KR20090101889A

KR20090101889A - 녹내장의 진단과 치료 및 항-녹내장 제제의 동정에서 혈청 아밀로이드 ａ 유전자의 용도

Info

Publication number: KR20090101889A
Application number: KR1020097010390A
Authority: KR
Inventors: 애보트 에프. 클락; 완-헝 왕; 로레타 그레이브스 맥나트
Original assignee: 알콘, 인코퍼레이티드
Priority date: 2006-12-22
Filing date: 2007-12-17
Publication date: 2009-09-29
Also published as: ES2424123T3; SA07280713B1; UY30837A1; AU2007337059A1; CA2669916A1; EP2428210A1; EP2120926A1; EP2428210B1; TW200833842A; CN101563081A; JP2010513563A; CL2007003800A1; MX2009004402A; RU2461378C2; RU2012123516A; US20100063052A1; US20070208043A1; US7662389B2; AR064499A1; RU2009128245A

Abstract

본 발명은 녹내장을 치료하기 위한 조성물 및 방법, 녹내장 진단 방법 및 녹내장 치료에 유용할 수 있는 제제를 동정하는 방법을 제공한다. 더욱 자세하게, 본 발명은 혈청 아밀로이드 A의 발현을 조절하는 제제의 이용을 기술한다.

Description

녹내장의 진단과 치료 및 항-녹내장 제제의 동정에서 혈청 아밀로이드 Ａ 유전자의 용도{USE OF SERUM AMYLOID A GENE IN DIAGNOSIS AND TREATMENT OF GLAUCOMA AND IDENTIFICATION OF ANTI-GLAUCOMA AGENTS}

본 출원은 미국 가출원 제60/530,430호(2003. 12. 17)의 우선권을 주장한 미국 출원 제11/000,757호(2004. 12. 1)의 부분 계속 출원인 미국 출원 제11/615,454호(2006. 12. 22)의 우선권을 주장한다.

본 발명은 녹내장의 진단 및 치료 분야에 관한 것이다. 보다 상세하게, 본 발명은 녹내장의 진단 및 치료에 유용하면서, 녹내장의 치료에 잠재적으로 유용한 제제를 동정하기 위한 방법 및 조성물을 제공한다.

시신경유두에 대한 손상, 안구 조직의 변성, 및/또는 상승 안압에 의해 유발되거나 악화되는 안구 상태는 다양하다. 예를 들어, "녹내장"은 미국 및 다른 개발 국가에서 비가역적 실명을 유발하는 원인인 일군의 쇠약성 안과 질환이다. 원발성 개방각 녹내장("POAG")은 가장 보편적인 형태의 녹내장이다. 상기 질환은 눈을 홍채와 각막 사이의 공간(예를 들어, 각("angle"))이 닫히지 않는 상태로 두기 위하여, 안방수의 정상적인 능력를 차단하는, 섬유주(trabecular meshwork)의 변성을 특징으로 한다(Vaughan, D. et al., (19921)). 상기 질환에서 차단의 특징은 안압("IOP")이 상승하여, 시기적절하게 적합한 치료를 받지 못할 경우, 진행성 시각상실 및 실명을 야기한다는 것이다. 이러한 질환은 40세 이상 전체 성인의 0.4% 내지 3.3%에 영향을 주는 것으로 조사되었다(Leske, M.C. et al. (1986); Bengtsson, B. (1989); Strong, N.P. (1992)). 더욱이, 상기 질환의 유병률은 75세 이상 노년층의 6% 이상에 대해 연령에 비례하여 증가한다(Strong, N.P., (1992)).

녹내장은 눈에서 3개의 개별 조직에 영향을 준다. POAG와 관련된 상승된 IOP는 각막과 홍채 사이의 각에 위치한 조직인 섬유주(TM)의 형태학적 및 생화학적 변화로 인한 것이다. 대부분의 영양성 안방수는 TM을 지나서 눈의 전안부(Anterior segment)에 존재한다. 녹내장성 안구 TM의 세포외 데브리스의 보강 및 TM 세포의 진행성 손실은 안방수 유출에 대한 저항을 증가시켜서, 결과적으로 IOP의 상승을 야기한다. 허혈과 같은 다른 인자뿐만 아니라, 상승된 IOP도 시신경유두(ONH)의 진행성 "함몰(cupping)" 및 망막의 신경절 세포 및 축삭의 손실을 야기하는, ONH 상의 퇴행성 변화를 유발한다. TM, ONH 및 망막의 신경절 세포에 대한 녹내장성 손상을 담당하는 자세한 분자적 기작은 아직 알려져 있지 않다.

20년 전, 고안압증, 허혈 및 시신경유두의 기계적 왜곡의 상호 작용은 녹내장의 시야 상실의 진행을 야기하는 주요 인자로 심각하게 논의되었다. 그 이후로, 흥분독성, 산화 질소, 활력 향신경성 인자의 부재, 비정상적 아교세포/신경세포 상호 작용 및 유전학을 포함한 다른 인자가 퇴행성 질환 과정에 연관되어 왔다. 분자 유전학의 고려는 궁극적으로 세포 사멸 기작을 규명할 수 있고, 다양한 형태의 녹내장에 대한 식별을 제공할 수 있는 한, 논의될 가치가 있다. 최근 10년 이내에, 15가지 이상의 다른 녹내장 유전자가 맵핑(mapping)되었고, 7개의 녹내장유전자가 동정되었다. 이는 원발성 개방각 녹내장에 대한 6개의 맵핑된 유전자(GLC1A-GLC1F) 및 동정된 2개의 유전자(MYOC 및 OPTN), 선천성 녹내장에 대한 2개의 맵핑된 유전자(GLC3A-GLC3B) 및 동정된 1개의 유전자(CYP1B1), 색소 분산/색소 녹내장에 대한 2개의 맵핑된 유전자, 및 발달 또는 증후군 형태의 녹내장에 대한 다수의 유전자(FOXC1, PITX2, LMX1B, PAX6)를 포함한다.

그러므로, 각 형태의 녹내장은 독특한 병리학을 가질 수 있고, 따라서 상기 질환을 관리하기 위한 다른 치료적 접근이 요구될 수 있다. 예를 들어, 시신경유두의 세포외 매트릭스를 분해하는 효소의 발현에 영향을 주는 약물은 흥분독성에 의해 야기되는 RGC 사멸을 저해할 수 없을 것이다. 녹내장에서, RGC 사멸은 아포토시스(apoptosis) (프로그램된 세포사멸)라고 불리우는 과정에 의해 일어난다. 사멸을 일으킬 수 있는 다른 형태의 손상이 몇몇 보편적인 경로에 집중됨으로써 그와 같이 일어날 수 있는 것으로 사료된다. 보편적인 경로의 다운스트림을 표적으로 삼는 것은 다른 형태의 질환을 관리하는데 있어 효용성을 가질 수 있는 가능성을 증가시킬 수 있으며, 약물의 효용성을 넓힐 수 있는 방법이다. 그러나, 복합적인 대사경로에 영향을 주는 약물은 바람직하지 못한 부작용을 유발하기 쉽다. 특정 형태의 녹내장을 확인하기 위한 유전자-기초의 진단 키트의 출현과 함께, 선택적인 신경보호제가 측정된 반응에 대한 변종의 정도를 감소시키기 위한 목적으로 테스트될 수 있다.

보편적으로 녹내장은 질환의 특정 징후(특징적인 시신경유두 변화 및 시야상실)에 근거하여 진단한다. 그러나, 진단하기까지는 녹내장을 가진 집단의 절반 이상이 자신이 이러한 눈을 멀게 하는 질환을 가지고 있는 것을 인식하지 못하고 있으며, 이미 자신의 망막 신경절 세포 중 대략 30 내지 50%가 비가역적으로 손실한 상태이다. 그러므로 녹내장의 조기 진단을 위한 개선된 방법이 요구되고 있다.

최근 녹내장 치료법은 녹내장의 발생 및 진행에 대한 주요 위험 인자인 IOP를 낮추는데 초점을 맞추고 있다. 그러나, 실질적으로 최근 IOP 감소 방법 중 어느 것도 상승하는 IOP을 초래하는 녹내장 질환 과정을 저해하지 못하며, 전안부에 대한 진행성 손상은 계속된다. 이는 대다수의 환자가 보편적인 녹내장 치료법에 대해 "저항성"을 가지게 되는 것에 대한 하나의 가능한 이유이다. 그러므로, 요구되는 것은 질환 과정을 변경(억제 또는 심지어 전환에 의해)시키기 위한 치료 방법이다.

하기 도면은 본 발명의 일부분을 형성하는 것으로, 본 발명의 특정 관점을 더욱 자세히 기술하기 위하여 포함된다. 본 발명은 본 명세서에 기재된 특정 구체예의 자세한 설명과 함께 도면을 참고함으로써 더욱 자세히 이해될 수 있다.

도 1은 12개의 녹내장 대 11개의 정상적인 TM 조직에서 SAA 발현의 QPCR 분석을 나타낸 것이다. NTM 및 GTM은 각각 정상 및 녹내장 그룹에서 유전자의 평균 발현 수준을 나타낸다.

도 2A는 TM 세포주에서 SAA 발현의 QPCR 분석을 나타낸 것이다. NTM 및 GTM은 각각 정상 및 녹내장 그룹에서 유전자의 평균 발현 수준을 나타낸다.

도 2B는 시신경유두 조직에서 SAA 발현의 QPCR 분석을 나타낸 것이다. NTM 및 GTM은 각각 정상 및 녹내장 그룹에서 유전자의 평균 발현 수준을 나타낸다.

도 3은 정상 및 녹내장 공여자(n=6)로부터의 TM 조직의 SAA 단백질을 나타낸 것이다. 정상 조직에 비해 녹내장 TM 조직에서 SAA 상의 현저한 증가(3배 증가)가 관찰되었다(p=0.05). 막대는 평균 +/- 표준 오차를 나타낸다.

도 4는 정상 및 녹내장 개체로부터의 인간 안방수에서 ELISA에 의해 결정된 SAA 단백질을 나타낸 것이다. 측정값은 안방수의 평균 SAA(ng/ml) +/- 표준 오차로 나타낸다(p=0.0001).

도 5는 rhSAA의 증가하는 농도에 반응하는 HL-60세포에 의한 IL-8의 분비를 나타낸 것이다.

도 6은 마우스 IOP에서 유리체내 주입에 의한 Adv.SAA2의 효과를 나타낸 것이다. 리바운드 안압계 TonoLab®로 IOP를 측정하였다.

도 7은 유리체내 주입 28일 후 Balb/c 마우스로부터의 마우스 눈에서 SAA 발현을 나타낸 것이다. SAA를 ELISA로 측정하였다. 대조군: Adv.null 주입된 눈 및 주입하지 않은 눈(Adv.SAA2 주입된 눈의 반대쪽 눈; n= 16); Adv.SAA: Adv.SAA2 주입된 눈(n=17).

도 8A 및 도 8B는 Balb/c 마우스 IOP(도 8A) 및 홍채 충혈(도 8B)에 대한 Ad.SAA2 + 항-CD40L 항체의 유리체내 주입의 효과를 나타낸 것이다. 데이터를 평균 및 표준 오차로 나타내었다.

도 9는 관류된 인간 전안부의 IOP에 대한 재조합 인간 혈청 아밀로이드 A(rhSAA, 1 ㎍/mL; 시간 0에 처리 시작)의 효과를 나타낸 것이다.

도 10은 관류된 인간 전안부의 관류액의 인터루킨-8(IL-8) 수준에 대한 재조합 인간 혈청 아밀로이드 A(rhSAA, 1 ㎍/mL; 시간 0에 처리 시작)의 효과를 나타낸 것이다.

도 11은 TM 세포에서 SAA 처리(1 ㎍/ml)에 의한 IL-8의 유도에 대한 MAP p38 키나아제 억제제의 효과를 나타낸 것이다. A: SB203580 (4-(4-플루오로페닐)-2-(4-메틸설피닐페닐)-5-(4-피리딜)-1H-이미다졸)의 효과. B: 4-아자인돌 및 BIRB-796 (1-(5-t-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3(4-(2-모폴린-4-일-에톡시)나프탈렌-1-일)우레아) 50 μM의 효과. IL-8은 ELISA에 의하여 배지 중에서 측정하였다.

도 12는 TM 세포 및 HL-60 세포에서 SB203580에 의한 SAA 자극된 IL-8 분비의 억제를 나타낸 것이다. NTM650-03, p9 또는 HL-60 세포를 1 ㎍/ml SAA 및 지시된 농도의 SB202580와 함께 혈청-부재 DMEM 중에서 4 시간 동안 처리하였다. IL-8은 ELISA에 의하여 배지 중에서 측정하였다. TM 세포에서 IC₅₀=15 μM이고 HL-60 세포에서는 25 μM으로 계산되었다.

도 13은 1 ㎍/ml SAA 및 지시된 농도의 억제제와 함께 혈청-부재의 DMEM 중에서 4 시간 동안 처리한 HL60 세포에서 p38 MAP 키나아제 억제제, 4-아자인돌 및 BIRB-796에 의하여 SAA 자극된 IL-8 분비의 억제를 나타낸 것이다. IL-8은 ELISA에 의하여 배지 중에서 측정하였다. 측정된 IC₅₀: 4-아자인돌=0.3 μM, BIRB-796=0.5 μM.

발명의 상세한 설명

녹내장은 특정의 임상적인 특성을 공유하는 시각 신경병증의 외인성 그룹이다. 녹내장에서 시력 상실은 ONH의 진행성 함몰, 신경 섬유층의 결손 및 시야에서의 특징적 변화에 의해 임상적으로 진단되는 감각신경망막에서 망막의 신경절 세포의 선택적인 사멸에 기인한 것이다. 녹내장의 발생에 대한 주요 위험 인자 중 하나는 고안압증(상승된 안압, IOP)의 존재이다. 또한, IOP는 환자가 종종 정상적인 IOP를 가지고 있는 것으로 생각되는 곳에서 정상적인 안압 녹내장의 발병기전에 관여하는 것으로 여겨진다. 녹내장과 관련하여 상승된 IOP는 안구 전방의 홍채-각막 각에 위치한 작은 특정 조직인, 섬유주(TM)에서의 상승된 안방수 유출 저항성에 기인한 것이다. TM에 대한 녹내장성 변화는 TM 세포에서의 손실 및 단백질성 플라크-유사 물질을 포함한 세포외 데브리스의 침착과 축적을 포함한다. 또한, 녹내장 시신경유두(ONH)에서 발생하는 변화도 있다. 녹내장 눈에는 ONH 아교 세포의 형태학적 변화 및 이동 변화가 있다. 상승된 IOP 및/또는 일시적인 허혈 손상에 반응하여, ONH 세포외 매트릭스의 조성물 상의 변화 및 아교 세포 및 망막 신경절 세포 축삭 형태 상에 변경이 있다.

본 발명자들은 혈청 아밀로이드 A(SAA) mRNA 및 단백질의 발현이 녹내장성 TM 조직 및 세포에서 현저히 증가한다는 것을 발견하였다. 본 발명자들은 실시간 정량적 중합 효소 연쇄 반응(QPCR)에 의하여 Affymetrix 유전자 칩을 사용하여 보여진 차별적인 mRNA 발현 및 SAA ELISA에 의해 증가된 SAA 단백질 수준을 규명하였다. 이는 SAA가 TM에서 발현된다는 것을 최초로 나타낸 것이다.

인간 SAA는 염색체 11번의 단완(short arm)에 위치한 유전자에 의해 암호화된 작은, 차별적으로 발현되는 다수의 아포지방단백질을 포함한다. SAA의 4 가지의 아형이 있다. 서열 번호 1로 암호화된 SAA1(서열 번호 2) 및 서열 번호 3으로 암호화된 SAA2(서열 번호 4)는 염증 전 사이토카인에 의해 현저하게 상향 조절되는, C-반응성 단백질과 같은, 급성기 반응 물질로서 알려져 있다. SAA1 및 SAA2 유전자의 5' UTR 프로모터 영역도 제공된다(각각, 서열 번호 12 및 서열 번호 13). SAA3(서열 번호 5)은 슈도유전자(pseudogene)이고, SAA4(서열 번호 6)는 구성 SAA4(서열 번호 7)를 암호화하는 낮은 수준의 구성적으로 발현되는 유전자이다. SAA2는 2 개의 아형, 서열 번호 8에 의해 암호화되는 SAA2α(서열 번호 9), 및 서열 번호 10에 의해 암호화되는 SAA2β(서열 번호 11)을 가지며, 이는 단 하나의 아미노산 서열만이 다르다. SAA1 및 SAA2 단백질은 아미노산 수준에서 93.5%의 동일성을 나타내었고(각각, 서열 번호 2 및 서열 번호 4), 이들 유전자는 뉴클레오티드 수준에서 96.7%의 동일성을 나타내었다(각각, 서열 번호 1 및 서열 번호 3).

SAA는 외상, 감염, 염증 및 종양을 포함한 다양한 손상에 대한 신체 반응의 일부분으로 혈중 수준이 대략 1000배 상승하는 급성기 반응 물질이다. 급성기 반응 물질로서, 발현의 최초 부위는 간인 것으로 여겨진다. 그러나, 간외 SAA 발현은 마우스의 조직에서 최초로 발견되었고, 나중에 인간의 동맥경화 부위 세포에서 발견되었다(O'Hara et al., 2000). 그 후에, SAA mRNA는 조직학적으로 정상인 다수의 인간 조직에서 널리 발현되는 것으로 관찰되었다. 국부적 발현은 가슴, 위, 소장 및 대장, 전립샘, 폐, 이자, 신장, 편도, 갑상샘, 뇌하수체, 태반, 피부 표피, 및 뇌신경을 포함한 다양한 조직에서 발견되었다. 림프구, 혈장 세포 및 내피 세포에서도 발현은 발견되었다. SAA mRNA 발현과 동시-국부적인 SAA 단백질 발현은 조직학적으로 정상인 인간의 간외 조직에서도 보고된 바 있다(Liang et al . 1997; Urieli-Shoval et al . 1998).

SAA 아형은 포유동물의 혈장에서 고-밀도 지질단백질(HDL)의 주요 구성성분이 되고, HDL 입자로부터 A-I(ApoA-I) 및 인지질을 치환하는 아포지질단백질이다(Miida et al. 1999). SAA는 콜레스테롤에 결합하고, 일시적인 콜레스테롤-결합 단백질로 제공될 수 있다. 또한, SAA1 또는 SAA2의 과발현은 발병기전을 유발할 수 있는, 아밀로이드 침착에서 선형의 원섬유의 형성을 야기한다(Uhlar and Whitehead 1999; Liang et al . 1997). SAA는 조직 재생의 자극, 감염, 및 염증에 있어서 중요한 역할을 수행한다. SAA 농도는 염증, 감염, 괴사 이후에 최대 1000배까지 증가할 수 있고, 회복된 다음 급속히 감소할 수 있다. 그러므로, 혈청 SAA 농도는 염증성 질환 활성을 모니터하는데 있어 유용한 마커로 사료된다. 간에서 SAA의 생합성은 급성기 반응을 유발하는 염증-전 사이토카인에 의해 상향 조절된다. 만성적으로 상승된 SAA 농도는 주로 단백질 가수 분해에 의해 분해된 SAA로 구성된 불용성 플라크가 주요 기관에서 침착되는 특징을 가진 진행성 및 때로는 치명적인 질환인, 이차성 아밀로이드증의 발병기전의 필수조건이다. 이와 동일한 과정은 동맥경화를 유발할 수 있다. 항상성을 유지하기 위하여, 양성 및 음성 SAA 조절 기작에 대한 필요조건이 있다. 상기 기작은 숙주-보호 기능을 이행하기 위하여 SAA 발현의 재빠른 유도를 허용하지만, 아밀로이드증을 방지하기 위하여 SAA 발현이 기저선 수준으로 재빨리 회복되는 것도 보장해야 한다. 예를 들어, 상기 기작은 핵 유도인자 NF-kB 및 그의 억제제 IkB, 인터루킨-6 패밀리에 대한 핵인자(NF-IL6)의 전사인자의 상향-조절, 및 yin 및 yang 1(YY1)과 같은 전사 억제제에 관여하는 프로모터 활성의 조절을 포함한다. mRNA 안전성 및 번역 효율의 변화에 관여하는 전사 후 조절은 수행되는 SAA 단백질 합성의 상향- 및 하향- 조절도 가능하게 한다. AP 반응의 후기 단계에서, SAA 발현은 인터루킨-1 수용체 길항제(IL-1Ra)와 같은 사이토카인 길항제 및 가용성 사이토카인 수용체의 증가된 생성을 통해 효과적으로 하향-조절되며, 염증-전 사이토카인에 의해 유도되는 신호 전달이 덜 유도되게 한다(Jensen 및 Whitehead 1998).

원발성 아밀로이드증이 녹내장과 연관이 있을 수 있다는 것을 제안하는 보고가 다수 있었다. 예를 들어, 아밀로이드는 원발성 전신 아밀로이드증 환자의 유리체, 망막, 맥락막, 홍채, 렌즈 및 TM을 포함한 다양한 안구 조직에서 침착되는 것으로 발견되었다(Schwartz et al. 1982). 1993년 Ermilov 등은 백내장, 녹내장, 및/또는 당뇨병을 앓고 있는 25살에서 90살까지의 환자 313명의 눈 478개 중, 66개의 눈(14%)이 아밀로이드-슈도 박탈성아밀로이드(amyloid-pseudoexfoliative amyloid, PEA)를 함유하고 있다고 기록하였다. 1996년 Krasnov 등은 개방각 녹내장을 가진 115명의 환자 중 44.4%가 아밀로이드의 세포외 침착을 나타내었다고 보고하였다. 82%의 경우가 공막에서, 70%의 경우가 홍채에서 아밀로이드증을 나타내었다. 알츠하이머 질환을 포함한 다수의 임상적 증상은 질환과 관련하여 비정상적인 아밀로이드 조직 침착을 나타낸다. 그러나, 아밀로이드는 분자적으로 이질적이며, 다른 아밀로이드 유전자에 의해 암호화된다. 아밀로이드와 녹내장과의 연관성에 대한 기존 연구는 명쾌하지 않다. 본 발명자는 처음으로 SSA 유전자 발현이 녹내장성 TM 조직에서 현저히 증가한다는 것을 입증하였다. 증가된 SAA는 녹내장 환자에게 시력 상실을 유발하는 안구 신경에 대한 손상 및 상승된 IOP의 생성에 관여할 수 있다. 본 발명은 녹내장을 진단하기 위하여 증가된 SAA 발현의 발견을 사용하는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한, 잠재적인 항-녹내장 제제를 동정하기 위하여 SAA 발현 또는 기능을 변경시키는 제제를 스크리닝하기 위한 방법을 제공한다. 다른 면에서, 본 발명은 녹내장의 치료를 위하여 다른 단백질과의 상호 작용 및/또는 SAA 활동을 길항시키는 제제를 이용하는 방법 및 조성물을 제공한다.

녹내장 진단

녹내장을 앓는 특정 대상은 SAA 발현 수준이 증가한다는 본 발명자들의 발견에 따라서, 본 발명은 녹내장을 진단하기 위한 다양한 방법을 제공한다. 본 발명의 특정 방법은 부적절하게 높은 수준의 SAA 단백질을 유발하는 핵산 서열 상의 돌연변이를 검출할 수 있다. 상기 진단법은 인간 SAA의 공지된 핵산 서열 또는 암호화된 아미노산 서열에 기반을 두고 개발될 수 있다(Miller 2001 참고). 다른 방법은 SAA의 발현을 조절하는 유전자의 서열 또는 인간 SAA의 게놈 서열에 기초하여 개발될 수 있다. 또한, 다른 방법은 mRNA 수준에서 SAA 유전자 발현의 수준을 변화시키는 것을 기초로 하여 개발될 수 있다.

또 다른 구체예에서, 본 발명의 방법은 SAA 시그널링 단백질 또는 SAA 시그널링 단백질을 암호화하는 유전자의 활성 또는 수준을 검출할 수 있다. 예를 들어, IL-8의 SAA 유도를 포함한, SAA 시그널링 성분의 부적절한 기능을 유발하는 돌연변이와 같은 것을 포함하는, 부적합하게 낮은 SAA 시그널링 활성을 검출하는 방법이 개발될 수 있다. 또한, 비-핵산 기초의 기술은 상기 SAA 시그널링 단백질 중 임의의 것의 양 또는 특정 활성에서의 변형을 검출하는데 사용될 수 있다.

현재, 유전자 및 유전자 산물의 비정상적인 수준 또는 활성을 검출하기 위한 수많은 수단이 숙련자에게 이용가능하다. 상기 방법은 숙련자에게 공지된 것으로, 점점 보편화되고 있다. 예를 들어, 인간의 다형 유전자 자리(polymorphic loci)에서 특정 대립 유전자를 검출하기 위한 많은 방법이 이용가능하다. 특정 다형 대립 유전자를 검출하는 바람직한 방법은 부분적으로 다형성의 분자적 특징에 따라 결정될 것이다. 다형 유전자 자리의 다양한 대립 유전자 형태는 DNA의 단일 염기쌍에 따라 다양해질 것이다. 이러한 단일 뉴클레오티드 다형성(또는 SNP)은 공지된 모든 다형성 중 약 80%를 포함하는, 유전적 변이에 대한 주요 공헌자이며, 인간 게놈에서 이들의 밀도는 평균 1000개의 염기쌍 당 1개로 예측된다. 개체에서 특정 단일 뉴클레오티드 다형성 대립 유전자의 존재를 검출하기 위하여 다양한 방법이 사용가능하다. 상기 분야에서의 진보는 정확하고, 용이하면서, 저렴한 대용량 SNP 유전형(genotyping)을 제공하고 있다. 예를 들어, 미국 특허 제 4,656,127호; 프랑스 특허 제 2,650,840호; PCT 출원 제 W091/02087호; PCT 출원 제 W092/15712호; Komher et al. 1989; Sokolov 1990; Syvanen et al. 1990; Kuppuswamy et al. 1991; Prezant et al. 1992; Ugozzoli et al. 1992; Nyren et al. 1993; Roest et al. 1993; 및 van der Luijt et al. 1994를 참고한다.

임의의 세포 타입 및 조직이 본 명세서에 기재된 진단에 사용하기 위한 핵산 샘플을 수득하는데 사용될 수 있다. 바람직한 구체예에서, DNA 샘플은 공지된 기술(예를 들어, 정맥천자(venipuncture))에 의해 수득된 혈액과 같은 체액, 또는 구강 세포에서 수득된다. 가장 바람직하게, 본 발명의 방법에 사용되는 샘플은 혈액 또는 구강 세포로부터 수득될 것이다. 택일적으로, 핵산 테스트는 건조 샘플(예를 들어, 머리카락 또는 피부)에서 수행할 수 있다.

진단 과정은 핵산 정제가 필요없도록, 동소(in situ)에서 생검 또는 절제로부터 수득된 환자 조직의 조직 절편(고정 및/또는 냉동된 절편)에 직접적으로 수행될 수도 있다. 핵산 시약은 상기 동소 과정을 위한 프로브 및/또는 프라이머로 사용될 수 있다(예를 들어, Nuovo 1992 참고).

주로 한 핵산 서열의 검출에 초점을 맞춘 방법 외에도, 상기 검출 방식에서 프로필이 분석될 수도 있다. 예를 들어, 핑거프린트(fingerprint) 프로필은 차별적인 디스플레이 과정, 노던 분석 및/또는 RT-PCR을 사용하여 생성될 수 있다.

바람직한 검출 방법은 다형성 영역 또는 돌연변이 주변에서 약 5, 10, 20, 25 또는 30개의 인접한 뉴클레오티드를 가지며, 녹내장을 나타내는 SAA 시그널링 t성분의 대립 유전자 중 적어도 하나의 영역과 겹쳐지는 프로브를 사용하는 대립 유전자 특이적 혼성화이다. 본 발명의 바람직한 구체예에서, 녹내장에 관련된 다른 대립 유전자 변이체에 특이적으로 혼성화할 수 있는 몇몇 프로브는 예를 들어 "칩(chip)" (약 250,000개의 올리고뉴클레오티드까지 보유할 수 있음)과 같은 고체상 지지체에 부착된다. 올리고뉴클레오티드는 석판인쇄술을 포함한 다양한 공정에 의해 고체 지지체에 결합될 수 있다. "DNA 프로브 어레이"로도 명명된, 올리고뉴클레오티드를 포함한 칩을 사용하는 돌연변이 검출 분석은 예를 들어, Cronin 등의 문헌(Cronin et al. (1996))에 기재되어 있다. 일 구체예에서, 칩은 유전자의 적어도 하나의 다형성 영역의 모든 대립 유전자 변이체를 포함한다. 그런 다음, 고체상 지지체는 테스트 핵산과 접촉하고, 특정 프로브에 대한 혼성화가 검출된다. 따라서, 하나 이상의 유전자의 방대한 대립 유전자 변이체의 동정은 간단한 혼성화 실험에 의해 확인될 수 있다.

상기 기술은 분석 전에 핵산을 증폭하는 단계를 추가로 포함할 수도 있다. 증폭 기술은 해당분야의 숙련자에게 공지된 것으로, 클로닝, 중합 효소 연쇄 반응(PCR), 특정 대립 유전자의 중합 효소 연쇄 반응(ASA), 리가아제 연쇄 반응(LCR), 네스티드 중합 효소 연쇄 반응(nested PCR), 자립적 서열 복제(self-sustained sequence replication)(Guatelli et al. 1990), 전사 증폭 시스템(Kwoh et al. 1989), 및 Q-β 레플리카아제(Q-β replicase) (Lizardi, et al. 1988)를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

증폭 산물은 크기 분석, 제한 효소 처리 후 크기 분석, 반응 산물에서 특정 택이 달린 올리고뉴클레오티드 프라이머의 검출, 대립 유전자-특이적 올리고뉴클레오티드(ASO) 혼성화, 대립 유전자 특이적 5' 엑소뉴클레아제 검출, 시퀀싱, 혼성화, SSCP 등을 포함한 다양한 방법에 의해 분석할 수 있다.

PCR 기초의 검출 방법은 동시에 복수개의 마커를 복합적으로 증폭하는 것을 포함할 수 있다. 예를 들어, 크기면에서 중첩되지 않으면서 동시에 분석할 수 있는 PCR 산물을 생성하기 위한 PCR 프라이머를 선별하는 것은 본 분야에 공지된 사실이다. 택일적으로, 차별적으로 표지되어 각각을 다르게 검출할 수 있는 프라이머로 다른 마커를 증폭하는 것이 가능하다. 물론, 혼성화 기초의 검출 방법은 샘플에서 복합적인 PCR 산물을 차별적으로 검출하는 것을 가능하게 한다. 복수개의 마커를 복합적으로 분석하는 것을 가능하게 하는 다른 기술은 본 분야에서 공지이다.

단지 예시가 되는 구체예에서, 상기 방법은 (ⅰ) 환자로부터 세포 샘플을 수집하는 단계, (ⅱ) 세포 샘플로부터 핵산 (예를 들어, 게놈, mRNA 또는 둘다)을 분리하는 단계, (ⅲ) 대립 유전자의 혼성화 및 증폭이 일어날 수 있는 조건 하에서, 녹내장을 나타내는 SAA의 적어도 하나의 대립 유전자에 대한 5' 및 3'를 특이적으로 혼성화하는 하나 이상의 프라이머와 핵산 샘플을 접촉시키는 단계; 및 (ⅳ) 증폭 산물을 검출하는 단계를 포함한다. 이러한 검출 과정은 핵산 분자가 매우 적은 수로 존재할 때 핵산 분자의 검출에 특히 유용하다.

대상 분석의 바람직한 구체예에서, 녹내장을 나타내는 SAA의 비정상적인 수준 또는 활성은 제한 효소 절단 패턴에서의 변형에 의해 확인된다. 예를 들어, 샘플 및 대조군 DNA를 분리하고, 증폭하여 (필요한 경우), 하나 이상의 제한 효소로 절단한 다음, 겔 전기영동을 수행하여 단편의 길이를 결정한다.

다른 구체예에서, 본 분야에서 공지된 다양한 시퀀싱 반응 중 어느 것이라도 대립 유전자를 직접적으로 시퀀싱하는데 사용될 수 있다. 대표적인 시퀀싱 반응은 Maxim 및 Gilbert (1997), 또는 Sanger (1977)이 개발한 방법에 기초한 반응을 포함한다. 질량 분석에 의한 시퀀싱을 포함한, 다양한 자동화 시퀀싱 방법이 대상 분석을 수행할 때 사용될 수 있다는 것도 고려된다(예를 들어, WO94/16101; Cohen et al. 1996; 및 Griffin et al. 1993 참고). 특정 구체예에 대하여, 오직 하나, 둘 또는 세 개의 핵산 염기의 발생이 시퀀싱 반응에서 결정될 필요가 있다는 것은 본 분야의 숙련자에게 명백할 것이다. 예를 들어, A-트랙(A-track) 등(예를 들어 여기에서는 단 하나의 핵산만이 검출된다)이 수행될 수 있다.

다른 구체예에서, 절단제(cleavage agent)(예를 들어, 핵산분해효소, 하이드록실아민 또는 오스뮴 테트라옥사이드 및 피레리딘과 함께로부터의 보호는 RNA/RNA 또는 RNA/DNA 또는 DNA/DNA 헤테로듀플렉스에서 부적절하게 짝을 이룬 염기를 검출하기 위하여 사용될 수 있다(Myers et al. 1985b; Cotton et al. 1988; Saleeba et al. 1992). 바람직한 구체예에서, 대조군 DNA 또는 RNA는 검출용으로 표지될 수 있다.

또 다른 구체예에서, 미스매치 절단 반응은 이중-나선 DNA에서 부적절하게 짝을 이룬 염기쌍을 인식하는 하나 이상의 단백질(소위, "DNA 미스매치 수선" 효소로 불리움)을 사용한다. 예를 들어, E. coli의 mutY 효소는 G/A 미스매치에서 A를 절단하고, HeLa 세포의 티미딘 DNA 글리코실라아제는 G/T 미스매치에서 T를 절단한다(Hsu et al. 1994; 미국특허 제 5,459,039호).

다른 구체예에서, 전기 영동 상에서 이동의 변화는 녹내장을 나타내는 SAA의 비정상적인 수준 또는 활성을 확인하는데 사용될 것이다. 예를 들어, 단일 가닥 구조 다형성(SSCP)은 돌연 변이 핵산과 야생형 핵산 간의 전기영동 상 이동에서의 차이를 검출하는데 사용할 수 있다(Orita et al. 1989; Cotton 1993; Hayashi 1992; Keen et al. 1991).

다른 구체예에서, 변성제 구배를 함유한 폴리아크릴아미드 겔에서 대립 유전자의 이동은 변성 구배 겔 전기 영동(DGGE)을 사용하여 분석된다(Myers et al. 1985a). 또 다른 구체예에서, 온도 구배는 대조군 및 샘플 DNA의 이동 상 차이점을 확인하기 위하여 변성제 구배 대신에 사용된다(Rosenbaum 및 Reissner 1987).

대립 유전자를 검출하기 위한 다른 기술의 예시는 선택적인 올리고뉴클레오티드 혼성화, 선택적인 증폭, 또는 선택적인 프라이머 확장을 포함하나, 그에 한정되는 것은 아니다. 예를 들어, 올리고뉴클레오티드 프라이머는 공지된 돌연변이 또는 뉴클레오티드상의 차이(예를 들어, 대립 유전자의 변이체)가 중심으로 위치한 다음, 완벽한 매치(match)가 발견될 때에만 혼성화를 허용하는 조건 하에서, 목적 DNA에 혼성화하도록 제조될 수 있다(Saiki et al . 1986; Saiki et al . 1989). 이러한 대립 유전자 특이적 올리고뉴클레오티드 혼성화 기술은 올리고뉴클레오티드가 PCR로 증폭된 목적 DNA에 혼성화할 때 반응마다 하나의 돌연변이 또는 다형성 영역을 테스트하는데 사용할 수 있거나, 올리고뉴클레오티드가 혼성화 멤브레인에 결합하여 표지된 목적 DNA와 혼성화할 때 다수의 다른 돌연변이 또는 다형성 영역을 테스트하는데 사용할 수 있다.

택일적으로, 선택적인 PCR 증폭에 따른 대립 유전자 특이적 증폭 기술이 본 발명과 함께 사용될 수 있다. 적절한 조건 하에서, 미스매치가 중합 효소 확장을 저해하거나 감소시킬 경우(Prossner 1993), 특이적인 증폭을 위한 프라이머로 사용되는 올리고뉴클레오티드는 분자의 중심부 또는 한 프라이머의 맨 가장자리의 3' 말단에서 관심이 되는 다형성 영역 또는 돌연변이를 가진다(증폭이 차별적인 혼성화에 따라 결정되도록 함)(Gibbs et al. 1989). 또한, 절단-기반 검출을 생성하기 위하여, 돌연변이 영역에서 신규 제한 효소 자리를 도입하는 것이 바람직할 수 있다(Gasparini et al. 1992). 특정 구체예에서, 증폭은 증폭용 Taq 리가아제를 사용하여 수행될 수도 있을 것으로 사료된다(Barany 1991). 상기 경우, 증폭의 존재 또는 부재를 찾아 특정 부위에서 공지된 돌연변이의 존재를 검출하는 것을 가능하게 하는 5' 서열의 3' 말단에 완전한 매치가 있을 경우에만, 라이게이션은 일어날 것이다.

다른 구체예에서, 대립 유전자 변이체의 확인은 예를 들어, 미국 특허 제 4,998,617호 및 Landegren 등의 참고 문헌(Landegren et al. 1988)에 기재된 올리고뉴클레오티드 라이게이션 분석법(OLA)을 사용하여 수행된다. Nickerson 등은 PCR 및 OLA의 속성을 결합시킨 핵산 검출 분석법을 기재하고 있다(Nickerson et al. 1990). 상기 방법에서, PCR은 목적 DNA의 기하급수적인 증폭을 이행하기 위하여 사용되며, 그런 다음, 증폭된 목적 DNA는 OLA를 사용하여 검출된다.

이와 같은 OLA 방법에 기초한 몇몇 기술이 개발되었고, 이들은 녹내장을 나타내는 SAA의 비정상적인 수준 또는 활성을 검출하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제 5,593,826호 및 Tobe 등의 참고 문헌(Tobe et al. 1996)은 자주 사용되는 상기 기술을 기재하고 있다.

일 구체예에서, 퍼옥시좀 증식인자-활성 수용체 α(PPAR α) 작용제인 페노피브레이트(fenofibrate)는 약제학적으로 허용가능한 조성물에서 제제화될 수 있고, SAA 발현을 조절함으로써 녹내장을 치료하는데 사용될 수 있다. 페노피브레이트 및 WY 14643 치료가 혈장 SAA 농도를 감소시킨다는 연구결과도 발표되었다(Yamazaki et al. 2002). 시프로피브레이트, 2-브로모헥사데칸산, 베자피브레이트, 시프로피브레이트 및 시글리티존과 같은 다른 PPAR α 작용제도 녹내장을 치료하는데 있어 유용할 수 있을 것으로 사료된다.

또다른 구체예에서, p38 MAP 키나아제 억제제는 IL-8의 SAA 유도 발현 및 다운스트림 시그널링 이벤트를 조절함으로써, 녹내장 또는 고안압증을 치료하고 상승된 안압으로 고통받는 환자에서 안압을 낮추는 데 사용될 수 있다. 본 발명자들은 SAA가 섬유주 세포 및 조직에서 IL-8의 분비를 자극하는 것을 보여주었다. IL-8의 상향 조절에 대한 하나의 경로는 MAP 키나아제의 활성화를 통한 것이다. 본 발명자들은 또한 p38 MAP 키나아제의 억제제가 TM 세포, 관류 배양 인간 눈 및 생체 내 설치류 눈에서 IL-8의 SAA 유도를 차단하는 것을 보여주었다. TM 세포에서 다른 분류의 MAPK 억제제를 나타내는 화합물이 SAA 유도의 IL-8 발현의 효율적인 억제제인 것으로 관찰되었다(표 3). 이들 중 가장 유력한 것은 p38 MAPK 억제제, SB203580, 4-아자인돌 및 BIRB-796이었다(도 11). TM 세포 및 HL60 세포 둘 모두에서 생성된 SAA 유도의 IL-8의 SB203580 억제에 대한 용량 반응 곡선은 유사한 결과를 제공하였다(IC₅₀ = TM 세포에서 15 μM 및 HL60 세포에서 25 μM, 도 12). HL60 세포에서 수행된 3-(4-플루오로페닐)-2-(피리딘-4-일)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘(본원에서 4-아자인돌로도 언급됨) 및 BIRB0796에 대한 억제 곡선은 이들 화합물 둘 모두가 SB203580보다 약 10배 더 효율적인 것으로 나타났다(IC₅₀ = 4-아자인돌에 대하여 0.3 및 BIRB-796에 대하여 0.5μM, 도 13).

표 3. TM 세포에서 SAA 유도의 IL-8 분비 억제에 대하여 스크리닝된 화합물 분류

표 3에서 확인된 화합물에 대한 화학 명칭은 다음과 같다:

SB203580: 4-(4-플루오로페닐)-2-(4-메틸설피닐페닐)-5-(4-피리딜)-1H-이미다졸;

SB202190: 4-[4-(4-플루오로페닐)-5-(4-피리디닐)-1H-이미다졸-2-일]페놀;

BIRB-796: 1-(5-t-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3(4-(2-모폴린-4-일-에톡시)나프-탈렌-1-일)우레아;

4-아자인돌: 3-(4-플루오로페닐)-2-(피리딘-4-일)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘;

PD98059: 2'-아미노-3'-메톡시플라본;

UO126: 1,4-디아미노-2,3-디시아노-1,4-비스(2-아미노피닐티오)부타디엔;

CalBio506126: 2-(4-클로로페닐)-4-(4-플루오로페닐)-5-피리딘-4-일-1,2-디하이드로피라졸-3-온.

시험관 내 분석으로 일부 p38MAPK 억제제가 SAA에 의한 IL-8 유도를 현저하게 차단하는 것이 밝혀졌다. Ad.SAA2(2x10⁷pfu/눈) + 항CD40L의 유리체 내 주입 이후 1% 현탁액의 국소 적용에 의하여 마우스에서 IOP를 낮추는 것에 대하여 p38 MAPK 억제제 중 하나인 3-(4-플루오로페닐)-2-(피리딘-4-일)-1H-피롤로-[3,2-b]피리딘이 가장 유력한 것으로 평가되었다. Adv.SAA2는 10-12일에 피크인 기준선으로부터의 10-12 mmHg 증가의 상당한 IOP 상승을 유발한 이후 느리게 감소된다. 24일에 IOP는 기준선 위 6-7 mmHg였다. 고안압증이 4-아자인돌의 국소 투여(1%; 하루 2회)에 의하여 차단되었다. 4-아자인돌 투여를 7일에 멈춘 후, IOP는 비히클-처리된 Ad.SAA2-주입 그룹과 동일한 수준으로 돌아갔다. 약물 투여를 13일에 다시 시작하는 경우, IOP는 3일 내에 기준선으로 다시 낮아졌다(도 8). 이러한 실험을 반복하고 유사한 결과를 수득하였다. 생체 내 데이터는 p38MAPK 억제제, 4-아자인돌이 Ad.SAA2에 의해 유도된 고안압증을 상쇄시킬 수 있는 것을 나타낸다.

본 발명의 이러한 구체예에 바람직한 화합물은 표 3에 열거된 화합물의 분류이며, 이들 실시예에 기술된 p38MAP 키나아제에 대한 억제 성능을 보유하는 추가의 부류의 화합물로 확장되며, SB202190, SB203580, SB220025, PD 169316, SB 239063, 4-아자인돌, BIRB-796, CalBio506126, RO3201195, R1487를 포함한다.

본 발명자들은 아밀로이드-유도성 세포 사멸을 방지하는 제제가 전부 포도막(anterior uvea) 및 안구 후부, 특히 망막 및 시신경유두의 TM 및 다른 안구 세포를 보호하는데 있어 유용할 수 있는 것으로 생각한다.

본 발명의 화합물은 눈으로 전달(예를 들어, 국소적으로, 전방내로, 또는 이식에 의해)하기 위한 다양한 타입의 안구용 제제에 도입될 수 있다. 상기 화합물은 눈으로 전달하기 위한 국소성 안구용 제제에 도입되는 것이 바람직하다. 상기 화합물은 수성인 멸균 안구용 현탁액 또는 용액을 형성하기 위하여, 안과학적으로 허용가능한 보존제, 계면활성제, 점도 증진제, 침투 증진제, 완충액, 염화 나트륨 및 물과 배합될 수 있다. 안구용 용제는 화합물을 생리학적으로 허용되는 등장성 수성 완충액 중에 용해시켜 제조될 수 있다. 더욱이, 안구용 용액은 화합물의 용해를 용이하게 하기 위하여, 안과학적으로 허용가능한 계면활성제를 포함할 수 있다. 또한, 안구용 용액은 결막 주머니(conjunctival sac)에서 제제의 유지를 개선하기 위하여, 하이드록시메틸셀룰로오스, 하이드록시에틸셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈 등과 같은 점도 증가용 제제를 함유할 수 있다. 겔화제(gelling agent)도 사용될 수 있으며, 이는 젤란 및 잔틴 검을 포함하나 그에 국한되는 것은 아니다. 멸균 안구용 도포 제제를 제조하기 위하여, 활성 성분은 미네랄 오일, 액체 라놀린, 또는 백색의 광유와 같은 적합한 비히클에서 보존제와 배합된다. 멸균 안구용 겔 제제는 유사한 안구용 제제를 위하여 공개된 제제에 따라, 카보폴-974 등의 조합으로부터 제조된 친수성 염기 중에 화합물을 현탁함으로써 제조될 수 있으며; 보존제 및 등장화제(tonicity agent)도 첨가될 수 있다.

화합물은 pH 약 4 내지 8인 국소성 안구용 현탁액으로 제제화되는 것이 바람직하다. 각 개체에 대한 특정 투여 요법의 확립은 임상의의 재량으로 남겨둔다. 화합물은 0.01 중량% 내지 5 중량%의 양으로 상기 제제에 함유될 것이나, 0.05 중량% 내지 2 중량%의 양으로 함유되는 것이 바람직하며, 0.1 중량% 내지 1.0 중량%의 양으로 함유되는 것이 가장 바람직하다. 제형은 용액, 현탁 마이크로에멀젼일 수 있다. 그러므로, 국소적 제시를 위하여, 상기 제제의 1 내지 2 방울이 숙련된 임상의의 재량에 따라 하루에 1 내지 4번 안구 표면으로 전달될 수 있다.

화합물은 녹내장을 치료하기 위한 다른 제제와 병용하여 사용할 수도 있으며, 제제는 β-차단제, 프로스타글란딘, 탄산탈수효소 억제제, α₂ 작용제, 축동제, 및 신경보호제를 포함하나, 그에 한정되는 것이 아니다.

하기 실시예는 본 발명의 바람직한 구체예를 설명하고자 하는 것이다. 하기 실시예에 제시되는 기술은 본 발명의 수행에 있어서 제대로 작용하도록 본 발명자에 의해 밝혀진 기술을 제시한 것으로서, 본 발명의 수행을 위하여 바람직한 모델을 제시하는 것으로 고려될 수 있는 것으로 본 분야의 숙련자들은 인식할 수 있다. 그러나, 본 발명에 기재된 내용으로 미루어, 본 분야의 숙련자는 기재된 특정 구체예에서 다양한 변화가 만들어질 수 있다는 것과, 본 발명의 목적 및 범위에서 벗어나지 않으면서, 동일한 또는 유사한 결과를 더 획득할 수 있다는 것을 인정할 것이다.

발명의 요약

본 발명은 녹내장의 진단 방법 및 녹내장 치료 방법을 제공함으로써, 선행기술의 상기 문제점 및 다른 문제점을 극복한다. 일 면에서, 본 발명은 혈청 아밀로이드 A 단백질(SAA)을 암호화하는 유전자 또는 상기 유전자의 프로모터 서열과 상호 작용하는 제제를 포함하는 조성물의 치료학적 유효량을 치료가 필요한 환자에게 투여함으로써 녹내장을 치료하는 방법을 제공한다. SAA를 암호화하는 유전자 또는 그의 프로모터 서열과 제제 간의 상호 작용은 환자의 녹내장 상태가 치료될 수 있도록 SAA의 발현을 조절한다. 바람직한 구체예에서, 제제는 단백질, 펩티드, 펩티도미메틱(peptidomimetic), 소 분자 또는 핵산일 것이다.

다른 면에서, 본 발명은 혈청 아밀로이드 A 단백질(SAA)와 그 수용체 간의 상호 작용을 억제하는 제제를 포함하는 조성물의 치료학적 유효량을 치료가 필요한 환자에게 투여함으로써 녹내장을 치료하는 방법을 제공한다. 바람직하게, 제제는 퍼옥시좀 증식인자-활성 수용체 α(PPAR α) 작용제, 타키키닌(tachykinin) 펩티드, 및 그들의 비-펩티드 유사체 또는 α-리포산일 것이다. 더욱 바람직하게, 제제는 페노피브레이트, Wy-14643, (4-클로로-6-(2,3-자일리디노)-2-피리미디닐티올)-아세트산), 시프로피브레이트, 2-브로모헥사데칸산, 벤자피브레이트 및 시글리티존, 바필로마이신, 콘카나마이신 또는 슈도라르산 B일 것이다.

본 발명은 또한, 혈청 아밀로이드 A 단백질(SAA) 길항제의 치료학적 유효량 및 약제학적 담체를 포함하는 녹내장 치료용 약제학적 조성물을 제공한다. 상기 조성물에 함유된 길항제는 상기 확인된 화합물 중 임의의 것일 수 있다.

다른 구체예에서, 본 발명은 하기 단계에 의한, 녹내장 진단 방법을 제공한다:

a) 환자로부터 생물학적 샘플을 수득하는 단계; 및

b) 혈청 아밀로이드 A 단백질(SAA)을 암호화하는 유전자 또는 그의 프로모터 영역, 또는 그의 유전자 산물의 비정상적인 수준, 비정상적인 생활성 또는 돌연변이에 대해 샘플을 분석하는 단계(여기에서 SAA를 암호화하는 유전자는 서열 번호 1 또는 서열 번호 3에 기재된 서열을 포함하고, 그의 프로모터 영역은 서열 번호 12 또는 서열 번호 13에 기재된 서열을 포함하며, SAA는 서열 번호 2 또는 서열 번호 4에 기재된 서열을 포함함);

여기에서, SAA 유전자 또는 상기 유전자 산물의 비정상적으로 높은 수준, 비정상적으로 높은 생활성 또는 돌연변이가 녹내장의 진단을 나타낸다.

바람직한 면에서, 생물학적 샘플은 안구 조직, 눈물, 안방수, 뇌척수액, 비강 또는 볼 도말 또는 혈청이다. 가장 바람직하게, 생물학적 샘플은 섬유주 세포를 포함한다.

택일적으로, 본 발명은 하기 단계에 의한, 환자의 녹내장 진단 방법을 제공한다:

a) 환자로부터 세포를 수집하는 단계;

b) 세포로부터 핵산을 분리하는 단계;

c) 대립 유전자의 혼성화 및 증폭이 일어나는 조건 하에서, 서열 번호 1, 서열 번호 3, 서열 번호 12, 또는 서열 번호 13 중 적어도 하나의 대립 유전자에 대한 5' 및 3'를 특이적으로 혼성화하는 하나 이상의 프라이머와 샘플을 접촉시키는 단계; 및

d) 증폭 산물을 검출하는 단계;

여기에서, 샘플에서 서열 번호 1, 서열 번호 3, 서열 번호 12, 또는 서열 번호 13의 비정상적인 수준 또는 돌연변이가 녹내장의 진단을 나타낸다.

본 발명은 또한, 하기 단계에 의한, 녹내장을 치료하는데 잠재적으로 유용한 제제를 동정하는 방법을 제공한다:

a) SAA(서열 번호 1 또는 서열 번호 2) 발현세포 또는 리포터 유전자가 발현되는 SAA 프로모터/리포터 유전자 함유 세포를 수득하는 단계;

b) 후보 물질을 세포와 혼합하는 단계; 및

c) 세포에서 유전자 발현의 수준 또는 SAA 단백질(서열 번호 2 또는 서열 번호 4)의 수준을 결정하는 단계;

여기에서, 후보 물질의 존재 하에서 SAA 단백질의 생산 또는 유전자 발현에 대한 증가 또는 감소가 녹내장의 치료에 잠재적으로 유용한 제제를 나타낸다.

다른 면에서, 본 발명은 하기 단계에 의한, 녹내장을 치료하는데 잠재적으로 유용한 제제를 동정하는 방법을 제공한다:

a) (i) SAA 단백질 또는 SAA 프로모터에 의해 유도되는 리포터 유전자 혹은 SAA를 발현하는 세포;

(ii) SAA 단백질 결합 파트너; 및

(iii) 테스트 화합물을 포함하는 반응 혼합물을 형성하는 단계;

b) 테스트 화합물의 존재 및 테스트 화합물의 부재 하에서, SAA 단백질과 결합 파트너 간의 상호 작용 또는 리포터 유전자 산물의 수준을 검출하는 단계;

여기에서, 테스트 화합물의 부재 하에서의 상호 작용에 비하여, 테스트 화합물의 존재 하에 SAA 단백질과 그의 결합 파트너의 상호 작용의 감소 또는 증가가 녹내장 치료에 잠재적으로 유용한 제제를 나타낸다.

다른 면에서, 본 발명은 하기 단계에 의한, 녹내장을 치료하는데 잠재적으로 유용한 제제를 동정하는 방법을 제공한다;

a) (i) SAA 재조합 단백질(서열 번호 2 또는 서열 번호 4)를 포함하는 세포 또는 서열 번호 1 또는 서열 번호 3을 포함하는 발현 벡터를 포함하는 세포; 및

(ii) 테스트 화합물을 포함하는 반응 혼합물을 형성하는 단계; 및

b) 테스트 화합물의 존재 및 테스트 화합물의 부재 하에서, 다운스트림 시그널링(IL-8)에 대한 영향을 검출하는 단계;

여기에서, 테스트 화합물의 부재 하에서의 상호 작용에 비하여, 테스트 화합물 존재 하에 다운스트림 시그널링의 감소 또는 증가가 녹내장의 치료에 잠재적으로 유용한 제제를 나타낸다.

바람직한 면에서, SAA 단백질 또는 발현 벡터를 함유하는 세포는 HL-60 세포일 것이다.

실시예 1. 녹내장 TM 세포 및 조직에서 SAA1 및 SAA2 발현의 증가

Affymetic GeneChips 세트(HG-U133)를 사용하여 유전자 발현을 측정하기 위하여, 정상적인 공여자(n=13)와 녹내장 공여자(n=9)로부터 채취한 TM 조직의 RNA 풀(pool)을 사용하였다. 아밀로이드 A2 발현은 정상적인 TM 조직에 비해 녹내장에서 4배 증가하는 것으로 확인되었다. 상기 결과를 확증하기 위하여, 12개의 녹내장 조직 및 11개의 정상 TM 조직으로부터의 개개의 RNA를 사용하여 QPCR을 수행하였다. 12개의 녹내장 TM 조직 중 5개(42%)는 SAA1/2 발현에 있어서 현저한 증가를 나타내었다. 12개의 녹내장 TM에서 평균 SAA 발현은 11개의 정상적인 TM에 비해 5.4배 높게 나타났다(도 1). 또한, SAA 차별적 발현에 있어서 유사한 결과가 녹내장 TM 세포 또는 녹내장 시신경유두 조직에서 관찰되었다. 정상에 비해, 각각 녹내장 TM 세포에서는 5.4배의 평균 증가가 있었고(14개의 녹내장 대 11개의 정상적인 TM 세포주, 도 2A), 녹내장 시신경유두 조직에서는 118배의 평균 증가가 있었다 14개의 녹내장 대 12개의 정상, 도 2B). 6개의 녹내장 제공자 및 6개의 정상적인 제공자로부터의 TM 조직에서 SAA의 ELISA로, SAA 단백질이 정상군에 비해 녹내장 TM 조직에서 현저히 증가하였다는 것이 나타났다. 정상적인 조직에 비해 녹내장 조직에서 SAA 농도에 있어서 3배의 차이를 나타내었다(각각, 11.3 및 3.8 ㎍/mg 단백질). 상기 데이타는 도 3에 나타내었다.

녹내장과 SAA 발현 증가의 관련성은 인간 안방수에서도 입증되었다. 정상 개체(n=16) 및 녹내장 개체(n=20)로부터의 안방수에서 SAA 단백질을 ELISA로 측정하였다. SAA는 정상적인 샘플보다 녹내장성 안방수에서 거의 3배 높은 것으로 밝혀졌다(각각, 10.0 ng/ml 대 3.7 ng/ml). 그 결과는 도 4에 나타내었다.

실시예 2. 국부 적용을 위한 페노피브레이트의 제제

안구에서 SAA를 감소시키고 IOP를 낮추기 위한 국부 적용용 1% 페노피브레이트 현탁액

설명	농도	단위	목적
페노피브레이트, NOC	1%	W/V%	활성 성분
하이드록시프로필 메틸셀룰로오스	0.5%	W/V%	점도 변형제(2910)(E4M), USP
2염기성 인산 나트륨	0.2%	W/V%	완충제(무수), usp
염화나트륨, usp	0.75%	W/V%	등장화제
디소듐 EDTA	0.01%	W/V%	킬레이트제(에데테이트 디소듐), usp
폴리소르베이트 80, nf	0.05%	W/V%	습윤제
염화 벤즈알코늄, nf	0.01%	W/V%	보존제
수산화나트륨, nf	q.s. pH	W/V%	pH 조정
염산, nf	q.s. pH	W/V%	pH 조정
정제수, usp	q.s. 100%	W/V%	비히클

실시예 3. SAA mRNA 또는 SAA 단백질의 발현을 변형시키는 화합물의 스크리닝 및 동정 과정

SAA 발현 및 기능을 변형시키는 제제를 스크리닝하기 위해 사용할 수 있는 방법 중 하나는 SAA 단백질 수준에서의 변화를 측정하는 것이다. 동물 또는 인간 혈청, 혈장, 완충된 용액, 세포 배양 배지, 및 조직 또는 세포 추출물에서 혈청 아밀로이드 A(SAA)의 정량을 위해 사용되는 시험관 내 분석 키트는 상업적으로 입수가능하다. 상기 분석법은 고체상 샌드위치 효소 결합 면역 흡착 분석법(ELISA)이다. SAA에 특이적인 단일클론 항체를 마이크로타이터 플레이트의 웰에 코팅한다. 알려진 SAA 함량의 표준 또는 미지의 SAA 함량을 포함한 샘플을 알칼리 포스파타아제 또는 퍼옥시다아제가 결합된 2차 항체와 함께 웰에 첨가한다. 항체는 어떠한 것도 다른 것의 결합 에피토프와 상호 작용하지 않도록 작제된 것이다. SAA를 고정된 항체에 의해 플레이트 상에 포획하고, 한 단계 과정에서 결합된 2차 항체로 표지한다. 인큐베이션 시간이 지난 다음, 플레이트를 세척하여 결합하지 않은 물질을 제거하고, 기질(PNPP 또는 과산화물(peroxide))을 첨가한다. 착색 산물의 강도는 미지의 샘플에 존재하는 SAA의 농도에 비례한다.

실시예 4. SAA mRNA 또는 단백질의 발현을 변형시키는 화합물의 스크리닝을 위하여 배양된 세포주에서 SAA 유도

인간 간암 세포주 HpeG2는 플라스미드를 이용한 트랜스펙션(transfection) 및 리포터 분석을 위하여, 사이토카인에 의한 SAA 유도 연구에 널리 사용된다. SAA mRNA 및 단백질 합성은 PCL/PRF/5, HepB 및 HepG2를 포함한 몇몇 인간 간암 세포주에서 다양한 사이토카인에 의해 유도될 수 있다(Uhlar 및 Whitehead 1999). 인간 대동맥혈관 평활근 세포(HASMC)에 의한 SAA 합성은 글루코코르티코이드 호르몬에 의해 유도되지만, 간세포에 위한 SAA 생산을 촉진하는 염증 전 사이토카인, IL-1, IL-6, 및 TNF-α에 의해서는 유도되지 않는다(Kumon et al . 2002b; Kumon et al. 2001; Thorn and Whitehead 2002). Chemotaxicell 배양 챔버를 사용하여 분석하는 경우, SAA는 용량 의존적 방식으로 HASMC의 화학주성 이동을 촉진시켰다(Kumon et al . 2002a). SAA mRAN 발현 및 단백질 생산은 류마티스성 관절염 윤활막세포의 일차 배양에서 입증되었다(O'Hara et al. 2000).

실시예 5. 배양된 세포에서 SAA 의 기능적 분석

SAA의 사이토카인-유사 특징은 호중구에 의한 IL-8 분비의 유도를 포함한다(Furlaneto and Campa, 2002; He et al. 2003). 전골수구성 세포주인 HL-60 세포는 IL-8 분비가 증가하면서 SAA에 대해 반응하는 것으로 확인되었고, 이는 SAA 기능의 시험관 내 분석에 사용될 수 있다. HL-60 세포는 농도가 증가하는 재조합 인간 SAA로 4시간 동안 처리하였고, IL-8은 ELISA에 의해 배지 중에서 측정하였다. IL-8 분비는 용량 의존적 방식으로 증가하였다(도 5). HL-60 세포는 SAA 기능 및 발현 수준을 변형시키는 제제를 동정하기 위한 기능적 분석법을 위한 대리 세포주로 사용될 수 있다.

실시예 6. 마우스에서 아데노바이러스 매개의 SAA 발현은 IOP 를 증가시키며, p38 MAPK 억제제는 유도된 IOP 를 감소시킨다.

마우스에서 아데노바이러스를 통하여 상향 조절된 SAA 발현의 IOP를 상승시키는 능력 및 유도된 IOP의 차단에서 p38 MAPK 억제제의 효능을 연구하였다.

1. 마우스에서 상향 조절된 SAA 발현은 IOP 를 상승시킨다.

각 Balb/c 마우스의 한쪽의 눈에 7 x 10⁷ pfu/눈/2ul 용량의 Adv.SAA2(처리) 또는 Adv.null(비히클)를 유리체내 주입하였다. 각 동물의 반대쪽 눈에는 주입하지 않았다. Adv 외에, -1, 0, 1, 2, 5, 9 및 14일에 각 동물에 항-CD40L(0.5 mg/주입)을 복막내 주입하여, Adv.SAA2의 발현 기간을 연장시켰다. 마우스 IOP를 Tonolab에 의하여 마스크 방식(mask way)으로 측정하였다. 각 눈에 대한 IOP의 평균을 18 내지 30개의 측정치로부터 수득하였다. 마우스에서 Adv.SAA2의 유리체내 주입은 IOP를 상당히 증가시켰다(49% 또는 5.8 mm Hg, n = 6-8, p<0.05) (도 6). SAA 발현은 비히클 처리된 눈 및 주입하지 않은 반대쪽 눈을 포함하는 대조군 눈에서보다 모든 Adv.SAA2 처리된 눈에서 상당히 더 높았다(p<0.0001; n = 16) (도 7). 이들 결과는 SAA 발현의 상향 조절이 마우스 IOP를 증가시키는 것을 나타내고, 이는 녹내장 발병 기전에 SAA의 관련 증거를 제공하는 것이다.

2. 마우스에서 p38 MAPK 억제제는 Adv . SAA2 유도된 IOP 를 낮춘다:

P38 MAPK 억제제인 4-아자인돌이 시험관 내에서 SAA-유도된 IL-8 발현을 억제하는 것을 확립한 후에, 본 발명자들은 -1일 내지 7일 및 13일 내지 17일에 하루 두 번씩 양쪽 눈에 5㎕의 1% 4-아자인돌 또는 비히클의 국소 투여에 의한 Ad.SAA2(2xlO⁷ pfu) + 항CD40L의 유리체내 주입 이후 마우스 IOP 상에서 화합물의 효과를 테스트하였다. 다시, Adv.SAA2의 유리체내 주입은 4일 내지 24일에 마우스 IOP를 상당히 증가시켰다(비히클 그룹). 4-아자인돌의 국소 투여는 처리 기간 동안 Adv.SAA2-유도된 IOP를 상당히 억제시켰다(-1일 내지 7일 및 13일 내지 17일). 4-아자인돌은 주입하지 않은 눈에서 IOP에 영향을 미치지 않았다(도 8A). 4일 후 모든 Ad.SAA2-주입된 눈에서 홍채 충혈이 관찰되었으며, 주입 후 두 주 동안 천천히 감소하였다(도 8B). 4-아자인돌은 주입된 눈에서 충혈에 영향을 미치지 않았으며, 이는 4-아자인돌의 IOP-강하 효과가 홍채 충혈의 제거를 통한 것이 아님을 나타낸다. 이들 결과는 고안압증의 치료를 위한 p38 MAPK 억제제의 가능성을 나타낸다.

실시예 7 재조합 SAA 는 관류 배양된 인간 눈에서 유출률을 감소시킨다.

다섯 쌍의 인간 눈을 재조합 SAA(1 ㎍/mL)(실험군 안구) 또는 동등 부피의 비히클(대조군 안구)를 함유하는 매질로 관류시켰다. 배양 기간의 마지막에, 각 눈의 4분의 1, 4곳을 투과 전자 현미경으로 시험하여 TM 조직 생존력을 결정하였다. 각 눈의 관류액을 수집하고, IL-8 수준의 ELISA 측정을 위하여 사용하였다. 다섯 명 모두는 처리 24 시간 내에 IOP가 상승하였다(도 9). 다섯 명 모두는 IL-8 수준이 상승하였다(도 10). IOP의 변화는 관류액에서 인터루킨-8의 SAA-유도된 증가와 관련된다. 모든 다섯 쌍의 눈은 허용가능한 관류-후 TM 생존력 점수를 가졌다. 이들 결과는 증가된 SAA 수준이 관류 배양된 인간 눈에서 IOP를 상승시킬 수 있다는 것을 나타낸다.

본 명세서에 개시되고 청구된 모든 조성물 및/또는 방법은 본 개시물의 관점에서 과도한 실험 없이 만들어지고 수행될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법이 바람직한 구체예에 의해서 기술되었지만, 변형이 본 발명의 개념, 목적 및 범위를 벗어나지 않고, 본 명세서에 기재된 방법의 단계 혹은 단계의 순서에, 그리고 조성물 및/또는 방법에 적용될 수 있다는 것은 본 분야의 숙련자에게 명백할 것이다. 더욱 상세하게, 화학적 및 구조적으로 관련된 특정 제제가 유사한 결과를 달성하기 위하여 본 명세서에 기재된 제제를 대신할 수 있다는 것이 명백할 것이다. 본 분야의 숙련자에게 명백한 그러한 모든 치환 및 변형은 수반되는 청구 범위에 의해 정의된 대로 본 발명의 목적, 범위 및 개념 내에 있는 것으로 간주된다.

참고 문헌

하기 참고 문헌은 본 명세서에 기재된 것에 대한 대표적인 절차 또는 다른 자세한 보충물을 제공하는 범위까지 참고로 본 명세서에 특별히 인용된 것이다.

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cagcattggg ggaagtgcag ctgcagagat gccagtggga gccccgtgat 300 ggcggcacct gggctgctgg aaggtgtgga gtgagggcag ctcttcagcc agctcctgac 360 tataccggtc atttcctcag gatgggccct gctgggccac atggcagatg accctgactg 420 aaatccctgt gagttcatgt ctaaagcttt aagctttaaa acggacagcc tacccctgcc 480 acatctcatg tgtgccctgg aagcctcctt ccacccctct ggatgtcctg atatttctca 540 gcacagaaaa tctctgctcc gctggcttag ccaatttgga aatgcttttt ctaagttggc 600 tcctgagcca aggacaatgt agagaggggg actttctgct gccccagcct agtcctggag 660 ccccaccttg ggagaatgag agtgtggtgc gttaaatagg cagcccagct ggggacgtgc 720 ccagcatcca ggcagggaag ggtgggagag ctcttggtct gctgtattat cacggagggg 780 tgcagggggc atgcagatca ctctctcatg agaacatcaa cagggtcaga ttagctctgc 840 agaggcttat ggaggagcat ggtggccaga gatgggtcag taccagagcc caggggggct 900 gaggccagga catgcagaga ggctggtgga catagcagca actctggttt cttcttctcc 960 agtccatgtt cataccctga gggctaggca tttgtaataa caaacaaaca agcaatttag 1020 aaatgggcca ggcatggtgg catgtgccta tagtcccagc tacttgggag gccaaggcag 1080 gaggcctgct tgaacccaga aatttgaggc cagcctgggc aacacagcaa gattatctta 1140 aaaaattttt tttaatctct gagaaatggg tagggccagg aagtaaagga tggccaaata 1200 ctccataagc agcaaatgcg tggctccaat gtgaacaatg atattataga ctctgttctg 1260 agacctatgc attgacacct ccacctcccc cactacatct tgccacctta aaaccactga 1320 gagtggtacc tgctggaatg ggtccacaca cacagtcaca catattttag gcagggtagt 1380 tgacatcccc agggaaaaag agctcacaga gagaggctga atgtttccaa ctgggtagca 1440 gtaatagtac atcatgctgt acatggtaca gcacagatca ggtgaaaata atagcacatc 1500 gtgattaacc agggcttatt ccagggagtc aagaagagtt tcatatcaga aaaatctatc 1560 tttgtaattc actataccag taatcaaaga aaaggattgt acatttattt tactagatgc 1620 agaaaatgaa tttcataatt gtcaacatct actgatgata aggaaaatgt ataacaaaat 1680 aaagagacca tttctgactt gagaaaggat aaataccaat atgttatagc aacagttctc 1740 aaactgtttt ccagggaacc ctaagaatcc ctccttaggg aggctttgat ctcaaaatta 1800 tttttagaat agtgctaaca cactattttc atgtttcagt ctcattttct catgagtaca 1860 cacaatatga caagttagtt gatatgagtg tggatttcca catggtaact gacttttcag 1920 aagctaccac ttgttgagtt tggtataata tagaatagcc acaattatct aaaaatacca 1980 ttaaaataca ctcccccatt tcaactatat atctgtgtga ggctgaattt tcttcatata 2040 ctccaaccta aataacatat taaaacaggt tggatgatga atcagatagg aaaatccagc 2100 tatgaaaaaa aaatcagaca tgaaaaattt tcaaaagggt aaaaccatag tactcttctt 2160 actttttttc ttttggaaga tggttatttt tcataaaaat atattattta tgttaacata 2220 tagaagatgg ataatttttt gaagaattga taaatgttta aattttttct ttctattatg 2280 gtaaatactg atgaatagag tccccataaa taaaagttct ttggggtatt caataatttt 2340 taatagtgta atgggatcct gagaccaaaa ggtttgagaa tcattgctct acagcaaaca 2400 ttatgtgtaa ttaagacact tcaggtgcat tctcaagaag accaataaag aggccacaat 2460 ggcaggcgtg gtggctcaca cttgtaatcc aagaacttag agaggacgag gcaggtggat 2520 cactggaggt caggaattct caaccagcct ggccaacatg gtgaaaccct gtctctacta 2580 aaagtacaaa aattagtcgg gtgtagtggc aggtacctgt aatcccaagt acttgggggg 2640 ttgaggcagg agaatcactt gaagccggga ggtggaggct gcagtgagcc gagatcgtgc 2700 cactgcactc cagcctgggc aacggagtga gacttcatca tggaaaaaaa aacaaagagg 2760 ccaggatgtc tggttgttac tgccactgtt tcacatatcc ctgaaggacc tgcccaatgc 2820 taaagaaaca caaggaaggt aagaggtgaa agagaagaaa tgaaactatc attgtttgaa 2880 gatgacacca tcttttacat agaaaacctg ttagaatcaa atggcaagct attagaacta 2940 ctaagagaat tcagtgaggc tgctgtattc atggcaaaat tttaacaatt gatagcattt 3000 ctctgcaaca ttccttaata gttataaaat acagcacaaa gtagtaccaa aaatattaac 3060 tatctaggaa ataacctctt acagagaaaa tttagtctgt taaaggataa acagtggcaa 3120 tgtacgtcat gtccacagag attatatttt agcttagcaa agataccaat tctcccaaat 3180 ttatttataa attaaatgca atgtgaatca aaatttccca ctggaatttt tatcaggaag 3240 gcaacaaatt ctttctttct ttctttcttt ctttctttat ttatttattt atttatttat 3300 ttatttattt ccttccttcc ttccttcctt ccttccttcc tttctttctt tctttctttc 3360 tttctttctt tctttctctc tctctttctc tctccccccc tctctctctc tctgtctctc 3420 tctctctctc tttctttctt tctttctttc tttcttttta agacaaagtc tggctctgtc 3480 acccaggctg cagtgcagtg atacaatctc agctcactga aacctcaacc tctccggcat 3540 caggtgaacc tcccacctca gccccccgag tagctgggac tacaggtgca caccactggg 3600 cctagataac tttttgtatt 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gtgctgggat tacaggtgtg agccaccgcg cccagccata 4500 tattttgctt ttcatctgca gctcctggat cctaactcct tgttatattg ttgggcactt 4560 taggcctcag taaacagaat ctctgtctat gaccttctcc tgtccttctt ccacctgccc 4620 aaagcaggac tctaatttga ttgtgggtca aaagactctc attccagaaa gggccttgcc 4680 tcatacccta gaggaaggaa tgctgcacag aaacgccaag tctgaacaga caagccttgc 4740 tgggtttata ccatatgctt tttgtccaat cacatttctt catggttgcc aatcatgcct 4800 atgtaatgaa gcctccataa gaacccagaa ggacagggtt cagagagttt ccacatagct 4860 gaacactatc tggagagtga acacttccta gagagtggca cacccagaga gatcatgaaa 4920 gctccacgcc cctttcccct tacctcgccc tccacatctc ttcatctgta tctttcataa 4980 tatcctttat aaataaacca gcaaatgtgt ttccctgagt tatgtgagtc actctagcaa 5040 attaatcgaa cccaaagagg gggtcatggg aaccccaact tgaagccagt cagtcagaag 5100 ttccagaggc ccagacttgc aactggggag aaagaggggg aggtcttggg gactgagccc 5160 ccaacctgtg ggatctgaca ctgtctccag gtaggtagtg ttggaactgc attggaggac 5220 actcctggtg tctgctgctt ggtgtgtggg gggaaaaacc cacacctttg gttacggagg 5280 tcttctgtgt tgacgatcat 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Claims

혈청 아밀로이드 A 단백질(SAA)을 암호화하는 유전자와 상호 작용하는 소 분자 제제를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 환자에 국소 안 투여하는 것을 포함하며, 상기 상호 작용이 SAA의 발현을 조절함으로써 SAA의 발현 감소로 녹내장을 치료하며 상기 제제는 p38 MAP 키나아제를 억제하는, 고안압증을 치료하는 방법.
제 1항에 있어서, 제제가 SB202190, SB203580, SB220025, PD 169316, SB 239063, 3-(-4-플루오로페닐)-2-(피리딘-4-일)-1H-피롤로-[3,2-b]피리딘, BIRB-796, CalBio506126, RO3201195 및 R1487로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
혈청 아밀로이드 A 단백질(SAA)과 그의 수용체의 상호 작용을 억제하거나 SAA 다운스트림 시그널링 이벤트를 조절하는 제제를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 환자에 국소 안 투여하는 것을 포함하며, 상기 제제는 p38 MAP 키나아제를 억제하는, 고안압증을 치료하는 방법.
제 3항에 있어서, 제제가 SB202190, SB203580, SB220025, PD 169316, SB 239063, 3-(-4-플루오로페닐)-2-(피리딘-4-일)-1H-피롤로-[3,2-b]피리딘, BIRB-796 및 CalBio506126로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
혈청 아밀로이드 A 단백질(SAA) 길항제의 치료적 유효량 및 약제학적 담체를 포함하며, 상기 SAA 길항제는 p38 MAP 키나아제의 소 분자 억제제인 국소 안구 조성물.
제 5항에 있어서, p38 MAP 키나아제 억제제가 SB202190, SB203580, SB220025, PD 169316, SB 239063, 3-(-4-플루오로페닐)-2-(피리딘-4-일)-1H-피롤로-[3,2-b]피리딘, BIRB-796 및 CalBio506126로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
혈청 아밀로이드 A 단백질(SAA)을 암호화하는 유전자와 상호 작용하는 소 분자 제제를 포함하는 안과적 조성물의 치료적 유효량을 안압이 상승된 환자에 투여하는 것을 포함하며, 상기 상호 작용이 SAA의 발현을 조절함으로써 SAA의 발현 감소로 IOP를 낮추고 상기 제제는 p38 MAP 키나아제를 억제하는, 안압이 상승된 환자의 안압을 낮추는 방법.
제 7항에 있어서, 제제가 SB202190, SB203580, SB220025, PD 169316, SB 239063, 3-(-4-플루오로페닐)-2-(피리딘-4-일)-1H-피롤로-[3,2-b]피리딘, BIRB-796, CalBio506126, RO3201195 및 R1487로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 7항에 있어서, 조성물이 국소로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.