KR20100014652A

KR20100014652A - 간 질환에서의 지방산 합성효소

Info

Publication number: KR20100014652A
Application number: KR1020097020299A
Authority: KR
Inventors: 수잔 엠. 메드갈치; 프란시스 피. 쿠하즈다
Original assignee: 파스겐 다이아그노스틱스, 엘엘씨
Priority date: 2007-02-27
Filing date: 2008-02-27
Publication date: 2010-02-10
Also published as: WO2008106563A3; EP2132565A2; MX2009009189A; US20090162870A1; WO2008106563A2; CN101720434A; CA2679325A1; JP2010519561A

Abstract

본 발명은 대상자의 간에서 상승된 지방산 합성효소(FAS) 발현을 검출하기 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다. 이 검출은 대상자의 간 세포 그 자체에서의 발현 및 체액에서의 발현에 관한 것일 수 있다. 또한, 상승된 FAS에 관련된 간 질환 또는 간 병상(pathology)의 존재 또는 부재를 확인하는 방법이 개시된다. 개시된 이들 방법은 본 명세서에서 기재된 바와 같은 FAS 발현을 검출하기 위한 시약들을 포함하는 다양한 조성물을 사용하여 실시될 수 있다.

지방산 합성효소, 간 질환, 간 병상, 간 상태

Description

간 질환에서의 지방산 합성효소{Fatty acid synthase in liver disease}

관련 출원

본 출원은 2007년 2월 27일자로 출원된 미국 가특허 출원 제60/891,928호로부터의 우선권의 이득을 청구하며, 이는 충분히 기술된 바와 같이 이의 전문을 본원에 인용한다.

대상자의 간에서 상승된 지방산 합성효소(FAS) 발현을 검출하기 위한 방법 및 조성물이 개시된다. 이 검출은 대상자의 간 세포 그 자체에서의 발현 또는 체액 물질에서의 발현에 관한 것일 수 있다. 또한, 상승된 FAS에 관련된 간 질환 또는 간 병상(pathology)의 존재 또는 부재를 확인하는 방법이 개시된다. 개시된 이들 방법은 본 명세서에서 기재된 바와 같은 FAS 발현을 검출하기 위한 시약들을 포함하는 다양한 조성물을 사용하여 실시될 수 있다.

비알코올성 지방간 질환(nonalchoholic fatty liver disease, NASH)으로도 알려진 비알코올성 지방간염(nonalcoholic steatohepatitis, NAFLD)은 단순 지방 증(지방간)으로부터 NASH/NAFLD까지, 나아가 확정된 간경변까지의 광범위한 병상(pathology)을 특징으로 하는 만성 간 질환이다(1). NASH의 진단은 간 생검에 대하여 확립되고, 여기서, 이의 병상은 알코올성 간염과 본질적으로 구별할 수 없다. 지방증, 간세포 손상에 의한 급성 및 만성 염증의 병소(foci), 말로리(Mallory)의 히알린 및 가변량의 섬유증은 이 질환의 특징 중 하나이며(2), 상당한 알코올 소비가 없을 때 일어남이 틀림없다.

NASH는 이차적 그룹 및 일차적 그룹의 2개의 그룹으로 하위분류되어 있다(1). 이차적 NASH는 근인(proximate cause), 예를 들면, 공회장 우회 수술, 약물, 간독소, 또는 질환, 예를 들면, 지방이영양증(lipodystrophy), 웨버-크리스티안병(Weber-Christian disease) 또는 HIV의 결과로서 지방간 질환의 상황에서 일어난다. 일차적 NASH는 비만, 제2형 당뇨병, 이상지질혈증(dyslipidemia) 및 인슐린 내성에 동반되거나, 대사성 증후군의 징후 및 증상의 무리(constellation)의 일부이거나, 특발성일 수도 있다.

초기 단계에서, NASH는 본질적으로 무증상성이며, 그러므로, 간경변의 발생과 일반적으로 관련된 증상들이 발생하기 전에 진단을 확립하는 것이 중요하다. 또한, 간경변이 증상의 발현 없이 NASH로 발달할 수 있다. 간 생검이 여전히 NASH의 진단을 위한 황금 기준(gold-standard)이더라도, 바늘 생검은 샘플링 에러와 잠재적 오류해석(potential misinterpretation) 둘 다를 수반한다(3, 4). 더욱이, 간 생검 및 영상 기술, 예를 들면, 자기 공명 분광법(MRS)은 비용 및 스크리닝 검사로서의 비실제성으로 인해 방해받고 있다. 이에 따라, 혈청에 대하여 수행되는 일반적이고 비교적 저렴한 간 기능 검사를 이용하여 NASH를 검출하려는 시도가 있어 왔다.

혈청에서 간 효소의 존재를 검출하는 데 사용되는 검정들이 많이 있는데, 이들 간 효소는 간 질환의 마커로서 단독으로 또는 조합하여 사용될 수 있는 것이다. 혈중 이들 효소의 존재는 간세포 손상을 나타낸다. 이들 효소에는 AST(아스파르테이트 아미노트랜스페라제), ALT(알라닌 아미노트랜스페라제), 알칼리 포스파타제(ALP), GGT(감마-글루타밀 트랜스페라제) 및 젖산 탈수소효소(LDH)가 포함된다. 혈중 이들 효소의 상승이 간세포 손상을 나타내는 한편, ALP 및 GGT의 소관 위치는 패쇄성 과정, 예를 들면, 결석이나 종양으로 인한 담도 폐쇄를 나타낼 수 있다(5).

불행히도, 간 효소의 수준은 만성 간 질환에 대하여 일반적으로 비감수성이고 비특이적이며, NASH에 대하여 특별히 비감수성이고 비특이적이다(1, 6-10). 예를 들면, 최근 연구(Kunde et al)에서는, II/II 부류 비만에 속하는 233명의 여성에서 NASH를 검출하기 위한 혈청 ATL 상승의 민감성 및 특이성은 정상에 대한 컷오프(cutoff)로서 ALT > 19 U/L을 사용하여 74% 및 42%였다. 컷오프 값을 ALT > 30 U/L로 변화시켰을 경우, 민감성 및 특이성은 42% 및 80%로 증가하였다. 그러나, 이들 저자들은 NASH를 확인하기 위한 ALT의 진단적 유용성은 여전히 나쁘다고 결론내렸다(6). NASH를 갖는 106명의 환자의 종단적 연구(longitudinal study)에서, 파시오 등(Fassio et al)은 ALT와 AST/ALT 비의 어떤 것도 NASH의 진행을 예측하는 데 유용하지 않음을 보여주었다(8). 상승된 ALT 수준을 갖는 50명의 환자에 비교한 정상 ATL 수준을 갖는 51명의 환자에서의 NASH의 연구에서, 질환의 전 범위가 정상 ALT 수준을 갖는 환자들에서 관찰되었으며, 지방증으로부터 확정된 간경변까지의 범위에 이르렀다. 이에 따라, 정상 ALT 값은 NASH의 경과된 섬유증으로의 진행을 배제시키지 못한다(10). 이 문제를 다른 방법으로 조사하기 위해서, 공혈(blood donation) 시에 발견된 상승된 ALT 수준을 갖는 간염 B 및 C 바이러스 음성인 119명의 환자에 대하여 상승된 ALT 수준의 원인이 연구되었다. 비만(30.2%) 및 알코올중독(28.6%)은 ALT 상승과 가장 빈번하게 관련되어 있다. 40명의 환자에서의 간 조직학은 지방증(35%), 지방간염(30%), 비특이적 간염(12.5%) 및 정상 간 15%로 나타났으며; 간경변, 혈색소증 및 문맥 섬유증은 각각 한 사례씩 있었다. 역시, ALT 상승은 이 집단에서 NASH에 대하여 높게 예측하지 않았다(11). 요약하면, NASH의 존재를 선별하는 데 유용한 어떠한 실제적인 시험도 없다.

지방산 합성효소(FAS)는 사람의 암 치료를 위한 약물 표적 및 암 진단을 위한 바이오마커로서 관심의 대상이 되어 왔다. FAS는 폐, 전립샘, 결장, 유방 및 난소와 같은 가장 일반적인 사람 종양에서 높은 퍼센트로 발현된다(12). FAS의 억제는 사람 암 세포에서 아폽토시스를 유도하고(13), 소분자의 FAS 억제제는 사람 암 이종이식의 성장을 억제한다(14, 15). 추가로, 유방암 환자의 혈중 FAS의 상승된 수준이 보고되어 왔다(16-18). 또한, 대조군에 비하여 폐암, 유방암, 난소암, 췌장암 및 결장암 환자에서 유의하게 상승된 FAS 수준에 대한 보고가 있다(19). 최근에는, 새로 구성된 FAS ELISA 검정이 이들 선행 혈청학적 연구를 확증시켜 왔다(도 1).

위의 문헌의 인용은 상기 중 어떠한 것도 적절한 선행 기술임을 인정하고자 함이 아니다. 이들 문헌의 내용에 대한 날짜 또는 설명에 대한 모든 기재는 출원인이 이용할 수 있는 정보에 기초하며, 이들 문헌의 날짜 또는 내용의 정확성은 승인되지 않는다.

발명의 개요

본 명세서에서는 다양한 병인을 포함하는 간 질환 및 병상을 비롯한 간의 상태를 검출하거나 확인하기 위한 방법 및 조성물이 개시된다. 이들 방법은, 확인된 간 상태, 질환 또는 병상을 치료하기 위한 방법과 유리하게 조합되거나, 이러한 치료 방법이 뒤따를 수 있다. 이들 방법의 양상 및 이들 조성물의 활동은 대상자, 예를 들면, 사람 환자의 간에서 지방산 합성효소(FAS) 발현을 검출하거나 측정하는 것을 포함한다. 본 발명의 양태는 검출되거나 측정된 FAS 발현 수준을 질환의 진단 및 질환을 위한 치료의 선택에 적용하는 것을 포함한다.

한 측면에서, 본 발명은 대상자의 간에서 지방산 합성효소(FAS) 발현을 검출하거나 측정하는 방법을 포함한다. 이러한 검출이나 측정은 FAS 발현의 수준이나 양에 대한 것일 수 있다. 몇 가지 양태에서, 이러한 검출이나 측정은 FAS 단백질 또는 이의 단편에 대한 것이다. 당해 방법의 비-제한적인 양태는 대상자로부터의 물질의 FAS 함유 샘플의 용도를 포함한다. 몇 가지 양태에서, FAS 함유 샘플은 체액, 예를 들면, 혈액이나 혈청을 포함한다. 다른 비-제한적인 양태에서, FAS 함유 샘플은 대상자로부터의 하나 이상의 간 세포, 간 세포의 호모지네이트 또는 간 세포의 FAS 함유 추출물을 포함한다.

몇 가지 양태에서, 샘플은 간 상태를 가질 것으로 고려되거나, 여겨지거나 예상되는 대상자로부터의 것일 수 있다. 대안적으로, 이 대상자는 이러한 상태를 가질 것으로 의심될 수 있다. 다른 양태에서, 이 대상자는 암이 아닐 것으로 의심되거나, 고려되거나, 여겨지거나, 진단된 개체일 수 있다. 추가의 대안적인 양태로서, 이 대상자는 상승된 FAS 발현을 특징으로 하는 간 상태로 이미 진단된 사람일 수도 있으며, 본 발명의 방법은 이 진단을 위한 추가의 증거를 확증하거나 제공하는 데 사용된다.

추가의 양태에서, FAS 발현을 검출하거나 측정하는 방법이 대상자의 간에서 FAS의 상승된 수준을 측정하거나 확인하는 데 사용될 수 있다. 대안적으로, 당해 방법은 대상자의 간에서 FAS의 상승되지 않거나 정상 수준을 측정하거나 확인하는 데 사용될 수 있다. 이 FAS의 수준은 간 질환 또는 병상이 없는 대상자로부터의 샘플 중의 FAS 수준에 비하여 상승되거나 상승되지 않은 것으로 결정될 수 있다.

당해 방법의 몇 가지 양태는 FAS 발현 수준을 반영하는 샘플에서 하나 이상의 성분을 검출하거나 측정하는 데 기초한다. 몇 가지 경우에, 이 성분은 FAS 단백질 또는 이의 단편일 수 있다. 이러한 양태에서, 당해 방법은 FAS 단백질 또는 이의 단편과 결합하는 시약의 용도를 포함할 수 있다. 다른 양태에서, 이 성분은 FAS 발현을 반영하는 세포성 인자 또는 중간물일 수 있다. 이러한 양태에서, 당해 방법은 이 인자 또는 중간물을 검출하거나 측정하기 위한 하나 이상의 시약의 용도를 포함할 수 있다. 비-제한적인 예로서, 이 성분은 FAS 단백질 암호화 mRNA일 수 있으며, 이 시약은 mRNA를 검출하기 위한 핵산 프로브일 수 있다. 대안적으로, 역 전사 중합효소 연쇄 반응(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)을 위한 시약들의 조합, 예를 들면 프라이머 및 프로브 분자들의 조합이 사용될 수 있다. 추가의 대안은, 정량적 PCR의 용도, 예를 들면, mRNA의 역전사 후에 FAS cDNA를 검출하기 위한 용도이다.

다른 측면에서, 본 발명은 검출되거나 측정된 FAS 수준에 기초하여 간 상태의 존재 또는 부재를 진단하는 방법을 포함한다. 몇 가지 양태에서, 이 진단은 상승된 FAS 발현에 기초한 간 질환 또는 병상의 존재에 대한 것이다. 다른 양태에서, 이 진단은 상승되지 않은 FAS 발현에 기초한 간 질환 또는 병상의 부재에 대한 것이다. 간 질환 또는 병상의 비-제한적인 예에는 지방간염(또는 비-알코올성 지방간염, NASH); 알코올성 간염; 간 독성; 간의 바이러스 감염 또는 바이러스성 간염; 자가면역성 간염; 잠복성 간경변(cryptogenic cirrhosis); 저관류 후의 간 괴사; 및 다른 질환으로부터 기인되는 간염 또는 이차적 NASH가 포함된다.

추가의 측면에서, 본 발명은 검출되거나 측정된 FAS 발현 수준에 기초하여 대상자의 간에서 지방 축적을 진단하는 방법을 포함한다. 몇 가지 양태에서, 대상자의 간에서 지방 축적의 존재의 진단은 상승된 FAS 발현에 기초한다. 대안적으로, 대상자의 간에서 지방 축적의 부재의 진단은 상승되지 않은 수준의 FAS 발현의 검출이나 측정에 기초할 수 있다. 몇 가지 양태에서, 이들 방법은 간 염증의 검출이나 측정을 조합하여 사용될 수 있다. 염증의 부재는 지방증의 존재를 나타내며, 반면 염증의 존재, 예를 들면, 간세포 손상이 동반된 간 소엽에서의 국소적 급성 염증의 존재는 지방간염의 존재를 나타낸다. 문맥 삼분지(portal triad)의 경도의 만성 염증이 지방증 환자에서 존재할 수 있음이 보고되어 왔다.

추가의 측면에서, 본 발명의 방법은 감별 진단의 방법의 일부로서 다른 의학적 또는 임상적 방법과 조합하여 사용될 수 있다. 이러한 방법은 본 명세서에 기재된 FAS 관련 검정을 다른 검정들과 조합하여 실시하는 것을 포함하여, 다른 가능한 질환 상태들을 포함하거나 배제시킴으로써 의학적 진단 과정을 개선할 수 있다.

또 다른 추가의 측면에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 간 상태의 진단에 기초하여 치료 또는 요법을 선택하거나 적용하는 방법을 포함한다. 몇 가지 양태에서, 이 치료 또는 요법은 진단된 상태의 증상 또는 양상을 경감시키거나 개선하기 위하여 당업자에게 알려져 있거나 이들에 의해 고려되는 것이다. 비-제한적인 예에는 임상의 또는 기타 의료인에 의해 인식되고, 진단된 질환 또는 병상에 대하여 이익이 있는 것으로 고려되거나 알려진 치료 및 요법이 포함된다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 바와 같이 대상자로부터 생물학적 물질의 샘플을 제조하는 방법을 포함한다. 이 제조는 당업자에게 공지된 임의의 수단 또는 방법에 의할 수 있다. 몇 가지 양태에서, 생체액의 샘플이 제조되고, 다음에 본 명세서에 개시된 방법에 사용될 수 있다. 다른 양태에서, 간 세포 또는 이로부터의 물질을 함유하는 샘플이 제조되고 본 명세서에 기재된 방법에 사용될 수 있다.

본 발명은 본 명세서에 개시된 방법을 실시하기 위한 조성물을 추가로 포함한다. 비-제한적인 양태에는 FAS 단백질 또는 이의 단편을 검출하기 위한 시약, 또는 FAS 암호화 핵산을 검출하기 위한 시약이 포함된다. 물론, 이러한 시약들을 하나 이상 포함하는 조성물이 또한 개시된다. 추가의 재료에는 FAS 발현을 검출하기 위한 시약과 이 시약에 의해 결합되는 리간드를 포함하는 복합체가 포함된다. 이 시약과 리간드는 본 발명의 "결합 쌍"을 형성하는데, 본 발명의 복합체가 이러한 "결합 쌍"을 포함할 수 있도록 한다. 리간드의 비-제한적인 예에는 시약에 의해 결합되는 생체액 또는 간 세포 중의 성분들 및 분자들이 포함된다. 몇 가지 양태에서, 이들 복합체는 이 리간드와 함께 통상적으로 발견되는 하나 이상의 분자로부터 분리되거나 정제된다.

추가의 양태의 상세한 내용은 첨부되는 도면 및 하기의 설명에서 기술된다. 이들 양태의 다른 특징, 목적 및 이점이 도면 및 상세한 설명, 그리고 청구항으로부터 명백해질 것이다.

정의

본 명세서에 사용되는 용어 "간 상태(liver condition)" 및 이의 변형어는 대상자에서 간의 상태가, 정상이거나 질환이 없는 개체의 간의 상태가 아닌 것을 말한다. 이 상태는 비정상적인 간의 상태이거나 원하지 않은 생리학적 상태의 일 수 있다. 비-제한적인 한 예는 지방간이다. 이 용어는 간 질환 및 간 병상과 같은 상태를 추가로 포함한다.

본 명세서에 사용되는 "간 질환" 및 이의 변형어는 대상자에서 간의 상태가 이의 정상적인 수준이나 특징적 기능을 붕괴시키는 상태를 말한다. 몇 가지 경우에, 이 붕괴는 간 기능의 방해, 정지 또는 장애이다. 다른 경우에, 이 붕괴는 간 기능의 부정확하거나 비정상 수준 또는 특성이다. 이 질환은 대상자의 유전 인자나 상태 또는 하나 이상의 병인(etiological agent)의 결과일 수 있다.

본 명세서에 사용되는 용어 "간 병상" 및 이의 변형어는 간 세포 및/또는 조직의 검사에 의해 확인될 수 있는, 구조적 성분을 포함하는 간의 질환 상태를 말한다. 병상은 흔히 조직, 기관 및/또는 체액의 조사에 의해 확인될 수 있는 상태(state 또는 condition)이다. 이 연구는 시각적 검사, 예를 들면, 현미경 하에서의 시각적 검사에 기초할 수 있는데, 이는 임의로 염색 및/또는 면역조직화학에 의해 증가된다.

본 명세서에 사용되는 "지방간염"은 비-알코올성 지방간염(NASH)과 알코올성 지방간염 둘 다를 포함한다.

용어 "사람 지방산 합성효소" 또는 "hFAS"는 미국 특허 제5,759,791호 및 이의 계류 중인 특허 출원에서 암 관련 항원으로서 이전에 확인된 폴리펩타이드를 말한다. 이 항원은 또한 당해 분야에서 OA-519라 불리며, NC-IUBMB (Nomenclature Committee of the International Union of Biochemistry and Molecular Biology)에 의해 지방산 합성효소(E.C. 2.3.1.85)로서 정의되어 있다(www.chem.qmul.ac.uk/iubmb/enzyme/에 기재됨). 이들 용어는 아미노산 서열에 의한 특정 사람 지방산 합성효소로 한정되지 않고, 오히려 본 발명의, 항체에 의해 인식되는 임의의 hFAS 또는 이의 단편이다. 이들 용어는 또한 hFAS 단백질 또는 펩타이드를 말하는데, 이에는 여전히 세포내에 있는 전체 길이 서열(full length sequence)의 단편, 뿐만 아니라 세포외 환경 및 체액에서 발견되는 무세포(cell- free) 형태가 포함된다. 몇 가지 경우에, 전체 길이 hFAS의 단편은 전체 길이 hFAS를 나타낸다(전체 길이 hFAS에 특정한 것이다). 본 명세서에 사용되는 용어 "FAS 폴리펩타이드", "FAS 펩타이드" 및 "FAS 단백질"은 전체적으로 FAS의 전부 또는 일부인 아미노산 잔기의 중합체를 말한다. 이들 용어는 또한, 중합체가 전체적으로 이의 기능성, 예를 들면, 본 발명의 안티-FAS 항체에 의해 인식되는 기능성을 유지하도록, 보존적인 아미노산 치환체를 함유하는 중합체를 포함한다.

용어 "접촉"은 직접적인 물리적 회합으로의 배치를 말하며, 예를 들면, 본 발명의 항체와 hFAS 폴리펩타이드가, 이들 두 성분의 복합체가 형성될 수 있도록 배치되는 것을 말한다.

용어 "상승된 FAS 수준" 또는 이의 변형어는 샘플 또는 기타 물질에서, FAS 폴리펩타이드 또는 FAS 폴리펩타이드를 포함하는 복합체의 존재 또는 부재에 대한 정성적 또는 정량적 평가에 관한 것이다. 이 어구는 또한 지정된 수준을 초과하는 FAS 폴리펩타이드의 존재의 검출로 고려될 수 있으며, 이러한 지정된 수준은, 예를 들면, 배경 노이즈를 초과하는 수준이나 기준 세포 또는 기준 샘플(정상 대상자로부터의 세포 또는 샘플을 포함한다) 중의 수준이지만, 이로 한정되지 않는다. 본 명세서에서 사용되는 FAS 폴리펩타이드의 수준을 "결정하는" 또는 "검출하는"의 사용은 정량적이거나 반-정량적인 수준에서 폴리펩타이드의 양을 평가하는 것을 말한다. 이 평가는 절대적으로 정확해야 할 필요는 없지만, 대신에 근사적일 수 있다.

용어 "컨쥬게이트", "결합", "연결" 및 이의 변형어는 2개의 개체의 하나 이상의 공유 결합의 형성에 의한 물리적 부착을 말한다. 몇 가지 상황에서, 이들 용어는 2개의 폴리펩타이드를 하나의 인접(contiguous) 폴리펩타이드 분자로 만드는 것을 말한다. 본 발명과 관련하여, 이들 용어는 항체 잔기를 고상 지지체 또는 다른 고상 물질(고상 물질의 표면, 뿐만 아니라 다른 분자를 포함함)에 결합되는 것을 언급함을 포함한다. 공유 결합의 형성은 이 결합을 형성하는 화학 반응을 이용하여 가능할 수 있다. 용어 "지지체(support)"는 통상의 지지체를 말하며, 예를 들면, 비드, 입자, 딥스틱(dipstick), 섬유, 필터, 막 및 실란 또는 규산염 지지체, 예컨대 유리 슬라이드이다. 본 발명의 컨쥬게이트된 항체에는 표지(label)에 부착되는 항체가 포함되지만, 이로 한정되지 않는다.

도 1은 정상 대조군에 비하여 유방암, 난소암, 전립샘암, 폐암 및 결장암 환자에서의 혈청 FAS 수준을 도시한다. 정상 남자는 결과가 0.21 ± 0.27 ng/ml (평균 ± 표준 편차) (여기서, n=10)임을 말한다. 정상 여자는 결과가 0.45 ± 0.67 ng/ml (평균 ± 표준 편차) (여기서, n=20)임을 말한다. "난소"는 난소암인 사례(여기서, n=13)를 나타낸다. "유방"은 유방암 사례(여기서, n=12)를 나타낸다. "결장"은 결장암 사례(여기서, n=10)를 나타낸다. "전립샘"은 전립샘암 사례(여기서, n=13)를 나타낸다. "폐"는 폐암 사례(여기서, n=11)를 나타낸다. 남성 및 여성에 대한 정상 상한은 각각 1.02 및 2.46 ng/ml (평균 + 3 표준 편차)이다.

도 2는 38명(n=38)의 비만 대상자로부터 간 생검에서의 지방증 및 지방간염과 관련하여 FAS 발현을 도시한다. A 부분은 지방간 스코어 대 지방간염 스코어의 플롯을 보여주며(여기서, p<0.0001 일원분산분석(1-way ANOVA)), ***는 양방 t-검정(two-tailed t-test)에 의해 p<0.001임을 나타낸다. B 부분은 FAS 발현 스코어 대 지방간 스코어의 플롯을 보여주며(여기서, p<0.011 일원분산분석), *는 양방 t-검정에 의해 p<0.05, ***는 p<0.01임을 나타낸다. C 부분은 FAS 발현 스코어 대 지방간염 스코어의 플롯을 보여주며(여기서, p<0.0003 일원분산분석), **는 양방 t-검정에 의해 p<0.01임을 나타낸다.

도 3은 정상 간, 지방증, 지방간염 및 간경변의 샘플에서의 FAS 발현을 도시한다.

본 발명의 실시 양태의 상세한 설명

본 발명은 대상체에서 간 상태를 검출하기 위한 방법 및 조성물을 포함한다. 이들 조성물의 검출은 대상자에서 질환의 진단 및/또는 치료를 개선시키는 데 사용될 수 있다. 이들 방법은 정량적인 방법으로, 예를 들면, 소정의 수준에서 또는 이 수준을 초과하는 FAS 발현을 검출함으로써 수행될 수 있다. 대안적으로, 이들 방법은 정량적인 방법으로, 예를 들면, FAS 발현의 수준 또는 양을 측정함으로써 수행될 수 있다.

본 발명은 대상자의 간에서 상승된 FAS를 검출하는 방법을 포함한다. 몇 가지 양태에서, 이 방법은 하나 이상의 간 세포에서의 FAS 발현의 분석을 포함할 수 있다. 다른 양태에서, 이 방법은 간으로부터 방출된 FAS, 예를 들면, 대상자의 체액 중의 FAS의 분석을 포함할 수 있다. 체액이 혈청인 양태에서, FAS 수준은 본 명세서에서 ALT, AST, ALP, 총 빌리루빈, 총 단백질 또는 알부민의 수준과 관련되지 않는 것으로서 개시된다. 추가의 양태에서, 이 혈청은 4℃에서 약 1일, 약 1 내지 2일, 약 2일, 약 2 내지 3일, 약 3일, 약 3 내지 4일 또는 약 4일 동안 저장되어 왔다.

분석의 비-제한적인 예에는 대상자의 간에서 FAS 발현 또는 FAS 수준을 검출하거나 측정하는 것을 포함된다. 이 검출이나 측정은 직접적으로, 예를 들면, FAS 단백질 또는 이의 단편의 검출에 의해 수행될 수 있다. 대안적으로, 이 검출이나 측정은 간접적으로, 예를 들면, FAS 발현을 나타내는 중간물을 거쳐 수행될 수 있다.

이 검출이나 측정은 샘플, 예를 들면, 대상자로부터의 하나 이상의 간 세포의 샘플 또는 대상자로부터의 체액의 샘플에 대한 것일 수 있다. 몇 가지 양태에서, 이 대상자는 사람이다. 다른 양태에서, 이 대상자는 사람이 아닌 동물이며, 예를 들면 대사 간 증후군에 걸리기 쉬운 대상자들이다(참조: Hansen, R.J. et al. "Avian fatty liver hemorrhagic syndrome: a comparative review." Adv Vet Sci Comp Med 37: 451- 468, 1993). 비-제한적인 예에는 새(예를 들면, 닭, 오리, 거위 및 기타 농업적으로 중요한 조류), 포유동물(예를 들면, 소, 돼지 및 기타 농업적으로 중요한 사지동물(quadraped)), 및 사람과 가까이 지내는 동물(예를 들면, 고양이, 개 등)이 포함된다.

몇 가지 양태에서, 이 대상자는 사람 환자이며, 예를 들면, 비만이 아닌 사람이며, 이들은 일반적으로 혈청 FAS 수준이 비만인 사람의 혈청 FAS 수준보다 낮 을 것이다. 이에 따라, 비만이 아닌 사람에서 상승된 혈청 FAS 수준은 지방증 또는 지방간염의 존재를 나타낸다. 더욱이, 간 질환 또는 간 병상을 갖는 비만인 사람은 동일한 질환 또는 병상을 갖는 비만이 아닌 사람보다 일반적으로 더 높은 혈청 FAS 수준을 가질 것이다. 이에 따라, 염증성 간 질환, 예를 들면, 바이러스성 간염을 갖는 환자에서 더 높은 혈청 FAS 수준은 염증성 질환과 함께 지방증 또는 지방간염의 존재를 나타낼 수 있다.

추가의 양태에서, 이 대상자의 상승된 FAS 발현은 간에 의한, 및 보다 특히 간 세포에 의한 증가된 발현으로 인한 것이다. 이에 따라, 몇 가지 양태에서, 이 대상자는 검출 가능하거나 측정 가능한 상승된 수준의 발현에 기여하는, FAS 발현의 다른 원인(source)을 갖지 않는다. 증가된 FAS 발현의 대안적인 원인의 비-제한적인 예는 암이나 기타 악성 종양의 사례에서 관찰된다. 이에 따라, 몇 가지 양태에서, 이 대상자는 암이나 악성 종양에 의해 고생하지 않거나, 이들을 갖지 않을 것으로 고려되는 개체이다. 달리 말하면, 이 대상자는 암이 아닌 것으로 진단되거나, 아니면 결정되거나 의심되는 개체이다.

이에 따라, 본 발명의 양태는 대상자의 간에서 상승된 지방산 합성효소(FAS)을 검출하는 방법이다. 이 방법은 암이 아닐 것으로 의심되거나 진단된 대상자로부터의 체액 샘플에서 지방산 합성효소(FAS)의 수준을 검출하거나 측정하는 것을 포함한다. FAS의 상승된 수준은 상기 대상자의 간에서 상승된 FAS를 나타낸다.

본 명세서에 개시된 바와 같이, 샘플에서 FAS의 상승된 수준은 상기 대상자의 간에서 상승된 FAS를 나타낸다. 이론에 구속됨 없이, 그리고 본 발명의 이해를 향상시키기 위해 제공됨 없이, 본 명세서에 기재된 측면 및 양태는 상승된 FAS 발현이, 비-제한적인 예로서 지방증 및 지방간염과 같은 간 병상을 갖는 대상자에서 일어난다는 인식에 부분적으로 기초한다. 그러므로, 간 상태를 갖는 대상자에서, 상승된 FAS 발현의 검출이나 측정이 이 상태의 존재를 나타내는 데 사용될 수 있다. 이에 따라, 이러한 상승된 수준은 대상자에서 상태의 존재의 마커이거나 지시자일 수 있다.

지방증 및 지방간염에서 관찰되는 FAS 발현의 증가는 지방 축적의 원인이 간에서의 새로운 합성으로부터 적어도 일부 기인됨을 나타낸다. 이에 따라, 본 발명은 또한 지방간이나 지방증으로서 알려진 간 상태를, 하나 이상의 간 세포, 간 세포의 호모지네이트 또는 간 세포의 FAS 함유 추출물의 샘플에서 FAS 발현을 검출하거나 측정함으로써, 검출하는 방법을 포함한다. 이 샘플은 비대한 간을 갖는 것으로서 밝혀졌거나 진단된 대상자 및/또는 지방증을 가질 것으로 의심되는 대상자로부터의 것일 수 있다. 이러한 샘플은 이 방법에서 FAS 발현에 기초하여, 지방증을 갖거나 이로 고생하고 있는 대상자를 진단하거나 확인하는 데 사용될 수 있다. 다른 양태에서, 지방증을 갖는 대상자에서 상승된 FAS 수준은 간 생검을 거쳐 확인되지 않은 지방간염의 존재를 나타낼 수 있다. 본 발명의 방법은 당업자가 간 생검과 조합하여 사용되는 동일한 기준에 의해 비-알코올성 지방간염(NASH)과 알코올성 지방간염을 구별할 수 있게 해준다.

본 발명은 지방간염으로 알려진 간 상태를, 간으로부터 방출된 FAS를 검출하거나 측정함으로써, 검출하는 방법을 추가로 포함한다. 몇 가지 양태에서, 이 방 출은 간세포 손상으로 인한 것인데, 이 간 세포 손상은 FAS를 체액, 예를 들면, 혈청 내로 유리시킨다. 이 방법은 체액 중의 상승된 FAS 수준에 기초하여, 지방간염을 갖거나 이로 고생하고 있는 대상자를 진단하거나 확인하기 위한 체액의 샘플의 분석을 포함할 수 있다. 이에 따라, 비-제한적인 한 양태는 지방간염의 존재를 나타내는 상승된 FAS 수준을 검출하거나 측정하기 위한 대상자로부터 혈청의 샘플의 용도를 포함한다. 임의로, 이 방법은 본 명세서에 기재된 바와 같이 하나 이상의 추가의 검정, 예를 들면, 간암이나 지방증의 검출과 조합하여 수행될 수 있다.

관련 측면에서, 본 발명은 간에서의 FAS 발현을 검출하거나 측정하는 방법을 포함한다. 몇 가지 양태에서, 이 방법은 간 세포, 간 세포의 호모지네이트 또는 간 세포의 FAS 함유 추출물을 포함하는 샘플에서 FAS 단백질 또는 이의 단편의 양을 검출하거나 측정하는 것을 포함할 수 있다. 임의로, 이 샘플은 간 생검의 전부 또는 일부, 예를 들면, 바늘 생검이다. 몇 가지 양태에서, 이 샘플은 암의 존재에 대해, 예를 들면, FAS 수준을 검출하기 전에, 면역조직화학 방법에 의해 스크리닝된다. 이 샘플은 임의로 또한 지방증의 존재에 대하여, 조직학적 수단, 예를 들면, 일상적인 헤마톡실린과 에오신 염색에 스크리닝되고, 이어서 분석될 수 있다.

다른 양태에서, 이 방법은 대상자의 체액의 샘플에서 FAS 단백질 또는 이의 단편의 양을 검출하거나 측정하는 것을 포함할 수 있다. 본 명세서에 사용되는 FAS 단백질 단편은 FAS 단백질의 일부로, FAS 단백질의 존재 또는 수준을 나타낸다. 몇 가지 양태에서, 이 단편은, 또한 FAS 단백질을 검출하는 시약에 의해 검출된다.

몇 가지 양태에서, 검출되거나 측정된 FAS 발현의 수준은 간 상태가 없는, 따라서 간 질환 또는 간 병상이 없는 정상 대상자에서의 FAS 발현에 비하여 상승되는 것으로 축정될 수 있다. 다른 양태에서, 이 비교는 FAS의 생리학적 발현이 정상적인 대상자에서 비교될 수 있다.

개시된 방법이 FAS 발현의 수준을 측정하는 것을 포함할 경우, 이 수준은 간 상태를 갖지 않은 대상자에서의 수준에 비해 상승되는 것으로 측정될 수 있다. 이에 의해, 검사받고 있는 대상자가 간 상태, 예를 들면, 간 질환 또는 간 병상을 갖는 것으로 확인될 수 있다. 대안적으로, 이 수준은 간 질환 또는 간 병상을 갖지 않은 대상자에서의 수준에 대하여 이와 동일하고, 따라서 상승되지 않은 것으로 결정될 수 있다. 이것은 검사받고 있는 대상자가 간 상태를 갖지 않은 것으로 확인시켜 준다.

그러므로, 본 발명의 양태는 FAS 발현의 분석에 의해 대상자에서 간 상태, 예를 들면, 간 질환 또는 간 병상의 존재 또는 부재를 확인하는 방법을 포함한다. 이 방법은

i) 간 질환 또는 간 병상을 갖지 않은 대상자에서의 FAS의 수준에 비해 상승된 FAS의 수준은 상기 대상자에서 간 질환의 존재를 확인시켜 주고,

ii) 간 질환 또는 간 병상을 갖지 않은 대상자에서의 FAS의 수준에 비해 이와 동일한 FAS의 수준은 상기 대상자에서 간 질환의 부재를 확인시켜 주는, 상기 대상자로부터의 체액 샘플에서 지방산 합성효소(FAS)를 검출하는 것을 포함한다.

몇 가지 양태에서, 이 대상자는 상승된 FAS 수준을 특징으로 하는 간 질환 또는 간 병상, 예를 들면, 지방간염(비-알코올성 지방간염 또는 알코올성 간염을 포함한다)으로 고생하고 있을 것으로 의심된다. 다른 양태에서, 질환 또는 병상은 상승된 FAS 수준을 특징으로 하지 않는데, 예를 들면, 간 독성; 간의 바이러스 감염 또는 바이러스성 간염; 자가면역성 간염; 잠복성 간경변; 저관류 후의 간 괴사; 및 다른 질환으로부터 기인되는 간염이다. 다른 양태에서, 이 대상자는, 임의로 간경변 증상의 발생 전에, 이 간 질환 또는 간 병상으로 고생하고 있을 것으로 의심된다.

이들 개시된 방법에서는, 이 대상자가 혈청이나 하나 이상의 다른 체액에서 FAS를 상승시키는 하나 이상의 추가의 상태와 동시에 지방간을 갖는 것이 가능하다. FAS의 상승이 간으로부터 존재하는 경우, 이 추가의 상태(들)는 본 명세서에 개시된 바와 같은 간 상태이다. FAS 상승이 간이 아닌 원인으로부터 존재하는 경우, 이때 당업자는 당해 분야에서 공지된 방법, 예를 들면 비-제한적인 예로서 간의 조직학적(또는 조직병리학적) 검사에 의해 지방간 상태를 비-지방 상태와 구별할 수 있다.

질환 또는 병상이 간 독성인 양태에서, 이것은 외인성 약물 또는 화학적 제제에의 대상자의 노출로 인한 것일 수 있다. 몇 가지 경우에, 이 약물 또는 화학적 제제는 테트라사이클린 또는 사염화탄소이다. 대안적으로, 이 질환 또는 병상이 바이러스 감염 또는 바이러스성 간염으로 인한 것일 경우, 이것은 A형, B형, C형 또는 D형 간염으로부터 선택되는 바이러스의 결과일 수 있다. 다른 양태에서, 이 바이러스는 시토메갈로바이러스 또는 헤르페스바이러스이거나, 전신성 또는 국 소성 바이러스 감염이다.

질환 또는 병상이 자가면역 관련 또는 자가면역 기반일 경우, 이것은 전신성 홍반성 낭창, 피부경화증, CREST 증후군 또는 기타 자가면역 질환으로 인한 것일 수 있다. 이 질환 또는 병상이 저관류 후의 간 괴사일 경우, 이것은 심각한 저혈압, 간의 기계적 손상 또는 혈관 이상(vascular compromise)일 수 있다. 대안적으로, 질환 또는 병상은 궤양성 대장염, 크론병, 경화성 담관염 또는 잠복성 간경변으로 인한 것일 수 있다.

추가의 양태에서, 질환 또는 병상은 악성 질환으로부터 간의 국소성 또는 미만성 침윤일 수 있다. 이러한 악성 질환의 비-제한적인 예에는 간세포암종, 백혈병, 림프종 또는 기타 일차적 또는 대사적 악성 종양이 포함된다.

본 명세서에 기재된 바와 같이, 이들 개시된 방법은 FAS 단백질 또는 이의 단편과 결합하는 시약의 사용에 의해 실시될 수 있다. 몇 가지 양태에서, 이 시약은 FAS에 대항하는 항체이며, 예를 들면, 사람 지방산 합성효소(hFAS)에 대항하는 항체이다. 본 명세서에 사용되는 "항체"는 면역글로불린 분자 및 이의 단편을 말하는데, 이들은 특정 항원과 면역학적으로 반응한다. 몇 가지 경우에, 이 항체는 사람의 암 세포로부터의 FAS와 반응할 수 있으며, 한편 비-변형된 세포로부터의 간 FAS와 반응할 수도 있다. 몇 가지 경우에, 단일클론 항체 또는 이의 FAS 결합 단편이 이들 개시된 방법에 사용될 수 있다.

용어 "항체"는 복수의 이러한 분자를 말하며, 단일 유형의 항체의 균질 집단(homogeneous population)으로 한정되지 않는다. 용어 "항체"는 또한 유전자 조 작 형태를 포함하며, 예를 들면, 키메라 항체(예를 들면, 사람화 뮤린 항체(humanized murine antibody)), 헤테로컨쥬게이트 항체(예를 들면, 이중특이성(bispecific) 항체)) 및 재조합 단쇄 Fv 단편(scFv), 및 이황화로 안정화된(disulfide stabilized, dsFv) Fv 단편(참조: 예를 들면, 미국 특허 제5,747,654호). 용어 "항체"는 또한 항체의 항원 결합 형태를 포함한다(예를 들면, Fab', F(ab')2, Fab, Fv 및 rIgG. 참조: Pierce Catalog and Handbook, 1994-1995 (Pierce Chemical Co., Rockford, III)). 용어 "안티-hFAS"는 hFAS에 대항하여 발생되는 항체를 말한다.

본 명세서에 기재된 바와 같은 FAS 또는 hFAS와 면역학적으로 반응하는 항체는 공지된 방법, 예를 들면 FAS 또는 hFAS 폴리펩타이드에 의한 항체 생성 동물의 면역화에 의해 발생될 수 있다. 단일클론 항체는 당업자가 잘 알고 있는 다양한 기술에 의해 수득될 수 있다. 이러한 단일클론 항체를 제조하기 위한 기술에 대한 기재는, 예를 들면, 문헌[참조: Stites, et al. (eds.) BASIC AND CLINICAL IMMUNOLOGY (4TH ED.), Lange Medical Publications, Los Altos, Calif.; Harlow & Lane, supra; Goding, MONOCLONAL ANTIBODIES: PRINCIPLES AND PRACTICE (2D ED.), Academic Press, New York, N.Y. (1986); Kohler & Milstein, Nature 256:495497 (1975); and Chowdhury, P. S., et al. Mol. Immunol. 34:9 (1997)]에서 찾아볼 수 있고, 이들은 단일클론 항체를 발생시키는 비-제한적인 하나의 방법을 논의한다.

단일클론 항체를 제조하는 방법에는 원하는 면역원(immnunogen) - 이 경우에는 FAS 폴리펩티드 - 을 암호화하는 핵산 서열을 갖는 동물의 면역화가 포함된다. 이 기술은 단백질-기반 면역화에 비하여 2가지 이상의 이점을 갖는다: 단백질 정제를 위한 필요성의 회피; 및 면역원의 적절한 전사 후 변형(post-translational modification)의 증가된 가능성.

몇 가지 양태에서, 이 항체는 FAS 단백질 또는 이의 단편에 "특이적인" 또는 이들과 "특이적으로 면역반응하는" 것으로서 언급될 수 있다. 이들 용어는 FAS, 예를 들면, 사람 FAS 또는 이의 단편에 결합하는 반응에서 항체가 반응하는 능력을 말한다. 이 반응은 다른 단백질, 세포 또는 물질의 존재 시에 FAS의 존재 또는 양을 결정할 수 있다. 숙련된 실무자에 의해 요구되는 바와 같은 검정 조건 하에서(본 명세서에 개시된 비-제한적인 조건을 포함함), 이 항체는 우선적으로 FAS에 결합하며, 샘플 중의 다른 인자들과는 유의하거나 검출 가능한 방법으로 결합하지 않는다. 본 발명의 비-제한적인 양태는 이 항체 또는 이의 대안적인 형태가 임의로 결합하여 신호를 생성하는 상태를 이용하는데, 이 신호는 적어도 2회, 3회, 4회, 5회, 6회, 7회, 8회, 9회 또는 적어도 10회 내지 100회의 배경 신호 또는 배경 노이즈이다. 배경 신호 또는 배경 노이즈는 다른 단백질 또는 생물학적 물질과의 낮은 수준의 교차 반응성(cross reactivity)을 포함할 수 있다.

본 발명의 FAS 특이적 항체의 대안적인 형태는 당업자들에게 공지된 방법에 의해 용이하게 생성될 수 있다. 항체의 항원 결합 단편을 생성하는 능력은 공지되어 있으며, 본 명세서에 개시된 바와 같이 사용하기 위한 2가의 F(ab')2 및 1가의 Fab 단편을 생성하는 데 이용될 수 있다. 본 명세서에 사용되는 "Fab"는 적어도 기능적으로 완전한 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체의 이중쇄 결합 단편을 말한다. 추가로, 항체의 하이브리드화, 키메라화, 변형(altered), 재조합(단쇄를 포함한다) 또는 사람화 형태를 제조하는 방법이 또한 당업자에게 공지되어 있다. 이들 항체 형태는 본 명세서에 개시된 항체 및 단일클론 항체의 유도체인 것으로 고려될 수 있다.

몇 가지 양태에서, 대안적인 형태는 "단쇄 Fv" 또는 "scFv"이며, 이는 통상적인 2-쇄 항체(two chain antibody)의 중쇄 및 경쇄가 결합되어 단일 결합 부위를 갖는 하나의 쇄를 형성하고 있는 항체를 말한다. 통상적으로, 링커 펩타이드가 2개의 쇄 사이에 위치하여, 활성 결합 부위를 생성하기 위한 가변 영역의 적절한 폴딩 및 위치 결정을 가능하게 한다. 용어 "링커 펩타이드"는 항체 결합 단편(예를 들면, Fv 단편) 내의 폴리펩타이드 쇄를 말하는데, 이것은 가변 중쇄를 가변 경쇄에 간접적으로 부착시키는 역할을 한다.

더욱 일반적으로, "링커"는 항체를 다른 분자에 결합시키는 데 사용되는 분자이다. 링커는 항체와 나머지 분자 둘 다에 공유 결합을 형성할 수 있다. 적합한 링커는 당업자에게 공지되어 있으며, 이에는 직쇄 또는 분지쇄 탄소 링커, 헤테로 사이클릭 탄소 링커 또는 펩타이드 링커가 포함되지만, 이로 한정되지 않는다. 항체 및 다른 분자가 폴리펩타이드일 경우, 이들 링커는 이들의 사이드 그룹을 통하여(예를 들어, 시스테인에의 이황화 결합을 통하여) 구성 아미노산에 결합될 수 있다. 대안적으로, 이들 링커는 말단 아미노산의 알파 탄소 아미노 그룹 및 카르복시 그룹에 결합될 것이다.

추가의 유도체 형태에는 본 발명의 항체 및 이들의 대안적인 형태가 포함되 는데, 이러한 대안적인 형태는 다른 화학적 잔기들에 컨쥬게이트되어 있는 것이다. 비-제한적인 예에는 표지된 항체 또는 이의 대안적인 형태가 포함된다. 용어 "표지", "검출 가능하게 표지된" 또는 "검출 가능한 마커로 표지된"은 "표지된" 분자의 존재를 나타내기 위한, (직접 또는 간접적으로) 검출될 수 있는 항체 조성물을 말한다. 이 검출은 정량적으로 또는 정성적으로 수행될 수 있다. 이에 따라, 표지는 이로 표지된 분자의 존재를 나타내는 검출 가능한 신호를 만들어내며, 본 발명의 표지된 항체는 당해 표지에 의해 검출될 수 있다. 적합한 표지에는 결합 쌍의 하나의 구성원(예를 들면, 비오딘-아비딘 또는 비오틴-스트레파비딘 결합 쌍에서 비오틴), 방사성 동위원소, 발색단, 효소(예를 들면, 양고추냉이 과산화효소(horse radish peroxidase), 알칼리 포스파타제 및 ELISA에서 일반적으로 사용되는 기타 물질), 기질, 염료, 형광 분자(예를 들면, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 텍사스 레드, 로다민 및 녹색 형광 단백질 등), 화학발광 잔기, 자기 입자 또는 비드, 생물형광 잔기, 열량측정 표지, 예를 들면, 콜로이드 금 등이 포함된다. 그러므로, 표지는 분광학적, 광화학적, 생화학적, 면역화학적, 전기적, 광학적 또는 화학적 수단에 의해 직접 또는 간접적으로 검출 가능한 임의의 조성물이다. 몇 가지 양태에서, 이 표지는 시각적 검사에 의해, 예를 들면, 맨눈으로 검출될 수 있는 가시적인 신호를 만들어낸다.

이러한 표지들을 검출하기 위한 수단은 당업자에게 공지되어 있다. 예를 들면, 방사성 표지는 사진 필름 또는 신틸레이션 계수기를 사용하여 검출될 수 있으며, 형광 마커는 광검출기를 사용하여 방출된 조명을 검출하는 것으로 검출될 수 있다. 효소 표지는 통상적으로 효소에 기질을 제공하고, 기질 상의 효소의 작용에 의해 생성된 반응 생성물을 검출함으로써 검출되고, 비색 표지는 착색된 표지를 간단히 시각화함으로써 검출된다.

본 발명의 항체 및 이들의 대안적인 형태는 또한 공지된 방법 및 수단에 의해 고상 지지체에 컨쥬게이트될 수 있는데, 이러한 고상 지지체는, 예를 들면, 유리, 플라스틱, 합성막이지만, 이로 한정되지 않는다. 다른 비-제한적인 예에는 비드, 입자, 딥스틱, 섬유, 필터, 페트리 접시, ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay, 효소-결합 면역흡수 검정) 플레이트, 마이크로타이터 플레이트, 실란 또는 규산염 지지체, 예를 들면, 유리 슬라이드, 및 접시, 웰 또는 용기, 뿐만 아니라 이들의 사이드가 포함된다. 항체의 이러한 고정된 형태는 본 명세서에 개시된 검출 방법에 사용될 수 있다.

본 발명의 항체 및 이들의 대안적인 형태는 또한 조성물로 제형화될 수 있다. 이들 조성물은 FAS 또는 이의 단편을 검출하기 위한 하나 이상의 다른 시약을 추가로 포함할 수 있다. 비-제한적인 예에는 동종(cognate)의 FAS에 결합된 항체의 복합체 및 항체 기반 검출 방법에 사용하는 다른 시약과 항체의 조합이 포함된다. 다른 예에는 다른 FAS 결합 항체 또는 검출 제제와의 혼합물이 포함된다. 이들 항체 및 이들의 대안적인 형태와 다른 검출 제제의 조합은 또한 FAS를 검출하는 데 사용되는 제조 용품, 예를 들면, 검사 장치의 일부일 수 있다.

FAS 또는 이의 단편을 검출하거나 측정하는 데 사용되는 방법은 디자인에 의해 제한되지 않는다. 비-제한적인 예에는 본 발명의 항체, 및 본 명세서에 기재된 바와 같은 이들의 대안적인 형태를 이용하는 방법, 및 웨스턴 블로팅 또는 다른 면역블로팅, ELISA, 측방 유동 장치(lateral flow device), 샌드위치 검정, 현미경법에 의한 시각적 관찰, 경쟁적 및 비-경쟁적 면역검정, 면역효소 검정, 면역형광, 면역자기 선별, 및 유세포측정(flow cytometry) (다염성(polychromatic) 유세포측정에 의한 검출을 포함한다)의 원리에 기초한 방법이 포함된다. 추가의 면역검정 포맷은 문헌[참조: Harlow and Lane (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Publications, New York]에 기재되어 있다. 본 발명의 방법은 본 명세서에 기재된 바와 같이, 샘플 또는 "검사 샘플(test sample)"에서 FAS의 존재 또는 부재를 정성적으로 또는 정량적으로 검출하거나 측정하는 데 사용된다.

본 명세서에 사용되는 "샘플" 또는 "검사 샘플"은 검출 가능한 신호로서 상승된 FAS 또는 상승된 FAS를 포함하는 상태를 가질 것으로 의심되는 개개인으로부터 분리된 샘플을 말한다. 대안적으로, 이들 용어는 본 발명의 검출 방법에서 대조군으로서 사용하거나, 본 발명의 검출 방법에서 FAS의 존재를 확증하거나 이의 양을 정량하는 데 사용하기 위한 FAS, 예를 들면, 사람 FAS를 함유하는 것으로 알려진 샘플을 말한다. 이러한 샘플은 임의의 적절한 수단에 의해 수집될 수 있으며, 이러한 수단에는, 샘플 함유 세포인 경우의 생검 및 바늘 생검, 및 샘플 함유 혈청인 경우의 혈액 수집이 포함된다. 본 발명의 샘플은 또한 비-제한적인 예로서 간 세포의 호모지네이트 또는 추출물일 수 있다. 샘플은 또한 혈청의 희석액, 예를 들면, 검정하기 전에 샘플 희석제를 이용한 희석액일 수 있다. 이 희석제는 당업자에 의해 요구되는 바와 같은 임의의 적합한 용매일 수 있다.

한 양태에서, 본 발명의 방법은 FAS 또는 이의 단편을 결합시켜, 이들 간에 복합체를 형성하는 포획 시약(capture reagent)의 사용에 기초한다. 이 포획 시약은 본 명세서에 기재된 바와 같이, 모노클론 항체 또는 이의 대안적인 형태일 수 있다. 대안적으로, 이 시약은 FAS와 결합하는 다른 항체일 수 있으며, 이에는 복수의 FAS 및 다른 세포 성분들과 결합하는 폴리클론 항체 또는 재조합 항체가 포함되지만, 이로 한정되지 않는다. 이 포획 시약은, 본 발명의 항체에 대하여 본 명세서에 기재된 바와 같이, 고상 지지체 상에, 임의로 본 발명의 샘플과 접촉하기 전에, 고정될 수 있다. 물론, 항체 단독이 아닌 FAS 단백질과 FAS 특이적 항체의 복합체와 결합하는 포획 시약이 또한 본 발명의 실시에서 사용될 수 있다.

포획 시약을 함께 사용하든 않든 간에, 본 발명은 또한 FAS 단백질 또는 이의 단편을 결합시켜, 직접적으로 또는 간접적으로 이의 존재 또는 양을 나타내는 검출 제제를 포함한다. 이 검출 제제는 FAS 단백질 또는 이들의 단편과 결합하는 본 발명의 항체 또는 이의 대안적인 형태일 수 있다. 결합 시에, 이 검출 제제는 이의 결합 파트너와 결합된 복합체를 형성한다. 이 검출 제제는 동종의 결합 파트너의 존재 또는 양, 이에 따라 FAS 단백질 또는 이들의 단편이 검출 제제의 결합 후에 표지에 의해 신호화되도록 검출 가능하게 표지될 수 있다. 대안적으로, 이 검출 제제는 검출 가능하게 표지된 2차 제제에 이 자체가 결합된다.

포획 시약와 조합하여 사용될 경우, 당해 시약, FAS 단백질 또는 이의 단편 및 검출 제제를 포함하는 샌드위치 복합체가 형성된다. 이 샌드위치 복합체는 포획 시약와 FAS 단백질 또는 이의 단편을 포함하는 복합체의 형성이 선행될 수 있으 며, 이 복합체가 검출 제제에 노출되어 샌드위치 복합체가 형성한다. 대안적으로, 샌드위치 복합체는 검출 시약과 FAS 단백질 또는 이들의 단편을 포함하는 복합체의 형성이 선행될 수 있으며, 이어서 이 복합체가 포획 시약에 노출되어 샌드위치 복합체를 형성한다. 샌드위치 복합체, 뿐만 아니라 다른 포맷의 특이성이 포획 시약이나 검출 시약 중 어느 하나, 또는 둘 다에 의해 도입될 수 있다.

본 발명의 양태는 포획 시약 및 검출 제제의 하기 조합의 사용을 포함한다:

FAS 단백질 또는 이의 단편과 결합하는 폴리클론 항체 및 FAS 단백질 또는 이의 단편과 결합하는 모노클론 항체;

FAS 단백질 또는 이의 단편을 포함하는 복합체와 결합하는 폴리클론 항체 및 FAS 단백질 또는 이의 단편과 결합하는 모노클론 항체;

FAS 단백질 또는 이의 단편과 결합하는 모노클론 항체 및 FAS 단백질 또는 이의 단편과 결합하는 폴리클론 항체;

FAS 단백질 또는 이의 단편과 결합하는 모노클론 항체 및 FAS 단백질 또는 이의 단편을 포함하는 복합체와 결합하는 폴리클론 항체; 및

FAS 단백질 또는 이의 단편과 결합하는 모노클론 항체 및 FAS 단백질 또는 이의 단편과 결합하는 모노클론 항체.

본 발명의 방법은 또한 양태로서 경쟁적 결합 검정(competitive binding assay)을 포함한다. 이들은 본 명세서에 기재된 바와 같고, 당해 기술분야에서 공지된 경쟁적 검정 방법과 유사한, 검출 제제 및/또는 포획 시약에 결합하기 위해 경쟁하는 FAS 단백질 또는 이의 단편의 표지된 형태의 사용을 포함한다. 본 발명 에 의해 제공되는 방법은 또한 전체적으로 또는 부분적으로 자동화될 수 있다.

본 발명의 방법에서 사용하는 재료는 공지된 절차에 따라 생성되는 키트의 제조에 이상적으로 적합하다. 본 발명은 본 명세서에 기재된 샘플에서 FAS 단백질 또는 이의 단편을 검출 및/또는 정량하기 위한 제제를 포함하는 키트를 포함한다. 이러한 키트는 이들 제제 및/또는 시약과 함께, 본 발명의 방법에 있어서 키트의 용도 또는 키트의 적합성에 관련된 확인용 명세, 표지 또는 사용설명서를 임의로 포함한다. 이러한 키트는 본 명세서에서 이용되는 하나 이상의 다양한 제제 및/또는 시약(임의로, 농축된 형태로) - 예를 들면, 검출 제제 및/또는 미리-고정된 형태의 포획 시약을 포함한다 - 을 각각마다 갖는 용기들을 구비할 수 있다. 사용설명서 또는 시약 식별자(identifier)의 세트가 또한 통상적으로 포함될 것이다. 다른 예시적인 키트는 이들 개시된 방법(들)의 실시를 위하여 장치 또는 고상 지지체를 포함하며, 예를 들면, 측방 유동 장치, 테스트 스트립, 비드, 막 또는 컨테이너의 코팅된 표면, 접시 또는 웰을 포함하지만, 이로 한정되지 않는다.

이들 키트는 또한 임의로 대조군 샘플, 예를 들면 면역반응성 FAS 단백질 또는 이의 단편의 공지의 샘플을 포함할 수 있다. 대조군은, 샘플을 희석하는 데 사용되고 외부 대조군으로서 사용되거나 실제의 샘플에 첨가되고 내부 내조군으로서 사용되는, 임의로, 검사받고 있는 샘플 유형과 관련하여 검정의 감수성을 결정하는 데 사용하기 위한, 샘플 희석제에 의한 희석액에 대하여 공지된 양으로 존재할 수 있다. 이들 키트는 단일 검정 또는 다중 검정을 위한 재료를 포함할 수 있다.

그러므로, 본 발명의 양태는 FAS 결합 항체 또는 이의 FAS 결합 단편과 FAS 단백질 또는 이의 단편 사이의 복합체를 형성하고, 이어서 검출하거나 측정하는 것을 포함하는 방법을 포함한다. 몇 가지 양태에서, 이 복합체는 FAS 결합 항체 또는 이의 FAS 결합 단편을 FAS 단백질 또는 이의 단편을 함유할 수 있는 샘플과 접촉함으로써 형성될 수 있다. 이러한 접촉은 만약 FAS가 이 샘플 내에 존재할 경우, 복합체의 형성을 허용하는 조건 하에서 일어난다. 본 명세서에 개시된 바와 같이, 이 샘플은 간 세포 함유 또는 유래의 샘플이나 샘플의 체액일 수 있다. 추가의 양태에서, 이 샘플은 FAS를 함유하는 양성 대조군일 수 있다.

몇 가지 경우에, 이러한 측정이나 검출은 효소-결합 면역흡수 검정(ELISA) 또는 방사성 면역 검정을 이용하여 수행된다. 대안적으로, 이러한 검출이나 측정은 측방 유동 장치의 사용에 의하는데, 이 장치에서는 위에 기재된 복합체가 측방 유동 장치의 고체 성분 상에 분리될 수 있다.

다른 측면에서, 본 발명은 대상자의 간에서의 지방 축적을 검출하는 방법을 포함한다. 몇 가지 양태에서, 이 방법은 대상자로부터의 하나 이상의 간 세포, 간 세포의 호모지네이트 또는 간 세포의 FAS 함유 추출물을 포함하는 샘플에서 FAS 발현을 검출하거나 측정하는 것을 포함할 수 있다. FAS 발현의 수준은 본 명세서에 기재된 바와 같이 상승되는 것으로 결정될 수 있다. 상승된 수준은 대상자의 간에서 새로 합성된 지방의 축적을 나타내는 데 사용될 수 있다.

추가의 양태에서, 이 방법은 간 염증 및/또는 간 세포 손상을 검출하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 염증 또는 손상의 부재는 지방증의 존재를 나타내며, 반면 염증 또는 손상의 존재는 지방간염을 나타낸다.

추가의 양태에서, 지방 축적의 존재를 나타내는 FAS 발현의 상승된 수준은 또한 총 간 중량의 약 5%를 초과하거나 간 소엽 중의 간 세포가 약 30%를 초과하는 것은 지방 침착물을 갖는다는 것을 나타내는 데 사용될 수 있다.

이들 개시된 방법은 추가의 작용을 포함할 수 있다. 몇 가지 양태에서, 이 추가의 작용은 FAS 발현의 수준을 상기 대상자에게 전달하는 것이다. 다른 양태에서, 이 추가의 작용은 FAS 발현을 검출하거나 측정하는 것에 대한 보상을 요구하거나 받는 것이다.

지금 일반적으로 설명된 본 발명은 예시로서 제공되는 하기 실시예를 참조하여 보다 용이하게 이해될 것이며, 규정되지 않는 한, 본 발명을 한정하고자 하지 않는다.

실시예 1:

지방증, 지방간염 및 FAS 발현 사이의 관계를 조사하기 위해서, 단일클론 안티-사람 FAS 항체를 사용한 면역조직화학을 이용하여 38명의 비만 대상자로부터의 바늘 생검에서 FAS 발현을 연구하였다. 지방증, 지방간염 및 FAS 발현은 증분 0.5로 하여 0-4+에서 반-정량적으로 등급화하였다. 이 데이터의 분석은 지방증 및 FAS 발현은 3개의 카테고리로 가장 잘 분류됨을 밝혔다: 음(-) 또는 약간의 발현을 나타내는 0-0.5+, 경도 내지 중등도의 발현을 나타내는 1.0-2.5+, 그리고 강한 발현을 나타내는 3.0-4.0. 도 2는 이번 연구의 결과를 나타낸다.

도 2의 패널 A는 지방간염과 지방간 사이의 관련성을 비교한다. 예상대로, 지방간을 갖지 않은 환자들(0-0.5+)은 지방간염을 거의 갖지 않으며, 반면 현저한 지방증을 갖는 환자들(3.0-4.0+)은 최고 수준의 지방간염을 갖는다(p<0.0001 (일원분산분석, Prism 4.00 for Windows, GraphPad Software, San Diego California USA, www.graphpad.com)). 이들 연구결과는 지방간과 지방간염 사이에 알려져 있는 관련성과 일치한다(2).

도 2의 패널 B는 지방간(지방증)과 FAS 발현 사이의 관계를 비교한다. 증가하는 지방증과 FAS 발현 사이에 관련성이 있다(p=0.011). 이론에 구속됨 없이, 그리고 본 발명의 이해를 향상시키기 위해 제공됨 없이, 이들 결과는 간에 축적된 지방의 일부 또는 대부분이, 지방 조직으로부터 간으로의 지방산의 동원 및 수송을 나타내기보다는 간 내부에서의 새로운 지방산 합성의 생성물일 수 있음을 시사한다.

도 2의 패널 C는 활성 지방간염에 대하여 FAS 발현을 비교한다. 증가된 FAS 발현과 지방간염의 존재 사이에 강력한 상관관계가 있다(p=0.0003). 이에 따라, 지방간과 유사하게, FAS 발현은 또한 지방간염의 존재와 높게 관련되어 있다. 역시 이론에 구속됨 없이, 그리고 본 발명의 이해를 향상시키기 위해 제공됨 없이, 이들 결과는 지방간염과 FAS의 상승된 혈액 및 혈청 수준 사이에 관계가 있음을 시사한다.

실시예 2:

도 3은 FAS 발현과 지방증, 지방간염 및 간경변의 관련성을 예시하는 일련의 현미경 사진이다. 도 3A는 지방증 또는 지방간염의 증거가 없는 조직학적으로 평범한 간의 포르말린-고정 파라핀-매봉된 간(formalin-fixed paraffin-embedded liver)의 헤마톡실린과 에로신으로 염색된 절편이다. 도 3B에서는, 이 정상 간 생검과 근사한 연속 절편을 안티-사람 FAS 마우스 모노클론 항체를 사용하여 염색하였다. 이 간에서는, 벽돌색으로 염색(화살표)된 것 - 이는 FAS 발현에 상응한다 - 으로 알 수 있는 바와 같이, FAS에 대하여 약간의 반응성이 있었다. 대조적으로, 도 3C는 심각한 지방증을 갖는 간의 헤마톡실린과 에로신으로 염색된 절편이다. 간 세포를 채우는(engorge) 트리글리세라이드 점적(화살표)을 나타내는 커다란 둥근 공간에 주목해야 한다. 이것은 거대소포성(macrovesicular) 지방증의 예이다. 추가로, 작은 공포(vacuole)를 갖는 소수의 세포가 있는데, 이러한 공포는 세포질을 '비누 거품' 외관으로 만들고, 미세소포성(microvesicular) 지방증의 성분임을 나타낸다.

도 3D는 동일 생검에서의 FAS에 대한 면역조직화학을 도시한다. 도 3B에서의 정상 간에 비하여, FAS 발현의 상향-조절을 나타내는, 풍부한 트리글리세라이드를 갖는 세포 중의 FAS에 대한 강한 세포질 염색(화살표)에 주목해야 한다. 지방간염은 도 3E에 도시되어 있다. 거대소포성 지방증이 압도적인 영역 내의 간세포들 가운데에 있는 염증 중심(화살표)에 주목해야 한다.

도 3F에서 FAS에 대한 면역조직화학적 염색은 모든 간세포 중의 FAS에 대하여, 심지어는 염증이 활발한 것들에서조차도 FAS에 대하여 강한 세포질 염색(화살표)을 보여준다. 지방간염을 갖는 환자들은 간경변으로 발병될 수 있다. 도 3G는 지방간염의 상황에서 발병된, 경과된 간경변을 갖는 환자로부터의 헤마톡실린과 에오신으로 염색된 간 생검이다. 간경변의 결절성(nodular) 외관을 가져오는 치밀한 섬유성 반흔화(화살표)에 주목해야 한다. 높은 수준의 FAS 발현이, 도 3H에 나타난 바와 같이 이 경변간(cirrhotic liver)에서 그대로 유지된다.

요약하면, 높은 수준의 FAS 발현은 NASH 환자에서 확정된 간경변으로 발병되는 지방증 및 지방간염과 관련되어 있는 것으로 보인다.

실시예 3:

검출 가능한 순환(circulating) FAS를 갖는 지방증 또는 지방간염 사이의 관계를 결정하기 위해서, FAS를 고도 비만을 위한 배리아트릭(bariatric) 수술을 받고 있는 16명의 환자로부터의 폐기된 수술 전 혈청에서 측정하였다. 추가로, 외과적 간 생검을 또한 이들 환자 중 12명에 대하여 수행하여 지방증 또는 지방간염의 존재를 평가하였다. 모노클론 안티-사람 FAS 샌드위치 ELISA 검정을 이용하여 혈청 FAS 수준을 측정하였다. 20명의 정상 대상자에 비하여, 16명의 비만 환자들이 도 4A에 나타낸 바와 같이 더 높은 수준의 혈청 FAS를 가졌다(3.5±1.17 ng/ml, 비만; 0.17±0.07 ng/ml, 정상; p=0.003, 양방 비대응 t-검정(GraphPad Prism version 4.00 for Windows, GraphPad Software, San Diego California USA, www.graphpad.com)).

수술로부터 간 조직을 입수한 12명의 환자들에 대하여, 지방간염 및 지방증을 지방의 변화, 염증 및 섬유증의 정도에 기초한 0-4+ 반정량적인 스케일을 이용하여 등급화하였다. 증가된 혈청 FAS 수준은 지방간염과 관련되어 있었으며, 지방 증과는 관련되지 않았다(p=0.03, 일방 t-검정, Prism 4.0, Graph Pad Software). 도 4B는 지방간염을 갖지 않는 환자들에 비하여 지방간염을 갖는 환자에서 상승된 혈청 FAS 수준을 그래프로 나타낸 것이다.

혈청 FAS 측정을 한 17명의 환자에 대하여, 일련의 간 기능 검사를 수행하였다. 이들 검사에는 ALT, AST, ALP, 총 빌리루빈, 총 단백질 및 알부민이 포함되었다. 피어슨 상관 검정(Pearsons correlation test)을 이용했을 때, 이들 분석물은 혈청 FAS 값과 어떠한 유의한 상관도 나타내지 않았다. 이는 혈청 FAS 수준이 이번 일련의 일상적인 간 기능 연구로부터 독립하고 있을 가능성이 높음을 시사한다.

특허, 특허 출원 및 공보를 비롯한 본 명세서에 인용된 참고문헌은 앞서 구체적으로 포함되어 있든 아니든 간에 전체적으로 본 명세서에 포함된다.

본 발명이 완전히 제공된 현 시점에서, 본 발명의 정신 및 범위로부터 벗어남 없이, 그리고 부당한 실험 없이 광범위한 등가의 파라미터, 농도 및 조건 내에서 동일하게 수행될 수 있음이 당업자에게 이해될 것이다.

본 발명이 이의 특정 실시형태들과 관련하여 기재되어 있지만, 추가의 변형이 가능함이 이해될 것이다. 본 출원은 일반적으로 본 발명의 원리를 따르고, 본 발명으로부터의 벗어남이, 당해 기술 분야 내의 공지되어 있거나 관습적인 실행 내에 있고, 앞서 설명한 본질적인 특징에 적용될 수 있는 정도를 포함하는 본 발명의 임의의 변형, 사용 또는 개작을 포함하고자 한다.

참조 목록:

Claims

암이 아닐 것으로 의심되거나 진단된 대상자로부터의 체액 샘플에서 지방산 합성효소(FAS)의 수준을 검출하거나 측정하는 것을 포함하고,

여기서, FAS의 상승된 수준은 상기 대상자의 간에서 상승된 FAS를 나타내는, 대상자의 간에서 상승된 지방산 합성효소(FAS)를 검출하는 방법.
제1항에 있어서,

i) 간 질환을 갖지 않은 대상자에서의 FAS의 수준에 비해 상승된 FAS의 수준은 상기 대상자에서 간 질환의 존재를 확인시켜 주고,

ii) 간 질환을 갖지 않은 대상자에서의 FAS의 수준에 비해 이와 동일한 FAS의 수준은 상기 대상자에서 간 질환의 부재를 확인시켜 주는, 상기 대상자에서 간 질환의 존재 또는 부재를 확인하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
제2항에 있어서, 상기 간 질환이, FAS의 상승된 수준을 특징으로 하는 지방간염, 예를 들면, 비-알코올성 지방간염 또는 알코올성 간염이거나;

FAS의 상승된 수준을 특징으로 하지 않는 간 질환, 예를 들면, 간 독성; 간의 바이러스 감염 또는 바이러스성 간염; 자가면역성 간염; 잠복성 간경변(cryptogenic cirrhosis); 저관류 후의 간 괴사; 및 다른 질환으로부터 기인되는 간염인, 방법.
제3항에 있어서,

상기 간 독성이 외인성 약물 또는 화학적 제제, 예를 들면, 테트라사이클린 또는 사염화탄소로의 대상자의 노출로 인한 것이고;

상기 바이러스 감염 또는 바이러스성 간염이 A형, B형, C형 또는 D형 간염으로부터 선택되거나, 시토메갈로바이러스 또는 헤르페스바이러스에 의한 감염으로 인한 것이고;

상기 자가면역성 간염이 상기 대상자에서 전신성 홍반성 낭창, 피부경화증 또는 CREST 증후군으로 인한 것이고;

상기 저관류 후의 간 괴사가 심각한 저혈압, 간의 기계적 손상 또는 혈관 이상(vascular compromise)으로부터 선택되거나;

상기 다른 질환으로부터 기인되는 간염이 궤양성 대장염, 크론병 또는 경화성 담관염으로부터 선택되는, 방법.
제1항 내지 제4항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 대상자가 사람인, 방법.
제1항 내지 제5항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 체액이 혈액 또는 혈청인, 방법.
제1항 내지 제6항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 검출하거나 측정하는 것 이, 상기 샘플 중에 FAS가 존재할 경우, FAS 결합 항체 또는 항체 단편과 FAS 사이의 복합체를 형성하고 검출하거나 측정하는 것을 포함하는, 방법.
제7항에 있어서, 상기 검출하거나 측정하는 것이 ELISA 또는 측방 유동 테스트 스트립(lateral flow test strip)에 의한 것인, 방법.
제1항 내지 제8항 중의 어느 한 항에 있어서, FAS의 수준을 상기 대상자에게 전달하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
제2항 내지 제4항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 대상자가, 임의로 간경변 증상의 발생 전에, 간 질환으로 고생하고 있을 것으로 의심되는, 방법.
대상자로부터의 간 세포를 포함하는 샘플에서 지방산 합성효소(FAS) 발현의 수준을 검출하거나 측정하는 것을 포함하고,

여기서, FAS 발현의 상승된 수준은 상기 대상자의 간에서 상승된 FAS를 나타내는, 대상자의 간에서 상승된 지방산 합성효소(FAS)를 검출하는 방법.
제11항에 있어서,

i) 간 질환을 갖지 않은 대상자에서의 FAS의 수준에 비해 상승된 FAS의 수준은 상기 대상자에서 간 질환의 존재를 확인시켜 주고,

ii) 간 질환을 갖지 않은 대상자에서의 FAS의 수준에 비해 이와 동일한 FAS의 수준은 상기 대상자에서 간 질환의 부재를 확인시켜 주는, 상기 대상자에서 간 질환의 존재 또는 부재를 확인하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
제12항에 있어서, 상기 간 질환이 지방간염(비-알코올성 지방간염 또는 알코올성 간염); 알코올성 간염; 간 독성; 간의 바이러스 감염 또는 바이러스성 간염; 자가면역성 간염; 잠복성 간경변; 저관류 후의 간 괴사; 및 다른 질환으로부터 기인되는 간염으로부터 선택되는, 방법.
제13항에 있어서,

상기 간 독성이 외인성 약물 또는 화학적 제제, 예를 들면, 테트라사이클린 또는 사염화탄소로의 대상자의 노출로 인한 것이고;

상기 바이러스 감염 또는 바이러스성 간염이 A형, B형, C형 또는 D형 간염으로부터 선택되거나, 시토메갈로바이러스 또는 헤르페스바이러스에 의한 감염으로 인한 것이고;

상기 자가면역성 간염이 상기 대상자에서 전신성 홍반성 낭창, 피부경화증 또는 CREST 증후군으로 인한 것이고;

상기 저관류 후의 간 괴사가 심각한 저혈압, 간의 기계적 손상 또는 혈관 이상으로부터 선택되거나;

상기 다른 질환으로부터 기인되는 간염이 궤양성 대장염, 크론병 또는 경화 성 담관염으로부터 선택되는, 방법.
제11항 내지 제14항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 대상자가 사람인, 방법.
제11항 내지 제15항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 체액이 혈액 또는 혈청인, 방법.
제11항 내지 제16항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 검출하거나 측정하는 것이, 상기 샘플 중에 FAS가 존재할 경우, FAS 결합 항체 또는 항체 단편과 FAS 사이의 복합체를 형성하고 검출하거나 측정하는 것을 포함하는, 방법.
제17항에 있어서, 상기 검출하거나 측정하는 것이 ELISA 또는 측방 유동 테스트 스트립에 의한 것인, 방법.
제11항 내지 제18항 중의 어느 한 항에 있어서, FAS의 수준을 상기 대상자에게 전달하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
제12항 내지 제14항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 대상자가, 임의로 간경변 증상의 발생 전에, 간 질환으로 고생하고 있을 것으로 의심되는, 방법.
대상자로부터의 간 세포를 포함하는 샘플에서 지방산 합성효소(FAS) 발현의 수준을 검출하거나 측정하는 것을 포함하고,

여기서, FAS의 상승된 수준은 상기 대상자의 간에서 새로 합성되는 지방의 축적을 나타내는, 대상자의 간에서 지방 축적을 검출하는 방법.
제21항에 있어서, 간 염증의 검출을 추가로 포함하고, 여기서, 염증의 부재는 지방증의 존재를 나타내고, 염증의 존재는 지방간염의 존재를 나타내는, 방법.
제21항에 있어서, 상기 FAS 발현의 수준이, 총 간 중량의 약 5%를 초과하거나 간 소엽 중의 간 세포의 약 30%를 초과하는 것은 지방 침착물이 있음을 나타내는, 방법.