KR20090064712A

KR20090064712A - 싸주아리 쑥 추출물을 포함하는 심장순환계 질환 예방 및치료용 약학 조성물

Info

Publication number: KR20090064712A
Application number: KR1020070132014A
Authority: KR
Inventors: 백남인; 이경태; 최명숙; 정태숙; 정해곤; 유종수
Original assignee: 강화군
Priority date: 2007-12-17
Filing date: 2007-12-17
Publication date: 2009-06-22

Abstract

본 발명은 싸주아리 쑥 추출물을 포함하는 심장순환계 질환 예방 및 치료용 약학 조성물에 관한 것으로, 특히 싸주아리 쑥으로부터 추출한 에르고스테롤 퍼옥사이드(ergosterol peroxide)를 유효성분으로 포함하여 항산화 활성이 우수한 심장순환계 질환 예방 및 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.

에르고스테롤 퍼옥사이드, 싸주아리 쑥, 심장순환계 질환, 동맥경화, 고지혈증, 심근경색

Description

싸주아리 쑥 추출물을 포함하는 심장순환계 질환 예방 및 치료용 약학 조성물 {Pharmaceutical composition containing Artemisia herba extract for treating and preventing heart disease}

본 발명은 싸주아리 쑥 추출물을 포함하는 심장순환계 질환 예방 및 치료용 약학 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 싸주아리 쑥으로부터 추출한 에르고스테롤 퍼옥사이드(ergosterol peroxide)를 유효성분으로 포함하는 심장순환계 질환 예방 및 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.

최근 성인병 증가와 더불어 동맥경화 등의 혈관장애 질환이 크게 증가하고 있다. 대표적인 혈관장애 질환으로서 동맥경화는 지질대사와 관련된 유전적 요인과 식습관, 흡연, 운동부족 등의 환경적 요인에 의하여 동맥이 경화되는 질환으로, 뇌동맥 또는 관상동맥에서 일어나기 쉬우며, 이로 인하여 심장질환, 뇌혈관 질환 등의 순환계 질환으로 발전하게 된다. 뇌동맥경화의 경우에는 두통, 현기증, 정신장애 등을 나타내고 뇌연화증의 원인이 되며, 관상동맥경화의 경우에는 심장부에 동통과 부정맥을 일으켜 협심증, 심근경색 등의 원인이 되는 것으로 알려져 있다. 또한 이로 인해 고혈압, 심장병, 뇌일혈 등이 유발되어, 동맥경화로 인한 질병이 현 대 사회에 있어 특히 50~60 대 남성들에게 가장 큰 사망요인으로 부각되고 있다.

혈관 내벽의 플라그(plaque) 형성 및 혈관파열은 심근경색 발병의 주요한 요인이며, 동맥경화의 초기 발생에 관한 가설은 혈관벽의 손상에 대한 만성 염증과정으로 손상기작 보다는 오히려 방어기작인 '손상에 대한 반응(response-to-injury hypothesis)'으로 제시되고 있다(Nature 1993, 362, 801-809). 이는 유전적 변이, 과산화물, 고혈압, 당뇨, 혈장 호모시스테인 농도 증가 또는 미생물 감염 등의 원인에 의하여 혈관 내피세포가 정상적인 항상성을 유지하지 못하는 기능부전 상태가 되는 것이다.

또한 혈중 콜레스테롤 농도가 높으면 관상동맥성 심혈관 질환이 유발되기 쉬우므로 혈중 콜레스테롤 농도를 줄이기 위해서는 콜레스테롤 및 지방의 섭취를 줄이는 식이요법을 시행하거나 지질대사와 관련된 효소를 저해함으로써 콜레스테롤의 흡수를 억제해야 한다. 이에, 콜레스테롤을 에스테르화하는 효소인 아실 코에이: 콜레스테롤 아실 전이효소(acyl-CoA: cholesterol acyltransferase; ACAT)에 관한 연구가 많이 행해지고 있다.

ACAT의 작용 기작은 크게 체내의 장, 간 및 혈관벽 세포의 세 부위에서 일어난다.

첫째, 장에서 ACAT는 섭취된 콜레스테롤을 에스테르의 형태로 바꾸어 장내로 흡수되는 것을 촉진시킨다. 둘째, 외부로부터 흡수되거나 체내에서 생합성된 콜레스테롤은 간에서 VLDL(very low-density lipoprotein)이라는 운반체 안에 축적된 후 혈관을 통해 신체 각 기관으로 공급되는데, 이때 ACAT에 의하여 콜레스테롤이 콜레스테릴 에스테르 형태로 전환됨으로써 운반체 내에 콜레스테롤 축적이 가능하게 된다. 셋째, 동맥혈관벽을 이루는 세포 내에서 ACAT는 콜레스테롤을 그의 에스테르 형태로 전환시켜 세포 내에 콜레스테롤이 축적되는 것을 촉진시키는데, 이는 동맥경화를 일으키는 직접적인 원인이 된다. 또한 ACAT 활성에 의해 거품세포가 콜레스테롤로부터 유도된 다량의 콜레스테릴 에스테르를 포함하기 때문에 실험적, 임상적인 측면에서 대식세포와 평활근세포로부터 유도된 거품세포의 형성은 매우 중요하다. 혈관벽 내의 거품세포의 증식은 ACAT 활성 증가와 직접적으로 연관되어 있기 때문에 강력한 항동맥경화제로서 ACAT 저해제의 개발은 바람직하다.

따라서, ACAT의 활성을 억제하는 약물은 첫째 장내 콜레스테롤의 흡수를 억제하여 체내로 유입되는 콜레스테롤의 양을 감소시킬 수 있을 것이며, 둘째 간에서 혈관 내로 콜레스테롤이 방출되는 것을 억제하여 혈중 콜레스테롤 농도를 떨어뜨릴 수 있고, 셋째 혈관벽 세포에 콜레스테롤이 축적되는 것을 방지하여 직접적으로 동맥경화를 예방할 수 있을 것으로 기대된다.

지금까지 보고된 ACAT 활성 저해제는 쥐간 마이크로좀 ACAT 또는 쥐간 대식세포(J774) ACAT에 대한 활성 저해제이다. 사람의 ACAT에는 hACAT-1(50 kDa) 및 hACAT-2(46 kDa)가 있는데, hACAT-1은 성인의 간, 부신, 대식세포, 신장에서 주로 작용하며, hACAT-2는 소장 및 간에서 작용한다(Rudel, L. L. et al., Curr. Opin. Lipidol. 12, 121-127, 2001). 사람 ACAT 활성을 저해하는 물질은 음식으로부터 유입되는 콜레스테롤의 흡수를 억제하고, 혈관 내벽에 콜레스테릴 에스테르의 축적을 억제하는 기작을 통해 고콜레스테롤증, 콜레스테롤 결석 또는 동맥경화 예방 및 치 료제의 표적이 되고 있다(Buhman, K. K. et al., Nature Med. 6, 1341-1347, 2000).

상기와 같은 종래기술의 문제점을 해결하고자, 본 발명은 항산화 활성(또는 아실 코에이:콜레스테롤 아실 전이효소 억제 활성)을 가져 LDL의 산화(또는 콜레스테릴 에스테르의 합성 및 축적)로 유발되는 고지혈증, 뇌동맥, 관상동맥 심장병, 동맥경화, 심근경색 등에 유용하게 사용될 수 있는 심장순환계 질환 예방 및 치료용 약학 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 에르고스테롤 퍼옥사이드(ergosterol peroxide)를 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 심장순환계 질환 예방 및 치료용 약학 조성물을 제공한다.

상기 에르고스테롤 퍼옥사이드는 싸주아리 쑥으로부터 추출되며, 조성물 총 중량 대비 0.01 내지 96 중량%로 포함되는 것이 바람직하다.

바람직하게, 상기 고지혈증, 뇌동맥, 관상동맥 심장병, 동맥경화 또는 심근경색이다.

본 발명의 약학 조성물은 항산화 활성(또는 아실 코에이:콜레스테롤 아실 전이효소 억제 활성)을 가져 LDL의 산화(또는 콜레스테릴 에스테르의 합성 및 축적) 로 유발되는 고지혈증, 뇌동맥, 관상동맥 심장병, 동맥경화, 심근경색 등에 유용하게 사용될 수 있다.

이하 본 발명을 상세하게 설명한다.

본 발명의 심장순환계 질환 예방 및 치료용 약학 조성물은 싸주아리 쑥으로부터 추출한 에르고스테롤 퍼옥사이드(ergosterol peroxide)를 유효성분으로 포함하여 고지혈증, 뇌동맥, 관상동맥 심장병, 동맥경화, 심근경색 등 심장순환계 질환을 예방 및 치료할 수 있다.

상기 에르고스테롤 퍼옥사이드는 건조한 싸주아리 쑥 전초 중량(㎏)의 약 1 내지 15배, 바람직하게는 약 5 내지 10배의 물이나 C₁ 내지 C₄의 저급알코올, 바람직하게는 메탄올에 담가 24 시간 동안 반복 정치 추출하고 여과한 후, 감압농축하고 이들을 통상의 분획 공정을 수행하여 얻을 수 있다.

구체적으로, 상기 에르고스테롤 퍼옥사이드는 싸주아리 쑥 건물 중 8.2 ㎏을 세절하여 80% MeOH 용액(40ℓ×2)을 가하여 2회 진탕 추출하여 여과 농축한다. 이렇게 얻은 농축물은 물(3ℓ)과 에틸아세테에트(EtOAc, 3ℓ×2)로 분배 추출하고, 물 분획은 다시 n-butanol(n-BuOH, 3ℓ×2)로 분배 추출한다. 그 다음, 각 분획을 감압 농축하여서 EtOAc 분획, n-BuOH 분획 및 물 분획을 얻을 수 있다. 상기 EtOAc 분획(SAE)을 50 ㎖의 실리카 겔(SiO₂)에 코팅한 후, 실리카 겔 컬럼 크로마토그라피(n-hexane:EtOAc=7:1→6:1→5:1→4:1→1:1→CHCl₃:MeOH=10:1→1:1)를 실시하여 얻 은 19 개의 분획물(SAE-1~SAE-19) 중 분획 SAE-8에 대하여 실리카 겔 컬럼 크로마토그라피(n-hexane:EtOAc=5:1)를 수행하여 총 11 개의 분획을 얻고, 이 중 SAE-8-4 분획을 실리카 겔 컬럼 크로마토그라피(n-hexane:EtOAc=7:1)로 정제하여 에르고스테롤 퍼옥사이드(SAE-8-4-9)를 분리할 수 있다.

상기와 같이 추출한 에르고스테롤 퍼옥사이드(phytol)은 하기 화학식 1로 표시된다.

상기 화학식 1의 화합물(white powder)은 10% 황산 발색 시 짙은 회색으로 발색되었다. IR spectrum에서 hydroxyl group(3360 cm^-1)을 갖는 구조임을 추정하였고, 분자량은 EI/MS를 측정하였을 때 m/z 428 [M]⁺의 peak가 관측되어 428로 결정할 수 있었다. ¹H-NMR(400 MHz, CDCl₃) 스펙트럼에서 δ_H 6.48(1H, d, J=8.4, H-7), 6.22(1H, d, J=8.4 Hz, H-6), 5.18(1H, dd, J=7.6, 15.2 Hz, H-22), 5.09(1H, dd, J=7.6, 15.2 Hz, H-23)의 signal을 통해 olefine methine proton이 4개 존재하는 것을 확인할 수 있었다. 또한, δ_H 3.91(1H, m)의 signal을 통해 1개의 oxygenated methine를 확인하고, δ_H 0.80-δ_H 1.00에서 다수의 methylene과 methine proton signal 을 관측할 수 있었다. 그리고 δ_H 0.86(3H, s, H-19) 과 δ_H 0.78(3H, s, H-18)에서 2개의 singlet methyl proton signal과, δ_H 0.98(3H, d, J=6.8 Hz), δ_H0.89(3H, d, J=6.8 Hz), δ_H 0.81(3H, d, J=6.4 Hz), δ_H 0.79(3H, d, J=7.2 Hz)에서 4개의 doublet methyl proton signal을 관측할 수 있었다. 따라서 sterol 화합물임을 알 수 있었다. ¹³C-NMR(100 MHz, CDCl₃) 스펙트럼에서 상기 화합물이 모두 28 개의 탄소를 가지고 있는 것을 확인하여 ergosteol류의 화합물로 추정할 수 있었다. 4개의 olefine methine 탄소[(δ_C 135.07, C-23), (δ_C135.29, C-7), (δ_C 132.16, C-22), (δ_C 130.61 , C-7)] signal 을 통해 2개의 이중결합이 존재하는 것을 확인할 수 있었다. 그리고 δ_C 82.12(C-8), 79.39(C-5)를 통해 2개의 oxygen이 결합하고 있는 4급탄소를 확인하고, δ_C 66.42(C-3)를 통해 oxygenated methine carbon을 확인할 수 있었으며, 6개의 methyl carbon[(δ_C 20.93, C-21), (δ_C 20.02, C-26), (δ_C 19.71, C-27), (δ_C 18.24, C-19), (δ_C 17.62, C-28), (δ_C 12.94, C-18)] signal을 확인할 수 있었다. 이를 종합한 결과, 상기 화학식 1의 화합물은 에르고스테롤(ergosterol)의 C-5와 C-8에 peroxide 결합한 에르고스테롤 퍼 옥사이드(5,8-epidioxy-ergosta-6,22-dien-3-ol, ergosterol, Takaishi et al, 1992)로 구조 결정할 수 있었다.

본 발명은 상기와 같은 에르고스테롤 퍼옥사이드를 유효성분으로 포함하는 심장순환계 질환 예방 및 치료용 약학 조성물을 제공한다.

상기 싸주아리 쑥으로부터 추출한 에르고스테롤 퍼옥사이드는 항산화 활성(또는 아실 코에이:콜레스테롤 아실 전이효소 억제 활성)을 가지므로, 상기 에르고스테롤 퍼옥사이드를 포함하는 본 발명의 약학 조성물은 LDL의 산화(또는 콜레스테릴 에스테르의 합성 및 축적)로 유발되는 고지혈증, 뇌동맥, 관상동맥 심장병, 동맥경화, 심근경색 등의 심장순환계 질환의 예방 및 치료제로 유용하게 사용될 수 있다.

상기 에르고스테롤 퍼옥사이드는 본 발명의 약학 조성물 총 중량 대비 0.01 내지 96 중량%로 포함되는 것이 바람직하다. 그 함량이 상기 범위내일 경우에는 고지혈증, 뇌동맥, 관상동맥 심장병, 동맥경화, 심근경색 등 심장순환계 질환의 예방 및 치료에 있어 더욱 좋다.

상기 약학 조성물에는 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함될 수 있다.

또한 상기 약학 조성물의 투여 형태는 이들의 약학적 허용 가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타약학적 활성 화합물과 결합뿐 아니라 적당한 집합으로도 사용될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡 슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 또한, 본 발명의 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 광물유 등이 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calciumcarbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로 제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서 본 발명의 약학 조성물은 1일 0.0001 내지 100 ㎎/㎏으로, 바람직하게는 0.001 내지 100 ㎎/㎏으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시하나, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시 예에 한정되는 것은 아니다.

[실시 예]

실시 예 1. 에르고스테롤 퍼옥사이드 추출

싸주아리 쑥 건물 중 8.2 ㎏을 세절하여 80% MeOH 용액(40ℓ×2)을 가하고 2회 진탕 추출하여 여과 농축하였다. 이렇게 얻은 농축물은 물(3ℓ)과 에틸아세테이트(EtOAc, 3ℓ×2)로 분배 추출하고, 물 분획은 다시 n-butanol(n-BuOH, 3 ℓ×2)로 분배 추출하였다. 각 분획을 감압 농축하여 EtOAc 분획, n-BuOH 분획 및 물 분획을 얻었다. 상기 EtOAc 분획(SAE)을 50 ㎖의 실리카 겔(SiO₂)에 코팅한 후, 실리카 겔 컬럼 크로마토그라피(n-hexane:EtOAc=7:1→6:1→5:1→4:1→1:1→ CHCl₃:MeOH=10:1→1:1)를 실시하여 총 19개의 분획물(SAE-1~SAE-19)을 얻었다. 이 중 분획 SAE-8에 대하여 실리카 겔 컬럼 크로마토그라피(n-hexane:EtOAc=5:1)를 수행하여 총 11 개의 분획을 얻었으며, 11 개의 분획 중 SAE-8-4 분획을 실리카 겔 컬럼 크로마토그라피(n-hexane:EtOAc=7:1)로 정제하여 하기 화학식 1로 표시되는 에르고스테롤 퍼옥사이드(SAE-8-4-9)를 분리하였다.

[화학식 1]

ergosterol peroxide(21.1 ㎎): white powder(CHCl₃); m.p. 180-182 ℃; [a]_D = +26.0°(c=0.2, CHCl₃); EI/MS m/z(70 eV): 428 [M]⁺; IR(KBr, cm^-1) 3360, 1460, 1380, 1040, 1030, 960, 940; ¹H-NMR(400 MHz, CDCl₃ _,δ_H) 6.48(1H, d, J=8.4, H-7), 6.22(1H, d, J=8.4 Hz, H-6), 5.18(1H, dd, J=7.6, 15.2 Hz, H-22), 5.09(1H, dd, J=7.6, 15.2 Hz, H-23), 3.91(1H, m, H-3), 0.97(3H, d, J=6.4 Hz, H-21), 0.88(3H, d, J=7.2 Hz, H-28), 0.86(3H, s, H-19), 0.81(3H, d, J=6.8 Hz, H-26), 0.78(3H, s, H-18), 0.77(3H, d, J=6.4 Hz, H-27); ¹³C-NMR(100 MHz, CDCl₃ _,δ_C) 135.07(C-23), 135.29(C-7), 132.16(C-22), 130.61(C-7), 82.12(C-8), 79.39(C-5), 66.42(C-3), 56.16(C-17), 51.67(C-14), 51.05(C-4), 44.56(C-13), 42.78(C-24), 39.79(C-20), 39.34(C-12), 39.34(C-1), 36.93(C-10), 34.70(C-9), 33.09(C-25), 30.12(C-2), 23.44(C-16), 20.93(C-21), 20.71(C-15), 20.68(C-11), 20.02(C-26), 19.71(C-27), 18.24(C-19), 17.62(C-28), 12.94(C-18)

.

실시예 2. ACAT 활성에 미치는 영향

(ACAT 효소원 제조)

상기 실시예 1에서 추출한 에르고스테롤 퍼옥사이드의 사람 ACAT-1 및 ACAT-2의 활성에 미치는 영향을 알아보기 위하여, 베큘로바이러스 발현체제를 이용하여 hACAT-1 및 hACAT-2 각각의 단백질을 얻었다. 사람 간 cDNA 라이브러리 스크리닝(library screening)을 통하여 얻어진 hACAT-1 및 hACAT-2 각각의 cDNA를 베큘로바이러스 전달 벡터에 삽입하고, 곤충세포인 sf9 세포에 도입하여 바이러스를 제조하였다. 다음으로, 플라크 정제(plaque purification) 방법으로 hACAT-1 및 hACAT-2 각각의 재조합 바이러스를 분리한 후, 3 차례의 증폭과정을 거쳐 저장용 바이러스(viral stock)의 역가(titer)를 높였다. 단백질 발현 효율이 좋은 Hi5 곤충세포에 재조합 바이러스를 감염다중도(Mutiplicity of Infection)가 1이 되도록 감염시킨 후, 27 ℃에서 하루 동안 진탕배양하였다. 배양된 hACAT-1과 hACAT-2가 각각 과 량 발현된 Hi5 세포들로부터 마이크로좀 분획을 분리하기 위하여 500 rpm에서 15 분간 원심분리하여 세포들을 모으고 저장완충액(hypotonic buffer)에서 급냉동, 급해동 방법으로 세포를 깬 후, 100000 rpm에서 한 시간 동안 초원심분리하였다. 이렇게 얻어진 마이크로좀 분획들은 단백질 농도가 8 ㎎/㎖이 되도록 저장완충액으로 현탁하여 사용 전까지 저온냉동기에 보관하였다.

(ACAT 활성 측정)

ACAT 활성의 측정은 [1-¹⁴C] 올레오일-코에이(oleoyl-CoA)(56.0 μCi/μmol; Amersham)를 기질로 하여 Brecher & Chan의 방법(P. Brecher and C. Chan, Biochim . Biophys . Acta , 617, 458, 1980)을 일부 수정하여 사용하였다.

상기 실시 예 1에서 추출한 에르고스테롤 퍼옥사이드 10 ㎕, 상기에서 수득한 마이크로좀 용액 4.0 ㎕, 활성분석 완충액(0.5 M KH₂PO₄, 10 mM DTT, pH 7.4; Sigma) 20.0 ㎕, 지방이 제거된 우혈청알부민(BSA; bovine serum albumin, 저장액 농도 40 ㎎/㎖; Sigma) 15.0 ㎕, 콜레스테롤(저장액 농도 20 ㎎/㎖; Sigma) 2.0 ㎕, 증류수 41.0 ㎕를 가하여 37 ℃에서 15 분간 예비 반응시켰다. 이 반응액에 [1-¹⁴C] 올레오일-코에이(0.05 μCi, 최종농도: 10 μM) 8 ㎕를 첨가하여 다시 37 ℃에서 30 분간 반응시킨 후, 이소프로판올:헵탄 혼합물(4:1 (v/v)) 1 ㎖을 가하여 반응을 정지시켰다. 여기에 600 ㎕의 헵탄과 200 ㎕의 0.1 M KH₂PO₄(pH 7.4)를 첨가 하고, 혼합물을 볼텍서(vortexer)로 격렬하게 혼합한 후, 300 rpm에서 5 분 동안 원심분리를 하였다. 상기 원심분리하여 얻은 100 ㎕의 상층액을 신틸레이션 병(scintillation bottle)에 넣고, 신틸레이션 액(Lipoluma) 4 ㎖을 가하였다. 이 혼합물의 방사선량은 1450 마이크로베타 액체 신틸레이션 계수기(1450 Microbeta liquid scintillation counter, Wallacoy)로 측정하였다.

ACAT 활성은 측정된 방사선량으로부터 시간당 방사선량을 계산하여 1 분 동안 단백질 1 ㎎당 합성된 콜레스테릴 올레이트 피코몰(피코몰/분/㎎ 단백질)로 계산하였으며, 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

구분	hACTC-1 (100 ㎍/㎖)	hACTC-2 (100 ㎍/㎖)
ACTC 활성 저해율 (%)	81.5 ± 0.7	34.8 ± 18

상기 표 1에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 싸주아리 쑥으로부터 추출한 에르고스테롤 퍼옥사이드는 ACAT 활성에 대한 억제능이 우수함을 확인할 수 있었다.

Claims

에르고스테롤 퍼옥사이드(ergosterol peroxide)를 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 심장순환계 질환 예방 및 치료용 약학 조성물.
제1항에 있어서,

상기 에르고스테롤 퍼옥사이드는 싸주아리 쑥으로부터 추출된 것을 특징으로 하는 심장순환계 질환 예방 및 치료용 약학 조성물.
제1항에 있어서,

상기 에르고스테롤 퍼옥사이드는 조성물 총 중량 대비 0.01 내지 96 중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 심장순환계 질환 예방 및 치료용 약학 조성물.
제1항에 있어서,

상기 심장순환계 질환은 고지혈증, 뇌동맥, 관상동맥 심장병, 동맥경화 또는 심근경색인 것을 으로 하는 심장순환계 질환 예방 및 치료용 약학 조성물