KR20090023631A - 유기 화합물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 히스톤 디아세틸라아제의 억제제 및 B 비타민을 함유하는 약제학적 조성물, 및 HDAC 의존적 질환의 치료에서의 이의 사용 방법 및 상기 질환의 치료를 위한 약제학적 제제의 제조 방법에 관한 것이다.

히스톤 디아세틸라아제, B 비타민, 증식성 질환

Description

유기 화합물{ORGANIC COMPOUNDS}

본 발명은 히스톤 디아세틸라아제(histone deacetylase)의 억제제 및 B 비타민 분자를 함유하는 약제학적 조성물 및 이의 사용 방법에 관한 것이다.

히스톤의 가역적 아세틸화는 DNA에 대한 전사 인자의 접근성을 변화시킴으로써 작용하는 유전자 발현의 주요 조절 인자이다. 정상 세포에서, 히스톤 디아세틸라아제 ("HDAC") 및 히스톤 아세틸트랜스퍼라아제는 함께 히스톤 아세틸화의 수준을 조절하여 염색체의 활성 및 불활성 부위를 조절한다. 히스톤 단백질의 리신 잔기의 아세틸화는 뉴클레오솜을 불안정화시키고 DNA의 인식 서열에 대한 전사 인자의 접근을 가능하게 함으로써 입체 형태 변화를 유도한다. 1종 이상의 HDAC 들의 활성에 의한 히스톤의 탈아세틸화는 염색체 패킹을 밀폐하여, 전사의 억제를 유도한다. HDAC의 억제는 과아세틸화된 히스톤의 축적을 야기하고, 이는 각종 세포 반응을 일으킨다.

HDAC의 억제제는 암 세포 및 기타 증식성 질환에 대한 이의 치료 효과에 대하여 연구되어 왔다. 예를 들어, 부티르산 및 이의 유도체, 예컨대 나트륨 페닐 부티레이트는 인간 결장 암종, 백혈병 및 망막아종 세포주에서 시험관내 아폽토시스를 유도하는 것으로 보고되어 왔다. 그 항증식 활성에 대하여 광범위하게 연구 된 HDAC의 기타 억제제는 트리코스타틴 A 및 트라포신이다. 트리코스타틴 A는 항진균성 및 항생성이며 포유동물 HDAC의 가역적 억제제이다. 트라포신은 시클릭 테트라펩티드이고, 이는 포유동물 HDAC의 비가역적 억제제이다. 탈리도미드도 HDAC를 표적하는 것으로 최근 보고되었다.

화학요법제는, 그러나, 신생물 조직 뿐만 아니라 정상 성장 세포에도 작용하고, 악성 세포 뿐만 아니라 빠르게 분화하는 정상 세포에도 독성이다. 통상의 즉각적 부작용은 오심 및 구토이며, 치료제의 투여 이후 약 1 개월부터 시작하여 지연형 부작용, 예컨대 골수 활성이 감소되어 혈구 생성의 감소를 야기하는 상태인, 골수억제가 종종 뒤따른다. 상기 부작용은 효과적인 암 화학요법을 방해하여, 환자가 후속 치료 과정을 지연하게 하고/거나 치료 용량을 감소시키게 한다. 최근 화학요법제는 이전의 작용제와 비교시 부작용이 감소되었으나, 현존 작용제의 부작용을 감소시키거나 제거하여, 더 많은 용량 및 더 긴 프로토콜 또는 반복된 과정이 암 환자에게 이용가능하도록 할 필요성이 존재한다.

증식성 질환, 예컨대 암 고형 종양, 백혈병, 및 림프종을 치료하여 바람직하지 않은 부작용을 개선하거나 감소시키는 방법에 대한 필요성이 존재한다.

본 발명은 하나의 실시양태에서 종양, 세포괴 또는 표적 세포를 갖는 대상체의 치료 방법을 제공하고, 상기 방법은 히스톤 디아세틸라아제 (HDAC)의 억제제 및 B 비타민 분자를 대상체에게 투여하는 단계를 갖는다. 관련 실시양태는 대상체에게 투여한 이후, HDAC 억제제 또는 비타민을 단독으로 유사하게 투여받은 대조군과 비교시 종양, 세포괴 또는 표적 세포의 증식의 감소를 관측하는 것을 더 포함한다. 표적 세포의 증식의 감소를 관측하는 것은 종양 크기; 전이; 종양 괴사; 세포 증식 속도; 및 세포 아폽토시스의 군 중에서 선택되는 한 가지 이상의 파라미터의 억제를 분석함으로써 측정된다. 상기 용도 및 방법과 관련된 실시양태에서, 대상체는 포유동물 또는 포유동물 세포이고, 예를 들어, 대상체는 인간이다.

상기 용도 및 방법과 관련된 실시양태에서, 종양, 세포괴 또는 표적 세포는 증식성 질환, 과다증식성 질환, 심혈관 질환, 면역계의 질환, 중추 신경계의 질환, 말초 신경계의 질환, 및 유전자의 발현이상과 관련된 질환의 군 중에서 선택되는 1종 이상의 질환에서 존재한다. 관련 실시양태에서, 심혈관 질환은 심부전이다. 관련 실시양태에서, 증식성 질환은 양성 또는 악성 종양, 뇌 암종, 신장 암종, 간 암종, 부신 암종, 방광 암종, 유방 암종, 위 암종 (특히 위 종양), 난소 암종, 식도 암종, 결장 암종, 직장 암종, 전립선 암종, 췌장 암종, 폐 암종, 질 암종, 갑상선 암종, 육종, 교아세포종, 림프종, 다발성 골수종 또는 위장암, 결장 암종 또는 결장직장 선종, 두경부 종양, 표피 과다증식, 건선, 전립선 비대증, 종양 형성, 바람직하게는 유방 암종, 또는 백혈병이다.

또다른 관련 실시양태에서, 과다증식성 질환은 백혈병, 과형성, 섬유증 (예컨대 폐 섬유증, 및 또한 신장 섬유증과 같은 기타 유형의 섬유증), 혈관신생, 건선, 아테롬성 동맥경화증 및 혈관 내의 평활근 증식, 예컨대 혈관형성술 이후의 협착증 또는 재협착증의 군 중에서 선택되는 1종 이상이다.

더욱 또다른 관련 실시양태에서, 면역 상태는 류마티즘성 관절염, 크론병, 다발성 경화증, 건선, 및 I형 당뇨병의 군 중에서 선택되는 1종 이상이다. 또다른 관련 실시양태에서, 면역 상태는 기관 또는 조직의 이식된 동종 이식편의 면역 거부이다.

상기 용도 및 방법과 관련된 기타 실시양태에서, 치료될 질환은 지속성 혈관신생, 예컨대 건선; 카포시 육종; 재협착증, 예를 들어, 스텐트 유도의 재협착증; 자궁내막증; 크론병; 호지킨병; 백혈병; 관절염, 예컨대 류마티즘성 관절염; 혈관종; 혈관섬유종; 안 질환, 예컨대 당뇨병성 망막병증 및 신생혈관 녹내장; 신장 질환, 예컨대 사구체신염; 당뇨병성 신병증; 악성 신장경화증; 혈전성 미세혈관병 증후군; 이식 거부 및 사구체병증; 섬유성 질환, 예컨대 간경화증; 혈관간세포-증식성 질환; 동맥경화증; 신경 조직의 손상과 관련되고; 풍선 카테터 치료 이후 혈관의 재폐색의 억제, 혈관 보철물에서의 사용 또는 혈관을 개방된 채로 유지하기 위한 기계적 장치, 예를 들어, 스텐트의 삽입 이후, 면역억제제로서, 흉터 없는 상처 치유에서의 보조물로서 사용, 및 검버섯 및 접촉 피부염의 치료를 위한 것이다.

상기 용도 및 방법과 관련된 실시양태에서, 종양, 세포괴 또는 표적 세포는 HDAC 의존적 질환에서 존재하거나 또는 이와 관련되고, HDAC는 HDAC1, HDAC2, HDAC3, HDAC4, HDAC5, HDAC6, HDAC7, HDAC8, HDAC9, HDAC1O 및 HDAC11의 군 중에서 선택되는 1종 이상이다. 관련 실시양태에서, 단백질 HDAC는 HDAC1, HDAC2, HDAC6 및 HDAC8의 군 중에서 선택된다.

상기 용도 및 방법과 관련된 실시양태에서, HDAC의 억제제로서 히스톤 디아세틸라아제와 상호 작용하여 HDAC 효소 활성을 억제하는 구조를 갖는 임의의 화합물을 들 수 있다. HDAC 활성의 억제는 HDAC의 식별된 활성의 억제, 예를 들어, 히스톤으로부터 아세틸기 제거의 억제로서 편리하게 분석된다. 대안으로, HDAC 활성의 억제는 기타 기질, 예컨대 튜뷸린, HSP-90, Hif-1 알파 및 p53의 탈아세틸화의 억제로서 분석된다. 특정 실시양태에서, HDAC 활성의 억제는 억제제의 부재 하의 활성과 비교시 약 50% 이상, 약 75% 이상, 약 90% 이상, 또는 약 99% 이상이다.

상기 용도 및 방법과 관련된 기타 실시양태에서, HDAC 억제제는 또다른 비관련 생물학적 효과 또는 효소학적 효과를 일으키는 억제제의 농도보다 더 낮은 농도에서 히스톤 디아세틸라아제를 억제한다. 일부 실시양태에서, 히스톤 디아세틸라아제 억제 활성에 이용되는 HDAC 억제제의 농도는 비관련 생물학적 효과 또는 효소학적 효과를 일으키는 농도보다 약 2 배 이상, 약 5 배 이상, 약 10 배 이상, 또는 약 20 배 이상 더 낮다.

상기 용도 및 방법과 관련된 기타 실시양태에서, B 비타민 분자는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B3, 비타민 B5, 비타민 B6, 비타민 B9, 및 비타민 B12로 이루어진 군 중에서 선택된다. 관련 실시양태에서, B 비타민 분자는 비타민 B2, 비타민 B3, 비타민 B6, 비타민 B9, 및 비타민 B12로 이루어진 군 중에서 선택된다. 더욱 또다른 관련 실시양태에서, B 비타민 분자는 B 비타민 전구체이다. 더욱 또다른 관련 실시양태에서, B 비타민 분자는 B 비타민 유사체 또는 유도체이다.

상기 용도 및 방법과 관련된 실시양태에서, 투여는 전신 경로에 의해 전달된다. 예를 들어, 전신 투여 경로는 경구, 피하, 근육내, 복막내, 경피, 및 정맥내 중 한 가지 이상이다.

상기 용도 및 방법의 하나의 실시양태에서, 조합 투여는 비타민 및 억제제의 동시 투여이다. 대안적 실시양태에서, 조합 투여는 비타민 및 억제제의 순차적 투여이다. 관련 실시양태에서, 비타민 및 억제제의 용량은 상이한 빈도로 투여된다. 예를 들어, 비타민의 투여는 억제제의 투여보다 더 빈번하고; 대안으로, 억제제의 투여는 비타민의 투여보다 더 빈번하다.

상기 용도 및 방법과 관련된 실시양태에서, 대상체당 비타민의 용량은 약 50 마이크로그램 (㎍) 이상, 약 80 ㎍, 90 ㎍, 100 ㎍ 이상, 또는 약 500 ㎍ 이상, 약 25 밀리그램 (mg), 30 mg, 40 mg 이상, 또는 약 50 mg 이상, 또는 약 500 mg 이상이다.

상기 용도 및 방법과 관련된 실시양태에서, 투여는 비타민의 부재 하의 동일한 양보다 더 많고 더 적은 부작용을 일으키는 HDAC 억제제/대상체/일의 양을 더 포함한다.

본 발명의 실시양태는 HDAC 억제제 및 B 비타민 분자의 조합물의 항암 치료로서의 용도를 제공한다. 관련 실시양태는 종양 크기의 증가 속도, 종양 수 (전이)의 증가 속도; 및 형질전환된 세포의 증식 속도로 이루어진 군 중에서 선택되는 한 가지 이상의 파라미터의 억제를 측정하는 것을 더 포함한다.

특정 실시양태에서, 본 발명은 증식성 또는 과다증식성 장애의 치료를 위한 키트를 제공하며, 상기 키트는 HDAC 억제제 및 B 비타민 분자 각각을 포함하고, 또한 용기를 포함한다. 관련 실시양태에서, HDAC 억제제 및 B 비타민 분자 각각은 키트 중에 단위 용량으로 존재한다. 또다른 관련 실시양태에서, 키트는 또한 사용설명서를 포함한다. 관련 실시양태에서, 용량은 경구 이용가능한 정제이다. 또다른 관련 실시양태에서, 용량은 비경구 투여용 바이알 중에 포함된다.

본 발명의 실시양태는 HDAC 억제제 및 B 비타민 분자를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 관련 실시양태에서, 약제학적 조성물은 HDAC 억제제 및 B 비타민 분자 각각을 유효 용량으로 포함한다. 또다른 관련 실시양태에서, 약제학적 조성물은 약제학적 허용 완충제를 더 포함한다. 또다른 관련 실시양태에서, 약제학적 조성물은 단위 용량으로 존재한다.

본 발명의 화합물은 세포 증식성 병 및/또는 이상 조절된 유전자 발현과 관련된 병의 치료에 특히 효능이 있는 약제학적 조성물 중의 활성 성분으로서 적절하다. 각종 실시양태의 약제학적 조성물은 기타 약제학적 허용 부형제, 담체, 충전제, 희석제 등과 함께 본 발명의 활성제의 약제학적 유효량을 갖는다. 본원에서 사용된 구절, "약제학적 유효량"은 숙주, 또는 숙주의 세포, 조직 또는 기관에 투여하여, 치료 결과, 특히 항-종양 효과, 예를 들어, 악성 암 세포, 양성 종양 세포 또는 기타 증식성 세포의 증식의 억제, 또는 임의의 기타 HDAC 의존적 질환의 억제를 달성하기 위해 필요한 양을 나타낸다.

HDAC 억제제 화합물

본원에서 사용된 용어 "히스톤 디아세틸라아제 억제제", "히스톤 디아세틸라아제의 억제제", 또는 "HDAC 억제제"는 히스톤 디아세틸라아제와 상호 작용하여 이의 효소 활성을 억제하는 기능을 할 수 있는 구조를 갖는 임의의 모든 화합물을 일컫는다. "히스톤 디아세틸라아제 효소 활성의 억제"는 히스톤 디아세틸라아제가 단백질로부터, 예를 들어, 히스톤으로부터, 또는, 예를 들어, 튜뷸린으로부터, HSP-90으로부터, Hif-1 알파로부터 또는 p53으로부터 아세틸기를 제거하는 능력을 감소시키는 것을 의미한다. 또한, 히스톤 디아세틸라아제 활성의 감소는 억제제의 부재 하의 히스톤 디아세틸라아제 활성과 비교시, 약 50% 이상, 약 75% 이상, 약 90% 이상, 약 95% 이상, 또는 약 99% 이상만큼이다.

또한, 특정 실시양태에서 억제제는 또다른, 비관련 생물학적 효과 또는 효소학적 효과를 일으키는 억제제의 농도보다 더 낮은 농도에서 히스톤 디아세틸라아제를 억제한다. 예를 들어, 히스톤 디아세틸라아제 억제 활성을 위한 억제제의 농도는 비관련 생물학적 효과 또는 효소학적 효과를 일으키는 농도보다 2배 이상, 5배 이상, 10배 이상, 또는 20배 이상 더 낮다.

또한, 본원에서 사용된 상기 용어는 미국 특허 제 6,831,061호 (Lee 등); 6,800,638호 (Georges 등); 6,399,568호 (Nishino 등); 6,124,495 (Neiss 등); 및 5,939,455호 (Rephaeli)에서 발견되는 화합물과 같은, 앞서 기술된 임의의 HDAC 억제제를 포함하나 이에 국한되지는 않는다.

따라서, 하나의 실시양태에서, HDAC 억제제는 미국 특허 제 6,831,061호에서 보여지는 바와 같은, 하기 화학식에 의해 나타내어지는 치환된 아피시딘 유도체이다:

하나의 실시양태에서, HDAC 억제제는 미국 특허 제 6,800,638호에서 보여지는 바와 같은, 하기 화학식에 의해 나타내어지는 테트라히드로피리딘 유도체이다:

하나의 실시양태에서, HDAC 억제제는 미국 특허 제 6,399,568호에서 보여지는 바와 같은, 하기 화학식에 의해 나타내어지는 시클릭 테트라펩티드 유도체이다:

하나의 실시양태에서, HDAC 억제제는 미국 특허 제 6,124,495호에서 보여지는 바와 같은, 하기 화학식에 의해 나타내어지는 불포화 옥시알킬렌 에스테르이다:

하나의 실시양태에서, HDAC 억제제는 미국 특허 제 5,939,455호에서 보여지는 바와 같은, 하기 화학식에 의해 나타내어지는 옥시알킬렌 디에스테르 부티르산 유도체이다:

또는

하나의 실시양태에서, HDAC 억제제 화합물은 PCT 공보 WO 02/22577에서 보여지는 바와 같은, 하기 화학식에 의해 나타내어지는 히드록사메이트 유도체이다:

HDAC 억제제는 히드록삼산, 히드록사메이트, 히드록시아미드, 시클릭 펩티드, 벤즈아미드, 벤즈이미다졸, 단쇄 지방산, 머캅토미드, 카르밤산, 카르보닐, 피페라지닐, 피페리디닐, 모르폴리닐, 설포닐, 아민, 아미드, 발프로산, 옥심, 디옥산, 에폭시드, 락탐, 및 데퓨데신과 같은 화합물을 더 포함한다.

히드록삼산 및 히드록삼산 유도체인 HDAC 억제제의 비제한적인 예로서 트리코스타틴 A (TSA), 수베로일아닐리드 히드록삼산 (SAHA), 옥삼플라틴, 수베릭 비스히드록삼산 (SBHA), m-카르복시-신남산 비스히드록삼산 (CBHA), 및 피록사미드를 들 수 있다. 히드록삼산 및 히드록삼산 유도체인 HDAC 억제제의 추가의 예는 출원 제 WO03082288호 (Watkins 등), CA2520611호 (Miller 등), WO2005075466호 (Bordogna 등), WO2005053610호 (Miller 등), US2005124679호 (Kim 등), 및 WO2005014588호 (Dyke 등)에서 발견된다.

히드록사메이트 및 히드록사메이트 유도체인 HDAC 억제제의 비제한적인 예로서, 출원 제 US2006058553호 (Leahy 등), WO2005097770호 (Setti), WO2005058803호 (LeBlond 등), 및 WO2005040161호 (Stunkel 등)에서 발견되는 것을 들 수 있다. 히드록시아미드 및 히드록시아미드 유도체인 HDAC 억제제의 비제한적인 예로서 출원 제 WO2006025683호 (Lee 등) 및 WO2006016680호 (Ishibashi 등)에서 발견되는 것을 들 수 있다. 벤즈이미다졸 및 벤즈이미다졸 유도체인 HDAC 억제제의 비제한적인 예로서, 출원 제 WO2004072047호 (Urano 등)에서 발견되는 것을 들 수 있다. 머캅토미드 및 머캅토미드 유도체인 HDAC 억제제의 비제한적인 예로서, 출원 제 WO2006028972호 (Ahmed 등) 및 WO2005075446호 (Koyama 등)에서 발견되는 것을 들 수 있다. 카르밤산 및 카르밤산 유도체인 HDAC 억제제의 비제한적인 예로서, US2006058282호 (Finn 등) 및 US2005143385호 (Watkins 등)에서 발견되는 것을 들 수 있다. 카르보닐 및 카르보닐 유도체인 HDAC 억제제의 비제한적인 예로서, 출원 제 EP1635800호 (Wash 등), US2005148613호 (Van Emelen 등), WO03099760호 (Lan-Hargest 등), 및 WO03099789호 (Lan-Hargest 등)에서 발견되는 것을 들 수 있다. 피페라지닐, 피레리디닐, 및 모르폴리닐 및 피페라지닐, 피페리디닐, 및 모르폴리닐 유도체인 HDAC 억제제의 비제한적인 예로서, 출원 제ZA200407237호 (Van Emelen 등) 및 WO2006010749호 (Van Brandt 등)에서 발견되는 것을 들 수 있다. 설포닐 및 설포닐 유도체인 HDAC 억제제의 비제한적인 예로서, 출원 제 WO03076401호 (Van Emelen 등), US2006030543호 (Malecha 등), 및 WO2005040101호 (Lim 등)에서 발견되는 것을 들 수 있다. 아민 및 아민 유도체인 HDAC 억제제의 비제한적인 예로서, 출원 제 WO2006010750호 (Verdonck 등), US2005119250호 (Angibaud 등), US2004157841호 (Fertig 등), 및 US2004162317호 (Fertig 등)에서 발견되는 것을 들 수 있다. 아미드 및 아미드 유도체인 HDAC 억제제의 비제한적인 예로서 출원 제 WO2006005955호 (Chakravarty 등), WO2006005941호 (Chakravarty 등), WO2005065681호 (Bressi 등), 및 WO03070691호 (Uesato 등)에서 발견되는 것을 들 수 있다. 발프로산 및 발프로산 유도체인 HDAC 억제제의 비제한적인 예로서, 출원 제 US2005038113호 (Groner 등)에서 발견되는 것을 들 수 있다. 옥심 및 옥심 유도체인 HDAC 억제제의 비제한적인 예로서, 출원 제 CA2519301호 (Fertig 등)에서 발견되는 것을 들 수 있다. 디옥산 및 디옥산 유도체인 HDAC 억제제의 비제한적인 예로서, 출원 제 WO02089782호 (Schreiber 등)에서 발견되는 것을 들 수 있다. 에폭시드 및 에폭시드 유도체인 HDAC 억제제의 비제한적인 예로서, 출원 제 US2005282890호 (Zheng) 및 WO03099272호 (Lan-Hargest 등)에서 발견되는 것을 들 수 있다. 락탐 및 락탐 유도체인 HDAC 억제제의 비제한적인 예로서, US2004077698호 (Georges 등)에서 발견되는 것을 들 수 있다.

시클릭 펩티드인 HDAC 억제제의 비제한적인 예로서, 트라포신 A, 아피시딘 및 FR901228을 들 수 있다. 시클릭 펩티드 및 시클릭 펩티드 유도체인 HDAC 억제제의 추가의 예는 출원 제 US2002120099호 (Basting), US6656905호 (Mori 등), 및 US6399568호 (Nishino 등)에서 발견된다.

벤즈아미드인 HDAC 억제제의 비제한적인 예로서 MS-27-275 (N-(2-아미노페닐)-4-[N-(피리딘-3-일메톡시카르보닐)아미노메틸]벤즈아미드)를 들 수 있다. 벤즈아미드 및 벤즈아미드 유도체인 HDAC 억제제의 추가의 예는 출원 제 HK1079042호, US2005171103호 (Stokes 등), 및 HK1046277호 (Ishibashi 등)에서 발견된다.

단쇄 지방산인 HDAC 억제제의 비제한적인 예로서 부티레이트 (예를 들어, 부티르산, 아르기닌 부티레이트 및 페닐부티레이트)를 들 수 있다 (문헌 [Newmark 등 (1994) Cancer Lett. 78: 1-5]; 및 [Carducci 등 (1997) Anticancer Res. 17:3972-3973]). 단쇄 지방산 및 단쇄 지방산 유도체인 HDAC 억제제의 추가의 예는 출원 제 US2006069157호 (Ferrante), WO2005055928호 (Chen 등), 및 WO9800127호 (Rephaeli 등)에서 발견된다.

또한, 마이크로몰 농도에서 HDAC를 억제하는 것으로 밝혀진 데퓨데신 (문헌 [Kwon 등 (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 95:3356-3361])도 본 발명의 히스톤 디아세틸라아제 억제제의 범위 내에 속한다.

일반적으로, HDAC 억제제는 알콜, 예컨대 메탄올 또는 에탄올, 또는 유기 용매, 예컨대 디메틸 설폭시드 (DMSO)에 가용성이다. 대안으로, HDAC 억제제는 시클로덱스트린, 예를 들어, 2-히드록시프로필-β-시클로덱스트린과 복합체화되어 (문헌 [Hockly 등, Proc Natl Acad Sci U S A. 2003; 100(4): 2041-2046] 참고), 이에 따라 HDAC 억제제가 복합체로서 수용액에 용해될 수 있다.

HDAC 의존적 질환에서의 용도

본 발명의 방법은 유용한 약리학적 특성을 갖고 질환의 치료에 유용한 화합물을 포함한다. 상기 용도 및 방법의 특정 실시양태에서, 상기 화합물은 HDAC 의존적 질환의 치료에, 예를 들어, 증식성 질환을 치료하기 위한 약물로서 유용하다.

구절 "HDAC 의존적 질환의 치료"는, 예를 들어, 하기 언급되는 질환을 비롯한 질환의 예방적 또는 치유적 (예컨대 완화 및/또는 치유하는) 치료를 일컫는다.

용어 "용도"는, 달리 명시하지 않는 한, 본 발명의 하기 실시양태 중 임의의 하나 이상을 각각 적절하고 적당하게 포함한다: HDAC 의존적 질환의 치료에서의 용도; 상기 질환의 치료에 사용하기 위한 약제학적 조성물의 제조, 예를 들어, 약제의 제조를 위한 용도; 상기 질환의 치료에 있어서 유도체의 사용 방법; 상기 질환의 치료를 위한 유도체를 갖는 약제학적 제제; 및 상기 질환의 치료에 사용하기 위한 유도체. 특히, 치료될, 따라서 본 발명의 화합물을 사용하기에 바람직한 질환은 HDAC 의존적 ("의존적"은 "오로지 의존적"인 것 뿐만 아니라 "지지되는"도 의미함) 질환, 예컨대 해당 증식성 질환 중에서 선택되며, HDAC1, HDAC2, HDAC3, HDAC4, HDAC5, HDAC6, HDAC7, HDAC8, HDAC9, HDAC1O, HDAC11, 또는 HDAC 복합체 (이후 "HDAC 들")에 의존하는 질환은 따라서 HDAC 의존적 질환의 치료에 이용될 수 있다. 용어 "용도"는 따라서 트레이서 또는 라벨로서 작용하기에 충분하게 HDAC 단백질에 결합되어, 플루오로 또는 태그에 커플링되거나, 또는 방사성이 되는 경우, 조사 시약으로서, 또는 진단제 또는 조영제로서 사용될 수 있는 조성물의 실시양태를 더 포함한다.

특정 실시양태에서, 본 발명의 방법은 "HDAC 의존적 질환", 즉 본원에 기술된 HDAC 들 중 1종 이상의 활성에 의존적인 질환의 치료에 이용된다. 용도는 군 HDAC1, HDAC2, HDAC3, HDAC4, HDAC5, HDAC6, HDAC7, HDAC8, HDAC9, HDAC1O, 및 HDAC11 중 하나 또는 아집단을 억제하는 치료일 수 있고, 이들 효소 모두가 본원의 화합물 중 임의의 것에 의해 동일한 정도까지 억제되는 것을 의미하지는 않음이 고려된다.

또한 본 방법의 화합물의 생체내 항종양 활성의 증명도 고려된다.

본 발명의 화합물의 각종 실시양태는 유용한 약리학적 활성을 갖고 이는 단백질 HDAC 의존적 질환의 치료에서, 예를 들어, 증식성 및 과다증식성 질환, 및 본 개시내용에 걸쳐 열거된 기타 HDAC 의존적 질환을 치료하기 위한 약물로서 유용하다. 본 발명의 화합물의 각종 추가의 실시양태는 유용한 결합 특성을 갖고, 진단 및 표지 능력에서 및 조영제로서 유용하다.

어세이

HDAC 활성의 억제는 하기와 같이 측정될 수 있다: 배큘로바이러스 공여자 벡터 pFB-GSTX3을 이용하여 HDAC 폴리펩티드를 발현하는 재조합 배큘로바이러스를 생성한다. HDAC 코딩 부위를 포함하는 전달 벡터를 DH1OBac 세포주 (GIBCO)로 트랜스펙션하고 선택적 아가 플레이트 상에 평판배양한다. 융합 서열이 바이러스 게놈 (박테리아에 의해 보유됨)에 삽입되지 않은 콜로니는 청색이다. 단리된, 백색 콜로니를 가려내고, 표준 플라스미드 정제 절차에 의해 박테리아 클론 각각으로부터 바이러스 DNA (백미드)를 단리한다. Sf9 세포 또는 Sf21 (미국 미생물 보존 센터) 세포를 그 후 셀펙션 (Cellfectin) 시약을 이용하여 25 ㎠ 플라스크 내에서 바이러스 DNA로 트랜스펙션한다.

Sf9 세포 중 소규모 단백질 발현의 측정: 바이러스 함유 배지를 트랜스펙션된 세포 배양액으로부터 수집하고 감염에 사용하여 이의 역가를 증가시킨다. 2 회의 감염 이후 수득된 바이러스 함유 배지를 대규모 바이러스 발현에 사용한다. 대규모 단백질 발현을 위하여, 100 ㎠ 둥근 조직 배양 플레이트에 5 x 10⁷ 세포/플레이트를 접종하고 1 ㎖의 바이러스 함유 배지로 감염시킨다 (대략 5의 MOI로). 3 일 이후, 세포를 플레이트로부터 긁어 내고 500 rpm에서 5 분 동안 원심분리한다. 10-20 개, 100 ㎠ 플레이트로부터의 세포 펠렛을 50 ㎖의 빙냉 용해 완충제 (25 mM tris-HCl, pH 7.5, 2 mM EDTA, 1% NP-40, 1 mM DTT, 1 mM P MSF)에 재현탁시킨다. 세포를 빙 상에서 15 분 동안 교반한 후 5,000 rpm에서 20 분 동안 원심분리한다.

GST 태깅 단백질의 정제: 원심분리된 세포 용해물을 2 ㎖의 글루타티온-세파로오스 칼럼 (파마시아 (Pharmacia)) 상에 로딩하고 10 ㎖의 25 mM tris-HCl, pH 7.5, 2 mM EDTA, 1 mM DTT, 200 mM NaCl로 3 회 세정한다. GST 태깅 단백질을 그 후 25 mM tris-HCl, pH 7.5, 10 mM 환원 글루타티온, 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 10% 글리세롤의 10 회 적용 (각각 1 ㎖)에 의해 용출하고 -70℃에서 저장한다.

효소 활성의 측정: 정제된 GST-HDAC 단백질을 이용하는 HDAC 어세이를 15 ng의 GST-HDAC 단백질, 20 mM tris-HCl, pH 7.5, 1 mM MnCl₂, 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 3 ㎍/㎖ 폴리(Glu,Tyr) 4:1, 1% DMSO, 2.0 μM ATP (γ-[³³P]-ATP 0.1 μCi)를 함유하는 최종 부피 30 ㎕로 수행한다. 억제제의 유무 하에 활성을 어세이한다. 하기 기술되는 조건 하에 상온에서 15 분 동안 96 웰 플레이트에서 어세이를 수행하고 20 ㎕의 125 mM EDTA를 첨가함으로서 종결한다. 이어서, 40 ㎕의 반응 혼합물을 메탄올로 5 분 동안 미리 적셔진 IMMOBILON-PVDF 막 (밀리포어 (Millipore)) 상으로 전달하고, 물로 헹군 후, 0.5% H₃PO₄로 5 분 동안 적시고, 단절된 진공 공급원을 갖는 진공 매니폴드 상에 올린다. 모든 샘플을 스폿팅한 후, 진공을 연결하고 각 웰을 200 ㎕의 0.5% H₃PO₄로 헹군다. 막을 제거하고 진탕기 상에서 1.0% H₃PO₄로 4회, 에탄올로 1 회 세정한다. 상온에서 건조한 후 막을 계수하고, 패커드 탑카운트 (Packard Topcount) 96 웰 프레임 내에 설치하며, MICROSCINT TM (패커드)을 10 ㎕/웰로 첨가한다. IC₅₀ 값을 각 화합물의 억제율 (백분율)의 선형 회귀 분석에 의해 4 가지 농도 (보통 0.01, 0.1, 1 및 10 μM)에서 중복하여 계산한다.

IC ₅₀ 계산

투입: 3 x 4 ㎕ 세정되지 않은 IMMOBILON 막 상에서 어세이 중지

백그라운드 (3 웰): 효소 대신 H₂O로 어세이

양성 대조군 (4 웰): 화합물 대신 3%의 DMSO

바스 대조군 (1 웰): 반응 혼합물 없음

4 가지 농도 (보통 10 μM에서 시작하여 3배 또는 10배 일련의 희석)의 각 화합물의 억제율 (백분율)을 대수 회귀 분석함으로써 IC₅₀ 값을 계산한다. 각 실험에서, 기준 화합물에 의한 실제 억제율을 이용하여 IC₅₀ 값을 기준 억제제의 평균 값의 기준으로 정상화한다:

정상화된 IC₅₀ = 측정된 IC₅₀ 평균 기준 IC₅₀ / 측정된 기준 IC₅₀

예: 실험에서 기준 억제제 0.4 μM, 평균 0.3 μM

실험에서 시험 화합물 1.0 μM, 정상화: 0.3/0.4 = 0.75 μM

예를 들어, 공지된 HDAC 억제제 또는 이의 합성 유도체를 기준 화합물로서 사용할 수 있다.

상기 프로토콜의 이용시, 본 발명의 화합물은 0.005-100 μM, 또는 0.002-50 μM의 범위, 예를 들어, 0.001-2 μM 이하의 범위인 HDAC 억제율에 대한 IC₅₀ 값을 보여주는 것으로 관측된다.

증식성 질환

상기 기술한 바와 같이, 본 발명의 방법은 증식성 질환의 치료에 유용하다. 증식성 질환으로서, 예를 들어, 종양 질환 (또는 암 및/또는 임의의 전이) 또는 혈구의 증식성 질환, 예컨대 백혈병 또는 림프종을 들 수 있다. 본 방법은, 예를 들어, 유방암, 비뇨생식기암, 폐암, 위장암, 식도암, 표피암, 흑색종, 난소암, 췌장암, 신경아세포종, 두부암 및/또는 경부암 또는 방광암, 또는 광의에서 신장암, 뇌암 또는 위암, 또는 백혈병, 또는 림프종; 예컨대 (i) 백혈병, 예컨대 골수성 백혈병 또는 급성 백혈병 또는 만성 백혈병; 림프종, 예컨대 호지킨 림프종 또는 비호지킨 림프종; 유방 종양; 표피 종양, 예컨대 표피 두부 종양 및/또는 경부 종양 또는 입 종양; 폐 종양, 예를 들어, 소세포 또는 비소세포 폐 종양; 위장 종양, 예를 들어, 결장직장 종양; 또는 비뇨생식기 종양, 예를 들어, 전립선 종양 (예컨대 호르몬 불응성 전립선 종양); 또는 (ii) 기타 화학요법제에 의한 치료에 불응성인 증식성 질환; 또는 (iii) 다약제 내성으로 인하여 기타 화학요법제에 의한 치료에 불응성인 종양인 종양의 치료에 유용하다.

HDAC 의존적 질환은, 단백질의 억제가 병상을 개선시킨다는 점에서, HDAC 단백질 또는 HDAC 관련 단백질 중 하나를 코딩하는 하나 이상의 유전자의 발현, 또는 상기 단백질의 활성과 관련된 임의의 병상이다. HDAC 유전자 및 단백질은 온라인 인간 멘델 유전 (O.M.I.M)에 기술된 바와 같다. HDAC 단백질의 억제는 HDAC 의존적 질환의 개선을 제공한다. 표 1은 HDAC 단백질 및 인간 게놈 상의 각각의 유전자 좌를 열거한다. 표 2는 이용가능한 3 이상의 유기체 종 중의 대표적 아미노산 서열에 대한 HDAC 1-11 GenBank 등록 번호를 나타낸다.

특정 실시양태에서, 증식성 질환은 또한 과다증식성 상태, 예컨대 백혈병, 과형성, 섬유증 (예컨대 폐 섬유증, 및 또한 신장 섬유증과 같은 기타 유형의 섬유증), 혈관신생, 건선, 아테롬성 동맥경화증 및 혈관 내의 평활근 증식, 예컨대 혈관형성술 이후의 협착증 또는 재협착증일 수 있다.

종양, 종양 질환, 암종 또는 암이 언급되는 경우, 종양 및/또는 전이의 위치가 어떠한 것이든, 원래 장기 또는 조직에서 및/또는 임의의 기타 위치에서의 전이도 대안으로 또는 추가로 포함된다.

본원의 방법에 기술된 화합물은 정상 세포보다 빠르게 증식하는 세포, 예를 들어, 인간 암세포, 예를 들어, 암 종양에 대하여 선택적으로 독성이거나 더 독성이다. 화합물은 유의한 항증식 효과를 갖고, 분화, 예를 들어, 세포 주기 정지 및 아폽토시스를 촉진한다. 또한, 본원의 방법의 화합물은 p21, 시클린-CDK 상호 작용 단백질을 유도하고, 이는 각종 세포주에 있어서 아폽토시스 또는 G1 정지를 유도한다.

하기 예는 본 발명을 예시하기 위한 것이며 이에 대한 제한으로서 해석되지 않아야 한다.

하기 실시양태에서, 일반적 표현은 상기 및 하기 제공된 해당하는 더 구체적인 정의에 의해 대체될 수 있다.

본원의 약제학적 조성물, 용도 및 방법, 본 발명의 화합물, 이의 토토머 또는 이의 약제학적 허용 염의 용도의 특정 실시양태에서, 치료될 HDAC 의존적 질환은 하기 HDAC 들, 예를 들어, HDAC1, HDAC2, HDAC6 및 HDAC8 중 임의의 1종 이상에 따른 증식성 질환이다.

기타 실시양태에서, HDAC 의존적 질환은 증식성 질환, 예컨대 과다증식성 상태, 예컨대 백혈병, 과형성, 섬유증 (예컨대, 폐 섬유증, 뿐만 아니라 또한 신장 섬유증과 같은 기타 유형의 섬유증), 혈관신생, 건선, 아테롬성 동맥경화증 및 혈관 내의 평활근 증식, 예컨대 혈관형성술 이후의 협착증 또는 재협착증일 수 있다.

기타 실시양태에서, 본 발명은 HDAC 억제제 및 B 비타민 분자를 투여하는 것을 포함하는, HDAC 의존적 질환을 치료하는 약제학적 조성물, 용도, 및 방법을 제공하며, 여기서 치료될 질환은 증식성 질환, 예를 들어, 백혈병, 예컨대 골수성 백혈병 또는 급성 백혈병 또는 만성 백혈병, 림프종, 예컨대 호지킨 림프종 또는 비호지킨 림프종, 양성 또는 악성 종양, 뇌 암종, 신장 암종, 간 암종, 부신 암종, 방광 암종, 유방 암종, 위 암종 (예컨대 위 종양), 난소 암종, 식도 암종, 결장 암종, 직장 암종, 전립선 암종, 췌장 암종, 폐 암종 (예컨대 SCLC), 질 암종, 갑상선 암종, 육종, 교아세포종, 다발성 골수종 또는 위장암, 특히 결장 암종 또는 결장직장 선종, 또는 두경부 종양, 표피 과다증식, 예컨대 건선, 전립선 비대증, 상피 특성의 종양형성을 비롯한 종양형성, 예컨대 유방 암종, 또는 혈구의 증식성 질환, 예컨대 림프종 또는 백혈병이다. 아테롬성 동맥경화증, 혈전증, 건선, 경피증 및 섬유증의 치료 방법도 포함된다.

본 방법의 이용은 종양의 퇴행, 및 종양 전이 (예컨대 미세전이)의 형성 및 전이 (예컨대 미세전이)의 성장의 예방 또는 감소를 일으킨다. 또한 상기 방법은 표피 과다증식 (예를 들어, 건선)의 치료에, 전립선 비대증에, 그리고 상피 특성의 종양형성을 비롯한 종양형성, 예를 들어, 유방 암종의 치료에 이용된다. 1종 이상의 개별 HDAC 단백질 종류 또는 관련 단백질이 포함되는 한, 본 발명의 방법을 이용하여 면역계의 질환을 치료하는 것도 가능하다. 또한, 본 발명의 방법은 1종 이상의 HDAC 단백질에 의한 신호 전달이 수반되는 중추 신경계 또는 말초 신경계의 질환의 치료에도 이용될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물, 용도, 및 방법은 또한 신호 전달에 수반되는 단백질의 전사 조절과 관련된 질환, 예컨대 VEGF 수용체 티로신 키나아제 과다발현의 치료에도 적절하다. 망막병증, 노년기 황반변성, 건선, 혈관모세포종, 혈관종, 동맥경화증, 근소모 상태, 예컨대 근육 퇴행위축, 악액질, 헌팅톤 증후군, 류마티즘성 또는 류마티즘 염증성 질환과 같은 염증성 질환, 예컨대 관절염, 및 골관절염 및 류마티즘성 관절염과 같은 관절염 상태, 또는 기타 만성 염증성 장애, 예컨대 만성 천식, 동맥 또는 이식후 아테롬성 동맥경화증, 자궁내막증, 및 특히 신생물 질환, 예를 들어, 소위 고형 종양 (예컨대 위장관, 췌장, 유방, 위, 경부, 방광, 신장, 전립선, 식도, 난소, 자궁내막, 폐, 뇌의 암, 흑색종, 카포시 육종, 두경부의 편평 세포 암종, 악성 흉막 중피종, 림프종 또는 다발성 골수종) 및 액체 종양 (예를 들어, 백혈병)이 이들 질환에 속한다.

HDAC 단백질은 9 개의 공통 서열의 세트를 공유한다. HDAC 단백질은 아미노산 서열에 기초하여 2 가지 클래스로 분류된다: 클래스 I 단백질, 예컨대 HDAC1, HDAC2 및 HDAC3은 효모 Rpd3과 실질적 상동성을 갖는다; 클래스 II 단백질, 예컨대 HDAC4 및 HDAC6은 효모 Hda1과 상동성을 나타낸다. 각종 발견 사실들은 상기 단백질과 HDAC 의존적 질환의 관련성을 나타낸다.

HDAC1은 482 개의 아미노산을 갖는 단백질이고, 자연에서 고도로 보존되며 효모 전사 인자와 60% 동일성을 갖는다. 이는 모든 조직에서 다양한 수준으로 발견되며, 전사 조절 및 세포 주기 진행, 특히 G1 점검점 제어에 수반된다. HDAC1은 세포 증식을 억제하는 망막아종 종양 억제 단백질인 RB1과, 그리고 핵 전사 인자 NFκB과 물리적으로 상호 작용하고 협동한다.

HDAC2는 또한, 이것이 포유동물 아연 손가락 전사 인자 YY1과 회합하므로, YY1-회합 인자 (YAF1)로서도 공지되어 있다. 인간 게놈 상에서 상기 단백질을 코딩하는 유전자 좌는, 유년기 급성 림프구성 백혈병 (ALL) 및 척골선 사지 결손에 관련된 게놈의 부위인 6q21이다. 또한, HDAC2는 HDAC1도 포함하는 복합체 중의 BRCA1과 상호 작용하여 물리적으로 회합한다. 상기 복합체의 공동 코어는 유전자를 침묵 상태로 억제하는 기능을 한다. 상이한 복합체가 S 기 동안 형성되며, 히스톤은 복제 이후 이질염색질로 탈아세틸화된다.

HDAC3은 모든 인간 조직 및 종양 세포주에서 발현되는 것으로 공지되어 있다. 인간 골수성 백혈병 주의 트랜스펙션은 비정상적 핵 형태 및 증가된 세포 크기를 갖는 G2/M 경계 기의 세포의 축적을 야기하였다. HDAC3의 촉매 작용 도메인은 HDAC4의 촉매 작용 도메인과 상호 작용한다.

HDAC4 디아세틸라아제 활성은 모든 4 개의 코어 히스톤 단백질에 작용하고, 비후전 연골 세포 내에서 발현되며, 연골 세포 비후, 연골내 골 형성 및 골격 발생을 조절한다. HDAC4-결핍 마우스는 시기 상조의 골화를 나타낸다. MIR 및 CABIN1과 함께, HDAC4는 MEF-2 (근육세포 증강 인자-2)의 칼슘 민감성 전자 억제 인자의 패밀리를 구성한다.

HDAC5는 시험된 모든 조직에서 발현되며, 비장 및 췌장에서 더 낮게 발현된다. HDAC5의 1,123 개 아미노산 서열은 HDAC4와 51% 동일하다. 29 명의 결장암 환자 중 5 명은 HDAC5에 대한 항체에 혈청학적 양성으로 검사되었다. MEF-2 단백질은 HDAC4 및 HDAC5와 상호 작용한다.

HDAC6은 튜뷸린 디아세틸라아제이고 오로지 세포질 내에 편재된다. 상기 효소는 집합된 미소관에 대한 강력한 디아세틸라아제 활성을 갖고, 이의 발현 또는 활성에의 치료 개입은 근육 보전 및 근육 소모에 영향을 미치는 각종 상태, 예컨대 헌팅톤 질환 및 악액질과 관련될 수 있다.

HDAC7A 전사체는 주로 심장 및 폐 조직에서 발견되며, 골격근에서 더 적은 정도로 발견된다. 단백질은 원자핵 내 영역에서 HDAC5와 함께 동시 편재된다.

HDAC8은 공통 서열의 전형적인 9 개의 보존된 HDAC 블록을 가지면서, 아미노 및 카르복시 말단 각각에서 기타 HDAC 단백질과 상이한 서열을 갖는 377 개 아미노산의 단백질이다. 이는 뇌에서 가장 강력하게 발현된다. RNAi에 의한 발현의 녹다운은 인간 폐, 결장, 및 경부암 세포주의 성장을 억제한다. Xq13에서의 코딩 유전자의 지도 위치는 X 염색체 불활성화의 개시에 수반되는 XIST 근처, 및 전백혈병 상태와 관련된 중지점 근처에 위치한다. 또한, 이의 발현 또는 활성에의 치료 개입은 염증성 질환, 예컨대 각종 관절염 상태, 예를 들어, 류마티즘성 관절염과 관련될 수 있다.

HDAC9는 또한 7B, MITR, 및 KIAA0744로서도 공지되어 있다. 이는 뇌에서 가장 활발하게 발현되고, 심장 및 평활근에서 더 적은 정도로 발현되며, 기타 조직에서는 거의 발현되지 않는다. 상기 단백질은 HDAC1과 상호 작용하고 전사의 억제 인자이다. 더 긴 아이소형은 1,011 개의 아미노산을 포함하고, 9a로서 공지된 더 짧은 형태는 C-말단에서 132 개의 잔기가 결핍된 879 개의 아미노산을 포함하며, 폐, 간 및 골격근에서 우세하다.

HDAC10은 669 및 649 아미노산의 2 개의 스플라이스 변이체에서 발견된다. 상기 단백질은 티미딘 키나아제 프로모터로부터 전사를 억제하고 HDAC3과 상호 작용한다.

HDAC11은 뇌, 심장, 골격근, 신장 및 고환에서 가장 고도로 발현되는 347 개 아미노산의 단백질이다. 이는 핵 추출물과 함깨 분배된다.

본 발명의 방법은 또한 지속성 혈관신생, 예컨대 건선; 카포시 육종; 재협착증, 예를 들어, 스텐트 유도의 재협착증; 자궁내막증; 크론병; 호지킨병; 백혈병; 관절염, 예컨대 류마티즘성 관절염; 혈관종; 혈관섬유종; 안 질환, 예컨대 당뇨병성 망막병증 및 신생혈관 녹내장; 신장 질환, 예컨대 사구체신염; 당뇨병성 신병증; 악성 신장경화증; 혈전성 미세혈관병 증후군; 이식 거부 및 사구체병증; 섬유성 질환, 예컨대 간경화증; 혈관간세포-증식성 질환; 동맥경화증; 신경 조직의 손상에 의해 유발되는 질환의 예방 또는 치료; 및 풍선 카테터 치료 이후 혈관의 재폐색의 억제, 혈관 보철물에서의 사용 또는 혈관을 개방된 채로 유지하기 위한 기계적 장치, 예를 들어, 스텐트의 삽입 이후, 면역억제제로서, 흉터 없는 상처 치유에서의 보조물로서 사용, 및 검버섯 및 접촉 피부염의 치료를 위해 사용될 수 있다.

B 비타민 분자

본원에서 사용된 "B 비타민 분자"는 비타민 B1 (티아민), 비타민 B2 (리보플라빈), 비타민 B3 (비타민 P 또는 비타민 PP, 또는 니아신), 비타민 B5 (판토텐산), 비타민 B6 (피리독신 및 피리독사민), 비타민 B7 (비타민 H, 비타민 B-w, 또는 비오틴), 비타민 B9 (비타민 M, 비타민 B-c, 또는 엽산), 비타민 B12 (시아노발라민)로 대표되는, 인간 영양학의 초기 연구 동안 발견된 몇몇 비타민의 복합체 중 임의의 것 또는 전부를 일컫는다.

B 비타민 분자의 비제한적인 예로서, 기타 생명 형태 (동물, 박테리아, 효모 등)에서의 영양학의 연구에 의해 밝혀진 "비인간 형태", 예컨대 비타민 B4 (아데닌), 비타민 B8 (에르가데닐산), 비타민 B1O (파라-아미노벤조산), 비타민 B11 (살리실산 또는 비타민 S), 비타민 B13 (피리미딘카르복실산 또는 오로틱산), 비타민 B14 (비타민 B1O 및 비타민 B11의 혼합물), 비타민 B15 (판감산 또는 디메틸글리신), 비타민 B16, 비타민 B17 (아미그달린), 비타민 B22, 비타민 B-t (L-카르니틴), 및 비타민 B-x (파라-아미노벤조산)를 들 수 있다.

B 비타민들은 종종 함께 작용하여 신체에 대해 다수의 건강 이점을 전달하고, 예컨대 대사를 보강하고, 건강한 피부 및 근육 긴장을 유지하고, 면역계 및 신경계 기능을 강화시키며, 세포 성장 및 분화, 예컨대 역치 최소 수준에서 빈혈의 발생을 예방하기 위해 중요한 적혈구의 성장 및 분화를 촉진한다. 조합된 B 비타민들은 스트레스의 증상 및 원인, 우울증, 및 심혈관 질환을 퇴치하는 것을 돕는다. B 비타민은 수용성이고 신체 도처에 분산되며, 임의의 과량은 일반적으로 소변으로 배설되므로 매일 보급되어야 한다.

본원에서 사용된 "비타민 B2 분자"는 비타민 B2, 리보플라빈 또는 비타민 G 중 임의의 것 또는 전부를 일컫는다. 본원에서 사용된 상기 용어는 또한 조효소 형태, 플라빈 아데닌 디뉴클레오티드 (FAD) 및 플라빈 아데닌 모노뉴클레오티드 (FMN)도 포함한다. B2 분자는 쉽게 흡수되고, 지방, 탄수화물, 및 단백질의 대사를 도움으로써 에너지 생성을 지지하는 수용성 미량 영양소이다. 비타민 B2 분자는 또한 적혈구 형성 및 호흡 작용, 항체 생성, 및 인간 성장 및 재생의 조절에도 필요하다. 이는 자유 라디칼로서 공지된 신체 내의 해로운 입자를 제거함으로써 산화방지제로서 기능한다. 비타민 B2 분자는 건강한 피부, 손톱, 모발 성장 및 일반적인 양호한 건강, 예컨대 갑상선 활성의 조절에 중요하다.

비타민 B2 결핍은 구각부의 갈라짐 및 상처, 눈 장애, 입 및 혀의 염증, 피부 병변, 피부염, 현기증, 탈모, 불면증, 광 민감성, 소화 불량, 성장 지연, 및 작열각 감지로서 나타난다.

비타민 B2 분자의 대표적 구조는 하기에 보여진다:

본원에서 사용된 "비타민 B3 분자"는 비타민 B3, 니아신, 또는 니코틴산 중 임의의 것 또는 전부를 일컫는다. 이는 아미드 형태, 니코틴아미드 또는 니아신아미드를 포함한다. 비타민 B3 분자는 수용성 비타민이고, 이의 유도체, 예컨대 NADH, NAD, NAD⁺, 및 NADP는 간 세포의 에너지 대사 및 DNA 복구에 중요한 역할을 한다. 이들 분자는 또한 신체가 부신 및 신체의 기타 부위 내의 각종 성 및 스트레스 관련 호르몬을 만드는 것을 돕는다. 비타민 B3 분자는 순환을 개선하고 혈중 콜레스테롤 수준을 감소시키는 데 효과적이다.

비타민 B3 분자의 결핍은 결핍 질환 펠라그라를 야기한다. 약간의 B3 결핍은 대사의 둔화를 야기하며, 이는 이어서 감기 저항성의 저하를 야기하고 비만에 대한 잠재적 기여 인자이다.

생체내 비타민 B3 분자의 합성은 아미노산 트립토판의 5원 방향족 헤테로사이클로부터 개시되고, 이는 절단되며 트립토판의 알파 아미노산에 의해 비타민 B3 분자의 6원 방향족 헤테로사이클로 재배열된다. 반응은 하기와 같이 진행된다: 트립토판 --> 키누레닌 --> 3-히드록시 키누레닌 (B6 효소가 필요함) --> 비타민 B3 분자. 간은 아미노산 트립토판으로부터 비타민 B3 분자를 합성할 수 있고, 합성은 느리며 비타민 B6를 요구하고, 즉 60 mg의 트립토판이 1 밀리그램의 비타민 B3 분자의 제조에 요구된다.

비타민 B3 분자의 대표적 구조는 하기에 보여진다:

본원에서 사용된 "비타민 B6 분자"는 비타민 B6, 피리독신, 피리독살, 및 피리독사민 중 임의의 것 또는 전부를 일컫는다. 이들 분자는 간에서 피리독살 5'-포스페이트 (PLP)로 전환된다. PLP는 다수의 대사 효소, 예컨대 아미노트랜스퍼라아제, 아미노산 라세마제, 및 아미노산 디카르복실라아제에 대한 중요한 보조인자이고, 이들 중 대부분은 아미노기 함유 화합물을 기질로서 갖는다. PLP의 부재 하에, 상당한 수의 세포 생합성 및 이화 경로는 기능을 멈춘다.

새로운 PLP 합성의 2 가지 경로, PdxA/PdxJ 경로 및 PDX1/PDX2 경로가 공지되어 있다. 유기체는 새로운 PLPL 합성의 한 가지 또는 기타 경로를 포함하는 것으로 보인다. 비타민 B6는, PLP 이외에, PLP의 인산화된 형태 및 비-인산화된 형태의 전구체를 포함하며, 이들 화합물은 B6 비타머로서 일컬어진다. 비-인산화된 비타머 피리독신, 피리독살 및 피리독사민은 다수의 박테리아, 진균류, 식물, 및 포유동물 세포에 의해 취해져서 재이용 경로에 의해 PLP로 전환될 수 있다.

비타민 B6 분자의 대표적 구조는 하기에 보여진다:

본원에서 사용된 "비타민 B9 분자"는 임의의 또는 모든 비타민 B9, 엽산 및 폴레이트를 일컫는다. B9 분자는, 특히 빠른 세포 분화 및 성장의 기간, 예컨대 유아기 및 임신기 동안 새로운 세포의 생성 및 유지에 중요한 수용성 비타민이다. B9 분자는 DNA 복제 및 RAN 합성에 필요하며, DNA의 합성, 복구, 및 기능에 수반된다. 폴레이트의 결핍은 DNA에 대한 손상을 야기할 수 있고, 이는 암을 유발할 수 있다. 성인 및 아동 모두 정상 적혈구를 생성하고 빈혈을 예방하기 위하여 비타민 B9 분자를 필요로 한다.

일련의 테트라히드로폴레이트 화합물의 형태인, 폴레이트 유도체는 다수의 단일 탄소 전달 반응에 있어서 생화학적으로 조효소이며, 또한 dUMP (2'-데옥시우리딘-5'-포스페이트)로부터 dTMP (2'-데옥시티미딘-5'-포스페이트)를 합성하는 데 수반된다.

테트라히드로폴레이트 (FH₄)의 형성 경로는 폴레이트 리덕타아제에 의한 폴레이트 (F)의 디히드로폴레이트 (FH₂)로의 환원, 그 후 디히드로폴레이트 리덕타아제에 의한 디히드로폴레이트의 테트라히드로폴레이트 (FH₄)로의 후속 환원이다. 3 개의 탄소 공여자: 포름알데히드, 세린, 또는 글리신 중 하나로부터 메틸렌기가 첨가됨으로써 메틸렌 테트라히드로폴레이트 (CH₂FH₄)가 테트라히드로폴레이트로부터 형성된다. 메틸 테트라히드로폴레이트 (CH₃-FH₄)는 메틸렌기의 환원에 의해 메틸렌 테트라히드로폴레이트로부터 제조될 수 있고, 포르밀 테트라히드로폴레이트 (CHO-FH₄, 폴린산)는 메틸렌 테트라히드로폴레이트의 산화에 의해 제조된다.

비타민 B9 결핍의 징후로서 설사, 식욕 상실, 체중 감소, 허약, 설통, 두통, 심계항진, 과민성, 및 행동 장애를 들 수 있다. 성인의 경우, 빈혈이 비타민 B9 결핍 진행의 징후이다. 유아 및 아동의 경우, 비타민 B9 결핍은 성장 속도를 늦출 수 있다.

비타민 B9 분자의 대표적 구조는 하기에 보여진다:

본원에서 사용된 "비타민 B12 분자"는 코리노이드로서 공지된 코발트 함유 테트라피롤 화합물의 군 중 임의의 것 또는 전부를 일컫는다. 예로서 코발라민, 시아노코발라민, 히드록소코발라민, 및 티오시아네이트 코발라민을 들 수 있다. 비타민 B12 분자의 구조는 4 개의 피롤기 및 중앙의 코발트 원자로 이루어진 코린 고리에 결합된 뉴클레오티드 (염기, 리보오스 및 포스페이트)를 포함한다. 코발트 원자는 메틸기, 데옥시아데노실기, 및 히드록실기 또는 시아노기에 결합된다. 비타민 B12 분자는 비타민 B12의 조효소 형태, 즉, 메틸코발라민 및 5-데옥시아데노실코발라민 (아데노실코발라민)을 포함한다.

비타민 B12 분자는 또한 미국 약전 [The National Formulary, 1995, pp. 1719-1721] (메릴랜드주, 록빌, 유나이티드 스테이츠 파마코피얼 컨벤션, 인코포레이티드 (United States Pharmacopoeial Convention, inc.)에 상세히 기술되어 있는 바와 같이 락토바실러스 레이크마니 (Lactobacillus leichmanii) ATCC 7830의 성장 반응에 기초한 비탁 바이오어세이에서 검출가능한 비타민 B12 활성을 갖는 임의의 비타민 B12 전구체를 포함한다. 상기 전구체의 예로서 코비린산, 우로포피리노겐 III, 히드로겐비린산, 프리코린-3, 및 프리코린-6x를 들 수 있다. 비타민 B12 전구체의 추가의 예는 문헌 [Thibaut 등, 1990 Proc. Natl. Acad. Sci. 87:8795-8799]에 상세히 기술되어 있다.

비타민 B12 분자는 임의의 비타민 B12 유사체 또는 유도체를 더 포함한다. 비타민 B12 유사체 또는 유도체의 예는 뉴클레오티드 리간드의 알파-리보오스 모이어티가 석시닐화된 비타민 B12 분자이고; 또다른 예는 축 뉴클레오티드가 결핍된 비타민 B12 분자이며, 상기 분자는 하나 이상의 알킬 할라이드기로 더 치환된다.

비타민 B12의 결핍은 혈액, 신경 및 위장 효과를 야기한다. 혈액 효과는 DNA 합성의 방해에 의해 야기된다. 비타민 B12 결핍의 혈액 증상 및 징후로서 다형핵 백혈구, 대적혈구, 고색소성 적혈구의 과다분획, 평균 적혈구 용적 (MCV)의 상승, 펑균 적혈구 헤모글로빈 농도 (MCH, MCHC)의 상승, 적혈구 총수의 감소, 창백한 피부, 에너지 감소 및 쉽게 피로함, 숨가쁨 및 심계항진을 들 수 있다.

비타민 B12 결핍의 신경 효과로서 사지 (특히 하지)의 저림 및 무감각, 진동 및 위치 감각의 상실, 걸음걸이의 이상, 경직, 바빈스키 반응, 과민성, 우울증 및 인지 변화 (집중력 상실, 기억 상실, 치매)를 들 수 있다. 시각 장애, 대소변 조절력 손상, 불면증 및 발기 부전도 발생할 수 있다.

비타민 B12 결핍의 위장 효과로서 간헐성 설사 및 변비, 복부 통증, 고창 및 작열설 (설염)을 들 수 있다. 식욕부진 및 체중 감소가 비타민 B12 결핍의 일반적인 증상이다.

병상 또는 결함은 상기 경로의 효능 또는 기능의 저하, 예컨대, 내인자를 생성하는 세포에 대한 항체의 형성을 수반하는 자가면역 상태; 어조충의 부재; 또는 소장의 표면이 B12 및 내인자를 얻기에 불충분하게 하는 소장에 대한 수술의 후유증을 야기할 수 있다. 상기 병상 또는 결함은 비타민 B12의 효과적 흡수를 저하시키고, 이는 더 고 투여량의 비타민 B12의 투여에 의해 개선될 수 있다.

비타민 B12 분자의 대표적 구조는 하기에 보여진다:

B 비타민 분자와 HDAC 억제제의 용도

골수억제는 골수 활성이 감소되어 (골수에서 생성되는) 더 적은 수의 혈구를 야기하는 상태, 예를 들어, 빈혈 (낮은 적혈구), 저혈소판증 (낮은 혈소판) 및 백혈구 감소증 (낮은 백혈구)이다. 일반적으로, 골수억제, 특히 저혈소판증은 대부분의 항암제에 대하여 통상적인 용량 제한 독성 부작용을 갖는다. 상기 독성은 효과적인 암 화학요법을 방해하여 후속 과정의 지연 및/또는 치료 용량의 감소를 야기할 수 있다. 심각한 골수억제는 백혈구를 수반하는 숙주-방어 기전의 장기 억제로 인하여 감염을 야기할 수 있다.

임의의 특정 이론 또는 작용 기전에 의해 제한되는 것은 아니나, B 비타민의 생체내 작용은 필수적 세포 분열 및 세포 복제 경로를 촉진한다. 예를 들어, 비타민 B12 및 비타민 B9는 세포 분열 동안 DNA의 빠른 합성 과정, 특히 DNA 및 RNA 합성을 위한 빌딩 블록의 합성에 수반된다. 비타민 B3은 DNA의 복구에 수반되며, 비타민 B2는 적혈구의 합성에 수반된다.

상기 과정은 세포가 빠르게 분열하는 조직, 특히 적혈구 형성의 기능을 하는 골수 조직에 특히 중요하다. 불충분한 양의 B 비타민은 필수적 빌딩 블록, 예컨대 정상 세포 분열에 필요한 DNA 합성의 전구체인, 티미딜산 및 퓨린 뉴클레오티드의 이용가능성을 감소시킨다.

임의의 특정 이론 또는 작용 기전에 의해 제한되는 것은 아니나, 전형적으로 구각부의 갈라짐 및 상처, 피부 병변, 피부염, 탈모, 소화 불량, 감기 저항성의 감소, 설사, 식욕 상실, 체중 감소, 허약, 설통, 두통, 빈혈 (낮은 적혈구 총수), 저혈소판증 (낮은 혈소판 총수), 백혈구 감소증 (낮은 백혈구 총수), 피부의 창백함, 에너지 감소, 쉽게 피로함, 및 복통으로 기술되는, 1 회의 화학요법 치료로부터 발생하는 환자의 부작용은 B 비타민 결핍을 갖는 개인에 의해 나타나는 상태와 유사하다.

B 비타민 투여량

B 비타민 분자는 전신, 예를 들어, 경구, 피하, 근육내, 및 정맥내 투여된다. 투여되는 B 비타민의 용량은 영양 보조제 분야의 당업자에게 잘 공지되어 있는 바와 같이, 전달 형태 및 경로, 즉, 주사, 코 겔, 또는 로젠지에 의한 또는 설하 정제에 의한 경구 투여에 의존한다. B 비타민은 수용성이고 과량은 저장되는 것이 아니라 일반적으로 소변으로 배설되므로, 이를 매일 보충하는 것이 중요하다. 표 3은 상이한 B 비타민의 전형적인 투여량을 보여준다.

상기 B 비타민의 총 흡수량은 섭취량 증가에 따라 증가한다. 임의의 특정 이론 또는 작용 기전에 의해 제한되는 것은 아니나, 최소 일일 요구량보다 더 높은 용량이 비타민 스트레스의 상황에서, 예컨대 항암 화학요법 동안 유익하다. 투여된 과량의 B 비타민은 이후 대소변으로 배설된다. 일반적으로, B 비타민의 순환 수준이 혈액의 B 비타민 결합 용량을 초과하는 경우, 과량은 소변으로 배설된다.

약제학적 조성물

상기 기술한 약제학적 조성물, 용도, 및 방법의 HDAC 억제 화합물 및 분자는 종종 약제학적 허용 염의 형태로 사용된다. 약제학적 허용 염으로서, 적절한 경우, 약제학적 허용 염기 부가 염 및 산 부가 염, 예를 들어, 금속 염, 예컨대 알칼리 금속 염 및 알칼리 토금속 염, 암모늄 염, 유기 아민 부가 염, 및 아미노산 부가 염, 및 설포네이트 염을 들 수 있다. 산 부가 염으로서 무기산 부가 염, 예컨대 히드로클로라이드, 설페이트 및 포스페이트, 및 유기산 부가 염, 예컨대 알킬 설포네이트, 아릴설포네이트, 아세테이트, 말레이트, 푸마레이트, 타르트레이트, 시트레이트 및 락테이트를 들 수 있다. 금속 염의 예는 알칼리 금속 염, 예컨대 리튬 염, 나트륨 염 및 칼륨 염, 알칼리 토금속 염, 예컨대 마그네슘 염 및 칼슘 염, 알루미늄 염, 및 아연 염이다. 암모늄 염의 예는 암모늄 염 및 테트라메틸암모늄 염이다. 유기 아민 부가 염의 예는 모르폴린 및 피페리딘과의 염이다. 아미노산 부가 염의 예는 글리신, 페닐알라닌, 글루타민산 및 리신과의 염이다. 설포네이트 염으로서 메실레이트, 토실레이트 및 벤젠 설폰산 염을 들 수 있다.

본 발명은 또한 HDAC 억제 화합물 및 B 비타민 분자를 포함하는 약제학적 조성물 및 치유적 (본 발명의 넓은 측면에서 또한 예방적) 치료에서의 이의 용도 또는 HDAC 의존적 질환, 예를 들어, 상기 언급한 질환의 치료 방법, 약제학적 제제에 사용하기 위한 HDAC 억제 화합물을 제공한다.

본 발명은 또한 생체내에서 본 방법의 HDAC 억제 화합물 자체로서 전환되는 HDAC 억제 화합물의 프로드러그, 및 B 비타민 분자를 제공한다. 본 방법의 HDAC 억제 화합물에 대한 임의의 언급은 따라서 HDAC 억제 화합물의 해당 프로드러그도 적절하고 적당하게 언급하는 것으로 이해된다.

본원의 HDAC 억제 화합물은, 예를 들어, 유효량의 본원의 HDAC 억제제 및 B 비타민 분자, 또는 이의 약제학적 허용 염을, 활성 성분으로서 함께 또는 상당량의 1종 이상의 무기 또는 유기의, 고체 또는 액체의, 약제학적 허용 담체와 혼합물로 포함하는 약제학적 조성물의 제조에 사용될 수 있다.

본원의 조성물은 온혈 동물, 예를 들어, 인간 (또는 온혈 동물 유래의 세포 또는 세포주, 예를 들어, 인간 세포, 예를 들어, 림프구)에 대한 투여, HDAC 활성의 억제에 반응하는 질환의 치료, 또는, 본 발명의 또다른 측면에서 이의 방지 (또한 이에 대한 예방으로도 일컬어짐)에 적절하고, 이는 HDAC의 활성의 억제, 또는 또다른 전사 효과기 단백질과 상호 작용하는 HDAC 단백질의 억제를 비롯한 상기 억제에 효과적인 본 방법의 화합물 또는 이의 약제학적 허용 염의 양을, 1종 이상의 약제학적 허용 담체, 및 B 비타민 분자와 함께 포함한다.

본 방법에 따른 약제학적 조성물은 온혈 동물 (예를 들어, 인간)에 대한 소화관내, 예컨대 코, 직장 또는 경구, 또는 비경구, 예컨대 근육내 또는 정맥내 투여를 위한 것이고, 이는 유효 용량의 약리학적 활성 성분을, 단독으로 또는 상당량의 약제학적 허용 담체와 함께 포함한다. 활성 성분의 용량은 온혈 동물의 종, 체중, 연령 및 개체 상태, 개체 약동학 데이터, 치료될 질환 및 투여 방식에 의존한다.

온혈 동물, 예를 들어, 체중이 대략 70 kg인 인간에게 투여되는 본 방법의 HDAC 억제제 또는 이의 약제학적 허용 염의 용량은, 예를 들어, 동일한 크기일 수 있는 1-3 회의 단회 용량으로 분할된, 대략 3 mg 내지 대략 10 g, 대략 10 mg 내지 대략 1.5 g, 약 100 mg 내지 약 1000 mg/개인/일이다. 보통, 아동은 성인 용량의 절반을 투여받는다.

온혈 동물, 예를 들어 체중이 대략 70 kg인 인간에게 투여되는 B 비타민 분자의 용량은, 예를 들어, 약 50 마이크로그램 (㎍) 이상, 약 80 ㎍, 90 ㎍, 100 ㎍ 이상, 또는 약 500 ㎍ 이상, 약 25 밀리그램 (mg), 30 mg, 40 mg 이상, 또는 약 50 mg 이상, 약 500 mg 이상이다.

약제학적 조성물은, 예를 들어, 1% 내지 대략 95%, 또는 대략 20% 내지 대략 90%의 활성 성분을 갖는다. 본 발명에 따른 약제학적 조성물은, 예를 들어, 단위 투여형, 예컨대 앰풀, 바이알, 좌제, 당의정, 정제 또는 캡슐의 형태일 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 그 자체로 공지된 방식으로, 예를 들어, 통상의 용해, 동결 건조, 혼합, 과립화 또는 당제 형성 방법에 의해 제조된다.

활성 성분의 용액, 및 또한 현탁액, 및 특히 등장성 수용액 또는 현탁액이 사용되며, 예를 들어, 활성 성분을 단독으로 또는 담체, 예를 들어, 만니톨과 함께 갖는 동결 건조된 조성물의 경우, 상기 용액 또는 현탁액이 사용 이전에 제조되는 것이 가능하다. 약제학적 조성물은 멸균될 수 있고/거나 부형제, 예를 들어, 보존제, 안정화제, 습윤제 및/또는 유화제, 가용화제, 삼투압 조절용 염 및/또는 완충제를 포함할 수 있고, 그 자체로 공지된 방식, 예를 들어, 통상의 용해 또는 동결 건조 방법에 의해 제조된다. 용액 또는 현탁액은 점도 증가 물질, 예컨대 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 덱스트란, 폴리비닐피롤리돈 또는 젤라틴을 가질 수 있다.

오일 중 현탁액은 오일 성분으로서 주사 목적에 통상적인 식물성, 합성 또는 반합성 오일을 포함한다. 예를 들어, 산 성분으로서 탄소수 8-22, 또는 12-22의 장쇄 지방산, 예를 들어, 라우르산, 트리데실산, 미리스트산, 펜타데실산, 팔미트산, 마르가르산, 스테아르산, 아라키드산, 베헨산 또는 해당 불포화 산, 예를 들어, 올레산, 엘라이드산, 에루스산, 브라시드산 또는 리놀레산 (필요에 따라 산화방지제, 예를 들어, 비타민 E, β-카로텐 또는 3,5-디-tert-부틸-4-히드록시톨루엔이 첨가됨)을 포함하는 액체 지방산 에스테르가 언급될 수 있다. 상기 지방산 에스테르의 알콜 성분은 탄소수가 최대 6이고, 모노- 또는 폴리-히드록시, 예를 들어, 모노-, 디- 또는 트리-히드록시, 알콜, 예를 들어, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 또는 펜탄올 또는 이의 이성질체이나, 특히 글리콜 및 글리세롤이다. 지방산 에스테르의 하기 예가 따라서 언급된다: 에틸 올레이트, 이소프로필 미리스테이트, 이소프로필 팔미테이트, "라브라필 (Labrafil) M 2375" (파리, 가테포세 (Gattefosse), 폴리옥시에틸렌 글리세롤 트리올레이트), "미글리올 (Miglyol) 812" (C8 내지 C12의 사슬 길이를 갖는 포화 지방산의 트리글리세라이드, 독일, 휠스 아게 (Huels AG)), 그러나 특히 식물성유, 예컨대 면실유, 아몬드유, 올리브유, 피마자유, 참기름, 대두유, 더 특히는 땅콩유.

주사 조성물은 무균 조건 하에 통상의 방식으로 제조되고; 조성물을 앰풀 또는 바이알에 도입하고 용기를 밀봉하는 데도 이를 적용한다.

경구 투여용 약제학적 조성물은 활성 성분을 고체 담체와 배합하고, 필요에 따라 생성되는 혼합물을 과립화하며, 필요 또는 요구에 따라, 적절한 부형제의 첨가 이후, 혼합물을 정제, 당의정 코어 또는 캡슐로 가공함으로써 수득될 수 있다. 활성 성분이 측정된 양으로 확산되고 방출되는 것을 가능하게 하는 플라스틱 담체로 이를 도입하는 것도 가능하다.

적절한 담체는, 예를 들어, 충전제, 예컨대 당, 예를 들어, 락토오스, 사카로오스, 만니톨 또는 소르비톨, 셀룰로오스 제제 및/또는 인산칼슘, 예를 들어, 인산 3칼슘 또는 인산수소칼슘, 및 결합제, 예컨대 옥수수, 밀, 쌀 또는 옥수수 전분을 이용하는 전분 페이스트, 젤라틴, 트래거캔스 고무, 메틸셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스 및/또는 폴리비닐피롤리돈, 및/또는, 필요에 따라, 붕해제, 예컨대 상기 언급한 전분, 및/또는 카르복시메틸 전분, 가교된 폴리비닐피롤리돈, 아가, 알긴산 또는 이의 염, 예컨대 나트륨 알기네이트이다. 부형제는 특히 유동 상태조절제 및 윤활제, 예를 들어, 규산, 탈크, 스테아르산 또는 이의 염, 예컨대 마그네슘 또는 칼슘 스테아레이트, 및/또는 폴리에틸렌 글리콜이다. 당의정 코어에는 적절한, 임의로 장용 코팅이 제공되며, 특히 아라비아 고무, 탈크, 폴리비닐피롤리돈, 폴리에틸렌 글리콜 및/또는 이산화티탄을 포함할 수 있는 농축 당 용액, 또는 적절한 유기 용매 중의 코팅 용액, 또는, 장용 코팅 제제의 경우, 적절한 셀룰로오스 제제, 예컨대 에틸셀룰로오스 프탈레이트 또는 히드록시프로필메틸셀룰로오스 프탈레이트의 용액이 사용된다. 캡슐은 젤라틴으로 이루어진 건조 충전 캡슐, 및 젤라틴 및 가소제, 예컨대 글리세롤 또는 소르비톨로 이루어진 연질 밀봉 캡슐이다. 건조 충전 캡슐은 과립 형태의 활성 성분을, 예를 들어, 충전제, 예컨대 락토오스; 결합제, 예컨대 전분, 및/또는 유동화제, 예컨대 탈크 또는 마그네슘 스테아레이트, 및 필요에 따라 안정화제와 함께 포함할 수 있다. 연질 캡슐의 경우 활성 성분은 바람직하게는 적절한 유성 부형제, 예컨대 지방유, 파라핀유 또는 액체 폴리에틸렌 글리콜에 용해 또는 현탁되며, 안정화제 및/또는 항균제가 첨가되는 것도 가능하다. 염료 또는 안료가, 예를 들어, 식별 목적으로 또는 활성 성분의 상이한 용량을 나타내기 위하여, 정제 또는 당의정 코팅 또는 캡슐 케이스에 첨가될 수 있다.

HDAC 및 B 비타민 분자의 조합물을 포함하는 약제학적 조성물

본 발명은 HDAC 억제제 및 B 비타민 분자를 함유하는 약제학적 조성물을 제공하고, 상기 조성물은 HDAC 활성의 억제에 반응하는 질환, 특히 증식성 질환의 치료, 예방 또는 개선을 위하여 대상체, 예를 들어, 인간에게 투여하기에 적절하다.

약제학적 조성물은 일반적으로 HDAC 억제제 및 B 비타민 분자 각각을 유효 용량으로 포함한다. 본원에서 사용된 "유효 용량"은 기타 활성 성분이 부재하는 치료 요법으로 투여되는 경우 성분의 최적의 양과 상이한 각 활성 성분의 양을 의미한다. 대상체에게 투여되는 경우 약제학적 조성물의 유효 용량은 질환 증상을 예방하거나 개선하고, 즉 증식성 장애 또는 HDAC 의존적 질환 또는 종양, 세포괴 또는 표적 세포를 감소시키고/거나 개선하며 또한 HDAC 억제제 또는 B 비타민 분자 단독이 투여된 대조군 대상체에서의 이들 증상과 비교시 더 적은 부작용을 일으킨다. 증식성 질환의 치료 분야에서의 당업자는 조합물 중의 각 성분의 유효량을 쉽게 결정할 수 있다. 예를 들어, 부작용은 조합물 중에 B 비타민의 특정 용량의 존재에 의해 예방되거나 개선되므로, 대상체에게 투여되는 HDAC 억제제 단독의 양인 대조군의 양과 비교시, 더 다량의 HDAC 억제제 성분이 대상체에게 투여되는 약제학적 조성물 중에 포함될 수 있다. B 비타민의 존재 또는 이의 동시 투여에 의해, HDAC 억제제의 유효 용량은 B 비타민이 부재하는 유효 용량과 비교시, B 비타민의 존재 하에 이들 화합물의 증가된 효능으로 인하여 감소되는 것이 본원의 방법 및 조성물의 목적이다.

항종양제는 종종 바람직하지 않은 부작용에 의해 용량이 제한되며, 따라서 효능은 대상체가 그 용량을 용인하는 능력에 기초하여, 용량의 선택에 의해 제한된다. 부작용으로서, 예를 들어, 저혈소판증 및 빈혈, 및 조혈제에 의한 억제로부터 발생하는 기타 상태를 들 수 있다. B 비타민 분자는 본원에서 놀랍게도 상기 효과를 예방하거나 개선하는 것으로 발견되었고, 따라서 B 비타민 분자의 양도 포함하는 본원의 약제학적 조성물에 의한 치료 요법에 있어서 더 높은 투여량의 HDAC 억제제가 용인된다. 실험 대상체, 예컨대 마우스에 대한 HDAC 억제제의 표준 양의 투여로부터 출발하여, B 비타민 분자는 HDAC 억제제 단독이 투여되거나, 또는 어떠한 작용제도 투여되지 않은 대조군을 제외하고 각 실험군의 각 마우스에게 변화되는 양으로 투여된다. 질환의 개선 및 부작용 모두의 증상이 임의의 암 어세이에 의해, 그리고 부작용, 예컨대 혈액 응고 시간, 적혈구 양 등의 편리한 어세이에 의해 모니터링된다. 그 후 과도한 실험 없이 상기 일상적 절차에 의해, 증상을 예방하거나 개선하는 B 비타민 분자 용량에서 출발하여, 최소의 부작용으로 최대의 효능을 나타내는 조합물의 유효 용량이 결정될 때까지, 새로운 마우스의 군을 증가된 용량의 B 비타민과 조합된, 훨씬 더 많은 용량의 HDAC의 용인성에 대하여 시험한다.

종양, 세포괴 또는 표적 세포의 증식의 감소, 또는 감소된 전이가, 예를 들어, 종양 크기, 전이의 수, 종양 괴사, 세포 증식 속도, 또는 세포 아폽토시스의 감소를 관측함으로써 분석될 수 있다. 약제학적 분야의 표준에서와 같이, 약제학적 조성물의 유효 용량은 온혈 동물의 종, 체중, 연령 및 개체 상태, 개체 약동학 데이터, 치료될 질환 및 투여 방식에 의존한다.

특성 조건 하에, B 비타민 분자는 HDAC 활성의 억제에 반응하는 질환, 예를 들어, 증식성 질환의 예방 또는 개선에 있어서, HDAC 억제제의 종류와 조합시 상승 효과를 갖는다. 따라서, 약제학적 조성물은 대상체에게 HDAC 억제제 단독을 투여하는 것과 비교시, 유사한 치료 효과를 얻기 위하여 더 적은 양의 HDAC 억제제 성분을 유효 용량으로 포함한다.

약제학적 조성물 중의 B 비타민 성분의 유효 용량은 HDAC 억제제의 투여로부터 발생하는 한 가지 이상의 부작용을 예방 또는 개선하는 양이고, 이는 본원에서 기술되어 있다.

증식성 질환의 치료 분야의 당업자는 증식성 질환 또는 상기 질환의 치료로부터의 부작용이 특정 비타민 결핍으로부터 발생하는 정도를 쉽게 측정할 수 있다. 특정 조건 하에, 약제학적 조성물 중의 B 비타민 성분의 유효 용량은 증식성 질환을 갖는 대상체에서 존재하는 비타민 결핍을 예방 또는 개선하여 이에 따라 HDAC 억제제의 부작용을 더 감소시키는 양이다.

조합물

본 방법의 HDAC 억제성 화합물은 또한 기타 항증식제와 조합되어 유리하게 사용될 수 있다. 상기 항증식제의 비제한적인 예로서 아로마타아제 억제제; 항에스트로겐; 토포아이소머라아제 I 억제제; 토포아이소머라아제 II 억제제; 미소관 활성제; 알킬화제; 히스톤 디아세틸라아제 억제제; 세포 분화 과정을 유도하는 화합물; 시클로옥시게나아제 억제제; MMP 억제제; mTOR 억제제; 항신생물성 항대사 물질; 백금 화합물; 단백질 또는 지질 키나아제 활성을 표적/감소시키는 화합물 및 추가의 항혈관신생 화합물; 단백질 또는 지질 포스파타아제의 활성을 표적하거나, 감소시키거나 또는 억제하는 화합물; 고나도렐린 효능제; 항안드로겐; 메티오닌 아미노펩티다아제 억제제; 비스포스포네이트; 생물 반응 조절제; 항증식성 항체; 헤파라나아제 억제제; Ras 종양유전자 아이소형의 억제제; 텔로머라아제 억제제; 프로테아좀 억제제; 혈액 악성 종양의 치료에 사용되는 작용제; Flt-3의 활성을 표적하거나, 감소시키거나 또는 억제하는 화합물; Hsp90 억제제; 테모졸로미드 (temozolomide) (테모달® (TEMODAL®)); 및 류코보린을 들 수 있다.

본원에서 사용된 구절, "아로마타아제 억제제"는 에스트로겐 생성, 즉 기질 안드로스텐디온 및 테스토스테론의 에스트론 및 에스트라디올 각각으로의 전환을 억제하는 화합물을 말한다. 상기 용어는 스테로이드, 특히 아타메스탄 (atamestane), 엑세메스탄 (exemestane) 및 포메스탄 (formestane) 및, 특히, 비-스테로이드, 특히 아미노글루테티미드, 로글레티미드, 피리도글루테티미드, 트리로스탄, 테스토락톤, 케토코나졸, 보로졸, 파드로졸, 아나스트로졸 및 레트로졸을 포함하나 이에 국한되지는 않는다. 엑세메스탄은, 예를 들어, 시판 형태로, 예를 들어, 상표명 아로마신 (AROMASIN)으로 투여될 수 있다. 포메스탄은, 예를 들어, 시판 형태로, 예를 들어, 상표명 렌타론 (LENTARON)으로 투여될 수 있다. 파드로졸은, 예를 들어, 시판 형태로, 예를 들어, 상표명 아페마 (AFEMA)로 투여될 수 있다. 아나스트로졸은, 예를 들어, 시판 형태로, 예를 들어, 상표명 아리미덱스 (ARIMIDEX)로 투여될 수 있다. 레트로졸은, 예를 들어, 시판 형태로, 예를 들어, 상표명 페마라 (FEMARA) 또는 페마르 (FEMAR)로 투여될 수 있다. 아미노글루테티미드는, 예를 들어, 시판 형태로, 예를 들어, 상표명 오리메텐 (ORIMETEN)으로 투여될 수 있다. 아로마타아제 억제제인 화학요법제를 포함하는 본 발명의 조합물은 호르몬 수용체 양성 종양, 예를 들어, 유방 종양의 치료에 특히 유용하다.

본원에서 사용된 용어 "항에스트로겐"은 에스트로겐 수용체 수준에서 에스트로겐의 효과에 길항 작용을 하는 화합물을 말한다. 상기 용어는 타목시펜, 풀베스트란트, 라록세핀 및 라록시펜 히드로클로라이드를 포함하나 이에 국한되지는 않는다. 타목시펜은, 예를 들어, 시판 형태로, 예를 들어, 상표명 놀바덱스 (NOLVADEX)로 투여될 수 있다. 라록시펜 히드로클로라이드는, 예를 들어, 시판 형태로, 예를 들어, 상표명 에비스타 (EVISTA)로 투여될 수 있다. 풀베스트란트는 US 4,659,516에서 개시된 바와 같이 제형화될 수 있고, 예를 들어, 시판 형태로, 예를 들어, 상표명 파슬로덱스 (FASLODEX)로 투여될 수 있다. 항에스트로겐인 화학요법제를 포함하는 본 발명의 조합물은 에스트로겐 수용체 양성 종양, 예를 들어, 유방 종양의 치료에 특히 유용하다.

본원에서 사용된 용어 "항-안드로겐"은 안드로겐 호르몬의 생물학적 효과를 억제할 수 있는 임의의 물질을 말하고, 이는, 예를 들어, US 4,636,505에 개시된 바와 같이 제형화될 수 있는, 비칼루타미드 (bicalutamide) (카소덱스 (CASODEX))를 포함하나 이에 국한되지는 않는다.

본원에서 사용된 구절, "고나도렐린 효능제"는 아바렐릭스 (abarelix), 고세렐린 (goserelin) 및 고세렐린 아세테이트를 포함하나 이에 국한되지는 않는다. 고세렐린은 US 4,100,274에 개시되어 있고, 예를 들어, 시판 형태로, 예를 들어, 상표명 졸라덱스 (ZOLADEX)로 투여될 수 있다. 아바렐릭스는, 예를 들어, US 5,843,901에 개시된 바와 같이 제형화될 수 있다.

본원에서 사용된 구절, "토포아이소머라아제 I 억제제"는 토포테칸 (topotecan), 기마테칸 (gimatecan), 이리노테칸 (irinotecan), 캄프토테칸 (camptothecan) 및 이의 유사체, 9-니트로캄프토테신 및 거대분자 캄프토테신 컨쥬게이트 PNU-166148 (WO99/17804의 화합물 A1)을 포함하나 이에 국한되지는 않는다. 이리노테칸은, 예를 들어, 시판 형태로, 예를 들어, 상표명 캄프토사 (CAMPTOSAR)로 투여될 수 있다. 토포테칸은, 예를 들어, 시판 형태로, 예를 들어, 상표명 히캄틴 (HYCAMTIN)으로 투여될 수 있다.

본원에서 사용된 구절, "토포아이소머라아제 II 억제제"는 안트라시클린, 예컨대 독소루비신 (리포솜 제형, 예를 들어, 캐릭스 (CAELYX)를 포함함), 다우노루비신, 에피루비신, 이다루비신 및 네모루비신, 안트라퀴논 미토산트론 및 로소산트론, 및 포도필로톡신 에토포사이드 및 테니포사이드를 포함하나 이에 국한되지는 않는다. 에토포사이드는, 예를 들어, 시판 형태로, 예를 들어 상표명 에토포포스 (ETOPOPHOS)로 투여될 수 있다. 테니포사이드는, 예를 들어, 시판 형태로, 예를 들어, 상표명 VM 26-브리스톨 (BRISTOL)로 시판될 수 있다. 독소루비신은, 예를 들어, 시판 형태로, 예를 들어, 상표명 아드리블라스틴 (ADRIBLASTIN) 또는 아드리아마이신 (ADRIAMYCIN)으로 투여될 수 있다. 에피루비신은, 예를 들어, 시판 형태로, 예를 들어, 상표명 파모루비신 (FARMORUBICIN)으로 투여될 수 있다. 이다루비신은, 예를 들어, 시판 형태로, 예를 들어, 상표명 자베도스 (ZAVEDOS)로 투여될 수 있다. 미토산트론은, 예를 들어, 시판 형태로, 예를 들어, 상표명 노반트론 (NOVANTRON)으로 투여될 수 있다.

구절, "미소관 활성제"는 미소관 안정화제, 미소관 불안정화제 및 마이크로튜블린 (microtublin) 중합 억제제, 비제한적인 예로서 탁산, 예를 들어, 파클리탁셀 및 도세탁셀, 빈카 알칼로이드, 예를 들어, 빈블라스틴 설페이트를 비롯한 빈블라스틴, 빈크리스틴 설페이트를 비롯한 빈크리스틴, 및 비노렐빈, 디스코데모라이드 (discodermolide), 코키신 (cochicine) 및 에포틸론 (epothilone) 및 이의 유도체, 예를 들어, 에포틸론 B 또는 D 또는 이의 유도체를 말한다. 파클리탁셀은, 예를 들어, 시판 형태로, 예를 들어, 탁솔 (TAXOL)로 투여될 수 있다. 도세탁셀은, 예를 들어, 시판 형태로, 예를 들어, 상표명 탁소테르 (TAXOTERE)로 투여될 수 있다. 빈블라스틴 설페이트는, 예를 들어, 시판 형태로, 예를 들어, 상표명 빈블라스틴 알.피. (VINBLASTIN R.P.)로 투여될 수 있다. 빈크리스틴 설페이트는, 예를 들어, 시판 형태로, 예를 들어, 상표명 파르미스틴 (FARMISTIN)으로 투여될 수 있다. 디스코데모라이드는, 예를 들어, US 5,010,099에 개시된 바와 같이 수득될 수 있다. WO 98/10121, US 6,194,181, WO 98/25929, WO 98/08849, WO 99/43653, WO 98/22461 및 WO 00/31247에 개시된 에포틸론 유도체도 포함된다. 에포틸론 A 및/또는 B가 포함된다.

본원에서 사용된 구절, "알킬화제"는 시클로포스파미드, 이포스파미드, 멜팔란 또는 니트로소우레아 (BCNU 또는 글리아델 (Gliadel))를 포함하지만 이에 국한되지는 않는다. 시클로포스파미드는, 예를 들어, 시판 형태로, 예를 들어, 상표명 시클로스틴 (CYCLOSTIN)으로 투여될 수 있다. 이포스파미드는, 예를 들어, 시판 형태로, 예를 들어, 상표명 홀록산 (HOLOXAN)으로 투여될 수 있다.

구절, "히스톤 디아세틸라아제 억제제" 또는 "HDAC 억제제"는 본원에 기술된 바와 같은, 히스톤 디아세틸라아제로서 공지된 효소 종류의 한 가지 이상의 예를 억제하는 화합물을 말하고, 상기 화합물은 일반적으로 항증식 활성을 갖는다. 앞서 개시된 HDAC 억제제로서, 예를 들어, WO 02/22577에 개시된 화합물, 예컨대 N-히드록시-3-[4-[[(2-히드록시에틸)[2-(1H-인돌-3-일)에틸]-아미노]메틸]페닐]-2E-2-프로펜아미드, N-히드록시-3-[4-[[[2-(2-메틸-1H-인돌-3-일)-에틸]-아미노]메틸]페닐]-2E-2-프로펜아미드 및 이의 약제학적 허용 염을 들 수 있다. 이는 또한 수베로일아닐리드 히드록삼산 (SAHA)을 포함한다. 기타 공개적으로 개시된 HDAC 억제제로서 부티르산 및 이의 유도체, 예컨대 나트륨 페닐부티레이트, 탈리도미드, 트리코스타틴 A 및 트라포신을 들 수 있다.

추가의 HDAC 억제제로서 히드록삼산, 히드록사메이트, 히드록시아미드, 시클릭 펩티드, 벤즈아미드, 벤즈이미다졸, 단쇄 지방산, 머캅토미드, 카르밤산, 카르보닐, 피페라지닐, 피페리디닐, 모르폴리닐, 설포닐, 아민, 아미드, 발프로산, 옥심, 디옥산, 에폭사이드, 락탐, 및 데퓨데신과 같은 화합물을 들 수 있다.

상기 HDAC 억제제의 예는 미국 특허: 6,831,061 (Lee 등); 6,800,638 (Georges 등); 6,399,568 (Nishino 등); 6,124,495 (Neiss 등); 및 5,939,455 (Rephaeli), 및 특허 출원: WO03082288 (Watkins 등); CA2520611 (Miller 등); WO2005075466 (Bordogna 등); WO2005053610 (Miller 등); US2005124679 (Kim 등); WO2005014588 (Dyke 등); US2006058553 (Leahy 등); WO2005097770 (Setti); WO2005058803 (LeBlond 등); WO2005040161 (Stunkel 등); WO2006025683 (Lee 등); WO2006016680 (Ishibashi 등); WO2004072047 (Urano 등); WO2006028972 (Ahmed 등); WO2005075446 (Koyama 등); US2006058282 (Finn 등); US2005143385 (Watkins 등); EP1635800 (Wash 등); US2005148613 (Van Emelen 등); WO03099760 (Lan-Hargest 등); WO03099789 (Lan-Hargest 등); ZA200407237 (Van Emelen 등); WO2006010749 (Van Brandt 등); WO03076401 (Van Emelen 등); US2006030543 (Malecha 등); WO2005040101 (Lim 등); WO2006010750 (Verdonck 등); US2005119250 (Angibaud 등); US2004157841 (Fertig 등); US2004162317 (Fertig 등); WO2006005955 (Chakravarty 등); WO2006005941 (Chakravarty 등); WO2005065681 (Bressi 등); WO03070691 (Uesato 등); US2005038113 (Groner 등); CA2519301 (Fertig 등); WO02089782 (Schreiber 등); US2005282890 (Zheng); WO03099272 (Lan-Hargest 등); US2004077698 (Georges 등); US2002120099 (Basting); US6656905 (Mori 등); 및 US6399568 (Nishino 등); HK1079042; US2005171103 (Stokes 등); HK1046277 (Ishibashi 등); US2006069157 (Ferrante); WO2005055928 (Chen 등); 및 WO9800127 (Rephaeli 등)에서 발견된다.

용어 "항신생물성 항대사 물질"은 5-플루오로우라실 또는 5-FU, 카페시타빈, 겜시타빈, DNA 탈메틸화제, 예컨대 5-아자시티빈 및 데시타빈, 메토트렉세이트 및 에다트렉세이트, 및 엽산 길항제, 예컨대 페메트렉세드를 포함하나 이에 국한되지는 않는다. 카페시타빈은, 예를 들어, 시판 형태로, 예를 들어, 상표명 젤로다 (XELODA)로 투여될 수 있다. 겜시타빈은, 예를 들어, 시판 형태로, 예를 들어, 상표명 젬자 (GEMZAR)로 투여될 수 있다. 또한, 예를 들어, 시판 형태로, 예를 들어, 상표명 허셉틴 (HERCEPTIN)으로 투여될 수 있는 단클론 항체 트라스투주맙 (trastuzumab)도 포함된다.

본원에서 사용된 구절, "백금 화합물"은 카보플라틴, 시스-플라틴, 시스플라티넘 및 옥살리플라틴을 포함하나 이에 국한되지는 않는다. 카보플라틴은, 예를 들어, 시판 형태로, 예를 들어 상표명 카보플라트 (CARBOPLAT)로 투여될 수 있다. 옥살리플라틴은, 예를 들어, 시판 형태로, 예를 들어, 상표명 에록사틴 (ELOXATIN)으로 투여될 수 있다.

본원에서 사용된 구절, "HDAC 활성; 또는 히스톤 디아세틸라아제 활성을 표적하는/감소시키는 화합물"; 또는 추가로 항혈관신생 화합물은 HDAC1-11 억제제, 예를 들어, HDAC2, HDAC3 및 HDAC8 억제제를 포함하나 이에 국한되지는 않는다.

신호 전달에 수반된 단백질의 하기 목록은 HDAC 활성을 억제함으로써 전사 조절을 크게 달성하는 효과를 예시한다:

i) 혈소판 유래 성장 인자 수용체 (PDGFR)의 활성을 표적하거나, 감소시키거나 또는 억제하는 화합물, 예컨대 PDGFR의 활성을 표적하거나, 감소시키거나 또는 억제하는 화합물, 특히 PDGF 수용체를 억제하는 화합물, 예를 들어, N-페닐-2-피리미딘-아민 유도체, 예를 들어, 이마티니브 (imatinib), SU1O1, SU6668, 및 GFB-111;

ii) 섬유아세포 성장 인자 수용체 (FGFR)의 활성을 표적하거나, 감소시키거나 또는 억제하는 화합물;

iii) 인슐린 유사 성장 인자 수용체 I (IGF-IR)의 활성을 표적하거나, 감소시키거나 또는 억제하는 화합물, 예컨대 IGF-IR의 활성을 표적하거나, 감소시키거나 또는 억제하는 화합물, 특히 IGF-IR 수용체를 억제하는 화합물, 예컨대 WO 02/092599에 개시된 화합물; 및/또는

iv) c-Met 수용체의 활성을 표적하거나, 감소시키거나 또는 억제하는 화합물.

종양 세포 손상 접근법은 전리 방사선과 같은 접근법을 일컫는다. 상기 및 이후 언급되는 구절, "전리 방사선"은 전자기선 (예컨대 X-선 및 감마선) 또는 입자 (예컨대 알파 및 베타 입자)로서 발생하는 전리 방사선을 의미한다. 전리 방사선은 방사선 요법으로 제공되나 이에 국한되는 것은 아니며, 종래 기술에 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Hellman, Principles of Radiation Therapy, Cancer, in Principles and Practice of Oncology, Devita 등, Eds., 4th Edition, Vol. 1, pp. 248-275 (1993)]을 참고하라.

본원에서 사용된 구절, "EDG 결합제"는 림프구 재순환을 조절하는 면역억제제의 종류, 예컨대 FTY720를 일컫는다.

써티칸 (CERTICAN) (에베로리무스, RAD)은 T-세포 및 혈관 평활근 세포의 증식을 예방하는 시험용 신규한 증식 신호 억제제이다.

구절, "리보뉴클레오티드 리덕타아제 억제제"는 피리미딘 또는 퓨린 뉴클레오시드 유사체, 비제한적인 예로서, 플루다라빈 및/또는 시토신 아라비노사이드 (ara-C), 6-티오구아닌, 5-플루오로우라실, 클라드리빈, 6-머캅토퓨린 (특히 ALL에 대한 ara-C와 조합됨) 및/또는 펜토스타틴을 일컫는다. 리보뉴클레오티드 리덕타아제 억제제는 특히 히드록시우레아 또는 2-히드록시-1H-이소인돌-1,3-디온 유도체, 예컨대 문헌 [Nandy 등, Acta Oncologica, Vol. 33, No. 8, pp. 953-961 (1994)]에 언급된 PL-1, PL-2, PL-3, PL-4, PL-5, PL-6, PL-7 또는 PL-8이다.

본원에서 사용된 구절, "S-아데노실메티오닌 디카르복실라아제 억제제"는 US 5,461,076에 개시된 화합물을 포함하나 이에 국한되지는 않는다.

특히 WO 98/35958에 개시된 화합물, 단백질 또는 VEGF의 단클론 항체, 예를 들어, 1-(4-클로로아닐리노)-4-(4-피리딜메틸)프탈라진 또는 이의 약제학적 허용 염, 예를 들어, 석시네이트 또는 WO 00/09495, WO 00/27820, WO 00/59509, WO 98/11223, WO 00/27819 및 EP 0 769 947에 개시된 것; 문헌 [Prewett 등, Cancer Res, Vol. 59, pp. 5209-5218 (1999)]; [Yuan 등, Proc Natl Acad Sci U S A, Vol. 93, pp. 14765-14770 (1996)]; [Zhu 등, Cancer Res, Vol. 58, pp. 3209-3214 (1998)]; 및 [Mordenti 등, Toxicol Pathol, Vol. 27, No. 1, pp. 14-21 (1999)]에 기술된 것; WO 00/37502 및 WO 94/10202에 개시된 것; 문헌 [O'Reilly 등, Cell, Vol. 79, pp. 315-328 (1994)]에 의해 기술된 안지소스타틴 (ANGIOSTATIN); 문헌 [O'Reilly 등, Cell, Vol. 88, pp. 277-285 (1997)]에 기술된 엔도스타틴 (ENDOSTATIN); 안트라닐산 아미드; ZD4190; ZD6474; SU5416; SU6668; 베바시주마브 (bevacizumab); 또는 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 수용체 항체, 예를 들어, rhuMAb 및 RHUFab, VEGF 압타머 (aptamer), 예를 들어, 마쿠곤 (Macugon); FLT-4 억제제, FLT-3 억제제, VEGFR-2 IgG1 항체, 안지오자임 (Angiozyme) (RPI 4610) 및 아바스탄 (Avastan)도 포함된다.

본원에서 이용된 광역학 요법은 암의 치료 또는 예방을 위한 광감작제로서 공지된 특정 화합물을 이용하는 요법을 일컫는다. 광역학 요법의 예로서, 예를 들어, 비수딘 (VISUDYNE) 및 포르피머 나트륨과 같은 작용제에 의한 치료를 들 수 있다.

본원에서 사용된 구절, "혈관신생억제 스테로이드"는 혈관신생을 차단하거나 억제하는 작용제, 예를 들어, 아네코르타브 (anecortave), 트리암시놀론, 히드로코르티손, 11-α-에피히드로코티솔, 코르덱솔론, 17α-히드록시프로게스테론, 코르티코스테론, 데스옥시코르티코스테론, 테스토스테론, 에스트론 및 덱사메타손을 일컫는다.

코르티코스테로이드를 함유하는 이식물은 작용제, 예를 들어, 플루오시놀론, 덱사메타손을 일컫는다.

기타 화학요법제의 비제한적인 예로서 식물 알칼로이드, 호르몬 작용제 및 길항제; 생물학적 반응 조절제, 바람직하게는 림포카인 또는 인터페론; 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 올리고뉴클레오티드 유도체; 또는 갖가지 작용제, 또는 다른 또는 공지되지 않은 작용 기전을 갖는 작용제를 들 수 있다.

코드 번호, 속명 또는 상표명에 의해 식별된 활성제의 구조는 표준 개론 "The Merck Index"의 현행 판으로부터 또는 데이터베이스, 예를 들어, 국제 특허 (예를 들어, IMS 세계 공보)로부터 얻을 수 있다.

본 방법의 화합물과 조합되어 사용될 수 있는, 상기 언급한 화합물은 상기 인용한 문헌과 같은 종래 기술에 기술된 바와 같이 제조 및 투여될 수 있다.

본 방법의 화합물은 또한 공지된 치료 방법, 예를 들어, 호르몬의 투여 또는 특히 방사선과 함께 유리하게 사용될 수 있다.

본 방법의 화합물은 또한 방사선민감제로서, 예를 들어, 방사선 요법에 대한 불충분한 민감성을 나타내는 종양의 치료에 사용될 수 있다.

용어 "조합물"이란 하나의 투여 단위 형태의 고정 조합물, 또는 본 발명의 화합물 및 조합 파트너가 독립적으로 동시에 또는 특히 조합 파트너가 협동, 예를 들어, 상승 효과를 나타내는 것을 가능하게 하는 시간 간격 이내에 별개로 투여될 수 있는 조합 투여용 부분들의 키트, 또는 이의 임의의 조합을 의미한다.

하기 실시예 1은 HDAC 억제제만의 투여를 HDAC 억제제 및 B 비타민 분자의 조합물의 투여와 비교하는, 래트의 생체내 종양 성장의 억제를 보여준다.

실시예 2는 HDAC 억제제를 이용하는 단일 작용제 치료의 효능을 HDAC 억제제 및 B 비타민 분자를 이용하는 조합 치료의 효능과 비교하는 것을 보여준다. 표 3은 각 동물 군에게 투여된 화합물 및 분자, 및 각각의 농도를 보여준다.

실시예 3은 화학요법 치료로부터의 부작용에 대한 어세이 방법을 포함한다. 표 4는 각 동물 군에게 투여된 화합물 및 분자, 및 각각의 농도를 보여준다.

본 발명은 충분히 기술되었으나, 이는 하기 실시예 및 특허청구범위에 의해 더 예증되며, 이는 예시적인 것이고 더 제한하는 의도가 아니다. 당업자는 단지 일상적 실험법을 이용하여, 본원에 기술된 특정 절차에 대한 다수의 등가물을 인지하거나 확인할 수 있다. 상기 등가물은 본 발명 및 특허청구범위의 범위 이내에 있다. 본 출원에 걸쳐 인용된, 발행된 특허 및 공개된 특허 출원을 비롯한 모든 참고 문헌은 본원에서 참고로 인용한다.

하기 프로토콜은 실시예 1-2의 실행을 용이하게 하기 위하여 제공된다.

약물 투여

설치류에게 투여하기 위하여, HDAC 억제제를 문헌 [Hockly 등, Proc Natl Acad Sci U S A. 2003; 100(4): 2041-2046]에서 제시된 바와 같이, 2-히드록시프로필-β-시클로덱스트린과 복합체화하여 용해도를 높이고 HDAC 억제제가 물에 용해되게 한다. 시클로덱스트린 및 기타 HDAC 억제제 제형을 또한 고체 현탁액 또는 분산액으로서 제공한다. B 비타민 분자를 생리 식염수 (0.9% NaCl)에 용해시킨다.

생체내 항종양 시험

HCT116 결장 암종 세포주를 어세이 및 마우스 이종이식 모델에 이용한다. 대안으로, B16-F10 뮤린 흑색종 세포를 이용한다. 미국 특허 출원 제 US/2004/0229843호 (Toole 등)를 참고하라. 기증자 마우스로부터의 HCT116 결장 암종 세포 또는 B16-F10 뮤린 흑색종 세포의 이용으로 적절한 래트 수용자 균주에게 세포를 피하 주사하여 종양을 증식시킨다.

실험의 초기에 종양의 치료를 위해 HDAC 억제제를 단독으로 또는 B 비타민 분자와 함께 투여하기 이전에, 요구되는 수의 동물을 모은 후 각종 치료군 및 대조군에 분배한다. 각 동물에 대한 효능 및 효능의 결과에 대한 관측을 한 가지 이상의 파라미터, 예컨대 종양 관류, 종양 크기, 종양 수, 또는 종양 무게를 평가함으로써 측정하고, 상기 파라미터 중 일부를 프로토콜의 과정 내내 살아있는 동물에 대하여 어세이하고, 나머지를 종결 및 동물의 희생 이후 어세이한다.

캘리퍼스에 의해 1 주에 2 회 종양을 측정함으로써 종양 크기를 결정한다. 종양 무게 (mg)를 하기 수학식으로부터 추정한다: 종양 무게 = (길이 x 너비2)/2. 종양 수를 부검 데이터로부터 측정한다. 에반스 블루 (Evans blue) 염료 흡수 어세이를 이용하여 종양 관류를 측정한다. 래트에게 에반스 블루 염료를 정맥내 주사하여 투여한다. 종양 내에 축적된 에반스 블루의 양은 종양을 통한 혈류에 비례한다.

일반적으로, 조성물을 경구 (po), 정맥내 전달 (iv) 또는 피하 (sc)에 의해 투여한다. 대안으로, 알자 코포레이션 (ALZA Corporation, 캘리포니아주, 팔로 알토)으로부터 입수가능한 ALZET 펌프를 이용한다. 제형은 PBS 또는 또다른 비히클을 함유하고, 2-히드록시프로필-β-시클로덱스트린과 복합체화되고 물에 용해된 HDAC 억제제, 또는 생리 식염수 (0.9% NaCl) 중에 용해된 B 비타민 분자를 래트의 등 부위의 피부 아래에 피하 주사한다. 주사한 다음 날, 0.1 ㎖의 PBS 중의 0.5 x 10⁵ 내지 1.0 x 10⁶ 개의 종양 세포를 투여 부위에 바로 근접하여 추가로 주사한다. 치료의 14 일 이후 CO₂에 의해 래트를 안락사시키고 종양 성장을 상기 기술한 바와 같이 평가한다.

실시예 1: HDAC 억제제 및 B 비타민 분자의 조합 치유적 치료의 개선된 효능

HDAC 억제제에 의한 단일 작용제 치료

B16-F10 뮤린 흑색종 세포를 피하 주입하기 이전에 HDAC 억제제를 투여하는 것은 이들 세포의 성장을 억제한다. 억제의 정도는 흑색종 세포의 주입 및 HDAC 억제제의 투여의 상대적 시점과 관련된다. 각 실험에 있어서, 종양 세포를 각 시험 조건에 대하여 5 마리의 대조군 및 5 마리의 실험 동물의 군 중의 치료될 동물에게 피하 주사한다.

종양을 실험 동물에게 주입하고, 종양의 크기가 증가하는 약 1-2 주 동안 종양의 성장을 모니터링한다. HDAC 억제제를 그 후 피하 투여한다. HDAC 억제제를 특정 프로토콜에 의해 결정된 시간 과정, 예를 들어, 14 일의 시간 과정에 걸쳐 투여한다. 대조군 동물에게 비히클 (HDAC 억제제와의 복합체화에 사용된 것과 유사한 양의 2-히드록시프로필-β-시클로덱스트린을 갖는 포스페이트 완충 용액 (PBS))만을 투여한다.

HDAC 억제제의 투여는 종양 성장을 억제하는 것으로 관측되며, 즉 대조군의 동물에 대하여 얻어진 데이터와 비교시, 종양 크기, 종양 무게, 종양 수, 및 종양 관류 중 한 가지 이상에서의 감소와 통계적으로 상호 관련된다.

HDAC 억제제 및 B 비타민 분자에 의한 조합 치료

HDAC 억제제를 B 비타민 분자와 함께 투여하는 경우, HCT116 결장 암종 종양의 치료 또는 예방에 있어서 상승적 항종양 활성이 관측된다. 각 실험에 있어서, 종양 세포를 상기와 같이 5 마리의 대조군 및 5 마리의 실험 동물의 군에게 피하 주사한다.

HDAC 억제제 및 B 비타민 분자를 종양 세포 주사 1 일 이전에 따로 투여하거나, 또는 단일 용액으로서 1 회의 주사로 투여한다. HDAC 억제제를 14 일의 과정에 걸쳐 이식 부위에 인접하여 투여한다. B 비타민 분자도 14 일의 과정에 걸쳐 투여한다. 대조군 동물은 오로지 비히클 (HDAC 억제제와의 복합체화에 사용된 것과 유사한 양의 2-히드록시프로필-β-시클로덱스트린을 갖는 PBS)만을 투여받는다.

HDAC 억제제 및 B 비타민 분자의 투여의 조합은 대조군과 비교시 종양 성장을 억제, 즉 종양 크기, 종양 무게, 종양 수, 및 종양 관류를 감소시키는 것으로 관측된다. 단일 작용제, 즉 HDAC 억제제만을 투여하여 얻어진 결과와 비교시, HDAC 억제제 및 B 비타민 분자의 조합 치료는 종양 성장을 더 크게 억제, 즉 종양 크기, 종양 무게, 종양 수, 및 종양 관류를 감소시키는 것을 관측된다.

실시예 2: B 비타민에 의한 효능 강화에 대한 유효 용량-약동학 측정

실시예 1에서 보여지는 바와 같이, HDAC 억제제 및 B 비타민 분자의 조합물에 의한 치유적 치료는 종양 출현 또는 성장의 억제에 대하여 치유적 상승 작용을 일으키는 것으로 보여진다. 이어서 HDAC 억제제를 이용하는 단일 작용제 치료의 효능을 다양한 양의 HDAC 억제제 및 일정량의 B 비타민 분자를 이용하는 조합 치료와 비교하는 연구를 수행한다. 상기 기술한 바와 같이 종양 크기, 종양 무게, 종양 수 및 종양 관류를 측정함으로써 종양 성장의 억제를 분석한다.

각 실험에서, B16-F10 뮤린 흑색종 세포를 군당 5 마리의 래트로 이루어진 7 개의 래트 군에게 피하 주사한다. 군은 하기 표 3에 기재된 바와 같이, 각종 농도의 HDAC 억제제만으로 치료된 동물의 3 개의 실험적 시험군 (단일 작용제, 군 I, II 및 III), 각종 농도의 HDAC 억제제와 조합된 일정량의 B 비타민 분자가 투여된 3 개의 동물 군 (조합물, 군 IV, V 및 VI), 및 비히클만이 투여된 대조군 (군 VII)이다.

HDAC 억제제 및 B 비타민 분자를 종양 세포의 주사 1 일 이전에 피하 투여한다. HDAC 억제제의 높은 수준은 경구 또는 정맥내 투여된 약 100 mg/체중 kg, 또는 약 50 mg/kg, 60 mg/kg, 70 mg/kg, 80 mg/kg, 또는 약 90 mg/kg 이상이다. 낮은 수준은 약 1 mg/총 체중 kg, 또는 약 2 mg/kg 미만, 약 3 mg/kg 미만, 또는 약 5 mg/kg 미만이다. 중간 수준은 약 10 mg/체중 kg 초과, 약 20 mg/kg, 약 30 mg/kg, 또는 약 40 mg/kg 초과이다. HDAC 억제제를 14 일의 과정에 걸쳐 고 투여량으로 (군 I), 중간 투여량으로 (군 II); 그리고 14 일의 과정에 걸쳐 더 적은 투여량으로 (군 III) 단일 작용제 군 (군 I-III)에게 투여의 부위에 인접하여 투여한다. HDAC 억제제 및 B 비타민 분자의 조합물이 투여된 군 (군 IV, V, 및 VI)은 조합물을 단회 주사로부터 또는 2 회 주사로부터 따로 투여받는다. 조합물 군 IV, V 및 VI의 경우 HDAC 억제제를 14 일의 과정에 걸쳐 고 투여량으로 (군 IV); 14 일의 과정에 걸쳐 중간 투여량으로 (군 VI); 그리고 14 일의 과정에 걸쳐 더 적은 투여량으로 (군 VII) 투여한다. B 비타민 분자를 조합물 군 IV, V 및 VI 각각에 대하여 14 일의 과정에 걸쳐 균일한 다량으로 투여한다. 대조군에게 비히클 (HDAC 억제제와의 복합체화에 사용된 것과 유사한 양의 2-히드록시프로필-β-시클로덱스트린을 갖는 PBS)만을 투여한다.

<표 3>

각 동물 군에게 투여된 화합물(들)
군 번호	군 명칭	치료 화합물	투여된 HDAC 억제제의 농도	투여된 B 비타민 분자의 농도
I	단일 작용제	HDAC 억제제만 (높은 수준)	고	0
II	단일 작용제	HDAC 억제제만 (중간 수준)	중	0
III	단일 작용제	HDAC 억제제만 (낮은 수준)	저	0
IV	조합물	HDAC 억제제 (높은 수준) 및 B 비타민 분자의 조합물	고	고
V	조합물	HDAC 억제제 (중간 수준) 및 B 비타민 분자의 조합물	중	고
VI	조합물	HDAC 억제제 (낮은 수준) 및 B 비타민 분자의 조합물	저	고
VII	대조군	HDAC 억제제와의 복합체화에 사용된 것과 유사한 양의 2-히드록시프로필-β-시클로덱스트린을 갖는 PBS	0	0

HDAC 억제제가 투여된 모든 군 (군 I-VI)에서 종양의 출현 또는 성장은 대조군 (군 VII)과 비교시 억제됨이 관측된다. HDAC 억제제 및 B 비타민 분자의 조합물을 이용하는 치유적 치료 (군 IV 내지 VI)는 HDAC 억제제에 의한 단일 작용제 치료보다 더 효과적인 것으로 관측된다.

높은 수준의 HDAC 억제제 및 B 비타민 분자가 투여된 조합물 군 IV는 종양 크기, 종양 무게, 종양 수, 및 종양 관류의 감소와 통계적으로 상호 관련된, 종양 성장의 최대량의 억제를 나타낸다. 중간 수준의 HDAC 억제제 및 B 비타민이 투여된 조합물 군 V는 중간 수준의 HDAC 억제제만이 투여된 단일 작용제 군 II 및 높은 수준의 HDAC 억제제만이 투여된 단일 작용제 군 I과 비교시, 더 큰 종양 성장의 억제, 즉 종양 크기, 종양 무게, 종양 수, 및 종양 관류의 감소를 나타낸다. 낮은 수준의 HDAC 억제제 및 B 비타민이 투여된 조합물 군 VI은 낮은 수준의 HDAC 억제제만이 투여된 단일 작용제 군 III, 중간 수준의 HDAC 억제제만이 투여된 단일 작용제 군 II, 및 높은 수준의 HDAC 억제제만이 투여된 단일 작용제 군 I과 비교시, 더 큰 종양 성장의 억제, 즉 종양 크기, 종양 무게, 종양 수, 및 종양 관류의 감소를 나타낸다.

상기 데이터는 종양 억제에 있어서 HDAC 억제제 및 B 비타민 분자 간의 상승 효과가 존재함을 나타낸다.

실시예 3: 화학요법제의 투여로부터의 부작용의 시험관내 분석

항암 치료 프로토콜은 부작용으로 인한 실제 지각되는 어려움에 의해 환자 허용가능성이 제한됨이 통상적으로 공지되어 있다. 효능을 강화시켜 더 저 용량의 항암제가 효능을 가질 수 있거나, 또는 부작용을 감소시켜 표준 또는 더 고 용량이 더 높은 허용가능성을 달성하게 하는 조성물이 필요하다.

따라서, 골수 세포를 이용하여 상기 치료로부터 발생하는 부작용을 측정함으로써 치료 관련 독성을 본원에서 분석하며, 상기 잠재적 부작용의 예는 골수억제, 저혈소판증 또는 빈혈이다. 래트로부터의 골수 샘플을 이용하여 14 일 콜로니 형성 단위 과립구-대식구 어세이로 골수독성을 평가한다. B 비타민의 투여 이후 부작용의 출현 또는 정도의 감소는 항종양 가능성의 치료 관련 강화의 척도를 제공한다. 일반적인 혈액 화학 물질 및 적혈구, 백혈구, 및 혈소판을 비롯한 혈구의 농도를 각 동물에 대하여 측정한다.

골수 샘플

7 내지 10 주령 래트에게 표준 실험실 식이를 투여한다. CO₂ 질식에 의해 동물을 희생시키고, 골수를 대퇴골로부터 무균으로 분출시키고, 적당한 파열에 의해 단세포 현탁액을 제조한다. 세포를 배지로 세정하고 적절한 농도까지 조절한다. 배지는 25 mmol/ℓ의 HEPES 완충제 및 5% (v/v)의 소 태아 혈청을 함유하는 이스코브의 변형된 둘베코 배지 (Iscove's Modified Dulbecco's Medium)로 이루어진다.

HDAC 억제제 및 B 비타민 분자의 제조

HDAC 억제제 및 B 비타민 분자를 계량하고 피셔 사이언티픽 (Fisher Scientific) (뉴저지주, 페어 론) 사 제 디메틸 설폭시드 (DMSO)에 용해시킨다. DMSO 중의 일련의 희석액을 제조하여 골수 세포를 함유하는 튜브에 이어서 첨가하고, 모든 배양액 중의 최종 DMSO 농도는 0.5%이다.

실험은, 하기 표 4에 기개된 바와 같이, HDAC 억제제만으로 치료된 하나의 군 (단일 작용제, 군 VIII), 각종 농도의 B 비타민 분자와 조합된 HDAC 억제제가 투여된 3 개의 군 (조합물, 군 IX, X, 및 XI), 및 비히클만으로 치료된 대조군 (군 XII)의 5 개의 군으로 이루어졌다.

<표 4>

각 동물 군에 투여된 화합물(들)
군 번호	군 명칭	치료 화합물	투여된 HDAC 억제제의 농도	투여된 B 비타민 분자의 농도
VIII	단일 작용제	HDAC 억제제만	100 pmol/ℓ	0
IX	조합물	HDAC 억제제 및 B 비타민 분자 (낮은 수준)의 조합물	100 pmol/ℓ	200 pmol/ℓ
X	조합물	HDAC 억제제 및 B 비타민 분자 (중간 수준)의 조합물	100 pmol/ℓ	500 pmol/ℓ
XI	조합물	HDAC 억제제 및 B 비타민 분자 (높은 수준)의 조합물	100 pmol/ℓ	1000 pmol/ℓ
XII	대조군	0.5%의 DMSO를 갖는 PBS	0	0

단일 작용제 군 VIII 및 조합물 군 IX, X, 및 XI 각각에게 투여된 HDAC 억제제의 농도는 100 pmol/ℓ이다. 조합물 군 IX, X, 및 XI 각각에게 투여된 B 비타민 분자의 농도는 200 pmol/ℓ (군 IX), 500 pmol/ℓ (군 X), 및 1000 pmol/ℓ (군 XI)이다. 세포의 대조군에는 0.5%의 DMSO를 함유하는 PBS 용액을 투여한다 (군 XII).

시험관내 과립구-대식구 어세이

골수 샘플을 무균의, 보존제가 없는 헤파린 튜브 중에 수집하고, 피콜-하이페크 (Ficoll-Hypaque) (d=1070) 밀도 구배 원심분리에 의해 분리한다. 과립구-대식구 어세이를 문헌 [Iscove 등, Am J Cell Physiol 1974;83:309-20]에 기술된 바 와 같이 수행한다. 간략히, 이스코브의 변형된 둘베코 배지 중의 2 x 10⁵ 개의 골수 세포/㎖를 10%의 식물성 혈구 응집소 자극된 백혈구 상태조절 배지, 10%의 소 혈청 알부민, 및 10%의 인간 AB 혈청을 함유하는 0.9%의 메틸셀룰로오스 중의 35 mm 페트리 접시 상에 평판배양한다. 배양액을 5%의 CO₂를 갖는 충분히 가습된 대기에서 37℃에서 항온배양한다. HDAC 억제제는 전체 배양 기간 (14 일) 동안 군 VIII-XI 각각에 대한 배지 중에 포함되고, B 비타민 분자는 전체 배양 기간 (14 일) 동안 군 IX-XI 각각에 대한 배지 중에 더 포함된다. 과립구-대식구 콜로니를 14 일째 도립 현미경 하에서 점수를 평가한다. 40 개 초과의 세포를 함유하는 집합체를 콜로니로서 평가하고, 4 내지 40 개의 세포를 함유하는 집합체를 클러스터로서 평가한다.

결과

비히클만이 투여된 대조군 (군 XII)에서 최대 수의 콜로니가 관측되며, 상기 수를 이용하여 기타 군에 대하여 얻어진 데이터를 정상화하여 생존율 (백분율)을 얻는다. HDAC 억제제 및 B 비타민 분자의 조합물을 이용하는 치유적 치료는 HDAC 억제제만이 투여된 단일 작용제 군 (VIII)으로부터 생성된 콜로니의 수와 비교시 유의하게 더 많은 수의 콜로니를 생성하는 것으로 관측된다. 1000 pmol/ℓ의 농도 (높은 수준)의 B 비타민 분자가 투여된 조합물 군 XI은 HDAC 억제제가 투여된 모든 군 중 최대 수의 콜로니 (최고 생존율 (백분율))를 생성한다. 200 pmol/ℓ의 농도 (낮은 수준)의 B 비타민 분자가 투여된 조합물 군 IX 조차도 HDAC 억제제만이 투여 된 단일 작용제 군 VIII보다 더 많은 수의 콜로니를 생성한다.

상기 데이터는 HDAC 억제제와 조합된 B 비타민의 투여가 화학요법제의 투여와 관련된 특정 부작용을 감소시키거나 개선함을 보여준다. 부작용의 감소 또는 개선 결과, 더 많은 용량의 HDAC 억제제가 단독으로, 또는 기타 공지된 항암제와 함께 사용되어, HDAC 억제제의 치료 지수를 개선할 수 있다.

등가물

비록 특정 실시양태가 본원에서 상세히 개시되었지만, 이는 오로지 예시의 목적으로 예로써 수행된 것이며, 하기 첨부된 특허청구범위의 범위에 대하여 제한하는 의도가 아니다. 특히, 각종 대체, 변형, 및 수정이 특허청구범위에 의해 정의된 본 발명의 취지 및 범위로부터 벗어나지 않고 본 발명에 수행될 수 있음이 고려된다. 기타 측면, 이점, 및 변형은 하기 특허청구범위의 범위 이내에 있는 것으로 고려된다.

Claims (61)

1. 히스톤 디아세틸라아제 (histone deacetylase; HDAC)의 억제제 및 B 비타민 분자를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 종양, 세포괴 또는 표적 세포를 갖는 대상체의 치료 방법.
2. 제1항에 있어서, 대상체에 대한 투여가 HDAC 억제제 또는 비타민 단독이 투여된 대조군과 비교하여 종양, 세포괴 또는 표적 세포의 증식의 감소를 관측하는 것을 더 포함하는 방법.
3. 제2항에 있어서, 종양, 세포괴 또는 표적 세포의 증식의 감소를 관측하는 것이 종양 크기; 전이; 종양 괴사; 세포 증식 속도; 및 세포 아폽토시스로 이루어진 군 중에서 선택되는 한 가지 이상의 파라미터의 억제를 분석하는 것을 더 포함하는 방법.
4. 제1항에 있어서, 대상체가 포유동물 또는 포유동물 세포인 방법.
5. 제4항에 있어서, 대상체가 인간인 방법.
6. 제1항에 있어서, 종양, 세포괴 또는 표적 세포가 증식성 질환, 과다증식성 질환, 심혈관 질환, 면역계의 질환, 중추 신경계의 질환, 말초 신경계의 질환, 및 유전자의 발현이상과 관련된 질환의 군 중에서 선택되는 1종 이상의 질환에서 존재하는 방법.
7. 제6항에 있어서, 심혈관 질환이 심부전인 방법.
8. 제6항에 있어서, 증식성 질환이 양성 또는 악성 종양, 뇌 암종, 신장 암종, 간 암종, 부신 암종, 방광 암종, 유방 암종, 위 암종 (특히 위 종양), 난소 암종, 식도 암종, 결장 암종, 직장 암종, 전립선 암종, 췌장 암종, 폐 암종, 질 암종, 갑상선 암종, 육종, 교아세포종, 림프종, 다발성 골수종 또는 위장암, 결장 암종 또는 결장직장 선종, 두경부 종양, 표피 과다증식, 건선, 전립선 비대증, 종양 형성, 바람직하게는 유방 암종, 또는 백혈병인 방법.
9. 제6항에 있어서, 과다증식성 질환이 백혈병, 림프종, 과형성, 섬유증 (폐 섬유증, 및 또한 신장 섬유증과 같은 기타 유형의 섬유증을 포함함), 혈관신생, 건선, 아테롬성 동맥경화증, 및 혈관형성술 이후의 협착증 또는 재협착증과 같은 혈관 내의 평활근 증식의 군 중에서 선택되는 1종 이상인 방법.
10. 제6항에 있어서, 면역 상태가 류마티즘성 관절염, 크론병, 다발성 경화증, 건선, 및 I형 당뇨병의 군 중에서 선택되는 1종 이상인 방법.
11. 제6항에 있어서, 면역 상태가 기관 또는 조직의 이식된 동종 이식편의 면역 거부인 방법.
12. 제6항에 있어서, 치료될 질환이 건선과 같은 지속성 혈관신생; 카포시 육종; 재협착증, 예를 들어, 스텐트 유도의 재협착증; 자궁내막증; 크론병; 호지킨병; 백혈병; 류마티즘성 관절염과 같은 관절염; 혈관종; 혈관섬유종; 당뇨병성 망막병증 및 신생혈관 녹내장과 같은 안 질환; 사구체신염과 같은 신장 질환; 당뇨병성 신병증; 악성 신장경화증; 혈전성 미세혈관병 증후군; 이식 거부 및 사구체병증; 간경화증과 같은 섬유성 질환; 혈관간세포-증식성 질환; 동맥경화증; 신경 조직의 손상과 관련되고; 풍선 카테터 치료 이후 혈관의 재폐색의 억제, 혈관 보철물에서의 사용 또는 혈관을 개방된 채로 유지하기 위한 기계적 장치, 예를 들어, 스텐트의 삽입 이후, 면역억제제로서, 흉터 없는 상처 치유에서의 보조물로서 사용, 및 검버섯 및 접촉 피부염의 치료를 위한 것인 방법.
13. 제1항에 있어서, 종양, 세포괴 또는 표적 세포가 HDAC 의존적 질환과 관련되고, HDAC가 HDAC1, HDAC2, HDAC3, HDAC4, HDAC5, HDAC6, HDAC7, HDAC8, HDAC9, HDAC1O 및 HDAC11의 군 중에서 선택되는 1종 이상인 방법.
14. 제13항에 있어서, 단백질 HDAC가 HDAC1, HDAC2, HDAC6 및 HDAC8의 군 중에서 선택되는 1종 이상인 방법.
15. 제1항에 있어서, HDAC 억제제가 히스톤 디아세틸라아제와 상호 작용하고 HDAC 효소 활성을 억제하는 구조를 갖는 화합물을 포함하는 방법.
16. 제15항에 있어서, HDAC 활성의 억제가 히스톤, p53, Hif1-알파, 튜뷸린, HSP-90 등의 군 중에서 선택되는 1종 이상의 단백질로부터 아세틸기의 제거를 감소시키는 것인 방법.
17. 제16항에 있어서, HDAC 활성의 억제가 약 50% 이상인 방법.
18. 제16항에 있어서, HDAC 활성의 억제가 약 75% 이상인 방법.
19. 제16항에 있어서, HDAC 활성의 억제가 약 90% 이상인 방법.
20. 제16항에 있어서, HDAC 활성의 억제가 약 99% 이상인 방법.
21. 제15항에 있어서, HDAC 억제제가 또다른 비관련 생물학적 효과 또는 효소학적 효과를 일으키는 억제제의 농도보다 더 낮은 농도에서 디아세틸라아제를 억제하는 방법.
22. 제21항에 있어서, 디아세틸라아제 억제 활성에 이용되는 HDAC 억제제의 농도가 비관련 생물학적 효과 또는 효소학적 효과를 일으키는 농도보다 2 배 이상 더 낮은 방법.
23. 제21항에 있어서, 디아세틸라아제 억제 활성에 이용되는 HDAC 억제제의 농도가 비관련 생물학적 효과 또는 효소학적 효과를 일으키는 농도보다 5 배 이상 더 낮은 방법.
24. 제21항에 있어서, 디아세틸라아제 억제 활성에 이용되는 HDAC 억제제의 농도가 비관련 생물학적 효과 또는 효소학적 효과를 일으키는 농도보다 10 배 이상 더 낮은 방법.
25. 제21항에 있어서, 디아세틸라아제 억제 활성에 이용되는 HDAC 억제제의 농도가 비관련 생물학적 효과 또는 효소학적 효과를 일으키는 농도보다 20 배 이상 더 낮은 방법.
26. 제1항에 있어서, B 비타민 분자가 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B3, 비타민 B5, 비타민 B6, 비타민 B9 (폴레이트), 및 비타민 B12의 군 중에서 선택되는 1종 이상인 방법.
27. 제26항에 있어서, 비타민 B 분자가 비타민 B2, 비타민 B3, 비타민 B6, 비타민 B9 (폴레이트), 및 비타민 B12의 군 중에서 선택되는 1종 이상인 방법.
28. 제1항에 있어서, B 비타민 분자가 B 비타민 전구체인 방법.
29. 제1항에 있어서, B 비타민 분자가 B 비타민 유사체 또는 유도체인 방법.
30. 제1항에 있어서, 투여가 전신 경로에 의한 전달인 방법.
31. 제30항에 있어서, 전신 투여 경로가 경구, 피하, 근육내 및 정맥내의 군 중에서 선택되는 한 가지 이상인 방법.
32. 제1항에 있어서, 조합물의 투여가 비타민 및 억제제의 동시 투여인 방법.
33. 제1항에 있어서, 조합물의 투여가 비타민 및 억제제의 순차적 투여인 방법.
34. 제1항에 있어서, 치료가 비타민 및 억제제의 용량을 상이한 빈도로 투여하는 것인 방법.
35. 제1항에 있어서, 비타민의 투여가 억제제의 투여보다 더 빈번한 방법.
36. 제1항에 있어서, 억제제의 투여가 비타민의 투여보다 더 빈번한 방법.
37. 제1항에 있어서, 비타민의 용량이 50 ㎍/대상체/용량 이상인 방법.
38. 제1항에 있어서, 비타민의 용량이 500 ㎍/대상체/용량 이상인 방법.
39. 제1항에 있어서, 비타민의 용량이 5 ㎎/대상체/용량 이상인 방법.
40. 제1항에 있어서, 비타민의 용량이 50 ㎎/대상체/용량 이상인 방법.
41. 제1항에 있어서, 비타민의 용량이 500 ㎎/대상체/용량 이상인 방법.
42. 제1항에 있어서, 투여가 비타민의 부재 하의 동일한 양보다 더 많고 더 적은 부작용을 일으키는 HDAC 억제제/대상체/일의 양을 더 포함하는 방법.
43. HDAC 억제제 및 B 비타민 분자의 조합의 항암 치료제로서의 용도.
44. 제43항에 있어서, 종양 크기의 증가 속도; 종양 수 (전이)의 증가 속도; 및 형질 전환된 세포의 증식 속도로 이루어진 군 중에서 선택되는 한 가지 이상의 파라미터의 억제를 측정하는 것을 더 포함하는 용도.
45. HDAC 억제제, B 비타민 분자, 및 용기 각각을 포함하는, 증식성 및 과다증식성 장애의 치료용 키트.
46. 제45항에 있어서, HDAC 억제제 및 B 비타민 분자 각각이 단위 용량으로 존재하는 키트.
47. 제45항에 있어서, 사용 설명서을 포함하는 키트.
48. 제45항에 있어서, 용량이 경구 이용가능한 정제인 키트.
49. 제45항에 있어서, 용량이 비경구 투여용 바이알 중에 함유된 키트.
50. HDAC 억제제 및 B 비타민 분자를 포함하는 약제학적 조성물.
51. 제50항에 있어서, HDAC 억제제 및 B 비타민 분자 각각이 유효 용량으로 존재하는 약제학적 조성물.
52. 제50항에 있어서, 약제학적 허용 완충제를 더 포함하는 약제학적 조성물.
53. 제50항에 있어서, 단위 용량으로 존재하는 약제학적 조성물.
54. 제50항에 있어서, 항증식제인 추가의 작용제를 더 포함하는 약제학적 조성물.
55. 제50항에 있어서,

    a) HDAC 억제제가 히드록삼산, 히드록사메이트, 히드록시아미드, 시클릭 펩티드, 항-HDAc 항체, 벤즈아미드, 벤즈이미다졸, 단쇄 지방산, 머캅토미드, 카르밤산, 카르보닐, 피페라지닐, 피페리디닐, 모르폴리닐, 설포닐, 아민, 아미드, 발프로산, 옥심, 디옥산, 에폭사이드, 락탐, 및 데퓨데신, 특히 N-(2-아미노페닐)-4-[N-(피리딘-3-일메톡시카르보닐)아미노메틸]벤즈아미드, N-히드록시-3-[4-[[(2-히드록시에틸)[2-(1H-인돌-3-일)에틸]-아미노]메틸]페닐]-2E-2-프로펜아미드, N-히드록시-3-[4-[[[2-(2-메틸-1H-인돌-3-일)-에틸]-아미노]메틸]페닐]-2E-2-프로펜아미드 및 이의 약제학적 허용 염을 비롯한 화합물의 군 중에서 선택되고;

    b) B 비타민 분자가 비타민 B2, 비타민 B3, 비타민 B6, 비타민 B9 (폴레이트), 및 비타민 B12의 군 중에서 선택되는 약제학적 조성물.
56. HDAC 억제제 및 B 비타민 분자를 포함하는, 종양, 세포괴 또는 표적 세포의 치료용 약제.
57. 제56항에 있어서, HDAC 억제제 및 B 비타민 분자 각각이 유효 용량으로 존재하는 약제.
58. 제56항에 있어서, 약제학적 허용 완충제를 더 포함하는 약제.
59. 제56항에 있어서, 조성물이 단위 용량으로 존재하는 약제.
60. 제56항에 있어서, 항증식제인 추가의 작용제를 더 포함하는 약제.
61. 제56항에 있어서,

    a) HDAC 억제제가 히드록삼산, 히드록사메이트, 히드록시아미드, 시클릭 펩티드, 항-HDAc 항체, 벤즈아미드, 벤즈이미다졸, 단쇄 지방산, 머캅토미드, 카르밤산, 카르보닐, 피페라지닐, 피페리디닐, 모르폴리닐, 설포닐, 아민, 아미드, 발프로산, 옥심, 디옥산, 에폭사이드, 락탐, 및 데퓨데신, 특히 N-(2-아미노페닐)-4-[N-(피리딘-3-일메톡시카르보닐)아미노메틸]벤즈아미드, N-히드록시-3-[4-[[(2-히드록시에틸)[2-(1H-인돌-3-일)에틸]-아미노]메틸]페닐]-2E-2-프로펜아미드, N-히드록시-3-[4-[[[2-(2-메틸-1H-인돌-3-일)-에틸]-아미노]메틸]페닐]-2E-2-프로펜아미드 및 이의 약제학적 허용 염을 비롯한 화합물의 군 중에서 선택되고;

    b) B 비타민 분자가 비타민 B2, 비타민 B3, 비타민 B6, 비타민 B9 (폴레이트), 및 비타민 B12의 군 중에서 선택되는 약제.