KR20090018793A - 파충류 및/또는 이들의 알에서 살모넬라균을 감소 또는 제거하는 방법 - Google Patents

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Abstract

알킬기 각각이 탄소수 1 내지 약 6 범위의 것들로부터 독립적으로 선택되는 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인을 사용하여 파충류 및/또는 파충류 알에서 살모넬라균을 감소 또는 제거하는 방법.
파충류, 살모넬라균, 살균 수용액

Description

파충류 및/또는 이들의 알에서 살모넬라균을 감소 또는 제거하는 방법 {METHODS OF REDUCING OR ELIMINATING SALMONELLA IN REPTILES AND/OR THEIR EGGS}
본 발명은 파충류 및/또는 파충류 알에서 살모넬라균을 감소 또는 제거하는 방법에 관한 것이다. 더 구체적으로, 본 발명은 파충류 및/또는 파충류 알에서 살모넬라균을 감소 또는 제거함에 있어서, 알킬기 각각이 탄소수 1 내지 약 6 범위의 알킬기로부터 독립적으로 선택되는 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인을 이용하는 방법에 관한 것이다.
파충류는 전형적으로 살모넬라균의 무증상 보균체로서, 살모넬라균이 파충류의 장, 예컨대, 소장, 결장, 맹장, 및/또는 배설물에 흔히 존재한다는 것은 익히 인식되어 있다. 파충류 보균체들로부터의 살모넬라균의 유포는 동물 및 인간의 건강에 실질적인 위해가 되며, 따라서, 미국 식품의약국 ("FDA") 은 1974 년에 거북 유생의 자국내 판매를 금지하였다.
그러나, FDA 의 금지는 유럽 및 아시아 시장 등의 해외 시장에서의 애완동물 등으로서의 판매를 위한 이들 거북의 수출을 제한하는 것은 아니었다. 사실상, 이러한 수출은 루이지애나주에서 호황 산업을 창출하였다. 현재, 루이지애나주 거북 양식 산업은 56 개의 허가받은 상업적 거북 농장으로 이루어져 있으며, 이들 농장은 루이지애나주 농림부로부터의 면허를 등록 및 취득해야 한다. 루이지애나주 거북 양식 산업은 애완동물 시장에서의 판매를 위해 미국으로부터 수출된 거북 유생의 90% 초과를 차지한다.
호황 수출 사업임에도 불구하고, 거북의 미국내 판매가 여전히 요구되고 있다. 자국내 시장 개방 노력으로, 거북 내의 살모넬라균 문제가 광범위하게 연구되었고, 현재도 여전히 연구되고 있는데, 그 결과 살모넬라균이 새끼 거북에 만연하는 주요 수단이 거북 알이라는 발견에 이르게 되었다. 따라서, 지난 20 여년 동안, 거북 알에서 살모넬라균을 박멸하기 위한 시도로 항생제인 황산 겐타마이신이 사용되었는데, 위생처리된 알을 진공 상태에서 황산 겐타마이신 조에서 처리하는 것이다. 그러나, 루이지애나주 등에서의 법령 및 규정은 동물을 교역하기에 앞서 거북 알을 무(無) 살모넬라균 처리하고 그로부터 생성되는 유생에 대해서는 FDA 승인 연구소로부터 무(無) 살모넬라균 인증을 받을 것을 요구하고 있는데, 상기 황산 겐타마이신 위생 가공은 이러한 보장을 제공할 수 없다.
따라서, 거북에서 살모넬라균을 제거 또는 이의 성장을 감소시키는 많은 부가적인 처리가 제안되었다. 제안된 처리들 중 일부는, 그 자체로서 문제를 야기하는 항생제의 사용을 수반하였다. 예를 들어, 상기 세균이 거북 알 등의 처리시에 사용된 항생제에 내성이 있게 된 경우 상기 거북을 만지는 어린이들은 위험에 처할 수 있다. 또 다른 이들은 파충류에서 살모넬라균을 제거하거나 또는 이의 성장을 감소시키려는 시도에서 파충류에 생균제 (probiotics) 를 공급하는 것을 제안하였다. 예를 들어, 미국 특허 제 5,879,719 호 참조.
그러나, 상기 처리들 중 어떤 것도 미국내 거북 판매 금지를 번복하는데 효과적이지 못하였으며, 거북 양식 산업계는 상기 금지를 해제하고 잠재적으로 실익이 있는 자국내 애완동물 시장을 되찾기 위해 여전히 방안을 강구중이다. FDA 는 그렇게 되기 위해서는, 생성물에서 겐타마이신-내성 세균이 출현할 수 있으므로 상기 업계가 일차적인 목표로 황산 겐타마이신 대신 항생제가 아닌 항균제를 사용할 수 있다는 자료를 제시하여야 한다고 언급하였다. 나아가, FDA 는 상기 금지를 해제할 수 있기 전에 그들이 느끼는 하기와 같은 추가적인 걱정들이 해소되어야 한다고 덧붙였다; 1) 거북이 가정 환경 내에서 "재감염"되지 않는다는 보장 제시, 및 2) 세균이 알 처리에 사용되는 항균제에 대해 내성이 생기지 않는 증거 제시.
따라서, 파충류 및/또는 파충류 알에서 살모넬라균을 감소 또는 제거하는 비-항생제 방법에 대한 필요가 존재한다.
발명의 요약
본 발명은 하나 이상의 파충류 알을 알킬기 각각이 탄소수 1 내지 약 6 범위의 알킬기로부터 독립적으로 선택되는 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인을 함유하는 살균 수용액에 접촉시키는 것을 포함하는, 파충류 알에서 살모넬라균을 감소 또는 제거하는 방법에 관한 것이다.
본 발명은 또한 하나 이상의 파충류를 알킬기 각각이 탄소수 1 내지 약 6 범위의 알킬기로부터 독립적으로 선택되는 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인을 함유하는 살균 수용액에 접촉시키는 것을 포함하는, 파충류에서 살모넬라균을 감소 또는 제거하는 방법에 관한 것이다.
본 발명은 또한, 하나 이상의 파충류에 하기를 투여하는 것을 포함하는, 파충류에서 살모넬라균을 감소 또는 제거하는 방법에 관한 것이다: i) 알킬기 각각이 탄소수 1 내지 약 6 범위의 알킬기로부터 독립적으로 선택되는 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인, 또는 (ii) 알킬기 각각이 탄소수 1 내지 약 6 범위의 알킬기로부터 독립적으로 선택되는 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인을 함유하는 살균 수용액, 또는 (iii) (i) 및 (ii) 둘 다.
본 발명은 또한, 하나 이상의 파충류를 a) 차아염소산나트륨 용액 및 b) i) 알킬기 각각이 탄소수 1 내지 약 6 범위의 알킬기로부터 독립적으로 선택되는 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인, 또는 (ii) 알킬기 각각이 탄소수 1 내지 약 6 범위의 알킬기로부터 독립적으로 선택되는 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인을 함유하는 살균 수용액, 또는 (iii) (i) 및 (ii) 둘 다에 1 회 이상 접촉시키는 것을 포함하고, a) 및 b) 는 임의 순서로 수행될 수 있는, 파충류에서 살모넬라균을 감소 또는 제거하는 방법에 관한 것이다.
본 발명은 또한, 하나 이상의 파충류 알을 a) 차아염소산나트륨 용액 및 b) i) 알킬기 각각이 탄소수 1 내지 약 6 범위의 알킬기로부터 독립적으로 선택되는 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인, 또는 (ii) 알킬기 각각이 탄소수 1 내지 약 6 범위의 알킬기로부터 독립적으로 선택되는 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인을 함유하는 살균 수용액, 또는 (iii) (i) 및 (ii) 둘 다에 1 회 이상 접촉시키는 것을 포함하고, a) 및 b) 는 임의의 순서로 수행될 수 있는, 파충류 알로부터 살모넬라균을 감소 또는 제거하는 방법에 관한 것이다.
발명의 상세한 설명
닭의 가공에서 살모넬라균의 억제에 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인을 사용하는 것은 익히 공지되어 있다. 예를 들어, 미국 특허 제 6,908,636 호 및 6,919,364 호; 미국 특허 출원 제 10/313,243 호, 10/313,245 호, 11/103,703 호, 11/180,054 호, 10/603,132 호, 및 10/603,130 호; 및 PCT 출원 번호 US04/14762, US04/43732, 및 US04/43381 참조. 그러나, 지금까지, 파충류 및/또는 이들의 알에서 살모넬라균의 억제에 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인을 사용하는 것이 제안된 적은 없다. 본 발명자들은 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인 및/또는 이를 함유하는 수용액을 사용하여 파충류 및/또는 파충류 알에서 살모넬라균을 억제, 또는 실질적으로 제거할 수 있다는 것을 예기치 못하게 발견하였다.
본 발명에 의한 처리에 적합한 파충류의 비제한적인 예로서는 거북, 악어, 도마뱀, 뱀 및 투아타라 (tuatara) 가 있다. 본 발명의 처리에 적합한 파충류 알의 비제한적인 예로서는 거북, 악어, 도마뱀, 뱀 및 투아타라의 알이 있다. 본 발명의 방법에 의해 처리되는 파충류는 거북일 수 있고, 본 방법에 의해 처리되는 파충류 알은 따라서 거북 알이다.
본 발명의 실시에서, 하나 이상의 파충류 및/또는 하나 이상의 파충류 알을 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인을 함유하는 수용액에 접촉시키는데, 즉, 사용되는 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인은 수용성일 수 있다. 사용에 적합한 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인은 알킬기들이, 독립적으로, 각각 1 내지 약 6 개, 또는 1 내지 4 개 범위의 탄소 원자를 포함하는 것들이다. 상기 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인은 두 할로겐 원자가 모두 브롬에서 선택되는 것일 수 있고, 또는 상기 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인은 할로겐 원자 중 하나가 염소이고 다른 하나는 브롬 또는 염소인 것일 수 있다. 이러한 유형의 적당한 화합물로는, 예를 들어, 하기와 같은 화합물이 있다: 1,3-디브로모-5,5-디메틸히단토인, 1,3-디클로로-5,5-디메틸히단토인, 1,3-디클로로-5,5-디에틸히단토인, 1,3-디클로로-5,5-디-n-부틸히단토인, 1,3-디클로로-5-에틸-5-메틸히단토인, N,N'-브로모클로로-5,5-디메틸히단토인, N,N'-브로모클로로-5-에틸-5-메틸히단토인, N,N'-브로모클로로-5-프로필-5-메틸히단토인, N,N'-브로모클로로-5-이소프로필-5-메틸히단토인, N,N'-브로모클로로-5-부틸-5-메틸히단토인, N,N'-브로모클로로-5-이소부틸-5-메틸히단토인, N,N'-브로모클로로-5-sec-부틸-5-메틸히단토인, N,N'-브로모클로로-5-tert-부틸-5-메틸히단토인, N,N'-브로모클로로-5,5-디에틸히단토인, 및 전술한 것 중 임의의 둘 이상의 혼합물. N,N'-브로모클로로-5,5-디메틸히단토인은 Chemtura Corporation 로부터, BROMICIDE 살생물제 (biocide) 라는 거래명으로 시중에서 구입가능하다. 또 다른 적당한 브로모클로로히단토인 혼합물은 주로 N,N'-브로모클로로-5,5-디메틸히단토인과 미량의 중량비의 1,3-디클로로-5-에틸-5-메틸히단토인으로 구성되어 있다. 상기 후자 유형의 혼합물은 Lonza Corporation 으로부터, DANTOBROM 살생물제라는 거래명으로 시중에서 구입가능하다.
본 발명의 실시에서 전술한 N,N'-브로모클로로-5,5-디알킬히단토인 중 둘 이상의 혼합물을 사용할 때, 상기 혼합물의 개별 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인들은 서로에 대해 임의의 비율로 존재할 수 있음을 유의하여야 한다. 또한, 예를 들어, N,N'-브로모클로로-5,5-디메틸히단토인과 관련하여 N,N'라는 표기는 상기 화합물이 (1) 1-브로모-3-클로로-5,5-디메틸히단토인, 또는 (2) 1-클로로-3-브로모-5,5-디메틸히단토인, 또는 (3) 1-브로모-3-클로로-5,5-디메틸히단토인 및 1-클로로-3-브로모-5,5-디메틸히단토인의 혼합물일 수 있다는 것을 의미함은 자명할 것이다. 또한, 일부 1,3-디클로로-5,5-디메틸히단토인 및 1,3-디브로모-5,5-디메틸히단토인이 (1), (2) 또는 (3) 과 부가 혼합되어 존재할 수 있다는 것도 생각할 수 있다.
본 발명의 실시에서 사용되는 적어도 하나의, 일부 경우에서는 단 하나의, N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인이 디브로모 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인인 경우, 상기 N,N-디브로모-5,5-디알킬히단토인은, 알킬기 중 하나가 메틸기이고 나머지 하나의 알킬기는 탄소수가 1 내지 약 6 범위, 또는 1 내지 4 범위인 1,3-디브로모-5,5-디알킬히단토인이다. 즉, N,N-디브로모-5,5-디알킬히단토인은 1,3-디브로모-5,5-디메틸히단토인, 1,3-디브로모-5-에틸-5-메틸히단토인, 1,3-디브로모-5-n-프로필-5-메틸히단토인, 1,3-디브로모-5-이소프로필-5-메틸히단토인, 1,3-디브로모-5-n-부틸-5-메틸히단토인, 1,3-디브로모-5-이소부틸-5-메틸히단토인, 1,3-디브로모-5-sec-부틸-5-메틸히단토인, 1,3-디브로모-5-tert-부틸-5-메틸히단토인, 및 이들 중 임의의 둘 이상의 혼합물을 포함할 수 있다. 이들 중, N,N-디브로모-5,5-디알킬히단토인, 1,3-디브로모-5-이소부틸-5-메틸히단토인, 1,3-디브로모-5-에틸-5-메틸히단토인, 및 1,3-디브로모-5-n-프로필-5-메틸히단토인이 가장 비용 효율적이다. 본 발명에 따라 사용가능한 전술한 N,N-디브로모-5,5-디알킬히단토인의 혼합물 중, 1,3-디브로모-5,5-디메틸히단토인이 성분들 중 하나로 사용가능한데, 예컨대, 1,3-디브로모-5,5-디메틸히단토인 및 1,3-디브로모-5-에틸-5-메틸히단토인의 혼합물로서이다. 본 발명에서, N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인 중 적어도 하나는 적어도 1,3-디브로모-5,5-디메틸히단토인이 적어도 하나의 다른 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인, 예컨대, 1,3-디브로모-5-에틸-5-메틸히단토인과 조합된 혼합물일 수 있다.
본원에서 사용되는 적어도 하나의, 일부 경우에서는 단 하나의, N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인은, 알킬기 중 하나가 메틸기이고 나머지 하나는 탄소수 1 내지 약 6, 또는 1 내지 4 범위의 알킬기인 수용성 1,3-디브로모-5,5-디알킬히단토인, 예컨대, 1,3-디브로모-5,5-디메틸히단토인일 수 있다. 상기 화합물은 시중에서 ALBROM 100T 살생물제 및 ALBROM 100PC 살생물제라는 거래명으로 정제 또는 과립 형태로 구입가능한데, 둘 다 Albemarle Corporation 으로부터 시중에서 구입가능하다.
본 발명의 실시에서 전술한 1,3-디브로모-5,5-디알킬히단토인 중 둘 이상의 혼합물이 사용되는 경우, 상기 혼합물의 개개 N,N-디브로모-5,5-디알킬히단토인은 서로에 대해 임의의 비율로 존재할 수 있다.
본 발명의 실시에서 상기 적어도 하나의, 때로 단 하나의, N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인은 수성 매질 중에서 가용화되어 살균 수용액을 형성한다. 상기 수성 매질은 물이거나, 또는 물을 함유한 또는 함유하지 않은 독성이 없는, 무해한, 적당한 수용성 유기 용매, 예컨대 아세토니트릴일 수 있다. 수용성 유기 용매를 사용하는 경우, 상기 파충류 및/또는 파충류 알을 상기 살균 수용액에 접촉시킨 후 상기 용매로부터 잔류물을 제거하기 위해 정수 (clean water) 로 세척할 수 있다.
본 발명의 실시에서 사용되는 살균 수용액은 상기 살균 수용액의 성분들을 임의의 순서로 및 공지된 임의의 방법으로 배합, 혼합하는 등에 의해 형성할 수 있는데, 이들을 배합하는 순서는 본 발명에서 중요하지 않으며, 상기 수성 매질 중에 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인을 실질적으로 완전히 가용화할 수 있는 임의의 방법을 사용할 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용되는 살균 수용액은 많은 경우에 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인 자체 (즉, 희석되지 않은 형태의 것) 를 물에 첨가하여 형성할 수 있다. 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인과 물을 함유하는 농축 용액을 형성할 수 있고, 그 후, 살균 수용액이 필요한 경우, 상기 농축 용액에 추가의 물을 첨가하여 살균 수용액을 형성할 수 있다. 상기 살균 수용액의 제조에 수용성 유기 용매를 사용할 경우, 상기 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인을 상기 유기 용매 내로 직접 가용화할 수 있다. 유기 용매 및 물의 조합을 사용할 경우, 상기 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인을 물에 가용화한 후 유기 용매를 도입할 수 있고, 상기 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인을 먼저 유기 용매에 가용화한 후 물을 도입할 수도 있고, 상기 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인을 유기 용매 등의 미리 형성한 혼합물에 가용화할 수도 있다.
상기 살균 수용액 중의 상기 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인의 농도는 사용되는 특정 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인(들), 선행 살균 처리의 성질 및 빈도, 존재하는 살모넬라균의 유형 및 본질, 상기 살모넬라균에 이용가능한 영양분의 양 및 유형, 만약 있다면 살균 처리와 함께 행해지는 정화 작용의 성질 및 정도, 처리되는 살모넬라균의 표면 또는 유전자좌 등과 같은 다양한 요인에 따라 다양할 것이다. 어떤 경우에도, 상기 살균 수용액의 살균상 유효한 양을 파충류 및/또는 파충류 알에 적용 또는 접촉시킬 것이다.
전형적으로 상기 살균 수용액은 살균상 유효한 양의 적어도 하나의, 때로 단 하나의, N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인을 함유할 것인데, 이는 상기 살균 수용액이 전형적으로 약 2 내지 약 1000 ppm (wt/wt) 범위, 또는 약 2 내지 약 500 ppm (wt/wt) 범위, 또는 약 25 내지 약 250 ppm (wt/wt) 범위의 활성 할로겐 농도를 가질 것을 의미하며, 이 때 활성 할로겐은 미국 특허 제 6,908,636 호에 기재된 통상의 DPD 시험 절차를 사용하여 결정될 수 있다. 상기 용액 중의 실제 활성 할로겐이 활성 염소로 이루어진 경우, 사용되는 희석 용액의 농도는 전술한 범위 중 최소치보다 적어도 2 내지 3 배 더 클 수 있다. 본 발명에 따라 사용되는 1,3-디브로모-5,5-디알킬히단토인의 경우, 통상의 상황에서 사용하기에 특히 유용한 범위는 약 50 내지 약 150 ppm (wt/wt) 범위의 활성 브롬이다. 파충류 및/또는 파충류 알을 적어도 하나의 1,3-디브로모-5,5-디알킬히단토인으로부터 형성된 수용액에 접촉시키는 경우, 상기 파충류 알의 "껍질" 또는 상기 파충류의 가죽 또는 껍데기를 유의미하게 또는 감지가능할 정도로 표백하지 않는 살균상 유효한 양의 활성 브롬을 함유한 용액을 사용하는 것이 유용하다. 이러한 양은 전형적으로 상기 DPD 시험 절차에 의해 결정가능한 바 활성 브롬 약 0.5 내지 약 30 ppm (wt/wt) 범위 또는 약 5 내지 약 25 ppm (wt/wt) 범위 내이다. 필요하거나 바람직한 것으로 간주되는 경우에는 언제나 전술한 범위를 이탈할 수 있음은 자명할 것이며, 그러한 이탈은 본 발명의 사상 및 범위 내에 속한다. 이에 따라, 상기 살균 수용액의 특정 용도에 좌우되어, 상기 살균 수용액 중의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인의 농도는 약 2 ppm 정도의 적은 양의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인에서부터, 상기와 같은 살균 수용액이 사용되는 온도에서, 사용되는 특정 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인의 최대 수용해도 정도의 높은 양까지로 확대될 수 있다.
상기 할로겐 농도는 상기 DPD 방법에 따라 측정되지만, 활성 염소이건, 활성 브롬이건 또는 둘 다이건 간에 활성 할로겐 함량을 결정함에 있어서 사용가능한 2 가지 상이한 유형의 절차가 존재한다는 것을 유의하여야 한다. 약 500 ppm (wt/wt) 정도 또는 그 이상의 활성 브롬 또는 약 1100 ppm 초과의 활성 염소 근처의 농도를 측정함에 있어서는, 녹말-요오드 적정이 유용한 절차인데, 이 방법은 미국 특허 제 6,908,636 호에 기재되어 있다. 한편, 농도가 이들 부근 수준 미만인 경우에는, 상기 통상적인 DPD 시험 절차가 더욱 적합한데, 그 이유는 당해 시험이 매우 낮은 활성 할로겐 농도, 예컨대, 0 내지 약 11-12 ppm (wt/wt) 범위의 활성 염소 농도 또는 0 내지 약 5 ppm (wt/wt) 범위의 활성 브롬 농도를 측정하도록 고안되어 있기 때문이다. 실제로, 활성 염소의 실제 농도가 약 11-12 ppm 내지 약 1100 ppm (wt/wt) 인 경우, 또는 활성 브롬의 실제 농도가 약 5 ppm 내지 약 100 ppm (wt/wt) 인 경우, 상기 DPD 분석 전에 시험 시료를 전형적으로는 순수(純水)로 희석하여 실제 농도를 활성 염소의 경우 약 4 내지 약 11-12 ppm 범위 및 활성 브롬의 경우 약 2 내지 약 5 ppm 범위가 되도록 감소시킨다. 따라서 사용되는 절차 사이에 중요한 엄격한 농도 경계선이 존재하지 않지만, 상기 제시된 근사치들은 실제적인 대략의 경계선을 나타낸다는 것을 알 수 있는데, 그 이유는 DPD 시험 절차를 사용할 경우 더 진한 용액의 희석을 위한 물의 양은 초기 활성 할로겐 농도 증가에 따라 증가하며, 더 진한 용액 분석시 그러한 대량의 희석은 녹말-요오드 적정을 사용함으로써 용이하게 회피할 수 있다. 요컨대, 적당히 묽은 용액으로는 DPD 시험 절차를 사용할 것이 권장되며, 더 진한 용액으로는 녹말-요오드 적정을 사용할 것이 권장된다.
파충류 및/또는 파충류 알은 당업계에 공지된 임의의 수단을 이용하여 살균 수용액과 접촉시킬 수 있다. 적당한 수단의 비제한적인 예로서는, 파충류 및/또는 파충류 알을 살균 수용액이 도포된 타월로 닦는 것, 파충류 및/또는 파충류 알을 살균 수용액에 담그는 것, 파충류 및/또는 파충류 알에 살균 수용액을 분무하는 것 등이 있다. 파충류 알을 살균 수용액에 침지시킬 수 있다.
파충류 및/또는 파충류 알을 살균 수용액에 접촉시키기 전에 먼저 차아염소산나트륨 용액에 1 회 이상 접촉시킬 수 있다. 이와 같은 차아염소산나트륨 용액은 파충류 알에서 살모넬라균을 처리함에 있어서 흔히 사용되기 때문에, 상기 용액 중의 차아염소산나트륨의 농도는 당업계의 통상의 지식을 가진 자에 의해 용이하게 선택된다.
본 발명은 하나 이상의 파충류에 하기를 투여하는 방법에 관한 것이다: (i) 알킬기 각각이 탄소수 1 내지 약 6 범위, 또는 1 내지 4 범위의 알킬기로부터 독립적으로 선택되는 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인, 또는 (ii) 알킬기 각각이 탄소수 1 내지 약 6 범위, 또는 1 내지 4 범위의 알킬기로부터 독립적으로 선택되는 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인을 함유하는 살균 수용액, 또는 (iii) (i) 및 (ii) 둘 다. 파충류에 (i), (ii), 또는 (iii) 을 투여하는 것은 미처리 파충류와 비교하여 처리된 파충류에서 살모넬라균 집락화 또는 감염을 실질적으로 억제, 저해 또는 제거하기 위한 것이다. 살균 수용액을 상기 파충류에 투여할 수 있다.
살모넬라균의 억제, 저해, 감소 및/또는 제거에 효과적인 살균 수용액의 전형적인 양은, 예를 들어, 파충류의 종류, 상기 파충류의 체중 및/또는 연령 등에 기초하여 다양할 수 있다. 그러나, 예를 들어, 1일당 약 1/10 내지 약 10 티스푼의 살균 수용액을 파충류에 투여할 수 있다.
살균 수용액은 파충류에 강제 영양, 또는 파충류의 소화기계, 위, 및/또는 장관 내로 도입가능한 임의의 기타 수단을 통해 1 회분량 이상 투여가능하다. N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인을 파충류 정상 음식물 또는 물과 혼합할 수 있고 또는 살균 수용액을 파충류 음식물에 적용할 수 있다. 주어진 파충류에 전달할 투여량은 파충류에 투여되는 살균 수용액과 음식물의 총 중량을 기준으로 약 10 중량% 내지 약 50 중량%로 다양할 수 있다.
본 발명의 방법은 여러 가지 이점을 갖는다. 예를 들어, 1,3-디브로모-5,5-디메틸히단토인 (DBDMH) 은 물에 첨가시 자기-활성화되는 건조 화합물이다. 두 브롬은 모두 방출되어 차아브롬산 (hypobromous acid) 및 디메틸히단토인 (비활성) 을 형성한다. 브롬은 높은 pH (예컨대, 7.5 이상) 에서 염소보다 더 우수한 살생물제이다. 상기 살생물제 투여량은 0.5 내지 2.0 ppm 유리 브롬이다. 브롬은 염소보다 휘발성이 약하여, 증발 손실이 덜하다. 브롬-기재 살생물제는 암모니아 오염 물질 (단백질 등) 을 함유한 물에서 더욱 효과적이다.
실험 배경
하기 실험은 본 발명의 이점을 증명하기 위해 수행되었다. 이의 목적은 차아염소산염 표백제 및, 본 발명에 따른, 특정 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인, 즉, 1,3-디브로모-5,5-디메틸히단토인 (DBDMH) 으로 세척한 알로써 살모넬라균 살상 유효성을 비교하는 것이었다. 하기를 충족하는 DBDMH 처리의 농도 및 시간을 결정하기 위한 실험을 수행하였다: (A.) 거북 알의 살모넬라균의 효과적 살상, 및 (B.) 통상 이용되는 차아염소산염 표백제 시스템과 대조하여 만족할만한 거북 알-부화율 제공.
현재, 거북 농장주들 사이의 통상적인 관행은 거북 알을 염소 [차아염소산염] 소독제인 Clorox 로 세척하는 것이다. 그러나, 차아염소산염의 사용은 거북 알 부화율에 부정적인 영향을 미친다는 것이 거북 양식 업계에서 일반적으로 받아들여지고 있다. 반면, 본 발명의 방법의 사용은 상기 알의 부화율에 부정적 인 영향을 미치는 것으로 보이지 않는다.
살모넬라균 검출 절차
10ml 의 균질액을 추가 40 ml 의 새로운 락토오스와 함께 24 hr 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 상기 사전-증균 (pre-enrichment) 플라스크에서 1 ml 를 하기 증균 튜브들에 담아 시료추출하였다: 7 ml Tetrationate [TT] 브로스 (broth) 가 담긴 튜브 2 개 및 7 ml 의 Selenite Cysteine [SC] 브로스가 담긴 튜브 2 개. SC 를 24 hr 동안 인큐베이션하고, TT 를 48 hr 동안 인큐베이션한 후, 각각 살모넬라균 동정, 비스무트 설파이트 및 XLT4 를 위한 선택적 한천 배지 상에 스트리킹(streaking)하였다. 또한, 이들 증균 브로스의 1 ml 시료 2 개를 에펜도르프 튜브에서 펠릿화하였다. 펠릿화된 세포를 용해시키고, 살모넬라균의 InvA 유전자가 있는지 PCR 분석으로 DNA 를 스크리닝하였다.
대조 연구 - 소독제 무처리
대조 평가를 위해 5 개의 거북 농장으로부터 거북 알을 제공받았다. 상기 살모넬라균 검정으로부터의 결과 (대조 알 균질액 시료당 총 세균수로 표시) 는 하기와 같았다:
농장 1: 107
농장 2: 106
농장 3: 106
농장 4: 105
농장 5: 107
유사한 절차를 이용하여 하기 데이터를 수득하였는데, 이 때 다양한 소독제 처리가 이용되었다. 결과는 대조 알 균질액 시료당 총 세균수로 표시되어 있다.
대조 연구 - 염소 (차아염소산염) 소독 처리
농장 ID 세균수 부화율
농장 1 104 N/A (해당 없음)
농장 2 0 N/A
농장 3 105 N/A
농장 4 103 N/A
농장 5 nd* N/A
(*nd=측정되지 않음)
대조 연구 - 염소 (차아염소산염) 소독 처리 20 분 후 물로 헹굼
농장 ID 세균수 부화율
농장 1 103 48%
농장 2 0 64%
농장 3 0 57%
농장 4 0 62%
농장 5 105 82%
DBDMH 활성 연구 A - 브롬 (DBDMH) 소독 처리 (10 분간 100ppm)
농장 ID 세균수 부화율
농장 1 103 69%
농장 2 0 71%
농장 3 0 57%
농장 4 0 35%
농장 5 105 76%
DBDMH 활성 연구 A - 브롬 (DBDMH) 소독 처리 (20 분간 100ppm)
농장 ID 세균수 부화율
농장 1 0 92%
농장 2 102 58%
농장 3 0 67%
농장 4 0 65%
농장 5 104 0*
(*알들은 파리의 침입으로 부화하지 못했다)
DBDMH 활성 연구 A - 브롬 (DBDMH) 소독 처리 (10 분간 500ppm)
농장 ID 세균수 부화율
농장 1 0 54%
농장 2 103 58%
농장 3 0 89%
농장 4 0 54%
농장 5 104 65%
DBDMH 활성 연구 A - 브롬 (DBDMH) 소독 처리 (20 분간 500ppm)
농장 ID 세균수 부화율
농장 1 102 87%
농장 2 0 56%
농장 3 0 63%
농장 4 0 63%
농장 5 105 84%
상기 상세한 설명은 본 발명의 여러 구현예에 관한 것이다. 당업자는 본 발명의 사상을 실시하기 위해 동등한 효과가 있는 다른 수단이 고안될 수 있음을 인지할 것이다. 또한 본 발명에서는 본원에 논의된 모든 범위가 임의의 더 적은 양에서부터 임의의 더 많은 양까지의 범위를 포함하는 것이 고려된다는 것도 유의해야 한다.

Claims (26)

  1. 하나 이상의 파충류 및/또는 하나 이상의 파충류 알을 알킬기 각각이 탄소수 1 내지 약 6 범위의 알킬기로부터 독립적으로 선택되는 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인을 함유하는 살균 수용액에 접촉시키는 것을 포함하는, 파충류 및/또는 파충류 알에서 살모넬라균을 감소 또는 제거하는 방법.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 살균 용액이 약 2 내지 약 1000 ppm (wt/wt) 활성 할로겐 범위의 활성 할로겐 농도를 갖는 방법.
  3. 제 2 항에 있어서, 상기 파충류가 거북, 악어, 도마뱀, 뱀, 및/또는 투아타라로부터 선택되고, 상기 파충류 알이 거북, 악어, 도마뱀, 뱀, 및/또는 투아타라 알로부터 선택되는 방법.
  4. 제 1 항에 있어서, 상기 파충류 알이 거북 알이고, 상기 파충류가 거북인 방법.
  5. 제 3 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인이 수용성인 방법.
  6. 제 5 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인이 그의 할로겐 원자 중 하나가 염소이고 나머지 하나가 브롬 또는 염소인 것으로부터 선택되는 방법.
  7. 제 6 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인의 알킬기들이 탄소수 1 내지 4 범위의 알킬기로부터 독립적으로 선택되는 방법.
  8. 제 6 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인이 하기로부터 선택되는 방법: 1,3-디클로로-5,5-디메틸히단토인, 1,3-디클로로-5,5-디에틸히단토인, 1,3-디클로로-5,5-디-n-부틸히단토인, 1,3-디클로로-5-에틸-5-메틸히단토인, N,N'-브로모클로로-5,5-디메틸히단토인, N,N'-브로모클로로-5-에틸-5-메틸히단토인, N,N'-브로모클로로-5-프로필-5-메틸히단토인, N,N'-브로모클로로-5-이소프로필-5-메틸히단토인, N,N'-브로모클로로-5-부틸-5-메틸히단토인, N,N'-브로모클로로-5-이소부틸-5-메틸히단토인, N,N'-브로모클로로-5-sec-부틸-5-메틸히단토인, N,N'-브로모클로로-5-tert-부틸-5-메틸히단토인, N,N'-브로모클로로-5,5-디에틸히단토인, 알킬기 중 하나가 메틸기이고 나머지 하나의 알킬기는 탄소수가 1 내지 6 범위인 1,3-디브로모-5,5-디알킬히단토인, 및 전술한 것 중 임의의 둘 이상의 혼합물.
  9. 제 5 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인이 알 킬기 중 하나가 메틸기이고 나머지 하나의 알킬기는 탄소수가 1 내지 6 범위인 1,3-디브로모-5,5-디알킬히단토인인 방법.
  10. 제 9 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인이 하기로부터 선택되는 방법: 1,3-디브로모-5,5-디메틸히단토인, 1,3-디브로모-5-에틸-5-메틸히단토인, 1,3-디브로모-5-n-프로필-5-메틸히단토인, 1,3-디브로모-5-이소프로필-5-메틸히단토인, 1,3-디브로모-5-n-부틸-5-메틸히단토인, 1,3-디브로모-5-이소부틸-5-메틸히단토인, 1,3-디브로모-5-sec-부틸-5-메틸히단토인, 1,3-디브로모-5-tert-부틸-5-메틸히단토인, 및 이들 중 임의의 둘 이상의 혼합물.
  11. 제 1 항에 있어서, 상기 살균 용액이 약 25 내지 약 250 ppm (wt/wt) 활성 할로겐 범위의 활성 할로겐 농도를 갖는 방법.
  12. 하나 이상의 파충류 및 또는 하나 이상의 파충류 알을 a) 차아염소산나트륨 용액 및 b) i) 알킬기 각각이 탄소수 1 내지 약 6 범위의 알킬기로부터 독립적으로 선택되는 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인, 또는 (ii) 알킬기 각각이 탄소수 1 내지 약 6 범위의 알킬기로부터 독립적으로 선택되는 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인을 함유하는 살균 수용액, 또는 (iii) (i) 및 (ii) 둘 다에 1 회 이상 접촉시키는 것을 포함하고, a) 및 b) 는 임의 순서로 수행될 수 있는, 파충류 및/또는 파충류 알에서 살모넬라균을 감소 또는 제거하는 방법.
  13. 제 12 항에 있어서, 상기 살균 용액이 DPD 시험 절차로 측정된 바 약 2 내지 약 1000 ppm (wt/wt) 활성 할로겐 범위의 활성 할로겐 농도를 갖는 방법.
  14. 제 13 항에 있어서, 상기 파충류가 거북, 악어, 도마뱀, 뱀, 및/또는 투아타라로부터 선택되고, 상기 파충류 알이 거북, 악어, 도마뱀, 뱀, 및/또는 투아타라 알로부터 선택되는 방법.
  15. 제 13 항에 있어서, 적합한 상기 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인은 그의 할로겐 원자 중 하나가 염소이고 나머지 하나는 브롬 또는 염소인 것, 또는 두 할로겐 원자가 모두 브롬인 것으로부터 선택되는 방법.
  16. 제 15 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인의 알킬기들이, 탄소수 1 내지 4 범위의 알킬기로부터 독립적으로 선택되는 방법.
  17. 제 15 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인이 알킬기 중 하나가 메틸기이고 나머지 하나의 알킬기는 탄소수가 1 내지 6 범위인 1,3-디브로모-5,5-디알킬히단토인인 방법.
  18. 제 17 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인이 적어도 하나의 다른 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인과 조합된 적어도 1,3-디브로모-5,5-디메틸히단토인의 혼합물인 방법.
  19. 제 17 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인이 1,3-디브로모-5,5-디메틸히단토인 및 1,3-디브로모-5-에틸-5-메틸히단토인의 혼합물인 방법.
  20. 제 14 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인이 1,3-디브로모-5,5-디메틸히단토인인 방법.
  21. 제 12 항에 있어서, 상기 살균 용액이 약 25 내지 약 250 ppm (wt/wt) 활성 할로겐 범위의 활성 할로겐 농도를 갖는 방법.
  22. 제 15 항에 있어서, 상기 살균 용액이 상기 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인을 수성 매질 중에 가용화함으로써 형성되는 방법.
  23. 제 22 항에 있어서, 상기 수성 매질이 물, 수용성 유기 용매, 또는 이들의 혼합물인 방법.
  24. 제 23 항에 있어서, 상기 수성 매질이 수용성 유기 용매 및 물과 수용성 유 기 용매의 혼합물로부터 선택되는 방법.
  25. 제 24 항에 있어서, 상기 파충류 및/또는 파충류 알이 살균 용액에 접촉 후 정수 (clean water) 로 세척되는 방법.
  26. 하나 이상의 파충류에 하기를 투여하는 것을 포함하는, 파충류에서 살모넬라균을 감소 또는 제거하는 방법: i) 알킬기 각각이 탄소수 1 내지 약 6 범위의 알킬기로부터 독립적으로 선택되는 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인, 또는 (ii) 알킬기 각각이 탄소수 1 내지 약 6 범위의 알킬기로부터 독립적으로 선택되는 적어도 하나의 N,N-디할로-5,5-디알킬히단토인을 함유하는 살균 수용액, 또는 (iii) (i) 및 (ii) 둘 다.
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