KR20090104040A

KR20090104040A - 비특이적 면역자극제

Info

Publication number: KR20090104040A
Application number: KR1020097015075A
Authority: KR
Inventors: 크리스챤 모세르; 안드레아스 카메르; 리날도 주르브리겐
Original assignee: 페비온 바이오테크 아게
Priority date: 2006-12-29
Filing date: 2007-12-31
Publication date: 2009-10-05
Also published as: EA016033B1; ZA200904461B; CN101616687B; EP1938835A1; AU2007341541B2; US20120164181A1; US20110142912A1; CN101616687A; ES2365988T3; EA200970651A1; ATE513562T1; WO2008080628A1; EP2117590B1; EP2117590A1; CA2674042A1; AU2007341541A1; CA2674042C

Abstract

본 발명은 약물의 제조를 위한 지질 소포체의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한 이를 필요로 하는 동물에게 그러한 지질 소포체를 투여하는 것을 포함하는 질환 또는 장애를 치료 및/또는 예방하는 방법에 관한 것이다.

면역반응, 약물, 지질막, 바이러스, 외피 단백질, 소포체

Description

비특이적 면역자극제{NON-SPECIFIC IMMUNOSTIMULATING AGENTS}

본 발명은 질환 또는 장애에 대한 동물의 면역반응을 비-특이적으로 자극하기 위한 약물의 제조용 지질 소포체의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한 이를 필요로 하는 동물에게 지질 소포체를 투여하는 것을 포함하는, 동물의 면역반응을 비-특이적으로 자극하는, 즉 질환 또는 장애를 치료, 제거 및/또는 예방하는 방법에 관한 것이다. 상기 지질 소포체는 그의 지질막 내에, 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질을 포함한다.

신체 면역체계의 비-특이적 자극에 의해 질환에 대한, 특히 감염성 질환에 대한 전신 내성이 증가하는 것이 바람직하다. 동시에 종양성 질환의 억제 및 제거를 위한 면역체계의 중요성이 명백해지고 일반적으로 승인되고 있다. 그러나 전신성 면역자극제의 작용 기작은 알려져 있지 않고 빈번한 복합 조성 및 다른 장기 체계로의 다중 감염으로 인해, 추측에 머물고 있다. 선천적 방어 기작과 적응적 면역성 사이의 상호작용에 대한 증가하는 이해가 타당한 설명을 제공하고 있다. 구체적으로, 1990년대 위험 신호에 대한 감지 시스템으로 톨-유사 수용체(toll-like receptors)의 발견은 질환에 대한 증가된 내성의 타당한 -그러나 불완전한- 설명을 제공하는 침입하는 미생물에 대해 매우 복잡하고, 통합되며 다중-중복되는 방어 기작을 다루는 새로운 분야의 연구를 개시하게 하였다.

일반적으로, 면역체계는 두 부류로 구분될 수 있다: 선천적 면역체계 및 적응적 면역체계. 이름에서 제시하는 바와 같이, 선천적 면역체계는 태어날 때 존재하고, 병원체에 대해 첫 번째 방어를 제공하지만, 아직 구체적으로 임의의 한 병원체를 중화시키도록 작용하는 능력은 가지고 있지 않다. 이러한 이유로, 선천적 면역체계는 때로 비특이적 면역체계로도 언급되는데, 어떠한 개별적인 세포 클론도 그의 면역반응을 발휘할 필요가 없기 때문에, 비-클론 방어 기작으로도 기술된다. 선천적 면역체계가 피부 및 그 자체 본래 표피의 산성 코팅과 같은 구조를 포함하는 반면, 이는 또한 인터페론 및 인터류킨과 같은 비특이적 매개체뿐만 아니라 보체 체계, 항미생물 효소 체계와 같은 보다 복잡한 실체를 포함한다. 전신성 염증 반응은 후자와 관련이 있는데, 이는 또한 선천적 면역에 한 역할을 담당한다. 세포 수준에서, 그리고 또한 염증 반응에 부분적으로 관여하는, 선천적 면역체계로 과립구, 단핵구-대식세포 체계 및 천연 살해 세포(NK)를 포함하는데, 후자는 비특이적 선천적 면역반응과 특이적 적응적 면역반응 사이의 관계 일부분을 구성한다. 선천적 면역반응의 구별되는 특징들 중의 하나는 숙주의 보다 특이적인 적응적 면역반응이 최초로 활성화되거나 발생되는 초기 단계 동안에 병원체에 대한 초기 방어를 제공하는, 병원체와 싸우는 그의 능력이 상당히 신속하다는 것이다.

특이적, 또는 적응적 면역반응은 활성화되거나 발현되는데 보다 시간을 요구 하고, 따라서 선천적 면역반응 뒤에 일어난다. 적응적 면역반응 과정에서, 숙주는 병원체와의 과거 또는 새로운 경험, 또는 이들의 조합에 근거하여 이 병원체와 싸우게 된다. 적응적 면역반응 자체는 세포성(즉, 세포독성 T 세포(CTCs)와 같은 특이적 세포 클론의 세포독성 활성과 연관됨), 또는 체액성(즉, 특이적 B 세포 클론에 의해 생성되는 항체와 연관됨), 또는 이들의 조합일 수 있으며, 적응적 면역반응의 어느 부분 -세포성 또는 체액성-의 우위는 분비되는 사이토카인의 특정 혼합물에 의해 부분적으로 결정된다. 말초 조직으로부터 림프 기관으로의 항원 제시 세포(APCs)의 이동은 특이적 면역반응을 촉발하고, 이들 각각의 클론 집단이 요구되는 만큼 확장되는, T 및 B 림프구 모두에 의해 실행되는 이후에 기억 기능을 또한 담당한다. 항원에의 초기 노출 시 발생하는 이 기억 기능은 후기에 동일한 항원에 대한 특이적 방어를 갖추기 위하여 적응적 면역체계에 의해 요구되는 반응 시간을 현저하게 감소시킨다.

선천적 및 적응적 면역성 사이의 특징 및 관계를 보여주는 모식도를 도 6에 나타내었다.

많은 가능한 면역 증강제들이 문헌에 기술되어 있는데, 작은 합성 분자들(폴리 I.C, 레바미솔)부터 살아있는 미생물(코리네박테리움 파르븀, Corynebacterium parvum)까지의 범위로, 세균성 성분들과 광물유(프로인트 항원보강제) 또는 유기염(수산화알루미늄 및 수산화마그네슘/인산염)의 복합 혼합물, 및 보다 최근에는, 면역성을 조절하는 재조합 단백질(예컨대, 사이토카인, 세포 수용체에 대한 항체)을 포함한다. 이러한 물질들은 백신에 대한 항원보강제, 즉 백신의 항원 성분과 관련된 질환에 대하여 면역성/내성을 증강시키는 목적을 위해 특이적 항원과 병용하여 주로 사용되고 있다. 수많은 공지된 면역자극제들 중에서, 단지 매우 소수만이 실제로 인간 백신에 대한 항원보강제로 승인되었다(명반염, 바이로솜, MF59, RC529). 대부분의 접근법은, 해결되지 못한 관련된 조절적(안정성, 독성) 및 경제적(생산 원가, 제품 프로파일) 측면이 야기되면서 순수한 전임상 연구를 벗어나 진행되지 못하였다. 다른 항원보강제들이 임상 개발의 다양한 단계 중에 있거나(예컨대, 세균성 독소, 사포닌 유도체, LPS 및 지질 A 유도체, CpGs, 나노입자) 수의학적 용도로만 승인되었다(예컨대, ISCOMS, GERBU). 자극적 효과와 부반응(reactogenicity), 그로써 유해한 반응을 야기하는 능력 사이에서 허용가능한 균형을 이루게 하는 것이 관건이다. 새롭게 개발된 항원보강제들은 예기치 못한 부작용, 예를 들면 비강 인플루엔자 백신에 대한 항원보강제로서 대장균(E. coli) 유래 열 불안정성 독소에서 관찰되는 바와 같은, 부작용에 대한 부가적인 위험을 감내한다.

특정한 백신에 대해 승인된 항원보강제의 어느 것도 비-특이적 방식, 예컨대, 스탠드-단독 제품(stand-alone product)으로 질환 내성을 촉진시키는데 사용되지 못한다.

점점 증가하는 기능성 식품 또는 식품 보조 제품들이 과학적 증거보다는 주로 심원한(esoteric) 주장을 근거로 하여, 질환 내성이 증가하였음을 주장하면서 시장에 등장하였다. 이러한 제품은 수퍼마켓에서 아무런 제약 없이 팔리고 있으며, 이들의 적용 경로는 보통 경구이다. 이들의 조성은 잘-정립된 비타민 또는 미 량 원소 칵테일부터 유기 물질(식물, 미생물, 동물) 유래의 복잡한 추출물까지 매우 다양하고, 살아있는 미생물을 포함하는 소위 생균제(probiotics)(예컨대, L. 카세이 디펜시스 함유 악티멜(등록상표))를 포함한다.

예를 들면, 브론코-박솜(Broncho-Vaxom)(등록상표), 뷰칼린(Buccalin)(등록상표) 및 유로-박솜(Uro-Vaxom)(등록상표)과 같은 다른 범주의 백신-유사 제품들이 의학 제품으로 등록되었다. 이들은 처방전이 필요 없는(over the counter, "OTC") 약물로서 또는 처방된 약물로서 자유로이 이용가능하고, 예컨대, 호흡기 및 하부 요로의 감염의 예방 및 치료를 위하여, 정확한 지시와 함께 판매된다. 이들은 주로 개별적인 질환과 관련되는 불활성화된 세균 형태의 특정 칵테일로 이루어진다. "실제" 예방적 백신과는 명백히 다르게, 상기 치료 일정은 질환 예방 및 치료 모두를 위하여 연장된 기간 동안에 매일 경구 적용을 예견한다. 작용 방식이 여전히 불명확하다고 하더라도, 이 제품들은 전임상 모델에서 보호 효과를 나타내고 인간에게서 입증된 효과를 갖는다(T 세포 활성, 증가된 인터페론 반응 및 IgA 수준).

베이파문(Baypamun)(등록상표)/질렉시스(Zylexis)(등록상표)(Pfizer)는 수의학적 용도를 위한 주사가능한 면역자극제의 일예이다. 이 제품은 활성 성분으로서 불활성화된 양(ovine) 파라폭스바이러스를 함유하고 애완동물과 농장 동물에게서 감염성 또는 스트레스-유도성 질환의 예방 및 치료에 권유된다. 제어(Controlled) 연구는 몇몇 종(가축, 말, 고양이, 개, 돼지)에서 임상 증상이 감소하는 수준으로 효과를 나타내었다. 비특이적 면역자극 효과는 사이토카인, 특히 인터페론의 유도로 인한 것이다. 제품 설명서에 따르면, 면역자극 효과는 주사 후 몇 시간 내에 개시되어 14일까지 지속된다. 이러한 동력학은 특정한 면역 예방이 효과적이기에는 너무 늦은 상황에서 감염된 집단의 치료에 이상적이다. 동물에서 관찰된 긍정적인 효과는 암 환자에게는 대부분, 보건 당국의 권고에 반하는 것일지라도, 인간에게서 질렉시스의 허가사항 외 사용(off-label use)을 유도하고 있다.

인터페론은 병원체-특이적이지 않은, 적어도 부분적으로 효과적인 항바이러스 치료(바이러스 감염)로서 광범위하게 사용된다. 재조합 단백질은 정맥내로 투여되어 바이러스 감염에 대한 천연적인 비특이적 반응의 많은 효과기 기능들 중의 하나를 증강/모방한다. 그러나 인터페론의 사용은 심각한 부작용, 비싼 가격 및 긴 치료기간으로 인해 제한적이다.

합성 이미다조티아졸 유도체인 레바미솔(Levamisole)(에르가미솔(Ergamisol)(등록상표))은 결장암의 치료를 위해 플루오로우라실과 병용하여 사용되는 항생제 약물이다. 이는 원래 인간과 동물 모두에게서 구충제로 개발되어 사용되었다. 벌레에 대한 이의 작용 기작은 문서로 충분히 입증되어 있다. 결장암을 치료하는 기작은 문서로 입증되어 있기는 하지만 완전히 명백하지는 않다. 레바미솔은 면역자극 특성을 갖는 것으로 나타났다. 이는 또한 흑색종 및 두경부암을 치료하는데 드물게 사용된다.

국제특허공개 제WO2006/085983호는 면역원에 대한 면역반응을 증강시키기 위한 바이러스 항원보강제의 사용을 교시한다. 교시된 바이러스 항원보강제는 복제되지만, 변형되거나 비변형된 형태로 바이러스 게놈을 포함하는 증식-결손 바이러스 입자이다. 비-특이적 면역자극제로서 이러한 바이러스 입자를 사용하는 단점은 바이러스 게놈의 적어도 일부분이 예측할 수 없는 효과를 가지고 환자에게 도입되어야만 한다는 것이다. 나아가, 환자에게 도입된 바이러스 입자는 복제-적격(replication-competent)이어야만 한다.

바이로솜은 in vitro 과정에 의해 제조된, 지질과 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질로 이루어지는 반-합성 복합체이다. 상기 지질은 달걀 또는 식물로부터 정제되거나 합성적으로 제조되고, 지질 분획은 외피 단백질을 제공하는 바이러스로부터 기원한다. 본질적으로, 바이로솜은 하나 이상의 인플루엔자 바이러스로부터 유래되고, 근원 바이러스(들)의 유전적 물질을 포함하는 뉴클레오캡시드가 결여된, 재구성된, 빈 바이러스 외피를 나타낸다. 바이로솜의 일 유형은 그의 지지막 내에 함몰되는 표적 세포와 인플루엔자의 융합에 중요한 역할을 담당하는 인플루엔자 외피 단백질인, 인플루엔자 헤마글루티닌("HA")을 보유하는, 면역강화 재구성된 인플루엔자 바이로솜("IRIV")이다. 바이로솜은 복제할 수는 없지만 순수한 융합-활성 소포(vesicle)이다. 이러한 이유로, 리포솜과 같이, 바이로솜은 전형적으로 표적 세포에 물질(예컨대, 면역원성 분자, 약물 및/또는 유전자)을 전달하기 위하여 사용된다. 그러나 리포솜과는 달리, 바이로솜은 바이러스 외피 단백질, 예를 들어 IRIV의 경우에는 HA에 의해 촉발되는 바이로솜 내용물의 세포내 분비에 의해 수반되는 세포 내로의 효율적인 유입이라는 이점을 제공한다. 더욱이, 이들의 막 내로의 활성 바이러스 외피 단백질의 도입으로 인해, 바이로솜은 세포에 의해 유입된 후에 즉시 세포질 내로 그들의 내용물을 분비하고, 그로 인해 엔도솜의 산성 환경 내에서 치료적 물질의 분해를 방지한다(미국특허 제6040167호).

바이러스-유사 입자(VLPs)와는 달리, 바이로솜은 적당한 발현 시스템 내에서 단백질의 재조합 발현 시 자발적으로 형성하지는 않지만 제어된 in vitro 과정의 결과로서, 이는 바이로솜의 대규모 산업적 생산을 가능케 한다. 그 결과로 얻은 바이로솜은 주로 합성 지질로 이루어진 지질 이중층을 포함하는 반면, VLPs는 세포성 지질로 만들어지고, 대부분의 경우에, 이중층을 형성하지 않는다. 또한, 바이로솜의 경우 단일 성분, 즉 지질, 바이러스 단백질의 함량이 최종 생성물에 대한 요구에 따라 달라질 수 있다.

바이로솜은 특정 질환 또는 장애와 관련된 항원에 대한 면역반응을 자극하는 것이 바람직한, 예방접종 분야에서 특히 유용하였다. 이러한 경우에, 항원은 전형적으로 바이로솜 내에 봉입되거나 그에 결합되고, 이는 그 후에 상기 항원을 접종되는 숙주 면역체계에 전달한다. 전달되는 특정 항원으로 인해, 그 결과로 나타나는 예방 및/또는 치료 효과는 상기 항원이 관련되어 있는 그 질환 또는 장애에 필연적으로 특이적이다.

바이로솜은 또한 보편적 T-헬퍼 세포 에피토프(Kumar 등, (1992). J. Immunol. 148, 1499-1505) 및 당업계의 숙련자에게 공지된 다른 것들을 포함하는, 몇몇 다른 B-세포 및 T-세포 에피토프들(P?ltl-Frank 등, (1999). Clin. Exp. Immunol. 117, 496; Moreno 등, (1993). J. Immunol. 151 , 489)과 동시에 적재될 수 있다. 따라서, 바이로솜은 항원 전달 비히클로서 우수한 특성 및 강력한 면역원성 잠재력을 보유하면서 동시에 부작용의 위험성을 최소화하는, 모뎀(modem) 예방접족에서 매우 효과적인 항원보강제이다.

바이로솜은, 그들의 막 융합 활성이 바이러스 외피 단백질에 의해 단독으로 매개되는, 완전한 바이러스의 명확하게 정의된 저-pH-의존성 막 융합 활성을 밀접하게 모방하는 면에서, 기능적이다. 바이러와 유사하게, 바이로솜은 수용체-매개 세포내이입(endocytosis) 또는 옵소닌화(opsonization)에 의해 신속하게 내부화된다. 바이러스 시스템과는 달리, 바이로솜은 모체 바이러스의 감염성 뉴클레오캡시드가 결손되어 있기 때문에, 바이로솜은 안전하다. 따라서, 바이로솜은, 그들의 수성 내부 내 피막화되거나 또는 그들의 막 내에 동시-재구성되는, 매우 다양한 다른 물질들의 전달에 유망한 담체 시스템을 나타낸다. 바이로솜 막 내부에서 다른 수용체들의 동시-재구성은, 나아가, 다른 세포 또는 조직에의 바이로솜의 표적화를 가능케 한다. 바이로솜은 주로 항원보강제 효과를 나타내는 바이로솜과 함께, 바이로솜의 표면상에 항원을 부가하거나 바이로솜 관내강 내에 또는 리포솜의 관내강 내로 항원을 피막화함으로써 백신으로 사용된다.

바이로솜은 인플루엔자 바이러스 외피로부터 재구성되고 그들의 바이러스 대응부로서 동일한 세포 수용체-매개 세포내이입을 이용한다(Hernandez 등, (1996). Annu Rev Cell Dev Biol 12, 627-661). 인플루엔자 바이러스와 엔도솜의 수용체 결합 및 막 융합 활성은 주 바이러스 외피 당단백질 HA에 의해 매개되는 것으로 알려져 있다(Bungener 등, (2002). J Liposome Res 12, 155-163; Huckriede 등, (2003). Vaccine 21 , 925-931). 바이러스 벡터와 유사하게, 엔도솜의 관내강 내 다소 산성인 pH는 바이로솜 막과 엔도솜 막의 융합을 촉발하여 DNA, RNA, 또는 단백질과 같은 피막화된 물질을 APCs의 사이토졸(cytosol) 내로 분비시킨다. 따라 서, 바이로솜에 피막화된 외인성 항원은 드 노보(de novo) 단백질 합성을 요구하지 않으면서 MHC 클래스 I 경로에 접근할 수 있다. 모든 바이로솜이 엔도솜 막과 융합하는 것 같지는 않고, 따라서 분획은 MHC 클래스 II 경로에 유용한 것으로 생각된다.

빈 IRIV 유래 인플루엔자에 대한 상업적으로 이용가능한 백신(인플렉살(INFLEXAL)(등록상표) V)은 매우 효과적이고 안전한 것으로 나타났다(Gluck 등, (1994). Lancet 344, 160-163). 인플루엔자 이외에 다른 특정한 질환과 관련된 항원의 전달 시스템으로서 바이로솜의 가능성은 에팍살(EPAXAL)(등록상표)과 같은, 예컨대 말라리아(P?ltl-Frank 등, (1999). Clin Exp Immunol 117, 496-503) 및 A형 간염(Holzer 등, (1996) Vaccine 14, 982-986)에 대해, 핵산 및 펩티드-기반 백신과 관련하여 입증되었다. 최근의 보고는 또한 바이로솜과 함께 피하(s.c.)로 투여된 합성 펩티드 백신이 강력한 CTL 면역을 유도할 수 있는 것으로 확인되었다(Amacker 등, (2005). Int Immunol 17, 695-704).

국제특허 공개 제WO2004/045582호는, 적당한 in vivo 조건 하에서, 빈 바이로솜(즉, 관심대상의 항원성 분자를 포함하거나 보유하지 않는 바이로솜)이 그러한 분자를 포함하거나 보유하는 리포솜과 융합되도록 만들어질 수 있음을 기술한다. 항원성 분자를 포함하거나 보유하는, 그 결과의 융합생성(fusogenic) 입자가 숙주에게 투여되면, 상기 항원성 분자에 대해 유발된 특정 면역반응은 이 항원성 분자가 리포솜 단독으로 투여되었을 때보다 강력하다. 유사하게, 유럽특허 제05027624.5호는 빈 바이로솜 및 항원성 분자를 보유하거나 포함하고 용액 내에 비- 융합된, 별개의 단위로 존재하는 리포솜과의 병용은 항원-포함 리포솜 단독에 의해 달성되는 것보다 높은 수준으로 숙주 면역반응을 증강시킬 수 있다.

문헌[Huckriede 등, (2005). Vaccine 23S1, S1/26-S1/38]은 그 항원이 관련되어 있는 특정 질환에 대한 백신으로서 IRIV 피막화된 다양한 질환-특이적 항원의 사용뿐만 아니라 인플루엔자 백신으로서 IRIV의 사용을 기술한다. 각각의 경우에, 특정 질환에 대한 백신으로 사용되는 IRIV의 능력은 IRIV 내 또는 그 위에 항원의 존재와 관련되는데, 상기 항원은 그에 대해 예방 접종되는 특정 질환과 연관되어 있다.

그러나 바이로솜이 이들의 항원성 분자의 직접적인 전달 또는 그러한 항원성 분자에 대한 숙주의 면역반응을 증강시키는 항원보강 활성에서 유용한 것과 같이, 선행 기술에 기술된 바와 같은 바이로솜 활성은 자연계에 특이적인데, 이들 스스로 전달되는 항원성 분자에 의해 지시되고 제한되는 특정 질환 또는 장애의 예방, 치료 및/또는 제거를 명백하게 나타냄을 의미하는 것이다.

상기에 비추어, 잠재적으로 위험한 바이러스 게놈을 도입하고 환자 내로 바이러스 입자를 복제하는 것을 포함하지는 않지만, 폭넓은 구획-의존성 방식으로 면역체계를 동원할 수 있는 면역자극제가 요구되고 있다. 이러한 면역자극제는 안전하고, 입증된 작용 기작을 기반으로 하고, 그들의 활성을 신뢰할 수 있어야 한다.

이러한 요구를 해결하는 것이 본 발명의 목적이다.

본 발명에서 그의 지질막 내에, 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질, 예를 들어 바이로솜을 포함하는 지질 소포체가 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질이 유래하는 모체 바이러스와 관련되어 있지 않은 질환 및 장애에 대한 면역체계의 자극을 유발하기 위해 사용될 수 있음이 놀랍게도 발견되었다. 이는 그러한 지질 소포체가 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질 이외에는 임의의 특정 질환과 관련된 어떠한 항원성 분자, 또는 약물도 보유하거나 포함하지 않기 때문에 놀라운 일이다. 게다가, 본 발명자들은 이러한 빈 지질 소포체가 그러한 질환과 관련된 임의의 부가적인 약물 또는 물질의 부재 하에서도 비-특이적인 보호 효과를 유도하는데 효과적임을 발견하였다.

따라서, 발명의 하나의 목적은 질환 또는 장애의 예방, 치료 및/또는 제거를 위하여 동물에게 면역반응을 비-특이적으로 자극하기 위한 약물의 제조를 위해 그의 지질막 내에, 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질을 포함하는 지질 소포체의 용도에 관한 것이다.

발명의 다른 목적은 질환 또는 장애의 예방, 치료 및/또는 제거를 위하여 동물에게 면역반응을 비-특이적으로 자극하는데 사용하기 위한, 그의 지질막 내에, 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질을 포함하는 지질 소포체에 관한 것이다.

발명의 다른 측면은 동물에게, 그의 지질막 내에, 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질을 포함하는 지질 소포체를 투여하는 것을 포함하는, 질환 또는 장애를 예방, 치료 및/또는 제거하기 위하여 동물의 면역반응을 비-특이적으로 자극하는 방법에 관한 것이다.

본 발명의 용도에 따른 지질 소포체는 하기에서 본 명세서에 상세히 기술된다.

이론에 구속되지 않으면서, 본 발명자들은 관찰된 놀라운 효과가 본 발명의 지질 소포체가 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질의 형태로 병원체-관련 분자 구조(pathogen-associated molecular patterns, "PAMPs")와 함께 숙주 면역체계를 나타낸다는 사실에 기인하는 것으로 생각한다. 이러한 PAMPs의 존재는 이어서 선천적 면역체계의 활성화를 야기하는 국소 감지기(톨-유사 수용체 등)의 자극을 통해 면역체계를 변경한다. 이러한 활성화는, 적응적 면역체계의 T 세포 및/또는 B 세포 내에서 특이적 클론 부차집단의 활성화에 의해 일반적으로 달성되는 것과 같이, 임의의 특이적 질환에 비의존적인 방식으로 달성되는 것처럼 보인다. 이러한 포괄적인 면역자극의 결과로, 상기 면역체계는 미생물 공격에 대한 반응 시간을 줄이고, 비-특이적 즉각(선천적) 반응의 강도를 증가시키고, 특이적인 적응적 면역의 후속 발현을 증강시키며, 결국 전신 감염을 유도하여, 이 감염과 관련된 증상의 중증도를 감소시키는, 각성도(alertness)의 일시적인 상태를 초래한다. 본질적으로, 그 후에, 본 발명의 지질 소포체는 제한된 시간 동안에 폭넓은 범위의 질환에 대해 저항성을 증가시키기 위하여 정리되지 않은 신속한 면역학적 경종("wake-up call")으로 작용한다.

본 명세서의 하기 첨부된 실시예에서 보여질 것과 같이, 본 발명자들은, 그의 지질막 내에, 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질을 포함하는 (빈) 지질 소포체가 질환의 중증도를 경감시키는데 사용될 수 있음을 증명하였다. 구체적으로, 그의 지질막 내에, 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질을 포함하는 지질 소포체, 즉 본 명세서에 정의된 바와 같은 노출된(naked) 지질 소포체가 투여 후 단지 수 시간 내에 면역자극 효과를 유도함을 보여주었다. 이러한 효과의 개시는 매우 신속하고, 특이적인, 즉 적응적 면역반응으로부터 야기되는 임의의 면역자극 효과가 그럴 것이라고 기대되는 것보다 확실하게 더욱 신속하다. 상기 지질 소포체로 예비-처리된 동물에게 질환이 생기는 경우에는, 이 질환의 진행 기간뿐만 아니라 중증도 모두 비-처리된 동물 대조군과 비교하여 처리된 동물에서 경감되었음을 추가로 확인하였다. 마지막으로, 이러한 효과가 일시적이기는 하지만, 수많은 다른 질환에 대해 서로 관찰되었는데, 이는 상기 지질 소포체를 사용하여 달성된 면역자극의 비-특이적 특성을 입증하는 것이다.

본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "지질 소포체"는 지질 이중층에 의해 경계가 구분되고 20-1000 nm, 바람직하게는 20-500 nm, 더욱 바람직하게는 80-500 nm, 더욱 더 바람직하게는 100-200 nm에 속하는 직경을 갖는 관내강을 정의하는 구체를 지칭한다. 가장 바람직하게는, 상기 지질 소포체의 직경은 약 150 nm이다. 본 명세서에 사용된 바와 같이 "지질 소포체"는 그의 지질막 내에 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질을 갖는 지질 소포체를 지칭하고, "단백질리포솜(proteoliposomes)"으로 불리는 화합물의 종류에 속한다.

본 명세서에 사용된 바와 같이, 문구 "그의 지질막 내"는 단백질 분자 내 막횡단/고정(anchor) 도메인을 통해, 또는 고정 기능을 제공하는 공유적으로 연결된 친지질성 분자를 통해, 또는 비-공유 연합을 통해, 지질 이중층의 구성요소 또는 지질 이중층 내 고정된 분자와 직접적으로, 지질 소포체에 대한 바이러스 외피 단백질의 물리적인 부착을 지칭하고, 그로써, 지질 소포체가 융합될 수 있는 세포 상에 대응하는 수용체에의 결합에 이용가능하다.

본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "바이러스 외피 단백질"은 본 발명에 사용되는 지질 소포체가 그로부터 부분적으로 또는 완전히 유래되고 그의 지질막 내에 존재하는 외피보유(enveloped) 바이러스에 의해 암호화되는 모든 단백질을 지칭한다. 많은 경우(항상은 아니지만)에, 바이러스 외피 단백질은 외부 비리온 표면의 일부로서 숙주 유기체, 예컨대, 세포 표면상의 수용체와 또는 가용성 분자와 상호작용을 한다. "바이러스 외피 단백질"이 일부 경우에서는 모체 바이러스와 관련된 면역원성 또는 항원성 분자를 나타낼 수 있는 반면, 본 발명에 사용된 지질 소포체의 바이러스 외피 단백질은 이 단백질에 대한 모든 종류의 특이적 면역반응을 유발하고자 하는 의도로 도입된 것이 아니라, 오히려 특이적 면역반응이 발생하기 훨씬 이전에 적어도 하나의 즉각적인, 비-특이적 위험 신호를 촉발한다. 바이러스 외피 단백질에 대해 이미-존재하는 특이적 면역성은 본 발명의 의미 내에서 상기 외피 단백질의 기능을 명백하게 파괴하지 않는다. 바이러스 외피 단백질은 때로 "바이러스 융합 단백질"로 작용하는데, 이는 본질적으로 "바이러스 융합-촉진 단백질"과 동일한 것을 의미하고, 이는 그러한 단백질이 표적 세포와 바이러스 또는 바이로솜과의 융합에 역할을 담당함을 의미한다.

본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "면역반응"은, 다중 질환 또는 장애에 대한 동시 저항성을 포함하는, 적어도 하나의 질환 또는 장애에 대한 동물의 증가된 저항성을 지칭한다. 면역반응은 외래 물질 및/또는 그의 병리학적 고유 물질의 도입에 대해 신체를 방어하기 위한 인간 및 다른 고등 동물의 생리적 반응(예컨대, 암과 관련하여, 자가면역 질환 또는 장애)이다.

본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어들 "비-특이적(non-specific)", "불특정한(unspecific)" 및 기타는 그로부터 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질이 유래되는 바이러스와 관련되지 않거나 그에 의해 야기되지 않는 적어도 하나의 질환 또는 장애에 대한 지질 소포체의 일반적인 면역자극 활성을 지칭한다. 그로부터 지질 소포체의 지질막 내 바이러스 외피 단백질이 유래되는 바이러스는 본 명세서에서 "모체 바이러스"로 지칭된다. 따라서 "비특이적" 면역자극은 모체 바이러스에 의해 야기되지 않는 임의의 하나 이상의 많은 질환 또는 장애의 예방, 투병 및/또는 제거를 지칭한다. 본 명세서에 기술된 비-특이적 면역자극의 특징은 그의 개시가 지질 소포체의 투여 후에 매우 신속하다는 것이다. 이러한 일시적인 비-특이적 면역자극은 일반적으로 5일 이하에 속하지만, 지질 소포체의 투여 후에 심지어 더 짧게, 예를 들어 4일 이하, 3일 이하, 2일 이하, 1일 이하, 또는 심지어 지질 소포체의 투여 후 수 시간 이내에 발생할 수 있다.

반대로, "특이적" 면역-자극 활성은 모체 바이러스와 관련되거나 그에 의해 야기되는 특정 질환 또는 장애를 예방, 투병 및/또는 제거하기 위하여 면역체계를 자극하는 것을 지칭한다. 이러한 면역자극의 개시는 느린데, 예컨대 2주에 속한다.

예시로서, (모체 바이러스 A와 관련되거나 그에 의해 야기되는) 질환 A에 대한 면역자극을 초래하기 위한 약물을 제조하기 위하여, 그의 지질막 내에, 모체 바이러스 A 유래 바이러스 외피 단백질을 포함하는 지질 소포체를 사용하는 것은 "특이적" 면역자극 활성을 유발하는 예시가 될 것이다. 반대로, (모체 바이러스 A와 관련되거나 그에 의해 야기되지 않는) 질환 B를 예방, 투병(즉, 치료) 및/또는 제거하기 위하여 동일한 지질 소포체를 사용하는 것은 "비특이적", 또는 "불특정한" 면역자극 활성을 유발하는 예시가 될 것이다. 이는 또한 동일한 바이러스의 다른 균주에 적용된다. 예를 들어, 동일한 종류의 바이러스(여기서는 인플루엔자)에 속하는 다른 특정한 균주의 바이러스 외피 단백질(예컨대, H3N2 또는 H5N1)을 보유하는 지질 소포체에 의해 초래되는 바이러스의 일 특정 균주(예컨대, 인플루엔자 H1 N1)에 대한 면역자극은 따라서 비-특이적 면역증강으로 간주될 것이다.

본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "치료적", "요법" 및 기타는, 임의의 대응하는 증상이 이미 생겼는지 여부와 무관하게, 이미 걸렸거나, 또는 이미 걸렸다고 의심되는 적어도 하나의 질환 또는 장애와 투병하는데 취해지는 작용을 지칭한다. 그로써, "요법" 및 "치료적"은 만약 증상이 이미 나타났다면, 이들이 완화되고, 또는 만약 증상이 아직 나타나지 않았다면, 이러한 증상의 개시가 중증도에서 경감되거나 완전히 배제되도록 그렇게 대상에게서 질환 또는 장애의 치료, 제거 또는 적어도 완화를 지칭한다.

본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어들 "예방적", "예방", "방지하다", "방지" 및 기타는 대상이 이미 그 질환에 걸린 것으로 의심되지는 않지만, 현재 또는 미래에 특정 질환 또는 장애에 걸릴 수 있는 높아진 위험성 또는 가능성이 존재할 때, 대상이 질환에 걸리는 것을 방지하기 위하여 취해지는 행위를 지칭한다. 상기 용어들은 또한 대상이 특정 질환에 대해 이미 예방접종/면역접종을 받았지만, 그의 효과가 지속적이지 않을 때, 대상이 임의의 질환에 걸리는 것을 방지하기 위하여 취해지는 행위를 지칭한다. 그로써, 본 명세서에 사용된 바와 같이, 문제의 대상이 임의의 질환 증상을 나타내지는 않지만 특정 질환 또는 장애에 걸릴 수도 있다고 기대되는 한, 활성은 "예방적" 또는 "방지적"으로 지칭되는 것이 바람직할 것이다. 적절하게 "예방적"으로 초기에 언급된 행위는 지질 소포체의 1회 이상의 초기 투여 이후에, 특정 질환 또는 장애가 대상에게 존재한다는 의심의 초기 결여에도 불구하고, 이 대상이 실제로 특정 질환 또는 장애에 걸렸다고 판명된다면, "치료적"이 될 수 있다. 반대로, 적절하게 "치료적"으로 초기에 언급된 행위는, 특정 질환 또는 장애를 치료하는 것 이상으로 지속된다면, 사실상 "예방적" 또는 "방지적"이 될 수 있다.

본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "약학적"은 조성물 및/또는 약제가 살아있는 동물, 바람직하게는 인간에게 투여하기에 적합하게 하는 이들의 특성을 지칭한다.

본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어들 "강화하는", "면역강화", "자극하는", "면역자극", "면역자극성" 및 기타는 상기에 정의된 의미 내에서 비-특이적인 면역 기능에 대한 지질 소포체 또는 이들의 효과를 지칭하도록 (빈) 지질 소포체의 문맥 내에서 호환적으로 사용된다.

본 명세서에 사용된 바와 같이 용어 "바이로솜"은 다양한 바이러스로부터 유래될 수 있지만 감염성 뉴클레오캡시드 및 근원 바이러스의 유전적 물질을 포함하지 않는 재구성된 바이러스 외피를 지칭한다. 바이로솜은 그의 지질막 내에, 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질을 포함하는 지질 소포체의 특별한 유형이다. 그의 구성으로 인해, 이러한 구조는 "단백질리포솜"으로 불리는 종류의 화합물에 속하는데, 지질막 내 상기 단백질은 바이러스 기원이다. 즉, 바이로솜은 바이러스 또는 비-바이러스 기원의 막 지질과 하나 이상의 바이러스 외피 단백질의 혼합물로 구성된다.

본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어들 "질환" 및 "장애"는 불편함, 기능이상, 또는 곤란을 야기하고 감염성, 비-감염성, 종양성, 면역성 또는 대사성 질환 또는 장애로 구분되는 신체 또는 정신의 비정상을 지칭한다.

본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어들 "노출된" 및 "빈"은 지질 소포체와 관련하여, 본질적으로 바이로솜과 관련하여 호환적으로 사용된다. 상기 용어들은 그렇게 특정된 소포체 또는 바이로솜이 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질 이외에, 질환-특이적인 항원을 포함하지 않고, 또한 이들이 그들의 지질 이중층 내 또는 그 위에 어떤 것도 보유하지 않는다는 사실을 지칭한다. 그로써, "노출된" 또는 "빈" 바이로솜과 같이, "노출된" 또는 "빈" 지질 소포체는 그렇게 지정된 소포체/바이로솜 내에 포함된 단백질 또는 폴리펩티드가 오로지 상기에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질임을 의미한다. 이러한 문맥 내에서 상기에 기술된 바와 같이 지질 소포체, 예컨대 바이로솜을 생산하기 위한 공지된 과정은 모든 오염물질의 완벽한 제거를 거의 허용하지 않음이 주목된다. 지질 소포체, 예컨대 바이로솜은 따라서 그의 제조에 관련된 미량의 잔여 물질(예컨대, 미량 변성제)을 포함할 수 있고, 이러한 잔여 물질이 상기 의미 내에서 "특이적인" 임의의 면역반응을 유발하지 않는 한, 상기 의미 내에서 여전히 "노출된" 또는 "빈"으로서 적절하게 이해될 것이다.

본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "항원보강제"(명사 또는 형용사로 사용됨)는 의도된 예방적 및/또는 치료적 효과를 담당하는 일차적인 활성 물질과 병용하여 투여되는 (그러나 동시일 필요는 없는) 이차적인 물질을 지칭한다. "항원보강제" 물질은 따라서 그 자체로 예방 및/또는 치료 효과를 나타내지는 않지만, 대신에 일차적인, 활성 물질에 의해 초래되는 예방 및/또는 치료 효과를 지지하고, 촉진하고 또는 다르게는 강화시킨다.

"항원보강제"로서 물질 또는 효과의 지정은, 본질적으로 그 물질 또는 효과의 고유한 특성에 의해서가 아니라, 이 물질이 사용되는 특이적인 관계에, 또는 이 효과가 나타나는 특이적인 관계에 의존한다. 따라서, 한 상황 하에서는 상기 의미 내에서 "항원보강제"로 기능할 수 있는 물질이 다른 상황 하에서는 의도되거나 명시되는 예방 및/또는 치료 효과에 따라서 활성 제제로 기능할 수 있다. 예시로서, 그의 지질막 내에 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질을 포함하는 지질 소포체(예컨대, 바이로솜)가 당업계에 항원보강제로 기술되었다고 하더라도, 비-특이적 면역자극 활성이 이 소포체에 의한 것이기 때문에, 상기 지질 소포체는 본 발명의 문맥 내에서는 항원보강제로 불리는 것이 적절하지 않을 것이다. 여기서, 상기 지질 소포체의 비-특이적 예방 및/또는 치료 효과를 지지하고, 촉진하고 또는 다르게는 강화시키는 다른 이차적인 물질이 적절하게 항원보강제로 불릴 수 있다고 하더라도, 상기 지질 소포체는 활성 제제이다.

그의 지질막 내에, 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질을 포함하는 지질 소포체는 유리하게는 바이로솜일 수 있다.

바이로솜의 제조는 당업계의 숙련자에게 잘 알려져 있다. 예를 들어, 바이로솜의 제조에 적합한 프로토콜이, 예를 들어, 본 명세서에 참고로 도입되는, 유럽특허 제538437호 또는, 대안으로는, 문헌[Mischler 및 Metcalfe (2002). Vaccine 20, B17-23]에 기술되어 있다.

예를 들어, 바이로솜은, 옥타에틸렌글리콜 모노도데실 에테르를 이용한, 예를 들어, 완전한 인플루엔자 바이러스의 용해화, 뉴클레오캡시드의 침강(바이러스 당단백질 및 지질은 상청액 내에 남을 것임), 및 소수성 수지(Bio-Beads SM2)를 이용한 상청액 내 계면활성제의 제거 후에, 본래 바이러스 막 지질과 스파이크(spike) 당단백질로부터 재구성될 수 있다(국제특허공개 제WO92/19267호).

모체 바이러스의 다른 균주 유래 HAs를 포함하는 바이로솜의 제조는 그러한 모체 바이러스 단백질의 동일한 양을 비롯한, 다양한 양으로 수행될 수 있다. 유리하게는, HA와 같은 모체 바이러스 외피 단백질은 비-이온성 계면활성제인 옥타에틸렌글리콜 모노도데실 에테르로 가용화될 수 있다. 바이오-비드(Bio-Beads) SM2를 이용한 상기 계면활성제의 제거 후, 다른 유형의 외피 단백질을 포함하는 바이로솜이 형성될 수 있다.

바이로솜의 특히 바람직한 형태는 면역강화 재구성된 인플루엔자 바이로솜("IRIV" 또는 "인플루엔자 바이로솜")이다. 이들은 150 nm에 속하는 평균 직경을 갖는 구형의, 단층 소포로, 인지질 및 인플루엔자 바이러스 표면 당단백질의 혼합물로부터 제조되지만, 이들은 어떠한 바이러스 핵산도 포함하지 않는다. 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌("HA") 막 당단백질은 인플루엔자 바이로솜의 작용 기작에 중요한 역할을 담당한다. 인플루엔자 바이러스의 이러한 주요 항원은 면역적격 세포에 항원 전달을 용이하게 하는, 융합-유도성 성분이다.

그로부터 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질이 유리하게 유래될 수 있는 인플루엔자 바이러스 아형은 인플루엔자 H1N1, 인플루엔자 H1N2, 인플루엔자 H2N2, 인플루엔자 H3N2, 인플루엔자 H3N8, 인플루엔자 H5N1, 인플루엔자 H5N2, 인플루엔자 H5N3, 인플루엔자 H5N8, 인플루엔자 H5N9, 인플루엔자 H7N1, 인플루엔자 H7N2, 인플루엔자 H7N3, 인플루엔자 H7N4, 인플루엔자 H7N7, 인플루엔자 H9N2 및/또는 인플루엔자 H10N7이다. 또한, 상기 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질은 유리하게는 인플루엔자 A/방콕/1/79, 인플루엔자 A/베이징/32/92, 인플루엔자 A/브라질/11/78, 인플루엔자 A/캘리포니아/7/2004(H3N2), 인플루엔자 A/칠레/1/83, 인플루엔자 A/크라이스트처치/4/85, 인플루엔자 A/잉글랜드/42/72, 인플루엔자 A/복건성/411/2002(H3N2), 인플루엔자 A/귀주성/54/89, 인플루엔자 A/홍콩/1/68, 인플루엔자 A/요하네스버그/33/94, 인플루엔자 A/레닌그라드/360/86, 인플루엔자 A/미시시피/1/85, 인플루엔자 A/모스코바/10/99(H3N2), 인플루엔자 A/뉴칼레도니아/20/99(H1N1), 인플루엔자 A/파나마/2007/99-RESVIR-17), 인플루엔자 A/필리핀/2/82, 인플루엔자 A/포트챠머스/1/73, 인플루엔자 A/스코틀랜드/840/74, 인플루엔자 A/산둥성/9/93, 인플루엔자 A/상하이/11/87, 인플루엔자 A/쓰촨성/2/87, 인플루엔자 A/싱가포르/6/86, 인플루엔자 A/시드니/5/97, 인플루엔자 A/텍사스/1/77, 인플루엔자 A/USSR/90/77, 인플루엔자 A/빅토리아/3/75, 인플루엔자 A/위스콘신/67/2005 (H3N2), 인플루엔자 A/후베이성/359/95, 인플루엔자 A/와이오밍/3/2003 X-147), 인플루엔자 B/홍콩/330/2001, 인플루엔자 B/지린성/20/2003, 인플루엔자 B/말레이시아/2506/2004, 인플루엔자 B/상하이/361/2002, 인플루엔자 A/베이징/262/95, 인플루엔자 B/빅토리아/98926/70, 인플루엔자 B/싱가포르/222/79, 인플루엔자 B/USSR/100/83, 인플루엔자 B/야마가타/16/88, 인플루엔자 B/파나마/45/90, 인플루엔자 B/홍콩/5/72, 인플루엔자 B/앤하버/1/86, 인플루엔자 A/바이에른/7/95, 인플루엔자 B/산둥성/7/97), 및/또는 B/장쓰성/10/2003으로부터 유래될 수 있다.

인플루엔자 바이로솜은 본질적으로 인지질(들), 바람직하게는 포스파티딜콜린(들)(PC) 및/또는 포스파티딜에탄올아민(들)(PE)으로 이루어지는, 구형의 지질막을 포함한다. 리포솜과는 달리, 인플루엔자 바이로솜은 인지질 이중층 막 내에 삽입된 기능성 바이러스 외피 당단백질 HA 및/또는 뉴라미니다제("NA")를 포함한다. 생물학적 활성 HA는 바이로솜 제형에 구조적인 안정성 및 동질성을 부여할 뿐만 아니라 바이러스의 융합 활성을 유지함으로써 면역원성 특성에 현저히 기여한다. HA 및/또는 NA가 숙주 면역체계에 의해 외래 항원으로 인식될 수 있음을 배제할 수 없다고 하더라도, 임의의 이러한 인식은 단지 모체 인플루엔자 바이러스에 특이적인 면역자극 반응을 촉발할 수 있을 뿐이다. 이와는 반대로, 그리고 상기에 개시된 바와 같이, 본 발명자들은 모체 바이러스에 대해 특이적인 보호를 제공하면서, 빈 지질 소포체, 예를 들어 빈 바이로솜이 또한 상기 모체 바이러스와 관련되거나 그에 의해 야기되지 않는, 또는 바이러스 외피 단백질이 하나 이상의 모체 바이러스, 모체 바이러스들로부터 유래되는 경우에, 숙주 면역체계를 증강시킬 수 있는 비-특이적 반응을 동시에 촉발할 수 있음을 놀랍게도 확인하였다.

인플루엔자 바이로솜은 비-특이적으로 면역반응을 증강시키는 유용하고 매우 효과적인 수단으로 작용한다. 이들은 또한 우수한 안전성 프로파일을 갖는 것으로 알려져 있는데(Schaad 등, (2000). Antimicrob Agents Chemother 44, 1163-1167; Gl?ck 등, (2000). J. Infcet. Dis. 181, 1129-1132), 이는 이들이 인간에게서 비특이적인 면역자극에 대해 의도된 약물처치에 사용하기에 매우 적합함을 의미한다.

인플루엔자 바이로솜은, 예를 들어 옥타에틸렌글리콜 모노도데실 에테르를 이용한 불활성화 인플루엔자 바이러스의 용해화, 뉴클레오캡시드의 침강(바이러스 당단백질 및 지질은 상청액 내에 남을 것임), 및 소수성 수지(Bio-Beads SM2)를 이용한 상청액 내 계면활성제의 제거 후에, 본래 바이러스 막 지질과 스파이크 당단백질로부터 재구성될 수 있다. 인플루엔자 바이로솜의 제조를 위한 프로토콜은 국제특허공개 제WO92/19267호에, 일반 바이로솜에 대한 프로토콜은 국제특허공개 제WO04/071492호에 제공된다.

적어도 하나의 바이러스 외피 단백질이 인플루엔자 바이러스로부터 유래되는 것이 유리하다고 하더라도, 본 발명에 사용된 지질 소포체는, 부가적으로 또는 대안적으로, 인플루엔자 이외의 다른 유형의 바이러스 유래 하나 이상의 바이러스 외피 단백질을 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 지질 소포체는, 예를 들어, 수포성 구내염 바이러스(VSV) G 단백질, 샘리키 삼림열 바이러스(SFV) E1 단백질, 센다이 바이러스 F 단백질, 호흡기 세포융합 바이러스(RSV) F- 또는 G-단백질 또는 C형 간염 바이러스(HCV) E 단백질로부터 선택되는 하나 이상의 바이러스 외피 단백질(들)을 포함할 수 있다.

본 발명에 사용된 지질 소포체는 또한 키메라 바이로솜일 수 있는데, 이는 이것이 적어도 두 개의 다른 바이러스 균주 유래, 예를 들어 인플루엔자 균주 X-31 및 A/Sing 또는 상기에 언급된 임의의 바이러스 균주로부터 유래된, 헤마글루티닌과 같은 바이러스 외피 단백질을 포함함을 의미한다. 부가적으로, 많은 다른 단백질들 중에서 수포성 구내염 바이러스(VSV) G 단백질, 샘리키 삼림열 바이러스(SFV) E1 단백질, 또는 센다이 바이러스 F 단백질, 또는 호흡기 세포융합 바이러스(RSV) 유래 G 단백질 또는 F 단백질 또는 C형 간염 바이러스(HCV) E 단백질와 같은, 다른 공지된 바이러스 외피 단백질이 연속적이고 개별적인 융합 과정을 겪게 되는 키메라 바이로솜을 제작하기 위하여 사용될 수 있다.

본 발명에 사용된 지질 소포체는 바람직하게는 양이온성 지질, 합성 지질, 당지질, 인지질 콜레스테롤, 또는 그의 유도체로 구성된 군으로부터 선택되는 지질을 포함한다. 인지질은 바람직하게는 포스파티딜콜린, 스핑고마이엘린, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜세린, 포스파티딜글리세롤, 포스파티드산, 카디오리핀, 및 다양한 지방 아실 조성을 갖는 포스파티딜이노시톨을 포함한다. 양이온성 지질은 바람직하게는 DOTMA(N-[(1-(2,3-다이올레일옥시)프로필]-N,N,N-트라이메틸암모늄 염화물), DOTAP(N-[1-(2,3-다이올레일옥시)프로필]-N,N,N-트라이메틸암모늄 염화물, DODAC(N,N-다이올레일-N.N.-다이메틸암모늄 염화물), DDAB(다이도데실다이메틸암모늄 브롬화물), TC-Chol(콜레스테릴 N-(트라이메틸암모니오에틸)카바메이트 염화물), DC-Chol(콜레스테릴 N-(다이메틸암모니오에틸)카바메이트 염화물), 또는 다른 양이온성 콜레스테롤 유도체, 및 스테릴아민 또는 다른 지방족 아민 등으로 구성된 군으로부터 선택된다. 이들은 PC(포스파티딜콜린)과의 혼합물로서 작은 단층 리포좀으로 제형화될 수 있다. 본 발명에 사용된 지질 소포체는 바람직하게는 달걀-유래 PC 및, 더욱 바람직하게는, 1-올레일-S-팔미토일-rac-글리세로-포스파티딜에탄올아민을 포함할 수 있다.

바람직하게는, 본 발명에 사용된 지질 소포체는 포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜세린, 및/또는 콜레스테롤 유도체와 같은 막 지질을 포함한다. 가장 바람직한 실시형태에서, 상기 지질 소포체는 양이온성 지질을 추가로 포함하는데, 예를 들어 양이온성 지질은 바람직하게는 DOTMA(N-[(1-(2,3-다이올레일옥시)프로필]-N,N,N-트라이메틸암모늄 염화물), DOTAP(N-[1-(2,3-다이올레일옥시)프로필]-N,N,N-트라이메틸암모늄 염화물, DODAC (N,N-다이올레일-N,N,-다이메틸암모늄 염화물), DDAB(다이도데실다이메틸암모늄 브롬화물), TC-Chol(콜레스테릴 N-(트라이메틸암모니오에틸)카바메이트 염화물), DC-Chol(콜레스테릴 N-(다이메틸암모니오에틸)카바메이트 염화물), 또는 기타 양이온성 콜레스테롤 유도체, 및 스테릴아민 또는 기타 지방족 아민, DPPE(다이팔미토일포스파티딜에탄올아민), DOGS(다이올레일-글리세로-석시네이트), DOSPA(2,3-다이올레일옥시-N-[2(스퍼민카복스아미도)에틸]-N,N-다이메틸-1-프로파나미늄 트라이플루오로아세테이트), DOSPER(1,3-다이올레일옥시-2-(6-카르복시스퍼밀)프로필아미드), THDOB(N,N,N1,N1-테트라메틸-N,N'-비스(2-하이드록시에틸)-2,3,-다이올레일옥시-1,4-부탄다이암모늄 요오드화물), DOPA(다이올레일-sn-글리세로-포스페이트), DOTP(다이옥틸 테레-프탈레이트), DOSC(다이올레일-석시닐-글리세롤), DOTB (다이올레일-e-(4'-트라이메틸암모니오)-부타노일-sn-글리세롤), DOPC(다이올레일-sn-글리세로-포스포콜린) 및 등으로 구성된 군으로부터 선택된다. 상기 양이온성 지질이 TC-Chol(콜레스테릴 N-(트라이메틸암모니오에틸) 카바메이트) 또는 DC-5 Chol(콜레스테릴 N-(다이메틸암모니오에틸) 카바메이트)과 같은 양이온성 콜레스테롤 유도체로부터 선택되는 것이 특히 바람직하다.

본 발명에 사용된 지질 소포체의 막은 상기 막의 총 지질 함량에 대하여, 바람직하게는 1.9 및 37 mol% 사이의 DC-Chol 또는 TC-Chol을 포함한다. 특히 바람직한 실시형태에서, 상기 막 내 DC-Chol 또는 TC-Chol의 함량은 막의 총 지질 함량의 1.9 및 16 mol% 사이이다. 막의 잔여 지질 함량은 인지질, 가장 바람직하게는 4:1의 비율로 포스파티딜콜린 및 포스피티딜에탄올아민으로 구성된다. 부가적으로, 상기 막은 지질 소포체의 융합 활성을 보장하기에 충분한 양의 HA를 포함할 수 있다.

공동-유화제(co-emulsifying agent)가 또한 상기 지질 소포체의 강도 및/또는 밀폐를 향상시키기 위하여 사용될 수 있다. 공동-유화제의 예시는 콜레스테롤 설페이트와 같이 하전되거나 중성인 콜레스테롤 에스테르, 식물 기원 유래 유도체와 같이 스테롤 골격을 갖는 유도체, 예를 들어 시스토스테롤, 시그마스테롤, 및 이들의 혼합물이다.

본 발명에 사용된 지질 소포체는 DOTAP가 DOSPER로 대체되고 최종 바이러솜 막 내 DOSPER 농도가 국제공개특허 제97/41834호에 기술된 바와 같이 적절히 조절되고, 특히, 바이로솜의 총 지질 함량의 70 중량%를 초과하지 않는 것을 제외하고는, 예를 들어 국제공개특허 제97/41834호의 실시예 1 내지 3에 기술된 DOTAP-함유 바이로솜을 제조하는 방법들 중의 어느 하나와 유사한 방법에 의해 수득될 수 있다. 기본적으로, 본 발명의 지질 소포체의 제조 방법은 하기 단계를 포함할 수 있다:

a) 비-이온성 변성제를 포함하고 추가로 DOSPER 및 기타 지질 및 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질을 포함하는 완충 용액을 제조하고;

b) 상기 지질 농도를 - 총 막 지질에 근거하여 - DOSPER의 5 내지 30 중량%로 조절하고 DOSPER 이외에 포스파티딜콜린(PC) 또는 그의 유도체 및 선택적으로 포스파티딜에탄올아민(PE) 및/또는 양이온성 지질을 포함하는 상기 기타 지질의 95 내지 70 중량%의 균형을 맞추고;

(c) 투석에 의해 또는 상기 용액을 미립담체 비드로의 처리에 의해 변성제를 제거하여, 상기 지질 소포체를 형성함.

(적어도 하나의) 질환 또는 장애는 감염성, 비-감염성, 종양성, 면역성 또는 대사성 질환 또는 장애일 수 있다. 일 실시형태에서, 본 발명의 용도는 하나 이상의 감염성 질환 또는 장애에의 일시적으로 증가된 노출에 직면한 건강한 대상에게, 또는 하나 이상의 감염성 질환 또는 장애에의 의심되는 노출을 즉각적으로 수반하지만 증상의 출현 또는 진단이 확정되기 전인 (여전히) 건강한 대상에게 본 발명에 사용된 지질 소포체를 적용하는 것을 수반한다. 치료적 또는 예방적으로서 대상과 직면하는 작용의 분류는 본 명세서에서 상기에 기술된다.

본 발명의 용도는 또한, 임의로 이러한 질환 또는 장애의 특이적인 치료의 독립적인 보완으로, 하나 이상의 이미 존재하는 질환 또는 장애의 치료에 적용될 수 있다. 이러한 문맥 내에서 본 명세서에 기술된 지질 소포체를 이용하여 달성되는 면역증강의 비-특이성은 주목할 만하다. 여기서, 상기 비-특이성은 다중 질환 또는 장애가 동시에 치료, 제거 및/또는 예방될 수 있음을 의미한다. 또한, 동시에 해결될 수 있는 질환 및/또는 장애의 수는 이론적으로는 무제한이다. 이는 예방, 치료 및/또는 제거되는 질환 및/또는 장애의 수가 제조된 특정한 백신 또는 백신 칵테일에 존재하는 특이적인 항원의 개수 및 유형에 따라 제한적인, 기존의 예방접종 계획에 비해 명백한 이점이다,

일 실시형태에 따르면, 적어도 하나의 감염성 질환 또는 장애는 바이러스성 질환 또는 장애, 세균성 질환 또는 장애, 진균성 질환 또는 장애, 기생충 질환, 또는 장애 또는 유성(phonic) 질환 또는 장애일 수 있다.

다른 실시형태에 따르면, 상기 바이러스성 감염성 질환 또는 장애는 AIDS, AIDS 관련 증후근, 수두(Varicella), 감기, 사이토메갈로바이러스 감염, 콜로라도 진드기열, 댕기열, 에볼라 유행성 출혈열, 유행성 이하선염, 생식기 사마귀, 수족구병, 간염, 단순포진, 대상포진, HPV, 인플루엔자(Flu), 라사열(Lassa fever), 홍역, 마르브르그 유형출혈열(Marburg haemorrhagic fever), 전염단핵구증(infectious mononucleosis), 볼거리, 회색질척수염(Poliomyelitis), 진행성 다초점 백색질뇌증(Progressive multifocal leukencephalopathy), 광견병, 풍진, SARS, 천연두(마마), 바이러스성 뇌염, 바이러스성 위장염, 바이러스성 수막염, 바이러스성 폐렴, 서부 나일강 질환(West Nile disease), 황열병으로부터 유리하게 선택될 수 있다. 이들 및 기타 바이러스성 감염성 질환 또는 장애는 RSV, 폴리오바이러스, 루벨라 바이러스, 뎅기 바이러스, 플라비비리데(Flaviviridae), 코로나비리데(Coronaviridae), 레오비리데(Reoviridae), 광견병 바이러스, 파라믹소비리데(Paramyxoviridae)(예를 들면, 멈프스 바이러스, 홍역 바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스 등), 오르쏘믹소비리데(orthomyxoviridae)(예를 들면, 인플루엔자 바이러스 유형 A, B 및 C 등), 원숭이 면역결핍 바이러스(SIV), HAV, HBV, HCV, HDV, HEV, HPV, HSV, HIV, CMV, EBV, 폴리오 바이러스, 베리셀라, 분야바이러스(예를 들면, 라 크로스 바이러스)에 의해 야기된다.

다른 실시형태에 따르면, 상기 세균성 감염성 질환 또는 장애는 탄저병, 세균성 수막염, 브루셀라증, 캄필로박터증, 고양이 긁힘 병, 콜레라, 디프테리아, 발진티푸스, 임질, 고름딱지증(Impetigo)-레지오넬라증(Legionellosis), 나병(한센병), 렙토스피라병, 리스테리아증, 라임병, 유비저(Melioidosis), MRSA 감염, 노카르디아증, 백일해(백일 기침), 흑사병, 폐렴구균성 폐렴, 앵무새병, Q열, 록키산홍반열(RMSF), 살로넬라증, 성홍열, 쉬겔라증, 매독, 파상풍, 트라코마, 결핵, 야생토끼병, 장티푸스, 티푸스; 요로 감염으로부터 유리하게 선택될 수 있다. 이들 및 기타 세균성 감염성 질환 또는 장애는 티프테리아균(Corynebacterium diphtheriae), 클로스트리듐 테타니(Clostridium tetani), 브르데텔라 퍼투스에 (Bordetella pertussis), 혈청형 수막알균(Meningococcus) A1 B1 C1 Y 및 W135를 포함하는 수막염균(Neisseria meningitidis), 헤모필루스 인플루엔자 유형 B(Hib), 및 헬리코박터 파일로리에 의해 야기된다.

또 다른 실시형태에 따르면, 상기 진균성 감염성 질환 또는 장애는 아스페리길루스증, 분야균증, 칸디다증, 콕시디오이데스진균증, 크립토콕쿠스증, 히스토플라스마증, 발피부곰팡이증으로부터 유리하게 선택될 수 있다.

또 다른 실시형태에 따르면, 상기 기생충성 감염성 질환 또는 장애는 아프리카 트리파노소마증, 아메바증, 회충증, 바베스열원충증, 샤가스병, 간흡충증, 크립토스포리듐증, 낭미충증, 열두조충증, 메디나충증, 포충증, 요충증, 간질증, 비대흡충증, 사상충증, 자유생활 아메바 감염, 람블편모충증, 턱구충증, 왜소조충증, 이소스포라증, 장리슈만편모충증 리슈만편모충증, 말라리아, 메타고니무스흡충증, 구더기증, 회선사상충증, 이감염증, 요충 감염, 옴, 주혈흡충증, 촌충증, 개회충증, 톡소포자충증, 선모충증(trichinellosis), 선모충증(Trichinosis), 편충증, 파동편모충증으로부터 유리하게 선택될 수 있다.

또 다른 실시형태에 따르면, 상기 프리온성 감염성 질환 또는 장애는 전달성 해면뇌병증, 소 해면뇌병증, 크로이츠펠트-야콥병, 쿠루로부터 유리하게 선택될 수 있다.

또 다른 실시형태에 따르면, 상기 종양성 질환 또는 장애는 암일 수 있다. 상기 암은 예를 들어 육종, 백혈병, 림프종, 골수종, 흑색종, 샘종, 암종, 융모막암종, 가스트린종, 크롬친화세포종, 프로락틴분비종양, 또는 신경종일 수 있다.

구체적으로, 상기 암은 성인 급성 림프모구 백혈병; 어린이 급성 림프모구 백혈병; 급성 골수성 백혈병; 부신겉질샘 암종; 어린이 부신겉질샘 암종; AIDS-관련 암; AIDS-관련 림프종; 항문암; 기저세포 암종; 간외 쓸개관암; 방광암; 골암, 골육종/악성 섬유성조직구종; 뇌줄기신경아교종; 성인뇌종양; 뇌암(예를 들어, 뇌줄기신경아교종; 소뇌별아교세포종; 대뇌별아교세포종/악성 신경아교종; 뇌실막세포종; 속질모세포종; 천막위 원시신경외배엽종양; 시각경로 및 시상하부 신경아교종); 유방암(여성 및 남성; 기관지 샘종/카르시노이드; 버킷림프종; 카르시노이드 종양; 위장관 카르시노이드 종양; 미지의 일차적 기원의 암종; 일차 중추신경계 림프종; 자궁경부암; 소아암; 만성 림프성 백혈병; 만성 골수성 백혈병; 만성 골수증식질환; 결장암; 직장결장암; 피부 T-세포 림프종, 균상식육종 및 세자리증후군; 자궁내막암; 뇌실막세포종; 식도암; 유잉 가계 종양; 두 개외 배아세포종양; 고환외 배아세포종양; 간외 쓸개관암; 안구암(예를 들어, 안구내 흑색종 안구암 및 망막모세포종); 쓸개암; 위(위)암; 위장관 카르시노이드 종양; 위장관 버팀질종양(GIST); 두 개외 배아세포종양; 고환외 배아세포종양; 난소 배아세포종양; 임신융모종양; 신경아교종; (예를 들어, 뇌줄기신경아교종, 대뇌 별아교세포종, 시각경로 및 시상하부 신경아교종); 털모양세포 백혈병; 두경부암; 일차 간세포(간) 암; 호지킨 림프종; 후두인두암; 안구내 흑색종; 췌장암(섬세포 암종); 카포시 육종; 신장(신세포) 암; 후두암; 급성 백혈병(예를 들어, 림프모구 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 림프성 백혈병, 만성 골수 백혈병, 털모양세포 백혈병); 입 및 구강암; 간암(원발성 및 전이성); 비-소세포폐암; 소세포폐암; AIDS-관련 림프종; 버킷 림프종; 피부 T-세포 림프종; 호지킨 림프종; 비-호지킨 림프종; 일차 중추신경계 림프종; 고분자글로불린혈증, 발덴스트롬; 골의 악성섬유조직구종/골육종; 속질모세포종; 흑색종;, 안구내(눈) 흑색종; 메르켈세포 암종; 중피종; 잠재의 일차 전이성 편평목암; 다발성 내분비선종증; 다발골수종/형질세포 신생물; 균상식육종; 골수 형성이상 증후군; 골수형성이상/골수증식질환; 만성 골수백혈병; 골수성 백혈병; 다발골수종; 만성 골수증식질환; 비강 및 부비동암; 코인두암; 비인두암; 신경모세포종; 구인두암; 골육종/뼈의 악성 섬유조직구종; 난소암; 상피성 난소암; 난소 배아세포종양; 난소 저 악성 잠재종양; 췌장암; 섬세포 췌장암; 부비동 및 비강암; 부갑상샘암; 음경암; 크롬친화세포종; 솔방울샘모세포종 및 천막위 원시신경외배엽종양, 어린이; 하수체종양; 악성 형질세포 신생물/다발골수종; 흉막폐장 모세포종; 임신 및 유방암; 임신 및 호지킨 림프종; 일차 중추신경계 림프종; 전립샘암; 직장암; 콩팥깔때기 및 요관의 일시적인 세포암; 망막모세포종; 횡문근육종; 침샘암; 유잉 가계 종양; 연조직 육종; 자궁 육종; 세자리증후군; 피부암(비-흑색종); 피부암(흑색종); 피부 암종, 메르켈세포; 소세포폐암; 소장암; 연조직 육종; 전이성 편평세포암종; 일차적 잠재성의 편평목암; 위(위)암; 천막위 원시신경외배엽종양; 피부 T-세포 림프종; 고환암; 가슴샘종; 가슴샘종 및 가슴생 암종; 갑상샘암; 임신영양모세포종양; 미지의 원발성 부위의 암종; 미지의 원발성 부위의 암; 비정상적 소아암; 요도암; 자궁내막 난관암; 난관 육종; 질암; 외음부암; 발덴스트롬 마크로글로불린혈증; 윌름즈종양; 및 여성암으로부터 유리하게 선택될 수 있다.

다른 실시형태에 따르면, 동물은 포유동물이다. 상기 포유동물은 바람직하게는 인간, 침팬지, 시노몰로구스 원숭이, 시미안 원숭이, 긴꼬리원숭이, 생쥐, 쥐, 고양이, 개, 말, 토끼, 낙타, 라마, 반추동물, 말, 돼지이다. 바람직한 반추동물은 젖소, 황소, 염소, 양, 들소, 버팔로, 사슴 및 수사슴일 수 있다.

다른 실시형태에서, 상기 약물은 근육내, 진피내, 정맥내(예를 들어, 주사에 의해), 피하, 복강내, 비경구로, 국소적으로(topically), 기관내, 심방내, 관절내, 안구내, 국부적으로(locally), 부착포에 의해(예를 들어, 피부 부착포로), 분무제에 의해(예를 들어, 코인두 분무제로), 경구로(예를 들어, 정제, 캡슐, 캐플릿, 당의정으로), 좌약에 의해(예를 들어, 직장 좌약 또는 질 좌약으로), 점적제에 의해(예를 들어, 안구 점적제) 또는 점막으로(예를 들어, 비강내, 설하, 가글링에 의해 또는 로젠지 상에 흡인에 의해) 투여하기에 적당하다. 따라서, 상기 약물은 주사제 용액으로, 부착포로, 분무제로, 좌약으로, 가글링 용액으로, 로젠지로 또는 점적제로 제형화되거나 제제화될 수 있다. 투여는 단일 용량 또는, 지시된 요구에 따라, 감독 임상의에 의해 적절히 요구되는 바와 같은 중재 시간 간격을 갖는 다중 용량일 수 있다. 진피내, 근육내, 피하 및 정맥내 및 점막내 투여가 바람직하고, 진피내 투여가 특히 바람직하다.

또 다른 실시형태에 따르면, 상기 본원에 기술된 지질 소포체는 환자에게 반복적인 투여를 가능케 하는 형태로 제조된다. 본 발명의 지질 소포체와 다른 화합물, 예를 들어, 항원보강제 또는 면역촉진제의 병용은 전체 효과를 상승적으로 증가시킬 수 있다. 지질 소포체의 양 및 종류, 자극 부위, 및 동시-자극된 신호(감염, 알레르기항원에의 노출 등)가 상기 전체 효과를 정의한다. 상기 효과는 수 시간 내지 수 주일에 속하는, 일시적이다. 달성되는 상기 효과의 지속기간은 투여된 약물의 조성뿐만 아니라, 투여량 크기, 투여량 시기조절, 선택된 투여 경로에 좌우된다.

일 실시형태에서, 상기 본원에 기술된 지질 소포체는 감염원에의 개체의 노출 전 및/또는 후에 수차례 투여되는 것을 가능케 하는 형태로 제조된다. 이상적으로는, 전- 및/또는 후-노출 3-7일의 투여 시기 이내에 다중 투여를 가능케 하는 형태로의 지질 소포체의 제조가 요구되는데, 전- 및/또는 후-노출 5일의 투여 시기 이내에 다중 투여를 가능케 하는 형태로의 제조가 바람직하다. 5일 전-노출뿐만 아니라 5일 후-노출 모두의 투여 시기 이내, 즉 총 10일 이내에 다중 투여를 가능케 하는 형태가 특히 바람직하다. 그러나 이 시기는 정확한 노출 시기를 확실하게 알 수 없기 때문에, 실제로는 측정하는 것이 어려울 수 있다. 이러한 경우에, 상기 투여 시기는 짐작되거나 예상되는 노출에 대해서 계산될 수 있다.

다른 실시형태에서, 상기 지질 소포체의 제형은 예컨대 전- 및/또는 후-노출 투여 시기(들) 이내에서 1일 1회 투여를 허용하는 것이다. 그러나 상기 지질 소포체는 필요에 따라서 상기 투여 시기(들) 이내에서 보다 빈번하거나 드문 투여를 가능케 하도록 제형화될 수 있다. 예를 들어, 상기 지질 소포체는 전- 및/또는 후-노출 투여 시기(들) 이내에서 1일 1회, 2회, 3회, 4회 또는 5회 투여될 수 있다. 유사하게, 전- 및/또는 후-노출 투여 시기(들) 이내에서 서로 다른 시기에 대한 이러한 투여 빈도의 조합이 또한 가능하다.

상기 본원에 기술된 지질 소포체를 포함하는 약물은 약학적으로 허용가능한 제제로 제형화된다. 이러한 제제는 일반적으로 약학적으로 허용가능한 농도의 염, 완충제, 보존제, 친화성 담체, 항원보강제 및 사이토카인과 같은 보조적 면역성 강화제 및 선택적으로 기타 치료제를 포함할 수 있다. 투여되는 지질 소포체의 바람직한 양은 예방, 치료 및/또는 제거되는 질환 또는 장애에 좌우된다. 일반적으로, 약 1 ng/kg 내지 약 100 mg/kg 범위의 투여량이 효과적인 것으로 생각되고, 상기 킬로그램은 치료되는 동물의 체중을 의미한다. 바람직한 범위는 약 10 ng/kg 내지 약 10 μg/kg인 것으로 생각된다. 절대량은 투여를 위해 선택된 조성물, 상기 투여가 단일 또는 다중 투여인지 여부(상기 참고), 및 연령, 신체조건, 크기, 체중을 포함하는 개별적인 환자 변수, 및 질환의 단계를 포함하는, 다양한 요인들에 좌우될 것이다.

투여의 경로 및 계획은 예방, 치료 및/또는 제거되는 질환 또는 장애의 단계 또는 중증도에 따라 달라질 것이고, 숙련된 진료의에 의해 결정된다. 상기 본원에 기술된 지질 소포체를 포함하는 약물은 일반적으로 비경구 투여에 적합할 것이다. 여기서, 상기 약물은 허용가능한 담체, 바람직하게는 수성 담체에 용해되거나 부유된 지질 소포체를 포함한다. 다양한 수성 담체, 예를 들어, 물, 완충된 물, 0.4% 식염수, 0.3% 글리세린, 히알루론산 등이 사용될 수 있다. 이들 조성물은 통상적이고, 공지된 기술에 의해 멸균될 수 있고, 또는 멸균-여과될 수 있다. 그 결과 수성 용액은 그대로 사용을 위해 포장될 수 있고, 또는 동결건조될 수 있는데, 상기 동결건조된 제제는 투여 전에 멸균 용액과 배합된다.

상기 본원에 기술된 지질 소포체를 포함하는 약물은 부가적으로 신체적 조건에 가깝게 만들기 위해 요구되는 것과 같은 약학적으로 허용가능한 보조 물질, 예컨대 pH 조정제 및 완충제, 독성 조정제, 습윤제 등, 예를 들어, 기타 많은 것들 중에서, 소듐아세테이트, 소듐락테이트, 소듐클로라이드, 포타슘클로라이드, 칼슘클로라이드, 소르비탄 모노라우레이트, 트라이에탄올아민 올레이트를 포함할 수 있다. 비경구로 투여가능한 화합물을 제조하기 위한 실질적인 방법은 당업계의 숙련자에게 공지되거나 자명할 것이고, 예를 들어, 본원에 참고로 포함되는, 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy ("Remington's Pharmaceutical Sciences") Gennaro AR ed. 20th edition, 2000: Williams & Wilkins PA, USA]에 상세히 기술된다.

상기 본원에 기술된 지질 소포체를 포함하는 약물은 성인 용량 형태, 예를 들어 정제, 캡슐(각각 시한 분비 및 지연된 분비 제형을 포함), 알약, 분말, 과립, 엘릭시르, 팅크, 용액, 부유액, 시럽 및 유화액으로, 또는 주사에 의한 투여가 가능하도록 제형화될 수 있다. 예를 들면, 정제 또는 캡슐의 형태로 경구 투여를 위하여, 에탄올, 글리세롤, 물 등과 같은 활성 약 성분은 경구, 비-독성 약학적으로 허용가능한 담체와 배합될 수 있다.

유사하게, 상기 본원에 기술된 지질 소포체를 포함하는 약물은 정맥내(볼루스 또는 주입 방법에 의해), 복강내, 피하, 폐색을 수반하거나 수반하지 않는 국소적으로, 또는 근육내 투여를 가능하도록 제형화될 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 본 발명의 용도에 따른 약물은 근육내, 피하, 진피내, 점막내 또는 경피로 투여된다. 모든 이러한 형태는 약학적 분야의 숙련자에게 잘 알려져 있다.

상기 본원에 기술된 지질 소포체를 포함하는 약물이 투여될 수 있는 것에 따른 투약계획 요법은 예를 들어, 환자의 종류, 연령, 체중, 성별 및 의학적 상태, 예방, 치료 및/또는 제거되는 질환 또는 장애의 단계 및 중증도, 및 사용되는 지질 소포체의 특정한 유형을 포함하는 다양한 요인들에 따라 선택된다. 당업계의 숙련된 의사는 감염성 질환 또는 장애의 악성으로의 진행을 예방하고, 대항하고, 또는 정지시키기 위해 요구되는 약물의 유효량을 용이하게 결정하고 처방할 수 있다. 독성 없이 또는 허용가능한 독성을 갖는 효과를 발휘하는 범위의 약물 농도를 달성하는데 있어 최적의 결정은 표적 부위에 대한 지질 소포체의 유용성의 동력학에 근거하는 투약계획을 요구한다. 이 과정은 상기 지질 소포체의 분포, 평형, 및 제거의 고려를 포함하고, 숙련된 전문의의 능력 범위 내이고 단지 통상적인 실험으로 처리될 수 있다.

상기 본원에 기술된 바와 같은 지질 소포체를 포함하는 약물의 일일허용량은 성인에게 1일 10 ng/kg 내지 약 10 μg/kg의 지질 소포체의 범위로 달라질 수 있다. 경구 투여를 위하여, 본 발명의 용도에 따라 제조된 약물은 치료 과정에서 환자의 징후 및 증상에 따라 용량의 대증(symptomatic) 조정을 위하여, 바람직하게는 0.001 내지 1,000 mg, 바람직하게는 0.001, 0.01, 0.05, 0.1, 0.5, 1, 2.5, 10, 20, 50, 100 밀리그램의 지질 소포체를 포함하는 정제의 형태로 제공된다. 본 발명의 용도 실시형태에 따라 제조된 약물 내에서 지질 소포체의 유효량은 보통 1일 약 0.0001 mg/kg 내지 약 50 mg/kg의 체중의 용량 수준에서 제공된다. 더욱 구체적으로는, 상기 범위는 1일 약 0.0001 mg/kg 내지 7 mg/kg의 체중이다.

또한, 상기 본원에 기술된 바와 같은 지질 소포체를 포함하는 약물은 비강내 형태로, 또는 당업계의 숙련자에게 공지된 진피 경로를 통해 투여하는 것이 가능하도록 제형화될 수 있다. 만약 상기 제형이 진피 전달 시스템의 형태로 투여하는 것이 가능하다면, 상기 투여 용량은 용량 투약계획 동안에 간헐적이기보다는 지속적일 것이다.

본 발명의 용도에 따라 제조되는 약물은 예를 들어, 폴리락트산, 폴리엡실론 카프로락톤, 폴리하이드록시 부티르산, 폴리오르쏘에테르, 폴리아세탈, 폴리다이하이드로-피란, 폴리시아노아크릴레이트, 및 하이드로겔의 가교된 또는 양친매성 블록 공중합체를 포함하는, 약물의 제어 분비를 달성하는데 유용한 한 부류의 생분해성 중합체에 연결될 수 있다.

국소 투여를 위해 본 발명의 용도에 따라 제조되는 약물의 적합한 제형은 예를 들어, 용액, 크림, 연고, 겔, 로숀, 샴푸, 또는 피부에의 적용을 위해 개조된 에어로졸 제형일 수 있다. 본 발명의 용도에 따라 제조된 약물을 포함하는 이러한 국소 약학적 조성물은 보통 약학적으로 허용가능한 부형제와의 혼합물로서, 약 0.02% 내지 5 중량%의 활성 화합물, 즉, 지질 소포체를 포함한다.

일반적으로, 상기 본원에 기술된 바와 같은 지질 소포체를 포함하는 약물은 일반적으로 0.02 wt%, 0.05 wt%, 0.08 wt%, 1 wt%, 1 wt% 및 2 wt% 사이, 2 wt%, 2 wt% 및 3 wt% 사이, 3 wt%, 3 wt% 및 4 wt% 사이, 4 wt%, 4 wt% 및 5 wt% 사이 또는 5 wt%의 지질 소포체를 포함할 수 있다.

본 발명의 용도에 따라 제조된 약물이 투여되는 경로와 무관하게, 상기 약물이 유효량으로 투여되는 것이다. 유효량은 단독으로 또는 추가적인 용량과 함께, 소정의 비-특이적 면역자극 반응을 촉진하는 약학적 제제의 양이다.

또한, 요구되거나 필요할 때, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 착색제가 본 발명의 용도에 의해 제조되는 바와 같은 약물 내에 도입될 수 있다. 적합한 결합제는, 제한 없이, 전분, 젤라틴, 글루코스 또는 베타-락토스와 같은 천연 당, 옥수수 감미제, 아카시아, 트라가칸스 또는 알진산나트륨과 같은 천연 및 합성 검, 카르복시메틸 셀룰로스, 폴리에틸렌글리콜, 왁스 등을 포함한다. 이러한 투약계획 형태에 사용되는 윤활제는, 제한 없이, 소듐올레이트, 소듐스테아레이트, 마그네슘스테아레이트, 소듐벤조에이트, 소듐아세테이트, 소듐클로라이드 등을 포함한다. 붕해제는, 제한 없이 전분, 메틸셀룰로스, 한천, 벤토나이트, 잔탄검 등을 포함한다.

본 발명의 용도에 의해 제조되는 바와 같은 약물의 액체 형태는 합성 및 천연 검, 예를 들어, 트라가칸스, 아카시아, 메틸 셀룰로스 등과 같은 현탁화제 또는 분산제에 의해 적절하게 제조될 수 있다. 사용될 수 있는, 기타 분산제는 글리세린 등이다. 비경구 투여를 위하여, 멸균 현탁액 및 용액이 요구된다. 일반적으로 적합한 보존제를 포함하는, 등장성 제제가 정맥내 투여가 요구될 때 사용된다. 상기 활성 약 성분을 포함하는 국소 제제는 예를 들어, 알코올성 용액, 국소 세정제, 스킨 겔, 스킨 로션, 및 크림 또는 겔 제형의 삼푸를 제조하기 위하여, 예를 들어, 알코올, 알로에 베라 겔, 알라토인, 글리세린, 비타민 A 또는 E 오일, 광물유, PPG2 미리스토일 프로피오네이트 등과 같은, 당업계에 잘 알려져 있는 다양한 담체 물질과 혼합될 수 있다.

일 실시형태에서, 본 발명의 용도에 의해 제조되는 바와 같은 약물은 추가로 면역반응, 예를 들어 선천성 면역반응, Thi 또는 Th2 반응을 증강 및/또는 매개하는 1종 이상의 항원보강제를 포함한다. 적합한 항원보강제는 대식세포를 활성화시키고/시키거나 특정한 세트의 림프구를 자극시킴으로써 면역학적 반응을 증강시킬 수 있다. 적합한 항원보강제는 병원체 인지 수용체(PRR)의 활성화에 적합한 임의의 리간드일 수 있다. 면역반응-강화 화합물은 항원보강제(상기 본원에서 정의된 의미 내에서) 또는 사이토카인으로 구분된다. 항원보강제는 항원 저장소(세포외 또는 대식세포 내)를 제공하고, 대식세포를 활성화시키고 특정한 세트의 림프구를 자극함으로써 면역반응을 증강시킬 수 있다.

많은 종류의 항원보강제가 당업계에 잘 알려져 있고; 구체적인 예시에는 프로인트(완전 및 불완전), BCG, M. vaccae, 또는 코리네박테리움 파르븀과 같은 미코박테리아, 콜레라 독소 또는 파상풍 독소, 대장균 열-민감 독소, QS-21(스미스클라인 비참), MF59(키론)과 같은 퀼-사포닌 혼합물 및 다양한 오일/물 유화제(예를 들어, IDEC-AF)가 포함된다. 사용될 수 있는, 기타 항원보강제에는 알루미늄하이드록사이드, 알루미늄포스페이트, 및 칼슘포스페이트와 같은 광물성 염 또는 광물성 겔; 라이소레시틴, 플루로닉, 폴리올, 다음이온, 펩티드, 열쇠구멍삿갓조개 헤모시아닌(keyhole limpet hemocyanins), 및 다이니트로페놀과 같은 표면 활성 물질, 사포닌, 뮤라밀 다이펩티드 및 트라이펩티드 유도체와 같은 면역자극성 분자, CpG 다이뉴클레오티드, CpG 올리고뉴클레오티드, 모노포스포릴 지질 A, 및 폴리포스파젠과 같은 짧은 핵산 신장물, 유화제, 리포좀, 달팽이 껍질(cochleates), 또는 면역자극 착체 항원보강제와 같은 미립자 및 미세미립자 항원보강제가 포함되지만, 이로 제한되는 것은 아니다.

사이토카인이 또한 이들의 림프구 자극 특성으로 인해 유용하다. 인터루킨-2(IL-2), IL-12, GM-CSF 및 많은 다른 것들을 포함하는, 이러한 목적에 유용한 많은 사이토카인이 당업계의 숙련자에게 잘 알려져 있을 것이다. 또한 케모카인 패밀리 유래 리간드, 예컨대 RANTES(Regulated upon Activation, Normal T cell Expressed and Secreted), 그람-양성 세균의 지질단백질, 효모 세포벽 성분, 이중-가닥 RNA, 그람-양성 세균의 지질다당질, 플라젤린, U-풍부 단일-가닥 바이러스 RNA, SOCS-6 siRNA(Suppressor 6f Cytokine Signalling small interfering RNA), Pan DR 에피토프(PADRE) 및 이들의 혼합물이 적합하다.

암 및/또는 전이의 예방, 치료 및/또는 제거를 위하여, 상기 본원에 기술된 지질 소포체를 포함하는 약물은 국소 투여용으로 개조된 약학적으로 허용가능한 담체와 병용하여 투여되도록 제조될 수 있다. 또한, 종양 및/또는 전이, 또는 바이러스 감염의 예방, 치료 및/또는 제거를 위하여, 본 발명의 용도에 의해 제조되는 바와 같은 약물은 이러한 악성을 치료하는데 유용하다고 알려진 기타 제제와 함께 사용될 수 있다. 활성 제제가 동시에 투여될 수 있는, 1종 이상의 활성 제제와의 병용 치료를 위하여, 상기 활성 제제는 동시에 투여될 수 있거나, 이들은 시차를 두고 개별적으로 투여될 수 있다.

상기 본원에 개시된 다양한 실시형태의 요소들이 본 발명의 임의의 특정한 측면 내에서, 그리고 발명의 하나 이상의 측면 사이에서 다른 요소와 자유롭게 조합될 수 있음이 이해된다. 예를 들어, 특정 실시형태의 요소가 이전에 약물의 제조를 위한 지질 소포체의 사용과 관련하여 기술될 수 있다고 하더라도, 이 실시형태의 요소가 이러한 사용과 관련하여 기술되는 다른 실시형태의 요소와 자유롭게 조합될 수 있음이 쉽게 이해될 것이다. 또한, 용도와 관련하여 기술된 동일한 요소는 동일한 지질 소포체를 포함하는 치료 방법에 적용될 수 있고, 이 치료 방법과 관련하여 기술된 실시형태의 요소와 자유롭게 배합될 수 있는 것으로 이해될 것이다.

본 발명의 특정 실시형태 및 하기 실시예는 청구된 발명의 효과를 입증하기 위하여 제공되는 것으로, 발명의 범위를 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 특정 물질이 언급된다는 점에서, 이는 단순히 예시를 목적으로 하는 것이지 발명의 범위를 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 달리 특정되지 않는 한, 문헌 [Voet, Biochemistry, Wiley, 1990; Stryer, Biochemistry, W.H. Freeman, 1995; Bodanszky, Peptide Chemistry. A Practical Textbook, 2nd ed., Springer-Verlag, Berlin, 1993; Sambrook 등,, Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory, 2001; Ausubel 등, (Eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, 2000]에 개시된 것들과 같은, 생화학적 및 분자생물학적 과정들이 사용된다. 당업계의 숙련자는 발명의 능력의 연습 없이 그리고 발명의 범위를 벗어남이 없이 동등한 수단 또는 반응물을 개발할 수 있다.

많은 변화가 여전히 본 발명의 범위 내에서 유지되면서 본원에 기술된 조성물 및 과정에 이루어질 수 있는 것으로 이해될 것이다. 이러한 변화가 본 발명의 범위 내에 포함되는 것이 본 발명자들의 의도이다.

도 1은 마우스에서 종양 성장에 대한 노출된 바이로솜의 효과를 나타낸 것이다. 상기 도면은 종양 세포가 주사되고, 이어서, 2종의 시료 중 하나: 즉 대조군(열린 원)으로 식염수 용액; 및 빈 바이로솜(막힌 다이아몬도)이 매주 주사된 마우스에서 종양 성장을 관찰한 결과이다. 상기 결과는 노출된, 즉 빈 바이로솜의 주사가 대조군의 주사보다 실험 기간의 말미에 유의미하게 많은 무-종양 마우스를 유발함을 보여준다.

도 2는 라 크로세 바이러스의 증식에 대한 노출된 바이로솜의 보호 효과를 나타낸 것이다. 상기 도면은 라 크로세 바이러스로 시험감염된 마우스의 생존을 관찰한 결과이다. 상기 마우스는 바이러스 시험감염 전에 4종의 시료 중의 하나: 즉 라 크로세 바이러스 당단백질을 인코딩하는 DNA를 피막화하는 바이로솜(열린 세모); 빈 바이로솜(막힌 다이아몬도); 라 크로세 바이러스 당단백질을 발현하는 DNA를 포함하는 DNA 벡터 단독(열린 네모); 및 라 크로세 바이러스 당단백질을 발현하는 DNA가 결여된 DNA 벡터 단독(열린 원)으로 주사되었다. 상기 결과는 노출된 바이로솜으로의 처리가 라 크로세 바이러스 당단백질을 발현하는 DNA가 결여된 DNA 벡터 대조군에 비하여 향상된 생존율을 나타냄을 보여준다.

도 3A 및 3B는 렙토스피라 인테로간스 감염의 진행에 대한 빈 바이로솜의 보호 효과를 나타낸 것이다. 상기 도면은 세균 렙토스피라 인테로간스로 시험감염된 저빌의 생존율을 관찰한 결과이다. 상기 저빌은 세균 시험감염 전에 빈 인플루엔자 바이로솜(흐린 다이아몬도)이 주사되었다. 음성 대조군으로 "비처리된" 저빌이 시험감염되었다(열린 원).

도 4는 HSV-2 시험감염 실험의 실험적 설계 개요를 나타낸 것이다. 상기 도면은 빈 바이로솜이 HSV-2의 치명적인 시험감염 전 및 후에 이어서 수차례 진피내 및 비강내로 투여되었음을 보여준다.

도 5A는 PBS 대조군- 및 HSV 백신-처리된 마우스와 비교하여 HSV-2 감염의 진행에 있어서 전체적인 생존에 대한 빈 바이로솜의 효과를 나타낸 것이다. 10마리 마우스의 그룹을 0일째에 질 내로 투여되는 HSV-2 G 균주로 시험감염시켰다. 빈 바이로솜을 진피내("i.d.", 열린 세모) 및 비강내("i.n.", 열린 원) 모두로 투여하였다. PBS 대조군을 투여받은 마우스의 생존율은 막힌 다이아몬드로 나타내었고, 시험감염 전 34일 및 20일 전에 HSV 백신을 투여받은 마우스의 생존율은 막힌 네모로 나타내었다. 상기 결과는 빈 바이로솜으로의 처리가 PBS-처리된 대조군 마우스에 비하여 향상된 생존율을 나타냄을 보여준다. 놀랍게도, 빈 바이로솜으로 진피내 처리된 마우스에서 관찰되는 생존율은 사전에 HSV-특이적인 면역접종을 받은 마우스에서 관찰되는 생존율과 동일하였다. 또한, 비강으로 빈 바이로솜을 투여받은 마우스는 사전에 HSV-특이적인 면역접종을 받은 마우스에서 관찰되는 생존율보다 단지 10% 낮은 25-일 생존율을 나타내었다.

도 5B는 PBS 대조군- 및 HSV 백신-처리된 마우스와 비교하여 HSV-2 감염의 진행에 있어서 임상 점수에 대한 빈 바이로솜의 효과를 나타낸 것이다. 10마리 마우스의 그룹을 0일째에 질 내로 투여되는 HSV-2 G 균주로 시험감염시켰다. 빈 바이로솜을 진피내("i.d.", 열린 세모) 및 비강내("i.n.", 열린 원) 모두로 투여하였다. PBS 대조군을 투여받은 마우스의 임상 점수는 막힌 다이아몬드로 나타내었고, 시험감염 전 34일 및 20일 전에 HSV 백신을 투여받은 마우스의 임상 점수는 막힌 네모로 나타내었다. 상기 결과는 빈 바이로솜으로 처리된 마우스가 PBS 대조군 처리에 이어 HSV-2 바이러스에 노출(시험감염)된 마우스에 비하여 덜 심각한 질환 증상을 체험하게 됨을 보여준다. 특히, 진피내 투여 경로로 빈 바이로솜을 투여받은 마우스에서의 질환 증상의 중증도는 사전에 HSV-특이적 백신을 투여받은 마우스에서보다 단지 약간 더 심각하였다.

도 6은 면역 시스템의 선천부 및 적응부 사이의 일정한 특성 및 상호관계를 보여주는 개요도이다.

실시예 1( 제조예 ): 제조 및 실례에 사용되는 시약

시약: 옥타에틸렌글리콜-모노-(n-도데실)에테르(OEG, Ci2E8)는 플루카 케미 지엠비에이치 (Fluka Chemie GmbH, 스위스, 부크스 소재)로부터 구입한다. 수크로스(Eur. Phar.)는 머크(스위스, 디티콘 소재)로부터 구입한다. 달걀 포스파티딜 콜린(PC)은 리포이드(Lipoid, 스위스, 참 소재)로부터 입수한다. 1-올레일-3-팔미 토일-rac-글리세로-2-포스포에탄올아민은 벳헴(Bachem, 스의스, 부벤도르프 소재)로부터 입수한다. 바이오-비드 SM2는 바이오-라드 래보러토리즈(스위스, 글라츠버그 소재)로부터 구입한다. 콜레스테릴 N-(트라이메틸암모니오에틸)카바메이트 염화물(TC-chol)은 머크 에프로바(Merck Eprova, 스위스, 샤프하우젠 소재)로부터 구입한다.

발육란의 요막공간 내에서 번식시킨, A/싱가포르/6/86(A/Sing) 균주의 인플루엔자 바이러스 및 다른 인플루엔자 A 균주(Gerhard, W. (1976), J. Exp. Med. 144:985-995)는 베르나 바이오테크 AG(Berna Biotech AG, 수위스, 베른 소재)로부터 입수하여 기술된 바와 같이 정제하였다(Skehel, J. 등,,(1971); Virology 44:396). 헤마글루티닌/인지질 비율은 문헌[B?ttcher 등, (1961). Anal. Chim. Acta 24, 203], 및 문헌[Ball (1986). Anal. Biochem. 155, 23]에 기술된 바와 같은 쿠마시-추출 방법을 이용한 SDS-PAGE 후 HA-정량에 따라 결정하였다.

실시예 2( 제조예 ): 인플루엔자 바이로솜으로서 표준 바이로솜의 제조

4 ml의 최종 부피에 대해, 32 mg 달걀 PC 및 8 mg OPPE를 3 ml의 PBS, 100 mM OEG(PBS/OEG)에 용해시킨다. 불활성화 인플루엔자 A/싱가포르/6/86 바이러스 또는 다른 인플루엔자 A 균주의 2 mg HA를 4℃에서 100,000× g로 1시간 동안 원심분리하고 펠렛을 1 ml의 PBS/OEG에 용해시킨다. 변성제 용해된 인지질 및 바이러스를 혼합하고 1시간 동안 초음파 처리한다. 이 혼합물을 18℃에서 100,000× g로 1시간 동안 원심분리한다. 교반하면서 실온에서 각 1시간 동안 1.5 g의 습식 SM2 바이오-비드를 이용한 2회의 변성제 제거에 의해 바이로솜이 형성된다. 그 후에 새롭게 형성된 바이로솜을 멸균 여과한다(0.22 μm).

실시예 3( 제조예 ): TC - Chol 을 함유하는 바이로솜의 제조

TC-Chol을 함유하는 바이로솜을 변성제 제거 방법에 의해 제조한다. 4 ml의 최종 부피에 대해, 32 mg 달걀 PC, 8 mg OPPE 및 5 mg 콜레스테릴 N-(트라이메틸암모니오에틸)카바메이트 염화물(TC-chol)을 2.6 ml의 PBS, 100 mM OEG(PBS/OEG)에 용해시킨다. 불활성화된 A/싱가포르/6/86 인플루엔자 바이러스 또는 다른 인플루엔자 A 균주의 2 mg HA를 4℃에서 100,000× g로 1시간 동안 원심분리하고 펠렛을 1 ml의 PBS/OEG에 용해시킨다. 변성제 용해된 인지질 및 바이러스를 0.4 ml의 50 %(w/v) 수크로스와 혼합하고 1분간 초음파 처리한다. 이 혼합물을 18℃에서 100,000× g로 1시간 동안 원심분리한다. 교반하면서 실온에서 각 1시간 동안 1.5 g의 습식 SM2 바이오-비드를 이용한 2회의 변성제 제거에 의해 바이로솜이 형성된다. 그 후에 새롭게 형성된 바이로솜을 멸균 여과하고(0.22 μm) 멸균 유리 바이알에 분주한다. 밀봉된 바이알을 -70℃에서 냉동시킨 후 -40℃에서 20시간 동안 및 10℃에서 2시간 동안 동결 건조한다. 밀봉된 바이알을 사용 전까지 냉동된 상태로 보관한다.

실시예 4(실례): 빈 바이로솜(empty virosome)을 이용한 비-특이적 면역자극이 마우스에서 종양 부하를 감소시킴

하기 실험은 치료적 사용을 위한 암 백신의 개발이라는 측면에서 수행된다. 상기 백신은 종양이 이미 신체 내에 발생된 경우에 적용되도록 의도된다. 이는 바이로솜을 이용한 면역접종이 상기 종양에 대한 특이적 면역반응을 종양세포가 성장하는 것을 완벽하게 제거하기에 충분한 수준으로 증강시키는 것으로 의도된다.

일생의 어느 과거 시점에서 자연적으로 인플루엔자에 감염된 적이 있는 사전-면역된 인간의 상황을 모사하기 위하여 8 내지 10주령 암컷 C57BI/6 마우스를 1 μg 헤마글루티닌을 함유하는 불활성화 인플루엔자 바이러스로 사전-면역시켰다. 3주 후, 10,000 B16 종양세포를 피하로 주사하였다. 2주 후, kg 체중 당 약 1-25 mg의 빈 바이로솜으로의 면역접종이 개시되었고 이는 9주간 일주일 간격으로 지속되었다.

상기 실험은 두 처리 그룹을 포함하였다. 각각의 개별적인 그룹 내 마우스는 다음과 같이 처리하였다:

그룹 1: 인산염-완충 식염수(도 1에서 "식염수 용액"; 열린 원)

그룹 2: 달걀-유래 인지질 및 용해된 인플루엔자 외피로 구성된 표준 (빈) 바이로솜(도 1에서 "빈 바이로솜"; 막힌 다이아몬드)

처리기간 동안에, 종양 발생 여부에 대해 동물들을 면밀히 관찰되었다. 육안으로 식별가능한 종양이 발생된 마우스는 안락사시켰다. 따라서 본 연구의 결과 해석은 관찰 기간 내내 각 그룹당 종양이 형성되지 않은 마우스의 개수였다. 상기 결과를 도 1에 나타내었다. 도 1에 나타난 바와 같이, 빈 바이로솜으로 처리된 마우스의 50%가 유의미하게 보호된 반면(도 1에서 막힌 다이아몬드; "빈 바이로솜"), 식염수 대조군으로 처리된 마우스의 단지 20%만이 종양이 형성되지 않았다(도 1에서 열린 원; "식염수 용액").

결론적으로, 노출된(naked) 바이로솜의 투여가 상당한 수의 종양-부하된 마우스에서 종양의 근절을 야기하였다.

실시예 5(실례): 노출된 바이로솜을 이용한 비-특이적 면역자극이 라 크로세( La Crosse ) 바이러스에 감염된 마우스에서 생존율을 증가시킴

본 실험은 원래 라 크로세 바이러스에 대한 DNA-계 백신의 전달 부형제로서 바이로솜을 평가하기 위하여 수행되었다. 바이러스 항원의 플라스미드 유입 및 발현을 증가시키기 위하여 라 크로세 바이러스의 바이러스 당단백질(VR1012-G1G2)을 암호화하는 플라스미드 DNA를 바이로솜 내로 패키징한다.

타입 I 인터페론에 대한 수용체가 결여되게 유전적으로 변형된 마우스(IFNAR-I-/- 마우스)는 바이러스 감염에 보다 걸리기 쉽고 따라서 라 크로세 바이러스에 적합한 시험 모델이다. 일생의 어느 과거 시점에서 자연적으로 인플루엔자에 감염된 적이 있는 사전-면역된 인간의 상황을 모사하기 위하여 상기 마우스를 인플루엔자로 사전-면역시키고, 단일 용량의 원형 라 크로세 백신(또는 하기에 지시된 바와 같은 대조군 제형)을 10일 후에 투여하였다. 감염유발량 단위(infectious unit)의 용량으로 생바이러스를 이용한 시험을 4주 후에 수행하였다. 상기 동물의 생존을 감염 후 24시간 동안 관찰하였다. 하기 그룹이 본 실험에 포함되었다:

1. 바이로솜과 함께 라 크로세 당단백질을 발현하는 DNA 벡터(도 1에서 "바이로솜과 DNA 백신"; 열린 세모)

2. DNA 없이 바이로솜(도 2에서 "빈 바이로솜"; 막힌 다이아몬드)

3. 라 크로세 당단백질을 발현하는 DNA 벡터 단독(도 2에서 "DNA 백신 단독"; 열린 네모)

4. 라 크로세 당단백질을 발현하지 않는 DNA 벡터 단독(도 2에서 "빈 DNA 벡터"; 열린 원)

연구 결과를 도 2에 나타내었다. 도 2에 나타난 바와 같이, 빈 바이로솜은 단독으로 투여될 때 라 크로세 바이러스 당단백질을 발현하는 DNA 벡터와 동일한 우수한 보호를 제공하였다. 각각의 경우에, 60%의 동물이 보호되었다. 이와 비교하면, DNA 벡터와 바이로솜이 투여된 그룹은 70%의 보호율을 나타내었다. 음성 대조군으로서, 라 크로세 바이러스 당단백질을 발현하지 않는 DNA 벡터가 투여되었다. 이는 여전히 30%의 보호율을 나타내었다.

면역접종과 시험감염 사이의 3주의 간격이 적응성 면역의 발생을 위해 요구될 수 있지만, 노출된 바이로솜에 의해 명시되는 비-특이적 보호 효과의 평가에는 차선책인 것으로 보인다. 그러나 이러한 차선의 투여에도 불구하고, 라 크로세-유래 DNA를 피막화하는 바이로솜으로서 그렇게 효과적인 것은 아니지만, 노출된(즉, 빈) 바이로솜을 이용한 초기 면역접종은 대조군에 비하여 생존율을 약 30% 향상시키기에 충분한 비-특이적 면역자극 효과를 유발하였다.

실시예 6(실례): 노출된 바이로솜을 이용한 비-특이적 면역자극이 세균 렙토스피라 인테로간스로 감염된 저빌(gerbil)에서 생존율을 증가시킴

본 실험을 렙토스피라 인테로간스에 대한 예방 백신의 개발이라는 측면에서 수행하였다. 렙토스피라 인테로간스에 2종의 서로 다른 시험감염 용량이 사용되었다. 바이로솜을 실시예 2("빈 인플루엔자 바이로솜")에 개시된 바와 같이 제조하였다.

저빌을 시험감염 2주 전에 생바이러스로 면역접종 하였다. 상기 시험감염은 개별적인 도 3A 및 3B에 지시된 바와 같이, 병원체의 다른 용량으로 수행되었다.

1. 음성 대조군: 비처리 동물(도 3A 및 3B에서 "neg 대조군"; 열린 원)

2. 빈 바이로솜 (도 3A 및 3B에서 "빈 인플루엔자 바이로솜"; 흐린 다이아몬드)

상기 결과를 도 3A 및 3B에 나타내었다. 도 3A 및 3B에 나타난 바와 같이, 어떠한 동물도 세균 감염에 생존하지 못하였지만, 빈-바이로솜으로 사전-처리된 동물은 비처리된 대조군 동물 보다 오래 생존하였다.

실시예 7(실례): 노출된 바이로솜을 이용한 비-특이적 면역자극이 단순헤르페스 바이러스 2(" HSV -2")로 감염된 마우스에서 생존율을 증가시키고 질환의 중증도를 완화시킴

본 실험은 바이로솜의 항원성 구성요소와 전혀 무관한 감염성 질환에 대해 인플루엔자 바이로솜의 비특이적인 보호 효과를 평가하고 확인하기 위하여 수행되 었다. 본 실험에서, HSV-2가 시험감염 병원체로 사용되었다. 실험 과정은 단순헤르페스 바이러스 유형 2(HSV-2)에 대해 마우스에서 사전에 확립된 시험 모델을 근거로 하였다. 실험에 사용된 모든 마우스는 실험의 개시 시점에 6-8주령의 암컷 Balb/C 마우스였다.

본 실험에 사용된 바이로솜을 상기 실시예 2에 기재된 바와 같이 제조하였다. 본 실험의 결과 해독은 일일 임상 점수 및 생존율로 이루어졌다. 바이로솜의 보호 효과는 인산염 완충 식염수("PBS")의 대조군 처리를 받은 그룹과 바이로솜을 받은 그룹의 비교에 의해 결정되었다. 또한, 상기 HSV-2 시험감염은 공지된 보호 효과를 갖는 특이적(적응적) 면역성을 유도하도록 고안된 통상적인 생-약독화 백신이 투여된 양성 대조 그룹을 포함하였다.

특이적 백신의 조절에 있어서, 바이로솜의 항원보강 효과가 선재성(pre-existing) 면역에 의해 상당히 증가됨이 반복적으로 입증되었다. 따라서, 모든 실험에서 사전-면역된 동물을 사용하는 것으로 결정하였다. 이를 위해, 동물들을 PBS에 재현탁된 1 마이크로그램 HA를 포함하는 정제된, 불활성화 인플루엔자 바이러스의 근육내 주사로 시험감염 4주 전에 면역접종 하였다. 실시예 4에서 상기에 설명된 바와 같이, 본 실험에 사용된 마우스를 또한 일생의 어느 과거 시점에서 자연적으로 인플루엔자에 감염된 적이 있는 사전-면역된 인간의 상황을 모사하기 위하여 1 μg 헤마글루티닌을 포함하는 불활성화 인플루엔자 바이러스로 사전-면역접종 하였다.

바이로솜 적용 시기 조절은 바이로솜에 의해 부여되는 비-특이적 보호 효과 가 대부분 단명한다는 가정에 근거하였다. 따라서 HSV-2를 이용한 시험감염 전 및 후에 바로 반복된 투여가 비-특이적 효과를 검출하는데 가장 합리적인 접근법으로 생각되었다. 동시에, 바이로솜 투여 및 HSV-2를 이용한 시험감염 사이에 선정된 시간(5일 이하)이 인플루엔자에 대한 특정 면역을 완전히 증폭시키기에는 명백히 너무 짧은(7-14일) 것으로 결정되었고, 이로 인해 관찰된 임의의 효과가 바이로솜성 HA 단백질로 인한 인플루엔자에 대한 특이적 면역접종에 기여할 수 있다는 후속 분석에 있어서의 가능성을 배제시켰다. 적용된 바이로솜 용량은 20 내지 40 마이크롬 HA 범위로, 이는 선택된 적용 경로에 대해 기술적으로 가능한 근접-최대 용량을 나타내었다.

백신-제어 마우스를 위한 생-약독화 백신을 사전에 확립된 스케줄과 용량에 따라 투여하였다. 본 연구 0일째에 상기 약독화 HSV KOS 균주의 8,000 플라크 형성 단위("pfu")를 상기 마우스의 오른쪽 발바닥에 진피내로 접종하고 14일째에 400,000 pfu를 추가 접종하였다. 이들 동물은 특이적 예방접종에 의한 가능한 간섭을 피하기 위하여 인플루엔자로 사전-접종하지 않았다. 시험감염 1주일 전에 모든 그룹은 이들의 월경 주기를 차단하기 위하여 5 mg 메드록시프로메드록시프로게스테론 아세테이트(Depo Provera 150, Pfizer)의 피하 주사를 받았다.

34일째, 모든 마우스를 10 μl의 부피로 질 내에 투여되는 HSV-2 G 균주의 치명적인 바이러스 용량(1000 pfu)으로 시험감염을 수행하였고, 임상 증상 및 생존율을 이어서 매일 기록하였다.

바이로솜 또는 PBS 대조군을 이용한 처리의 개요를 도 4에 나타내었다. 도 4에 나타난 바와 같이, 상기 마우스는 HSV-2 시험감염 전 및 후 모두에 총 5회 용량의 빈 바이로솜 또는 PBS 대조군을 투여받았다. 구체적으로 빈 바이로솜 또는 PBS 대조군은 HSV-2 시험감염 전에 1회 투여되는 반면, 나머지 4회의 투여는 시험감염 후에 수행되었다. 비강내 적용이 자일라진(Xylazine, 0.3 mg/동물)을 이용한 진정 하에서 수행되었고, 10 μl가 각각의 콧구멍 내로 적용되어, 각 비강내 적용에는 20 μg HA의 총 용량이 사용되었다. 각각의 진피내 적용은 40 μg HA를 포함하는 40 μl의 주사를 포함하였다.

시험감염 후, 동물들을 매일 관찰하여 공인된 점수 도표에 따라서 각 동물에 대해 임상 점수를 평가하였다(Natuk 등, (2006). Journal of Virology 80(9), 4447-57). 임상 점수 도표를 하기 표 1에 나타내었는데, 보다 높은 임상 점수 순위는 보다 심각한 질환 증상을 나타내고, 보다 낮은 임상 점수 순위는 덜 심각한 질환 증상을 나타낸다.

표 1: 문헌[Natuk 등, (2006)]에 따른 임상 점수 도표

증상	임상 점수
질환의 징후 없음	0
질내 홍반	1
질내 홍반 및 부종	2
질내 헤르페스 병소	3
생식기 궤양화, 탈모, 편측성 마비	4
양측성 마비 또는 사망	5

마비를 보이는 거의 죽어가는 동물은 안락사시켰다. 동물들을 시험감염 후 25일간 관찰하였다. 미가공 데이터를 이어서 생존율 및 일일 임상 점수와 관련하여 그룹간의 차이에 대해 분석하였다. 통계학적 분석을, 예를 들어 문헌["Statistische Prinzipien for medizinische Projekte" ("Statistical principles for medical projects"), by J. H?sler & H. Zimmermann; 4th Edition, 2006; Verlag Hans Huber, Hogrefe AG, Bern; pages 116-121]에 공개된 바와 같은 윌콕슨 순위 합계 검사(Wilcoxon rank sum test)를 이용하여 수행하였다.

시험감염 후 0-25일 후 하기 그룹의 마우스의 생존율과 관련한 결과를 도 5A에 나타내었다:

1. PBS 대조군을 투여받은 마우스(도 5A에서 "PBS"; 막힌 다이아몬드);

2. 생-약독화된 HSV-특이적 백신을 투여받은 마우스(도 5A에서 "백신(HSV KOS)"; 막힌 네모);

3. 진피내 투여 경로에 의해 빈 바이로솜을 투여받은 마우스(도 5A에서 "바이로솜 i.d."; 열린 삼각형); 및

4. 투여 경로에 의해 빈 바이로솜을 투여받은 마우스(도 5A에서 "바이로솜 i.n."; 열린 원).

도 5A는 HSV 시험감염 후에 PBS-처리된 대조군 마우스의 25-일 생존율은 단지 50%인 반면, HSV 백신-처리된 마우스의 생존율은 100%였음을 명백하게 보여준다. 놀랍게도, 진피내 경로를 통한 노출된 바이로솜의 투여가 25일째에 HSV 감염에 대해 100%의 생존율을 나타내었는데, 이는 HSV-특이적 사전-면역접종에 의해 부여되는 보호와 동일한 수준이었다. 비강 경로를 통해 투여되는 바이로솜에 의해 부여되는 보호는 이보다 약간 낮은 90%였다. 종합적으로, 이어서, 빈/노출된 바이로솜이 상기 바이로솜 내/상에 포함된 바이러스 외피 단백질과 관련이 없는 질환에 대해 보호를 제공하는; 즉, 빈/노출된 바이로솜이 비-특이적인 면역증강을 유도할 수 있는 것으로 결론내릴 수 있다. 또한, 유도되는 면역증강의 크기는 특이적 사전-면역접종에 의해 부여되는 것과 동일한 수준이다.

도 5A와 관련하여 상기에 기술된 바와 같은 동일한 그룹의 마우스의 임상 점수에 대한 결과를 도 5B에 나타내었다. 도 5B는 HSV 시험감염 후에 PBS-처리된 대조군의 25-일 임상 점수는 약 3.5(훨씬 심각)인 반면, HSV 백신-처리된 마우스의 임상 점수는 약간 1 이상(덜 심각)임을 명백하게 보여준다. 중요하게도, 진피내 투여된 빈 바이로솜은 PBS-처리된 대조군에 비하여 질환 증상의 중증도를 HSV-특이적 백신으로 사전에 처리되었던 마우스에 상응하는 수준으로 감소시켰다. 반대로, 비강 투여 경로를 통해 빈 바이로솜을 투여받은 마우스가 체험하게 되는 것보다 단지 약간 덜한 중증도의 질환 증상을 체험하였다. 따라서 빈 바이로솜의 진피내 투여가 빈 바이로솜의 비강내 투여보다 더 강력한 면역강화 효과를 가지고 있는 것으로 보인다.

종합하면, 빈 바이로솜의 비강내 투여뿐만 아니라 진피내 투여가 마우스에서 HSV 감염에 대한 생존율을 증가시키고, HSV에 감염되었지만 노출된 바이로솜 대신에 PBS 대조군을 투여받은 마우스에 비하여 마우스에서 이러한 감염의 중증도를 감소시키는 것으로 결론내릴 수 있다. 이러한 비-특이적 보호 효과는 양측 모두 측정 결과 비강내 투여된 빈 바이로솜보다 진피내에서 더 높았고, 진피내 투여된 바이로솜을 이용하여 달성되는 이러한 보호 효과는 특이적 HSV 백신에 의해 달성되는 것과 동일하거나 다만 약간 낮은 수준이었다. 이러한 보호는 투여된 빈 바이로솜이 인플루엔자 유래 바이러스 외피 단백질(HA)을 보유하지만, HSV-특이적인 항원이 아니기 때문에 비-특이적이다. 마지막으로, 상기 실험에 사용된 시험감염 용량은 1 LD50("치사량 50%", 동물의 50%가 사망할 것으로 예상되는 용량을 의미함)에 상응하는 것으로 이해되어야 한다. 더 높은 시험감염 용량 또는 보다 치명적인 시험감염 균주가 보다 특징적인 결과를 제공할 수 있다. 또한, 빈 바이로솜의 적용 용량 및 스케줄은 이론적이었다. 이러한 이유로 인해, 상기 관찰된 보호 효과는 빈 바이로솜의 완전한 보호능을 반영하지 않을 수 있다.

Claims

질환 또는 장애를 예방 및/또는 치료하기 위해 동물의 면역반응을 비-특이적으로 자극하기 위한 약물의 제조를 위한, 그의 지질막 내에, 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질을 포함하는 지질 소포체의 용도.
제1항에 있어서, 상기 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질이 인플루엔자 바이러스 외피 단백질인 용도.
제2항에 있어서, 상기 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질이 헤마글루티닌(hemagglutinin, HA) 또는 뉴라미다제(neuraminidase, NA)인 용도.
제2항에 있어서, 상기 바이러스 외피 단백질이 헤마글루티닌(HA) 및 뉴라미다제(NA)인 용도.
제1항에 있어서, 상기 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질이 하기로부터 선택되는 바이러스 외피 단백질인 용도:

수포성 구내염 바이러스(VSV)의 G 단백질;

샘리키 삼림열 바이러스(SFV)의 E1 단백질; 및/또는

센다이 바이러스의 F 단백질;

C형 간염 바이러스(HCV)의 E-단백질;

호흡기 세포융합 바이러스 (RSV)의 F-단백질;

호흡기 세포융합 바이러스 (RSV)의 G-단백질.
제1항 내지 제5항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 질환 또는 장애가 감염성, 비감염성, 종양성, 면역성 또는 대사성 질환 또는 장애인 용도.
제6항에 있어서, 상기 감염성 질환 또는 장애가 바이러스성, 세균성, 진균성, 기생충성 또는 프리온성 질환 또는 장애인 용도.
제6항에 있어서, 상기 종양성 질환 또는 장애가 암인 용도.
제8항에 있어서, 상기 암이 육종, 백혈병, 림프종, 골수종, 흑색종, 샘종, 암종, 융모막암종, 가스트린종, 크롬친화세포종, 프로락틴분비종양, 성숙 T-세포 백혈병/림프종 또는 신경종인 용도.
제6항에 있어서, 상기 면역성 질환 또는 장애가 면역억제를 특징으로 하는 질환 또는 장애인 용도.
제1항 내지 제10항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 약물이 적어도 두 개의 질환 또는 장애에 대한 면역반응을 동시에 비-특이적으로 자극하기 위한 것인 용도.
제1항 내지 제11항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 동물이 포유동물인 용도.
제12항에 있어서, 상기 포유동물이 인간, 침팬지, 시노몰로구스 원숭이(cynomologous monkey), 긴팔원숭이, 시미안 원숭이(simian monkey), 긴꼬리 원숭이(macaque monkey), 생쥐, 쥐, 고양이, 개, 말, 토끼, 낙타, 라마, 반추동물, 말, 돼지로부터 선택되는 용도.
제13항에 있어서, 상기 반추동물이 젖소, 황소, 염소, 양, 들소, 버팔로, 사슴 및 수사슴으로부터 선택되는 용도.
제1항 내지 제14항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 약물이:

정맥내, 근육내, 진피내, 피하, 복강내, 비경구로, 국소적으로, 국부적으로, 경구로, 설하 또는 양치질에 의한 투여에 적합하고/하거나

주사제 용액으로, 부착포로, 분무제로, 좌약으로, 양치질 용액으로 또는 점적제로 제형화되거나 제제화되는 용도.
제1항 내지 제15항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 지질 소포체가 바이로솜(virosome)인 용도.
제16항에 있어서, 상기 바이로솜이 면역강화 재구성된 인플루엔자 바이로솜("인플루엔자 바이로솜"), 또는 키메라 바이로솜인 용도.
제17항에 있어서, 상기 인플루엔자 바이로솜 또는 키메라 바이로솜이 키메라 인플루엔자 바이로솜인 용도.
질환 또는 장애를 예방 및/또는 치료하기 위해 동물의 면역반응을 비-특이적으로 자극하는데 사용하기 위한, 그의 지질막 내에, 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질을 포함하는 지질 소포체.
제19항에 있어서, 상기 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질이 인플루엔자 바이러스 외피 단백질인 지질 소포체.
제20항에 있어서, 상기 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질이 헤마글루티닌(HA) 또는 뉴라미다제(NA)인 지질 소포체.
제20항에 있어서, 상기 바이러스 외피 단백질이 헤마글루티닌(HA) 및 뉴라미 다제(NA)인 지질 소포체.
제19항에 있어서, 상기 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질이 하기로부터 선택되는 바이러스 외피 단백질인 지질 소포체:

수포성 구내염 바이러스(VSV)의 G 단백질;

샘리키 삼림열 바이러스(SFV)의 E1 단백질; 및/또는

센다이 바이러스의 F 단백질;

C형 간염 바이러스(HCV)의 E-단백질;

호흡기 세포융합 바이러스 (RSV)의 F-단백질;

호흡기 세포융합 바이러스 (RSV)의 G-단백질.
제19항 내지 제23항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 질환 또는 장애가 감염성, 비감염성, 종양성, 면역성 또는 대사성 질환 또는 장애인 지질 소포체.
제24항에 있어서, 상기 감염성 질환 또는 장애가 바이러스성, 세균성, 진균성, 기생충성 또는 프리온성 질환 또는 장애인 지질 소포체.
제24항에 있어서, 상기 종양성 질환 또는 장애가 암인 지질 소포체.
제26항에 있어서, 상기 암이 육종, 백혈병, 림프종, 골수종, 흑색종, 샘종, 암종, 융모막암종, 가스트린종, 크롬친화세포종, 프로락틴분비종양, 성숙 T-세포 백혈병/림프종 또는 신경종인 지질 소포체.
제24항에 있어서, 상기 면역성 질환 또는 장애가 면역억제를 특징으로 하는 질환 또는 장애인 지질 소포체.
제19항 내지 제28항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 지질 소포체가 적어도 두 개의 질환 또는 장애에 대한 면역반응을 동시에 비-특이적으로 자극하기 위한 것인 지질 소포체.
제19항 내지 제29항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 동물이 포유동물인 지질 소포체.
제30항에 있어서, 상기 포유동물이 인간, 침팬지, 시노몰로구스 원숭이, 긴팔원숭이, 시미안 원숭이, 긴꼬리 원숭이, 생쥐, 쥐, 고양이, 개, 말, 토끼, 낙타, 라마, 반추동물, 말, 돼지로부터 선택되는 지질 소포체.
제31항에 있어서, 상기 반추동물이 젖소, 황소, 염소, 양, 들소, 버팔로, 사슴 및 수사슴으로부터 선택되는 지질 소포체.
제19항 내지 제32항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 약물이:

정맥내, 근육내, 진피내, 피하, 복강내, 비경구로, 국소적으로, 국부적으로, 경구로, 설하 또는 양치질에 의한 투여에 적합하고/하거나

주사제 용액으로, 부착포로, 분무제로, 좌약으로, 양치질 용액으로 또는 점적제로 제형화되거나 제제화되는 지질 소포체.
제19항 내지 제33항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 지질 소포체가 바이로솜인 지질 소포체.
제34항에 있어서, 상기 바이로솜이 면역강화 재구성된 인플루엔자 바이로솜("인플루엔자 바이로솜"), 또는 키메라 바이로솜인 지질 소포체.
제35항에 있어서, 상기 인플루엔자 바이로솜 또는 키메라 바이로솜이 키메라 인플루엔자 바이로솜인 지질 소포체.
그의 지질막 내에, 적어도 하나의 외피 단백질을 포함하는 지질 소포체를 동물에게 투여하는 것을 포함하는, 질환 또는 장애를 치료하거나 예방하기 위하여 동물의 면역반응을 비-특이적으로 자극하는 방법.
제37항에 있어서, 상기 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질이 인플루엔자 바이러스 외피 단백질인 방법.
제38항에 있어서, 상기 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질이 헤마글루티닌(HA) 또는 뉴라미다제(NA)인 방법.
제38항에 있어서, 상기 바이러스 외피 단백질들이 헤마글루티닌(HA) 및 뉴라미다제(NA)인 방법.
제37항에 있어서, 상기 적어도 하나의 바이러스 외피 단백질이 하기로부터 선택되는 바이러스 외피 단백질인 방법:

수포성 구내염 바이러스(VSV)의 G 단백질;

샘리키 삼림열 바이러스(SFV)의 E1 단백질; 및/또는

센다이 바이러스의 F 단백질;

C형 간염 바이러스(HCV)의 E-단백질;

호흡기 세포융합 바이러스 (RSV)의 F-단백질;

호흡기 세포융합 바이러스 (RSV)의 G-단백질.
제37항 내지 제41항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 질환 또는 장애가 감염성, 비감염성, 종양성, 면역성 또는 대사성 질환 또는 장애인 방법.
제42항에 있어서, 상기 감염성 질환 또는 장애가 바이러스성, 세균성, 진균성, 기생충성 또는 프리온성 질환 또는 장애인 방법.
제42항에 있어서, 상기 종양성 질환 또는 장애가 암인 방법.
제44항에 있어서, 상기 암이 육종, 백혈병, 림프종, 골수종, 흑색종, 샘종, 암종, 융모막암종, 가스트린종, 크롬친화세포종, 프로락틴분비종양, 성숙 T-세포 백혈병/림프종 또는 신경종인 방법.
제42항에 있어서, 상기 면역성 질환 또는 장애가 면역억제를 특징으로 하는 질환 또는 장애인 방법.
제37항 내지 제46항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 적어도 두 개의 질환 또는 장애에 대한 면역반응을 동시에 비-특이적으로 자극하기 위한 것인 방법.
제37항 내지 제47항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 동물이 포유동물인 방법.
제48항에 있어서, 상기 포유동물이 인간, 침팬지, 시노몰로구스 원숭이, 긴팔원숭이, 시미안 원숭이, 긴꼬리 원숭이, 생쥐, 쥐, 고양이, 개, 말, 토끼, 낙타, 라마, 반추동물, 말, 돼지로부터 선택되는 방법.
제49항에 있어서, 상기 반추동물이 젖소, 황소, 염소, 양, 들소, 버팔로, 사슴 및 수사슴으로부터 선택되는 방법.
제37항 내지 제50항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 약물이:

정맥내, 근육내, 진피내, 피하, 복강내, 비경구로, 국소적으로, 국부적으로, 경구로, 설하 또는 양치질에 의한 투여에 적합하고/하거나

주사제 용액으로, 부착포로, 분무제로, 좌약으로, 양치질 용액으로 또는 점적제로 제형화되거나 제제화되는 방법.
제37항 내지 제51항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 지질 소포체가 바이로솜인 방법.
제52항에 있어서, 상기 바이로솜이 면역강화 재구성된 인플루엔자 바이로솜("인플루엔자 바이로솜"), 또는 키메라 바이로솜인 방법.
제53항에 있어서, 상기 인플루엔자 바이로솜 또는 키메라 바이로솜이 키메라 인플루엔자 바이로솜인 방법.