KR20080090457A

KR20080090457A - Ｃ-반응성 단백질 농도 저하용 피토스테롤

Info

Publication number: KR20080090457A
Application number: KR1020087018180A
Authority: KR
Inventors: 카롤린 무레; 에릭크 피. 레르첸펠드; 도날드 이. 스트리에겔; 이쉬왈랄 지알알; 스리데비 데바라즈
Original assignee: 더 코카콜라 컴파니; 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아
Priority date: 2005-12-23
Filing date: 2006-12-20
Publication date: 2008-10-08
Also published as: TW200800046A; RU2008128316A; CA2633993A1; US20070003600A1; BRPI0620417A2; AU2006330626A1; WO2007076387A1; JP2009521495A; AR058621A1; EP1962858A1

Abstract

본 발명은 C-반응성 단백질의 농도를 저하시킬 필요성이 있는 개체에게 1종 이상의 피토스테롤을 C-반응성 단백질의 농도를 저하시키는 양으로 투여하는 것을 포함하는 C-반응성 단백질의 농도를 저하시키는 방법에 관한 것이다.

Description

Ｃ-반응성 단백질 농도 저하용 피토스테롤 {PHYTOSTEROLS FOR USE IN REDUCING C-REACTIVE PROTEIN LEVELS}

이 출원은 2003년 6월 11일자로 출원된 미국 출원 제10/458,692호와 2003년 10월 24일자로 출원된 미국 출원 제10/691,581호의 일부 계속 출원으로서, 이들 출원의 이익을 주장하는 2005년 12월 23일자로 출원된 미국 출원 제11/315,206호에 대하여 우선권을 주장하며, 상기 출원들은 본 명세서에 참고로 포함되어 있다.

염증은 죽상 (粥狀) 동맥 경화증 (심장 혈관 질환)에 있어서 중요한 역할을 수행하고, 죽상 동맥 경화증, 즉 급성 관상 동맥 증후군에 대하여 지방 선조(脂肪線條)의 발달 단계 전체에 걸쳐 염증이 존재한다는 사실에 대한 증거가 제시되어 있다. 문헌 [R. Ross, Atherosclerosis : An Inflammatory Disease, 340 N. Engl. J. Med. 115-26 (199); P. Libby, Inflammation in Atherosclerosis, 420 Nature 868-74 (2002)] 참조. 그의 유병률을 고려하여 보면, 염증을 나타내는 신호는 예방, 진행 및 심지어 감시 목적에 있어서 중요한 단서를 제공할 수 있다. 다수의 연 구에 따르면, C-반응성 단백질 (CRP)은 혈액 중에 존재하는 염증의 표지이며 심장 혈관 질환을 평가하는 데 도움을 줄 수 있다.

CRP는 류마티스학, 즉 류마티스 관절염의 활성을 감시하는 데 오랫동안 사용되어 왔고, 최근에는 심장 혈관 질환에 대한 독립적인 표지로서 나타내지고 있다. 예컨대, 문헌 [Ishwarlal Jial et al., C- Reactive Protein : Risk Marker of Mediator in Atherothrombosis, 44 Hypertension 6-11 (2004)] 참조. 사실, 미국 심장 협회 (American Heart Association)와 질병 통제 및 예방 센터 (Centers for Disease Control and Prevention)는 CRP를 10%와 20% 사이의 프라밍햄 (Framingham) 위험도와 함께 심장 혈관 질환용 위험 표지로서 사용하도록 권장하는 성명을 발표하였다. 그들이 권장하는 바에 따르면, 1 ㎎/ℓ 미만의 CRP 농도는 저위험으로 간주되고, 1 내지 3 ㎎/ℓ의 농도는 평균적인 위험을 나타내며, 3 ㎎/ℓ를 초과하는 농도는 고위험으로 간주된다.

CRP는 단백질의 펜트락신 (pentraxin)류의 일종인데, 펜트락신은 5 중합 착물을 형성하는 것으로 알려져 있고, 다수의 리간드와 결합할 수 있는 특징이 있다. [Shrive, A.K., C- Reactive Protein and SAP - like Pentraxin are Both Present in Limulus Polyphemus Haemolympa : Crystal Structure of Limulus SAP, 290 J. Mol. Bio. 997-1008 (1999)]. 예를 들면, CRP의 환상(環相) 5 중합 구조체로서는 분자량이 약 118000 Da인 중심 세공 주변에 배열된 5개의 비공유 결합 프로토머 (protomer)들을 들 수 있다. [Thompson D. et al., The Physiological Structure of Human C- Reactive Protein and Its Complex with Phosphcholine, 7 Structure 169-77 (1999).] CRP는 당화(糖化)되지 않은 상태로 염색체 1에 배치된다. [Senthil Kumar et al., Effect of C- Reactive Protein on Vascular Cells : Evidence for a Proinflammatory, Proatherogenic Role, 14 Current Opinion in Nephrology & Hypertension 33, 34 (2005)].

역사적인 연구에 따르면, CRP 생성은 간에서 일어나고, 간세포 중에서 인터류킨 (IL)-1에 의하여 상승 효과를 일으키면서 IL-6에 의하여 촉진되었다. [I. Kushner et al., Control of the Acute Phase Response : C- Reactive Protein Synthesis by Isolated Perfused Rabbit Livers, 96 J. Lab. Clinical Med. 1037-1045 (1980); I. Kushner et al., Control of the Acute Phase Response : Demonstration of C- Reactive Protein Synthesis and Secretion by Hepatocytes During Acute Inflammation in the Rabbit, 148 J. Ex. Med. 466-77 (1978)]. 그러나, 최근의 연구에 따르면, CRP 생성은 죽상 동맥 경화증 병터, 폐포 대식 세포, 신경 세포, 관모양 상피 세포 및 인간의 대동맥 내피 세포 등의 기타의 조직에서도 역시 관찰될 수 있다. [K. Yasojima et al., Generation of C- reactive Protein and Complement Components in Atherosclerotic Plaques, 158 Am. J. Pathol. 1039-51 (1989); S. Kobayashi, Interaction of Oxidative Stress and Inflammatory Response in Coronary Plaque Instability : Important Role of C-Reactive Protein, 23 Arterioscler Thromb. Vasc. Biol. 1398-1404 (2003); G.D. Reynolds and R.P. Vance, C- Reactive Protein Immunohistochemical Localization in Normal and Atherosclerotic Human Aortas, 111 Arch. Pathol. Lab. Med. 265- 69 (1987); Q. Dong and J.R. Wright, Expression of C- Reactive Protein by Alveolar Macrophages, 156 J. Immunol. 4815-20 (1996); K. Yasojima et al., Human Neurons Generate C- Reactive Protein and Amyloid P: Upregulation in Alzheimer's Disease, 887 Brain Res. 80-89 (2000); W.J. Jabs et al., The Kidney as a Second Site of Human C- Reactive Protein Formation in Vivo, 33 Eur. J. Immunol. 152-61; Senthil Kumar Venugopal et al., Macrophage Conditioned Medium Induces the Expression of C- Reactive Protein in Human Aortic Endothelial Cells, 166 American J. Pathology 1265-71 (2005)] CRP 생성이 지질 과산화, 감염 및 시토메갈로바이러스 (cytomegalovirus), 단순 헤르페스 바이러스 (herpes simplex virus), 폐렴 클라미디아 (Chlamydia pneumoniae) 및 헬리코박터 파일로리 (Helicobacter pylori) 등의 바이러스제에 의하여 촉발될 수 있다는 사실에 대한 자료도 역시 제시되어 있다.

CRP 생성이 촉발되는 경우, CRP가 단핵 세포/대식 세포, 내피 세포 및 민무늬 근육 세포에 작용한다는 사실에 대한 증거가 제시되어 있다. 이들 세포에 있어서, CRP는 매우 다양한 염증 촉진성 (proinflammatory) 분자의 분비를 자극한다. 이들 염증 촉진성 분자는 죽상 동맥 경화증의 다수의 단계에 걸쳐 존재하는 것으로 나타나 있다. [Isthwarlal Jialal et al., C- Reactive Protein : Risk Marker or Mediator in Atherothrombosis 44 Hypertension 6-11 (2004)] 사실, CRP는 심장 혈관 질환의 위험도 표지일 뿐만 아니라 죽종(粥腫) 생성 (atherogenesis)에 역할을 할 수도 있다는 자료가 제시되어 있다. 자료에 따르면, 내피 혈관 반응성은 CRP의 농도에 대하여 반비례 관계를 나타내고 있다. [S. Fichtlscherer et al., Elevated C- Reactive Protein Levels and Impaired Endothelial Vasoreactivity in Patients with Coronary Artery Disease, 102 Circulation 1000-1006 (2000); S.J. Cleland et al., Endothelial Dysfunction as a Possible Link Between C- Reactive Protein Levels and Cardiovascular Disease, 98 Clinical Science (London) 531-35 (2000); F. Tomai et al., Unstable Angina and Elevated C- Reactive Protein Levels Predict Enhanced Vasoreactivity of the Culprit Lesion, 104 Circulation 1471-76 (2001)]

이 때, 비만 개체에 있어서 체중 감소 등을 위한 치료와 어떠한 의약, 즉 3-하드록시-3-메틸글루타릴 코엔자임 A 환원 효소 억제제 (HMG-CoA 환원 효소 억제제), 예컨대, 스타틴, 퍼옥시좀 증식자-활성화 수용체-α 작용제 (피브레이트), 퍼옥시좀 증식자-활성화 수용체-α 작용제 (글리타존), 아스피린 및 고용량의 RRR-α 토코페롤은 고민감성 (hs)-CRP의 농도를 조절하는 데 사용될 수 있다. 그러나, 이들 각각의 치료는 잠재적인 한계와 단점이 있다.

예를 들면, 어떠한 형식의 약물 요법을 수반하는 스타틴 요법의 환자는 각 약물로부터의 부작용 및/또는 유해 사례의 위험, 즉 안전성에 대한 우려에 본질적으로 직면하고, 이들은 다른 사람들보다 일부의 사람들, 예컨대 노인들에 있어서 더욱 문제를 유발하는 잠재성이 있다. 그 밖에, 스타틴 요법은 종종 장기간이 소요되고, 이들의 장기간으로 인한 잠재적인 영향은 아직 분명하지 않을 수 있다. 스타틴 요법에 의하면, 근육 문제, 예컨대 가로무늬근 융해 (rhabdomyolysis)의 발병에 관한 우려가 강화되고 있다. 가로무늬근 융해는 신장에 치명적일 수 있는 심각한 근육 조직 파괴를 초래하고, 이는 결국 신장 기능 상실 또는 죽음에 이르게 할 수 있다. 최근에는, 겜피브로질 (gemfibrozil)과의 혼합 투여뿐만 아니라, 높은 투여량에 관련되어 있는 가로무늬근 융해의 발생 증가로 인하여 스타틴 세리바스타틴 (statin cerivastatin)이 시장에서 퇴출되었다. 스타틴 요법의 기타의 일반적인 부작용으로서는 인지 문제, 위장과 신경계 부작용 및 면역 부작용을 들 수 있다. 1 가지 이상의 이들 우려에 의하면, 상기 잠재적인 부작용 및 안정성의 고려 사항은 적어도 일부 경우에 있어서, 상기 요법의 혜택을 능가할 수 있다.

이들 치료의 대부분이 상당한 진전을 나타내고 있지만, CRP의 농도는 낮추면서 동시에 기존의 여러 가지 요법에 관련되어 있는 1 가지 이상의 부작용을 감소시킬 필요성이 여전히 남아있다. 본 발명의 발명자들은 죽상 동맥 경화증을 예방 및 경감시키는 방법을 연구하면서, 식물성 스테롤 및/또는 스타놀, 즉 피토스테롤이 C-반응성 단백질을 감소시키는 데 유용하다는 사실을 발견하였다.

식물성 스테롤은 식물성 오일 중에서 자연적으로 발생한다. 식물성 스타놀도 역시 자연적으로 발생하지만, 대응하는 식물성 스테롤의 수소 첨가 화합물이기도 하다. 1950년대 초반, 과학 문헌은 식물성 스테롤이 포유류에 있어서의 죽상 동맥 경화증 사례의 감소, 즉 남성에 있어서 혈청 콜레스테롤의 감소 및 죽상 동맥 경화성 심장 질환에 걸린 젊은 남성에 있어서의 혈청 콜레스테롤의 감소에 다소 효과를 나타낸다는 사실을 보고하였다. [Pollak, O.J., Successful Prevention of Experimental Hypercholesterolemia and Cholesterol Atherosclerosis in the Rabbit, 7 Circulation 696-701 (1953); Farquhar et al., The Effect of Beta Sitosterol on the Serum Lipids of Young Men with Arthrosclerosis Disease, 14 Circulation 77-82 (1956)] 식물성 스테롤 및 스타놀은 소장(小腸) 중에서 콜레스테롤이 흡수되는 것을 방지함으로써 콜레스테롤 저하 효과를 나타낸다고 알려져 있다. 예컨대, [Mattson, FH, Grundy, SM, & Crouse, JE, Optimizing the effect of plant sterols on cholesterol absorption in man, 35 Am. J. Clin. Nut. 697-700 (1982)] 참조. 기타의 과학 문헌은 식물성 스테롤 및 스타놀이 인간에 있어서 혈청 콜레스테롤 수치를 사실상 저하시키지만, 수중 용해도가 빈약하기 때문에 이들 식물성 스테롤 또는 스타놀을 함유하는 인간 및 동물의 소비용으로서 적절한 제품을 제조하는 것은 어렵다는 사실을 밝히고 있다.

일반적으로, 식물성 스테롤 및 스타놀은 이들의 소수성 특성 때문에 마가린과 기타의 소위 스프레드류 (spreads) 또는 이와 유사한 식품 제품에 사용되어 왔다. 양자가 모두 엘리 릴라이 (Eli Lilly)에게 양도되어 있는 미국 특허 제3,881,005호 및 제4,195,084호는 식물성 스테롤의 용해도를 증가시키기 위한 식물성 스테롤의 마쇄 또는 분쇄를 설명하고 있다. 엘리 릴라이는 한때 혈청 콜레스테롤을 약 9%까지 저하시키는 톨유로부터의 나중에는 대두유로부터의 스테롤 제제를 사이텔린 (Cytelline)이라는 상표명으로 시장에 내놓았었다. [Kuccodkar et al., Effects of Plant Sterols on Cholesterol Metabolism in Man, 23 Atherosclerosis 239-48] 그러나, 상기 제품은 광범위한 소비자의 인정을 받지는 못하였다.

불프손 (Vulfson) 등은 WO 00/41491에서 올레오마가린 제품, 드링크, 수프, 소스, 딥 (dip), 샐러드 드레싱, 마요네즈, 제과품, 빵, 케익, 비스켓, 아침 식사용 시리얼 및 요거트 종류의 제품 등의 식품 제품 또는 음료에 대한 보조제로서, 식물성 스테롤 및 리코펜 (lycopene) 등의 소수성 화합물을 개시하고 있다. 불프손 등은 식물성 스테롤 또는 리코펜을 상기 제품들에 결합시키는 데 있어서, 히드록실기와 카르복실기의 양자를 모두 포함하고 있는 상기 식품들이 스테롤 또는 리코펜의 표면과 상호 작용을 한다는 이론을 세웠다.

미국 특허 제6,572,876호도 역시 LDL-콜레스테롤과 총콜레스테롤의 혈중 농도를 저하시키고 죽상 동맥 경화증의 발달을 예방 또는 최소화하는 데 유용한 식물성 스테롤, 콩단백질 및 이소플라빈 (isoflavin)과 이들의 혼합물을 함유하는 조성물에 관련되어 있다. 식물성 스테롤 및/또는 스타놀은 혈청 콜레스테롤 농도에 강력한 영향을 주는 것으로 알려져 있으나, 식물성 스테롤 및/또는 스타놀은 CRP 농도에 효율적이라는 사실은 알려져 있지 않았다.

사실상, 문헌 [Steven E. Nissen et al., Statin Therapy, LDL Cholesterol , C-Reactive Protein and Coronary Artery Disease, 352 N. Engl. J. Med. 29-38 (2005)]에는, CRP 농도 및 LDL-콜레스테롤 농도의 변화는 스타틴 요법에 수반되는 플라크 (plaque) 퇴행의 독립적인 전조(前兆) 요인이라는 사실에 대한 자료가 제시되어 있다. 마찬가지로, 문헌 [Paul M. Ridker et al., C- Reactive Protein Levels and Outcomes After Statin Therapy, 352 N. Engl. J. Med. 20, 26 (2005)]에는 "CRP 농도는 LDL-콜레스테롤의 모든 농도에서 그리고 프라밍험 위험 카테고리의 모든 스펙트럼에 걸쳐서 독립적으로 제1의 관상 동맥 사례의 위험을 예측하고, CRP 농도는 활성 관상 동맥 증후군 환자에 있어서 예후 수치를 나타낸다"는 주장을 뒷받침하는 자료가 제시되어 있다. 따라서, LDL-콜레스테롤과 CRP간의 연합이 사라지는 대신에, CRP는 심장 혈관 질환에 대한 독립적은 표지로서 간주된다.

따라서, 본 발명은 C-반응성 단백질을 저하시킬 필요성이 있는 개체에게 1종 이상의 피토스테롤을 C-반응성 단백질 농도를 저하시키는 양으로 투여하는 것을 포함하는 C-반응성 단백질의 농도를 저하시키는 방법을 제안하고 있다.

따라서, 본 발명은 기타의 것들 중에서, C-반응성 단백질을 저하시킬 필요성이 있는 개체에게 1종 이상의 피토스테롤을 C-반응성 단백질 농도를 저하시키는 양으로 투여하는 것을 포함하는 C-반응성 단백질의 농도를 저하시키는 방법에 관한 것이다.

추가의 실시 상태에 있어서, 본 발명은 혈관 염증을 치료 또는 예방할 필요성이 있는 개체에게 1종 이상의 피토스테롤을 C-반응성 단백질의 농도를 저하시키는 양으로 투여하는 것을 포함하는 혈관 염증의 치료 또는 예방 방법에 관련이 있다.

본 발명의 또 다른 실시 상태는 C-반응성 단백질의 농도를 저하시킬 필요성이 있는 개체에게 C-반응성 단백질의 농도를 저하시키는 양의 1종 이상의 피토스테롤 및 수용성 물질로 이루어진 실질적으로 안정한 분산액을 함유하는 음료를 투여하는 것을 포함하는 C-반응성 단백질의 농도 저하 방법에 관한 것으로서, 여기서 상기 1종 이상의 피토스테롤은 식물성 스테롤 및 식물성 스타놀로부터 선택되고, 상기 실질적으로 안정한 분산액 중에서 분말감을 회피하기 위하여, 상기 1종 이상의 피토스테롤의 입도는 약 0.1 미크론 내지 약 30 미크론이고, 상기 1종 이상의 피토스테롤 입자의 대부분은 약 0.2 미크론 내지 약 10 미크론의 범위 내이고 종(鐘) 모양 곡선 분포를 따르는 것이다.

본 발명의 추가의 이점들은 후술하는 발명의 상세한 설명에서 일부 설명되게 되고 일부는 발명의 상세한 설명으로부터 자명하게 되며, 또는 본 발명을 실시함으로써 지득할 수 있다. 본 발명의 상기 이점들은 첨부되어 있는 특허 청구 범위 중에 특히 지적되어 있는 요소 및 조합에 의하여 구현 및 달성되게 된다.

전술한 일반적인 설명과 이하의 상세한 설명의 양자는 모두 단지 예시적이고 설명적일 뿐이며, 특허 청구 범위와 같이 본 발명을 한정하는 것은 아니라는 사실을 이해하여야 한다.

따라서, 본 발명은 C-반응성 단백질의 농도를 저하시킬 필요성이 있는 개체에게 1종 이상의 피토스테롤을 C-반응성 단백질 농도를 저하시키는 양으로 투여하는 것을 포함하는 C-반응성 단백질의 농도 저하 방법에 관련이 있다. 상기 1종 이상의 피토스테롤을 투여하기 위하여, 상기 1종 이상의 피토스테롤은 조성물의 구성 성분일 수 있다. 예를 들면, 조성물은 고체 또는 반고체의 식료품, 즉 기능성 식품, 또는 액체 제품, 예컨대 음료 등의 약학 및 소모성 식료품으로부터 선택되는 형태일 수 있다.

적어도 한 가지 실시 상태에 있어서, 상기 조성물은 영양 물질, 즉 개체가 매일 소비할 수 있는 소모성 제품 및/또는 영양제이다. 예를 들면, 영양 음료, 청량 음료, 과일 음료와 주스, 전해질 함유 음료, 푸딩, 구운 제품, 굽지 않은 제품, 샐러드 드레싱, 시리얼 제품, 조미료, 과자, 스낵 식품, 딥과 스프레드, 아이스크림, 냉동 조미료와 신상품, 요거트, 마가린과 유사한 스프레드 등의 유제품 및 시즈닝을 언급할 수 있다. 그 밖에, 이들 식품 및 음료의 무지방, 저지방 및 저칼로리 제품도 역시 본 발명에 의하여 고려된다.

추가의 예로서, 본 발명의 상기 1종 이상의 피토스테롤은 정제(錠劑), 주사, 또는 상기 1종 이상의 피토스테롤을 투여하는 숙련된 기술자에게 알려져 있는 임의의 기타 매체 등의 약학 조성물에 통합될 수 있다. 상기 약학 조성물은 이 약학 조성물이 즉시 방출, 변형 방출 및 지연 방출 특성으로부터 선택되는 방출 특성을 나타내도록 하는 이 기술 분야의 숙련자에게 알려져 있는 방법으로도 역시 제제될 수 있다.

그 밖에, 투여는 개체가 상기 1종 이상의 피토스테롤을 소화하도록 촉진하는 데 이바지하는 숙련된 기술자에게 알려져 있는 임의의 기타 매체의 형태일 수 있다.

본 발명의 방법에 의하여 치료될 수 있는 적절한 개체들의 예로서는 인간, 개, 또는 기타 동물 등의 포유류를 들 수 있다.

입수 가능한 자료에 의하여 식물성 스테롤 및 스타놀이 콜레스테롤을 억제하는 메카니즘은 확인되고 있지만, 식물성 스테롤 및 스타놀이 CRP의 농도를 조절하는 메카니즘은 알려져 있지 않다. 어떠한 특정 이론에 구애되기를 바라는 일이 없이, 본 발명의 발명자들은 피토스테롤을 보통의 양으로 섭취하면 CRP의 농도에 거의 영향을 미치지 않지만, 예를 들어, 피토스테롤을 보통의 양 이상으로 및/또는 특정의 형태로 섭취하면 정상적의 신체 작용을 통하여 CRP의 농도에 영향을 미칠 수 있다는 사실을 믿고 있다.

조성물의 조제

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "피토스테롤"이라는 용어는 유리(遊離)되고 에스테르화된 식물성 스테롤과 스타놀, 예컨대 시토스테롤 (sitosterol)의 지방산 에스테르를 말한다. 본 명세서에 기재되어 있는 1종 이상의 피토스테롤은 유리형으로 사용될 수 있다. 식물성 스테롤은 과일류, 야채류, 견과류, 열매류, 곡물류, 콩과류 및 야채유(野菜油)류 등의 여러 가지 식품 원료 중에 소량으로 존재하는 천연 발생 화합물이다. 과학 문헌은 44종 이상의 식물성 스테롤을 기술하고 있고, 숙련된 기술자들은 본 발명을 실행하는 경우 이용할 수 있는 것들로부터 임의의 식물성 스테롤을 선택할 수 있다. 본 발명은 이 기술 분야에서 사용되고 있는 일부의 식물성 스테롤의 사용도 역시 포함한다. 예를 들면, 시토스테롤, 캄페스테롤, 스티그마스테롤, 스피노스테롤, 타락사스테롤, 브라시카스테롤, 데스모스테롤, 칼리노스테롤, 포리퍼라스테롤, 클리오나스테롤 및 에르고스테롤을 비롯한 식물성 스테롤을 언급할 수 있다. 본 발명은 2종의 성분, 3종의 성분 및 4종의 성분의 혼합물 등의 식물성 스테롤의 혼합물도 역시 사용할 수 있다.

이들 및 기타의 식물성 스테롤의 공급원은 예컨대, 쌀겨, 옥수수겨, 옥수수 배아, 밀 배아유, 옥수수유, 홍화유, 귀리유, 올리브유, 면실유, 대두유, 땅콩유, 홍차, 녹차, 콜록시아 (colocsia), 케일, 브로콜리, 참깨, 시아 (shea)유, 포도씨유, 평지씨유, 아마씨유, 캐놀라 (canola)유, 톨유 및 목재 펄프로부터 얻어지는 기타의 오일류이다. 다음의 표 Ⅰ은 논문 [Richard E. Ostlund et al., Effects of Trace Components of Dietary Fat on Cholesterol Metabolism : Phytosterols , Oxysterols, and Squalene, 60 Nutrition Reviews 349-59 (2002)]에 제시되어 있는 일부 정상적인 야채 지방의 피토스테롤 함량을 요약하고 있다.

표 Ⅰ - 정상적인 야채 지방의 피토스테롤 함량

공급원	피토스테롤 ( mg /100g)
너트멕 ( Nutmeg )	0
코코넛 ( Coconut )	86
우쿠바 버터 ( Uchuba Butter )	95
팜 커넬 ( Palm Kernel )	95
바바쑤 ( Babassu )	95
코코아 버터 ( Cocoa Butter )	201
쿠푸 아쑤 ( Cupu Assu )	95
시아넛트 ( Sheanut )	357
면실	324
차씨 ( Teaseed )	102
토마토씨	100
쌀겨	1190
밀 배아	553
땅콩	207
대두	250
참깨	865
올리브	221
양귀비 씨	276
옥수수	968
해바라기	100
포도씨	180
월넛 ( Walnut )	176
아몬드 ( Almond )	266
헤이즐넛 ( Hazelnut )	120
아프리콧 커넬 ( Apricot Kernel )	266
홍화	444

한 가지 이상의 실시 상태에 있어서, 본 발명의 상기 1종 이상의 피토스테롤 공급원은 야채유로부터 얻는다.

또한, 식물성 스테롤은 수소가 첨가되어서 식물성 스타놀을 형성할 수도 있다. 따라서, 본 발명의 상기 식물성 스타놀은 시토스테롤 등의 여러 가지 식물성 스테롤의 수소 첨가 생성물로서 설명될 수도 있지만, 식물성 스테롤에 수소를 첨가하는 일이 없이, 이 기술 분야에서 사용되는 각종 식물들로부터 천연적으로도 역시 얻을 수 있다. 그러므로, 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 식물성 스타놀에 적용되는 "식물성 스테롤의 수소 첨가 생성물"이라는 용어는 합성 식물성 스타놀뿐만 아니라, 천연의 원료로부터 얻은 것들도 역시 포함한다. 예를 들면, 시토스타놀, 캄페스타놀, 스티그마스타놀, 스피노스타놀, 타락사스타놀, 브라시카스타놀, 데스모스타놀, 칼리노스타놀, 포리퍼라스타놀, 클리오나스타놀 및 에르고스타놀을 비롯한 식물성 스타놀을 언급할 수 있다. 상기 숙련된 기술자들은 이용 가능한 것들로부터 임의의 식물성 스타놀도 역시 선택할 수 있다. 본 발명은 2종 성분, 3종 성분 및 4종 성분의 혼합물 등의 식물성 스타놀의 혼합물뿐만 아니라, 2종 성분, 3종 성분 및 4종 성분의 혼합물 등의 식물성 스테롤과 식물성 스타놀의 혼합물도 역시 사용할 수 있다.

상기 식물성 스테롤과 식물성 스타놀의 양자는 모두 α 및 β 이성질체뿐만 아니라 소형 (1개 내지 4개의 탄소 원자) 측쇄(側鎖)를 포함하는 식물성 스테롤과 식물성 스타놀 등의 이 기술 분야에서 사용되는 다양한 위치 이성질체형과 입체 이성질체형을 포함한다. 예를 들면, β-시토시테롤 및 β-시토스타놀 이성질체들은 각각 상기 1종 이상의 피토스테롤로서 사용될 수 있다. 한 가지 실시 상태에 있어서, 상기 1종 이상의 피토스테롤은 β-시토스테롤, 콤페스테롤 및 야채유로부터의 스티그마스테롤을 함유하는 유리 식물성 스테롤들의 혼합물일 수 있다.

피토스테롤의 투여는 피토스테롤이 천연 발생 화합물이고 신체가 본질적으로 이들을 흡수하지 않아서, 그 결과 정상적인 배출을 통하여 이들이 제거되기 때문에 매력적이다. 그러므로, 예컨대 혈관 염증과 관련이 있는 C-반응성 단백질을 1종 이상의 피토스테롤을 사용하는 식이 경로를 통하여 예방 또는 감소시키는 것이 바람직하다.

적어도 한 가지의 실시 상태에 있어서, 본 발명의 상기 조성물은 음료이다. 그러나, 본 발명은 음료의 투여로만 한정되는 것은 아니고, 오히려 본 발명에 따른 상기 조성물은 위에 제시되어 있는 바와 같이, 약학, 기능성 및/또는 고체 또는 반고체의 소모성 식료품 등의 기타의 형태일 수 있다고 간주된다.

그러한 점에서, 상기 조성물이 음료인 경우, 이 음료는 식물성 스테롤과 식물성 스타놀로부터 선택되는 1종 이상의 피토스테롤을 C-반응성 단백질을 감소시키는 양으로 함유한다. 음료에 사용되는 실질적으로 안정한 분산액의 제조 공정은 예컨대, 1종 이상의 피토스테롤 및 본 명세서에 그 내용이 참고로서 포함되어 있는 미국 특허 출원 공보 제2003/0232118호 및 제2004/0142087호에 기재되어 있는 주스 농축물 등의 수용성 음료 농축물과 같은 수용성 물질을 포함한다. 상기 공정은 상기 1종 이상의 피토스테롤을 상기 수용성 물질과 혼합하여 제1 분산액을 형성시키는 것을 포함한다. 그 다음 단계로서는 상기 제1 분산액을 가열하여 가열된 혼합물을 형성시키고, 이어서 그 가열된 혼합물을 균질화함으로써 제2 분산액을 얻는 것을 들 수 있는데, 여기서 상기 1 분산액 및 제2 분산액 중의 상기 1종 이상의 피토스테롤의 입도는 약 0.1 미크론 내지 약 30 미크론이다.

예를 들면, 상기 1종 이상의 피토스테롤은 그 1종 이상의 피토스테롤을 수용성 음료 농축물과 혼합시켜서 입자들의 제1 분산액을 형성시킴으로써 상기 음료에 통합될 수 있는데, 이 공정은 제1 분산액 형성을 위하여 약 -10℃ 내지 약 100℃ (약 14℉ 내지 약 212℉) 또는 약 0℃ 내지 약 82℃ (약 32℉ 내지 약 180℉) 또는 약 18℃ 내지 약 64℃ (약 64℉ 내지 약 148℉) 또는 약 24℃ 내지 약 57℃ (약 75℉ 내지 약 135℉)의 온도에서 약 0.1 분 내지 약 120 분 또는 약 5 분 내지 약 60 분 또는 약 15 분 내지 약 30 분의 기간 동안 수행될 수 있다.

상기 1종 이상의 피토스테롤 입자 및 음료 농축물 등의 수용성 물질을 주성분으로 하는 제1 분산액의 제조에 사용되는 장치에는 고전단 혼합기 (Arde Barinco Model #CJ-4) 또는 어떠한 대용량 (예컨대, 약 50 내지 약 300 갤런) 고전단 혼합기가 있다. 제1 분산액을 제조하기 위한 상업용 장치로서는 예컨대, 에이피브이사 (APV, Invensys Company)에 의하여 제조되고, APV Liquiverter model 200 CLV의 상표명으로 제조되는 "리퀴버터 (Liquiverter)" (상표명)를 들 수 있다.

한 가지 실시 상태에 있어서, 제공되는 상기 1종 이상의 피토스테롤은 약 0.5 미크론 내지 약 10 미크론의 입도로 미분(微粉)될 수 있다.

제1 분산액과 제2 분산액의 양자 모두의 상기 1종 이상의 피토스테롤의 입도는 이 기술 분야의 통상의 숙련자에게 잘 알려져 있는 종 모양 곡선의 입도 분포를 실질적으로 나타낼 수 있다.

상기 수용성 물질은 물, 화합물을 더 함유하는 물 및 물 중의 고체 분산액, 또는 물 중의 액체 에멀젼이나 액체 중의 물 에멀젼과 같이 물 중에 용해 또는 분산된 조성물일 수 있다. 이는 본 발명의 수용성 물질을 상기 1종 이상의 소수(疎水) 식물성 스테롤과 혼합하기 전의 상기 수용성 물질을 규정하는 것이다. 상기 수용성 물질을 용해 또는 분산된 화합물 또는 조성물과 함께 사용하는 경우, 수용성 음료 농축물 등의 상기 수용성 물질의 고체 함량은 수용성 물질 1 ℓ당 약 200 g 내지 약 1000 g 또는 약 400 g 내지 약 900 g 또는 약 600 g 내지 약 800 g이다. 본 발명의 "수용성 물질"에 적용시, "고체 함량"이라는 용어는 본 명세서에서 정의된 바와 같이 "수용성 물질"의 에멀젼형을 형성하는 데 사용되는 물에 첨가된 임의의 액체도 역시 포함할 수 있다.

조성물 중에 1종 이상의 피토스테롤을 통합하는 기타의 기술을 언급할 수 있는데, 예를 들어:

그 내용이 본 명세서에 참고로서 포함되어 있는 티아이넨 (Tiainen) 등의 미국 특허 제6,129,944호에는 수용성 용액 중의 미결정질(微結晶質) 식물성 스테롤 및 감미료로 이루어진 균질 현탁액을 형성시킴으로써 식물성 스테롤을 함유하는 제품을 생산하는 방법이 설명되어 있다.

그 내용이 본 명세서에 참고로서 포함되어 있는 하라실타 (Haarasilta) 등의 WO 98/58554에는 분말형의 식물성 스테롤 및 과일류, 야채류 또는 장과류(奬果類)의 물질 등의 일반적인 식료품 성분을 특히 분말형으로 함유하는 식품 산업에서 이용되는 프리믹스 (premix)와 이 프리믹스의 제조 방법이 설명되어 있다. 이 결과는, 그 내용이 본 명세서에 참고로 포함되어 있는 핀란드 특허 출원 제F1 973 904호와 제F1 932 853호에 개시되어 있는 방법 및 장치에 의하여 상기 식물성 스테롤과 상기 장과류, 과일류 또는 야채류 등의 식료품을 메가트렉스 오와이 (Megatrex Oy)사에 의하여 제조된 아트렉스 제분기 (Atrex mill) 등의 소위 충격식 제분 (impact milling) 원리에 따라 작동되는 제분기에 의하여 분쇄할 때 일어난다. 본 발명의 발명자들은 본 발명의 방법을 식물성 스테롤과 혼합된 형태의 시리얼에 적용하는 경우, 시리얼 곡물의 온도가 그 곡물에 가해지는 기계적인 에너지의 영향으로 인하여 상승하고, 이에 따라 분쇄와 관련된 곡물의 열처리가 제공된다는 사실에 주목하고 있다.

자비스토브스키 (Zawistowski)는 그 내용이 본 명세서에 참고로 포함되어 있는 WO 00/45648에서 반유체, 유체 또는 점성 매체 중에 식물성 스테롤과 식물성 스타놀을 분산 및 현탁시키고, 이와 같이 하여 형성시킨 매체를 충격력에 노출시킴으로써 식물성 스테롤과 식물성 스타놀 또는 이들 양자의 혼합물의 미립자를 제조하는 방법을 설명하고 있다. 이 방법은 상기 식물성 스테롤 및/또는 식물성 스타놀을 적절한 반유체, 유체 또는 점성의 매체 중에 분산 또는 현탁시키고, 이어서 그 매체에 충격력을 가하여 미립자를 제조하는 방법을 포함하고 있다. 자비스토브스키는 공기-분무 노즐, 공기압 노즐, 고전단 혼합기 또는 콜로이드 제분기 중의 어느 한 가지, 그러나 좋기로는 마이크로플루이딕스사 (Microfluidics Incorporation, Massachusetts, Newton)로부터 구득이 용이한 미세 유동기를 사용하여 고전단을 생성시킴으로써 이들 충격력을 발생시키고 있다.

본 발명에 따르면, 상기 1종 이상의 피토스테롤은 CRP 농도를 저하시키는 데 효율적인 양으로 투여된다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "C-반응성 단백질의 농도를 저하시키는 양"이라는 용어는 조절, 즉 혈관 염증 진행의 둔화 또는 정지 및/또는 C-반응성 단백질 농도의 저하를 포함할 수 있는, 투여자가 목표로 하는 조직, 계통 또는 개체의 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하는 능력을 나타내는 상기 1종 이상의 피토스테롤의 농도를 의미한다.

상기 1종 이상의 피토스테롤을 함유하는 조성물을 얻기 위하여, 예를 들어, 상기 1종 이상의 피토스테롤은 상기 제1 분산액 및/또는 상기 제2 분산액 중에 수용성 물질, 농축물 또는 음료 제품 1 ℓ당 약 1 g 내지 약 100 g 또는 약 10 g 내지 약 60 g 또는 약 20 g 내지 약 30 g의 양으로 존재할 수 있다. 한 가지 실시 상태에 있어서, 상기 1종 이상의 피토스테롤은 상기 제1 분산액 및/또는 상기 제2 분산액 중에 상기 수용성 물질, 농축물 또는 음료 제품 1 ℓ당 약 15 g 내지 약 30 g의 양으로 존재할 수 있다.

상기 1종 이상의 피토스테롤의 1일 총투여량뿐만 아니라 투여 빈도도 역시 사용되는 특정의 복용 형태와 투여 경로에 따라 달라지게 된다. 투여량과 투여 빈도는 개별 개체의 연령, 체중 및 상태와 반응에 따라서도 역시 달라지게 된다. 투여량과 투여 빈도는 과도하게 실험하는 일이 없이 유능한 의사에 의하여 용이하게 결정될 수 있다. 임상의 또는 치료의는 개별 개체의 반응과의 관계에서 어떻게, 언제 요법을 중단, 조절 및 종결할지를 알게 된다는 사실도 역시 주목하여야 한다.

일반적으로, 1일 총투여량은 최대 2 g 또는 그 이상, 또는 약 1 ㎎ 내지 약 3 g, 또는 약 1 ㎎ 내지 5 g, 또는 1 g 내지 10 g 또는 이들 범위 내의 임의의 양이다. 한 가지 실시 상태에 있어서, 상기 1종 이상의 피토스테롤의 1일 총투여량은 최대 2 g일 수 있다.

한 가지 실시 상태에 있어서, 상기 1종 이상의 피토스테롤이 음료로서 투여되는 경우, 상기 1종 이상의 피토스테롤은 총조성물에 비하여 약 0.5 중량% 내지 약 80 중량%, 추가적인 예로서, 약 1 중량% 내지 약 50 중량% 또는 이들 범위 내의 임의의 구간 등의 최대 약 100 중량%의 양으로 존재할 수 있다. 추가의 예로서, 상기 1종 이상의 피토스테롤이 조성물로서 투여되는 경우, 상기 1종 이상의 피토스테롤은 상기 조성물의 총중량에 비하여 약 0.1 중량% 내지 약 75 중량% 또는 이들 범위 내의 임의의 구간 등의 최대 100 중량%의 양으로 존재할 수 있다.

상기 제1 분산액을 균질화하여 상기 1종 이상의 소수 식물성 스테롤의 입자 및 상기 수용성 음료 농축물로 이루어진 제2 분산액을 얻는 것은, 예컨대 상기 분산액을 작은 오리피스를 통하여 고압에서 힘을 가함으로써 기능을 수행할 수 있는 균질화기 (예컨대, APV model # APV 1000) 중에서 수행될 수 있다. 상기 균질화는 약 100 psi 내지 약 14,500 psi 또는 약 500 psi 내지 약 10,000 psi 또는 약 1,000 psi 내지 약 5,000 psi의 압력에서 수행될 수 있다. 한 가지 실시 상태에 있어서, 상기 균질화는 약 2.000 psi 내지 약 5.000 psi의 압력에서 수행될 수 있다.

다양한 음료 농축물이 수용성 물질로서 사용될 수 있지만, 한 가지 실시 상태에 있어서, 상기 공정은 1종 이상의 피토스테롤 및 오렌지 주스 농축물 등의 수용성 감귤 주스 농축물을 함유하는 실질적으로 안정한 분산액의 제조를 포함한다.

한 가지 실시 상태에 있어서, 상기 수용성 물질은 물과, 영양소, 향미료, 감미료, 이산화탄소와 기타의 기체 및 이들의 혼합물과 배합된 형태의 물을 함유한다. 예를 더 들면, 상기 수용성 물질은 오렌지, 레몬, 라임, 텐저린, 만다린을 비롯한 감귤 주스와 포도 주스 등의 과일 주스 또는 과일향의 농축물, 아세로라, 포도, 배, 열대 과일, 파인애플, 바나나, 사과, 체리, 라즈베리, 복숭아, 자두, 포도, 건포도, 크랜베리, 블랙베리, 블루베리, 딸기, 미라벨, 수박, 감로, 켄터롭, 망고, 파파야 등의 기타의 주스 및 과일향의 농축물, 콜라, 차, 커피, 초콜렛, 바닐라, 아몬드로부터 유래된 향미료 등의 식물성 향미료와, 토마토, 양배추, 샐러리, 오이, 시금치, 당근, 상추, 물냉이, 민들레, 대황, 사탕무, 코코나, 구아바, 한 구오 등의 야채 주스 및 야채 향미료와, 2종, 3종 및 4종의 혼합물 등의 이들의 혼합물일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 상기 수용성 물질은 기존의 스포츠 음료와 질병으로 인한 채액 손실증을 치료하는 데 사용되는 음료의 농축물도 역시 함유할 수 있는데, 이는 물의 첨가를 요하는 제품인지 또는 물과의 혼합물 형태인지에 관계없이, 수크로스 시럽, 글루코스-프룩토스 시럽, 시트르산, 시트르산나트륨, 인산일나트륨과 나트륨염 및 소실된 전해질 보충용의 기타 물질을 함유한다.

본 발명의 농축물은 물로 희석되어서 주스 또는 음료를 형성할 수 있다. 예를 들면, 상기 농축물에 당 또는 당류의 혼합물이 함유되어 있는 경우, 이를 물을 사용하여 약 2°Brix 내지 약 20°Brix 또는 약 6°Brix 내지 약 16°Brix 또는 약 11°Brix 내지 약 13°Brix로 희석시킬 수 있다. 본 발명에 의하여 사용되는 상기 당류로서는 일반적으로 프룩토스, 수크로스, 글루코스 등뿐만 아니라 문헌 [McMurry, Organic Chemistry, Third Edition, pp. 916-950, Hawley's Condensed Chemical Dictionary, Twelfth Edition, p. 1100, and Hackh's Chemical Dictionary, Third Edition, pp. 815-817]에 기재되어 있는 바와 같이 이 기술 분야에서 사용되는 기타의 당류 등의 탄수화물 물질을 들 수 있다. 그 밖에, 비영양의 고강도 감미료, 천연 또는 인공의 감미료도 역시 사용될 수 있다. 2종의 성분, 3종의 성분 또는 4종의 성분의 혼합물 등의 당류 및/또는 감미료의 혼합물도 역시 사용될 수 있다.

본 발명에 의하여 예상되는 상기 조성물은 필요에 따라 여러 가지 성분을 함유할 수 있다. 이들 임의 선택적 성분은 여러 가지 형태의 조성물, 즉 약학 조성물 또는 기타의 소모성 제품에 분산, 용해 또는 그렇지 않으면 혼합될 수 있다. 본 발명에서 사용하기에 적절한 임의 선택적 성분의 예로서는 다음의 것들을 들 수 있는데, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 조성물이 약학 조성물인 경우, 임의 선택적 성분들로서는 담체, 충전제, 증량제(增量劑), 결합제, 분해제, 용해 지연제, 흡착 촉진제, 습윤제, 흡착제, 윤활제, 안정화제, 착색제, 중화제, 분배제, 보존제, 유기산, 수용성 및 불수용성 중합체, 장관제(腸管劑) 및 비장관제, 피복제와 임의 선택적 약학 성분으로서 일반적으로 사용되는 임의의 기타 성분 또는 성분들을 들 수 있는데, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 조성물이 식품 제품 또는 음료 등의 소모성 제품인 경우, 임의 선택적 성분들로서는 비타민과 미네랄 등의 영양제, 향미제, 착색제, 탄산 성분, 보존제, 검 (gum), 유화제와 필요에 따른 소모성 제품 성분들로서 일반적으로 사용되는 임의의 기타 성분 또는 성분들을 들 수 있는데, 이에 한정되는 것은 아니다.

예를 들어, 본 발명의 상기 조성물은 비타민 C, 비타민 B6 및/또는 비타민 B12와 폴산 등의 1종 이상의 수용성 비타민 및/또는 비타민 A, 베타 카로틴, 비타민 B, 비타민 D, 비타민 E 및 비타민 K 등의 1종 이상의 지용성 비타민, 2종 성분, 3종 성분 및 4종 성분의 혼합물을 들 수 있는데, 이에 한정되는 것은 아니다. 비타민 B와 E 등의 비타민 첨가를 변화시켜서 단위 1인분당 각 비타민에 있어서 일일 식이 권장량 (RDA)의 약 1% 내지 약 100% 또는 약 5% 내지 약 30% 또는 약 15% 내지 약 20% 얻도록 한다.

C-반응성 단백질 분석법 및 방법론은 관련 기술 분야의 숙련자에게 알려져 있다. 그 밖에, C-반응성 단백질 농도의 분석법은 그 내용이 본 명세서에 참고로 포함되어 있는 미국 특허 제5,358,852호, 제6,040,147호 및 제6,277,584호에 설명되어 있다. CRP에 대한 고감도 분석법은 다데 베링사 (Dade Behring, Inc), 아봇 라보라토리즈 (Abbot Laboratories) 및 로체 라보라토리즈 (Roche Laboratories) 등의 몇몇 공급업자로부터 시판되고 있다.

예를 들어, 상기 CRP의 농도는 고감도 근접 적외선 입자 면역 검정률 (Near Infrared Particle Immunoassay Rate (NIPIA)) 방법과 함께 베크만 엘엑스20프로 (Beckman LX20PRO)를 사용하여 수행되는 고감도 CRP (hs-CRP) 분석법을 사용함으로써 측정될 수 있다. 이 방법에 따르면, 안티-CRP 항체로 피복된 입자는 혈장 시료 중의 CRP와 결합하여 비용해성 응집체를 형성시켜 혼탁을 유발한다. 베크만 코울터 (Beckman Coulter)에 의한 고감도 C-반응성 단백질 (CRPH)에 대한 제품 안내서 참조. 940 nm에서의 흡수도 변화를 관찰함으로써, 시료 중의 상기 CRP 농도를 측정할 수 있으며, 즉 상기 흡수도 변화는 상기 CRP의 농도에 비례한다. 상기 LX PRO 시스템은 단일 지점 조절의, 소정의 적정 곡선을 기초로 하여 CRP 농도를 나타내고 있다.

본 발명은 상기 1종 이상의 피토스테롤 이외의 1종 이상의 활성제, 예컨대 상기 1종 이상의 피토스테롤에 의하여 치료되는 동일한 질환을 치료할 수 있는 화화합물을 상기 조성물에 첨가하는 것, 예를 들면 1종 이상의 스타틴을 첨가하는 것을 더 포함하고자 한다. 그러한 활성제들로서는 3-히드록시-3-메틸글루타릴 코엔자임 A 환원 효소 억제제 (statin), 퍼옥시좀 증식제 활성화 수용체-α 작용제 (fibrate), 퍼옥시좀 증식제 활성화 수용체-α 작용제 (glitazone), 아스피린 및 고용량의 RRR-α 토코페롤을 들 수 있는데, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명은 단일 요법으로서 투여되는 상기 1종 이상의 피토스테롤, 즉 상기 1종 이상의 피토스테롤의 단독 투여도 역시 예상한다.

별법으로서, 그러한 추가의 약제가 제공될 수 있는 경우, 이들은 별도의 제제로서 본 발명의 조성물과 함께 개체에 공동 투여될 수 있다. 이들 별도의 제제들은 상기 본 발명의 조성물의 투여 전, 후 또는 동시에 투여될 수 있다.

조작예 이외에, 또는 달리 지시되지 않는 한, 본 명세서와 특허 청구 범위에서 사용되고 있는 성분의 양, 반응 조건 등을 나타내는 모든 숫자들은 "약"이라는 용어에 의하여 모든 예에 있어서 변형되는 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 반대로 지시되지 않는 한, 이 명세서와 첨부된 특허 청구 범위에서 설명되어 있는 상기 숫자 파라미터들은 본 발명에 의하여 얻도록 추구되고 있는 필요로 하는 특성에 의존하여 변화할 수 있는 근사치이다. 최소한, 청구항의 범위에 대한 균등론의 적용을 제한하려는 시도로서가 아니고, 각 숫자 파라미터는 유효 숫자의 개수 및 보통의 라운딩 접근법 (rounding approach)의 관점에서 해석되어야 한다.

본 발명의 넓은 범위를 설명하고 있는 상기 숫자 범위와 파라미터들은 근사치이지만, 특정의 예 중에서 설명되어 있는 수치들은 가능한한 정확하게 보고된다. 임의의 수치는, 그러나, 본질적으로 그들의 각 시험 측정치 중에 발견되는 표준 편차로부터 필연적으로 발생하는 일정한 오차를 포함하고 있다.

이하의 예시들은 본 발명을 비한정적인 방식으로 설명하는 역할을 한다.

피토스테롤 음료의 제조

다음의 성분들을 결합하여 피토스테롤과 수용성 물질로 이루어진 기초 혼합물을 제조하고, 후속 공정에서 본 발명의 음료의 제1 분산액을 형성하였다.

상기 조성물을 제제하여 다음을 얻었다.

기초 성분:

목표 용적 0.75 갤론 (2.84 ℓ)

수분 180.3 g

오렌지 농축액 3363.0 g

(굴절계 ˚Brix, 65 (산(酸)에 대하여 보정한 것); 산 3.71% (wt./wt.))

오렌지 향미료 53.1 g

오렌지유 2.7 g

피토스테롤 76.7 g

총량 3675.8 g

완제품의 성분:

목표 용적 4.8 갤론 (18.2 ℓ)

수분 4.05 갤론 (15.3 ℓ)

기초 성분 0.75 갤론 (2.84 ℓ)

기초 성분 내역	최적	최소	최대
가용성 고체의 %	61.56	61.14	62.39
굴절계 ˚Brix	61.15	60.74	61.99
산 % w/w (시트르산으로서)	3.42	3.12	3.72
˚Brix/산 비율	18.0	16.4	20.0

상기 1종 이상의 피토스테롤과 상기 수용성 물질로서의 오렌지 주스 농축물의 농도는 61.15˚Brix (굴절계 ˚Brix, 산에 대하여 보정한 것)이었다.

상기 혼합물을 고전단 혼합기 (Arde-Barinco Model No. CJ-4)를 사용하여 7000 rpm에서 약 15분 교반하고 82.2℃ (180℉)로 8초간 가열하고 약 43.3℃ 내지 약 60℃ (약 110℉ 내지 140℉)로 약 5초 냉장하여, 평균 입도가 약 10 미크론이고 입도 분포가 약 0.5 미크론 내지 약 30 미크론이며 약 30 미크론에서 입도가 최대인 제1 분산액을 제조하였다.

에이피브이 호모제니저 그룹 (APV Homogenizer Group (Invensys Co.))으로부터 구득되는 에이피브이 균질화기 (Model No. APV 1000) 중에서 상기 제1 분산액을 60℃ (140℉) 및 3400 psi에서 균질화한 다음, 600 psi에서 상기 제2 분산액을 얻 었다.

상기 제2 분산액은 상기 1종 이상의 피토스테롤 및 상기 수용성 물질로서의 오렌지 주스를 주성분으로 하는 실질적으로 안정한 분산액을 함유하였다.

상기 실질적으로 안정한 분산액에 수분을 가하여 12.00˚Brix의 오렌지 주스를 제조하였다. 이 제품의 상세 내역은 다음과 같다.

제품의 상세 내역	최적	최소	최대
가용성 고체의 %	12.00	11.90	12.20
굴절계 ˚Brix	11.92	11.82	12.12
산 % w/w (시트르산으로서)	0.67	0.65	0.69
˚Brix/산 비율	18.0	17.3	18.8

연구 Ⅰ: 피토스테롤 음료

72명의 개체가 이 위약(僞藥) 대조군의, 이중 맹검, 무작위 추출 실험에 참여하였다. 그 내용이 본 명세서에 참고로 포함되어 있는 [Sridevi Devaraj et al., Plant Sterol - Fortified Orange Juice Effectively Lowers Cholesterol Levels in Mildly Hypercholesterolemic Healthy Individuals, 24 Artherioscler. Thromb. Vasc. Biol. e24-e28 (2004)] 참조. 정상적인 전혈구계산치(全血球計算値), LDL-콜레스테롤 >100 ㎎/㎗; 정상적인 간 및 신장 기능 (정상적인 아미노산 전이 효소, 알칼리성 인산 분해 효소, 크레아티닌); 무출혈 체질, 정상적인 갑상샘 기능 (정상적인 TSH)를 나타내는 성인이 본 연구에 포함되었다.

모든 개체는 영양 보강이 되지 않은 음료를 받는 상태에서 2주간의 실험을 수행하였다. 이어서, 상기 개체들을 조건을 알리지 않는 방식으로 무작위 추출하여 개체들에게 피토스테롤로 영양 보강이 된 음료 (즉, 피토스테롤 음료군) 또는 위약 음료를 그 다음 8 주간 공급하였다. 목표로 한 입도 분포를 나타내는 상기 피토스테롤 음료를 전술한 방법을 사용하여 주스에 현탁시켰다. 개체들에게 18 일간 지속하기에 충분한 양의 음료를 제공하였다. 분석 연구에 의하여 상기 최종 음료가 저장 수명 전체에 걸쳐 그 음료에 남아있는 피토스테롤을 나타낸다는 사실이 증명되었다.

각 개체는 240 ㎖의 음료를 1일 2회 식사와 함께 섭취하도록 하였다. 이는 피토스테롤 음료 중의 피토스테롤의 1일 약 2 g에 해당한다.

그 밖에, 개체들은 연구에 진입하지 전 4주와 본 연구의 기간 동안 베네칼^® (Benecal^®) 또는 타케 콘트롤^® (Take Control^®) 등의 기타 종류의 영양이 보강된 마가린류를 섭취하지 못하도록 하였다. 공복 혈액 시료들을 시작 시점에서 (5 내지 7일 간격으로, 2개 시료의 평균), 본 연구의 2 주차 및 10 주차에서 (5 내지 7일 간격으로, 2개 시료의 평균) 채취하였다. 상기 위약 음료 및 피토스테롤 음료의 조성은 아래의 표 Ⅱ에 제시되어 있다.

표 Ⅱ - 상기 피토스테롤 및 위약 음료의 조성

성분	피토스테롤 음료	위약 음료
칼로리	110	110
폴산염 (㎍)	60	60
비타민 E (IU)	6	0
비타민 B6 (mg)	0.4	0.08
비타민 B12 (㎍)	1.2	0
비타민 C (mg)	72	72
나트륨 (mg)	450	450
티아민 (mg)	0.15	0.15
유리 스테롤	1.0	0

상기 연구의 과정 중에 얻은 상기 시료들 각각의 CRP 농도를 조사하기 위하여, 600 g에서 15분 원심 분리한 후 혈장으로부터 적혈구를 분리시켰다. 모든 분석은 베크만 LX20PRO 시스템에 대한 근접 적외선 입자 면역 검정률 방법론을 사용하여 수행되었다. 75명의 개체가 상기 연구에 참여하였는데, 3명이 개인적인 이유로 탈퇴하였고 (피토스테롤군에서 2명, 위약군에서 1명), 72명의 개체 (n=36/군)가 상기 연구를 완수하였다. 양자의 군의 개체들은 모두 연령, 성별 및 체중 지수에 있어서 대등하였다. 표 Ⅲ에 양자의 군의 개체들에 대한 CRP 수치가 제시되어 있다.

표 Ⅲ - 위약 음료 및 피토스테롤 음료 중의 CRP 농도의 요약

		CRP 수치 (mg/ℓ)
		최소치	최대치	평균치	중간치	P-수치*
위약군 (n=36)	기준선	0.2	10.80	2.771	1.70	0.7550
위약군 (n=36)	투여 후	0.2	12.30	2.754	1.70	0.7550
피토스테롤 음료군 (n=36)	기준선	0.2	9.80	2.597	1.50	<0.0001
피토스테롤 음료군 (n=36)	투여 후	0.2	7.20	1.808	1.15	<0.0001

* 윌콕슨 부호 순위 검정 (Wilcoxon's signed rank test)에 기초하였음.

기준선과 투여 후에서 상기 위약 음료와 피토스테롤 음료의 통계학적 비교를 위하여 윌콕슨 부호 순위 검정을 사용하여 CRP 수치 변화를 평가하였다. 문헌 [Wilcoxon, F. Individual Comparisons by Ranking Methods, 1 Biometrics 80-83 (1945)] 참조. 상기 윌콕슨 부호 순위 검정은 조사 전 후에 수집된 자료의 차이점을 시험하는 데 종종 사용되는데, 이는 짝지은 스튜던트의 티-검정 (paired Student's t-test)의 별법이다. 투여 후와 비교한 기준선에서의 피토스테롤 음료를 분석한 결과 <0.0001의 P 수치가 나왔다. 상기 P 수치는 영(零)의 가설이 사실인 경우에, 그 영(零)의 가설 (즉, 기준선과 투여 후에서의 CRP 농도간에 차이가 없게 된다는 것)을 거부함 추정 확률이다. 즉, 이는 상기 검정의 결과의 강도를 측정하기 위한 시도이다.

일반적으로, <0.05의 P 수치들은 통계학적 유의성을 나타내고, <0.001의 P 수치, 즉 틀림 확률이 1/1000 이하인 경우는 통계학적으로 높은 유의성을 나타낸다. 이 경우에 있어서, P 수치가 낮게 나오는 경우, 상기 영의 가설은 거짓일 수 있다. 상기 연구가 이중 맹검이었다는 사실을 고려하면, 상기 <0.0001의 P 수치는 상기 결과들이 우연에 기인할 가능성이 없고 통계학적 유의성이 높다는 사실, 즉 상기 CRP의 저하는 우연에 기인한 것이 아니라는 사실이 제시된다.

연구 Ⅱ: 저칼로리의 피토스테롤 음료

72명의 개체가 이 위약 대조군의, 이중 맹검, 무작위 추출 실험에 참여하였다. 정상적인 전혈구계산치 (全血球計算値, CBC), LDL-콜레스테롤 >100 ㎎/㎗; 정상적인 간 및 신장 기능 (정상적인 아미노산 전이 효소, 알칼리성 인산 분해 효소, 크레아티닌); 무출혈 체질, 정상적인 갑상샘 기능 (정상적인 TSH)를 나타내는 성인이 본 연구에 포함되었다.

개체들을 조건을 알리지 않는 방식으로 무작위 추출하여 총음료 조성물에 대하여 피토스테롤이 2 중량% 이상 함유하는 저칼로리 음료 또는 위약을 다음 8 주간 제공하였다. 목표로 한 입도 분포를 나타내는 피토스테롤을 전술한 바와 같이 저칼로리 음료에 현탁시켰다. 개체들에게 18 일간 지속하기에 충분한 양의 음료를 제공하였다.

각 개체가 240 ㎖의 음료를 식사와 함께 1일 2회 섭취하도록 하였다. 이는 1 일 약 2 ｇ의 피토스테롤에 상당하는 양이었다. 그 밖에, 개체들은 연구에 진입하지 전 4주와 본 연구의 기간 동안 베네칼^® (Benecal^®) 또는 타케 콘트롤^® (Take Control^®) 등의 기타 종류의 영양이 보강된 마가린류의 임의의 기타 소스를 섭취하지 못하도록 하였다.

공복 혈액 시료들을 시작 시점에서 (5~7일 간격으로, 2개 시료의 평균), 본 연구의 4 주차 및 8 주차에서 (5~7일 간격으로, 2개 시료의 평균) 채취하였다. 상기 위약 음료 및 피토스테롤 음료의 조성은 아래의 표 Ⅲ에 제시되어 있다.

표 Ⅲ - 음료의 조성

성분	피토스테롤 음료	위약 음료
칼로리	50	50
총지방 (g)	0	0
총탄수화물 (g)	13	13
총단백질 (g)	0	0
폴산염 (㎍)	24	24
비타민 E (IU)	6	0
비타민 B6 (mg)	0.4	0.08
비타민 B12 (㎍)	1.2	0
비타민 C (mg)	72	72
칼륨 (mg)	450	450
티아민 (mg)	0.15	0.15
유리 스테롤	1.0	0

상기 연구의 과정 중에 얻은 상기 시료들 각각의 CRP 농도를 조사하기 위하여, 600 g에서 15분 원심 분리한 후 혈장으로부터 적혈구를 분리시켰다. 모든 분석은 베크만 LX20PRO 시스템에 대한 근접 적외선 입자 면역 검정률 방법론을 사용하여 수행되었다. 77명의 개체가 상기 연구에 참여하였는데, 5명이 개인적인 이유로 탈퇴하였고 (피토스테롤군에서 2명, 위약군에서 3명), 72명의 개체 (n=36/군)가 상 기 연구를 완수하였다. 양자의 군의 개체들은 모두 연령, 성별 및 체중 지수에 있어서 대등하였다. 표 Ⅳ에 양자의 군의 개체들에 대한 CRP 수치가 제시되어 있다.

표 Ⅳ - 위약 음료 및 피토스테롤 음료 중의 CRP 농도의 요약

		CRP 수치 (mg/ℓ)
		최대치	최소치	평균치	충간치	P-수치*
위약군 (n=36)	기준선	0.200	7.50	2.723	1.800	0.3821
위약군 (n=36)	투여 후	0.200	10.70	3.289	1.900	0.3821
피토스테롤음료군 (n=36)	기준선	0.300	10.40	2.803	1.700	0.0006
피토스테롤음료군 (n=36)	투여 후	0.200	8.20	1.966	1.500	0.0006

* 윌콕슨 부호 순위 검정에 기초하였음.

기준선과 투여 후에서 상기 위약군과 피토스테롤 음료군간의 비교로부터 제시되어 있는 바와 같이, 상기 CRP의 중간치는 위약군과 비교하여 저칼로리 피토스테롤 음료 중에서 저하되었다. 윌콕슨 부호 순위 검정법을 사용하면, 투여 후에 비하여 기준선에서 저칼로리의 피토스테롤 음료의 분석은 0.0006의 P 수치를 초래하였다. 그러므로, P 수치가 낮게 나왔고, 이 연구는 이중 맹검이었다는 점에서, 상기 영의 가설은 거부될 수 있고, CRP 저하는 우연에 기인한 것일 수 없다.

Claims

C-반응성 단백질의 농도를 저하시킬 필요성이 있는 개체에게 1종 이상의 피토스테롤을 C-반응성 단백질 농도를 감소시키는 양으로 투여하는 것을 포함하는 C-반응성 단백질의 농도를 저하시키는 방법.
제1항에 있어서, 상기 1종 이상의 피토스테롤은 경구(經口) 투여되는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 1종 이상의 피토스테롤은 조성물의 성분으로서 투여되는 것인 방법.
제3항에 있어서, 상기 조성물은 약학 조성물 및 소모성 제품으로부터 선택되는 것인 방법.
제4항에 있어서, 상기 소모성 제품은 식품 및 음료로부터 선택되는 것인 방법.
제5항에 있어서, 상기 소모성 제품은 음료인 것인 방법.
제6항에 있어서, 상기 음료는 감귤 주스인 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 1종 이상의 피토스테롤은 1일 약 2 ｇ의 1일 총투여량이 달성되도록 투여되는 것인 방법.
제8항에 있어서, 상기 투여량은 1회 투여량 또는 분할 투여량으로부터 선택되는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 1종 이상의 피토스테롤의 투여를 반복하는 것을 더 포함하는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 1종 이상의 피토스테롤은 식물성 스테롤 및 식물성 스타놀로부터 선택되는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 1종 이상의 피토스테롤은 시토스테롤, 캄페스테롤, 스피노스테롤, 타락사스테롤, 브라시카스테롤, 데모스테롤, 칼리노스테롤, 포리페라스테롤, 클리노스테롤, 에르고스테롤 및 이들의 혼합물로부터 선택되는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 1종 이상의 피토스테롤은 유리(遊離) 식물성 스테롤 및 유리 식물성 스타놀로부터 선택되는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 1종 이상의 피토스테롤은 야채유 스테롤로부터 유래되는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 1종 이상의 피토스테롤은 베타-시토스테롤, 캄페스테롤 및 시티그마스테롤을 포함하는 유리 식물성 스테롤의 혼합물인 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 개체는 인간인 것인 방법.
제1항에 있어서, 1종 이상의 피토스테롤을 C-반응성 단백질의 농도를 저하시키는 양으로 투여함으로써 혈청 콜레스테롤 농도를 저하시키는 것을 더 포함하는 것인 방법.
C-반응성 단백질의 농도를 저하시킬 필요성이 있는 개체에게 1종 이상의 피토스테롤을 C-반응성 단백질을 저하시키는 양으로 함유하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 C-반응성 단백질의 농도를 저하시키는 방법.
제18항에 있어서, 상기 조성물은 약학 조성물 및 소모성 제품으로부터 선택되는 것인 방법.
제18항에 있어서, 상기 조성물은 담체, 충전제, 증량제(增量劑), 결합제, 분해제, 용해 지연제, 흡착 촉진제, 습윤제, 흡착제, 윤활제, 안정화제, 착색제, 중화제, 분배제, 보존제, 유기산, 수용성 및 불수용성 중합체, 장관제(腸管劑) 및 비장관제, 피복제, 영양소, 향미료, 탄산 성분, 검 (gum), 유화제 및 이들의 혼합물로부터 선택되는 임의 선택적 성분을 더 함유하는 것인 방법.
제18항에 있어서, 상기 조성물은 상기 1종 이상의 피토스테롤 이외에 1종 이상의 활성제를 더 함유하는 것인 방법.
혈관 염증 질환을 치료 또는 예방할 필요성이 있는 개체에게 1종 이상의 피토스테롤을 C-반응성 단백질의 농도를 저하시키는 양으로 투여하는 것을 포함하는 혈관 염증을 치료 또는 예방하는 방법.
C-반응성 단백질의 농도를 저하시킬 필요성이 있는 개체에게 C-반응성 단백질의 농도를 저하시키는 양의 1종 이상의 피토스테롤을 함유하는 음료를 투여하는 것을 포함하는 C-반응성 단백질의 농도를 저하시키는 방법
C-반응성 단백질의 농도를 저하시킬 필요성이 있는 개체에게 C-반응성 단백질의 농도를 저하시키는 양의 1종 이상의 피토스테롤을 함유하는 단일 요법제 (mono-therapy)를 투여하는 것을 포함하는 C-반응성 단백질의 농도를 저하시키는 방법.
C-반응성 단백질의 농도를 저하시킬 필요성이 있는 개체에게 C-반응성 단백질의 농도를 저하시키는 양의 1종 이상의 피토스테롤 및 수용성 물질로 이루어진 실질적으로 안정한 분산액을 함유하는 음료를 투여하는 것을 포함하는 C-반응성 단백질의 농도를 저하시키는 방법으로서, 상기 1종 이상의 피토스테롤은 식물성 스테롤 및 식물성 스타놀로부터 선택되고, 상기 실질적으로 안정한 분산액에 있어서 분말감을 회피하기 위하여, 상기 1종 이상의 피토스테롤의 입도는 약 0.1 미크론 내지 약 30 미크론이고, 상기 1종 이상의 피토스테롤 입자의 대부분은 약 0.2 미크론 내지 약 10 미크론의 범위이고 종(鐘) 모양의 곡선 분포를 나타내는 것인 C-반응성 단백질의 농도를 저하시키는 방법.