KR20100049272A

KR20100049272A - 과민성 장 증후군의 예방 및 치료용 조성물

Info

Publication number: KR20100049272A
Application number: KR1020080108371A
Authority: KR
Inventors: 선원석; 전효진; 김택수; 류근호; 민동선; 박양혜; 손현주; 강상환; 표성수; 엄기안; 이봉용
Original assignee: 에스케이케미칼주식회사
Priority date: 2008-11-03
Filing date: 2008-11-03
Publication date: 2010-05-12
Also published as: TW201021814A; WO2010062046A1

Abstract

본 발명은 육두구 (Myristicae Semen) 추출물을 유효성분으로 함유하는 과민성 장 증후군의 예방 및 치료를 위한 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 육두구 추출물은 내장 과민성 억제 및 스트레스나 장과민성으로 인한 배변 이상에 대한 개선효과가 탁월하므로, 과민성 장 증후군의 예방 및 치료에 유용한 약학조성물 및 건강기능식품에 이용될 수 있다.

육두구, 과민성 장 증후군

Description

과민성 장 증후군의 예방 및 치료용 조성물{Composition for preventing and treating irritable bowel syndrome}

본 발명은 육두구 추출물을 유효성분으로 함유하는 과민성 장 증후군의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.

과민성 장 증후군은 기질적 원인이 없이 장기간 반복되는 복부팽만감 등의 복부 불편감 및 복통과 더불어 설사, 변비 등의 배변 습관의 변화를 동반하는 만성 질환이며 그 증상이 정신적인 요인이나 스트레스를 유발하는 사회 환경에 의해서 악화되기도 한다. 소화기 질환으로 내원 환자 중 27.8%가 과민성 장 증후군 환자로, 여자가 남자에 비해 2~4배 많다. 국내 내원 환자 중 설사형이 30.8%, 변비형이 24.6%, 설사와 변비 교대형이 44.6%를 차지하며, 증상에 따라 설사 우세형, 변비 우세형, 통증 우세형으로 구분하여 약물치료가 되고 있다. 과민성 장 증후군의 약물요법은 아직까지 만족스럽지 못하며 위약에 비해 치료이득이 크지 않다. 약물요법은 과민성 장 증후군의 전반적인 증상을 개선시키는 약제와 단일 증상에 대한 약 제로 나눌 수 있는데 복통에 관한 약물로는 평활근 이완제와 항우울제, 오피오이드 작용제(Opioid agonist) 등이 사용되고 변비 우세형 과민성 장 증후군에 관한 약제로는 섬유제제, 완하제, 5-HT4 작용제 등이 사용되고 설사 우세형 과민성 장 증후군에 관한 약제로는 지사제, 5-HT3 길항제 등이 사용 된다 [이오영, 대한소화기학회지, 47, p 111-119, 2006; 이풍렬, 대한소화기학회지, 47, p 94-100, 2006; 최명규, 대한소화기학회지, 47, p 125-130; 박효진, 대한소화기학회지, 47, p 101-110, 2006; TT. Ashburn 외, Nat. Rev. Drug Discov., 5(2), p 99-100, 2006; MJG Farthing, BMJ., 330, p 429-430, 2005; MJG. Farthing, Best Pract. Res. Clin. Gastroenterol., 18(4), p 773-786, 2004].

육두구 (Myristicae Semen)는 육두구과(Myristicaceae)의 육두구나무(Myristica fragrans HOUTT.)의 종인으로서, 위와 비장을 따뜻하게 하며, 하기(下氣), 소식(消食), 고양(固陽)에 효능이 있고, 기를 높여준다 [신민교 외, 도해 향약대사전, p 519 ~ 520, 1989]. 육두구 함유 성분으로는 정유가 2 내지 9%를 차지하며, 지방 중의 미리스틴산 (myristic acid) 함량이 70 내지 80%에 달한다. 이외에도 페닐프로파노이드 (phenylproponoid) 류인 사프롤 (safrole), 유게놀 (eugenol), 메틸유게놀 (methyl eugenol), 엘레미신(elemicin), 신경독성이 알려진 미리스티신 (myristicin) 등이 있으며 모노테르펜 (monoterpene) 류로는 β-피넨 (pinene), γ-테르피넨 (terpinene), 리모넨 (limonene), 리그닌 (lignin) 류로는 메이스리그난 (macelignan), 구아이아신 (guaiacin), 아쿠미나틴 (acuminatin), 오스트로바이리그난-7 (austrobilignan), 프래그란신 (fragransin) 등이 알려져 있다 [LW. Wulf 외, J. Chromatography, 161, p 271-278, 1978; X. Guo 외, Yaowu Fenxi Zazhi, 5, 5, p 258-262, 1985; J. Totte 외, Planta Med., 50, 3, p 222-226, 1984; J. Forrest 외, J. Chromatography, 89, p 113-117, 1974; JS. Liu 외, Youji Huaxue, 8, p 227-228, 1988; T. Murphy 외, Aust. J. Chem., 28, p 81-90, 1975; KH. Shin 외, Kor. J. Pharmacogn., 17, 1, p 91-99, 1986; M. Hattori 외, Chem. Pharm. Bull., 34, 9, p 3885-3893, 1986; DJ. Harvey, J. Chromatogr., 110, p 91-102, 1975; S. Hada 외, Phytochemistry, 27, 2, p 563-568, 1988; M. Hattori 외, Chem. Pharm. Bull., 35, 8, p 3315-3322, 1987; S. Hada 외, Phytochemistry, 27, 2, p 563-568, 1988]

뉴로키닌 수용체 (Neurokinin receptor ; NK)는 NK1, NK2, NK3의 아류형 (subtype)으로 구분되며 중추신경계와 말초 신경계에 작용하는 신경펩타이드 (neuropeptide)인 substance P (SP), 뉴로키닌 (Neurokinins) A, 뉴로키닌 (Neurokinins) B 등의 타키닌 (tachykinins) family가 결합하는 수용체이다 [S. Harrison 외, Int. J. Biochem. Cell Biol., 33 : p 555-576, 2001]. 이러한 NK 수용체는 뇌의 편도, 해마, 시상하부, 선조체, 척수와 같은 중추신경계나 피부, 염증세포, 소화계, 호흡계, 심혈계 등의 말초 신경계에 골고루 분포해 신경조절자 (neuromodulator) 또는 신경전달자 (neurotransmitter)의 역할을 수행하기 위한 중요한 생리학적 기능, 특히 장운동성, 장과민성 등과 밀접한 관련을 갖고 있다 [JH. La 외, World J. Gastroenterol., 11(2), p 237-241, 2005 ; MS Kramer, Science, 281(5383) p 1624-1625. 1998; G. J. Sanger., Br. J. Pharmacol., 141, p1303- 1312, 2004]. 따라서, 이러한 생리학적 기능에 근거하여 과민성 장 증후군 치료제에 대한 새로운 타겟으로서 NK 수용체에 대한 길항제들에 대한 연구가 활발히 이루어지고 있다 [R. A. Duffy, Expert Opin. Emerg. Drugs, 9(1), 2004; M. Camilleri, Br. J. Pharmacol., 141, p1237-1248, 2004; G. J. Sanger., Br. J. Pharmacol., 141, p1303-1312, 2004 ; A. Lecci 외, Br. J. Pharmacol., 141, p1249-1263, 2004].

육두구 내의 리그난계 화합물의 천식, 비염, 관절염, 소화기 관련 염증성 질환에 대한 효과 [황재관 외, 등록특허 10-0579752, 2006]가 알려져 있으나, 본 원에서 주장하고 있는 과민성 장 증후군에 대해서는 언급 된 바 없다. 또한, 육두구를 포함한 생약 복합물이 위장관 운동 장애 질환의 예방 및 치료에 효과가 있다는 특허[주식회사 팬제노믹스, 등록특허 10-0532703, 2005]에서는 위장관 운동장애 관련 질환 중 하나로써 과민성 대장증상을 언급하고 있다. 하지만, 조성물 자체가 육두구 이외에도 10여종 이상의 생약들로 구성된 복합조성물 (혼합 시 각 생약을 동일 중량비로 혼합하여 추출) 이라는 점과 위장관 운동을 촉진(5-HT3 수용체와 5-HT4 수용체를 동시에 촉진)한다는 것에 주안점을 두고 있다.

따라서, 본 원에서 주장하고자 하는 육두구 추출물이 NK 수용체에 대한 저해작용을 통해 장신경계 (ENS : enteric nervous system)를 통한 nociceptive pathway 및 장 운동성에 관여하며, 이를 통해 장과민성을 완화하고 속박(restraint) 스트레스에 의한 배변이상을 개선한다는 점 [실험예 1, 2, 3]과는 그 차이가 있다.

본 발명자들은 육두구 추출물이 내장통증에 대한 과민성을 억제하고 스트레스나 장과민성으로 인한 배변이상에 대한 개선 효과를 확인하여 과민성 장 증후군의 치료 및 예방용 조성물로 유용하게 사용될 수 있음을 확인하여 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 목적은 육두구 추출물을 유효성분으로 함유하는 과민성 장 증후군의 예방 및 치료용 약학조성물을 제공하는데 있다.

본 발명의 다른 목적은 육두구 추출물을 유효성분으로 함유하는 과민성 장 증후군의 예방 및 개선을 위한 건강기능식품을 제공하는데 있다.

본 발명의 과민성 장 증후군의 예방 및 치료용 약학조성물은 육두구 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명의 과민성 장 증후군의 예방 및 개선을 위한 건강기능식품은 육두구 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.

본원에서 정의되는 추출물은 정제수를 포함한 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 비극성용매 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 에탄올에 가용한 육두구 추출물을 의미한다.

상기 과민성 장 증후군은 설사형 과민성 장 증후군, 변비형 과민성 장 증후군, 또는 통증 우세형 과민성 장 증후군으로부터 선택된 하나 이상의 질환을 포함한다.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 생약 추출물은 하기와 같이 제조될 수 있다.

본 발명의 육두구 (Myristicae Semen)를 음건하여 마쇄한 후, 건조된 시료의 중량의 약 1 내지 20배, 바람직하게는 약 3 내지 10배 분량의 물 또는 에탄올, 메탄올 등과 같은 C₁ 내지 C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합비 (v/v)가 약 5% 내지 95%(v/v), 바람직하게는 30% 내지 70% (v/v)를 갖는 알코올 수용액, 비극성 용매 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 용매로, 80 ℃에서 약 1 내지 6시간, 바람직하게는 2 내지 4시간 동안 교반추출, 열탕 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출, 초음파 추출 또는 초임계 추출 등의 추출방법을 사용하여, 바람직하게는 열탕 추출한 후 수득한 추출액을 여과, 감압농축 또는 건조하여 본 발명의 생약 추출물 (MYFT)을 얻을 수 있다.

본 발명은 상기 제조방법으로 얻어지는 육두구의 생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 과민성 장 증후군의 예방 및 치료용 약학조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 혼합 생약 추출물을 0.1 내지 50% 중량으로 포함한다.

그러나 상기와 같은 조성은 반드시 이에 한정되는 것은 아니고, 환자의 상태 및 질환의 종류 및 진행 정도에 따라 변할 수 있다.

본 발명의 육두구 추출물을 포함하는 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 추출물을 포함하는 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외 용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 추출물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 추출물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 추출물은 1일 0.01 mg/kg 내지 10 g/kg으로, 바람직하게는 1 mg/kg 내지 1 g/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수 있다. 따라서, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 (intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

본 발명은 과민성 장 증후군의 예방 및 개선 효과를 나타내는 육두구 추출물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 과민성 장 증후군의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 추출물을 포함하는 조성물은 과민성 장 증후군의 예방 및 개선을 위한 약제, 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 발명의 육두구 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.

본 발명의 육두구 추출물 자체는 독성 및 부작용은 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있는 약제이다.

본 발명의 상기 추출물은 과민성 장 증후군의 예방 및 개선을 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은 일반적으로 본 발명의 건강식품 조성물은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 10 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 것 외에 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등의 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등의 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

본 발명의 육두구 추출물은 내장 과민성 억제 및 스트레스 또는 장 과민성에 의한 배변이상에 대한 개선 활성이 탁월하므로, 과민성 장 증후군의 예방 및 치료에 유용한 약학조성물 및 건강기능식품으로 이용될 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 이에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 육두구 추출물 (MYFT)의 제조

경동시장에서 구입한 육두구나무의 종인(種仁)인 육두구 100 g을 음건 후 세절하여 0.7 ℓ의 50% 에탄올 수용액을 가하고 잘 교반하면서 4시간 동안 열탕 추출하였다. 여과 후, 농축하여 건조 시킨 후, 육두구 추출물 (MYFT) 18 g을 얻어 하기 실험예의 시료로 사용하였다.

도 1a 는 육두구 추출물 (MYFT)의 패턴분석을 위한 고압액체 크로마토그래피 (HPLC)의 크로마토그램[시스템 : Agilent 1200 Series, 컬럼 : C18 column (250X4.6mm ID, S-5μm, 12nm)]이고, 도 1b는 기체크로마토크래피/질량분석기 (GC/MS)를 이용한 질량스펙트럼[시스템 : GC/MS system PerkinElmer Clarus600 series, 컬럼 : Elite-5MS (30m, 0.25mm ID, 0.25μm df), 수송 가스 : 헬륨] 이다. 이를 바탕으로 정유성분 외에도 페닐프로파노이드류, 리그난 류 등의 비극성 성분들이 육두구 추출물 (MYFT)의 주요 성분임을 확인 할 수 있었다.

실시예 2. 육두구 헥산 추출물 (MYFH)의 제조

육두구 추출물의 패턴을 분석 [도 1] 한 결과 비극성 성분들이 주요 성분들임을 확인한 바, 비극성 용매인 헥산을 사용하여 육두구의 헥산 추출물 (MYFH)를 제조하여 패턴을 비교하였다.

경동시장에서 구입한 육두구 100 g을 음건 후 세절하여 0.3 ℓ의 헥산을 가하고 48시간 동안 냉침 추출하였다. 여과 후, 농축하여 건조 시킨 후, 육두구 추출물 (MYFH) 8.2 g을 얻었다.

도 2는 헥산 추출물 (MYFH)의 기체크로마토크래피/질량분석기 (GC/MS)를 이용한 질량스펙트럼[시스템 : GC/MS system PerkinElmer Clarus600 series, 컬럼 : Elite-5MS (30m, 0.25mm ID, 0.25μm df), 수송 가스 : 헬륨] 이다. 실시예 1을 통해 얻어진 MYFT의 패턴과 유사함을 확인할 수 있었다.

실험예 1. CRD (Colorectal Distension) model을 통한 추출물 MYFT의 내장통증 억제 효과 측정

상기 실시예 1로부터 얻어진 육두구 추출물 (MYFT)의 내장통증 억제효과를 알아보기 위해 직장확장 테스트(Colorectal Distension ; CRD)를 이용한 동물 실험[JH. La 외, World J. Gastroenterol., Dec., 9(12): p 2791-2795, 2003; Y.D. Choi 외, Dig. Dis. Sci., Mar 21, Epub ahead of print, 2008]을 아래와 같이 실시하였다.

체중 250-300g의 Sprague-Dawley rat(Charles River) 수컷을 이용하였다. 온도 25℃, 습도 50% 낮-밤 cycle 12:12시간으로 조절된 동물실에서 cage당 두 마리씩 사육하였다. 음수와 사료는 자유롭게 접근할 수 있도록 하였으며 5일간 적응시킨 후 결장염을 유발하였다. 결장염 유발 24시간 전에 사료공급을 중단하고, isoflurane을 사용하여 호흡마취 후에 rubber 카테터(PE 50)를 항문에서부터 안쪽 8cm 길이 로 직장을 통하여 삽입하였다.

3.5% 아세트산(acetic acid in 0.9% saline) 1ml을 카테터 (catheter)를 통하여 colon의 lumen에 투여한 다음 용액이 새어 나오지 않도록 항문을 막고, 30초 후에 0.9% saline 1ml을 동일 카테터를 통하여 colon의 lumen에 넣어 아세트산 용액을 씻어내었다.

실험동물의 직장에 길이 2cm의 고무풍선을 삽입한 후 0.1ml부터 1.0ml 까지 단계적으로 풍선 내에 37℃의 물을 채워 부풀리고, 이 때 나타나는 동물의 통증 반응을 측정하였다. CRD시 실험동물이 보이는 특징적 행동인 abdominal withdrawal reflex(AWR)를 간접적으로 정량화 하기 위해 각 자세마다 점수가 부여되는 AWR score로 내장 통증반응을 확인하였으며, AWR score [표 1. 참조; E. D. Al-Chaer 외, Gastroenterology, Nov., 119(5), p1276-1285. 2000] 를 기록함과 동시에 맥박 측정기를 이용하여 미동맥으로부터 맥박을 측정함으로써 통증 반응의 보조 지표로 사용하였다.

AWR score	특징적인 자세
0	직장 팽창 시 별다른 반응을 보이지 않음
1	직장 팽창 시 간헐적으로 머리를 움직이며, 자극동안 움직이지 못함
2	복근의 수축이 일어나지만 복부를 들어올리지 않음
3	복부를 바닥에서 들어올림
4	복부와 골반부를 함께 바닥에서 들어올리고 등을 활처럼 구부림

결장염 유발 후 7일째 rat에서 CRD를 실시하여 내장 과민성(visceral hypersensitivity) 유무를 확인하여 IBS 유사증상 모델 동물을 선별하였다 [JH. La 외, World J. Gastroenterol., Dec., 9(12): p 2791-2795, 2003]. 실시예 1을 통해 얻은 육두구 추출물 (MYFT)을 0.5% CMC 수용액에 녹여 300 mg/kg로 경구투여 하고, 양성 대조군인 알로세트론 (alosetron HCL; Jiangyin Yongda Chemical Co., Ltd. 구매)은 20mg/kg로 경구투여 하고, 50~60분 동안 안정화 시킨 후 CRD 실험을 수행하여 AWR score와 맥박의 변화 (Pulse rate)를 기록하였다. 실험동물의 vehicle군과 MYFT에 대한 CRD 내장통증의 반응을 AWR score와 맥박의 변화(Pulse rate)로 기록하였다. vehicle군, 양성대조군, MYFT 군에 대한 반응 결과를 정량화하기 위해 AWR score와 맥박 변화의 AUC(area under the curve)를 구하였다. 통계처리는 Student's t-test를 이용하여 p<0.05 수준에서 유의성을 검정하였다. 도 3에서 “Normal”은 결장염을 유발시키지 않은 정상군, “Vehicle"은 결장염을 유발시킨 실험동물군에 Vehicle만 경구투여한 군, ”Alo"는 결장염을 유발시킨 실험동물에 알로세트론 20mg/kg 경구투여한 양성대조군, 그리고 "MYFT"는 결장염을 유발시킨 실험동물에 육두구 추출물(MYFT) 300mg/kg 경구투여한 군으로, MYFT (300 mg/kg)는 CRD 후 관찰되는 AWR score와 맥박 변화를 모두 감소시키는 경향을 나타내었고 이는 양성대조군인 알로세트론과 동등 수준의 효과를 나타냄을 확인할 수 있었다 [도 3].

실험예 2. Restraint stress-induced fecal pellet output model을 통한 추출물 MYFT의 배변 개선 효과 측정

상기 실시예 1로부터 얻어진 육두구 추출물 (MYFT)의 속박 스트레스에 의한 배변 모델(Restraint stress-induced fecal pellet output model)[S. Kobayashi 외, Jpn. J. Pharmcaol., 2001]에서의 효과를 알아보았다.

체중 250-300g의 Sprague-Dawley rat(Charles River) 수컷을 이용하였다. 온도 25℃, 습도 50% 낮-밤 cycle 12:12시간으로 조절된 동물실에서 cage당 두 마리씩 사육하였다. 음수와 사료는 자유롭게 접근할 수 있도록 하였다.

실험 당일 rat에서 보정틀(restraint cage)을 사용하여 Restraint-induced fecal pellet output을 측정하였다. 실시예 1을 통해 얻은 육두구 추출물 (MYFT)을 0.5% CMC 수용액에 녹여 300 mg/kg의 농도로 경구투여 하고, 실험동물을 보정틀에 집어 넣었다.. 이때 동물이 투여로 인한 스트레스를 받지 않도록 조심하였다. 보정틀 안에서 움직이지 못하게 되면 동물은 속박 스트레스를 받게 되고 배변 활동을 시작하였다.

변은 60분 간격으로 4 시간동안 측정하되 cage를 옮기지 않고 보정틀만 조금씩 이동시켜서 개수가 헷갈리지 않도록 하였다. 시간이 경과하면 변의 수분이 말라서 배변양상을 결정하기가 쉽지 않으므로 수시로 변의 양상과 개수를 체크하였다. 통계처리는 Student's t-test를 이용하여 p<0.05 수준에서 유의성을 검정하였다.

MYFT 300 mg/kg 처리군은 속박에 의해 발생하는 fecal pellet output 을 vehicle 대비 감소시켰다. Fecal pellet output 개수가 vehicle군 7.5개 대비 MYFT 300 mg/kg 처리군에서는 2.5개로 감소되었다. MYFT 100 mg/kg 처리군에서는 vehicle 군 대비 fecal pellet output을 감소시키는 경향을 보였으나, 유의성은 관찰되지 않았다. 따라서, MYFT는 restraint stress-induced fecal pellet output을 용량 의존적으로 억제함을 확인하였다 [도 4].

실험예 3. 뉴로키닌 수용체 ( NK1, 2 ,3 ) 에 대한 저해 활성

상기 실시예 1에서 얻은 육두구 추출물 (MYFT)의 뉴로키닌 수용체에 대한 저해 활성을 알아보았다. Human recombinant CHO cells을 사용하여 binding assay를 실시하였다. (Arch Int Pharmacodyn.329:161-184,Proc Natl Acad Sci USA, 94:310-315, Proc Natl Acad Sci USA.94:310-315) 각각의 수용체 서브타입을 발현하도록 transfection 시킨 Human recombinant CHO 세포의 세포막을 분리하여 반응 튜브에 넣은 후 NK1 수용체는 0.25 nM [H³] SR-140333, NK2 수용체의 경우는 0.5 nM [H³] SR-48968, 그리고 NK3 수용체는 0.06 nM[¹²⁵I]MePhe-Neurokinin B를 agonist 로 사용하여 MYFT의 뉴로키닌 수용체에 대한 결합 저해 활성을 측정하였다. 반응액 HEPES buffer ( 20 mM HEPES, pH7.4, 1mM MnCl2, 0.01% BSA) 를 사용하며, 반응은 25℃에서 90분(NK 1&2)과 2시간 (NK3) 동안 실시하였다. 반응은 Whatman GF/B filter 에 반응액을 가한 후 ice cold HEPES buffer로 wash 하여 종결시켰으며, filter에 결합된 방사능은 liguid scintillation counter로 측정하였다. MYFT는 1% DMSO에 용해시킨 후 최종 농도가 1 ug/ml, 10 ug/ml, 100 ug/ml 가 되도록 하여, 결합저해 활성을 측정하였다.

표 2에서와 같이 육두구 추출물 (MYFT)의 NK 1, 2, 3 수용체에 대한 억제 작용을 확인할 수 있었다. 특히, MYFT 100 ug/ml군에서 NK 2, 3 수용체에 대하여 각각 88, 85%의 우수한 억제율을 나타내었고 (IC₅₀는 각각 17.5 ug/ml, 76 ug/ml), NK1수용체에 대해서는 IC₅₀ 값을 확인 할 수 없었으나 100 ug/ml 농도군에서 44%의 억제율을 보였다.

수용체	농도	저해활성 (%)	IC₅₀
NK1	100 ug/ml	44	-
	10 ug/ml	2
	1 ug/ml	-10
NK2	100 ug/ml	88	17.5 ug/ml
	10 ug/ml	34
	1 ug/ml	6
NK3	100 ug/ml	85	76 ug/ml
	10 ug/ml	-6
	1 ug/ml	1

하기에 본 발명의 추출물을 함유하는 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 산제의 제조

실시예 1에서 얻은 추출물 20 mg

유당 100 mg

탈크 10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

제제예 2. 정제의 제조

실시예 1에서 얻은 추출물 10 mg

옥수수전분 100 mg

유당 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

제제예 3. 캅셀제의 제조

실시예 1에서 얻은 추출물 10 mg

결정성 셀룰로오스 3 mg

락토오스 14.8 mg

마그네슘 스테아레이트 0.2 mg

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

제제예 4. 주사제의 제조

실시예 1에서 얻은 추출물 10 mg

만니톨 180 mg

주사용 멸균 증류수 2974 mg

Na₂HPO_4,12H₂O 26 mg

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플 당(2㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

제제예 5. 액제의 제조

실시예 1에서 얻은 추출물 20 mg

이성화당 10 g

만니톨 5 g

정제수 적량

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.

제제예 6. 건강 식품의 제조

실시예 1에서 얻은 추출물 1,000 ㎎

비타민 혼합물 적량

비타민 A 아세테이트 70 ㎍

비타민 E 1.0 ㎎

비타민 B1 0.13 ㎎

비타민 B2 0.15 ㎎

비타민 B6 0.5 ㎎

비타민 B12 0.2 ㎍

비타민 C 10 ㎎

비오틴 10 ㎍

니코틴산아미드 1.7 ㎎

엽산 50 ㎍

판토텐산 칼슘 0.5 ㎎

무기질 혼합물 적량

황산제1철 1.75 ㎎

산화아연 0.82 ㎎

탄산마그네슘 25.3 ㎎

제1인산칼륨 15 ㎎

제2인산칼슘 55 ㎎

구연산칼륨 90 ㎎

탄산칼슘 100 ㎎

염화마그네슘 24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

제제예 7. 건강 음료의 제조

실시예 1에서 얻은 추출물 1,000 ㎎

구연산 1,000 ㎎

올리고당 100 g

매실농축액 2 g

타우린 1 g

정제수를 가하여 전체 900 ㎖

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

도 1a는 육두구 추출물 (MYFT)의 고압액체 크로마토그래피 (HPLC)의 크로마토그램이다.

도 1b는 육두구 추출물 (MYFT)의 기체크로마토크래피/질량분석기 (GC/MS)를 이용한 질량스펙트럼이다.

도 2는 육두구 추출물 (MYFH)의 기체크로마토크래피/질량분석기 (GC/MS)를 이용한 질량스펙트럼이다

도 3는 육두구 추출물 (MYFT)의 CRD 모델에서의 효과를 나타낸 그래프이다.

도 4은 육두구 추출물 (MYFT)의 Restraint stress-induced fecal pellet output model에서의 효과를 나타낸 그래프이다.

Claims

육두구 추출물을 유효성분으로 함유하는 과민성 장 증후군의 예방 및 치료용 약학조성물.
제 1항에 있어서, 상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 비극성 용매 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 용매에 가용한 추출물인 것을 특징으로 하는 약학조성물.
제 2항에 있어서, 상기 혼합용매는 물과 상기 저급 알코올의 혼합비 (v/v)가 5% 내지 95%(v/v)인 알코올 수용액임을 특징으로 하는 약학조성물.
제 2항에 있어서, 상기 비극성 용매는 디클로로메탄, 클로로포름, 디에틸 에테르, 에틸 아세테이트, 헥산 또는 초임계유체인 것을 특징으로 하는 약학조성물.
제 1항 내지 제 4항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 추출물은 건조된 육 두구 중량의 1 내지 20배 분량의 추출용매를 사용하여 교반추출, 열탕 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출, 초음파 추출 또는 초임계 추출하여 얻어진 것임을 특징으로 하는 약학조성물
제 1항 내지 제 4항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 조성물은 경구용 또는 비경구용으로 제형화 된 것임을 특징으로 하는 약학조성물.
제 1항 내지 제 4항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 과민성 장 증후군은 설사형 과민성 장 증후군, 변비형 과민성 장 증후군, 또는 통증 우세형 과민성 장 증후군으로부터 선택된 하나 이상의 질환인 것을 특징으로 하는 약학조성물.
제 1항에 있어서, 상기 추출물이 NK수용체를 저해하는 것을 특징으로 하는 약학조성물.
육두구 추출물을 유효성분으로 함유하는 과민성 장 증후군의 예방 및 개선용 건강기능식품.
제 8항에 있어서, 상기 건강기능식품의 형태는 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료 형태인 것을 특징으로 하는 건강기능식품.