KR20100046605A - 아토피성 피부염 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 아토피성 피부염 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 해양심층수 80~90 부피%, 벌꿀 5~15 부피%, 식초 0.4~0.6 부피% 및 키토산 0.5~1.0 부피%를 포함하여 이루어지는 조성물로서, 2차 피부감염에 관여하는 세균 및 진균에 대한 억제활성을 나타내며, 아토피 유발 마우스에 대하여 아토피 완화 작용을 나타내는 바, 아토피성 피부염 등 피부질환을 예방 또는 치료하는데 유용하게 사용될 수 있다.

해양심층수, 벌꿀, 식초, 키토산, 항균, 항진균, 아토피, 피부질환

Description

아토피성 피부염 예방 또는 치료용 조성물{A composition for prevention or treatment of atopic dermatitis}

본 발명은 아토피성 피부염 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 해양심층수, 벌꿀, 식초 및 키토산을 포함하여, 2차 피부감염에 관여하는 세균 및 진균에 대한 억제활성을 나타내며, 아토피 유발 마우스에 대하여 아토피 완화 작용을 보이는 조성물에 관한 것이다.

세균의 감염은 인간의 질병에서 가장 흔하고 치명적인 원인 중의 하나인데, 불행하게도 항생제의 남용으로 인하여 세균의 항생제 저항성(resistance)이 야기되었다. 실제로, 세균이 새로운 항생제에 저항성을 나타내는 속도는 새로운 항생제의 유사체가 개발되는 속도보다 훨씬 더 빠르다. 예를 들면, 생명에 위협을 가할 수 있는 엔테로코쿠스 패칼리스(Enterococcus faecalis ), 마이코박테리움 투버쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis ) 및 슈도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa ) 등의 세균 종들은 지금까지 알려진 모든 항생제에 대한 저항력을 키워 왔다.

항생제에 대한 내성(tolerance)은 항생제에 대한 저항성(resistance)과는 구별되는 현상인데, 1970년대에 뉴모코커스(Pneumococcus sp .)에서 최초로 발견이 되었으며 페니실린의 작용 기작에 대한 중요한 단서를 제공하였다. 내성을 보이는 종은 통상적인 농도의 항생제 존재하에서는 성장을 멈추지만 결과적으로 죽지는 않는다. 내성은 항생제가 세포벽 합성 효소를 저해할 때 오토라이신(autolysin)과 같은 세균의 자가분해(autolytic) 효소의 활성이 일어나지 않기 때문에 생기는데, 페니실린의 경우에 있어서 내인성 가수분해 효소(endogenous hydrolytic enzymes)를 활성화함으로써 세균을 죽이지만, 또한 세균이 이 효소의 활성을 억제하여 항생제 치료 시에도 생존하는 결과를 나타내게 된다.

세균이 항생제에 대한 내성을 가지는 것은 임상적으로 대단히 중요한데, 이는 내성 세균을 박멸하는 것이 불가능하게 되면 임상적인 감염에서 항생제 치료의 효용이 떨어지기 때문이다. 아울러, 내성은 항생제에 대한 세균의 저항성이 발생할 선행조건이라고 간주하는데, 이것은 항생제 치료에도 살아남는 균주가 생기기 때문이다. 이러한 균주는 항생제에 저항성을 가지는 새로운 유전 요소를 획득해서 항생제의 존재하에서도 계속 성장하게 된다. 실제로 항생제에 대한 저항성을 보이는 모든 세균들은 그 항생제에 대한 내성도 있는 것으로 알려져 있으므로, 항생제 저항성을 가지는 세균을 죽일 수 있는 신규한 항생제의 개발이 필요하다.

한편, 아토피성 피부염은 심한 가려움증을 가지는 재발성 만성 피부염으로, 어린이의 약 10-15%가 아토피성 피부염을 가지고 있으며, 90%는 5년내 저절로 호전되는 것으로 보고되어 있다. 이러한 아토피성 피부염은 성인기에는 대체로 호전되어 약 30-40%는 외관상으로 피부염이 재발되지 않으나, 그 나머지는 피부 건조, 자극성 물질에 의한 피부 자극, 주부 습진 등 중증의 피부염을 야기하는 것으로 알려져 있으며, 이러한 비율은 산업화의 진전 및 환경 오염의 증가에 따라 함께 증가 추세를 나타내고 있다.

건성 및 민감성 피부는 수분 보유능 및 그 회복력이 낮고, 그에 따라 피부 각질화, 가려움증 등이 나타나기 쉬우며, 심할 경우 아토피성 피부염 등과 같은 피부염으로 발전하게 된다. 상기한 아토피성 피부염 등과 같은 피부 건조 및 가려움증을 치료하기 위한 방안으로서 몇 가지 조성물이 제안되어 있으나, 이들 조성물 모두는 의약 조성물이며 그 대부분은 스테로이드 제제나 항생제를 유효 성분으로서 포함하고 있으므로 장기간 피부에 적용시 모세 혈관 확장증 및/또는 각질층의 두께 증가 내지 확장을 유발하는 등의 심각한 부작용을 발생시킬 염려가 있으며, 최근 아토피성 피부염 완화에 많이 쓰이는 감마-리놀렌산(한국특허공개 2000-0046633호)을 주성분으로 하는 조성물은 쉽게 산화되므로 안정성이 열등함과 아울러, 피부 자극성이 비교적 강하여 민감한 피부에는 사용하기 곤란한 등의 문제점이 있었다.

이에 최근에는 천연물질로부터 아토피성 피부염을 치료 및 예방하기 위한 시도가 진행되고 있으며, 대표적인 종래기술로는 쑥 추출물을 함유하는 아토피성 피부염 화장료 조성물(대한민국 특허등록 제10-0377262호), 아토피 피부용 한방 화장료 조성물(대한민국 특허등록 제10-0517465호), 아토피성 피부염 치료용 화장료 조 성물(대한민국 특허등록 제10-0451444호), 아토피성 피부염 치료용 기능성 식품(대한민국 특허등록 제10-0454752호), 아토피성 피부염의 예방 또는 치료용 조성물 및 그 제조방법(대한민국 특허등록 제10-0483539호), 허브를 함유하는 아토피성 피부질환 치료제 및 그 제조방법(대한민국 특허등록 제10-0597997호) 등이 있었다.

본 발명자는 상기와 같이 천연물질을 탐색하던 중 해양심층수, 벌꿀, 식초와 키토산에 주목하게 되었다.

해양심층수란 햇빛이 닿지 않는 심해에 있는 청정한 물을 말한다. 일반적으로 수심 2백미터를 기준으로 그 이상을 표층수, 그 이하를 해양심층수로 구분한다. 해양심층수는 온도와 염분 차이로 침강하기 때문에 심해에만 존재한다. 해양심층수는 4천년을 주기로 대서양과 인도양, 태평양을 순환하는 것으로 알려져 있다. 초고압 상태에다 수온까지 낮은 곳에서 끌어올려 미생물이 자라거나 번식하기 어렵고 미네랄이 풍부하게 함유되어 있는 것이 해양심층수의 특징이다. 해양심층수를 사람이 마실 수 있는 물로 만들기 위해서는 여러 단계를 거쳐야 한다. 취수된 해양심층수는 우선 성분과 세균을 검사하는 수질 분석실을 거친다. 이후 세균도 통과하지 못하는 15-20μ 공기순환 시스템이 갖춰진 살균실에서 자외선 살균 과정을 거쳐야 먹는 물이 된다. 나트륨 등 먹을 수 없는 물질은 제거하고 사람에게 필요한 미네랄만 남긴 물로 가공되는 것이다.

특히 동해 해양심층수는 다른 대양의 심층수보다 수질이 우수하기 때문에 우 리나라가 앞으로 세계적인 우위를 점할 수 있다는 것이 전문가들의 견해다. 예를 들어 동해 해양심층수의 수온은 평균 0.2℃로 다른 대양의 해양심층수 2℃보다 낮기 때문에 활용 가치가 높다는 것이다. 개발 기술의 핵심은 멤브레인(Membrane)이라는 ‘막’ 기술이다. 해양심층수에서 염분 등 불필요한 성분을 제외하고 몸에 이로운 미네랄만 남기는 고난도의 기술이다. 어려운 만큼 해양심층수 개발에 성공한 국가는 우리나라를 비롯해 미국, 일본, 노르웨이, 타이완 등 5개국에 불과하다.

해양심층수는 마시는 물로만 사용되는 것이 아니라 의약품, 화장품, 생활용품 등 다양한 분야에 원재료로도 활용된다. 해양심층수에는 병원균 등이 거의 없을 뿐 아니라 연중 안정된 저온을 유지하고 있으며, 해양 식물의 성장에 필수적인 영양 염류가 장기간 숙성된 해수 자원이다. 즉, 해양심층수는 청정성, 저온 안정성, 풍부한 영양성 등의 특징을 가져 아주 유용하다. “미국 FDA의 안정성 시험 결과, 해양심층수는 몸에 전혀 해롭지 않은 것으로 나타났다. 오히려 여러 실험을 통해 이로운 점들이 밝혀지고 있다. 동물 실험 결과, 해양심층수는 아토피를 진정시키는 것으로 나타났다. 일본도 같은 연구 결과를 발표한 바 있다. 또 유방암, 간암, 직장암 등 암 예방에도 해양심층수가 효과를 보이는 실험 결과가 나오고 있다. 물론 이때 경도는 700 ㎎/L 정도가 되어야 한다.

경도란 물 1L에 포함되어 있는 마그네슘과 칼슘의 양을 수치화한 것이다. 보통 경도가 100 ㎎/L 이하면 연수 또는 단물이라고 한다. 1,100~1,300 ㎎/L이면 중경수, 310 ㎎/L 이상이면 경수 또는 센물이라고 한다. 경도가 높을수록 미네랄이 많이 포함되어 있음을 의미한다. 그러나 경도가 높을수록 마그네슘 성분 때문에 쓴 맛이 난다. 가장 맛있는 물의 경도가 50㎎/L로 생수가 이 정도이고, 지하수가 60~100 ㎎/L이다. 해양심층수의 경도는 6,000 ㎎/L이므로 바로 마실 수는 없다. 염분을 제거하는 탈염 과정을 거쳐야 한다. 이때 미네랄 성분도 제거된다. 이후 염분을 뺀 미네랄을 다시 해양심층수에 주입한다. 이 과정에서 물의 경도를 150 ㎎/L로 낮추어 사람이 마실 수 있게 만들게 된다.

토종꿀은 말 그대로 우리나라 토종 야생벌이 산속을 자유롭게 날아다니며 돌이나 나무 사이에 벌집을 지어 만든 꿀이다. 한 자리에서 꿀을 얻는 토종꿀은 어느 해는 기상악화로 한방울도 못뜨는 경우가 있어 오히려 먹이를 주어야 할 형편에 처하기도 한다.

토종벌은 동양전래로 길들여 온 순수한 한국의 토종벌이라 하여, 서양에서부터 길러온 양봉벌과는 엄격히 벌에서부터 차이가 많다. 지리산 토종벌꿀은 첫서리가 내린 후 1년에 단 한차례 채밀하여, 봄부터 가을까지 지리산해발 1,800m 이상 고지대의 무공해 청정지역에서 철따라 피는 약초꽃이나 야생화꽃들을 먹고 서식하는 자연발생의 토종벌 속에 함유되어 있는 로얄제리, 프로폴리스, 화분, 밀납이 다량으로 함유되어 있어서, 각종 성인병 예방과 아토피 피부염 치료에 많은 효과가 있으며 그리고 현대인의 필수 건강 영양식품이다.

꿀벌들이 1kg의 꿀을 따모으기 위해서는 560만번의 날개짓을 해야만 하고, 이렇게 모아진 자연토종벌집꿀을 채집하여 전통방법으로 다시 내려서 수분을 빼고 농축하여 순수한 추출된 벌꿀로 탄생하게 된다. 색상은 벌집채꿀의 색상과는 약간 다른 진한 밤갈색으로서 이것은 벌집채꿀에서 밀납과 수분이 제거되었기 때문이다.

벌꿀의 주성분은 포도당과 과당으로 소화작용을 거치지 않고 흡수되기 때문에 만성위장병, 해소천식, 기관지염, 가래, 신경성위장병, 간염, 신경쇠약, 폐결핵, 변비, 건망증(서울대학교 의약연구소발표), 또한 동의보감에서는 꿀을 계속해서 먹으면 얼굴이 꽃처럼 되며 오래먹을수록 좋고, “십이지장부에 이보다 더한 것은 없다”고 하며, 허약체질에 안성맞춤으로 성장기의 아이들을 튼튼하게 자라게 하며 고혈압에도 좋다고 알려져 있다.

키토산은 글루코오스아민(glucosamine)의 피라노스(pyranose)단위체가 β-1,4 결합된 것으로서, 글루코오스아민 잔기가 5,000 개 이상 결합된 분자량이 100 만 이상인 천연고분자이다. 이러한 키토산은 게 껍질이나 새우와 같은 갑각류 및 오징어를 포함하는 수산계로부터 추출할 수 있으며, 그 분자 구조로 볼 때 다당류 의 일종인 셀룰로오즈와 유사한 구조로서, 생체 친화성이 우수하여 면역 반응시 거부 반응이 일어나지 않기 때문에 의약 산업에 응용되고 있고, 최근 미국의 FDA에서 식품으로서 인증을 받은 후, 키토산은 21세기의 중요한 생물산업 및 생체의료용 물질로 응용되고 있다.

특히 대한민국 등록특허 제10-0441270에 개시된 “수용성 유리 아민 키토산”은 키토산 자체의 유리 아민의 강한 양전하를 이용하여 기능성 제품 등에 유용하게 이용될 수 있다.

한편, 식초는 일반적으로 피로 회복에 좋고, 혈액을 알카리성으로 유지하여 혈액을 맑게하는 작용을 일으키는 것으로 알려져 있을 뿐 아니라, 피부미용 등에 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 이러한 식초는 동서양을 막론하고 오래전부터 이용되어온 발효식품으로 근래에 각종 과실 및 곡류를 이용한 양조식초의 소비가 급증하고 있다. 더욱이 최근에는 체내 대사 조절을 비롯한 건강증진효과가 보고되어 식초의 다양화 및 고급화가 뚜렷한 실정이다.

현미는 다량의 식이섬유, 칼슘, 철분 및 티아민과 리보플라빈 등 비타민이 풍부하여 동맥경화, 당뇨병 등 성인병 예방 차원에서 건강식으로 널리 이용되고 있다.

또한, 현미를 발효시킨 현미식초는 예로부터 우리나라의 각 가정에서는 전통적인 방법으로 다양한 식초를 제조하여 조리에 이용해온 대표적인 전통 발효식품이다.

상기 성분들 중 일부는 아토피 피부질환에 효과가 있다고 알려져 있으나, 이들을 모두 적절한 비율로 혼합하여 시너지 효과를 갖는 아토피 제품은 알려진 바 없다.

이에 본 발명자는 상기 천연물질들을 대상으로 실험을 거듭한 결과, 해양심층수, 벌꿀, 식초 및 저분자량의 수용성 유리 아민 키토산을 적절히 조합한 혼합조성물이 아토피 환자의 2차 피부감염을 유발하는 병원성 세균 및 진균에 대하여 항 생 효과를 가지며, 아토피 피부염 유발 쥐를 대상으로 치료 효과를 보임을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 아토피성 피부염을 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는 데 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 해양심층수 80~90 부피%, 벌꿀 5~15 부피%, 식초 0.4~0.6 부피% 및 키토산 0.5~1.0 부피%를 포함하여 이루어지는 아토피성 피부염 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.

본 발명은 해양심층수 80~90 부피%, 벌꿀 5~15 부피%, 식초 0.4~0.6 부피% 및 키토산 0.5~1.0 부피%를 포함하여 이루어지는 아토피성 피부염 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 상기 조성물은 2차 피부감염에 관여하는 세균 및 진균에 대한 억제활성을 나타내며, 아토피 유발 마우스에 대하여 아토피 완화 작용을 나타내는 바, 아토피성 피부염 등 피부질환을 예방 또는 치료하는데 유용하게 사용될 수 있다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 해양심층수 80~90 부피%, 벌꿀 5~15 부피%, 식초 0.4~0.6 부피% 및 키토산 0.5~1.0 부피%를 포함하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물 중 상기 해양심층수는 수심 200 미터 이하에서 채취한 물로서, 2-3회 여과하여 정제한 것을 의미한다. 시판 중인 해양심층수를 사용하여도 무방하나, 경도가 50 내지 300 mg/L인 심층수를 사용하는 것이 바람직하다.

본 발명의 조성물 중 벌꿀은 시판 중인 벌꿀로서 유채꿀, 아카시아꿀, 밤꿀, 잡화꿀, 싸리꿀 등을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 토종꿀을 사용할 수 있다.

본 발명의 조성물 중 식초는 합성식초, 알코올 양조식초, 천연 양조식초 등 어떠한 것을 사용하여도 무방하나, 현미식초를 사용하는 것이 가장 바람직하다. 상기 현미식초는 현미를 5 내지 10 중량%로 함유하고, 전체 산 함량이 6.0 내지 7.0%(w/v)인 것을 사용하는 것이 바람직하다.

본 발명의 조성물 중 키토산은 시판중인 키토산 제품을 사용할 수 있으나, 바람직하게는 대한민국 특허등록 제10-0441270호에 개시된 제조방법으로 제조한 저분자량의 수용성 유리 아민 키토산(LMWSC)을 사용하는 것이 바람직하다.

상기 저분자량의 수용성 유리 아민 키토산은 하기의 방법으로 제조된다.

즉, 1) 키토산 올리고당의 유기산 또는 무기산 염의 용액을 염기인 트리알킬 아민으로 처리하고;

2) 상기 용액에 유기용매를 첨가하여 키토산 올리고당에 결합되어 있는 유기산 또는 무기산이 트리알킬 아민 염의 형태로 제거된 키토산 올리고당을 회수하고;

3) 상기에서 산이 제거된 키토산 올리고당 용액을 무기산 처리 후, 활성화된 탄소/이온교환수지(activated carbon/ion exchange resin) 컬럼으로 정제하여 1,000 ∼100,000 달톤의 분자량을 가진 수용성 유리 아민 키토산을 제조할 수 있다.

상기 제조방법을 보다 상세히 살펴보면,

키틴으로부터 추출한 불용성 키토산을 젖산, 초산, 프로피온산, 포름산, 아스코르브산, 및 주석산을 포함하는 유기산과 염산, 질산 및 황산을 포함하는 무기산을 이용하여 염의 형태로 만들어 용해시킨다. 상기의 키토산 용액을 효소 분해하여 키토산 올리고당을 얻는다.

상기 키토산 올리고당의 산 용액은 젖산, 초산, 프로피온산, 포름산, 아스코르브산, 및 주석산을 포함하는 유기산 염과 염산, 질산 및 황산을 포함하는 무기산 염의 용액을 제조하기 위하여 사용된 용매는 PBS(Phosphate buffered saline) 7.0, 7.2 및 7.4 군에서 선택되어 용해시킨다.

상기 키토산 올리고당에 포함되어 있는 유기산 또는 무기산 염의 형태를 효과적으로 제거하기 위하여, 트리알킬 아민을 키토산 올리고당의 아민기 1 당량에 대해 2∼3 당량의 비율로 첨가하며, 바람직하게는 2 당량을 첨가한다.

상기에서 첨가되는 트리알킬 아민의 정량비는 키토산 올리고당의 한 단위체 에서 C-2 위치의 아민기에 있는 유기산 또는 무기산이 트리알킬 아민 염의 형태로 제거되고, C-6 위치의 -CH 2 OH기를 보호하는 역할을 위해 필요하다. 보다 상세히 설명하면, 상기 불용성 키토산을 유기산 또는 무기산에 녹이는 과정에서 C-2 위치가 젖산염의 경우 -NH₃+ㆍCH₃CHOHCOO- , 초산염의 경우 -NH₃+ㆍCH₃COO- , 프로피온산염의 경우 -NH₃+ㆍCH₃CH₂COO- , 포름산의 경우 -NH₃+ㆍHCOO- , 아스코르브산의 경우 -NH₃+ㆍCO(COH)₃CHOHCH₂O- 및 주석산염의 경우 -NH₃+ㆍHOOC(CHOH₂)COO- , 그리고 무기산인 염산염의 경우 -NH₃+ㆍCl- ,황산염의 경우 -NH₃+ㆍHSO₄- , 및 질산염의 경우 -NH₃+ㆍNO₃- 형태가 된다. 이때, 트리알킬 아민이 첨가되면, 강한 산성을 띠고 있는 키토산 올리고당의 아민기에서 H+ 를 트리알킬 아민이 끌어당기고, CH₃CHOHCOO- 또는 CH₃COO- , Cl- 와 트리알킬 아민 간의 정전기적인 상호작용에 의해 결합하여 제거됨으로써 C-2 위치는 유리 아민 형태를 얻을 수 있다.

상기 트리알킬 아민, 바람직하게는 트리-C_{1 ∼4} 알킬 아민이며, 구체적으로는 트리메틸 아민, 트리에틸 아민, 트리프로필 아민, 트리이소프로필에틸 아민 및 트리부틸 아민으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하고, 보다 바람직하게는 트리에틸 아민을 사용하는 것이다.

상기의 반응물은 상온에서 2 시간 정도 반응시킨 후 아세톤, 메탄올, 클로로포름, 디클로로메탄 군에서 선택된 유기용매를 첨가하여 교반하고 원심분리한다.

상기 과정을 거친후, 트리알킬 아민에 의해 보호받은 C-6 위치의 -CH₂OH기는 0.0005 ∼ 0.010 N 무기산 처리하여 제거되고, 상기 무기산은 염산, 질산 또는 황산으로 구성하는 무기산에서 선택되어 사용될 수 있다. 바람직하게는 0.001 N의 염산을 사용하는 것이고, 이때 (C₂H₅)₃NH +ㆍCl- 염의 형태로 제거된다. 또한, 본 발명은 유기산 또는 무기산이 제거된 키토산 올리고당의 용액을 활성화된 탄소/이온 교환수지 칼럼으로 정제하여 순수한 수용성 유리 아민 키토산을 제조한다.

본 발명의 조성물 중 해양심층수는 80~90 부피%의 함량을 사용하는 것이 바람직한데, 80 부피% 이하에서는 아토피 개선 효과가 낮아지는 단점이 있다.

또한, 벌꿀은 5~15 부피%의 범위로 사용하는 것이 바람직한데, 5 부피% 이하인 경우 활성이 낮아지는 단점이 있으며, 15 부피%이상인 경우 활성의 변화가 거의 없다.

본 발명의 조성물은 항균 활성 또는 항진균 활성을 나타냄으로써 아토피성 피부염을 예방 또는 치료한다.

상기 항균 활성은 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 슈도모나스 애루지노사(Pseudomonas aeruginosa) 및 대장균(Escherichia coli)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상에 대한 억제활성이며, 상기 항진균 활성은 캔디다 알비칸스(Candida albicans) 또는 트리코스포론 베이겔리(Trichosporon beigelli)에 대한 억제활성이다.

본 발명의 조성물은 세균에 대하여 1.25 내지 5.0 μg/mL의 최소성장억제농도(MIC)를 나타냄으로써, 세프피라마이드 대비 우수한 활성을 보였으며(표 2 참조), 진균에 대하여 5 내지 10 μg/mL의 최소성장억제농도를 나타냄으로써(표 3 참조), 아토피, 습진, 질염, 피부염증, 비듬 또는 무좀 등의 피부질환을 치료하는데 사용될 수 있다.

또한, in - vivo 실험결과, 아토피 유발 마우스에 본 발명의 혼합조성물을 처리하여 거의 정상쥐에 가까운 관능평가 결과를 얻었으며(도 10 참조), IgE의 함량을 감소시키는 효과를 나타내었고(도 15 참조), 조직검사 결과 염증을 완화시키는 효과를 나타내었는바(도 16 및 도 17 참조), 아토피성 피부염을 치료 또는 개선시키는 데 매우 효과적으로 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물은 당업자의 관점에서 다양한 투여 방법으로 이용될 수 있으나, 가장 바람직하게는 상기 조성물을 피부의 환부에 도포하는 외용제로 사용할 수 있다.

이하 본 발명이 구체적인 실시예를 들어 상세히 설명하고자 하지만, 본 발명의 권리범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1: 피부 외용 혼합조성물의 제조

피부 외용 혼합조성물 제조를 위하여, 해양심층수, 토종벌꿀, 현미식초 및 저분자량의 수용성 유리 아민 키토산(Low molecular water-soluble chitosan; LMWSC)을 선발하였다. 해양심층수는 경도 300 mg/L인 것으로 (주)키토라이프에서 구입하였고, 토종벌꿀은 가내 수제품으로서, 주요성분이 수분 19.0~20.5%, 프럭토스 36.0~41.5%, 글루코스 26.0~38%, 수크로스 3.0~7.0%, 유기산 0.1~0.2% 및 회분 0.13~0.45%이며, 영양소로 비타민 B1(1.56 mg), B2(1.33 mg), 니코틴산 11.6 mg, 판토텐산 1.73 mg, B6(0.88 mg), 비오틴 0.6 mg 및 엽산 1.56 mg을 함유한 벌꿀을 사용하였다. 현미식초는 (주)키토라이프에서 구입한 것으로서, 총산(total acid) 함량이 6.0~7.0%(w/v), 현미 8 중량%을 함유하며, 기타 성분으로 주정, 맥아엿, 올리고당, 구연산을 함유한 현미식초를 사용하였다.

한편, 저분자량의 수용성 유리 아민 키토산(LMWSC)은 본 발명자가 종래 등록받은 바 있는 특허(제10-0441270호)의 제조방법으로 제조된 저분자량의 수용성 유리 아민 키토산을 사용하였다. 상기 성분들을 하기의 함량으로 혼합하여 피부 외용 혼합조성물을 제조하였다.

피부 외용 혼합조성물의 조성비

성분	함량(부피%)	사용가능한 함량 범위
해양심층수	88.65	80~90
토종벌꿀	10	5~15
현미식초	0.55	0.4~0.6
LMWSC	0.8	0.5~1.0

실험예 1: 본 발명의 피부 외용 혼합조성물의 항균 활성 측정

실시예 1에서 제조한 피부 외용 혼합조성물의 항균(antibacterial) 활성을 측정하였다.

균, 항생제의 준비

항균 활성에 사용할 세균으로는 그람 양성균으로써 아토피나 습진 등 피부 2차 감염에 관여하며 피부 외에 기관지 같은 호흡기 질환 등에 관여하는 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus KCTC 1621)와 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis KCTC 1918)를, 그람 음성균으로 요도감염과 장내 독성 및 피부염증에 관여하는 슈도모나스 애루지노사(Pseudomonas aeruginosa KCTC 1637)와 대장균(Escherichia coli KCTC 1682)을 선발하였고, 각각을 한국생명공학연구원(KCTC)으로부터 분양받았다. 상기 세균 중 대장균과 바실러스 서브틸리스는 LB 배지, 슈도모나스 애루지노사는 NB+0.5 % NaCl 배지, 스타필로코커스 아우레우스는 TSB 배지에 대수기 중간단계(mid-log phase)까지 배양하여 실험에 이용하였다.

양성 대조구로 세팔로스포린 계열 3세대 항생제로 널리 이용되는 세프피라마이드(cefpiramide)를 사용하였다.

혼합조성물의 농도 측정 및 희석

실시예 1의 피부 외용 혼합조성물을 0.22μm 필터로 걸러준 후, 브래드포드의 방법(Bradford, M.M. (1976)"A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding" Anal Biochem. 72. 248-254)을 이용하여 농도를 측정하였다. 구체적으로, 멸균한 3차 증류수 800μL와 브래드포드 용액(1리터 기준 함량: Coomassie brilliant blue G250 0.1g/50mL 에탄올, 인산 100mL, 3차 증류수 850 ml) 200μL를 첨가한 후 본 발명의 혼합조성물 10μL를 첨가하였다. 대조군은 본 발명의 혼합 조성물을 첨가하지 않고 증류수 800μL와 브래드포드 용액 200μL만 첨가하여 준비하였다. 분광기를 이용하여 595nm 파장에서 OD 값을 측정하였고, 아래의 계산식을 이용하여 정량을 계산하였다.

OD₅₉₅<0.241인 경우, 정량농도(μg/mL)=(2.8136＊OD₅₉₅)-0.0146

OD₅₉₅0.241인 경우, 정량농도(μg/mL)=(11.702＊OD₅₉₅)-2.1208

상기 측정된 결과를 바탕으로, 본 발명의 혼합조성물을 1% 박토펩톤(Bactopeptone)을 이용하여 96-웰 마이크로티터 플레이트(Nunc)에 단계적으로 희석하였다.

항균활성 측정

본 발명의 혼합조성물의 항균활성을 아래와 같이 측정하였다. 96-웰 플레이트에 본 발명의 혼합조성물 및 양성대조구인 세프피라마이드 항생제를 농도별로 희석하여 분주하였다. 상기 각 웰에 항균활성을 측정할 세균이 포함된 배지를 100μL(웰당 세균수 : 2×10⁵ CFU/mL) 씩 가한 후, 37℃에서 하루밤 방치하였다. 음성대조구는 본 발명의 혼합조성물 또는 항생제를 전혀 첨가하지 않은 상태에서 동일하게 수행하였다. 하루밤 배양한 대장균과 바실러스 서브틸리스는 LB 아가 배지에, 슈도모나스 애루지노사는 NA+0.5 % NaCl 아가 배지에, 스타필로코커스 아우레우스는 TSA 아가 배지에 도말하고 12시간 동안 배양하여 생육 여부를 확인하였다.

측정결과

측정결과는 도 1 내지 4에 나타내었다.

도 1은 그람 양성균인 스타필로코커스 아우레우스에 대한 항균 결과를 나타낸 것으로, A는 음성대조구를, B는 본 발명의 혼합조성물을 5 μg/mL로 첨가한 것을, C는 본 발명의 혼합조성물을 5 μg/mL로 첨가한 것을, D는 양성대조구인 세프피라마이드 5 μg/mL, E는 세프피라마이드 2.5 μg/mL 첨가에 의한 결과를 나타낸다. 측정결과, 스타필로코커스 아우레우스는 5 μg/mL의 혼합조성물 첨가시 생육이 억제되었으며, 양성 대조구인 세프피라마이드의 경우 5 μg/mL 첨가시 생육이 억제됨을 알 수 있었다.

도 2는 그람 양성균인 바실러스 서브틸리스에 대한 항균 결과를 나타낸 것으로, A 내지 E는 상기 도 1에 나타낸 것과 동일하다. 측정결과, 바실러스 서브틸리스는 혼합조성물을 5 μg/mL 및 2.5 μg/mL 첨가시 생육이 억제되었으며, 양성 대조구인 세프피라마이드의 경우 5 μg/mL 및 2.5 μg/mL 첨가시 생육이 억제됨을 알 수 있었다.

도 3은 그람 음성균인 대장균에 대한 항균 결과를 나타낸 것으로, A 내지 E는 상기 도 1에 나타낸 것과 동일하다. 측정결과, 대장균은 혼합조성물을 5 μg/mL 및 2.5 μg/mL 첨가시 생육이 억제되었으며, 양성 대조구인 세프피라마이드의 경우 5 μg/mL 및 2.5 μg/mL 첨가시 생육이 억제됨을 알 수 있었다.

도 4는 그람 음성균인 슈도모나스 애루지노사에 대한 항균 결과를 나타낸 것으로, A 내지 E는 상기 도 1에 나타낸 것과 동일하다. 측정결과, 슈도모나스 애루지노사는 혼합조성물을 5 μg/mL 및 2.5 μg/mL 첨가시 생육이 억제되었으며, 양성 대조구인 세프피라마이드의 경우 5 μg/mL 첨가시 생육이 억제됨을 알 수 있었다.

상기 결과로부터, 본 발명의 피부 외용 혼합조성물과 항생제의 다양한 세균에 대한 최소성장억제농도(MIC)를 판단할 수 있었고, 이를 하기 표 2에 정리하였다.

본 발명의 혼합조성물과 항생제(양성대조구)의 세균에 대한 최소성장억제농도(MIC)

	혼합조성물(μg/mL)	세프피라마이드(μg/mL)
S. aureus	5	5
B. subtilis	1.25	2.5
E. coli	2.5	2.5
P. aeruginosa	2.5	5

상기 결과들을 종합하여 볼 때, 본 발명의 피부외용 혼합조성물은 피부 2차 감염을 유발하는 세균에 대하여 양성대조구(항생제)와 비슷한 수준의 항균활성을 나타냄으로써, 아토피나 습진 등의 피부질환을 예방 또는 치료하는데 유용하게 사용될 수 있다.

실험예 2: 본 발명의 혼합조성물의 항진균 활성 측정

실시예 1에서 제조한 혼합조성물의 항진균(antifungal) 활성을 측정하였다.

진균, 항생제의 준비

항진균 활성에 사용할 진균으로는 여성의 질염과 피부염증의 2차 감염을 유발하는 캔디다 알비칸스(Candida albicans KCTC 7121)와 지루성 피부염이라 불리는 비듬과 무좀을 유발하는 트리코스포론 베이겔리(Trichosporon beigelli KCTC 7707)를 선발하여 한국생명공학연구원(KCTC)으로부터 분양받았다. 진균 배양용 배지는 YPD 배지를 이용하였다. 양성 대조구로 곰팡이의 피부 감염시 연고로 쓰이고 있는 항진균 항생제인 클로트리마졸(clotrimazole)을 사용하였다.

항진균 활성 측정

YPD배지를 이용하여 혼합조성물과 항생제를 각 웰당 50 μL씩 넣고 단계적으로 희석하였다.

진균수는 96-웰 마이크로티터 플레이트에 각 웰당 2×10⁴ cell이 되도록 진균을 포함한 YPD배지 50 μL 분주한 후 28 ℃ 배양기에서 24시간 방치하였다. 그리고 난후, YPD 아가 배지에 도말하고, 생육 여부를 측정하였다.

측정결과

측정결과는 도 5 내지 6에 나타내었다.

도 5는 캔디다 알비칸스에 대한 항진균 결과를 나타낸 것으로, A는 음성대조구를, B는 혼합조성물을 10 μg/mL 첨가한 것을, C는 혼합조성물을 5 μg/mL 첨가한 것을, D는 음성대조구인 진균에 DMSO를 첨가한 것을, E는 양성대조구인 클로트리마졸 0.63 μg/mL 첨가에 의한 결과를 나타낸다. 측정결과, 캔디다 알비칸스는 10 μg/mL 및 5 μg/mL 농도의 혼합조성물 첨가시 생육이 억제되었으며, 양성 대조구인 클로트리마졸의 경우 0.63 μg/mL 첨가시 생육이 억제됨을 알 수 있었다.

도 6은 트리코스포론 베이겔리에 대한 항진균 결과를 나타낸 것으로, A 내지 E는 도 5에 나타낸 바와 동일하다. 측정결과, 트리코스포론 베이겔리는 10 μg/mL 농도의 혼합조성물 첨가시 생육이 약하게 억제되었으며, 양성 대조구인 클로트리마졸의 경우 0.63 μg/mL 첨가시 생육이 억제됨을 알 수 있었다.

상기 결과로부터, 본 발명의 혼합조성물과 항생제의 다양한 곰팡이에 대한 최소성장억제농도(MIC)를 판단할 수 있었고, 이를 하기 표 3에 정리하였다.

본 발명의 혼합조성물과 항생제(양성대조구)의 진균에 대한 최소성장억제농도(MIC)

	혼합조성물(μg/mL)	클로트리마졸
C. albicans	5	<0.63
T. beigelli	10	<0.63

상기 결과들을 종합하여 볼 때, 본 발명의 혼합조성물은 피부 2차 감염을 유발하는 진균에 대하여 양성대조구(항생제)와 비슷한 수준의 항진균활성을 나타냄으로써, 질염과 피부염증, 비듬 또는 무좀 등의 피부질환을 예방 또는 치료하는데 사용될 수 있을 것이다.

실험예 3: 본 발명의 혼합조성물의 세포독성 측정

인간의 피부에 존재하는 정상피부세포인 케라티노사이트 세포(Human Keratinocyte cell)인 HaCaT 세포를 이용하여 본 발명의 혼합조성물의 세포독성을 측정하였다. 상기 HaCaT 세포는 서울대학교 세포은행으로부터 분양 받았다.

상기 세포를 10% 우태아혈청(fetal bovine serum)을 포함하는 RPMI-1640 배지에서 배양하고, 96-웰 플레이트에 단계적으로 희석시킨 약초꿀과 항생제를 넣고, 이에 상기 세포를 각 웰당 2×10³개 되도록 혼합하여 37℃에서 24시간 배양시켰다. 여기에 20μL의 MTT용액(5mg/mL MTT in phosphate-buffered saline)을 가하여, 37℃에서 4시간 배양한 후, DMSO 용액을 추가하여 생성된 MTT-포르마잔 생성물을 녹였다. 그 후 ELISA 리더를 사용하여 570nm에서 흡광도를 측정하였다.

측정결과는 도 7에 나타내었다. A는 항생제인 클로트리마졸과 본 발명의 혼합조성물 농도에 따른 세포독성률(%)을, B는 MTT 용액에 의한 클로트리마졸의 세포독성을, C는 MTT 용액에 의한 혼합조성물의 세포독성을 나타낸 것이다. 도 7에 나타낸 바와 같이, 양성대조구인 클로트리마졸의 경우 세포독성이 높게 나온 반면 본 발명의 혼합조성물은 전혀 세포독성을 나타내지 않았다. 상기 결과로부터, 본 발명의 혼합조성물은 매우 안전한 물질로 판명되었다.

실험예 4: 본 발명의 혼합조성물이 세균 및 진균 세포에 미치는 영향 분석

각각의 세균 및 진균을 배지에 log-phase까지 키운 후에 균의 경우 2x10⁵CFU/mL, 진균의 경우 2x10⁴ CFU/mL로 재 현탁 한 후에 본 발명의 혼합조성물을 MIC 농도로 37℃에서 12시간 반응시키고, 진균의 경우 28℃에서 24시간 반응시킨다. 대조군은 본 발명의 조성물을 넣지 않고 반응시켰다. 그 후 2% 글루타르알데하이드(glutaraldehyde)로 4℃에서 12시간 고정시켰다. 상기 반응시킨 대조군과 실험군을 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 100% 에탄올을 이용하여 탈수시켰다. 탈수시킨 후에 5% 수크로스가 포함된 1% 오스뮴 테트록사이드(osmium tetroxide)로 세척한 후 동결 건조하여 금으로 코팅을 하였다. 그리고 나서, 주사전자현미경(HITHACHI S-2400 SEM; Scanning electron microscope)를 이용하여 각 시료를 분석하였다. 분석 결과는 도 8과 9에 나타내었다.

도 8A는 본 발명의 혼합조성물을 처리하지 않은 대장균 자체를, 도 8B는 대장균에 본 발명의 혼합조성물을 처리한 결과를, 도 8C는 본 발명의 혼합조성물을 처리하지 않은 스타필로코커스 아루레우스 자체를, 도 8D는 스타필로코커스 아루레우스에 본 발명의 혼합조성물을 처리한 결과를 나타낸다. 분석 결과, 그람 양성균인 S. aureus와 그람 음성균인 E. coli가 음성대조군에 비해 세포의 모양이 일그러지거나 파괴되었음을 확인할 수 있었다.

도 9A는 본 발명의 혼합조성물을 처리하지 않은 캔디다 알비칸스 자체를, 도 9B는 캔디다 알비칸스에 본 발명의 혼합조성물을 처리한 결과를 나타낸다. 분석 결과, 본 발명의 혼합조성물을 처리한 처리구는 음성대조군보다 곰팡이 세포들이 많이 파괴되거나 일그러져 있는 것을 알 수 있었다

실험예 5: 본 발명의 혼합조성물의 in - vivo 아토피 피부염 치료 효과 검증(1)

아토피 피부염 유발 및 본 발명의 혼합조성물의 처리

본 발명의 혼합조성물의 아토피 피부염 치료 효과를 입증하기 위하여 아토피성 피부염 유발 모델을 대상으로 본 발명의 피부 외용 혼합조성물을 도포하여 비교하여 보았다.

실험동물은 NC/Nga 마우스(5주령, 30수)를 중앙실험동물에서 구입하여 일주일간 23± 3℃, 55± 15%의 조건하에 순응시켰다. 사료는 Feedlab Formula M-07(중앙실험동물)을 자유섭취시켰고, 음용수 역시 미세여과기를 이용하여 멸균한 물을 물병을 이용하여 자유 섭취 시켰다. 일주일 후 상기 NC 마우스를 제모하고, 2~4일에 1% DNCB(dinitrochlorobenzene; 150μL/dorsal area in AOO)(상기 AOO는 아세톤:올리브오일=3:1임)를 처리하였다. 그 후 5주동안 0.2~0.4% DNCB(150μL/dorsal area in AOO)를 처리하여 아토피성 피부염을 유발시켰다. 7주째 되는 첫째날에 DNCB 처리를 중단하고, 그 후 5일동안 1일 2회씩 본 발명의 혼합조성물을 마우스의 등에 도포하였다. 약물대조군로 피메로크로리무스 크림1%(노바티스)을 동일한 방법으로 도포하였다.

상기 실험군와 대조군을 정리하면, 아토피 피부염이 유발되지 않은 음성 대조군(negative control), 아토피 피부염이 유발된 양성 대조군(positive control), 아토피 피부염이 유발된 양성 대조군에 대조 약물인 피메크로리무스 1% 크림을 도포한 약물 대조군(drug control), 아토피 피부염이 유발된 양성 대조군에 본 발명의 혼합조성물을 도포한 실험군으로 나뉜다.

관능평가 결과

상기 대조군과 실험군을 일반적으로 사용되는 임상적 육안 평가법을 이용하여 평가하였다. 육안 평가 결과는 하기 표의 5가지 항목을 각각 평가한 점수의 총 합으로 나타내며, 피부염 점수는 전문가 2인 이상이 각각 실시하여 협의하여 결정하였다.

피부염 점수 평가항목

	없음	약함	중증도	심함
발적, 출혈	0	1	2	3
가피형성, 건조	0	1	2	3
부종	0	1	2	3
조직 손상	0	1	2	3
이 조직손상	0	1	2	3

상기 점수는 최저 0점에서 최고 15점까지 가능하며, 얻은 자료에 대한 대조군과 실험군 간의 비교는 student's t- test를 사용하여 군 간의 차이를 검정하였다.

관능평가 결과인 각각의 대조군 및 실험군에 대한 아토피 점수는 도 10에 나타내었고, 구체적인 사진을 도 11 내지 14에 나타내었다. 도 11는 음성 대조군을, 도 12은 양성 대조군을, 도 13은 약물 대조군을, 도 14는 실험군을 나타낸다.

도 10의 그래프를 보면, 아토피 피부염이 유발된 양성 대조군의 경우 아토피 점수가 11.00인데 반하여, 대조 약물을 도포한 약물 대조군의 경우 4.70으로 아토피가 완화되었음을 확인할 수 있었다. 나아가 본 발명의 혼합조성물의 경우 아토피 점수가 2.50으로 대조 약물에 비하여도 훨씬 뛰어난 효과를 가짐을 알 수 있었다. 아토피를 유발하지 않은 음성 대조군의 아토피 점수가 2.10이므로, 본 발명의 혼합조성물의 처리로 거의 정상쥐에 가까워졌음을 확인할 수 있었으며, 이로부터 본 발명의 조성물은 아토피 치료에 매우 효과적인 것으로 판단된다.

실험예 6: 본 발명의 혼합조성물의 in - vivo 아토피 피부염 치료 효과 검증(2)

IgE는 비만세포(mast cell)나 백혈구(basophil)의 표면에 있는 수용체(receptor)와 결합을 해서 알레르기 반응을 유도하는 항체로서, 상기 IgE의 결합으로 인해 세포들이 활성화가 되면 히스타민을 분비하게 되어 염증반응이 일어나게 된다. 아토피 피부염을 가진 사람은 보통 혈청 내 IgE 수치가 높고 주변의 다양한 항원에 대해 민감하게 반응을 보이며, 또한 피부 증상이 심각해질수록 IgE 수치가 높아지고 피부 증상의 완화는 IgE 수치 감소와 관련이 있다.

이에 본 실험에서는 본 발명의 혼합조성물이 혈청 내 IgE 수치에 미치는 영향을 검토하여 아토피 완화 효과를 살펴보았다.

실험예 5의 각각의 대조군 및 실험군으로부터 혈청을 채취한 다음, IgE 함량을 측정하였으며, 측정결과는 도 15에 나타내었다. 도 15에서 알 수 있는 바와 같이, 음성 대조군에 근접한 값은 없었으나, 그 중 본 발명의 혼합조성물이 가장 낮은 수치를 보여 IgE 함량을 감소시키는데 효과적임을 알 수 있었다. 나아가 본 발명의 화합물은 약물 대조군에 비하여도 효과가 뛰어났다. 상기 결과로부터 본 발명의 화합물은 아토피 피부염을 완화시키는 작용을 함을 확인할 수 있었다.

실험예 7: 본 발명의 혼합조성물의 in - vivo 아토피 피부염 치료 효과 검증(3)

실험예 5의 대조군과 실험군의 등 부위 조직에 대하여 조직검사를 수행하였다. 각각의 결과는 도 16 및 17에 나타내었다.

도 16에 나타낸 바와 같이, 아토피가 유발된 양성 대조군의 경우 아토피증상은 피부 병소(skin lesion)에서 피부의 부드러운 정도(mild spongiosis)가 감소하고 과각화증(epidermal hyperplasia)과 이상각화증(parakeratosis)과 함께 염증세포의 침윤 증상(inffiltration with leukocytes)을 동반하며, 약물 대조군의 경우에는 그 정도는 감소하였으나, 염증과 두터운 각질층을 보임을 알 수 있었다.

도 17에서, 본 발명의 혼합조성물의 경우에 약간의 염증이 남아있기는 하나, 이 정도의 염증은 음성 대조군(정상군)에서도 나타나는 수준의 염증으로, 본 발명 혼합조성물이 피부염을 완화시키는 효과가 있음을 확인할 수 있었다.

이상, 실험예로부터 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 혼합조성물은 외관평가, IgE 수치 및 조직검사에서 양성 대조구에 대하여 피부염 개선 효과를 나타내었고, 특히 대조 약물에 비하여도 훨씬 우월한 효과를 나타내었는바, 아토피성 피부염을 치료 또는 개선하는데 매우 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 본 발명의 혼합조성물이 그람 양성균인 스타필로코커스 아우레우스의 생육에 미치는 효과를 보여주는 플레이트 사진이다.

도 2는 본 발명의 혼합조성물이 그람 양성균인 바실러스 서브틸리스의 생육에 미치는 효과를 보여주는 플레이트 사진이다.

도 3은 본 발명의 혼합조성물이 그람 음성균인 대장균의 생육에 미치는 효과를 보여주는 플레이트 사진이다.

도 4는 본 발명의 혼합조성물이 그람 음성균인 슈도모나스 애루지노사의 생육에 미치는 효과를 보여주는 플레이트 사진이다.

도 5는 본 발명의 혼합조성물이 진균인 캔디다 알비칸스의 생육에 미치는 효과를 보여주는 플레이트 사진이다.

도 6은 본 발명의 혼합조성물이 진균인 트리코스포론 베이겔리의 생육에 미치는 효과를 보여주는 플레이트 사진이다.

도 7은 본 발명의 혼합조성물과 양성대조구(클로트리마졸)의 농도에 따른 세포독성률 및 세포독성 결과를 나타내는 것이다.

도 8은 본 발명의 혼합조성물 첨가에 따른 세균의 외형적 변화를 촬영한 사진이다.

도 9는 본 발명의 혼합조성물 첨가에 따른 진균의 외형적 변화를 촬영한 사진이다.

도 10은 아토피 유발 마우스를 대상으로 본 발명의 혼합조성물 도포에 따른 관능평가 결과를 나타낸 그래프이다.

도 11은 아토피를 유발하지 않은 정상 마우스의 외형을 촬영한 사진이다.

도 12는 아토피를 유발한 마우스(양성 대조군)의 외형을 촬영한 사진이다.

도 13은 아토피를 유발한 마우스에 대조약물인 피메크로리무스 크림을 적용하여 변화한 마우스의 외형을 촬영한 사진이다.

도 14는 아토피를 유발한 마우스에 본 발명의 혼합조성물을 적용하여 변화한 마우스의 외형을 촬영한 사진이다.

도 15는 아토피 유발 마우스를 대상으로 본 발명의 혼합조성물 도포에 따른 혈청 내 아토피 관련 항체인 IgE의 수치를 나타낸 그래프이다.

도 16은 정상 마우스(음성 대조군)와 아토피 유발 마우스(양성 대조군) 및 대조 약물인 피메크로리무스 크림을 적용한 마우스(약물 대조군)의 조직 검사 사진이다.

도 17은 정상 마우스(음성 대조군)와 아토피 유발 마우스(양성 대조군) 및 본 발명의 혼합조성물을 적용한 마우스(약물 대조군)의 조직 검사 사진이다.

Claims (8)

1. 해양심층수 80~90 부피%, 벌꿀 5~15 부피%, 식초 0.4~0.6 부피% 및 키토산 0.5~1.0 부피%를 포함하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염 예방 또는 치료용 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 해양심층수는 경도가 50 내지 300 mg/L인 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염 예방 또는 치료용 조성물.
3. 제1항에 있어서, 상기 식초는 현미를 5 내지 10 중량%로 함유하고, 총산 함량이 6.0 내지 7.0%(w/v)인 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염 예방 또는 치료용 조성물.
4. 제1항에 있어서, 상기 키토산은

   1) 키토산 올리고당의 유기산 또는 무기산 염의 용액을 염기인 트리알킬 아민으로 처리하고,

   2) 상기 용액에 유기용매를 첨가하여 키토산 올리고당에 결합되어 있는 유기 산 또는 무기산이 트리알킬 아민 염의 형태로 제거된 키토산 올리고당을 회수하고,

   3) 상기에서 산이 제거된 키토산 올리고당 용액을 무기산 처리 후, 활성화된 탄소/이온교환수지(activated carbon/ion exchange resin) 컬럼으로 정제하여 제조된 1,000 ∼100,000 달톤의 분자량을 가진 수용성 유리 아민 키토산인 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염 예방 또는 치료용 조성물.
5. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 항균 활성 또는 항진균 활성을 나타냄으로써 아토피성 피부염을 예방 또는 치료하는 것임을 특징으로 하는 아토피성 피부염 예방 또는 치료용 조성물.
6. 제5항에 있어서, 상기 항균 활성은 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 슈도모나스 애루지노사(Pseudomonas aeruginosa) 및 대장균(Escherichia coli)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상에 대한 억제활성인 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염 예방 또는 치료용 조성물.
7. 제5항에 있어서, 상기 항진균 활성은 캔디다 알비칸스(Candida albicans) 또 는 트리코스포론 베이겔리(Trichosporon beigelli)에 대한 억제활성인 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염 예방 또는 치료용 조성물.
8. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 피부의 환부에 도포하는 외용제인 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염 예방 또는 치료용 조성물.

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