KR20100076263A - 송아지설사병 예방을 위한 신규한 미생물 및 그 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 송아지 분변으로부터 분리 동정된 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus Fermentum) BLAB19 및 엔테로코커스 라티(Enterococcus Ratti) BLAB41 중 하나 이상을 포함하는 생균제 조성물을 제공한다. 본 발명은 내산성, 내담즙성 및 생체 안전성이 인정되고, 병원성 세균 억제활성을 가져 질병을 예방한다.

생균제, 락토바실러스 퍼멘텀

Description

송아지설사병 예방을 위한 신규한 미생물 및 그 용도{Microorganisms for prevention of calves with diarrhea and use thereof}

본 발명은 송아지 분변으로부터 분리 동정된 신규한 락토바실러스 퍼멘텀 BLAB19 및 엔테로코커스 라티 BLAB41 중 하나 이상을 포함하는 생균제 조성물에 관한 것이다.

2000년을 기준으로 전 세계적으로 가축성장 촉진 목적의 사료첨가용 항생제는 약 12,000톤이며 질병치료용 항생제는 약 900톤으로 집계 되었을 정도로 항생제가 과도하게 사용되고 있다. 현재 세계적 추세는 가축 사료 내 항생제 첨가가 인체에 여러 가지 부작용을 초래할 수 있는 것을 고려하여 질병치료 목적 외에 질병예방 및 성장촉진 목적으로 사료에 첨가되는 항생제의 사용을 전면 금지시키거나 규제하고 있는 실정으로, 항생제 사용 규제에 따라 가축의 생선성이 저하되고 폐사율이 증가할 수 있어 이러한 문제점을 보완할 수 있는 대체제의 개발이 매우 시급한 실정이다.

송아지의 설사병은 소 질병 중 가장 많은 발생율을 보이며 이에 의한 축산농 가의 경제적 피해 또한 가장 크다. 설사 단독 증세나 설사 증세가 포함된 합병증이 전체 질병 중 60% 이상을 차지한다. 항생제는 그 효과 면에서 가장 빠르고 만족할 만한 효과를 얻을 수 있는데 연변의 방지와 성장촉진에 매우 유익하다. 그래서 현재도 여러 가지의 항생제가 이용되고 있으며 지속적으로 개발되고 있다. 그렇지만 항생제의 사용은 가축의 장내에서 항생물질에 대한 저항성이 강한 미생물의 유도, 축산물 내 잔류가능성과 인간에 있어 병원성 미생물의 항생제에 대한 저항성 증진 등의 문제를 야기한다. 이러한 문제 때문에 선진국에서는 가축사료에 대한 항생제의 남용을 적극적으로 차단하고 있으며, 앞으로도 그 규제를 강화할 전망이다. 특히, 축산물의 해외수출을 위해서는 항생물질의 청결화가 선결과제이다. 그러므로 항생제를 대체할 수 있는 물질 개발이 자연적으로 대두되는 데 천연항생물질 및 생균제 등이 항생제 대체제로서 부각되고 있다.

Gilliland(1979)와 Fuller(1989)에 따르면 생균제의 조건으로는 첫째, 정상 소화기관 미생물총에 대하여 비병원성이어야 하며, 산도가 높은 위와 담즙산 농도가 높은 십이지장에서 고농도로 생존하여야 한다. 둘째, 우수한 생균제는 장내에서 빠르게 성장 할 수 있어야 하고 대사활동을 하여야 한다. 셋째, 생균제는 소화기관에서 집락을 형성하여 부착하며 유기산 생산효율이 우수하고 유해미생물을 억제할 수 있는 항생물질을 분비하여야 한다. 마지막으로 대량 생산이 용이하고 생존율이 우수하여야 한다.

생균제로 가장 많이 이용되는 미생물 가운데 하나가 유산균이다. 그러나 기능성 미생물제의 경우 숙주 특이성이 높은 유산균의 특성을 고려하지 않고 통상적 으로 인체나 다른 축 종에서 분리된 유산균을 분별없이 사용되고 있다. 이에 소의 설사병의 예방 및 치료를 위하여 소 장관유래의 미생물 균주의 개발이 절실히 요구되고 있다.

본 발명자들은 생균제로서 유용한 송아지 분변으로부터 분리 동정된 신규한 락토바실러스 속 미생물인 락토바실러스 퍼멘텀 BLAB19 균주 및 락토코커스 속 미생물인 엔테로코커스 라티 BLAB 41균주가 소의 설사를 유발시키는 대표적인 균주인 대장균 및 살모넬라에 대한 항균력과 항바이러스성이 우수함을 확인하고서 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 목적은 소의 장질환 예방 또는 치료를 위한 기능성 생균제로서 사용이 가능한 신규한 락토바실러스 속 미생물 및 엔테로코커스 속 미생물 중 하나 이상을 포함하는 조성물을 제공함에 있다.

본 발명은 송아지 장관 유래의 신규한 락토바실러스 속 미생물인 락토바실러스 퍼멘텀 BLAB19를 제공한다.

본 발명은 송아지 장관 유래의 신규한 엔테로코커스 속 미생물인 엔테로코커스 라티 BLAB41을 제공한다.

본 발명에 따른 송아지 장관 유래의 락토바실러스 퍼멘텀 BLAB19 및 엔테로코커스 라티 BLAB41은 내산성, 내담즙성, 유해 미생물 억제활성 및 인체 안전성이 우수한 특성이 있다.

락토바실러스 속 미생물 및 엔테로코커스 속 미생물은 자연계에 널리 존재하며 유산을 생산한다. 일반적으로 이와 같은 유산균은 직접 혹은 간접적으로 식품에 첨가되어 이들의 대사산물인 유산에 의하여 식품의 저장성을 향상시키며, 식품의 향미와 조직을 개선한다고 알려져 있다. 또한, 발효식품을 통하여 섭취된 유산균은 장내로 유입된 후 장내 상피세포에 착생하게 되어 병원성 미생물의 저해 및 길항작용, 면역활성의 증진, 암 발생률의 감소 및 발암원인성 효소의 감소 등 숙주 동물에 많은 도움을 준다. 따라서 유산균은 동서양을 막론하고 유제품, 육제품, 침채류 및 각종 젓갈류의 가공에 유용한 보조 수단뿐만 아니라 생균제로도 이용되고 있다. 그런데, 유산균을 생균제로 이용하기 위해서는 그 유산균이 위산이나 담즙에 내성이 있어 장내 도달율이 높아야하며 장내 상피 세포나 점막에 흡착하여 정착할 수 있고, 바람직하게는 항균 물질을 분비하여 유해균을 억제함으로써 장을 안정화시킬 수 있고, 유해균의 장 정착을 방지하며 식품으로서 사용이 가능하고 안전해야 한다. 본 발명의 락토바실러스 퍼멘텀 BLAB19 및 엔테로코커스 라티 BLAB41은 위 성질을 모두 갖추고 있는 신규한 미생물이다.

본 발명에 따른 송아지 장관 유래의 락토바실러스 퍼멘텀 BLAB19 및 엔테로코커스 라티 BLAB41의 분리 및 동정은 다음 방법에 의해 수행되었다. 먼저, 송아지의 분변을 채취한 후 생리식염수를 이용하여 분변을 현탁시킨 후 MRS(Difco co.)배지에서 배양하고 생성된 콜로니(colony)를 선별한 다음 내산성 및 내담즙성 시험에서 생존율이 우수한 균주들을 분리하였으며, 상기와 같이 분리된 미생물은 버제스 매뉴얼(Bergey's manual)에 따라 형태학적, 생화학적 특성을 조사하였고 그람 염색을 실시하여 그람 양성이며 간균이고 카탈라제(catalase test) 음성인 균주들을 선별하였다.

상기 선별된 균주들을 API 50 CHL Kit와 16S rRNA를 한국미생물 보존센터에 의뢰하여 미생물을 동정한 결과 락토바실러스 퍼멘텀과 99%의 상동성을 보이는 균주 중 항균성과 항바이러스성이 가장 우수한 균주 1주를 선별한 다음 락토바실러스 퍼멘텀 BLAB19로 명명하였고, 엔테로코커스 라티와 99%의 상동성을 보이는 균주 중 항균성과 항바이러스성이 가장 우수한 균주 1주를 선별한 다음 엔테로코커스 라티 BLAB41로 명명하였다.

본 발명에 따른 락토바실러스 퍼멘텀 BLAB19는 다음과 같은 특성을 지닌다.

첫째로, 낮은 pH의 스트레스에서 생존하며, 담즙산에도 생존력이 우수하다.

둘째로, 본 발명의 락토바실러스 퍼멘텀 BLAB19는 유해 미생물을 억제하는 활성이 있다. 상기 유해 미생물은 이들로 한정되는 것은 아니지만, 대장균(K88, K99, F18, F41), 살모넬라균(S. typhimurium, S. dublin)이 포함된다.

셋째로, 본 발명의 락토바실러스 퍼멘텀 BLAB19는 바이러스를 중화시키는 능력이 있다. 상기 바이러스는 이들로 한정되는 것은 아니지만, 보바인 로타바이러스(bovine rotavirus) 및 보바인 코로나 바이러스(bovine corona virus)가 포함된다.

본 발명에 따른 엔테로코커스 라티 BLAB41은 다음과 같은 특성을 지닌다.

첫째로, 낮은 pH의 스트레스에서 생존하며, 담즙산에도 생존력이 우수하다.

둘째로, 본 발명의 엔테로코커스 라티 BLAB41은 유해 미생물을 억제하는 활성이 있다. 상기 유해 미생물은 이들로 한정되는 것은 아니지만, 대장균(K88, K99, F18, F41), 살모넬라균(S. dublin)이 포함된다. 다만 락토바실러스 퍼멘텀 BLAB19와는 달리 살모넬라 티피뮤리움 (Salmonella typhimurium )을 억제하는 효과는 없다.

셋째로, 본 발명의 엔테로코커스 라티 BLAB41은 바이러스를 중화시키는 능력이 있다. 상기 바이러스는 이들로 한정되는 것은 아니지만, 보바인 로타바이러스(bovine rotavirus) 및 보바인 코로나 바이러스(bovine corona virus)가 포함된 다.

본 발명은 락토바실러스 퍼멘텀 BLAB19 또는 엔테로코커스 라티 BLAB41 중 하나 이상을 포함하는 소의 장질환 예방 또는 치료를 위한 생균제 조성물을 제공한다.

‘장질환’으로는 이에 한정되는 것은 아니지만, 예를 들어, 병원성 미생물(대장균, 살모넬라 등)에 의한 감염성 설사, 위장염, 염증성 장질환, 신경성 장염 증후군, 소장 미생물 과성장증, 장 급이성 설사 등이 포함된다.

‘생균제(Probiotics)’는 살아있는 균 즉, 사람이나 동물이 섭취했을 때 위장관에 머물러 생존할 수 있는 미생물로서 특정 병리적 상태를 예방하거나 치료할 수 있는 사람이나 동물에게 유익한 효과를 주는 미생물 제제를 말한다. 구체적으로 미생물제제란 미생물을 살아 있는 상태로 제제화한 의약품 또는 동물 약품을 말한다. 일반적으로 생균제는 장내 세균총의 이상 발효에 의하여 야기되는 제반 증상을 치료하고 개선하는 효과가 있으며 사람 및 동물에 투여되면 장내의 소화관 벽에 밀집, 정착하여 유해균이 정착하지 못하게 하는 작용을 하며, 유산을 생성하여 장내의 pH를 낮추어서 유해세균이 증식하지 못하게 한다. 또한, 투여된 생균제는 박테리오신(Bacteriocin)과 과산화물을 생성하여 병원균의 증식을 억제하며 영향분의 흡수를 담당하는 장융모의 활동을 도와준다. 이밖에도, 영양소의 흡수와 이용을 돕는 물질을 생성하고, 동물에 있어서 사료 요구율을 개선시키며 병원균이 생성하는 독성물질을 중화하는 물질을 생성하기도 한다.

본 발명은 또한 소의 장질환 예방 또는 치료용 생균제의 제조를 위한 락토바 실러스 퍼멘텀 BLAB19 및 엔테로코커스 라티 BLAB41의 용도를 제공한다. 따라서 락토바실러스 퍼멘텀 BLAB19 및 엔테로코커스 라티 BLAB41 중 하나 이상을 포함하는 생균제 조성물은 소의 장질환 예방 또는 치료를 위한 용도로 이용될 수 있다.

또한 본 발명은 소에게 치료상 유효량의 락토바실러스 퍼멘텀 BLAB19 및 엔테로코커스 라티 BLAB41 중 하나 이상을 포함하는 생균제 조성물을 투여하는 것을 포함하는 소의 장질환 예방 또는 치료방법을 제공한다.

본 발명의 생균제 조성물은 다양한 제형과 방법으로 제조 및 투여될 수 있다. 예를 들어, 유효량의 락토바실러스 퍼멘텀 또는 엔테로코커스 라티 를 약제학적 분야에서 통상적으로 사용하는 담체와 혼합하여 제조할 수 있다. 유효량의 조성물 내 생균수는 바람직하게는 10⁷ 개/g 이상을 의미한다. 담체로는 예를 들어, 결합제, 활탁제, 붕해제, 부형제, 가용화제, 분산제, 안정화제, 현탁화제, 색소 및 향료를 혼합하여 정제, 트포키, 캡슐, 엘렉시르, 서스펜션, 시럽, 웨이퍼(wafer), 산제, 과립제 등의 형태로 사용할 수 있다. 바람직한 투여방식으로는 경구 투여한다. 이외에 본 발명 약학 조성물은 각종 제형의 형태로 통용되는 기법에 따라 제조할 수 있다. 투여 용량은 체내에서 활성 성분의 흡수도, 불활성율, 배설속도 및 치료할 질병의 중증정도에 따라 적절히 선택할 수 있다.

본 발명인 송아지 분변으로부터 분리 동정된 락토바실러스 퍼멘 텀(Lactobacillus Fermentum) BLAB19 및 엔테로코커스 라티(Enterococcus Ratti) BLAB41 은 내산성, 내담즙성 및 생체 안전성이 인정되고, 병원성 세균 억제활성을 가져 질병을 예방한다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

[실시예]

실시예 1. 송아지 장관유래 미생물의 분리 및 동정

(1) 송아지 장관유래 미생물 분리

충북 영주, 경기도 화성, 충남 아산에 위치한 5곳의 농장에서 초유를 섭취하고 있는 총 15두의 송아지로부터 분변을 채취하였다. 채취한 분변을 0.85% 멸균된 생리식염수를 이용하여 1시간 동안 현탁시켜 MRS agar(Difco co.) 배지에 도말한 후 37 ℃에서 48시간 배양하였다. 생성된 콜로니(colony)의 형태에 따라 총 300개 의 균주를 1차 선별한 후 상기 선별된 균주를 MRS broth에서 48시간 배양하여 최종 pH가 4.0이하인 균주를 2차로 선별하였다. 2차로 선별된 균주를 pH3.0으로 조정된 MRS broth에서 24시간 배양한 후 pH를 측정하였고 아래 표 1에서 나타낸 바와 같이 OD₆₀₀이 0.6 이상인 균주 22개를 3차 선별하였다.

(2) 내산성 및 내담즙성을 가진 미생물 분리

상기의 3차 선별된 균주를 내산성 및 내담즙성 시험을 위해 인공위액(pH 2.5)와 인공 담즙액(pH 6.8)을 제조하여 실시하였다. 인공위액은 pH 2.5로 조절한 MRS both에 1 %(w/v) 펩신(sigma co.)를 첨가하여 사용하였다. 내산성 시험을 실시하기 위해 2 회 계대한 균주를 MRS broth에서 37 ℃, 150 rpm, 24 시간 배양한 후, 3,000×g에서 10 분간 원심분리 하여 균체를 회수하였다. 이를 37 ℃로 유지된 인공위액을 상등액과 동량으로 첨가하여 37 ℃에서 3 시간 배양하였으며, 배양 후 MRS 배지에 도말하여 균수를 측정하였다.

인공 담즙액은 MRS broth에 1 %(w/v) 판크레아틴을 첨가하여 멸균된 10 %(w/v) 옥스갈(oxgall, Difco co.)용액을 배지의 1 %(v/v)가 되도록 첨가하였다. 그 후 최종 pH를 6.8 로 조정하여 0.45 ㎍ 필터로 여과멸균 후 사용하였다. 분리 유산균의 인공담즙에 대한 내성은 인공위액에서 3 시간동안 배양 후 3,000×g 에서 10 분간 원심분리하여 상등액은 버리고 균체만 회수하여 인공 담즙액을 상등액과 동량으로 첨가하여 37 ℃에서 24 시간 배양 후 MRS 배지에 도말하여 균수를 측정하였다.

인공위액과 인공담즙액을 처리하지 않은 균주를 대조군이라 할 때, 아래 표 2에서는 대조군에 대응하는 3차 선별된 균주의 생존율을 내산성 시험(%) 및 내담즙성 시험(%)로 나타내었다.

내산성이 10%이상이며 내담즙성이 있는 15개의 균주를 선별하여 그 중에서 그람 양성이며 간균이고 카탈라제(catalase test) 음성인 균주를 최종적으로 선별하였다.

(3) 분리한 균주의 동정

최종적으로 선별된 총 5개의 균주 (BLAB19, BLAB 24, BLAB 31, BLAB 41, BLAB 59)는 한국 미생물 보전센터에 의뢰하여 API 50 CHL 키트 조사결과 BLAB19, BLAB24, BLAB31은 락토바실러스 퍼멘텀과 81.2%의 상동성을 보였으며, BLAB 41 및 BLAB 59는 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis ssp lactis)와 99.2%의 상동성을 보였으며, 16S rRNA의 염기서열을 조사한 결과 도1 내지 5에서 나타난 바와 같이 BLAB19, BLAB24, BLAB31의 염기서열은 락토바실서스 퍼멘텀과 99%의 상동성을 보였으며, BLAB41 및 BLAB59 는 엔테로코커스 라티와 99%의 상동성을 보였다.

[실험예]

실험예 1. 항균성 시험

상기 실시예1에서 분리 동정된 총 5개의 유산균주 (BLAB19, BLAB 24, BLAB 31, BLAB 41, BLAB 59)의 항균 활성은 송아지의 설사를 유발시키는 대표적인 균주인 대장균(K88, K99, F18, F41)과 살모넬라균(S.typhimurium, S.dublin)에 항균력이 있는지 페이퍼 디스크(paper disk)를 이용하여 측정하였다. 항균성 시험을 실시하기 위해 대장균(K88, K99, F18, F41)과 살모넬라균(S.typhimurium, S.dublin) 및 분리 동정된 총 5개의 유산균주를 2회 계대배양 하였다. 계대 배양된 유산균은 MRS broth에서 48시간 진탕배양 하였으며, LB broth 와 TSB에서 24시간 진탕 배양한 각 병원성 미생물을 nutrient agar 배지에 멸균된 면봉을 이용하여 도말하였다. MRS에서 48시간 배양한 유산균주를 페이퍼 디스크에 적신 후 병원성 미생물이 도말된 plate에 올려놓은 후 37℃에서 24시간 배양 후 클리어존(clear zone)을 관찰하였다.

측정 결과 아래 표3에서 나타난 바와 같이 대장균의 경우 분리된 유산 균주 모두 항균력을 보였으며, K88의 경우 BLAB41이, K99의 경우 BLAB24, BLAB31, BLAB41이, F18의 경우 BLAB24, BLAB41이 각 균에 대한 항균력이 우수하였다. 살모넬라 티피뮤리움(Salmonella typhimurium)의 경우 BLAB19만이 균에 대한 증식을 억제하였으며, 살모넬라 듀블린(Salmonelladublin)의 경우 분리된 모든 균주가 억제효과를 나타내었다. 특히 BLAB19, BLAB31, BLAB41이 살모넬라 듀블린의 증식 억제 효과가 가장 우수 하였다.

아래 표 3에서 나타난 병원균의 성장 억제 정도는 클리어존의 직경을 측정하여 평가되었으며, -는 음성을 나타내고, +는 10mm, ++는 11 내지 15mm를 나타내며 +++는 16 내지 20mm를 나타낸다.(도 7참조)

또한, 분리 동정된 총 5개의 유산균주 (BLAB19, BLAB 24, BLAB 31, BLAB 41, BLAB 59)와 송아지 설사를 유발시키는 대표적인 병원성 미생물인 대장균K99또는 살모넬라 듀블린을 함께 배양하였을 때 유산균이 각각의 병원성 미생물에 대한 증식을 억제시키는지 알아보기 위해 경쟁적 배제시험을 실시하였다. 분리 동정된 유산균, 대장균K99 및 살모넬라 듀블린을 활성시키기 위해 MRS broth, LB broth, TSB에 접종하여 37℃, 200rpm에서 18시간 배양하였다. MRS broth에 전배양 되어있는 대장균K99와 살모넬라 듀블린을 분리 동정된 유산균의 1/10로 접종하여 37℃, 200rpm에서 배양하였다. 3시간 단위로 균 배양액을 채취하여 pH를 측정하고 유산균, 대장균 및 살모넬라균의 CFU/ml를 측정하였다.

시험 결과 도 6내지 15에서 나타난 바와 같이 모든 분리 유산균주는 대장균K99와 살모넬라 듀블린의 증식을 억제하였다. 배양시작 3시간 이내에는 유산균의 수가 감소하고 대장균K99와 살모넬라 듀블린의 수가 증가하였으나 3시간 내지 9시간에는 유산균의 수가 증가함에 따라 대장균K99와 살모넬라 듀블린의 수가 감소하였으며 9시간 이후부터는 유산균만 증식하였다. pH는 배양시작부터 6시간 사이에 pH4.0까지 급격하게 떨어졌으며, 6시간 이후부터는 pH4.0 수준을 유지하였다. 이는 대장균K99와 살모넬라 듀블린의 증식을 억제함에 따라 pH도 변화하는 것을 볼 수 있었다. BLAB41, BLAB59는 대장균K99의 증식 억제효과가 우수하였으며, BLAB19 및 BLAB41은 살모넬라 듀블린의 증식억제 효과가 가장 우수하였다.

실험예 2. 항바이러스성 시험

분리 동정된 유산균주가 보바인 로타바이러스(bovine rotavirus) 와 보바인 코로나 바이러스(bovine corona virus)에 대한 중화능력을 측정하기 위해 혈구응집억제시험 (Hemagglutinin Inhivition(HI) test)을 실시하여 응집반응을 관찰하였다. MRS broth 에 분리 동정된 5종의 유산균주를 각각 접종하여 37℃에서 24시간 배양하였다.

실험 결과 아래 표 4에서 나타난 바와 같이 분리 동정된 5종의 유산균주와 원심분리하여 획득한 상등액 (cell free supernatant)은 보바인 로타바이러스 및 보바인 코로나 바이러스에 대한 중화력이 있었다. 보바인 로타바이러스의 경우 분리 동정된 5종의 유산균주 중 BLAB19, BLAB 31 및 BLAB 41의 경우 중화능력이 우수하고 보바인 코로나 바이러스의 경우 BLAB19 및 BLAB41이 중화능력이 가장 우수 하였다.

아래 표 4에서 CLS는 원심분리 상등액을 의미하며 병원균의 성장 억제 정도는 적혈구 세포의 혈구 응집을 측정하여 평가되었으며, -는 음성을 나타내고, +는 20 내지 40HI, ++는 50 내지 80HI, +++SMS 90 내지 160HI를 나타내며 ++++는 170 내지 320HI를 나타낸다.

실시예 2. 미생물 균주의 생산조건 확립

분리 동정된 5종의 유산균 중 선별된 두 종류의 유산균 BLAB19 및 BLAB41을 배양하여 유산균의 생산조건을 확립하기 위해 일정한 시간간격으로 600nm에서 흡광도를 측정해 본 결과 도 16에서 나타난 바와 같이 27시간 이후부터 유산균의 정체기라는 것을 알 수 있었다. 따라서 유산균을 배양하여 산업적으로 사용할 경우 27시간 이상 배양하여야 한다.

또한 상기 선별된 두 종류의 유산균을 배양하여 동결건조 시켰으며 미생물의 활성을 측정하기 위해 유산균 배양액과 동결건조 된 분말을 MRS아가 배지에 도말하여 CFU(colony forming unit)를 측정하였다. 그 결과 유산균 배양액의 경우 4X10⁶CFU/g, 동결 건조된 유산균 분말의 경우 6 X 10⁸CFU/g이었다.

도 1은 BLAB19의 16S rDNA 염기서열 분석결과이다.

도 2는 BLAB24의 16S rDNA 염기서열 분석결과이다.

도 3은 BLAB31의 16S rDNA 염기서열 분석결과이다.

도 4는 BLAB41의 16S rDNA 염기서열 분석결과이다.

도 5는 BLAB59의 16S rDNA 염기서열 분석결과이다.

도 6는 선별된 총 5개의 균주의 페이퍼 디스크 상에 클리어존이 나타난 사진이다(A : 대장균K88, B: 대장균K99, C: 대장균F18, D: 대장균F41, E: 살모넬라 티피뮤리움, F: 살모넬라 듀블린).

도 7은 BLAB19와 대장균 K99를 함께 배양하였을 때 경쟁적 배제시험 결과를 나타내는 그래프이다.

도 8은 BLAB19와 살모넬라 듀블린(SD)을 함께 배양하였을 때 경쟁적 배제시험 결과를 나타내는 그래프이다.

도 9은 BLAB24와 대장균 K99를 함께 배양하였을 때 경쟁적 배제시험 결과를 나타내는 그래프이다.

도 10는 BLAB24와 살모넬라 듀블린(SD)을 함께 배양하였을 때 경쟁적 배제시험 결과를 나타내는 그래프이다.

도 11은 BLAB31과 대장균 K99를 함께 배양하였을 때 경쟁적 배제시험 결과를 나타내는 그래프이다.

도 12은 BLAB31과 살모넬라 듀블린(SD)을 함께 배양하였을 때 경쟁적 배제시 험 결과를 나타내는 그래프이다.

도 13는 BLAB41과 대장균 K99를 함께 배양하였을 때 경쟁적 배제시험 결과를 나타내는 그래프이다.

도 14은 BLAB41과 살모넬라 듀블린(SD)을 함께 배양하였을 때 경쟁적 배제시험 결과를 나타내는 그래프이다.

도 15는 BLAB59와 대장균 K99를 함께 배양하였을 때 경쟁적 배제시험 결과를 나타내는 그래프이다.

도 16는 BLAB59와 살모넬라 듀블린(SD)을 함께 배양하였을 때 경쟁적 배제시험 결과를 나타내는 그래프이다.

도 17은 BLAB19 및 BLAB 41의 시간에 따른 성장 곡선을 나타내는 그래프이다.

Claims (5)

1. 송아지 장관 유래의 락토바실러스 퍼멘텀 BLAB19.
2. 송아지 장관 유래의 엔테로코커스 라티 BLAB41.
3. 락토바실러스 퍼멘텀 BLAB19및 엔테로코커스 라티 BLAB41 중 하나 이상을 포함하는 소의 장질환 예방 또는 치료를 위한 생균제 조성물.
4. 제 3항에 있어서,

   상기 장질환은 병원성 미생물에 의한 감염성 설사, 위장염, 염증성 장질환, 신경성 장염 증후군, 소장 미생물 과성장증 및 장 급이성 설사로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 생균제 조성물.
5. 제3항의 생균제 조성물을 투여하는 것을 포함하는 소의 장질환 예방 또는 치료방법.

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