KR20100025724A - 면역증진 조성물 및 그 제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 수세미로부터 추출된 유효성분을 조성물로 한 면역증진 조성물 및 그 제조방법에 관한 발명이다.

본 발명 조성물은 건조된 수세미열매를 전탕하여 얻어지는 전탕액이나 생수세미열매에서 추출되는 과즙이나 살아있는 수세미줄기를 절단하여 얻어지는 수액으로 조성물이 구성된다.

건조된 수세미열매에서 소정량의 정제수 또는 에탄올을 용매로 하여 소정온도에서 전탕하여 얻어진 전탕액과 생수세미를 압착하여 추출되는 과즙과 살아있는 수세미줄기를 절단하여 얻어지는 수액을 여과하여 조성물을 얻는다.

수세미

Description

면역증진 조성물 및 그 제조방법{Composition Comprising Luffa Cylindrica As An Immue enhancing Effective Ingredient}

본 발명은 자연에서 쉽게 얻을 수 있는 단일식물로부터 추출된 유효성분을 주제로한 면역증진조성물 및 그 제조방법에 관한 발명이다.

인간을 비롯한 척추동물은 외부로부터 침입하는 균이나 바이러스와 같은 외부물질에 대하여 비적응적인 방어기능을 가지고 있다.

생체에는 비적응적인 방어기능을 하는 피부조직과 방어세포들과 방어기능을 가지는 단백질이 존재하고 있으며, 방어세포는 생체에 침입한 모든 병원체들에 결합하여 이들을 먹어치우거나 분해하는 기능을 갖는 것이다. 이와 같이 외부로부터 침입하는 모든 물질을 퇴치 또는 박멸하는 기능을 면역증강이 우선하는 것으로 세포의 면역력이 저하됐을 때 이를 방어기능 또한 저하되면서 각종 질병에 노출되는 것이다.

T 세포는 면역계 전반을 통제하는 중심적인 세포로 세포내 병원체를 통제하고 대부분 항원에 대한 B세포의 반응을 활성화시키는 역할을 한다. T세포에서는 IFN-γ, IL-2, IL-4. IL-5, IL-6와 TNF-α등이 생성되어 외부 항원에 대항하는 작 용을 한다.

본 발명에서는 항원에 대한 B세포의 반응을 활성화시키고 각종 사이토카인을 생성하여 외부 항원에 대항하는 작용을 하는 T 세포의 생존율 및 T세포의 인터페론(IFN)-γ 생성률의 증가를 통하여 본원 조성물의 면역력 증진 효능을 확인할 수 있다.

대식세포는 생체 내 여러 조직에서 형태, 기능 및 세포 표면 표식항원이 다른 단핵 식세포계를 이루고 있으며, 이물을 탐식하고, 여러 자극에 대한 세포활성물질의 분비, process된 항원을 T세포에 제시하는 기능 외에도 살균, 항종양세포, 상흔 회복, 골의 형성과 흡수, 지질대사 등 광범위한 기능을 나타내 생체 방어와 항상성 유지에 기본적인 중요한 역할을 담당하고 있다. 이러한 대식세포의 활성화 정도를 측정하면 면역 증강의 지표가 될 수 있다.

종래에도 면역증진 또는 강화 기능을 갖는 물질들이 선행기술로 많이 알려지고 있는 것이다.

그러나 상기한 선행기술들은 조성물의 소재 또한 다양하여서 자연에서 얻어지는 각종 약초나 식물 또는 화학물질들을 주성분으로 하고 있어서 원재료의 구입난이나 추출공정 이들을 혼합제조하는 다양한 제조공정 복잡한 시험과정 등 많은 난제를 안고 있는 것이다.

본 발명은 상기한 선행기술들의 문제점을 해결하기 위하여 특히 면역증진에 탁월한 효능을 갖는 다양한 성분을 함유한 여러 종류의 식물체를 시험한 결과 수세미 열매건조물로부터 추출된 전탕액이나 생수세미열매로부터 추출된 추출액 또는 살아있는 수세미줄기로부터 채취한 수액이 탁월한 효능이 있는 것으로 입증되었다.

수세미는 박과의 1년생 덩굴성 초본식물로서 주로 인체피부의 노화방지에 효능이 있어 수액을 직접피부에 도포하거나 화장품원료로도 쓰이고 있다.

수세미의 성분은 수분, 회분, 단백질, 카로틴, 식이섬유, 칼슘, 칼륨, 철, 마그네슘, 나트륨과 같은 10종의 인체에 필요한 주요성분과 17종의 필수 아미노산 등 27종의 많은 영양소가 함축되어있다.

건조된 수세미열매, 생수세미 열매, 살이 있는 수세미줄기로부터 얻어지는 추출물은 다른 유사종류(예 ; 박, 호박, 오이 등)의 덩굴성 초본식물에서 추출되는 추출물에 비하여 변질속도가 매우 느린 장점을 가지고 있다.

특히 살아있는 수세미 줄기로부터 얻어지는 수액이나 생수세미 열매로부터 추출된 과즙은 밀봉된 상태로 상온에서 10~12개월까지 변질되지 않는 특징이 있으며, 본 발명 조성물은 원재료확보가 매우 손쉽고 자연식물인 수세미로부터 얻어지는 추출물은 유해성분이나 독성이 거의 없으며 유효성분은 면역증진 효과가 매우 탁월하다.

본 발명 조성물을 얻기 위한 방법으로는 유효성분의 함량은 낮지만, 원재료의 다량확보와 시기나 계절에 구애됨이 없고 장시간동안 보관이 가능하며 언제나 필요할 때 추출액을 얻을 수 있는 방법으로 수세미 열매를 건조하여 소정온도에서 전탕액을 얻는 방법이 있으며, 시기적인 제한은 있지만 생수세미 열매를 압착하여 과즙을 얻는 방법과 수세미의 성장이 가장 활발하며 꽃이 개화할 무렵에 수세미 줄기를 절단하여 수액을 얻는 방법이 있다.

상기 전탕액을 얻기 위해서는 수분함량이 8~15%가 되도록 건조된 수세미열매를 소정량의 용매에 넣고 전탕농축시켜 전탕액을 얻는다.

건조된 수세미열매로부터 얻어지는 전탕액 생수세미로부터 얻어진 과즙, 살아있는 수세미줄기로부터 얻어지는 수액은 필터를 이용하여 여과한 다음 잘 소독된 유리병에 밀봉보관하면 되는 것이다.

<실시예1>

건조된 수세미열매 60g에 용매(정제수, 또는 에탄올) 1000ml를 넣고 섭씨 80~150℃의 온도에서 3시간 동안 전탕하여 농축된 전탕액이 200ml가 되도록 한다.

<실시예2>

수분함량이 가장 높은 시기의 생수세미 2개를 압착기에 넣고 압착하여 과즙 300ml를 얻는다.

<실시예3>

살아있는 수세미줄기를 지상에서부터 약50~70cm 부위를 절단하여 줄기로부터 흘러나오는 수액을 약 4~5일간 채취한다.

수세미줄기로부터 채취되는 수액량은 수세미줄기의 굵기나 토양의 수분함량에 따라 차이가 있지만 하루에 약 1~2L 정도로 채취가 가능하다.

이렇게 채취된 전탕액,과즙,수액은 0.5~10μm의 여과필터를 이용하여 여과한다.

여과된 전탕액, 과즙, 수액은 냉장보관하였다가 증류수와 희석시켜 사용한다.

본 발명이 상기 실시예에 국한되지는 않는다.

또한 전탕액이나 과즙, 수액을 각각사용하거나 어느 선택된 두가지 또는 이들 세가지를 혼합하여 사용하여도 무방하다.

이와 같이 얻어진 조성물은 액체상태로의 사용이 바람직하지만, 통상의 방법에 의하여 분말정제.산제.캡슐제.과립제.추출액제 등 경구투여용제형으로 제조하여 사용할 수가 있다.

이렇게 얻어진 상기 조성물을 이용하여 면역증강 확인을 위한 실험을 실시하였다.

<실험예>

실험예 1 : T세포 활성확인 실험

1-1) 생쥐 비장 T세포 배양

생쥐 비장 T세포는 실험실에서 6주령가량 키워 온 ICR 암컷 생쥐에서 적출한 비장에서 분리했다. 비장을 잘게 자르고, 눌러서 단일세포로 만든 후, Cell strainer를 통과시켜 단일 세포만 잘 모아 10% FBS와 1% 페니실린/스트렙토마이신이 첨가된 RPM1 1640에서 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 배양하였다.

1-2) MTT 어세이(assay)

T-세포의 증식을 관찰하기 위하여 MTT 어세이를 실행하였다. 10% FBS과 1 % 페니실린/스트렙토마이신이 들어간 RPMI 1640에 3 × 10⁵이 되는 상기에서 배양한 T 세포를 CD3가 코팅된 96 웰 플레이트에 접종(seeding)하고 수세미 건조물 전탕액 및 수액을 각각 원액, 1/10 희석, 1/100 희석한 농도로 처리한 후 CD28을 처리하여, T세포를 임의 활성화 시킨 경우와 그렇지 않은 실험군으로 나누어, 24시간 동안 37℃에서 배양하였다. 배양된 배지를 버리고 난 다음 신선한 배지를 넣고, MTT (10 ㎕/well : 5 ㎍/ml)를 첨가하여 4시간 동안 다시 배양한 다음 DMSO 100 ㎕로 MTT를 녹이고 540 nm에서 ELISA reader로 분석하였다.

수세미 건조물 전탕액 및 수액의 투여에 따른 T세포 생존율(%)을 측정하고 각각 도 1a 및 도 1b에 나타내었다. 약 6주에 걸쳐 반복실험을 수행한 결과, 도 1a에서와 같이 건조 수세미 전탕액 원액에서 유의적으로 T세포의 증식을 유도하는 것으로 나타났다.

1-3) IFN-γ 분비의 측정

생쥐 비장에서 직접 배양한 T세포에서 세포활성물질, IFN-γ의 분비(생성)율를 ELISA 방법으로 측정하고 그 결과를 도 2a 및 2b에 나타내었다.

약 9주에 걸쳐 반복실험을 수행한 결과, 수세미 건조물 전탕액에서는 대조군과 비교했을 때 IFN-γ 생성은 1/10, 1/100 희석한 농도에서 증가하였고(도 2a), 수세미 수액의 경우 1/10 희석, 원액의 경우에 대조군에 비해 IFN-γ의 생성이 농도 의존적으로 유의성 있게 증가하는 경향을 나타내었다 (도 2b).

실험예 2. 대식세포의 활성 확인 실험

2-1) 실험동물

대한바이오 실험동물센터에서 C57BL/6J 수컷생쥐를 구입하여 무균 사육실에서 4주 이상 사육하여 사용하였다. 동물실내의 명암은 12시간으로 자동 조절하여 물과 사료를 자유롭게 섭취하도록 하였다.

2-2)　복강 대식세포의 분리

생쥐의 복강　내에 4% thioglycollate를 2.5 ㎖ 주사하고 3-4일 후 복강을 DMEM으로 세척하여 RBC lysis를 처리하여 적혈구를 제거하고 10% FBS를 함유하는 DMEM에 부유시켜, 24-well에 한 well당 2.5×10⁵ 세포가 되도록 분주하여 CO₂배양기에서 배양한다. 약 3시간 후에 배양액을 교환하여 배양용기 표면에 부착되지 않은 세포는 제거하고, 부착된 대식세포만을 실험에 사용하였다.

2-3) 산화질소 생성량 측정

대식세포에 IFN-γ를 처리하고 6시간이 지난 후에 수세미 건조물 전탕액 및 수액의 투여하고 48시간 동안 인큐베이터 내에서 배양하였다. 이후, 발생된 산화질소의 양은 배지에 축적된 산화질소의 산화물인 nitrite를 Griess 반응으로 정량한다. 즉 0.1% naphthylethylene diaminedihydrochloride와 1% sulfanilamide를 동량 섞은 Griess reagents 100 ㎕와 배양액 100 ㎕를 섞은 다음 10분 후에 ELISA reader를 이용하여 540 nm에서의 흡광도를 측정한다. Nitrite의 농도계산은 sodium nitrite를 표준물질로 사용하여 결정하였다.

수세미 열매건조물, 생수세미열매, 살아있는 수세미줄기로부터 얻어지는 추출물의 투여에 따른 산화질소 생성량을 측정하고 각각 도 3a 및 도 3b에 나타내었다. 약 7주에 걸쳐 반복실험을 수행한 결과, 수세미열매 건조물 전탕액에서는 대조군과 비교했을 때 산화질소의 생성이 1/10 희석, 원액에서 농도 의존적으로 증가하였고(도 3a), 수세미 수액과 생수세미에서 얻어지는 과즙의 경우도 역시 1/10 희석, 원액 투여 시 산화질소의 생성이 유의성 있게 증가하는 양상을 나타내었다(도 3b). 위의 각 실험 자료는 약 5개월에 걸친 반복실험 결과를 분석한 것이다.

도 1a는 본 발명 조성물 소재인 수세미건조물 전탕액 투여에 따른 T세포 생존율(%)을 도시한 그래프.

도 1b는 본 발명 조성물 소재인 수세미 수액 투여에 따른 T세포 생존율(5)을 도시한 그래프.

도 2a는 본 발명 조성물 소재인 수세미 건조물 전탕액 투여에 따른 사람 T세포주의 IFN-γ생성(pg/ml)을 도시한 그래프.

도 2b는 본 발명 조성물소재인 수세미 수액 투여에 따른 사람 T세포주의 IFN-γ생성 (pg/ml)을 도시한 그래프.

도 3a는 본 발명 조성물소재인 수세미 건조물 전탕액 투여에 따른 생쥐복강 대식세포의 산화질소생성(μM)을 도시한 그래프.

도 3b는 본 발명 조성물소재인 수세미 수액 투여에 따른 생쥐복강 대식세포의 산화질소생성(μM)을 도시한 그래프.

Claims (5)

1. 수세미로부터 추출된 유효성분을 주재로 하는 것을 특징으로 하는 면역증진 조성물.
2. 제 1항에 있어서, 상기 조성물은 건조수세미열매로부터 추출되는 전탕액 생수세미열매로부터 추출된 과즙, 살아있는 수세미줄기로부터 채취된 수액인 것을 특징으로 하는 면역증진 조성물.
3. 제 2항에 있어서, 상기 전탕액, 상기 과즙 상기 수액 중 선택된 어느 한가지 또는 선택된 어느 두가지의 혼합물 또는 세가지의 혼합물을 사용하는 것을 특징으로 하는 면역증진 조성물.
4. 수분 8~15%가 되도록 그늘에서 건조된 수세미열매를 용매에 넣고 섭씨 80~150℃의 열에서 2~4시간 동안 전탕하여 얻어진 전탕액과 생수세미열매로부터 추출된 과즙, 살아있는 수세미줄기를 절단하여 얻어진 수액을 0.5~10μm의 필터로 여과하는 것을 특징으로 하는 면역증진 조성물의 제조방법.
5. 제 4항에 있어서, 상기 용매는 정제수 또는 에탄올인 것을 특징으로 하는 면역증진 조성물의 제조방법.

Images