KR20080063048A

KR20080063048A - 발효인삼 또는 홍삼의 제조방법

Info

Publication number: KR20080063048A
Application number: KR1020070103435A
Authority: KR
Inventors: 이건호; 김용태; 강흔수; 최지웅
Original assignee: 메타볼랩(주)
Priority date: 2007-10-15
Filing date: 2007-10-15
Publication date: 2008-07-03
Also published as: KR100856790B1

Abstract

본 발명은 사포닌의 전환 방법, 발효 인삼 또는 홍삼의 제조방법 및 진세노사이드 Rg3 또는 Rh2의 인리치먼트 방법에 관한 것으로서, (a) 유산균을 인삼 또는 홍삼에 접종하는 단계; (b) 상기 유산균을 배양하는 단계; 및 (c) 상기 단계 (b)의 배양 결과물을 열처리하는 단계를 포함한다. 본 발명에 따르면, 비교적 간단한 공정으로 인삼 또는 홍삼 고유의 진세노사이드를 전환하여, Rg3 및/또는 Rh2가 인리치먼트된 인삼 또는 홍삼액을 얻을 수 있다.

인삼, 홍삼, 전환, Rg3, Rh2, 유산균, 열처리

Description

발효인삼 또는 홍삼의 제조방법{Methods for Preparing Fermented Ginseng or Red Ginseng}

본 발명은 사포닌의 전환 방법, 발효 인삼 또는 홍삼의 제조방법 및 진세노사이드 Rg3 또는 Rh2의 인리치먼트 방법에 관한 것이다.

인삼은 식물 분류학상 오가피과(Panax)의 인삼속에 속하는 다년생 숙근초로서 지구상에 약 11종이 알려져 있다. 인삼은 지금까지 많은 약리실험을 통해 콜레스테롤 저하, 지질과산화 억제, 혈압강하, 혈류증가, 뇌혈관확장, 심장기능항진, 항부정맥, 항혈전, 혈소판응집 억제, 만성신부전 치료 효과, 세포독성 및 암 억제, 면역조절 작용, 기억력 증가, 뇌대사 항진, 항스트레스, 항산화 작용, 항노화 작용, 항궤양 및 위액분비 억제, 작업 능력 항진, 방사선에 대한 보호작용, 항당뇨, 해독, 간세포 효소 증가, 천식 치료, 항염증, 진통작용, 빈혈치료, 생식능력 증진 및 성수행능력 증진, 알코올 혈중농도 저하, 항알러지, 항암제 등의 활성을 가지고 있는 것으로 알려져 있다.

최근에는 이러한 인삼의 약효성분이 인체 내로 용이하게 흡수되도록 하며, 인삼에 극미량으로 존재하는 성분들을 강화시키는 방법으로서 인삼을 장내 미생물또는 유산균을 이용하여 발효하거나 및 효소를 처리하는 방법 등이 사용되고 있다.

대한민국 특허출원 공개 제2006-0001834호는 인삼 또는 홍삼에 김치 유산균을 접종하고 유기산을 처리하는 단계를 포함하는 발효인삼 또는 발효홍삼의 제조방법을 개시하고 있다. 대한민국 특허출원 공개 제2003-61756호는 인삼을 아스퍼질러스로 발효한 후 전분 분해효소 및 단백질 분해효소로 분해하는 것을 특징으로 하는 기능성 및 관능성이 우수한 인삼 발효액의 제조방법을 개시하고 있다.

또한, 대한민국 특허출원 공개 제2006-74970호는 락토바실러스 카제이 하세가와 균주로 인삼 내의 배당체 성분을 분해하여 얻은 분해물을 포함하는 발효인삼을 개시하고 있다. 대한민국 특허출원 공개 제1998-040224호는 다양한 락토바실러스 균주로 인삼을 발효하여 사포닌 분해물을 포함하는 발효인삼을 개시하고 있다.

본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.

본 발명자들은, 인삼 또는 홍삼에 포함되어 있는 사포닌, 즉 진세노사이드를 인체에 보다 유용한 형태로 전환(conversion)시킬 수 있는 방법을 개발하고자 예의 연구 노력한 결과, 인삼 또는 홍삼에 유산균을 접종하여 배양하고 배양물을 최종적으로 열처리하면 인삼 또는 홍삼 고유의 진세노사이드가 인체에 유용한 형태의 진세노사이드(특히, Rg3 및 Rh2)로 전환됨을 확인함으로써, 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 목적은 사포닌의 전환 방법을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은 발효 인삼 또는 홍삼의 제조방법을 제공하는 데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 진세노사이드 Rg3 또는 Rh2의 인리치먼트 방법을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은 진세노사이드 Rg3 또는 Rh2가 인리치먼트된 인삼 또는 홍삼액을 제공하는 데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 사포닌의 전환 방법에 이용되는 신규한 유산균을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.

본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 (a) 유산균을 인삼 또는 홍삼에 접종하는 단계; (b) 상기 유산균을 배양하는 단계; 및 (c) 상기 단계 (b)의 배양 결과물을 열처리하는 단계를 포함하는 사포닌의 전환 방법을 제공한다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 (a) 유산균을 인삼 또는 홍삼에 접종하는 단계; (b) 상기 유산균을 배양하는 단계; 및 (c) 상기 단계 (b)의 배양 결과물을 열처리하는 단계를 포함하는 발효 인삼 또는 홍삼의 제조방법을 제공한다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 (a) 유산균을 인삼 또는 홍삼에 접종하는 단계; (b) 상기 유산균을 배양하는 단계; 및 (c) 상기 단계 (b)의 배양 결과물을 열처리하는 단계를 포함하는 진세노사이드 Rg3 또는 Rh2의 인리치먼트(enrichment) 방법을 제공한다.

본 발명자들은, 인삼 또는 홍삼에 포함되어 있는 사포닌, 즉 진세노사이드를 인체에 보다 유용한 형태로 전환(conversion)시킬 수 있는 방법을 개발하고자 노력하였다. 그 결과, 인삼 또는 홍삼에 유산균을 접종하여 배양하고 배양물을 최종적으로 열처리하면 인삼 또는 홍삼 고유의 진세노사이드가 인체에 유용한 형태의 진세노사이드로 전환됨을 확인하였다.

본 발명은 인삼 또는 홍삼 고유의 진세노사이드(즉, 사포닌)을 전환하는 방 법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 홍삼의 주 효능 진세노사이드, 즉 Rg3 및 Rh2를 인리치먼트(enrichment)할 수 있는 방법에 관한 것이다.

본 명세서에서 용어 “사포닌”은 특별하게 다른 언급이 없는 한, 진세노사이드, 즉 인삼사포닌과 동일한 의미로 사용되고 있다.

본 명세서에서, 본 발명은 “사포닌의 전환 방법”, “발효 인삼 또는 홍삼의 제조방법” 및 “진세노사이드 Rg3 또는 Rh2의 인리치먼트 방법”으로 표현되고 있으나, 상기 3가지 방법은 서로 동일한 과정을 공유하고 있기 때문에 실질적으로는 동일한 방법으로 취급될 수 있다.

기재의 편의상, 본 발명의 방법은 인삼 또는 홍삼에 적용되는 것으로 본 명세서에 기재되어 있다. 그러나, 본 발명은 다양한 형태로 가공된 모든 인삼, 예컨대, 수삼, 미삼, 백삼 및 홍삼에 적용될 수 있으며, 이는 본 발명의 범위에 포함된다는 것은 당업자에게 명확하다.

본 발명의 방법의 각 단계를 언급하면서 사용되는 용어 “인삼”은 홍삼을 만들기 위한 처리를 하지 않은 인삼을 의미한다. 인삼은 홍삼과 비교하여 진세노사이드 Rg3 및 Rh2의 함량이 낮은 특징이 있다.

본 발명에서 이용되는 인삼으로는, 공지된 다양한 인삼을 사용할 수 있으며, 고려삼(Panax ginseng), 회기삼(P. quiquefolius), 전칠삼(P. notoginseng), 죽절삼(P. japonicus), 삼엽삼(P. trifolium), 히말라야삼(P. pseudoginseng) 및 베트남삼(P. vietnamensis)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 본 발명에서 이용되는 홍삼은 상기 인삼을 가공처리 하여 제조된 것이다. 바람직하게는, 본 발명에 서 이용되는 인삼은 고려삼(Panax ginseng) 또는 전칠삼(P. notoginseng)이다.

본 발명의 방법에 따르면, 우선 유산균을 인삼 또는 홍삼에 접종한다.

본 발명에 적합한 유산균은 당업계에 공지된 다양한 유산균을 포함한다. 본 명세서에서 용어 “유산균(lactic acid bacteria)”은 탄수화물 대사의 주산물로서 유산을 생산하는 박테리아 군을 의미한다. 바람직하게는, 본 발명에서 이용되는 유산균은, 락토코커스(Lactococcus), 락토바실러스(Lactobacillus), 류코노스톡(Leuconostoc), 프로리오니박테리움(Propionibacterium), 엔테로코커스(Enterococcus), 비피도박테리움(Bifidobacterium), 스트렙토코커스(Streptococcus) 및 페디오코커스(Pediococcus)으로 구성된 군으로부터 선택되는 유산균이다. 보다 바람직하게는, 본 발명에서 이용되는 유산균은 락토바실러스 알리멘타리우스(Lactobacillus alimentarius), 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei), 락토바실러스 아시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri), 락토바실러스 델브루엑키(Lactobacillus delbrueckii), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus), 락토바실러스 헬베티쿠스(Lactobacillus helveticus), 류코노스톡 멘센테로이드스(Leuconostoc mensenteroides), 스트렙토코커스 서모필러스(Streptococcus thermophilus), 스트렙토코커스 락티스(Streptococcus lactis), 엔테로코커스 파에시엄(Enterococcus faecium), 엔테로코커스 파에칼리스(Enterococcus faecalis), 비피도박테리엄 비피덤(Bifidobacterium bifidum), 비 피도박테리엄 인판티스(Bifidobacterium infantis), 비피도박테리엄 브라베(Bifidobacterium brave) 및 비피도박테리엄 롱검(Bifidobacterium longum)으로 구성된 군으로부터 선택되는 유산균이다. 보다 더 바람직하게는, 상기 유산균은 락토바실러스 알리멘타리우스(Lactobacillus alimentarius) M-2 균주(KCTC 11054 BP) 또는 류코노스톡 멘센테로이드스(Leuconostoc mensenteroides) M-3 균주(KCTC 11055 BP)이며, 가장 바람직하게는 락토바실러스 알리멘타리우스(Lactobacillus alimentarius) M-2 균주(KCTC 11054 BP)이다. 하기의 실시예에서 입증된 바와 같이, 본 발명의 락토바실러스 알리멘타리우스(Lactobacillus alimentarius) M-2 균주(KCTC 11054 BP)를 이용하면, 류코노스톡 멘센테로이드스(Leuconostoc mensenteroides) M-3 균주(KCTC 11055 BP)를 이용한 경우보다 Rg3 및 Rh2의 인리치먼트 효율이 더욱 우수하다.

본 발명에 따르면, 유산균은 상술한 유산균의 1종 또는 1종 이상의 혼합 유산균을 이용할 수 있다.

유산균의 접종은 인삼 또는 홍삼의 추출액에 할 수 있고, 혹은 인삼 또는 홍삼 뿌리의 절편이 침지된 물에 할 수도 있다. 유산균의 접종량은 특별히 제한되지 않으며, 인삼 또는 홍삼의 추출액 전체 부피에 대하여 0.5-10 %(v/v)가 바람직하며, 보다 바람직하게는 1-5 %(v/v)이다.

유산균을 접종한 다음 이 유산균을 적합한 조건 하에서 배양한다. 이 경우, 이용되는 배지는 인삼 또는 홍삼의 추출액 자체, 또는 인삼 또는 홍삼 뿌리의 절편이 침지된 물 자체를 이용하는 것이 바람직하다. 상기 인삼 또는 홍삼 성분 이외의 다른 배지 성분이 포함되면, 최종 산물의 질이 떨어지는 문제점이 있다. 본 발명에서의 유산균 배양은 통상적인 유산균 배양 조건에서 실시된다.

인삼 또는 홍삼에 접종한 유산균을 배양한 다음, 배양 결과물을 열처리한다. 본 발명의 방법에서, 단계 (c)는 본 발명에서 가장 큰 특징 중 하나이다.

종래 기술들은, 인삼 또는 홍삼에 유산균을 접종하여 배양하면 생물전환(bioconversion)된 진세노사이드가 얻을 수 있다고 발표하고 있다(참고: 대한민국 특허 제517899호, 특허 제497895호, 대한민국 특허출원 공개 제2006-0000488호, 대한민국 특허출원 공개 제1998-040224호 및 대한민국 특허출원 공개 제2003-0041923호).

그러나, 상술한 종래기술과 상반되게, 본 발명자들은 본 발명을 통하여, 인삼 또는 홍삼에 접종된 유산균이 진세노사이드를 거의 대사하지 않는다는 것을 제시한다. 만일, 유산균이 진세노사이드를 대사하여 진세노사이드의 생물전환을 유도한다 하여도 그 양은 미량일 것으로 판단된다.

본 발명자들은, 본 발명을 통하여, 진세노사이드의 전환과 관련하여 다음과 같은 새로운 이론을 제시한다: 인삼 또는 홍삼에 접종되어 배양된 유산균은 유산균 고유의 대사산물을 생성하며, 이 대사산물이 진세노사이드에 작용하여 진세노사이드의 전환을 유도한다. 상기 열처리는 이러한 진세노사이드의 전환을 매우 효율적으로 이루어지도록 한다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 단계 (c)의 열처리는 90-180℃, 보다 바람직하게는 100-150℃, 가장 바람직하게는 110-130℃에서 실시된다. 만일, 열 처리를 90℃ 미만에서 하면, 진세노사이드의 전환율이 매우 낮아지며, 180℃ 초과에서 하면, 진세노사이드 및 기타 유용성분들이 파쇄 되는 문제점이 있다.

단계 (c)의 열처리는, 매우 짧은 시간 동안 실시된다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 단계 (c)의 열처리는 1-90분, 보다 바람직하게는 5-40분, 가장 바람직하게는 5-25분 동안 실시된다.

단계 (c)의 열처리는 대기압 하에서 실시될 수 있으나, 바람직하게는 대기압보다 높은 기압 하에서 실시된다. 보다 바람직하게는, 단계 (c)의 열처리는 1.1-3.0 기압, 보다 더 바람직하게는 1.2-2.0 기압, 가장 바람직하게는 1.2-1.8 기압에서 실시된다.

상술한 과정을 통하여, 인삼 또는 홍삼 고유의 진세노사이드가 전환된 인삼 또는 홍삼액, 즉 Rg3 또는 Rh2가 인리치먼트된 인삼 또는 홍삼액을 얻을 수 있다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 단계 (c)의 결과물은 상기 단계 (a)의 인삼 또는 홍삼과 비교하여 3-15배, 보다 바람직하게는 8-13배의 진세노사이드 Rg3를 포함한다. 인삼과 홍삼을 나누어 설명하면, 인삼의 경우 본 발명의 처리를 받으면 진세노사이드 Rg3의 함량이 6-15배, 바람직하게는 8-13배 증가한다. 홍삼의 경우 본 발명에 따른 처리를 받으면 진세노사이드 Rg3의 함량이 3-8배, 바람직하게는 3-5배 증가한다. Rg3는 홍삼에서 중요한 생리활성 진세노사이드로 알려져 있으며, 강력한 혈관이완효과를 가지고 있어 순환기계 장애로 인한 고혈압, 동맥경화, 혈액순환장애, 당뇨병, 성기능장애 및 기억력장애 등의 질환에 대한 예방 및 치료제로서 유용하게 사용될 수 있는 진세노사이드이다.

본 발명의 방법에 의해 Rh2도 크게 인리치먼트 된다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 단계 (c)의 결과물은 상기 단계 (a)의 인삼 또는 홍삼과 비교하여 5-20배, 보다 바람직하게는 10-16배의 진세노사이드 Rh2를 포함한다. 인삼과 홍삼을 나누어 설명하면, 인삼의 경우 본 발명의 처리를 받으면 진세노사이드 Rh2의 함량이 8-20배, 바람직하게는 12-20배 증가한다. 홍삼의 경우 본 발명에 따른 처리를 받으면 진세노사이드 Rh2의 함량이 5-10배 증가한다. Rh2는 암세포 증식 억제, 암세포 침윤 억제, 종양증식 억제, 항암제의 항암활성 증대 및 알러지 억제 작용을 하는 것으로 알려져 있는 진세노사이드이다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 인삼 또는 홍삼액에 포함되어 있는 진세노사이드 Rh1, Rb2, Rc, Rg1, Re, Rg3 및 Rh2의 총 함량에 대한 진세노사이드 Rg3 및 Rh2의 함량의 비가 0.7-0.95인 것을 특징으로 하는 인삼 또는 홍삼액을 제공한다.

본 발명의 인삼 또는 홍삼액은 진세노사이드 Rg3 및 Rh2가 크게 인리치먼트된 것이다. 본 발명의 경우, 진세노사이드 Rg3 및 Rh2를 최대 0.95의 함량비로 포함한다. 이와 같은 높은 진세노사이드 Rg3 및 Rh2의 함량비는 아직까지 발표된 바 없다.

본 명세서에서, 용어 “인삼 또는 홍삼액”은 인삼 또는 홍삼의 추출액 및 침출액 등, 인삼 또는 홍삼으로부터 유래되는 모든 액체를 의미한다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 진세노사이드 Rh1, Rb2, Rc, Rg1, Re, Rg3 및 Rh2의 총 함량에 대한 진세노사이드 Rg3 및 Rh2의 함량의 비는 0.9-0.95이다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 김치로부터 분리된 락토바실러스 알리멘타리우스(Lactobacillus alimentarius) M-2 균주(KCTC 11054 BP) 또는 류코노스톡 멘센테로이드스(Leuconostoc mensenteroides) M-3 균주(KCTC 11055 BP)를 제공한다.

본 발명자들에 의해 분리되고 동정된 상기 유산균은 진세노사이드의 전환에 매우 유용하다.

본 발명에 따르면, 비교적 간단한 공정으로 인삼 또는 홍삼 고유의 진세노사이드를 전환하여, Rg3 및/또는 Rh2가 인리치먼트된 인삼 또는 홍삼액을 얻을 수 있다.

이상에서 상세히 설명한 바와 같이, 본 발명은 사포닌의 전환 방법, 발효 인삼 또는 홍삼의 제조방법 및 진세노사이드 Rg3 또는 Rh2의 인리치먼트 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 상술한 방법에 이용되는 신규한 유산균을 제공한다. 본 발명에 따르면, 비교적 간단한 공정으로 인삼 또는 홍삼 고유의 진세노사이드를 전환하여, Rg3 및/또는 Rh2가 인리치먼트된 인삼 또는 홍삼액을 얻을 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

실시예

실시예 1: 김치 유산균의 분리

수 종의 김치액을 수집하여 분리를 수행할 때까지 4℃에 냉장 보관하였다. 수집된 김치액을 균일하게 교반한 다음, 0.9% 멸균생리식염수를 이용하여 계단 희석(10^-2, 10^-4, 10^-6및 10^-8)하고, 유산균 분리용 배지인 MRS(deMan Rogosa Sharpe, Difco^TM, Becton Dickinson and Company, USA)-BCP(Bromocresol Purple) 평판배지에 도말하였다. 도말한 배지는 30℃에서 집락의 형성을 관찰하며 유의한 수준의 집락이 형성될 때까지 24-48시간 동안 배양하였다. 단일 집락으로서 구분 가능한 수준의 희석 농도의 배지에서 원래 배지의 색인 보라색이 균주의 젖산 형성을 통해 노란색의 집락 및 경계를 형성하는 균주들을 무작위로 선발하여 김치 유산균으로 간주하였다. 선택된 집락들을 다시 MRS-BCP 평판 배지에 계대배양하여 단일 집락임을 재차 확인하고, 이렇게 단일 집락으로 확인된 균주들에 대해서 활성(홍삼 농 축액에 대한 대사 관련 활성)을 측정하고 확인된 유용 균주를 동정하였다.

실시예 2: 16S rRNA 유전자 염기 서열 분석에 의한 균주 동정

분리된 2종의 미생물의 16S rRNA 유전자 서열을 분석함으로써 본 발명의 미생물을 동정하였다. 16S rRNA 유전자 서열 분석은, Lane, D. J. (1991), 16S/23S sequencing. In: Nucleic Acids Techniques in Bacterial Systematics, Eds.: Stackebrandt, E. and Goodfellow, M. pp. 115-175, John Wiley and Sons, New York 및 Harju, S., et al., 2004, Rapid isolation of yeast genomic DNA: Bust n' Grab. BMC Biotech. 21:4-8에 개시된 방법에 따라 실시하였다.

상기 2종의 미생물을 MRS 액체 배지 10 ml에 접종하고 회전식 배양기 내에서 80 rpm의 회전을 주며 30℃에서 2일간 배양하였다. 상기 배양액 1 ㎖을 1.5 ㎖ 원심분리 튜브에 넣고 15,000 x g로 5분간 원심분리 하였다. 게놈 DNA를 추출하기 위해서 상층액을 제거한 후 튜브에 라이시스 완충액(2 %(v/v) Triton X-100, 1% (w/v) SDS, 100 mM NaCl, 10 mM Tris-Cl 및 1 mM EDTA; pH 8.0) 200 ㎕를 첨가하여 균질한 상태로 만든 뒤, 상기 튜브를 -80℃에서 4분간 얼리고 곧 이어 끓는 물에서 다시 2분간 중탕하였다. 이렇게 얼리고 녹이는 과정을 두 차례 수행한 뒤, 30초간 볼텍싱 하였다. 그리고 200 ㎕의 클로로포름을 넣고 다시 2분간 볼텍싱한 뒤, 4℃에서 15,000 x g로 5분간 원심분리 하였다. 상층액만 분리하여 2 ㎕의 RNaseI 용액(mg/ml)을 처리한 후 에탄올 침전법을 이용하여 게놈 DNA를 분리하고 TE 용액 200 ㎕에 용해하고, 이를 16S rRNA 유전자를 증폭하는 데에 사용하였다.

상기 미생물의 염색체 DNA로부터 16S rRNA 유전자를 프라이머 8F(AGAGTTTGATCCTGGCTCAG)와 1541R(AAGGAGGTGATCCAGCC)을 사용하여 PCR 증폭하였다. 증폭을 위한 PCR 프로그램은 다음과 같이 수행하였다. 94℃에서 5분 동안 반응시킨 다음 94℃에서 30초, 55℃에서 40초 및 72℃에서 1분 30초로 이루어진 사이클을 35회 반복하고 최종 신장 단계로서 72℃에서 5분간 반응시켰다. 게놈 DNA로부터 증폭된 PCR 산물을 Accu Prep gel 정제 키트(Accu. Chem. Sci. Corp. Westbury, N.Y.)를 사용하여 정제하였다. 이렇게 얻어진 각각의 PCR 증폭 산물을 각각 pPCR2.1-TOPO 벡터(Invitrogen, USA)에 도입하고 이 벡터를 이용하여 E. coli DH5a(Real Biotech, Inc., Taiwan)를 형질 전환하였다. 유효한 E. coli DH5a 균주를 확인한 후 여기에서 플라스미드를 분리 정제하였다. 이렇게 해서 얻어진 플라스미드인 pM-2 및 pM-3에 있는 16S rRNA의 시퀀싱을 실시하였다. 상기 2종의 미생물의 16S rRNA 서열은 서열목록 제1서열-제2서열에 기재되어 있다. 차례로 각각 1559 bp 및 1543 bp에 해당하는 16S rRNA의 유전자 서열을 BLAST를 사용하여 상동성을 비교하였다.

실험 결과, 본 발명의 2종 미생물들에 있어서, M-2 균주는 Lactobacillus alimentarius와 99%, M-3 균주는 Leuconostoc mesenteroides와 99%의 상동성을 나타냈다.

실시예 3: 당 발효능 분석(생화학적 특성 규명)

16S rRNA 유전자의 염기서열 분석을 통하여 유산균으로 평가된 M-2 및 M-3 균주에 대하여, API 50 CHL 키트(BioMerieux, France)를 이용하여 49종의 당에 대한 발효 검사를 실시하였고, 그 결과는 표 1-2에 정리되어 있다. 하기 표 1a-1b는 Lactobacillus alimentarius M-2 균주, 표 2a-2b는 Leuconostoc mesenteroides M-3 균주에 대한 것이다.

1	글라이세롤 (Glycerol)	-
2	에리스리톨 (Erythritol)	-
3	D-아라비노즈 (D-Arabinose)	-
4	L-아라비노즈 (L-Arabinose)	+
5	D-리보스 (D-Ribose)	+
6	D-자일로스 (D-Xylose)	-
7	L-자일로스 (L-Xylose)	-
8	D-아도니톨 (D-Adonitol)	-
9	메틸-bD-자일로피라노사이드 (Methyl-bD-Xylopyranoside)	-
10	D-갈락토스 (D-Galactose)	-
11	D-글루코스 (D-Glucose)	+
12	D-프록토스 (D-Fructose)	+
13	D-만노스 (D-Mannose)	+
14	L-소르보스 (L-Sorbose)	-
15	L-람노스 (L-Rhamnose)	-
16	둘시톨 (Dulcitol)	-
17	이노시톨 (Inositol)	-
18	D-만니톨 (D-Mannitol)	-
19	D-소르비톨 (D-Sorbitol)	-
20	메틸-aD-만노피라노사이드 (Methyl-aD-Mannopyranoside)	-
21	메틸-aD-글루코피라노사이드 (Methyl-aD-Glucopyranoside)	w
22	N-아세틸글루코사민 (N-Acetylglucosamine)	+
23	아미그달린 (Amygdalin)	+
24	아르부틴 (Arbutin)	+
25	에스큘린 페릭 시트레이트 (Esculin ferric citrate)	+

26	살리신 (Salicin)	+
27	D-셀로비오스 (D-Cellobiose)	+
28	D-말토스 (D-Maltose)	+
29	D-락토스 (D-Lactose)	-
30	D-멜리비오스 (D-Melibiose)	-
31	D-사카로스 (D-Saccharose)	+
32	D-트레할로스 (D-Trehalose)	+
33	이눌린 (Inulin)	-
34	D-멜리지토스 (D-Melezitose)	-
35	D-라피노스 (D-Raffinose)	-
36	아미돈 (전분) (Amidon (starch))	w
37	글라이코겐 (Glycogen)	-
38	자일리톨 (Xylitol)	-
39	젠티오비오스 (Gentiobiose)	+
40	D-투란노스 (D-Turanose)	-
41	D-락소스 (D-Lyxose)	-
42	D-타가토스 (D-Tagatose)	-
43	D-퓨코스 (D-Fucose)	-
44	L-퓨코스 (L-Fucose)	-
45	D-아라비톨 (D-Arabitol)	-
46	L-아라비톨 (L-Arabitol)	-
47	포타슘 글루코네이트 (Potassium Gluconate)	+
48	포타슘 2-케토글루코네이트 (Potassium 2-Ketogluconate)	-
49	포타슘 5-케토글루코네이트 (Potassium 5-Ketogluconate)	-

1	글라이세롤 (Glycerol)	-
2	에리스리톨 (Erythritol)	-
3	D-아라비노즈 (D-Arabinose)	-
4	L-아라비노즈 (L-Arabinose)	+
5	D-리보스 (D-Ribose)	+
6	D-자일로스 (D-Xylose)	+
7	L-자일로스 (L-Xylose)	-
8	D-아도니톨 (D-Adonitol)	-
9	메틸-bD-자일로피라노사이드 (Methyl-bD-Xylopyranoside)	-
10	D-갈락토스 (D-Galactose)	+
11	D-글루코스 (D-Glucose)	+
12	D-프록토스 (D-Fructose)	+
13	D-만노스 (D-Mannose)	+
14	L-소르보스 (L-Sorbose)	-
15	L-람노스 (L-Rhamnose)	-
16	둘시톨 (Dulcitol)	-
17	이노시톨 (Inositol)	-
18	D-만니톨 (D-Mannitol)	w
19	D-소르비톨 (D-Sorbitol)	-
20	메틸-aD-만노피라노사이드 (Methyl-aD-Mannopyranoside)	-
21	메틸-aD-글루코피라노사이드 (Methyl-aD-Glucopyranoside)	+
22	N-아세틸글루코사민 (N-Acetylglucosamine)	+
23	아미그달린 (Amygdalin)	+
24	아르부틴 (Arbutin)	+
25	에스큘린 페릭 시트레이트 (Esculin ferric citrate)	+

26	살리신 (Salicin)	+
27	D-셀로비오스 (D-Cellobiose)	+
28	D-말토스 (D-Maltose)	+
29	D-락토스 (D-Lactose)	+
30	D-멜리비오스 (D-Melibiose)	+
31	D-사카로스 (D-Saccharose)	+
32	D-트레할로스 (D-Trehalose)	+
33	이눌린 (Inulin)	-
34	D-멜리지토스 (D-Melezitose)	-
35	D-라피노스 (D-Raffinose)	+
36	아미돈 (전분) (Amidon (starch))	-
37	글라이코겐 (Glycogen)	-
38	자일리톨 (Xylitol)	-
39	젠티오비오스 (Gentiobiose)	w
40	D-투란노스 (D-Turanose)	+
41	D-락소스 (D-Lyxose)	-
42	D-타가토스 (D-Tagatose)	-
43	D-퓨코스 (D-Fucose)	-
44	L-퓨코스 (L-Fucose)	-
45	D-아라비톨 (D-Arabitol)	-
46	L-아라비톨 (L-Arabitol)	-
47	포타슘 글루코네이트 (Potassium Gluconate)	+
48	포타슘 2-케토글루코네이트 (Potassium 2-Ketogluconate)	-
49	포타슘 5-케토글루코네이트 (Potassium 5-Ketogluconate)	+

상기 표에서 “+”당을 이용하여 발효한 것, “-”는 해당하는 당을 이용하여 발효하지 못한 것, w는 약간의 당만을 이용하여 발효한 것을 나타낸다.

실시예 4: 발효 인삼의 제조

인삼 농축액을 증류수로 10배 희석한 후 121℃, 1.5 기압 하에서 15분간 고온 가압 처리하여 멸균하였다. 이어, 멸균된 인삼 농축액에 본 발명의 Lactobacillus alimentarius M-2 또는 Leuconostoc mensenteroides M-3 균주를 접종하였다. 접종량은 인삼 농축액의 전체 부피에 대하여 1%(v/v)(10⁷-10⁸ cfu에 해당됨)로 하였다. 접종 후, 30℃에서 120시간 동안 배양하였다. 그런 다음, 본 발명의 균주에 의해 생물전환된 사포닌을 분석하였다. 컬럼에 물로 팽윤시킨 HP-20(Diaion사, 일본)을 충진하고 여기에 상기 발효 결과물을 로딩하여 HP-20에 흡착시켰다. 이어, 충진제의 2-3배의 물을 첨가하여 세척함으로써, 흡착된 사포닌 이외의 성분을 제거한 후 흡착된 사포닌을 주정으로 탈착하여 회수하였다. 회수한 추출물을 농축한 후 부탄올을 이용하여 층 분리를 하고 부탄올 층을 감암 농축하였다. 상기 부탄올 층을 HPLC로 분석 하였다. HPLC 분석은, Jasco LC-2000Plus Series HPLC(Jasco, 일본)를 사용하여 실시하였고, 컬럼은 Merck Chromolith Performance RP-18e(4.6 x 100mm, 2micron), 컬럼의 오븐 온도는 30℃, 샘플의 로딩양은 10 ㎕로 하였다. 이동상으로는 100% 물과 100% 아세트니트릴로 75분간 농도구배 하여 얻었다. 유속은 분당 2.5 ml로 하였으며, 203 nm에서 검출하였다. 실험 결과는 다음 표 3-4에 정리되어 있다.

실시예 5: 발효 홍삼의 제조

홍삼 농축액을 증류수로 10배 정도 희석한 후 121℃, 1.5 기압 하에서 15분간 고온 가압 처리하여 멸균하였다. 이어, 멸균된 홍삼 농축액에 본 발명의 Lactobacillus alimentarius M-2 또는 Leuconostoc mensenteroides M-3 균주를 접종하였다. 접종량은 홍삼 농축액의 전체 중량에 대하여 1%(v/v)로 하였다. 접종 후, 30℃에서 120시간 동안 배양하였다. 그런 다음, 본 발명의 균주에 의해 생물전환된 사포닌을 상기 실시예 4와 동일한 방법으로 실시하였다. 실험 결과는 다음 표 3-4에 정리되어 있다.

인삼 및 홍삼의 발효 반응 후 사포닌 함량(M-2 균주)

성분명	함량(중량%)
성분명	인삼	발효인삼	홍삼	발효홍삼
진세노사이드 Rb1	10.48	2.01	8.30	1.95
진세노사이드 Rb2	5.94	1.02	3.32	1.17
진세노사이드 Rc	5.80	0.43	0.42	0.20
진세노사이드 Rg1	2.84	0.15	2.85	0.70
진세노사이드 Re	5.74	0.22	4.85	0.37
진세노사이드 Rg3	1.22	13.67	3.28	13.25
진세노사이드 Rh2	2.05	29.20	4.58	30.09

상기 표 3에서 확인할 수 있듯이, 진세노사이드 Rb1, Rb2, Rc, Rg1 및 Re는 비처리 인삼 및 비처리 홍삼과 비교하여 발효 인삼 및 발효 홍삼에서 모두 양이 감소하였으나, Rg3 및 Rh2의 양은 크게 증가하였다. 비처리 인삼과 비교하여 발효 인삼의 Rg3 및 Rh2 양은 각각 약 11.2배 및 약 14.2배 정도 증가하였다. 비처리 홍삼과 비교하여 발효 홍삼의 Rg3 및 Rh2 양은 각각 약 4.0배 및 약 6.6배 정도 증가하였다. 진세노사이드 Rh1, Rb2, Rc, Rg1, Re, Rg3 및 Rh2의 총 함량에 대한 진세노사이드 Rg3 및 Rh2의 함량의 비는 발효인삼 및 발효홍삼의 경우 각각 약 0.92 및 0.91로써, 매우 높은 함량비를 나타낸다.

인삼 및 홍삼의 발효 반응 후 사포닌 함량(M-3 균주)

성분명	함량(중량%)
성분명	인삼	발효인삼	홍삼	발효홍삼
진세노사이드 Rb1	10.48	3.30	8.30	2.63
진세노사이드 Rb2	5.94	2.21	3.32	1.41
진세노사이드 Rc	5.80	1.24	0.42	0.19
진세노사이드 Rg1	2.84	0.98	2.85	0.85
진세노사이드 Re	5.74	1.14	4.85	0.43
진세노사이드 Rg3	1.22	10.34	3.28	12.98
진세노사이드 Rh2	2.05	25.16	4.58	24.88

상기 표 4에서 확인할 수 있듯이, 진세노사이드 Rb1, Rb2, Rc, Rg1 및 Re는 비처리 인삼 및 비처리 홍삼과 비교하여 발효 인삼 및 발효 홍삼에서 모두 양이 감소하였으나, Rg3 및 Rh2의 양은 크게 증가하였다. 비처리 인삼과 비교하여 발효 인삼의 Rg3 및 Rh2 양은 각각 약 8.5배 및 약 12.3배 정도 증가하였다. 비처리 홍삼과 비교하여 발효 홍삼의 Rg3 및 Rh2 양은 각각 약 3.9배 및 약 5.4배 정도 증가하였다. Rg3 및 Rh2의 함량의 증가는, 상기의 락토바실러스 알리멘타리우스(Lactobacillus alimentarius) M-2 균주보다 조금 낮았다. 진세노사이드 Rh1, Rb2, Rc, Rg1, Re, Rg3 및 Rh2의 총 함량에 대한 진세노사이드 Rg3 및 Rh2의 함량의 비는 발효인삼 및 발효홍삼의 경우 각각 약 0.8 및 0.87로써, 매우 높은 함량비를 나타낸다.

실시예 6: 균주의 기탁

상기 실시예에서 분리되고 동정된 균주의 특성을 조사하였고, 이 균주들, 즉 Lactobacillus alimentarius M-2 및 Leuconostoc mensenteroides M-3 균주 각각을 기탁기관 한국유전자은행에 2006년 12월 22일자로 기탁하고, 기탁번호 KCTC 11054 BP 및 KCTC 11055 BP를 부여받았다.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현 예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

<110> Metabolic Engineering Laboratories, Inc. <120> Methods for Preparing Fermented Ginseng or Red Ginseng <160> 2 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 1559 <212> DNA <213> Lactobacillus alimentarius M-2 <400> 1 agagtttgat cctggctcag gacgaacgct ggcggcatgc ctaatacatg caagtcgaac 60 gaactttcct tttgattgat gcttgcatca tgatttagat ctaagtgagt ggcggacggg 120 tgagtaacac gtgggtaacc tgcccagaag tgggggataa catttggaaa caagtgctaa 180 taccgcataa caacattaaa cacatgtttt ttgtttaaaa gatggttttg ctatctcttc 240 tggatggacc cgcggcgtat tagctagttg gtgaggtaat agctcaccaa ggcgatgata 300 cgtagccgac ctgagagggt aatcggccac attgggactg agacacggcc caaactccta 360 cgggaggcag cagtagggaa tcttccacaa tggacgaaag tctgatggag caatgccgcg 420 tgagtgaaga aggttttcgg atcgtaaaac tctgttgttg aagaagaaca tatgtgagag 480 taactgttca cgtactgacg gtattcaacc agaaagccac ggctaactac gtgccagcag 540 ccgcggtaat acgtaggtgg caagcgttgt ccggatttat tgggcgtaaa gagaatgtag 600 gcggttcatt aagtttgaag tgaaagccct cggctcaacc gaggaagtgc ttcgaaaact 660 ggtgaacttg agtgcagaag aggaaagtgg aactccatgt gtagcggtgg aatgcgtaga 720 tatatggaag aacaccagtg gcgaaggcgg ctttctggtc tgtaactgac gctgagattc 780 gaaagcatgg gtagcaaaca ggattagata ccctggtagt ccatgccgta aacgatgagt 840 gctaagtgtt ggagggtttc cgcccttcag tgctgcagct aacgcattaa gcactccgcc 900 tggggagtac gatcgcaaga ttgaaactca aaggaattga cgggggcccg cacaagcggt 960 ggagcatgtg gtttaattcg aagcaacgcg aagaacctta ccaggtcttg acataccatg 1020 aaaagctaag agattagtct ttcccttcgg ggacatggat acaggtggtg catggttgtc 1080 gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgcaac gagcgcaacc cttattatca 1140 gttgccagca ttcagttggg cactctggtg agactgccgg tgataaaccg gaggaaggtg 1200 gggacgacgt caaatcatca tgccccttat gacctgggct acacacgtgc tacaatggtc 1260 ggtacaacgt gttgcgaact cgcgagggca agcaaatcac ttaaaaccga tctcagttcg 1320 gattgcaggc tgcaactcgc ctgcatgaag ctggaatcgc tagtaatcgc ggatcagcat 1380 gccgcggtga atacgttccc gggccttgta cacaccgccc gtcacaccat gagagtttgt 1440 aacacccaaa gtcggtgggg taacccttcg gggaactagc cgcctaaggt gggacaaatg 1500 attagggtga agtcgtaaca aggtagccgt aggagaacct gcggctggat cacctcctt 1559 <210> 2 <211> 1543 <212> DNA <213> Leuconostoc mesenteroides M-3 <400> 2 agagtttgat cctggctcag gatgaacgct ggcggcgtgc ctaatacatg caagtcgaac 60 gcacagcgaa aggtgcttgc gcctttcaag tgagtggcga acgggtgagt aacacgtgga 120 caacctgcct caaggctggg gataacattt ggaaacagat gctaataccg aataaaactt 180 agtgtcgcat gacaaaaagt taaaaggcgc ttcggcgtca cctagagatg gatccgcggt 240 gcattagtta gttggtgggg taaaggccta ccaagacaat gatgcatagc cgagttgaga 300 gactgatcgg ccacattggg actgagacac ggcccaaact cctacgggag gctgcagtag 360 ggaatcttcc acaatgggcg aaagcctgat ggagcaacgc cgcgtgtgtg atgaaggctt 420 tcgggtcgta aagcactgtt gtatgggaag aacagctaga ataggaaatg attttagttt 480 gacggtacca taccagaaag ggacggctaa atacgtgcca gcagccgcgg taatacgtat 540 gtcccgagcg ttatccggat ttattgggcg taaagcgagc gcagacggtt tattaagtct 600 gatgtgaaag cccggagctc aactccggaa tggcattgga aactggttaa cttgagtgca 660 gtagaggtaa gtggaactcc atgtgtagcg gtggaatgcg tagatatatg gaagaacacc 720 agtggcgaag gcggcttact ggactgcaac tgacgttgag gctcgaaagt gtgggtagca 780 aacaggatta gataccctgg tagtccacac cgtaaacgat gaacactagg tgttaggagg 840 tttccgcctc ttagtgccga agctaacgca ttaagtgttc cgcctgggga gtacgaccgc 900 aaggttgaaa ctcaaaggaa ttgacgggga cccgcacaag cggtggagca tgtggtttaa 960 ttcgaagcaa cgcgaagaac cttaccaggt cttgacatcc tttgaagctt ttagagatag 1020 aagtgttctc ttcggagaca aagtgacagg tggtgcatgg tcgtcgtcag ctcgtgtcgt 1080 gagatgttgg gttaagtccc gcaacgagcg caacccttat tgttagttgc cagcattcag 1140 atgggcactc tagcgagact gccggtgaca aaccggagga aggcggggac gacgtcagat 1200 catcatgccc cttatgacct gggctacaca cgtgctacaa tggcgtatac aacgagttgc 1260 caacccgcga gggtgagcta atctcttaaa gtacgtctca gttcggattg tagtctgcaa 1320 ctcgactaca tgaagtcgga atcgctagta atcgcggatc agcacgccgc ggtgaatacg 1380 ttcccgggtc ttgtacacac cgcccgtcac accatgggag tttgtaatgc ccaaagccgg 1440 tggcctaacc ttttaggaag gagccgtcta aggcaggaca gatgactggg gtgaagtcgt 1500 aacaaggtag ccgtaggaga acctgcggct ggatcacctc ctt 1543

Claims

(a) 유산균을 인삼 또는 홍삼에 접종하는 단계; (b) 상기 유산균을 배양하는 단계; 및 (c) 상기 단계 (b)의 배양 결과물을 열처리하는 단계를 포함하는 사포닌의 전환 방법.
(a) 유산균을 인삼 또는 홍삼에 접종하는 단계; (b) 상기 유산균을 배양하는 단계; 및 (c) 상기 단계 (b)의 배양 결과물을 열처리하는 단계를 포함하는 발효 인삼 또는 홍삼의 제조방법.
(a) 유산균을 인삼 또는 홍삼에 접종하는 단계; (b) 상기 유산균을 배양하는 단계; 및 (c) 상기 단계 (b)의 배양 결과물을 열처리하는 단계를 포함하는 진세노사이드 Rg3 또는 Rh2의 인리치먼트(enrichment) 방법.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유산균은 락토코커스(Lactococcus), 락토바실러스(Lactobacillus), 류코노스톡(Leuconostoc), 프로리오니박테리움(Propionibacterium), 엔테로코커스(Enterococcus), 비피도박테리 움(Bifidobacterium), 스트렙토코커스(Streptococcus) 및 페디오코커스(Pediococcus)으로 구성된 군으로부터 선택되는 유산균인 것을 특징으로 하는 방법.
제 4 항에 있어서, 상기 유산균은 락토바실러스 알리멘타리우스(Lactobacillus alimentarius), 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei), 락토바실러스 아시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri), 락토바실러스 델브루엑키(Lactobacillus delbrueckii), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus), 락토바실러스 헬베티쿠스(Lactobacillus helveticus), 류코노스톡 멘센테로이드스(Leuconostoc mensenteroides), 스트렙토코커스 서모필러스(Streptococcus thermophilus), 스트렙토코커스 락티스(Streptococcus lactis), 엔테로코커스 파에시엄(Enterococcus faecium), 엔테로코커스 파에칼리스(Enterococcus faecalis), 비피도박테리엄 비피덤(Bifidobacterium bifidum), 비피도박테리엄 인판티스(Bifidobacterium infantis), 비피도박테리엄 브라베(Bifidobacterium brave) 및 비피도박테리엄 롱검(Bifidobacterium longum)으로 구성된 군으로부터 선택되는 유산균인 것을 특징으로 하는 방법.
제 5 항에 있어서, 상기 유산균은 락토바실러스 알리멘타리우스(Lactobacillus alimentarius) M-2 균주(KCTC 11054 BP) 또는 류코노스톡 멘센테로이드스(Leuconostoc mensenteroides) M-3 균주(KCTC 11055 BP)인 것을 특징으로 하는 방법.
제 6 항에 있어서, 상기 유산균은 락토바실러스 알리멘타리우스(Lactobacillus alimentarius) M-2 균주(KCTC 11054 BP)인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단계 (c)의 열처리는 100-150℃에서 실시하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단계 (c)의 열처리는 5-25분 동안 실시하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단계 (c)의 열처리는 1.2-1.8 기압에서 실시하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단계 (c)의 결과물은 상기 단계 (a)의 인삼 또는 홍삼과 비교하여 3-15배의 진세노사이드 Rg3를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 11 항에 있어서, 상기 단계 (c)의 결과물은 상기 단계 (a)의 인삼 또는 홍삼과 비교하여 8-13배의 진세노사이드 Rg3를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단계 (c)의 결과물은 상기 단계 (a)의 인삼 또는 홍삼과 비교하여 5-20배의 진세노사이드 Rh2를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 13 항에 있어서, 상기 단계 (c)의 결과물은 상기 단계 (a)의 인삼 또는 홍삼과 비교하여 10-16배의 진세노사이드 Rh2를 포함하는 것을 특징으로 하는 방 법.
김치로부터 분리된 락토바실러스 알리멘타리우스(Lactobacillus alimentarius) M-2 균주(KCTC 11054 BP) 또는 류코노스톡 멘센테로이드스(Leuconostoc mensenteroides) M-3 균주(KCTC 11055 BP).