KR20100097654A - Ｉｌ－２３ 항체 - Google Patents

Abstract

본 발명은 인간 IL-23에 대한 항원 결합 단백질, 상기 항원 결합 단백질을 함유하는 약제 조성물 및 염증성 질환, 예컨대, 류마티스성 관절염(Rheumatoid Arthiristis, RA)의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 상기 항원 결합 단백질의 용도에 관한 것이다.

Description

ＩＬ－２３ 항체{IL-23 ANTIBODIES}

발명의 분야

본 발명은 인터루킨 23(IL-23)에 결합하고 이의 활성을 중화시키는 항원 결합 단백질, 특히 항체, 그러한 항원 결합 단백질을 엔코딩하는 폴리뉴클레오티드, 상기 항원 결합 단백질을 함유한 약제 제형(pharmaceutical formulations) 및 염증, 예컨대, 류마티스성 관절염(Rheumatoid Arthritis, RA)와 관련된 질환의 치료 및/또는 예방에 있어서의 그러한 항원 결합 단백질의 용도와 관련이 있다. 본 발명의 다른 양상, 목적 및 이점은 하기 상세한 설명으로부터 분명하게 될 것이다.

본 발명의 배경

인터루킨-23(IL-23)은 IL-12 이종이합체성(heterodimeric) 사이토카인 패밀리의 일원이고 IL12와 IL-23에 공통된, p40 쇄, 및 IL-23에 특유한 p19 쇄를 함유한다. IL-12는 p40와 이의 파트너 p35의 이종이합체인데, 상기 p35는 IL-12에 특유하다.

이전 연구에 따라 IL-12가 분비를 위해 p40를 필요로 한다는 것이 입증되었으나, p19의 분비는 p40과 파트너를 형성하는 이의 활성에 의존한다는 것이 또한 밝혀졌다(Oppmann et al. 715-25). 엡스타인-바 바이러스-유도 분자(Epstein-Barr virus-induced molecules 3, EBI3)와 파트너를 형성하는 p28 서브유닛을 구성하는 추가의 IL-12 패밀리 일원은 IL-27로 지정되었다(Pflanz et al. Immunity. 16.6 (2002): 779-90).

(거대한 부류의 병원균들 사이에 공통적으로 존재하는 보존된 분자 패턴의 인지를 통한) 상이한 부류의 병원균을 구별짖는 타고난 능력은 항원-특이적 T 및 B 세포의 분비, 활성화 및 증식(expansion)을 위한 후천적 반응을 조정하기 위한 적절한 정보를 제공한다. 다양한 병원균에 대한 반응에서 항원 제시 세포(APC)에 의해 생산되는 사이토카인 IL-12, IL-23 및 IL-27은 이러한 반응을 형성하는 주요 조절 분자들이다.

이들이 생산한 사이토카인에 기초하여 2개의 하위그룹(Th1과 Th2)로 세분될 수 있는 뮤린 CD4+ T 헬퍼 세포 클론의 특성에 대해 기술한 모스만과 코프만의 세미나 발표(Mosmann et al. J. Immunol . 175.1 (2005): 5-14)는 감염 또는 백신접종(vaccination) 진행시 유도되는 독특한 유형의 면역 반응에 대한 기초를 제공하였다. 적절한 Th1 또는 Th2 면역 반응의 개시 결과는 심오하다 - 뮤린 모델에서 뿐만 아리라 인간의 질환 결과에 있어서도 그렇다. 따라서, IFNg 생산에 의해 특징지워지는, Th1 CD4⁺ T 세포는 인간 질환 및 생체내(in vivo) 동물 모델 둘 모두에서 개체, 예컨대, 미코박테리움 렙래(Mycobacterium leprae), 미코박테리운 튜버쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis) 및 레쉬마니아 도노바니(Leshmania donovani)에 의해 초래된 세포내 감염증의 적절한 조절에 중요하다. 대조적으로, IL4, IL5 및 IL13 사이토카인의 생산에 의해 특징지워지는, Th2 CD4+ T 세포의 우선적 유도는 특정 기생충 감염증을 비롯한 IgE 관련 알레르기성 반응, 예컨대, 천식 및 알레르기성 비염에 대한 보호와 연관이 있다. 뮤린 모델에서, (우세한 Th2 면역 반응으로 인해) 세포내 병원균에 민감할 수 있는 마우스는 IL-12의 적절한 투여로 내성이 생성될 수 있고 반대로 내성 마우스는 중화 항-p40 항체의 투여로 민감하게 될 수 있다. 그러한 연구는 IL-12가 Th1 세포의 분화에 관여하는 중심적인 사이토카인이다.

실제로 수년 동안 IL-12에 의해 유도된, Th1 CD4⁺ T 세포는 실험적 자가면역성 뇌척수염(experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE), 콜라겐 유발성 관절염(collagen-induced arthritis, CIA), 염증성 대장염 및 자가면역성 포도막염을 포함하는 중화 p40 항체 또는 p40 녹아웃 마우스의 용도에 기초한 광범위한 자가면역질환의 유도에 관여하는 것으로 생각되었다. 그러한 질환들이 높은 수준의 IFNγ(원형적 Th1 사이토카인)에 의해 특징지워지나, 자가면역성 염증에서 이러한 사이토카인의 실제 역할은 잘 이해되지 못하였다. 이것은 EAE 발병중 중추 신경계(CNS) 염증에서 p40과 IFNγ의 역할에 의해 설명될 수 있다. IFNγ 또는 IFNγ-매개 신호전달이 결여된 동물(ifn-, ifnr-, 및 sfaf7-결함 마우스)은 민감하게 유지되며 질환 발병은 더 극심한 병리를 동반하면서 더 빠르다(Langrish et al. Immunol.Rev. 202 (2004): 96-105; Langrish et al. J. Exp . Med . 201.2 (2005): 233-40; Mosmann et al. 5-14). p40 항체로의 치료는 EAE 발병을 억제시켰다. 유사한 관찰이 CIA 모델에서도 언급되었다. p40 중화 항체로의 치료는 질환을 억제시켰으며, 한편 IFNγ 신호전달 경로의 부재는 결과적으로 질환의 극심도를 증가시켰다. 또한, IL-12 p35 결함 동물은 EAE에 완전히 민감하였는데, 이는 p40에 관한 추가적인 역할, 즉, IL-12에 대한 추가적인 p40 사이토카인에 대해 시사하였다.

IL-23의 확인 및 IL-12 p40 쇄가 이러한 2가지 사이토카인에 의해 공유된다는 인식은 자가면역성 반응의 확대에 있어서 p40에 대한 필요성과 다른 Th1 향염증성(pro-inflammatory) 사이토카인에 대한 불필요성 간의 관찰된 차이에 대한 설명을 제공하였다. 이러한 가설은 p19 결함 동물을 이용한 연구에서 확증되었다. 그러한 동물은 p40 결함 동물과 유사한 방식으로 EAE 및 CIA에 완전하게 내성이다. 더욱이, IL-23(그러나 IL-12는 아님)의 존재시 기억 T 세포의 자극이 IL-17의 생산을 유도한다는 발견은 이펙터 T 세포 기능의 조절에서 IL-23의 특유 역할에 대한 증거를 제공하였다. 유전자 발현 연구를 포함하는, 추가 연구는 IL-23-의존성 CD4⁺ T 세포 개체군은 IL-12 유래 Th1 세포와는 상이한 프로파일을 나타내는 것으로 드러났다. 후속 생체내 연구는 무경험(naive) 수령체로의 입양 전달(adoptive transfer)후 질환을 유발하는 10⁵개 정도의 적은 CNS 항원-특이적 IL-17-생산 CD4⁺ T 세포와 함께 EAE에서 IL-23 유도성(driven) IL-17 생산 세포의 역할을 확립시켰다(Langrish et al. 233-40). IL-23 결함 마우스(p19^-/-)는 CIA에 내성이고 이것은, 골 이화작용에 중요한 역할을 담당하는 사이토카인인, IL-17을 만드는 CD4+ T 세포의 결핍과 상관관계가 있다(Murphy et al. J. Exp . Med . 198.12 (2003): 1951-57). IL-10 결함 마우스에서 자발성 대장염의 발달은 IL-23 p19 결합 동물과 교배될 때 완벽하게 예방되는데, 이것은 대장염의 유발에 있어서 이 사이토카인의 필수적인 역할을 입증한다(Yen et al. J. CIin . Invest 116.5 (2006): 1310-16). IL-23/IL-17 면역 축(axis)의 역할에 대한 최근의 발견이 자가면역성 염증에서 이들의 역할을 설명하였으나, IFNγ 신호전달 결함 마우스에서 관찰된 질환의 악화를 설명하지 못한다. 그러한 관찰은 실제로 IFNγ(또는 IFNγ-매개 신호전달)이 IL-23의 효과를 상쇄시키는 조절 시스템의 일부임을 제시한다.

또한 인간 CD4⁺ T 세포를 이용한 최근 연구는 IL-23R 양성 T 세포가 IL-23R 음성 세포 보다 정량적으로 더 높은 수준의 IL17A를 생산할 수 있었다는 점에서, CD4+ IL17 생산 T 세포의 분화 또는 유지에 있어서 IL-23의 역할을 제시하였다(Wilson et al Nature Immunology (2007) 8 950-957). 또한 면역조직화학 분석은 건선을 지닌 환자의 생검으로부터 병변성 대 비병변성 피부내 수지상 세포에 의한 IL-23 p19 발현 증가를 입증하였다.

IL-23 경로를 표적으로 삼기 위한 추가의 타당한 이유는 다수의 염증성 질환에 대한 위험 인자로서 IL-23 경로와 관련 단일 뉴클레오티드 다형성(single nucleotide polymorphisms, SNPs)을 확인시킨 광범위-유전체 연관 연구(genome-wide association studies)로부터 드러났다. IL-12/IL-23 경로는 2가지 건선 민감성 유전자(susceptibility genes) IL12B와 IL-23R의 확인에 따라 건선과 연루되어 있다(Cargill et al. Am .J. Hum . Genet . 80.2 (2007): 273-90). 또한 유사 연구들이 크론병에 대한 강한 보호를 제공하는 IL-23R의 희귀 코딩 변이체를 확인하였다(Duerr et al. Science 314.5804 (2006): 1461-63). 그러한 발견은 IL-23R 내의 SNPs를 포함하는, 다수의 종래 식별된 유전자좌(loci)에서 유사하게 연관성이 관찰되었고 웰컴 트러스트 케이스 컨트롤 컨소시엄(Wellcome Trust Case Control Consortium)에 의해 영국인 개체군에서 확증되었다. 성인 개체군에서 크론병에 대한 보호를 부여하는 R381Q SNP의 희귀 대립유전자는 어린이들에서 염증성 장질환(IBD)과 음의 연관성을 나타내었는데 이는 IL-23 염증 경로의 역할을 소아 크론병으로 확장시킨다(Dubinsky et al. Inflamm . Bowel.Pis. 13.5 (2007): 511-15).

민감성 변이체의 확인 및 크론병, 건선 및 기타 자가면역성 염증성 장애에서 IL-23R의 역할에 대한 이해의 증가는 이 경로를 표적으로 삼는 개선된 치료학적 개입(interventions)으로 이끌어야한다. 이의 근거로, 서브유닛 p40을 공통적으로 지니는, IL-12, IL-23에 대한 단일클론 항체는 활동성 크론병을 지니는 환자에서 임상적 반응과 완화를 유발하였으며(Mannon et al. N. Engl .J. Med . 351.20 (2004): 2069-79) 건선에 있어서 치료적 효능을 나타내었다(Gottlieb et al. Curr.Med.Res.Opin. 23.5 (2007): 1081-92; Krueger et al. N. Engl .J. Med . 356.6 (2007): 580-92). 항-p40 mAbs를 이용한 건선학(psoriatics)에서의 초기 연구가 심근 경색증을 포함하는 심각한 부작용을 드러내었으나(Krueger et al. 580-92), 2차 연구에서 이러한 부작용에 대한 증거는 없었다(Gottlieb et al. 1081-92). 그러나, IL-23R 경로의 특이적-봉쇄는 완전한 보호 반응의 저하(compromising) 없이 장기-특이적(organ-specific) 염증을 차단하는데 유효할 것으로 가정되었다(McKenzie, Trends Immunol. 27.1 (2006): 17-23).

당업계에 기재된 몇몇 항-IL-23 특이적 mAbs가 존재한다. 이들은 IL-23의 p19 서브유닛의 특이적 부분에 결합하는 mAbs(WO2007/024846, WO 2007/005955) 또는 IL-23 p40 특이적 서열에 결합하나 IL12의 p40 서브유닛에 결합하지 않는 mAbs((US 2005/0137385 A1)를 포함한다. 또한, (IL12 및 IL-23에 공통된) p40에 결합하고 IL12와 IL-23 둘 모두를 중화시키는 mAbs는 건선(Gottlieb et al. Current Med. Res .& Op 23 (2007): 1081-1092)과 크론병(Mannon et al. N. Eng .J. Med 351 (2004): 2069-2079)에 있어서 임상적 효능을 나타내었다.

항-IL-23 항체를 제공하는 종래 기술에도 불구하고, 치료학적으로 유용한 항원 결합 단백질, 예컨대, 인간 IL-23에 결합하고 이의 활성을 억제시키는 단일클론 항체를 분리하고 개발하기 위한 매우 갈망되는 목표가 여전히 있다.

위에 언급된 질환/장애의 치료를 위한 항원 결합 단백질은 본 발명에 의해 제공되며 아래에 상세히 기재된다.

본 발명의 간단한 요약

본 발명은 IL-23에 결합하는 항원 결합 단백질, 예를 들어, IL-23에 결합하는 항체를 제공한다. 본 발명의 특정 구체예는 뮤린 mAb 8C9 2H6와 관련된, 또는 이로부터 유래된 단일클론 항체(mAbs)를 포함한다. 8C9 2H6 중쇄 가변 영역 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 8로 제공된다. 8C9 2H6 경쇄 가변 영역아미노산 서열은 SEQ ID NO: 10으로 제공된다.

본 발명의 중쇄 가변 영역(VH)은 (카밧(Kabat)에 의해 규정된) 하기 CDRs을 포함한다:

표 1: 본 발명의 중쇄 가변 영역의 CDRs은 하기 CDRs 또는 SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 99 및 SEQ ID NO: 100에 제시된 대안적인 CDRs을 포함할 수 있다.

본 발명의 경쇄 가변 영역은 (카밧에 의해 규정된)하기 CDRs 또는 SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 101 및 SEQ ID NO: 102로 제시된 대안적인 CDRs을 포함한다.

한 구체예에서, 본 발명의 항원 결합 단백질은 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 95 및 SEQ ID NO: 100으로 구성된 목록에서 선택된 CDRH3를 함유하는 중쇄 가변 영역을 포함하며, 상기 중쇄 가변 영역은 경쇄 가변 영역과 짝을 이루어 인간 IL-23에 결합하고 인간 IL-23의 활성을 중화시키는 항원 결합 Fv 유닛을 형성한다. 이 구체예의 일 양상에서, SEQ ID NO: 1로 제시된 CDRH1, 및 SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 98 및 SEQ ID NO: 99로 구성된 목록에서 선택된 CDRH2가 또한 상기 중쇄 가변 영역내에 존재한다. 또 다른 양상에서, 상기 항원 결합 Fv 유닛은 10 nM 이하, 더 바람직하게는, 2 nM 이하, 예를 들어, 약 0.8 nM 내지 2 nM, 1 nM 이하, 또는 10O pM 이하의 Biacore(Biacore)에 의해 측정된 높은 친화력으로 인간 IL-23에 결합한다. 한 그러한 구체예에서, 이것은 예를 들어, 실시예 5에 제시된 것과 같이, 바이오센서 칩에 포획된 항원 결합 Fv 유닛과의 Biacore에 의해 측정된다.

본 발명의 중쇄 가변 영역은, 통상의 면역글로불린 방식으로(예를 들어, 인간 IgG, IgA, IgM 등), 인간 IL-23에 결합하도록 경쇄 가변 영역과 함께 포맷화되거나, 인간 IL-23에 결합하는 임의의 다른 "항체-유사" 포맷으로(예를 들어, 단일 쇄 Fv, 디아바디(diabodies), Tandabs™ 등(대안적인 "항체" 포맷의 요약에 관해, 문헌[Holliger 및 Hudson, Nature Biotechnology, 2005, Vol 23, No. 9, 1126-1136] 참조)) 포맷화될 수 있다.

본 발명의 항원 결합 단백질은 SEQ ID NO: 8과 SEQ ID NO: 10으로 기재된 가변 영역을 지니는 뮤린 항체 또는 이의 비뮤린 동등체(equivalents), 예컨대, 이의 래트, 인간, 키메라 또는 인간화된 변이체를 포함한다.

본 발명의 이의 항원 결합 단백질과 관련하여 본 명세서 곳곳에서 사용된 용어 "인간 IL-23에 결합한다"는 항원 결합 단백질이 다른 인간 단백질, 예컨대, IL-12에 대한 결합 없이 또는 대수롭지 않은 결합과 함께 인간 IL-23(이후 hIL-23으로 약칭함)에 결합한다는 것을 의미한다. 특히, 본 발명의 항원 결합 단백질은 이들이 Biacore 분석(예를 들어, 실시예 5에 기재된 Biacore 분석)에서 인간 IL-23에 결합하는 것으로 확인가능하며, 한편 이들이 동등한 Biacore 분석에서 인간 IL-12에 결합하지 않거나 유의미하게 결합하지 않는다는 점에서 인간 IL-23에 결합한다. 그러나, 이 용어는 본 발명의 특정 항원 결합 단백질이 또한 다른 종으로부터의 IL-23, 예를 들어, 치노몰구스 IL-23과 교차-반응할 수 있다는 사실을 배제하지 않는다.

본원에 사용된 용어 "항원 결합 단백질"은 인간 IL-23에 결합하고 이를 중화시킬 수 있는 항체, 항체 단편 및 기타 단백질 작제물을 의미한다.

본 발명의 또 다른 양상에서, 인간 IL-23에 결합하고 SEQ ID NO: 3에 기재된 서열의 변이체인 CDRH3를 포함하는 항원 결합 단백질, 예를 들어, 항체가 제공되는데, 상기 변이체의 상기 CDRH3내의 1 또는 2개의 잔기는 SEQ ID NO: 3의 상응하는 위치의 잔기와 다르며, 예를 들어, 서열 번호 3의 1번째 잔기(시스테인)가 다른 아미노산으로 치환되고/거나(SEQ ID NO: 4 또는 SEQ ID NO: 73 또는 SEQ ID NO: 74의 서열을 갖는 CDRs), 예를 들어, SEQ ID NO: 3의 8번째 잔기(발린)가, 예를 들어, SEQ ID NO: 95에 제시된 것과 같이, 다른 아미노산으로 치환되며, 그래서, 일 양상에서, CDRH3의 변이체는 SEQ ID NO: 3의 CDRH3와 다른 1개의 잔기(예를 들어, 위치 1 또는 위치 8에서)를 지니는데, 예를 들어, CDRH3의 위치 1에서 아미노산 잔기는 시스테인, 세린, 알라닌 및 발린 중에서 선택되고, 예를 들어, CDRH3의 위치 8에서 아미노산 잔기는 발린 및 메티오닌 중에서 선택된다. 또 다른 양상에서, CDRH3의 변이체는, 예를 들어, SEQ ID NO: 95에 제시된 것과 같이, 위치 1과 8 둘 모두에서 치환을 포함한다.

본 발명의 추가 양상에서, CDRH3는 SEQ ID NO: 3에 기재된 서열의 변이체를 포함하는데, 상기 변이체의 상기 CDRH3내 1, 2, 또는 3개의 잔기는 SEQ ID NO: 3의 상응하는 위치의 잔기와 다르며, 여기서 SEQ ID NO: 3의 4번째 잔기(이소루신)은 다른 아미노산으로 치환되며(예를 들어, SEQ ID NO: 100의 서열을 갖는 CDRs), 예를 들어, CDRH3의 위치 4에서 아미노산 잔기는 트레오닌일 수 있다. 또한, 그러한 변이체는 위치 1과 8에서 상기한 치환 하나 또는 둘 모두를 포함할 수 있다.

일 양상에서, 본 발명의 항원 결합 단백질, 예를 들어, 항체는 SEQ ID NO: 1로 기재된 CDRH1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 98 또는 SEQ ID NO: 99로 제시된 CDRH2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 95 또는 SEQ ID NO: 100으로 제시된 CDRH3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 75, 또는 SEQ ID NO: 101로 제시된 CDRL1, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80 또는 SEQ ID NO: 102로 제시된 CDRL2, 및 SEQ ID NO: 7로 제시된 CDRL3을 포함한다. 그러한 일 구체예에서, 항원 결합 단백질, 예를 들어, 항체는 하기 CDRs을 포함한다:

CDRH1: SEQ ID NO: 1

CDRH2: SEQ ID NO: 2

CDRH3: SEQ ID NO: 4

CDRL1 : SEQ ID NO: 5

CDRL2: SEQ ID NO: 6

CDRL3: SEQ ID NO: 7.

본 발명의 또 다른 양상에서, 인간 IL-23에 결합하고 하기 CDRs

CDRH1: SEQ ID NO: 1

CDRH2: SEQ ID NO: 2

CDRH3: SEQ ID NO: 4

CDRL1: SEQ ID NO: 5

CDRL2: SEQ ID NO: 6 및

CDRL3: SEQ ID NO: 7.

또는 이러한 CDRs 중 임의의 하나 이상의 CDR의 변이체를 포함하는 항원 결합 단백질, 예를 들어, 항체가 제공되며, 상기 변이체의 각각의 CDR 서열내의 1 또는 2개의 잔기, 또는 최대 3개의 잔기가 위에 나열된 서열번호(SEQ ID NO)의 상응하는 위치의 잔기와 다른데, 일예로 하기 서열번호(SEQ ID NO)로 제시된 그러한 CDR이 있다: SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 99, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80 및 SEQ ID NO: 102.

본 명세서 곳곳에서, 항체 서열내 아미노산 잔기는 카밧 규칙에 따라 넘버링된다. 유사하게, 용어 "CDR", "CDRL1 ", "CDRL2", "CDRL3", "CDRH1 ", "CDRH2", "CDRH3"는 문헌[Kabat et al; "Sequences of Proteins of Immunological Interest" NIH, 1987]에 설명된 카밧 넘버링 시스템에 따른다.

본 발명의 또 다른 양상에서, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 114 또는 SEQ ID NO: 115로 제시된 서열을 지니는 VH 도메인; 및 SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 96, SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 118, SEQ ID NO: 119, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 122 또는 SEQ ID NO: 123으로 제시된 서열을 지니는 V_L 도메인을 포함하는, 항원 결합 단백질, 예컨대, 이의 인간화된 항체, 또는 항원 결합 단편이 제공된다. 이러한 V_H와 V_L 서열의 목록은 임의의 개개 V_H 및 임의의 개개 V_L 서열의 모든 가능한 조합을 구체적으로 개시하기 위한 의도로 제시된다.

본 발명의 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 1로 기재된 CDRH1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 98, 또는 SEQ ID NO: 99로 기재된 CDRH2, 및 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 95, 또는 SEQ ID NO: 100으로 기재된 CDRH3를 포함할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 1로 기재된 CDRH1, SEQ ID NO: 2로 기재된 CDRH2, 및 SEQ ID NO: 3으로 기재된 CDRH3를 포함할 수 있다. 대안적으로, 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 1로 기재된 CDRH1, SEQ ID NO: 2로 기재된 CDRH2, 및 SEQ ID NO: 4로 기재된 CDRH3를 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 1로 기재된 CDRH1, SEQ ID NO: 2로 기재된 CDRH2, 및 SEQ ID NO: 73으로 기재된 CDRH3를 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 1로 기재된 CDRH1, SEQ ID NO: 2로 기재된 CDRH2, 및 SEQ ID NO: 74로 기재된 CDRH3를 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 1로 기재된 CDRH1, SEQ ID NO: 72로 기재된 CDRH2, 및 SEQ ID NO: 3으로 기재된 CDRH3를 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 1로 기재된 CDRH1, SEQ ID NO: 72로 기재된 CDRH2, 및 SEQ ID NO: 4로 기재된 CDRH3를 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 1로 기재된 CDRH1, SEQ ID NO: 72로 기재된 CDRH2, 및 SEQ ID NO: 73으로 기재된 CDRH3를 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 1로 기재된 CDRH1, SEQ ID NO: 72로 기재된 CDRH2, 및 SEQ ID NO: 74로 기재된 CDRH3를 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 1로 기재된 CDRH1, SEQ ID NO: 2로 기재된 CDRH2, 및 SEQ ID NO: 95로 기재된 CDRH3를 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 1로 기재된 CDRH1, SEQ ID NO: 72로 기재된 CDRH2, 및 SEQ ID NO: 95로 기재된 CDRH3를 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 1로 기재된 CDRH1, SEQ ID NO: 98로 기재된 CDRH2, 및 SEQ ID NO: 3으로 기재된 CDRH3를 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 1로 기재된 CDRH1, SEQ ID NO: 98로 기재된 CDRH2, 및 SEQ ID NO: 4로 기재된 CDRH3를 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 1로 기재된 CDRH1, SEQ ID NO: 98로 기재된 CDRH2, 및 SEQ ID NO: 73으로 기재된 CDRH3를 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 1로 기재된 CDRH1, SEQ ID NO: 98로 기재된 CDRH2, 및 SEQ ID NO: 74로 기재된 CDRH3를 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 1로 기재된 CDRH1, SEQ ID NO: 98로 기재된 CDRH2, 및 SEQ ID NO: 95로 기재된 CDRH3를 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 1로 기재된 CDRH1, SEQ ID NO: 98로 기재된 CDRH2, 및 SEQ ID NO: 100으로 기재된 CDRH3를 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 1로 기재된 CDRH1, SEQ ID NO: 99로 기재된 CDRH2, 및 SEQ ID NO: 3으로 기재된 CDRH3를 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 1로 기재된 CDRH1, SEQ ID NO: 99로 기재된 CDRH2, 및 SEQ ID NO: 4로 기재된 CDRH3를 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 1로 기재된 CDRH1, SEQ ID NO: 99로 기재된 CDRH2, 및 SEQ ID NO: 73으로 기재된 CDRH3를 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 1로 기재된 CDRH1, SEQ ID NO: 99로 기재된 CDRH2, 및 SEQ ID NO: 74로 기재된 CDRH3를 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 1로 기재된 CDRH1, SEQ ID NO: 99로 기재된 CDRH2, 및 SEQ ID NO: 95로 기재된 CDRH3를 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 1로 기재된 CDRH1, SEQ ID NO: 99로 기재된 CDRH2, 및 SEQ ID NO: 100으로 기재된 CDRH3를 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 1로 기재된 CDRH1, SEQ ID NO: 2로 기재된 CDRH2, 및 SEQ ID NO: 100으로 기재된 CDRH3를 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 1로 기재된 CDRH1, SEQ ID NO: 72로 기재된 CDRH2, 및 SEQ ID NO: 100으로 기재된 CDRH3를 포함할 수 있다.

본 발명의 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 75 또는 SEQ ID NO: 101로 기재된 CDRL1, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80 또는 SEQ ID NO: 102로 기재된 CDRL2, 및 SEQ ID NO: 7로 기재된 CDRL3을 포함할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 5로 기재된 CDRL1, SEQ ID NO: 6으로 기재된 CDRL2, 및 SEQ ID NO: 7로 기재된 CDRL3을 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 5로 기재된 CDRL1, SEQ ID NO: 76으로 기재된 CDRL2, 및 SEQ ID NO: 7로 기재된 CDRL3을 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 5로 기재된 CDRL1, SEQ ID NO: 77로 기재된 CDRL2, 및 SEQ ID NO: 7로 기재된 CDRL3을 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 5로 기재된 CDRL1, SEQ ID NO: 78로 기재된 CDRL2, 및 SEQ ID NO: 7로 기재된 CDRL3을 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 5로 기재된 CDRL1, SEQ ID NO: 79로 기재된 CDRL2, 및 SEQ ID NO: 7로 기재된 CDRL3을 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 5로 기재된 CDRL1, SEQ ID NO: 80으로 기재된 CDRL2, 및 SEQ ID NO: 7로 기재된 CDRL3을 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 75로 기재된 CDRL1, SEQ ID NO: 6으로 기재된 CDRL2, 및 SEQ ID NO: 7로 기재된 CDRL3을 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 75로 기재된 CDRL1, SEQ ID NO: 76으로 기재된 CDRL2, 및 SEQ ID NO: 7로 기재된 CDRL3을 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 75로 기재된 CDRL1, SEQ ID NO: 77로 기재된 CDRL2, 및 SEQ ID NO: 7로 기재된 CDRL3을 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 75로 기재된 CDRL1, SEQ ID NO: 78로 기재된 CDRL2, 및 SEQ ID NO: 7로 기재된 CDRL3을 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 75로 기재된 CDRL1, SEQ ID NO: 79로 기재된 CDRL2, 및 SEQ ID NO: 7로 기재된 CDRL3을 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 75로 기재된 CDRL1, SEQ ID NO: 80으로 기재된 CDRL2, 및 SEQ ID NO: 7로 기재된 CDRL3을 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 101로 기재된 CDRL1, SEQ ID NO: 6으로 기재된 CDRL2, 및 SEQ ID NO: 7로 기재된 CDRL3을 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 101로 기재된 CDRL1, SEQ ID NO: 76으로 기재된 CDRL2, 및 SEQ ID NO: 7로 기재된 CDRL3을 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 101로 기재된 CDRL1, SEQ ID NO: 77로 기재된 CDRL2, 및 SEQ ID NO: 7로 기재된 CDRL3을 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 101로 기재된 CDRL1, SEQ ID NO: 78로 기재된 CDRL2, 및 SEQ ID NO: 7로 기재된 CDRL3을 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 101로 기재된 CDRL1, SEQ ID NO: 79로 기재된 CDRL2, 및 SEQ ID NO: 7로 기재된 CDRL3을 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 101로 기재된 CDRL1, SEQ ID NO: 80으로 기재된 CDRL2, 및 SEQ ID NO: 7로 기재된 CDRL3을 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 101로 기재된 CDRL1, SEQ ID NO: 102로 기재된 CDRL2, 및 SEQ ID NO: 7로 기재된 CDRL3을 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 5로 기재된 CDRL1, SEQ ID NO: 102로 기재된 CDRL2, 및 SEQ ID NO: 7로 기재된 CDRL3을 포함할 수 있거나, SEQ ID NO: 75로 기재된 CDRL1, SEQ ID NO: 102로 기재된 CDRL2, 및 SEQ ID NO: 7로 기재된 CDRL3을 포함할 수 있다.

이러한 중쇄 가변 영역 중 임의의 영역은 경쇄 가변 영역중 임의 영역과 조합될 수 있는데, 예를 들어, 본 발명의 항원 결합 단백질은 SEQ ID NO: 75 또는 SEQ ID NO: 101로 기재된 CDRL1, SEQ ID NO: 6 또는 SEQ ID NO: 76으로 기재된 CDRL2 및 SEQ ID NO: 7로 기재된 CDRL3를 포함하는 경쇄 가변 영역과 조합된, SEQ ID NO: 1로 기재된 CDRH1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 98 또는 SEQ ID NO: 99로 기재된 CDRH2, 및 SEQ ID NO:4, SEQ ID NO: 73 또는 SEQ ID NO: 74로 기재된 CDRH3를 포함할 수 있다.

본 발명의 중쇄 가변 영역중 임의 영역은 적합한 인간 불변 영역(예컨대, SEQ ID NO: 92로 기재된 인간 불변 영역)과 조합되어, 전장 중쇄를 제공할 수 있다. 본 발명의 경쇄 가변 영역중 임의 영역은 적합한 인간 불변 영역(예컨대, SEQ ID NO: 91로 기재된 인간 불변 영역)과 조합되어, 전장 경쇄를 제공할 수 있다.

본 발명의 중쇄 가변 영역 작제물은 경쇄와 쌍을 이루어, 통상의 IgG 항체 포맷을 포함하는, 임의의 포맷으로 인간 IL-23 결합 유닛(Fv)을 형성할 수 있다. 본 발명의 VH 작제물을 포함하는 전장(FL) 중쇄 서열의 일예는 SEQ ID NO: 26, 60, 62, 64, 및 66을 포함한다.

본 발명의 중쇄 가변 영역서열과 함께 Fv를 형성하는 경쇄 가변 영역서열은 상기 Fv가 인간 IL-23에 결합하게 하는 임의의 서열일 수 있다. 본 발명의 V_H 작제물을 포함하는 전장(FL) 경쇄 서열의 일예는 SEQ ID NO: 8, 30, 32, 34, 68, 70, 93 및 94를 포함한다.

특정 구체예에서, 본 발명의 항원 결합 단백질은 하기 가변 영역 쌍을 포함한다:

A3M0 (SEQ ID NO: 16 + SEQ ID NO: 18)

A3M1 (SEQ ID NO: 16 + SEQ ID NO: 20)

A3N1 (SEQ ID NO: 16 + SEQ ID NO: 22)

A3N2 (SEQ ID NO: 16 + SEQ ID NO: 24)

A7M3 (SEQ ID NO: 52 + SEQ ID NO: 56)

A10M3 (SEQ ID NO: 54 + SEQ ID NO: 56)

A3M4 (SEQ ID NO: 16 + SEQ ID NO: 58)

A5M0 (SEQ ID NO: 48 + SEQ ID NO: 18)

A6M0 (SEQ ID NO: 50 + SEQ ID NO: 18)

A8M3 (SEQ ID NO: 81 + SEQ ID NO: 56)

A9M3 (SEQ ID NO: 82 + SEQ ID NO: 56)

A10.5M3 (SEQ ID NO: 85 + SEQ ID NO: 56)

A11M3 (SEQ ID NO: 83 + SEQ ID NO: 56)

A12M3 (SEQ ID NO: 84 + SEQ ID NO: 56)

A11.5M3 (SEQ ID NO: 86 + SEQ ID NO: 56)

A12.5M3 (SEQ ID NO: 87 + SEQ ID NO: 56)

A8M4 (SEQ ID NO: 81 + SEQ ID NO: 58)

A9M4 (SEQ ID NO: 82 + SEQ ID NO: 58)

A10.5M4 (SEQ ID NO: 85 + SEQ ID NO: 58)

A11 M4 (SEQ ID NO: 83 + SEQ ID NO: 58)

A11.5M4 (SEQ ID NO: 86 + SEQ ID NO: 58)

A12M4 (SEQ ID NO: 84 + SEQ ID NO: 58)

A12.5M4 (SEQ ID NO: 87 + SEQ ID NO: 58)

A13M4 (SEQ ID NO: 88 + SEQ ID NO: 58)

A14M4 (SEQ ID NO: 89 + SEQ ID NO: 58)

A15M4 (SEQ ID NO: 90 + SEQ ID NO: 58)

A3M12 (SEQ ID NO: 16 + SEQ ID NO: 121)

A3M13 (SEQ ID NO: 26 + SEQ ID NO: 88)

A23M4 (SEQ ID NO: 110 + SEQ ID NO: 58)

A10.5M14 (SEQ ID NO: 85 + SEQ ID NO: 123)

A24M4 (SEQ ID NO: 111 + SEQ ID NO: 58).

또 다른 구체예에서, 본 발명의 항원 결합 단백질, 예를 들어, 항체는 하기 전장 서열을 포함한다:

A3M0 (SEQ ID NO: 26 + SEQ ID NO: 28)

A3M1 (SEQ ID NO: 26 + SEQ ID NO: 30)

A3N1 (SEQ ID NO: 26 + SEQ ID NO: 32)

A3N2 (SEQ ID NO: 26 + SEQ ID NO: 34)

A5M0 (SEQ ID NO: 60 + SEQ ID NO: 28)

A6M0 (SEQ ID NO: 62 + SEQ ID NO: 28)

A7M3 (SEQ ID NO: 64 + SEQ ID NO: 68)

A3M4 (SEQ ID NO: 26 + SEQ ID NO: 70)

A3M5 (SEQ ID NO: 26 + SEQ ID NO: 93)

A3M6 (SEQ ID NO: 26 + SEQ ID NO: 94)

A5M4 (SEQ ID NO: 60 + SEQ ID NO: 70)

A6M4 (SEQ ID NO: 62 + SEQ ID NO: 70)

A7M4 (SEQ ID NO: 64 + SEQ ID NO: 70)

A10M4 (SEQ ID NO: 66 + SEQ ID NO: 70)

A10M3 (SEQ ID NO: 66 + SEQ ID NO: 68).

한 구체예에서, 본 발명의 항원 결합 단백질은 하나 이상의 본 발명의 CDRs을 포함하는 다-특이적(multi-specific) 항체일 수 있는데, 상기 항체는 IL-23에 결합할 수 있고 또한 하나 이상의 TH17 타입의 사이토카인, 예를 들어, IL-17, IL-22, 또는 IL-21에 결합할 수 있다. 그러한 일 구체예에서, CDRH3를 포함하고, IL-17, 또는 IL-22, 또는 IL-21에 결합할 수 있는 추가의 항원 결합 부위를 포함하는 다-특이적 항체, 또는 본원에 정의된 항원 결합 단백질이 제공된다. 본 발명의 항원 결합 단백질의 일예는 하나 이상의 TH17 타입 사이토카인, 예를 들어, IL-17, IL-22, 또는 IL-21에 대한 특이성을 지니는 하나 이상의 에피토프-결합 도메인에 연결된, 본원에 정의된 CDRH3를 포함하는 IL-23에 특이적인 항체이다.

본원에 사용된, 용어 "도메인"은 단백질의 나머지 구조와 독립하여 3차 구조를 갖는 폴딩된 단백질 구조를 의미한다. 일반적으로, 도메인은 단백질의 별개의 기능적 특성에 관여하며, 많은 경우에 있어서, 단백질의 나머지 부분 및/또는 도메인의 기능 손실 없이 다른 단백질에 첨가, 이동(removed) 또는 전이될 수 있다. "단일 항체 가변 도메인"은 항체 가변 도메인의 특징적인 서열을 포함하는 폴딩된 폴리펩티드 도메인이다. 따라서, 이것은 완전한 항체 가변 도메인과 변형된 가변 도메인(예를 들어, 하나 이상의 루프가 항체 가변 도메인의 특징이 아닌 서열로 대체된 것), 또는 절두된(truncated) N- 또는 C-말단을 지니거나 N- 또는 C-말단 연장부(extensions)를 포함하는 항체 가변 도메인, 뿐만 아니라, 적어도 전장 도메인의 결합 활성 및 특이성을 보유한 가변 도메인의 폴딩된 단편을 포함한다.

본원에 사용된, 용어 "면역글로불린 단일 가변 도메인"은 다른 V 영역 또는 도메인와 독립적으로 항원 또는 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 가변 도메인 (VH, VHH, VL)을 의미한다. 면역글로불린 단일 가변 도메인은 다른, 상이한 가변 영역 또는 가변 도메인과 함께 한 포맷(예를 들어, 동종- 또는 이종-다합체)로 존재할 수 있는데, 여기서 상기 다른 영역 또는 도메인은 단일 면역글로불린 가변 도메인에 의한 항원 결합을 위해 필요하지 않다(즉, 여기서 상기 면역글로불린 단일 가변 도메인은 추가적인 가변 도메인과 독립적으로 항원에 결합한다). "도메인 항체" 또는 "dAb"는 본원에 사용된 용어인 항원에 결합할 수 있는 "면역글로불린 단일 가변 도메인"과 동일하다. 면역글로불린 단일 가변 도메인은 인간 항체 가변 도메인일 수 있으나, 또한 다른 종, 예컨대, 설치류로부터의 단일 항체 가변 도메인을 포함한다(예를 들어, WO 00/29004호에 개시된 것과 같은, 너스 상어(nurse shark) 카멜리드(Camelid) V_HH dAbs. 카멜리드 V_HH는 카멜, 라마, 알파카, 단봉낙타, 및 과나코(guanaco)를 포함하는 종들로부터 유래된 면역글로불린 단일 가변 도메인 폴리펩티드인데, 상기 폴리펩티드는 경쇄가 자연적으로 결여된 중쇄 항체를 생산한다. 그러한 V_HH 도메인은 당업계에서 가용한 표준 기술에 따라 인간화될 수 있고, 그러한 도메인은 여전히 본 발명에 따른 "도메인 항체"인 것으로 간주된다. 본원에 사용된, "V_H"는 카멜리드 V_HH 도메인을 포함한다.

용어 "에피토프-결합 도메인"은 상이한 V 영역 또는 도메인과 독립적으로 항원 또는 에피토프에 특이적으로 결합하는 도메인을 지칭하는데, 이것은 도메인 항체이거나 CTLA-4, 리포칼린(lipocalin), SpA, 애피바디(Affibody), 애비머(avimer), GroEI, 트랜스페린(transferrin), GroES 및 피브로넥틴/어드넥틴(fibronectin/adnectin)으로 이루어진 그룹에서 선택된 스캐폴드(scaffold)의 유도체인 도메인일 수 있는데, 상기 도메인은 천연 리간드 이외의 리간드에 대한 결합을 획득하기 위해 단백질 조작을 거친다.

본원에 사용된, 용어 "항원 결합 부위"는 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항원 결합 단백질상의 부위를 지칭하는데, 이것은 단일 도메인, 예를 들어, 에피토프-결합 도메인, 또는 단일-쇄 Fv(ScFv) 도메인일 수 있거나, 이것은 표준 항체에서 발견될 수 있는 것과 같은 쌍을 이룬 VHA/L 도메인일 수 있다.

본 발명의 추가 양상은 약학적으로 허용되는 희석제 또는 담체와 함께 본 발명의 항원 결합 단백질을 포함하는 약제 조성물을 제공한다. 추가 양상에서, 본 발명은 인간에서 면역계 매개성 염증과 관련된 질병 또는 장애, 예컨대, 건선, 염증성 장질환, 궤양성 대장염, 크론병, 류마티스성 관절염, 소아 류마티스성 관절염, 전신성홍반성낭창, 신경퇴행성 질환, 예를 들어 다발성 경화증, 호중구 유도성 질환, 예를 들어, COPD, 베게너 혈관염, 낭포성 섬유증, 쇼그렌 증후군, 만성 장기이식 거부증, 제 1형 당뇨병 이식편대숙주질환, 천식, 알레르기성 질환 아토피 피부염, 습진성 피부염, 알레르기성 비염, 및 갑성선염, 척추관절염, 강직성 척추염, 포도막염, 다발성 연골염 또는 피부경화증을 포함하는 기타 자가면역질환의 치료 또는 예방하는 방법을 제공하는데, 당해 방법은 본 발명의 항원 결합 단백질을 유효양으로 이의 투여가 필요한 상기 인간에게 투여하는 단계를 포함한다. 한 구체예에서, 상기 장애는 류마티스성 관절염이다.

또 다른 양상에서, 본 발명은 면역계 매개성 염증, 예컨대, 건선, 염증성 장질환, 궤양성 대장염, 크론병, 류마티스성 관절염, 소아 류마티스성 관절염, 전신성홍반성낭창, 신경퇴행성 질환, 예를 들어 다발성 경화증, 호중구 유도성 질환, 예를 들어, COPD, 베게너 혈관염, 낭포성 섬유증, 쇼그렌 증후군, 만성 장기이식 거부증, 제 1형 당뇨병 이식편대숙주질환, 천식, 알레르기성 질환 아토피 피부염, 습진성 피부염, 알레르기성 비염, 및 갑성선염, 척추관절염, 강직성 척추염, 포도막염, 다발성 연골염 또는 피부경화증을 포함하는 기타 자가면역질환의 치료 또는 예방용 약제의 제조에 사용하기 위한 본 발명의 항원 결합 단백질의 용도를 제공한다. 한 구체예에서, 상기 장애는 류마티스성 관절염이다.

본 발명의 다른 양상 및 이점은 상세한 설명 및 이의 바람직한 구체예에서 더 상세히 기재된다.

한 구체예에서, 본 발명은, IL-23R ELISA에 대한 IL-23 결합의 억제(예를 들어, 실시예 6에 설명됨), 또는 비장세포(splenocytes)에 의한 IL-17 또는 IL-22 생산의 억제(예를 들어, 실시예 7에 설명된 생체분석)로 결정된 것과 같은, hIL-23에 대한 결합 및 이의 중화를 위해, CDRH3(SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 95 또는 SEQ ID NO: 100)을 포함하는 항체와 경쟁하는 항원 결합 단백질을 제공하는데, 예를 들어, 본 발명의 항원 결합 단백질은 하기 CDR을 포함하는 항체와 경쟁한다:

CDRH1: SEQ ID NO: 1

CDRH2: SEQ ID NO: 2

CDRH3: SEQ ID NO: 4

CDRL1: SEQ ID NO: 5

CDRL2: SEQ ID NO: 6 및

CDRL3: SEQ ID NO: 7. 한 구체예에서, 경쟁하는 항체는 A3M0(SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28)와 경쟁하는 항체이다.

또 다른 구체예에서, 본 발명의 항원 결합 단백질은 CDRH3(SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 95, 또는 SEQ ID NO: 100)를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항원 결합 단백질인데, 예를 들어, 상기 항체는 하기 CDRs을 포함한다:

CDRH1: SEQ ID NO: 1

CDRH2: SEQ ID NO: 2

CDRH3: SEQ ID NO: 4

CDRL1: SEQ ID NO: 5

CDRL2: SEQ ID NO: 6 및

CDRL3: SEQ ID NO: 7.

한 구체예에서, 경쟁하는 항원 결합 단백질은 A3M0(SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28)와 동일한 에피토프에 결합하는 항원 결합 단백질이다. 에피토프는 당업계의 통상의 기술자에게 공지된 방법, 예를 들어, 인간 p19의 서열(SEQ ID NO: 37)에 상응하는 펩티드 라이브러리를 사용한 펩티드 맵핑에 의해 결정될 수 있으며, 상기 라이브러리의 각 펩티드는 14개 아미노산 잔기를 함유하며, 각 펩티드의 서열은 각 펩티드들과 중첩된다. 형태적 및/또는 불연속 에피토프는 공지의 방법, 예를 들어, CLIPS™(Pepscan Systems)에 의해 확인될 수 있다.

발명의 상세한 설명

본 발명의 항원 결합 단백질은 천연 항체 또는 이의 기능성 단편 또는 등가물의 구조로 포맷화될 수 있는 본 발명의 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있다. 따라서, 본 발명의 항원 결합 단백질은 적절한 경쇄와 쌍을 이룰 때,전장 항체, (Fab')₂ 단편, Fab 단편, 또는 등가체(예컨대, scFV, 비-, 트리- 또는 테트라-바디, Tandabs, 등)로 포맷화된 본 발명의 VH 영역을 포함할 수 있다. 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4; 또는 IgM; IgA, IgE 또는 IgD 또는 이의 변형된 변이체일 수 있다. 항체 중쇄의 불변 도메인은 적절하게 선택될 수 있다. 경쇄 불변 도메인은 카파 또는 람다 불변 도메인일 수 있다. 더욱이, 항원 결합 단백질은 모든 부류의 변형, 예를 들어, IgG 이합체, Fc 수용체에 더 이상 결합하지 못하거나 C1 q 결합을 매개하지 못하는 Fc 돌연변이체를 포함할 수 있다. 항원 결합 단백질은 또한 항원 결합 영역 및 비-면역글로불린 영역을 포함하는 WO86/01533호에 기재된 유형의 키메라 항체일 수 있다.

불변 영역은 요구되는 임의의 기능성에 따라 선택된다. IgG1은 보체에 대한 결합을 통한 용해 활성을 나타낼 수 있고/있거나 항체 의존성 세포매개 세포독성(antibody-dependent cell cytotoxicity, ADCC)을 매개할 것이다. IgG4는 비-세포독성 블록킹 항체가 필요한 경우 선호될 것이다. 그러나, IgG4 항체는 생성시 불안정성을 나타낼 수 있고 따라서 일반적으로 더 안정한 IgG1을 변형시키는 것이 더 바람직할 수 있다. 제안된 변형은 EP0307434호에 기재되어있으며, 예를 들어, 위치 235와 237에서의 돌연변이가 있다. 따라서, 본 발명은 용해 또는 비용해 형태의 본 발명에 따른, 항원 결합 단백질, 예를 들어, 항체를 제공한다.

특정 형태에서, 본 발명의 항체는 본원에 기재된 임의의 중쇄 가변 영역을 지니는 전장(예를 들어, H2L2 테트라머) 용해 또는 비용해 IgG1 항체이다.

추가 양상에서, 본 발명은 본원에 기재된 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.

이종이합체 사이토카인 IL-23에 대한 수용체, IL-23R은 IL-12R베타1과 신규한 사이토카인 수용체 서브유닛으로 구성된다. Parham,C. et al. J. Immunol. 168 (11), 5699-5708 (2002) (SEQ ID NO:47).

본 발명의 항원 결합 단백질과 관련하여 본 명세서의 곳곳에서 사용된 용어 "중화시키다(neutralises)"와 이의 문법적 동의어는 IL-23의 생물학적 활성이, 그러한 항원 결합 단백질의 부재시의 IL-23의 활성과 비교하여 본 발명의 항원 결합 단백질의 존재시, 전체적으로 또는 부분적으로, 감소된다는 것을 의미한다. 중화는 리간드 결합의 블록킹, 리간드의 수용체 활성화 억제, IL-23 수용체의 하향조절 또는 이펙터 기능성에 대한 영향 중 하나 이상에 기인할 수 있으나, 이로만 국한되는 것은 아니다. 중화의 수준은 몇몇 방법으로, 예를 들어, 하기 실시예에 설명된 분석법을 사용함으로써, 예를 들어, 실시예 6에 기재된 것과 같이 수행될 수 있는 IL-23 수용체에 대한 IL-23 결합의 억제를 측정하는 분석법에 의해 측정될 수 있다. 이 분석법에서 IL-23의 중화는 중화 항원 결합 단백질의 존재하에 IL-23과 이의 수용체 간의 결합의 감소에 대해 평가함으로써 측정된다.

중화의 수준은 또한, 예를 들어, 실시예 7에 기재된 것과 같이 수행될 수 있는 IL-17 생산 분석법으로 측정될 수 있다. 이 분석법에서 IL-23의 중화는 중화 항원 결합 단백질의 존재하에 IL-17의 생산의 억제에 대해 평가함으로써 측정된다.

예를 들어, 중화 항원 결합 단백질의 존재하에 IL-23과 이의 수용체 간의 결합의 감소를 평가함으로써, 중화를 평가하는 다른 방법은 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어, Biacore(Biacore ) 분석법을 포함한다.

본 발명의 다른 양상에서, 본원에 예시된 항체와 적어도 실질적으로 동등한 중화 활성을 지니는 항원 결합 단백질, 예를 들어, 각각, 실시예 6, 7, 및 11에 설명된, IL-23/IL-23 수용체 중화 분석 또는 IL-17/IL-22 생산 분석, 또는 pSTAT3 신호전달 억제 분석에서 A3M1, A3N1, A3N2 또는 A3M0의 중화 활성을 보유하는 항원 결합 단백질이 제공된다.

용어 Fv, Fc, Fd, Fab, 또는 F(ab)2는 이들의 표준 의미로 사용된다(예를 들어, 하기 문헌 참조: Harlow et al., Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, (1988)).

"키메라 항체"는 억셉터 항체에서 유래된 경쇄 및 중쇄 불변 영역과 함께 도nn너 항체에서 유래된 자연적으로 생성되는 가변 영역(경쇄 및 중쇄)을 함유한 조작된 항체의 유형을 의미한다.

"인간화된 항체"는 비인간 도너 면역글로불린에서 유래된 이의 CDRs을 지니는 조작된 항체 유형을 의미하는데, 당해 항체 분자의 나머지 면역글로불린-유래 부분은 하나(또는 그 이상)의 인간 면역글로불린(들)에서 유래된다. 또한, 프레임워크 지지 잔기들은 결합 친화력이 보존되도록 변형될 수 있다(예를 들어, 하기 문헌 참조: Queen et al., Proc. Natl Acad Sci USA, 86:10029-10032 (1989), Hodgson et al., Bio/Technology, 9:421 (1991)). 적합한 인간 억셉터 항체는 도너 항체의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열에 대한 상동성에 의해, 통상의 데이터베이스, 예를 들어, KABAT® 데이터베이스, Los Alamos 데이터베이스, 및 Swiss 단백질 데이터베이스에서 선택된 것일 수 있다. (아미노산에 기반하여) 도너 항체의 프레임워크 영역에 대한 상동성으로 특징지워지는 인간 항체는 도너 CDRs의 삽입을 위한 중쇄 불변 영역 및/또는 중쇄 가변 프레임워크 영역을 제공하는데 적합할 수 있다. 경쇄 불변 또는 가변 프레임워크 영역을 공여(donating)할 수 있는 적합한 억셉터 항체는 유사한 방식으로 선택될 수 있다. 억셉터 항체 중쇄 및 경쇄는 동일한 억셉터 항체로부터 기원될 필요는 없다는 것에 주목하여야 한다. 종래 기술은 그러한 인간화된 항체를 생산하는 몇몇 방법에 대해 기재하고 있다 - 예를 들어, EP-A-0239400호 및 EP-A-054951호 참조.

용어 "도너 항체"는, 변형된 면역글로불린 코딩 영역과 결과적으로 발현된 항체가 해당 도너 항체의 항원 특이성 및 중화 활성 특징을 지니는 변형된 항체를 제공하기 위해, 제 1 면역글로불린 파트너에 항체의 가변 영역, CDR 또는 이의 작용 단편 또는 이의 유사체의 아미노산 서열을 공여하는 항체(모노클로날 및/또는 재조합)를 의미한다.

용어 "어셉터 항체"는 도너 항체에 이종성인 항체(모노클로날 및/또는 재조합)을 의미하며, 이 항체는 이의 중쇄 및/또는 경쇄 프레임워크 영역 및/또는 이의 중쇄 및/또는 경쇄 불변 영역을 엔코딩하는 아미노산 서열 모두(또는 임의의 부분, 그러나 몇몇 구체예에서, 전부)를 제 1 면역글로불린 파트너에 공여한다. 특정 구체예에서, 인간 항체는 어셉터 항체이다.

"CDR"은 면역글로불린 중쇄 및 경쇄의 초가변 영역(hypervahable regions)인 항체의 상보성 결정 영역 아미노산 서열로서 정의된다. 예를 들어, 문헌[Kabat et al., Sequence of Proteins of Immunological Interest, 4th Ed., U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987)] 참조. 면역글로불린 가변부에는 3개의 중쇄 및 3개의 경쇄 CDRs(또는 CDR 영역)이 있다. 따라서, 본원에 사용된 "CDRs"은 모든 3개의 중쇄 CDRs 또는 모든 3개의 경쇄 CDRs (또는 적합하게는, 모든 중쇄 및 모든 경쇄 CDRs)을 지칭한다. 항체의 구조 및 단백질 폴딩은 기타 잔기가 항원 결합 영역의 일부로 고려된다는 것을 의미하며, 통상의 기술자에게 이렇게 이해될 것이다. 예를 들어, 문헌[Chothia et al., (1989) Conformations of immunoglobulin hypervariable regions; Nature 342, p877-883] 참조.

본 발명의 항원 결합 단백질, 예를 들어, 항체는 본 발명의 항원 결합 단백질에 관한 코딩 서열을 포함하는 발현 벡터를 이용한 숙주 세포의 형질감염(transfection)에 의해 생산될 수 있다. 발현 벡터 또는 재조합 플라스미드는, 항원 결합 단백질에 관한 이러한 코딩 서열과 숙주 세포에서의 복제와 발현 및/또는 숙주 세포로부터의 분비를 조절할 수 있는 통상의 통제 조절 서열을 작동상 연계되게 위치시킴으로써 생산된다. 조절 서열은 프로모터 서열, 예를 들면, CMV 프로모터, 및 다른 공지의 항체로부터 유래될 수 있는 신호 서열을 포함한다. 마찬가지로, 상보되는 항체 경쇄 또는 중쇄를 엔코딩하는 DNA 서열을 가진 제 2 형질발현 벡터가 제조될 수 있다. 특정 구체예에서, 이러한 제 2 발현 벡터는 코딩 서열 및 선택가능한 마커를 제외하고는 제 1 발현 벡터와 동일하고, 그에 따라, 각각의 폴리펩티드 쇄가 기능적으로 발현된다는 것은 너무나도 확실하게 보장된다. 대안적으로, 항원 결합 단백질에 대한 중쇄 및 경쇄 코딩 서열이 단일의 벡터상에 존재할 수도 있다.

선택된 숙주 세포는 통상의 기법에 의해서 제 1 및 제 2 벡터로 동시에 형질감염되어 (또는 단순히 단일의 벡터에 의해 간단히 형질감염되어), 재조합 또는 합성 경쇄와 중쇄 둘 모두를 포함하는 본 발명의 형질감염된 숙주 세포가 된다. 이후, 상기 형질감염된 세포는 통상의 기법에 의해 배양되어 본 발명의 항원 결합 단백질이 생산된다. 재조합 중쇄 및/또는 경쇄의 결합을 포함하는 항원 결합 단백질은 ELISA 또는 RIA와 같은 적절한 분석법에 의해서 배양물로부터 선별된다. 마찬가지로, 통상의 기법이 다른 항원 결합 단백질을 작제하는데 이용될 수 있다.

본 발명의 방법 및 조성물의 작제물에 사용되는 클로닝 및 서브클로닝 단계에 적합한 벡터는 통상의 기술자에 의해 선택될 수 있다. 예를 들어, 통상적인 pUC 시리즈 클로닝 벡터가 사용될 수 있다. 한 벡터 pUC19는 공급업체, 예컨대, 아머샴(Amersham: Buckinghamshire, United Kingdom) 또는 파마시아(Pharmacia: Uppsala, Sweden)로부터 시중에서 구입가능하다. 또한, 용이하게 복제될 수 있으며, 풍부한 클로닝 부위 및 선택가능한 유전자(예를 들어, 항생제 내성)를 가지며, 조작이 용이한 벡터가 클로닝에 사용될 수 있다. 따라서, 클로닝 벡터의 선택은 본 발명의 제한 요소가 아니다.

또한, 발현 벡터는 이종성 DNA 서열, 예를 들면, 포유류 디하이드로폴레이트 리덕타제 유전자(DHFR)의 발현을 증폭시키는데 적합한 유전자를 특징으로 한다. 기타 바람직한 벡터 서열은, 예컨대, 소 성장 호르몬(BGH) 및 베타글로빈 프로모터 서열(betaglopro)로부터의, 폴리 A 신호 서열을 포함한다. 본 발명에 유용한 발현 벡터는 통상의 기술자에게 잘 알려진 기법에 의해서 합성될 수 있다.

이러한 벡터의 성분, 예를 들어, 리플리콘, 선별 유전자, 인핸서, 프로모터, 시그널 서열 등은 시중의 또는 천연 공급원으로부터 수득될 수 있거나, 선택된 숙주에서 재조합 DNA 생성물의 발현 및/또는 분비를 유도하는데 이용되는 공지된 공정에 의해 합성될 수 있다. 포유동물, 박테리아, 곤충, 효모 및 진균류 발현을 위해 당해 기술분야에 공지된 다양한 유형의 기타 적합한 발현 벡터가 또한 본 목적을 위해 선택될 수 있다.

본 발명은 또한, 본 발명의 항원 결합 단백질의 코딩 서열을 함유하는 재조합 플라스미드로 형질감염된 세포주를 포함한다. 이러한 클로닝 벡터의 클로닝 및 기타 조직에 유용한 숙주 세포 또한 관용적으로 사용되는 것이다. 그러나, 가장 바람직하게는, E. coli의 다양한 균주로부터의 세포가 클로닝 벡터의 복제 및 본 발명의 항원 결합 단백질의 작제에서 기타 단계에 사용된다.

본 발명의 항원 결합 단백질의 발현에 적합한 숙주 세포 또는 세포주는 바람직하게는, 포유동물 세포, 예컨대, NSO, Sp2/0, CHO(예를 들어, DG44), COS, H다 섬유아세포(예를 들어, 3T3), 및 골수종 세포를 포함하며, 상기 항원 결합 단백질은 CHO 또는 골수종 세포에서 발현될 수 있다. 인간 세포가 사용될 수 있으며, 따라서, 분자를 인간 글리코실화 패턴으로 변형시킬 수 있다. 대안적으로, 기타 진핵 세포주가 사용될 수 있다. 적합한 포유동물 숙주 세포의 선택, 및 형질전환, 배양, 증폭, 스크리닝 및 생성물 생성 및 정제의 방법은 당해 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 위에 인용된 문헌[Sambrook et al.] 참조.

박테리아 세포는 본 발명의 재조합 Fab 또는 다른 구체예의 발현에 적합한 숙주 세포로서 유용한 것으로 입증될 수 있다(예를 들어, 문헌[Plueckthun, A., Immunol. Rev., 130:151-188(1992)] 참조). 그러나, 단백질이 박테리아 세포에서 언폴딩되거나 부적합하게 폴딩된 형태 또는 비글리코실화된 형태로 발현되는 경향이 있기 때문에, 박테리아 세포에서 생성된 재조합 Fab는 항원 결합력의 보유에 대해 스크리닝되어야 할 것이다. 박테리아 세포에 의해 발현된 분자가 적합하게 폴리된 형태로 생성되는 경우, 이러한 박테리아 세포는 바람직한 숙수 세포일 것이다. 예를 들어, 발현에 사용된 E. coli의 다양한 균주는 생물학 분야에서 숙주 세포로서 널리 공지되어 있다. B. 서브틸리스(B. subtilis), 스트렙토미세스(Sterptomyces), 기타 바실리(bacilli) 등의 다양한 균주가 또한 본 발명에 사용될 수 있다.

요망되는 경우, 통상의 기술자에게 공지된 효모 세포 균주가 또한 숙주 세포로서 이용가능하며, 뿐만 아니라, 곤충 세포, 예를 들어, 드로소필라(Drosophila) 및 레피돕테라(Lepidoptera) 및 바이러스 발현 시스템 또한 이용가능하다. 예를 들어, 문헌[Miller et al., Genetic Engineering, 8:277-298, Plenum Press (1986)]과 상기 문헌내에서 인용된 참고문헌 참조.

벡터를 작제할 수 있는 일반적 방법, 본 발명의 숙주 세포를 생성시키는데 필요한 형질감염 방법, 및 이러한 숙주 세포로부터 본 발명의 항원 결합 단백질을 생성시키는데 필요한 배양 방법은 모두 통상적인 기법에 해당한다. 전형적으로, 본 발명의 배양 방법은 일반적으로, 현탁액 중에서 혈청없이 세포를 배양하는 무혈청 배양법이다. 마찬가지로, 일단 생성되면, 본 발명의 항원 결합 단백질은 암모늄 설포이트 침전, 친화성 칼럼, 칼럼 크로마토그래피, 겔 전기영동 등을 포함하는 당업계의 표준 공정에 따라 세포 배양 내용물로부터 정제될 수 있다. 이러한 기법은 본 발명의 기술 분야에 속하며, 본 발명을 제한하지 못한다. 예를 들어, 변형된 항체의 제조법은 WO 99/58679 및 WO 96/16990에 기술되어 있다.

또 다른 항체 발현 방법은 U.S 특허 제 4,873,316호에 기술된 바와 같이 유전자이식(transgenic) 동물에서의 발현을 이용할 수 있다. 이는 동물 카세인 프로모터를 사용하는 발현 시스템에 관한 것이데, 상기 프로모터는 포유동물에 유전자이식 혼입되는 경우, 암컷으로 하여금 이의 젖으로 목적하는 재조합 단백질을 생산하게 한다.

본 발명의 추가 양상에서, 본 발명의 항체의 경쇄 및/또는 중쇄를 엔코딩하는 벡터로 형질전환되거나 형질감염된 숙주 세포를 배양하는 단계 및 그에 따라 생산된 항체를 회수하는 단계를 포함하는 본 발명의 항체를 생산하는 방법이 제공된다.

본 발명에 따라, 하기 단계를 포함하는 인간 IL-23에 결합하고 이의 활성을 중화시키는 본 발명의 항-IL-23 항체를 생산하는 방법이 제공된다:

(a) 항체의 중쇄를 엔코딩하는 제 1 벡터를 제공하는 단계;

(b) 항체의 경쇄를 엔코딩하는 제 2 벡터를 제공하는 단계;

(c) 상기 제 1 및 제 2 벡터로 포유동물 숙주 세포(예를 들어, CHO)를 형질전환시키는 단계;

(d) 숙주 세포로부터 항체가 배양 배지내로 분비되게 하는 조건하에서 단계 (c)의 숙주 세포를 배양하는 단계;

(e) 단계 (d)의 분비된 항체를 회수하는 단계.

바람직한 방법에 의해 일단 발현되면, 이후 항체는 적합한 분석법을 사용하여 시험관내 활성에 대해 시험된다. 현재, 통상적인 ELISA 분석 포맷이 IL-23에 대한 항체의 정성적 및 정량적 결합을 평가하는데 사용된다. 또한, 기타 시험관내 분석법이 일반적인 제거(clearance) 메카니즘에도 불구하고 체내에서 항체의 지속성(persistence) 평가하기 위해 후속 인간 임상 연구를 실행하기 전에 효력 중화를 입증하는데 사용될 수 있다.

치료 용량 및 기간은 인간 순환계에서 본 발명의 분자의 상대적 존속 기간과 관련이 있으며, 치료할 질병 및 환자의 건강 상태에 따라 통상의 기술자에 의해 조절될 수 있다. 연장된 기간(예를 들어, 4 내지 6 개월)에 걸친 반복된 투여(예를 들어, 주 1회 또는 2주마다 1회)는 최대 치료 효율을 달성하는데 요구될 수 있다고 예상된다.

본 발명의 치료제의 투여 모드는 치료제가 숙주로 전달되는 적합한 경로일 수 있다. 본 발명의 항원 결합 단백질, 약제 조성물은 비경구 투여 즉, 피하내(s.c.), 경막내(intrathecally), 복강내, 근내(i.m.), 정맥내(i.v.) 또는 비내 투여에 특히 유용할 수 있다.

본 발명의 치료제는 약제학적으로 허용되는 담체중에 활성성분으로서 본 발명의 항원 결합 단백질을 유효량으로 함유하는 약제 조성물로서 제조될 수 있다. 본 발명의 예방제에서, 즉석주입 형태로, 바람직하게는 생리학적 pH로 완충된, 항원 결합 단백질을 함유하는 수성 현탁액 또는 용액이 바람직하다. 비경구 투여용 조성물은 통상적으로 약제학적으로 허용되는 담체, 바람직하게는 수성 담체 중에 용해된 본 발명의 항원 결합 단백질의 용액 또는 이의 칵테일을 포함할 것이다. 다양한 수성 담체, 예를 들어, 0.9% 살린, 0.3% 글리신 등이 사용될 수 있다. 이러한 용액은 멸균되고, 일반적으로 미립자 물질을 함유하지 않는다. 이러한 용액은 통상적으로 널리 공지된 멸균 기법(예를 들어, 여과)에 의해 멸균될 수 있다. 조성물은 생리학적 조건에 가깝게 만들기 위해 요구되는 약제학적으로 허용되는 보조제, 예컨대, pH 조절제 및 완충제 등을 함유할 수 있다. 이러한 약제 제형 중의 본 발명의 항원 결합 단백질의 농도는 매우 다양할 수 있는데, 즉, 약 0.5 중량% 미만, 일반적으로 약 1 중량% 이상 내지 15 또는 20중량%이며, 선택된 특정 투여 모드에 따라 유체 부피, 점도 등에 기초하여 주로 선택될 것이다.

따라서, 근내 주입을 위한 본 발명의 약제 조성물은 1mL의 멸균 완충수, 약 1ng 내지 약 100mg, 예를 들어, 약 50ng 내지 약 30mg, 더욱 바람직하게는 약 5mg 내지 약 25mg의 본 발명의 항원 결합 단백질, 예를 들어, 항체를 함유하도록 제조될 수 있다. 유사하게는, 정맥내 주입을 위한 약제 조성물은 약 250ml의 멸균 링거액, 및 약 1mg 내지 30mg, 바람직하게는 5mg 내지 25mg의 본 발명의 항원 결합 단백질를 함유하도록 제조될 수 있다. 비경구 투여가능한 조성물을 제조하기 위한 실제적인 방법은 널리 공지되어 있거나, 통상의 기술자에게 자명할 것이며, 예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Science, 15th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania]에 더욱 상세히 기술되어 있다. 정맥내 투여가능 항원 결합 단백질 제형을 제조하기 위해서는, 문헌[Lasmar U and Parkins D"The formulation of Biopharmaceutical products", Pharma. Sci. Tech. today, page 129-137, Vol. 3(3 April 2000), Wang,W "Instability, stabilisation 및 formulation of liquid protein pharmaceutical", Int. J. Pharm 185 (1999) 129-188, Stability of Protein Pharmaceuticals Part A and BedAhern T. J., Manning M. C., New York, NY: Plenum Press (1992), Akers, M. J. "Excipient-Drug interactions in Parenteral Formulations", J. Pharm. Sci. 91 (2002) 2283-2300, Imamura, K et al. "Effects of types of sugar onstabilization of Protein in the dried state", J. Pharm. Sci. 92 (2003) 266-274, zutsu, Kkojima, S. "Excipient crystalinity and its protein-structure-stabilizing effect during freeze-drying", J. Pharm. Pharmacol, 54 (2002) 1033-1039, Johnson, R, "Mannitol-sucrose mixtures-versatile formulations for protein lyophilization", J. Pharm. Sci, 91 (2002) 914-922.]을 참조하라.

문헌[Ha, E Wang W, Wang Y. j. "Peroxide formation in polysorbate 80 and protein stability", J. Pharm Sci, 91,2252-2264, (2002)]의 전체 내용은 본원에 참고문헌으로 인용되었고, 독자에게 구체적으로 참조된다.

약제 제조물중에 있을 때, 본 발명의 치료제는 단위 용량 형태로 존재하는 것이 바람직하다. 치료학적으로 유효한 적절한 용량은 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 환자의 체중에 따라 환자에게 적합한 용량이 계산될 수 있고, 예를 들어, 적합한 용량은 0.1 내지 20mg/kg, 예를 들어, 1 내지 20mg/kg, 예를 들어, 10 내지 20mg/kg 또는, 예를 들어, 1 내지 15mg/kg, 예를 들어, 10 내지 15mg/kg의 범위내에 있을 것이다. 인간에서 류마티스성 관절염, 건선, IBD, 다발성 경화증 또는 SLE과 같은 병태를 효과적으로 치료하기 위해, 본 발명의 항원 결합 단백질의 적합한 용량은 0.1 내지 1000mg, 예를 들어, 0.1 내지 500mg, 예를 들어, 500mg, 예를 들어, 0.1 내지 100mg, 또는 0.1 내지 80mg, 또는 0.1 내지 60mg, 또는 0.1 내지 40mg, 또는 예를 들어, 1 내지 100mg, 또는 1 내지 50mg 범위 이내에 있을 것이고, 상기 용량은 비경구적으로 바람직하게는, 피하로, 정맥내로 또는 근내로 투여될 수 있다. 이러한 용량은 필요에 따라, 의사에 의해 선택된 적절한 시간 간격으로 반복될 수 있다.

본원에 기술된 항원 결합 단백질은 저장을 위해 동결건조되고, 사용전 적합한 담체로 재구성될 수 있다. 이러한 기법은 통상적인 면역글로불린에 효과적인 것으로 드러났으며 당해 기술분야에 공지된 동결건조 및 재구성 기법이 이용될 수 있다.

또 다른 양상에서, 본 발명은 면역계 매개성 염증, 예컨대, 건선, 염증성 장질환, 궤양성 대장염, 크론병, 류마티스성 관절염, 소아 류마티스성 관절염, 전신성홍반성낭창, 신경퇴행성 질환, 예를 들어, 다발성 경화증, 호중구 유도성 질환, 예를 들어, COPD, 베게너 혈관염, 낭포성 섬유증, 쇼그렌 증후군, 만성 장기이식 거부증, 제 1형 당뇨병 이식편대숙주질환, 천식, 알레르기성 질환, 예를 들어, 아토피 피부염, 습진성 피부염, 알레르기성 비염, 및 갑성선염, 척추관절염, 강직성 척추염, 포도막염, 다발성 연골염 또는 피부경화증을 포함하는 기타 자가면역질환의 치료 또는 예방을 위한 본 발명의 항원 결합 단백질 또는 이의 기능성 단편 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제 조성물을 제공한다. 한 구체예에서, 상기 질환은 류마티스성 관절염이다.

아직 추가 양상에서, 본 발명은 면역계 매개성 염증, 예컨대, 건선, 염증성 장질환, 궤양성 대장염, 크론병, 류마티스성 관절염, 소아 류마티스성 관절염, 전신성홍반성낭창, 신경퇴행성 질환, 예를 들어, 다발성 경화증, 호중구 유도성 질환, 예를 들어, COPD, 베게너 혈관염, 낭포성 섬유증, 쇼그렌 증후군, 만성 장기이식 거부증, 제 1형 당뇨병 이식편대숙주질환, 천식, 알레르기성 질환 예를 들어 아토피 피부염, 습진성 피부염, 알레르기성 비염, 및 갑성선염, 척추관절염, 강직성 척추염, 포도막염, 다발성 연골염, 또는 피부경화증을 포함하는 기타 자가면역질환의 치료 또는 예방을 위한 본 발명의 항원 결합 단백질과 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제 조성물을 제공한다. 한 구체예에서, 상기 질환은 류마티스성 관절염이다.

본원에 기재된 서열(SEQ ID NO: 8 내지 SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 48 내지 SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 81 내지 SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 96, SEQ ID NO: 97 및 SEQ ID NO: 103 내지 SEQ ID NO: 123)은 본원에 기재된 서열과 실질적으로 동일한, 예를 들어, 본원에 기재된 서열과 90% 이상, 예를 들어, 91% 이상, 또는 92% 이상, 또는 93% 이상, 또는 94% 이상, 또는 95% 이상, 또는 96% 이상, 또는 97% 이상, 또는 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 서열을 포함한다는 것이 이해될 것이다.

핵산의 경우, 용어 "실질적 동일성(substantial identity)"은 최적으로 정렬되고 비교될 때, 2개의 핵산, 또는 이의 지정된 서열이, 적절한 뉴클레오티드 삽입 또는 결실을 지니면서, 뉴클레오티드의 적어도 약 80%에서, 일반적으로, 뉴클레오티드의 적어도 약 90% 내지 95%에서, 및 더 바람직하게는 뉴클레오티드의 적어도 약 98% 내지 99.5%에서, 동일하다는 것을 나타낸다. 대안적으로, 실질적 동일성은 세그먼트가 선택적인 혼성화 조건하에서 해당 스트랜드의 상보가닥에 혼성화할 때 존재한다.

뉴클레오티드와 아미노산 서열의 경우, 용어 "동일한"은 최적으로 정렬되고 비교될 때, 적절한 삽입 또는 결실을 지니는 2개의 핵산 또는 아미노산 서열 간의 동일성 정도를 나타낸다. 달리, 실질적 동일성은 DNA 세그먼트가 선택적인 혼성화 조건하에서 해당 스트랜드의 상보가닥에 혼성화할 때 존재한다.

2개 서열 간의 동일성 비율은, 2개 서열의 최적 정렬을 위해 도입될 필요가 있는, 갭의 갯수, 각 갭의 길이를 고려하여, 대상 서열에 의해 공유된 동일한 위치의 갯수에 대한 함수이다(즉, 동일성 % = 동일한 위치의 #/위치의 총 # × 100). 2개 서열 간의 서열 비교와 동일성 비율의 결정은, 하기의 비제한적 일예에 기재된 것과 같은, 수학 알고리즘을 사용하여 달성될 수 있다.

2개 뉴클레오티드 서열 간의 동일성 비율은 NWSgapdna.CMP 매트릭스와 40, 50, 60, 70, 또는 80의 갭 가중치(gap weight), 1 , 2, 3, 4, 5, 또는 6의 길이 가중치를 사용하는 GCG 소프트웨어 패키지내의 GAP 프로그램을 사용하여 결정될 수 있다. 2개의 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열 사이의 동일성 비율은 또한 PAM120 가중치 잔기 테이블, 12의 갭 길이 페널티 및 4이 갭 패널티를 사용하는, ALIGN 프로그램(버전 2.0)에 통합된, E. Meyers와 W. Miller의 알고리즘[Comput. Appl. Biosci., 4:11 -17 (1988)]를 사용하여 결정될 수 있다. 또한, 2개이 아미노산 서열 간의 동일성 비율은 Blossum 62 매트릭스 또는 PAM250 매트릭스, 및 16, 14, 12, 10, 8, 6, 또는 4의 갭 가중치 및 1 , 2, 3, 4, 5, 또는 6의 길이 가중치를 사용하는, GCG 소프트웨어 패키지의 GAP 프로그램에 통합된 Needleman과 Wunsch(J. MoI. Biol. 48:444-453 (1970)) 알고리즘을 사용하여 결정될 수 있다.

일예로, 본 발명의 폴리뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 17의 참조(reference) 서열과 100% 동일하거나, 상기 참조 서열과 비교할 때 특정 갯수의 뉴클레오티드 변형을 포함할 수 있다. 그러한 변형은 적어도 하나의 뉴클레오티드 결실, 치환(전이(transition) 및 역위(transversion)를 포함), 또는 삽입으로 구성된 그룹에서 선택되며, 여기서 상기 변형은 참고 뉴클레오티드 서열의 5' 또는 3' 말단 위치에서 일어나거나 참조 서열내 뉴클레오티드들 중에서 개별적으로 또는 참조 서열내의 하나 이상의 연속된 그룹에서 산재된, 그러한 말단 위치들 중 임의 위치에서 일어날 수 있다. 뉴클레오티드 변형의 갯수는 SEQ ID NO: 17의 뉴클레오티드 총 갯수에 각각의 동일성 비율의 수치(100으로 나눈 수치)를 곱하고 상기 SEQ ID NO: 17의 뉴클레오티드 총 갯수로부터 결과값을 공제함으로써 결정되거나, 하기 식에 의해 결정될 수 있다:

nn ≤ xn - (xn·y),

상기 식에서 nn은 뉴클레오티드 변형의 갯수이고, xn은 SEQ ID NO: 17의 뉴클레오티드의 총 갯수이고, y는 50%의 경우 0.50, 60%의 경우 0.60, 70%의 경우 0.70, 80%의 경우 0.80, 85%의 경우 0.85, 90%의 경우 0.90, 95%의 경우 0.95, 97%의 경우 0.97 또는 100%의 경우 1.00이며, 상기 식에서 xn 및 y의 임의의 비정수 결과값은 xn으로부터 이 값을 공제하기 전에 가장 가까운 정수로 반올림된다. SEQ ID NO: 17의 폴리뉴클레오티드 서열의 변형은 이의 코딩 서열내 침묵(nonsense), 비침묵 또는 프레임시프트 돌연변이를 생성시킬 수 있고 그에 따라 그러한 변형후 폴리뉴클레오티드에 의해 엔코딩된 폴리펩티드를 변형시킬 수 있다.

유사하게, 또 다른 일예에서, 본 발명의 폴리펩티드 서열은 SEQ ID NO: 16에 의해 엔코딩된 참조 서열과 100% 동일하거나, 참조 서열과 비교할 때 특정 정수까지의 아미노산 변형을 포함할 수 있는데, 그리하여 동일성 %는 100% 미만이 된다. 그러한 변형은 적어도 하나의 아미노산 결실, 치환(보존적 및 비보존적 치환을 포함), 또는 삽입으로 구성된 그룹에서 선택되며, 여기서 상기 변형은 참고 폴리펩티드 서열의 5' 또는 3' 말단 위치에서 일어나거나 참조 서열내 아미노산들 중에서 개별적으로 또는 참조 서열내의 하나 이상의 연속된 그룹내에 산재된, 그러한 말단 위치들 중 임의 위치에서 일어날 수 있다. 주어진 동일성 %에 대한 아미노산 변형의 갯수는 SEQ ID NO: 16에 의해 엔코딩된 폴리펩티드내 아미노산 총 갯수에 각각의 동일성 비율의 수치(100으로 나눈 수치)를 곱하고 상기 SEQ ID NO: 16에 의해 엔코딩된 폴리펩티드내 아미노산의 총 갯수로부터 결과치를 공제함으로써 결정되거나, 하기 식에 의해 결정될 수 있다:

na≤xa - (xa·y),

상기 식에서 na은 아미노산 변형의 갯수이고, xa은 SEQ ID NO: 16에 의해 엔코딩된 폴리펩티드내 아미노산의 총 갯수이고, y는, 예를 들어, 70%의 경우 0.70, 80%의 경우 0.80, 85%의 경우 0.85 등이며, 상기 식에서 xa 및 y의 임의의 비정수 결과값은 xa로부터 이 값을 공제하기 전에 가장 가까운 정수로 반올림된다.

하기 실시예는 본 발명을 설명하며 본 발명을 제한하지 아니한다.

실시예

실시예 1

재조합 뮤린 , 키메라 및 인간화 항- IL -23 항체의 작제

뮤린 mAbs를 인간 IL-23로 마우스를 면역접종하여 생산하였다. 반응자 동물로부터 비장을 수확하고 골수종 세포와 융합시켜 하이브리도마를 생산하였다. 하이브리도마 상청액 물질을 결합에 관해 스크리닝하였다. 관심있는 하이브리도마를 표준 기술을 사용하여 모노클로닝하였다. 본 실시예에서 사용한 뮤린 항체(8C9 2H6)는, RT-PCR로 분석하였을 때, 2개의 중쇄 및 1개의 경쇄의 존재를 보여주었다. 두 조합물(combinations)(HC1LC1 및 HC2LC1)를 키메라 mAbs의 형태로 작제하였다. 이 하이브리도마로부터 생산되었으며, 하기 실험들에서 사용한 8C92H6 뮤린 mAbs의 주요 활성 결합 도메인은 SEQ ID NO: 8과 SEQ ID NO: 10로 제시된 가변 영역을 포함하는 것으로 믿어진다.

키메라 작제물을 마우스 하이브리도마 세포주로부터의 RNA를 이용한 RT-PCR로 뮤린 V_H 및 V_L 작제물을 제조함으로써 제작하였다. RT-PCR 생성물을 제일 먼저 서열 결정을 위해 벡터내로 클로닝하고 이후 가변 영역을 제한 부위를 비롯한 인간 신호 서열(SEQ ID NO: 36)을 함유한 올리고뉴클레오티드를 사용하여 Rld 및 Rln 포유류 발현 벡터내로 클로닝하였다. 이러한 발현 벡터는 인간 불변 영역을 함유하였다. 다른 작제물을 마찬가지로 인간 불변 영역을 포함하는 pTT 벡터를 사용하여 생산하였다.

인간화 VH 및 VL 작제물을 Rld 및 Rln 포유류 발현 벡터내로의 클로닝을 위한 제한 부위를 비롯한 인간 신호 서열을 포함하는 중첩 올리고뉴클레오티드의 제작에 의해 새로이(de novo) 제조하였다. HindIII 및 SpeI 제한 부위를 도입하여 인간 γ1 불변 영역을 함유하는 Rld내로의 클로닝을 위한 신호 서열(SEQ ID NO: 36)을 함유하는 VH 도메인 골격을 형성하였다. HindIII 및 BsiWI 제한 부위를 도입하여 인간 카파 불변 영역을 함유하는 Rln내로의 클로닝을 위한 신호 서열(SEQ ID NO: 36)을 함유하는 V_L 도메인 골격을 형성하였다. 다른 작제물을 마찬가지로 인간 불변 영역을 포함하는 pTT 벡터를 사용하여 생산하였다. 적절한 경우, 위치-지정 돌연변이유발(site-directed mutagenesis, SDM)을 이용하여 상이한 인간화 작제물을 제조하였다.

인간화:

마우스 경쇄 가변 도메인은 위치 46에서 류신의 부재, 및 위치 69 다음에 개시되는 8개 아미노산(RSPFGNQL)의 삽입 때문에 서열과 구조 둘 모두에서 매우 특이하다. 문헌 및 cDNA 데이터베이스에 대한 검토로 관련 마우스 경쇄 가변 영역에 대한 하나의 보고를 확인하였다. 이 경쇄에 대한 인간화에서, 위치 46의 류신이 마우스 서열에 부재한다. 이 모티프를 인간화 경쇄로 전달하였다.

인간화 과정에서, 다수의 변화가 마우스 서열에 이루어졌다. 이러한 변화는 하기의 것을 포함한다.

시스테인의 세린, 알라닌 또는 발린으로의 치환을 마우스 CDRH3(SEQ ID NO: 3)부터 인간화 CDRH3 대안체(SEQ ID NO:4, 73, 74)까지 실행하였다.

추가적으로 다수의 대안적인 CDR 서열을 SEQ ID NO: 72 내지 80, SEQ ID NO: 95 및 SEQ ID NO: 98 내지 102에 제시된 것과 같이 작제하였다.

인간화 중쇄 A3(SEQ ID NO: 16)

적합한 프레임워크를 CDR 이식을 위해 선택하였고, 3가지 역 돌연변이를 위치 27, 30 및 95에 일으켰다.

인간화 경쇄 MO (SEQ ID NO: 18)

적합한 프레임워크를 CDR 이식을 위해 선택하였다. L46의 결실을 일으켰다.

인간화 경쇄 M1 (SEQ ID NO: 20)

적합한 프레임워크를 CDR 이식을 위해 선택하였다. L46의 결실을 일으켰다. 또한, 역 돌연변이를 위치 59, 64, 68, 69, 70에 일으켰고 위치 69과 70 사이에 RSPFGNQL을 삽입하였다.

인간화 경쇄 N1 (SEQ ID NO: 22)

적합한 프레임워크를 CDR 이식을 위해 선택하였다. L46의 결실을 일으켰다. 또한, 역 돌연변이를 위치 59, 64, 68, 69, 70에 일으켰고 위치 69과 70 사이에 RSPFGNQL을 삽입하였다.

인간화 경쇄 N2 (SEQ ID NO: 24)

적합한 프레임워크를 CDR 이식을 위해 선택하였다. L46의 결실을 일으켰다. 또한, 역 돌연변이를 위치 59와 64에 일으켰다.

SEQ ID NO: 48, 50, 52, 54, 56, 58, 81 내지 90, 96, 97, 및 103 내지 123에 제시된 다수의 추가 인간화 변이체를 유사한 방법으로 생성시켰다.

실시예 2

CHO 세포에서 항체 발현

각각 중쇄와 경쇄를 엔코딩하는 Rld과 Rln 플라스미드를 CHO 세포로 과도적으로(transiently) 동시-형질감염시키고 소규모 또는 대규모로 발현시켜 항체를 생산하였다. 대안적으로, 동일한 플라스미드를 전자천공으로 CHO 세포내로 동시-형질감염시키고 적절한 항체를 발현시키는 안정한 폴리클로날 세포 개체군을 무-뉴클레오티드 배지를 사용하여 선별하였다. 일부 분석에서, 항체를 조직 배양물 상청액으로부터 직접적으로 분석하였다. 다른 분석에서, 재조합 항체를 회수하고 단백질 A 세파로즈 상의 친화력 크로마티그래프로 정제하였다.

그러한 항체의 작제 및 발현에 대한 더 상세한 내용은 WO2007/080174호 및 WO2007/068750호에 기재된 일반적 방법학에 따라 실행되었다.

HEK 293 6E 세포에서의 항체 발현

각각 중쇄와 경쇄를 엔코딩하는 pTT 플라스미드를 HEK 293 6E 세포로 과도적으로 동시-형질감염시키고 소규모 또는 대규모로 발현시켜 항체를 생산하였다. 일부 분석에서, 항체를 조직 배양물 상청액으로부터 직접적으로 분석하였다. 다른 분석에서, 재조합 항체를 회수하고 단백질 A 세파로즈 상의 친화력 크로마티그래프로 정제하였다.

본 발명자들이 코드로 항체를 설명한 경우(즉, A3M0, A3M1, A3N1, A3N2, HC1LC1), 본 발명자들은 언급된 제 1 및 제 2 플라스미드의 동시-형질감염과 발현으로 생성된 mAb를 지칭하며, 예를 들어, 'A3M0'은 적합한 세포주에서 A3 서열을 함유한 플라스미드와 MO 서열을 함유한 플라스미드의 동시-형질감염에 의해 생성된 mAb와 관련이 있다.

실시예 3

뮤린 항- IL -23 항체의 Biacore 분석

항-뮤린 IgG을 아민 커플링 화학을 사용하여 CM5 센서칩에 고정시켰다. 항-IL-23 하이브리도마 항체 샘플을 표면 및 포획된 뮤린 mAb에 주입하였다. 연이어, 재조합 인간 IL-23, 재조합 치노몰구스 IL-23 또는 재조합 인간 IL-12를 5가지 상이한 농도로 포획된 항체 표면위로 흘려주어(O nM - 91 nM 범위) 결합 센서그램(sensorgrams)을 획득하였다. 항체 및 항원 주입후 표면 재생을 3분 동안 0.1 M 인산 주입에 의해 수행하였다.

이중 대조(Double referencing)를 항-뮤린 IgG 센서칩 표면 상에 완충액 주입과 함께 모든 센서그램에 사용하였다. 실험을 25℃, HBS-EP 완충액 중에서 수행하였다. 결과적으로 얻은 센서그램 데이터를 Biacore 3000 장치를 위한 비아이밸류에이션 소프트웨어내에 통합된 1:1 결합 모델을 사용하여 분석하였다. 표 2에 제시된 데이터는 조직 배양물 플라스크로부터 획득한 하이브리도마 상청액으로부터 얻은 것이다.

표 2.

실시예 4

인간 IL -23에 대한 항- IL -23 키메라와 인간화 mAbs 의 결합

키메라 및 인간화 mAbs를 샌드위치 ELISA로 평가하여 인간 IL-23에 대한 이들의 결합 활성을 결정하였다.

플레이트를 1 μg/희석제(중탄산염 완충액)로 항-인간 IL-12로 코팅시켰다. 웰당 50㎕의 이 혼합물을 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 이후 플레이트를 0.05% Tween 20을 포함하는 트리스 완충된 살린(TBST)으로 2회 세척하였다. 플레이트를 실온에서 최소 1시간 동안 웰당 100㎕의 1 % BSA TBST로 블록킹시켰다. 이후 플레이트를 트리스 완충된 살린 + 0.05% Tween 20 (TBST)로 2회 세척하였다. 다양한 농도의 항체를 실온에서 1시간 동안 일정한 농도의 IL-23과 함께 별개의 플레이트에서 인큐베이션하였다. 각 혼합물 50㎕를 분석 플레이트로 옮기고 1시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 이후 이 플레이트를 트리스 완충된 살린 + 0.05% Tween 20(TBST)로 2회 세척하였다. 결합된 mAbs를 1 % BSA TBST 중에서 1/1000으로 희석시킨 염소 항-인간 IgG 감마 쇄 HRP(Sigma A6029)로 검출하였다. 웰 당 50㎕의 검출 항체를 첨가하고 1시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 이후 플레이트를 트리스 완충된 살린 + 0.05% Tween 20(TBST)로 2회 세척하였다. o-페닐렌디아민 디히드로클로라이드(o-phenylenediamine dihydrochloride, OPD)를 20ml H₂O로 재구성하고, 웰당 50㎕씩 첨가하고 실온에서 20분 동안 인큐베이션하였다. 웰당 25㎕씩 3MH₂SO₄를 첨가하였다. 플레이트를 소프트맥스프로(SOftmaxPRO) 버사맥스 플레이트 판독기를 사용하여 OD490nm에서 판독하였다. 결과는 도 1, 2, 및 3에 도시되어 있다. 이것을 아래에 설정된 최적화된 분석 조건과 다른 제조물로부터의 항-IL-23 항체 물질을 사용하여 반복하였고, 결과는 도 1A, 1B 및 3A에 도시되어 있다. 도 1A, 1B 및 3A에 도시된 데이터는 따라서 도 1, 2 및 3에 도시된 데이터 보다 더 정확한 것으로 간주된다. 도 1A에 도시된 8C92H6 HC1LC1의 결합 프로파일은 도 1B에 도시된 것과 다른데, 결합 프로파일에서 이러한 차이가 나타난 이유는 불명이다.

최적화된 분석 조건: 플레이트를 2μg/희석제(인산염 완충된 염수)로 항-인간 IL12로 코팅하였다. 웰당 50㎕의 이 혼합물을 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 이후 플레이트를 인산염 완충된 염수와 0.05% Tween 20 (PBST)로 3회 세척하였다. 플레이트를 실온에서 최소 1시간 동안 웰 당 200㎕의 4% 스킴 밀크 분말(Fluka BioChemika #70166) PBS로 블록킹하였다. 이후 플레이트를 인산염 완충된 염수 + 0.05% Tween 20(PBST)로 3회 세척하였다. 다양한 농도의 항체를 실온에서 1시간 동안 일정한 농도의 IL-23과 함께 별개의 플레이트에서 인큐베이션하였다. 각 혼합물 50㎕을 분석 플레이트로 옮기고 1시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 이후 이 플레이트를 인산염 완충된 살린 + 0.05% Tween 20(PBST)로 3회 세척하였다. 결합된 mAbs를 4% 스킴 밀크 분말(Fluka BioChemika #70166) PBS 중에서 1/3000으로 희석된 염소 항-인간 IgG 감마 쇄 HRP(Serotec STAR 106P)로 검출하였다. 웰당 50㎕씩 검출 항체를 첨가하고 1시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 이후 플레이트를 인산염 완충된 살린 + 0.05% Tween 20 (PBST)로 3회 세척하였다. 웰 당 50㎕씩 검출 항체를 상기 플레이트에 첨가하고 실온에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 웰당 50㎕씩 1 M H₂SO₄를 첨가하였다. 플레이트를 소프트맥스프로 버사맥스 플레이트 판독기를 사용하여 OD450 nm에서 판독하였다.

도 1, 1A, 및 1B는 인간 IL-23에 결합하는 정제된 키메라 8C92H6 HC1LC1의 활성을 보여준다.

도 2는 인간 IL-23에 결합하는 조직 배양물 상청액 키메라 8C92H6 HC1LC1의 활성을 보여준다.

도 3은 인간 IL-23에 결합하는 조직 배양물 상청액 인간화 mAbs의 활성을 보여준다.

도 3A는 인간 IL-23에 결합하는 정제된 인간화 mAbs의 활성을 보여준다.

모든 샘플을 2개 1조로 전개시키고, 각 조의 평균을 도시하였다. 또한, 상청액 물질을 이용한 분석을 상이한 제조물의 조직 배양 상청액을 이용하여 2회 전개시키고, 대표적인 결과를 도시하였다.

실시예 5

항- IL -23 키메라와 인간화 mAbs 의 Biacore 분석

단백질 A 또는 항-인간 IgG(Biacore BR-1008-39)를 제조업자의 사용지침에 따라 1차 아민 커플링으로 Biacore CM5 칩에 고정시켰다. 항-IL-23 항체를 이 표면상에 포획시키고 소정 기간의 안정화를 거친 후, IL13를 항체가 포획된 표면에 통과시키고 결합 센서그램을 획득하였다. 포획된 항체가 제거된 2 펄스의 10OmM 인산을 이용하여 재생을 달성하였는데, 이러한 재생은 후속 결합 사건에서 단백질 A/항-인간 IgG 표면의 활성에 유의미하게 영향을 미치지 아니하였다. 모든 시행을 포획된 항체 표면에서 완충액 주입으로 2회 반복 실행하였다. 동력학을 획득하기 위해 사용한 기계에 따라서 Biacore 3000 또는 T100에 탑재된 소프트웨어를 사용하여 1:1 모델로 분석하였다. 분석을 25℃에서 HBS-EP 완충액을 사용하여 수행하였다. 표 3-6에 제시된 데이터는 달리 명시하지 않는한, 관심있는 항체를 과도적으로 발현하는 CHO 세포의 조직 배양 상청액에 관한 것이다. 데이터를 다양한 농도의 IL-23(256, 64, 16, 4, 1, 0.25nM)를 이용하여 얻었다. 인간화 변이체에 대해 도시된 데이터는 다수의 실행을 대표한다. 키메라 mAb(8C9H6.HC1LC1)를 각 실험에서 단지 1회 시행하였고, 따라서 이 mAb에 대해 제시된 데이터는 1회 시행으로부터 얻은 것이다.

표 3

데이터를 3가지 농도의 IL-23(100, 10 및 1 nM)을 이용하여 Biacore 3000으로 얻었다.

표 4

데이터를 10가지 농도의 IL-23(128, 64, 32, 16, 8, 4, 2, 1, 0.5 및 0.25nM)을 이용하여 T100으로 얻었다.

표 5

데이터를 4가지 농도의 IL-23(256, 64, 16 및 4nM)을 이용하여 Biacore 3000으로 얻었다.

표 6

데이터를 5가지 농도의 IL-23(256, 64, 16, 4 및 1 nM)을 이용하여 T100으로 얻었다.

실시예 5A

정제된 키메라 및 인간화 mAbs 의 Biacore 분석

이 실시예는 본질적으로 실시예 5의 반복이나 IL-23의 다른 공급원을 사용하였다.

Biacore 분석을 CM5 칩상의 포획 표면을 이용하여 실시하였다. 항-인간 IgG(BR-1008-39)를 포획제(capturing agent)로 사용하였다. 항-인간 IgG를 1차 아민 커플링으로 CM5 바이오센서 칩에 커플링시켰다. 인간화 항체를 이 고정된 표면에 포획시키고 규정된 농도의 IL-23을 이 포획된 표면상에 통과시켰다. 상기 포획된 항체 표면 상에 완충액의 주입을 이중-참조를 위해 사용하였다. 3M MgCl₂를 사용하여 각 IL-23 주입 후, 포획된 표면을 재생시켰는데, 재생은 포획된 항체를 제거시켰으나 후속 사이클에서 항체를 포획하는 표면의 능력에 유의미한 영향을 미치지 않았다. T100 Biacore 기계를 이용하여 데이터를 얻었다; 모든 시행을 25℃에서 HBS EP를 이용하여 실행하였다. 데이터를 기계에 탑재된 소프트웨어를 사용하여 분석하였고 1:1 결합 모델에 맞추었다. 표 7과 8은 2회 별개 실험에서8C92H6.HC1LC1 키메라와 선택된 인간화 변이체에 대해 실행된 IL-23 결합 분석을 상세히 보여준다. 표 7과 8에 제시된 데이터는 정제된 항체 샘플에서 얻은 것이다. 인간화 변이체에 대하여 제시된 데이터는 다수의 시행을 대표한다. 키메라 mAb(8C9H6.HC1LC1)을 각 실험에서 단지 1회만 전개시켰고, 따라서 이 mAb에 대해 제시된 데이터는 1회 시행으로부터 얻은 것이다. 표 8A는 비교를 위한 목적으로 A3M0을 포함하는 동일한 Biacore 전개로부터의 조직 배양물 상청액으로부터 얻은 데이터를 보여준다.

표 7

표 8

표 8A

실시예 6

항- IL -23 mAbs ( 뮤린 , 키메라 및 인간화)의 존재시 IL -23 수용체에 대한 IL -23 결합의 억제

항-IL-23 mAbs가 IL-23 특이적 중화 항체임을 입증하기 위해, 뮤린 mAb를 IL-12Rβ1에 대한 IL-12(또는 IL-23)의 억제를 능가하여 IL-23 수용체에 대한 IL-23의 결합의 우선적 억제에 관해 시험하였다.

항-IL-23 뮤린 8C92H6 mAb를 하기 분석으로 시험하였다. 재조합 인간 IL-23 수용체(R&D systems 1400-IR-050) 또는 IL-12Rβ1(R&D systems 839-B1-100) 또는 IL-12Rβ2(R&D systems 1959-B2-050)를 플레이트상의 단일 수용체를 이용할 때 1 μg/ml의 농도로 96 웰 플레이트상에 코팅하였다. IL-12Rβ1과 β2를 결합시킬 때, 둘 모두를 플레이트 상에 코팅시키기 전에 0.5μg/ml로 희석시켰다. 플레이트를 0.05% Tween 20을 함유하는 PBS로 세척하고 난 다음 1 % BSA를 함유하는 PBS로 블록킹시켰다. 50ng/ml의 인간 또는 치노몰구스 IL-23 또는 인간 IL-12(R&D systems 219-IL-025)을 사전-코팅된 플레이트에 첨가하기 전에 동일한 부피의 적정된 정제된 항체 물질과 함께 1시간 동안 사전인큐베이션하였다. 검출을 비오티닐화된 항-인간 IL12(R&D systems BAF-219)에 후속하여 스트렙트아비딘-HRP(GE Healthcare RPN 4401)을 이용하여 실시하였다.

도 7에 도시된 것과 같이, IL-23 뮤린 8C92H6 mAb는 인간 IL-23의 결합을 억제시키고(도 7A) IL-23 수용체에 대한 치노몰구스 IL-23 의 결합을 억제시킬 수 있다(도 7B). 이것과 반대로, 항-IL-23 mAb는 단독의 IL12Rβ1 또는 IL12Rβ1과 IL12Rβ2의 조합물에 대한 재조합 인간 IL-12의 결합을 억제하지 못하였다(도 7C). 데이터는 비상관(irrelevant) 대조 IgG(억제율 0%)와 비교한 중화 mAb로 처리된 조건하에서 IL-23R에 대한 IL-23R의 결합 억제율(%)을 나타낸다.

키메라 및 인간화 mAbs를 인간 IL-23 수용체에 결합하는 인간 IL-23 및 인간 IL23 수용체에 결합하는 치노몰구스(cyno) IL23를 중화시키는 이들의 활성에 대해 평가하였다. 플레이트를 1 μg/희석제(중탄산염 완충액)로 인간 IL23R Fc 키메라로 코팅하였다. 웰당 50㎕의 혼합물을 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 이후 플레이트를 0.05% Tween 20을 포함하는 Tris 완충된 염수(TBST)로 2회 세척하였다. 플레이트를 실온에서 최소 1시간 동안 웰당 100㎕의 1 % BSA TBST로 블록킹시켰다. 이후 플레이트를 0.05% Tween 20을 포함하는 Tris 완충된 염수(TBST)로 2회 세척하였다. 다양한 농도의 항체를 실온에서 1시간 동안 일정한 농도의 IL-23와 함께 별개의 플레이트내에서 인큐베이션하였다. 각각의 혼합물 5O ㎕를 플레이트에 옮기고 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 이후 상기 플레이트를 0.05% Tween 20을 포함하는 Tris 완충된 염수(TBST)로 2회 세척하였다. 결합된 IL23를 1 % BSA TBST 중에서 100 ng/ml로 희석시킨 항-인간 IL12 비오틴 표지된 Ab(R&D systems BAF219)로 검출하였다. 웰당 50㎕씩 비오티닐화된 항체를 첨가하고 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 이후 플레이트를 0.05% Tween 20을 포함하는 Tris 완충된 염수(TBST)로 2회 세척하였다. ExtrAvidin-Peroxidase(Sigma E2886)를 1 % BSA TBST 중에서 1/1000로 희석시켰고, 웰 당 50㎕를 상기 플레이트에 첨가하였다. 이후 플레이트를 0.05% Tween 20을 포함하는 Tris 완충된 염수(TBST)로 3회 세척하였다. H₂O 중에서 재구성된 OPD(Sigma P9187)를 웰당 50㎕씩 상기 플레이트에 첨가하고 실온에서 20분 동안 인큐베이션하였다. OPD를 이미 함유한 웰에 3M H₂SO₄를 웰당 25㎕씩 첨가하였다. 플레이트를 SOftmaxPRO 버사맥스 플레이트 판독기를 사용하여 OD 490nm에서 판독하였다. 결과는 도 4, 5, 및 6에 도시되어 있다. 이것을 아래에 설정된 최적화된 분석 조건과 초기 분석에 사용하였던 것과는 다른 제조물로부터의 항-IL-23 항체를 사용하여 반복하였으며, 결과는 도 4A와 4B, 및 도 6A, 6B 및 6C에 제시되어 있다. 따라서, 도 4A와 4B 및 도 6A, 6B 및 6C에 도시된 데이터는 도 4, 5와 6에 제시된 데이터 보다 더 정확한 것으로 간주된다.

최적화된 프로토콜: 플레이트를 1μg/희석제(인산염 완충된 염수)에서 인간 IL23R Fc 키메라로 코팅시켰다. 웰당 50㎕의 이 혼합물을 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 이후 플레이트를 0.05% Tween 20을 포함하는 Tris 완충된 염수(TBST)로 3회 세척하였다. 플레이트를 실온에서 최소 1시간 동안 웰 당 100㎕의 4% 스킴 밀크 분말(Fluka BioChemika #70166) PBST로 블록킹시켰다. 이후 플레이트를 인산염 완충된 염수 + 0.05% Tween 20(PBST)로 3회 세척하였다. 다양한 농도의 항체를 실온에서 1시간 동안 일정한 농도의 IL-23과 함께 별개의 플레이트에서 인큐베이션하였다. 각각의 혼합물 5O ㎕를 분석 플레이트에 옮기고 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 이후 상기 플레이트를 인산염 완충된 염수 + 0.05% Tween 20(PBST)로 3회 세척하였다. 결합된 IL23를 4 % 스킴 밀크 분말(Fluka BioChemika #70166) PBST 중에서 100 ng/ml로 희석시킨 항-인간 IL12 비오틴 표지된 Ab(R&D systems BAF219)로 검출하였다. 비오티닐화된 항체를 웰당 50㎕씩 첨가하고 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 이후 플레이트를 인산염 완충된 염수 + 0.05% Tween 20(PBST)로 3회 세척하였다. SA HRP(GE healthcare RPN4401)를 4% 스킴 밀크 분말(Fluka BioChemika #70166) PBS 중에서 1/4000으로 희석시키고, 웰당 50㎕씩 상기 플레이트에 첨가하였다. 이후 상기 플레이트를 인산염 완충된 염수 + 0.05% Tween 20(PBST)으로 3회 세척하였다. TMB를 웰당 50㎕씩 상기 플레이트에 첨가하였고 실온에서 15분 동안 인큐베이션하였다. TMB를 이미 함유한 웰에 3M H₂SO₄를 웰당 25㎕씩 첨가하였다. 플레이트를 SOftmaxPRO 버사맥스 플레이트 판독기를 사용하여 OD 450nm에서 판독하였다.

도 4와 4A는 인간 IL-23R에 결합하는 인간 IL-23을 억제시키는 정제된 키메라 8C92H6 HC1LC1의 활성을 보여준다.

도 4B는 인간 IL-23R에 결합하는 치노몰구스 IL-23을 억제시키는 정제된 키메라 8C92H6 HC1LC1의 활성을 보여준다.

도 5는 인간 IL-23R에 결합하는 인간 IL-23을 억제시키는 키메라 8C92H6 HC1LC1을 함유하는 조직 배양 상청액의 활성을 보여준다.

도 6은 인간 IL-23R에 결합하는 인간 IL-23을 억제시키는 조직 배양물 상청액 인간화 mAbs의 활성을 보여준다.

도 6A와 6C는 인간 IL-23R에 대한 인간 IL-23의 결합을 억제시키는 정제된 인간화 mAbs의 활성을 보여준다.

도 6B는 인간 IL-23R에 대한 치노몰구스 IL-23의 결합을 억제시키는 정제된 인간화 mAbs의 활성을 보여준다.

모든 샘플을 2중으로 시행하였고, 각 중복물(duplicate)의 평균을 제시ㅎ나다. 또한, 상청액 물질을 이용한 분석을 상이한 조직 배양물 상청액 제조물을 사용하여 2회 시행하였고 대표적인 결과를 도시하였다.

조직 배양물 상청액 중의 인간화 항체 A3M4, A5M4, A6M4, A7M4, A8M4, A9M4, A10M4, A11M4, A12M4, A10.5M4, A11.5M4, A12.5M4, A10.5M3, A11.5M3, A12.5M3, A10M3, A11M3, 및 A12M3를 또한 이 분석에서 시험하였다. 이러한 항체 모두가 인간 IL23R에 대한 인간 IL23의 결합을 중화시켰고, IC₅₀ 값은 0.14nM 내지 0.57nM의 범위이내였다(데이터 미제시).

실시예 7

항- IL -23 뮤린 및 인간화 mAbs 에 의한 IL -23 생물학적 활성의 억제

즉석에서 분리한 뮤린 비장세포를 단독의 재조합 인간 IL-23으로 처리하거나 사전-인큐베이션후 적정된 IL-23 mAbs와 함께 재조합 인간 IL-23로 처리하였다. 3일 후 배양물 세포 상청액을 수집하였고 IL-17 또는 IL-22 ELISA 듀오 세트(R&D systems)를 사용하여 ELISA로 분석하였다.

인간 재조합 IL-23과의 인큐베이션후 비장세포로부터의 뮤린 IL-17의 생산을 억제시키는 항-IL-23 mAbs의 활성은 도 8, 8A, 8B 및 8C에 도시되어 있다.

뮤린 항체를 3가지 다른 공급원의 IL-23으로 억제에 관해 시험하였다. 일예가 도 8에 도시되어 있다. 추가 실험에서, 뮤린 mAb를 도 8A-C에 도시된 것과 같이 키메라 항체와 인간화 변이체(A3M0)와 비교하였다. 항체는 인간 재조합 IL-23과의 인큐베이션후 비장세포로부터의 뮤린 IL-17의 생산을 억제시켰다.

데이터(Grafit를 사용하여 작도됨)는 무관련 IgG(즉, 억제율 0%)를 포함하는 조건에 의해 생산된 IL-17의 수준과 비교할 때 중화 mAbs로 획득된 억제율(%)를 나타낸다.

도 9, 9A, 9B 및 9C는 뮤린 비장세포로부터의 IL-23 유도된 IL-22 생산을 억제시키는 항-IL-23 mAbs의 활성을 보여준다.

도 9는 뮤린 항체 또는 대조 IgG와 함께 인큐베이션시켰을 때 비장세포내에서 측정된 IL-22의 양을 제시한다.

도 9A-C는 이 분석에서 IL-22 생산의 억제율(%)를 보여준다. 도 9A는 뮤린 항체를 나타내고, 9B는 인간화 항체 A3M0을 나타내며, 9C는 키메라 항체를 나타낸다.

실시예 8

NK92 세포로부터의 IL -12 유도된 IFN γ 생산을 억제시키는 이들의 활성에 대한 항- IL -23 mAbs 와 항- IL -12/23 p40 mAbs 간의 비교

자연 살해 세포주, NK92(ATCC# CRL-2407)를 ATCC 지침에 따라 증식시켰다. 이 세포주는 용량-의존적 방식으로 IL-12에 반응하여 IFNγ를 분비한다. 세포, 웰당 4 x 10⁴개를 배지 존재하에 또는 1 ng의 단독의 IL-12(Peprotech)과 함께 또는 상기 세포에 첨가하기 전에 실온에서 1시간 동안 정제된 항체 물질의 적정물(titration)과 함께 사전-인큐베이션한 IL-12과 함께 3일 동안 배양하였다. 세포 배양물 상청액을 수확하고 배양 3일 후 분석하였고 IFNγ 함량을 제조업자의 사용설명서에 따라 항-hulFNγ 항체 쌍(Biosource)을 사용하여 정량하였다. 요약하자면, 항-인간 IFNγ 포획 mAb를 96웰의 평평한 바닥 Nunc Maxisorp™ 플레이트에 코팅시켰다. 플레이트를 1 % BSA로 블록킹시킨 다음 샘플에 첨가하였다. 비오티닐화된 검출 mAb(Biosource)에 후속하여 스트렙트아비딘-HRP과 TMB 기질을 이용하여 검출을 실시하였다. 단독의 IL-12로 획득한 값을 양성 대조군으로 사용하였고, 단독의 배지를 음성 대조군으로 사용하였다.

본 발명의 항-IL23 mAbs는 NK92 세포로부터의 IL-12-유도 IFNγ 생산에 대해 영향을 미치지 않았다(도 10 참조). 이것은 본 발명의 항-IL23 mAbs가 IL-12의 수용체에 대한 IL-12의 결합을 억제시키지 못한다는 것을 입증하며 그에 따라 이 항체가 IL12와 IL-23 간에 공유되지 않는 에피토프를 인지한다는 것을 제시한다.

실시예 9

항- IL -23 mAbs ( 뮤린 , 키메라 및 인간화)에 의한 IL -23 수용체에 결합하는 내 생성 인간 IL -23의 억제

8C92H6 마우스 모(parental), 키메라 항체 HC1LC1, 및 인간화 변이체 A3M0를 인간 IL-23 수용체에 대한 내생성 인간 IL-23의 결합을 중화시키는 이들의 활성에 관해 평가하였다.

내생성 인간 IL-23을 자극시킨 수지상 세포로부터 제조하였다. 요약하자면, 말초 혈액 단핵구 세포로부터의 음성 선별(negative selection)로 정제된 단핵구를 GMCSF/IL-4 존재하에 5일 동안 배양하였다. 이 배양 시간을 거친후, 세포를 세척하고 CD40L과 자이모산(zymosan)으로 자극하였다. 추가 24시간 경과후, 상청액을 세포로부터 수집하고 IL-23 함량의 평가(ELISA) 및 수용체 중화 분석에 사용 전에 저장하였다.

재조합 인간 IL-23 수용체(R&D systems 1400-IR-050)를 1μg/ml의 농도로 96 웰 플레이트상에 코팅시켰다. 최종 농도 3.5ng/ml의 내생성 인간 IL-23을 정제된 항체 물질의 적정물과 함께 1시간 동안 사전인큐베이션시킨 후 사전-코팅된 플레이트에 첨가하였다. 비오티닐화된 항-인간 IL12(R&D systems BAF-219)에 후속하여 스트렙트아비딘-HRP(GE Healthcare RPN 4401)를 이용하여 검출을 실시하였다. 이 중화 ELISA에서는 1 % BSA를 사용하였다.

뮤린 mAb(8C92H6), 키메라 mAb(HC1LC1), 및 인간화 mAb(A3M0)는 내생성 인간 IL-23를 중화시켰고 인간 IL-23 수용체에 대한 인간 IL-23의 결합을 억제시켰다. 대표적인 데이터는 도 11에 도시되어 있다.

실시예 10.

항- IL -23 mAbs 에 의한 25% AB 혈청 존재시 IL -23 수용체에 결합하는 내생성 인간 IL -23의 억제

재조합 인간 IL-23 수용체(R&D systems 1400-IR-050)를 1 μg/ml의 농도로 96 웰 플레이트에 코팅하였다. 최종 농도 5ng/ml로 내생성 인간 IL-23를 정제된 mAbs의 적정물과 함께 사전 인큐베이션한 후 사전-코팅된 플레이트에 첨가하였다. 비오티닐화된 항-인간 IL12(R&D systems BAF-219)에 후속하여, 스트렙트아비딘-HRP(GE Healthcare RPN 4401)를 이용하여 검출을 실시하였다. 이 중화 ELISA에서는 25% 인간에서 채혈한(pooled) AB 형 혈청을 사용하였다. 8C92H6, HC1LC1, 및 A3M0는 인간 혈청내에서 이들의 활성을 보유하며, 인간 IL-23 수용체에 결합하는 내생성 인간 IL-23의 결합을 억제시킨다. 대표적인 데이터는 도 12에 도시되어 있다.

실시예 11.

항- IL -23 mAbs 에 의한 인간 세포내 내생성 수용체 복합체를 통한 IL -23 유도 pSTAT3 신호전달의 억제.

본 실시예의 분석에서 내생성 수용체 복합체를 통한 IL-23 유도 pSTAT3 신호전달을 DB 인간 림프종 세포주(ATCC CCRL-2289)에서 STAT3의 인산화의 정량화로 측정하였다. 상기 세포주를 mRNA 수준에서의 IL-23R과 IL12β1 발현(Taqman) 및 세포 표면 수용체 발현에 대한 스크리닝으로 확인하였다(유세포분석, 데이터 미제시). DB 세포는 STAT3 인산화에 의해 모니터링된 것과 같이 용량 의존적 방식으로 인간 IL-23에 반응한다.

인간 IL-23(R&D systems 1290-IL) 50ng/ml를 다양한 농도의 정제된 항체 물질과 함께 실온에서 30분 동안 사전-인큐베이션하였다. 이후 IL-23/항체 혼합물을 실온에서 10분 동안 1.25 x 10⁶개의 DB 세포에 첨가하였고, 이후 이 세포를 수확하고 1X의 최종 농도로 얼음이 있는 용해 완충액(Cell Signaling) 중에서 용해시켰다. 이 용해물에서 포스포-STAT3의 발현을 면역분석으로 정량하였다(Mesoscale Discovery kit K110-DID2). IC5O 값은 3회 독립된 실험으로 분석된, 3개의 생물학적 복제물(replicates)에 관한 데이터를 대표한다. A5M0, A6M0, A7M3, A8M3 및 A9M3에 대한 IC5O 값은 2회의 독립된 실험으로 분석된, 3개의 생물학 복제물에 대한 데이터를 대표한다.

IC50 값을 모 항체 8C92H6, the 키메라 항체 HC1LC1, 인간화 항체 A3M0 A5M0, A6M0, A7M3, A8M3 및 A9M3에 관해 결정하였다. 제시된 데이터는 독립된 분석으로부터의 평균 IC50이고(표 9), Grafit를 사용하여 계산하였다. 모든 항체는 IL-23에 의해 유도된 STAT3의 인산화를 억제시켰다. 음성 대조군 mAb는 이 분석에서 인산화된 STAT3의 수준에 영향을 미치지 않았다(데이터 미제시).

표 9:

서열

SEQUENCE LISTING <110> GLAXO GROUP LIMITED BEMBRIDGE, Gary Peter CLARKSON, Jane ELLIS, Jonathan Henry HAMBLIN, Paul, Andrew Lewis, Alan MCADAM, Ruth KOPSIDAS, George <120> Immunoglobulins <130> PB62663 <150> 60977841 <151> 2007-10-05 <160> 123 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Mus Musculus <400> 1 Ser Tyr Gly Ile Thr 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Mus Musculus <400> 2 Glu Asn Tyr Pro Arg Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 17 <212> PRT <213> Mus Musculus <400> 3 Cys Glu Phe Ile Ser Thr Val Val Ala Pro Tyr Tyr Tyr Ala Leu Asp 1 5 10 15 Tyr <210> 4 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Mutated CDR <400> 4 Ser Glu Phe Ile Ser Thr Val Val Ala Pro Tyr Tyr Tyr Ala Leu Asp 1 5 10 15 Tyr <210> 5 <211> 16 <212> PRT <213> Mus Musculus <400> 5 Lys Ala Ser Lys Lys Val Thr Ile Phe Gly Ser Ile Ser Ala Leu His 1 5 10 15 <210> 6 <211> 7 <212> PRT <213> Mus Musculus <400> 6 Asn Gly Ala Lys Leu Glu Ser 1 5 <210> 7 <211> 9 <212> PRT <213> mus musculus <400> 7 Leu Gln Asn Lys Glu Val Pro Tyr Thr 1 5 <210> 8 <211> 126 <212> PRT <213> mus musculus <400> 8 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Gly Ile Thr Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Asn Tyr Pro Arg Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Cys Glu Phe Ile Ser Thr Val Val Ala Pro Tyr Tyr Tyr Ala 100 105 110 Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 9 <211> 378 <212> DNA <213> mus musculus <400> 9 caggttcagc tgcagcagtc tggagctgag ctggcgaggc ctgggacttc agtgaagctg 60 tcctgcaagg cttctggcta caccttcaca agctatggta taacctgggt gaagcagaga 120 actggacagg gccttgagtg gattggagag aattatccta gaagtggtaa tacttactac 180 aatgagaaat tcaagggcaa ggccacactg actgcagaca aatcctccag cacagcgtac 240 atggagctcc gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct atttctgtgc aagatgcgaa 300 tttattagta cggtagtagc tccctattac tatgctctgg actactgggg tcaaggaacc 360 tcagtcaccg tctcctca 378 <210> 10 <211> 119 <212> PRT <213> mus musculus <400> 10 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gln Lys Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Lys Lys Val Thr Ile Phe 20 25 30 Gly Ser Ile Ser Ala Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Lys Leu Ile Tyr Asn Gly Ala Lys Leu Glu Ser Gly Val Ser Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Asp Ser Gly Ser Gln Asn Arg Ser Pro Phe Gly Asn Gln 65 70 75 80 Leu Ser Phe Thr Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu Ala Asp Asp Ala Ala 85 90 95 Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Asn Lys Glu Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly 100 105 110 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 115 <210> 11 <211> 357 <212> DNA <213> mus musculus <400> 11 gacattgtac taacccaatc tccagcatct ttggctgtgt ctctagggca gaaggccacc 60 atctcctgca aggccagcaa aaaagtcact atatttggct ctataagtgc tctgcactgg 120 taccaacaga aaccaggaca gccacccaaa ctcatctata atggagccaa actagaatct 180 ggggtcagtg ccaggttcag tgacagtggg tctcagaacc gctcaccatt tggaaatcag 240 ctcagcttca ccctcaccat tgatcctgtg gaggctgatg atgcagcaac ctattactgt 300 ctgcaaaata aagaggttcc gtacacgttc ggagggggga ccaagctgga aataaaa 357 <210> 12 <211> 457 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Chimeric sequence <400> 12 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Gly Ile Thr Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Asn Tyr Pro Arg Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Cys Glu Phe Ile Ser Thr Val Val Ala Pro Tyr Tyr Tyr Ala 100 105 110 Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Leu Val Thr Val Ser Ser Ala 115 120 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ctgttccccc ccaagcctaa ggacaccctg 780 atgatcagca gaacccccga ggtgacctgt gtggtggtgg atgtgagcca cgaggaccct 840 gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc acaatgccaa gaccaagccc 900 agggaggagc agtacaacag cacctaccgg gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag 960 gattggctga acggcaagga gtacaagtgt aaggtgtcca acaaggccct gcctgcccct 1020 atcgagaaaa ccatcagcaa ggccaagggc cagcccagag agccccaggt gtacaccctg 1080 ccccctagca gagatgagct gaccaagaac caggtgtccc tgacctgcct ggtgaagggc 1140 ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg gagagcaacg gccagcccga gaacaactac 1200 aagaccaccc cccctgtgct ggacagcgat ggcagcttct tcctgtacag caagctgacc 1260 gtggacaaga gcagatggca gcagggcaac gtgttcagct gctccgtgat gcacgaggcc 1320 ctgcacaatc actacaccca gaagagcctg agcctgtccc ctggcaag 1368 <210> 64 <211> 456 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanised sequence <400> 64 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Gly Ile Thr Trp Val Arg Gln 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Gly Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Asn Tyr Pro Arg Ser Gly Asn Ile Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Phe Ile Ser Thr Val Val Ala Pro Tyr Tyr Tyr Ala 100 105 110 Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 112 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanised sequence <400> 112 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Gly Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Asn Tyr Pro Arg Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Phe Ile Ser Thr Val Val Ala Pro Tyr Tyr Tyr Ala 100 105 110 Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 113 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanised sequence <400> 113 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ala Ser Tyr 20 25 30 Gly Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Asn Tyr Pro Arg Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Arg Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Phe Ile Ser Thr Val Val Ala Pro Tyr Tyr Tyr Ala 100 105 110 Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 114 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanised sequence <400> 114 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Ser Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ala Ser Tyr 20 25 30 Gly Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Asn Tyr Pro Arg Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Phe Thr Ser Thr Val Val Ala Pro Tyr Tyr Tyr Ala 100 105 110 Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 115 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanised sequence <400> 115 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ala Ser Tyr 20 25 30 Gly Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Asn Tyr Pro Arg Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Gly Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Phe Ile Ser Thr Val Val Ala Pro Tyr Tyr Tyr Ala 100 105 110 Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 116 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanised sequence <400> 116 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Val Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Lys Lys Val Thr Ile Phe 20 25 30 Gly Ser Thr Ser Ala Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Lys Leu Ile Tyr Asn Gly Ala Lys Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Asn Lys 85 90 95 Glu Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 117 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanised sequence <400> 117 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Lys Lys Val Thr Ile Phe 20 25 30 Gly Ser Ile Ser Ala Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Lys Leu Val Tyr Asn Gly Ala Lys Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Asn Lys 85 90 95 Glu Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 118 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanised sequence <400> 118 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Lys Lys Val Thr Ile Phe 20 25 30 Gly Ser Ile Ser Ala Leu His Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Lys Leu Ile Tyr Asn Gly Ala Lys Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Asn Lys 85 90 95 Glu Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 119 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanised sequence <400> 119 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Lys Lys Val Thr Ile Phe 20 25 30 Gly Ser Ile Ser Ala Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Lys Leu Ile Tyr Asn Gly Ala Lys Leu Glu Ser Gly Val Pro Gly 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Asn Lys 85 90 95 Glu Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 120 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanised sequence <400> 120 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Lys Lys Val Thr Ile Phe 20 25 30 Gly Ser Ile Ser Ala Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Lys Leu Ile Tyr Asn Ser Ala Lys Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Asn Lys 85 90 95 Glu Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 121 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanised sequence <400> 121 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Lys Lys Val Thr Ile Tyr 20 25 30 Gly Ser Thr Ser Ala Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Lys Leu Ile Tyr Asn Gly Ala Lys Pro Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Asn Lys 85 90 95 Glu Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 122 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanised sequence <400> 122 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Lys Lys Val Thr Ile Phe 20 25 30 Gly Ser Thr Ser Ala Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Lys Leu Ile Tyr Asn Gly Ala Lys Pro Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Asn Lys 85 90 95 Glu Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 123 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanised sequence <400> 123 Gly Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Lys Lys Val Thr Ile Phe 20 25 30 Gly Ser Thr Ser Ala Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Lys Leu Ile Tyr Asn Gly Ala Lys Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Asn Lys 85 90 95 Glu Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110

Claims (18)

1. 인간 IL-23에 결합하고 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 95 또는 SEQ ID NO: 100의 CDRH3, 또는 상기 CDRH3내에 1 또는 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 CDRH3의 변이체(variants)를 포함하는, 항원 결합 단백질.
2. 제 1항에 있어서, 상기 항원 결합 단백질이 하기 CDR을 포함하는, 항원 결합 단백질:
   CDRH1: SEQ ID NO: 1;
   CDRH2: SEQ ID NO: 2;
   CDRH3: SEQ ID NO: 4;
   CDRL1: SEQ ID NO: 5;
   CDRL2: SEQ ID NO: 6;
   CDRL3: SEQ ID NO: 7.
3. 제 1항 또는 제 2항의 항원 결합 단백질과 동일한 에피토프에 결합하고 인간 IL-23을 중화시키는, 항원 결합 단백질.
4. 인간 IL-23 및 치노몰구스/(cynomolgus) IL-23 둘 모두를 중화시키는 제 1항 내지 제 3항중 어느 한 항에 기재된 항원 결합 단백질.
5. 인간 IL-23를 중화시키지만 인간 IL-12를 중화시키지 않는 제 1항 내지 제 4항중 어느 한 항에 기재된 항원 결합 단백질.
6. 제 1항 내지 제 5항중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원 결합 단백질이 항체인, 항원 결합 단백질.
7. 제 6항에 있어서, 상기 항체가 인간화(humanized) 항체 또는 키메라 항체인, 항원 결합 단백질.
8. 제 1항 또는 제 2항의 항원 결합 단백질과 경쟁하며 인간 IL-23를 중화시키는, 항원 결합 단백질.
9. 제 6항에 있어서, 상기 항체가 IgG 이소형(isotype)인, 항원 결합 단백질.
10. 제 9항에 있어서, 상기 인간 항체 불변 영역이 IgG1인, 항원 결합 단백질.
11. 제 1항 내지 제 10항중 어느 한 항에 있어서, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 81 , SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 114 및 SEQ ID NO: 115 중에서 선택된 V_H 도메인; 및 SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 96, SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 118, SEQ ID NO: 119, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 122, 및 SEQ ID NO: 123중에서 선택된 V_L 도메인을 포함하는, 항원 결합 단백질.
12. 제 1항 내지 제 5항중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원 결합 단백질이 Fab, Fab', F(ab')₂, Fv, 디아바디(diabody), 트리아바디(triabody), 테트라바디(tetrabody), 미니항체(miniantibody), 미니바디(miniabody), 분리된 V_H, 분리된 V_L 또는 dAb를 포함하는, 항원 결합 단백질.
13. 제 1항 내지 제 11항중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원 결합 단백질이 감소된 항체-의존성 세포매개 세포독성(antibody-dependent cell cytotoxicity, ADCC) 및/또는 보체 활성화를 지니도록 돌연변이된 Fc 영역을 포함하는, 항원 결합 단백질.
14. 제 1 및 제 2 벡터를 포함하는 형질전환되거나 형질감염된 재조합 숙주 세포로서, 상기 제 1 벡터가 제 1항 내지 제 13항에 기재된 항체의 중쇄를 엔코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하며, 상기 제 2 벡터가 제 1항 내지 제 13항중 어느 한 항에 기재된 경쇄를 엔코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 숙주 세포.
15. 제 1항 내지 제 13항중 어느 한 항에 기재된 항원 결합 단백질 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 약제 조성물.
16. 치료학적으로 유효한 양의 제 1항 내지 제 13항중 어느 한 항에 기재된 항원 결합 단백질을 투여하는 단계를 포함하는, 면역계 매개성 염증(immune system mediated inflammation), 예컨대, 건선, 염증성 장질환, 궤양성 대장염, 크론병, 류마티스성 관절염, 소아 류마티스성 관절염, 전신성홍반성낭창, 신경퇴행성 질환(neurodegenerative diseases), 예를 들어, 다발성 경화증, 호중구 유도성 질환(neutrophil driven diseases), 예를 들어, COPD(chronic obstructive pulmonary disease), 베게너 혈관염, 낭포성 섬유증, 쇼그렌 증후군, 만성 장기이식 거부증(chronic transplant rejection), 제 1형 당뇨병, 이식편대숙주질환, 천식, 알레르기성 질환, 아토피 피부염, 습진성 피부염(eczematous dermatitis), 알레르기성 비염, 및 갑성선염, 척추관절염(spondyloarthropathy), 강직성 척추염, 포도막염, 다발성 연골염(polychondritis) 또는 피부경화증을 포함하는 기타 자가면역질환을 앓고 있는 인간 환자를 치료하기 위한 방법.
17. 면역계 매개성 염증, 예컨대, 건선, 염증성 장질환, 궤양성 대장염, 크론병, 류마티스성 관절염, 소아 류마티스성 관절염, 전신성홍반성낭창, 신경퇴행성 질환, 예를 들어, 다발성 경화증, 호중구 유도성 질환, 예를 들어, COPD, 베게너 혈관염, 낭포성 섬유증, 쇼그렌 증후군, 만성 장기이식 거부증, 제 1형 당뇨병, 이식편대숙주질환, 천식, 알레르기성 질환 아토피 피부염, 습진성 피부염, 알레르기성 비염, 및 갑성선염, 척추관절염, 강직성 척추염, 포도막염, 다발성 연골염 또는 피부경화증을 포함하는 기타 자가면역질환의 치료 또는 예방을 위한 약제의 제조에 사용되는, 제 1항 내지 제 13항중 어느 한 항에 기재된 항원 결합 단백질의 용도.
18. 면역계 매개성 염증, 예컨대, 건선, 염증성 장질환, 궤양성 대장염, 크론병, 류마티스성 관절염, 소아 류마티스성 관절염, 전신성홍반성낭창, 신경퇴행성 질환, 예를 들어, 다발성 경화증, 호중구 유도성 질환, 예를 들어, COPD, 베게너 혈관염, 낭포성 섬유증, 쇼그렌 증후군, 만성 장기이식 거부증, 제 1형 당뇨병, 이식편대숙주질환, 천식, 알레르기성 질환 아토피 피부염, 습진성 피부염, 알레르기성 비염, 및 갑성선염, 척추관절염, 강직성 척추염, 포도막염, 다발성 연골염 또는 피부경화증을 포함하는 기타 자가면역질환의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 제 1항 내지 제 13항중 어느 한 항에 기재된 항원 결합 단백질.

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