KR20080055808A - 에스테라아제 유전자 및 이의 용도 - Google Patents
에스테라아제 유전자 및 이의 용도 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20080055808A KR20080055808A KR1020087005442A KR20087005442A KR20080055808A KR 20080055808 A KR20080055808 A KR 20080055808A KR 1020087005442 A KR1020087005442 A KR 1020087005442A KR 20087005442 A KR20087005442 A KR 20087005442A KR 20080055808 A KR20080055808 A KR 20080055808A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- yeast
- polynucleotide
- seq
- protein
- gene
- Prior art date
Links
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 title claims abstract description 58
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims abstract description 193
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 127
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 88
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 57
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims abstract description 51
- 235000013334 alcoholic beverage Nutrition 0.000 claims abstract description 46
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 137
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 137
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 137
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 66
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 50
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 49
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 49
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 42
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 37
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 37
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 31
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 29
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 29
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 27
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 17
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 14
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 9
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 claims description 8
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 235000014101 wine Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 5
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000021577 malt beverage Nutrition 0.000 claims description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 8
- 108091030071 RNAI Proteins 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 14
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 abstract description 13
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 abstract description 13
- 101150087107 IAH1 gene Proteins 0.000 abstract description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 abstract description 3
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 160
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 49
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 38
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 description 19
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- MLFHJEHSLIIPHL-UHFFFAOYSA-N isoamyl acetate Chemical compound CC(C)CCOC(C)=O MLFHJEHSLIIPHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 13
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 239000002585 base Substances 0.000 description 8
- 235000019992 sake Nutrition 0.000 description 8
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 7
- BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N geneticin Chemical compound O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C(C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N 0.000 description 7
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 7
- 229940117955 isoamyl acetate Drugs 0.000 description 7
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 6
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 6
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 6
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 5
- ZCUFMDLYAMJYST-UHFFFAOYSA-N thorium dioxide Chemical compound O=[Th]=O ZCUFMDLYAMJYST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 4
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 108020004491 Antisense DNA Proteins 0.000 description 3
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 3
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 3
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 3
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 3
- 239000003816 antisense DNA Substances 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- 235000015041 whisky Nutrition 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 2,4-diaminobutyric acid Chemical compound NCCC(N)C(O)=O OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OYIFNHCXNCRBQI-UHFFFAOYSA-N 2-aminoadipic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CCCC(O)=O OYIFNHCXNCRBQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PECYZEOJVXMISF-UHFFFAOYSA-N 3-aminoalanine Chemical compound [NH3+]CC(N)C([O-])=O PECYZEOJVXMISF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010080691 Alcohol O-acetyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 102100023026 Cyclic AMP-dependent transcription factor ATF-1 Human genes 0.000 description 2
- 238000000018 DNA microarray Methods 0.000 description 2
- PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N Ethyl methanesulfonate Chemical compound CCOS(C)(=O)=O PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101001019605 Homo sapiens Isoamyl acetate-hydrolyzing esterase 1 homolog Proteins 0.000 description 2
- 102100035008 Isoamyl acetate-hydrolyzing esterase 1 homolog Human genes 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 241001123227 Saccharomyces pastorianus Species 0.000 description 2
- 241000235088 Saccharomyces sp. Species 0.000 description 2
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 2
- QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N alpha-aminobutyric acid Chemical compound CCC(N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 238000003988 headspace gas chromatography Methods 0.000 description 2
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Chemical compound [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- BJBUEDPLEOHJGE-UHFFFAOYSA-N (2R,3S)-3-Hydroxy-2-pyrolidinecarboxylic acid Natural products OC1CCNC1C(O)=O BJBUEDPLEOHJGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- YOFPFYYTUIARDI-ZCFIWIBFSA-N (2r)-2-aminooctanedioic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCCCCC(O)=O YOFPFYYTUIARDI-ZCFIWIBFSA-N 0.000 description 1
- BVAUMRCGVHUWOZ-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-(cyclohexylazaniumyl)propanoate Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC1CCCCC1 BVAUMRCGVHUWOZ-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- MRTPISKDZDHEQI-YFKPBYRVSA-N (2s)-2-(tert-butylamino)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(C)(C)C MRTPISKDZDHEQI-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- NPDBDJFLKKQMCM-SCSAIBSYSA-N (2s)-2-amino-3,3-dimethylbutanoic acid Chemical compound CC(C)(C)[C@H](N)C(O)=O NPDBDJFLKKQMCM-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 1
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N -2-Amino-4-hydroxybutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NUKQEEMKQGMUQH-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-1-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(N)=N NUKQEEMKQGMUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GVEZIHKRYBHEFX-MNOVXSKESA-N 13C-Cerulenin Natural products CC=CCC=CCCC(=O)[C@H]1O[C@@H]1C(N)=O GVEZIHKRYBHEFX-MNOVXSKESA-N 0.000 description 1
- OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 3-phospho-D-glyceric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)COP(O)(O)=O OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- XFGVJLGVINCWDP-UHFFFAOYSA-N 5,5,5-trifluoroleucine Chemical compound FC(F)(F)C(C)CC(N)C(O)=O XFGVJLGVINCWDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WDIYWDJLXOCGRW-ACZMJKKPSA-N Ala-Asp-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O WDIYWDJLXOCGRW-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- LBFXVAXPDOBRKU-LKTVYLICSA-N Ala-His-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O LBFXVAXPDOBRKU-LKTVYLICSA-N 0.000 description 1
- XUCHENWTTBFODJ-FXQIFTODSA-N Ala-Met-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O XUCHENWTTBFODJ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- CJQAEJMHBAOQHA-DLOVCJGASA-N Ala-Phe-Asn Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N CJQAEJMHBAOQHA-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- PHQXWZGXKAFWAZ-ZLIFDBKOSA-N Ala-Trp-Lys Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 PHQXWZGXKAFWAZ-ZLIFDBKOSA-N 0.000 description 1
- 101100433757 Arabidopsis thaliana ABCG32 gene Proteins 0.000 description 1
- HAVKMRGWNXMCDR-STQMWFEESA-N Arg-Gly-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O HAVKMRGWNXMCDR-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- MTYLORHAQXVQOW-AVGNSLFASA-N Arg-Lys-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O MTYLORHAQXVQOW-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- LJUOLNXOWSWGKF-ACZMJKKPSA-N Asn-Asn-Glu Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N LJUOLNXOWSWGKF-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- XVAPVJNJGLWGCS-ACZMJKKPSA-N Asn-Glu-Asn Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N XVAPVJNJGLWGCS-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- GQRDIVQPSMPQME-ZPFDUUQYSA-N Asn-Ile-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O GQRDIVQPSMPQME-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- RCFGLXMZDYNRSC-CIUDSAMLSA-N Asn-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O RCFGLXMZDYNRSC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- HMUKKNAMNSXDBB-CIUDSAMLSA-N Asn-Met-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HMUKKNAMNSXDBB-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- UGXYFDQFLVCDFC-CIUDSAMLSA-N Asn-Ser-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O UGXYFDQFLVCDFC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- GBAWQWASNGUNQF-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ala-Cys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N GBAWQWASNGUNQF-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- BUVNWKQBMZLCDW-UGYAYLCHSA-N Asp-Asn-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O BUVNWKQBMZLCDW-UGYAYLCHSA-N 0.000 description 1
- KHBLRHKVXICFMY-GUBZILKMSA-N Asp-Glu-Lys Chemical compound N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O KHBLRHKVXICFMY-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- SNDBKTFJWVEVPO-WHFBIAKZSA-N Asp-Gly-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SNDBKTFJWVEVPO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- HOBNTSHITVVNBN-ZPFDUUQYSA-N Asp-Ile-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N HOBNTSHITVVNBN-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- CTWCFPWFIGRAEP-CIUDSAMLSA-N Asp-Lys-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O CTWCFPWFIGRAEP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- DRCOAZZDQRCGGP-GHCJXIJMSA-N Asp-Ser-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O DRCOAZZDQRCGGP-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 1
- YODBPLSWNJMZOJ-BPUTZDHNSA-N Asp-Trp-Arg Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N YODBPLSWNJMZOJ-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QLRRUWXMMVXORS-UHFFFAOYSA-N Augustine Natural products C12=CC=3OCOC=3C=C2CN2C3CC(OC)C4OC4C31CC2 QLRRUWXMMVXORS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150085381 CDC19 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100327917 Caenorhabditis elegans chup-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100459439 Caenorhabditis elegans nac-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010010737 Ceruletide Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 101100285410 Danio rerio eng2b gene Proteins 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108010039731 Fatty Acid Synthases Proteins 0.000 description 1
- 102000015303 Fatty Acid Synthases Human genes 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- QXDXIXFSFHUYAX-MNXVOIDGSA-N Glu-Ile-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O QXDXIXFSFHUYAX-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 1
- VGBSZQSKQRMLHD-MNXVOIDGSA-N Glu-Leu-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O VGBSZQSKQRMLHD-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 1
- MFNUFCFRAZPJFW-JYJNAYRXSA-N Glu-Lys-Phe Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 MFNUFCFRAZPJFW-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- KXTAGESXNQEZKB-DZKIICNBSA-N Glu-Phe-Val Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 KXTAGESXNQEZKB-DZKIICNBSA-N 0.000 description 1
- BKMOHWJHXQLFEX-IRIUXVKKSA-N Glu-Tyr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O BKMOHWJHXQLFEX-IRIUXVKKSA-N 0.000 description 1
- PYTZFYUXZZHOAD-WHFBIAKZSA-N Gly-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN PYTZFYUXZZHOAD-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- BRFJMRSRMOMIMU-WHFBIAKZSA-N Gly-Ala-Asn Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BRFJMRSRMOMIMU-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- YZPVGIVFMZLQMM-YUMQZZPRSA-N Gly-Gln-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)CN YZPVGIVFMZLQMM-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- XTQFHTHIAKKCTM-YFKPBYRVSA-N Gly-Glu-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O XTQFHTHIAKKCTM-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- DUAWRXXTOQOECJ-JSGCOSHPSA-N Gly-Tyr-Val Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O DUAWRXXTOQOECJ-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 1
- RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N H-Lys-Trp-OH Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GNBHSMFBUNEWCJ-DCAQKATOSA-N His-Pro-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O GNBHSMFBUNEWCJ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- FFYYUUWROYYKFY-IHRRRGAJSA-N His-Val-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O FFYYUUWROYYKFY-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 101000655352 Homo sapiens Telomerase reverse transcriptase Proteins 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- GRRNUXAQVGOGFE-UHFFFAOYSA-N Hygromycin-B Natural products OC1C(NC)CC(N)C(O)C1OC1C2OC3(C(C(O)C(O)C(C(N)CO)O3)O)OC2C(O)C(CO)O1 GRRNUXAQVGOGFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150031639 IV gene Proteins 0.000 description 1
- CIJLNXXMDUOFPH-HJWJTTGWSA-N Ile-Pro-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 CIJLNXXMDUOFPH-HJWJTTGWSA-N 0.000 description 1
- PWWVAXIEGOYWEE-UHFFFAOYSA-N Isophenergan Chemical compound C1=CC=C2N(CC(C)N(C)C)C3=CC=CC=C3SC2=C1 PWWVAXIEGOYWEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N L-2-aminopentanoic acid Chemical compound CCC[C@H](N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N L-norVal-OH Natural products CCCC(N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- WNGVUZWBXZKQES-YUMQZZPRSA-N Leu-Ala-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O WNGVUZWBXZKQES-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- KWTVLKBOQATPHJ-SRVKXCTJSA-N Leu-Ala-Lys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N KWTVLKBOQATPHJ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- XBCWOTOCBXXJDG-BZSNNMDCSA-N Leu-His-Phe Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 XBCWOTOCBXXJDG-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- INCJJHQRZGQLFC-KBPBESRZSA-N Leu-Phe-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)NCC(O)=O INCJJHQRZGQLFC-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- XZNJZXJZBMBGGS-NHCYSSNCSA-N Leu-Val-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XZNJZXJZBMBGGS-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HBBGRARXTFLTSG-UHFFFAOYSA-N Lithium ion Chemical compound [Li+] HBBGRARXTFLTSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NFLFJGGKOHYZJF-BJDJZHNGSA-N Lys-Ala-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN NFLFJGGKOHYZJF-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- NNKLKUUGESXCBS-KBPBESRZSA-N Lys-Gly-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O NNKLKUUGESXCBS-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- DRRXXZBXDMLGFC-IHRRRGAJSA-N Lys-Val-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN DRRXXZBXDMLGFC-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- STTRPDDKDVKIDF-KKUMJFAQSA-N Met-Glu-Tyr Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 STTRPDDKDVKIDF-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- UNPGTBHYKJOCCZ-DCAQKATOSA-N Met-Lys-Ala Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O UNPGTBHYKJOCCZ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010087066 N2-tryptophyllysine Proteins 0.000 description 1
- 101100234604 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) ace-8 gene Proteins 0.000 description 1
- KNTFCRCCPLEUQZ-VKHMYHEASA-N O-methylserine Chemical compound COC[C@H](N)C(O)=O KNTFCRCCPLEUQZ-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100054296 Oryza sativa subsp. japonica ABCG37 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100107593 Oryza sativa subsp. japonica ABCG40 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150093629 PYK1 gene Proteins 0.000 description 1
- WYPVCIACUMJRIB-JYJNAYRXSA-N Phe-Gln-Lys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N WYPVCIACUMJRIB-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- FXYXBEZMRACDDR-KKUMJFAQSA-N Phe-His-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FXYXBEZMRACDDR-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- MSSXKZBDKZAHCX-UNQGMJICSA-N Phe-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O MSSXKZBDKZAHCX-UNQGMJICSA-N 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- XWYXZPHPYKRYPA-GMOBBJLQSA-N Pro-Asn-Ile Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O XWYXZPHPYKRYPA-GMOBBJLQSA-N 0.000 description 1
- SNIPWBQKOPCJRG-CIUDSAMLSA-N Pro-Gln-Cys Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O SNIPWBQKOPCJRG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- KTFZQPLSPLWLKN-KKUMJFAQSA-N Pro-Gln-Tyr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O KTFZQPLSPLWLKN-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- LNOWDSPAYBWJOR-PEDHHIEDSA-N Pro-Ile-Ile Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O LNOWDSPAYBWJOR-PEDHHIEDSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005115 Pyruvate Kinase Proteins 0.000 description 1
- 108010079005 RDV peptide Proteins 0.000 description 1
- 235000003534 Saccharomyces carlsbergensis Nutrition 0.000 description 1
- 101100491255 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) YAP1 gene Proteins 0.000 description 1
- VMLONWHIORGALA-SRVKXCTJSA-N Ser-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]([NH3+])CO VMLONWHIORGALA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 102100032938 Telomerase reverse transcriptase Human genes 0.000 description 1
- BSNZTJXVDOINSR-JXUBOQSCSA-N Thr-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BSNZTJXVDOINSR-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 1
- GZYNMZQXFRWDFH-YTWAJWBKSA-N Thr-Arg-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N)O GZYNMZQXFRWDFH-YTWAJWBKSA-N 0.000 description 1
- JEDIEMIJYSRUBB-FOHZUACHSA-N Thr-Asp-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O JEDIEMIJYSRUBB-FOHZUACHSA-N 0.000 description 1
- LGNBRHZANHMZHK-NUMRIWBASA-N Thr-Glu-Asp Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N)O LGNBRHZANHMZHK-NUMRIWBASA-N 0.000 description 1
- OQCXTUQTKQFDCX-HTUGSXCWSA-N Thr-Glu-Phe Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)N)O OQCXTUQTKQFDCX-HTUGSXCWSA-N 0.000 description 1
- UYTYTDMCDBPDSC-URLPEUOOSA-N Thr-Ile-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)N UYTYTDMCDBPDSC-URLPEUOOSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- NMCBVGFGWSIGSB-NUTKFTJISA-N Trp-Ala-Leu Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N NMCBVGFGWSIGSB-NUTKFTJISA-N 0.000 description 1
- OBAMASZCXDIXSS-SZMVWBNQSA-N Trp-Glu-Lys Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N OBAMASZCXDIXSS-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 1
- GYKDRHDMGQUZPU-MGHWNKPDSA-N Tyr-Lys-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N GYKDRHDMGQUZPU-MGHWNKPDSA-N 0.000 description 1
- FMXFHNSFABRVFZ-BZSNNMDCSA-N Tyr-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O FMXFHNSFABRVFZ-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- GQVZBMROTPEPIF-SRVKXCTJSA-N Tyr-Ser-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O GQVZBMROTPEPIF-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- MWUYSCVVPVITMW-IGNZVWTISA-N Tyr-Tyr-Ala Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 MWUYSCVVPVITMW-IGNZVWTISA-N 0.000 description 1
- LNYOXPDEIZJDEI-NHCYSSNCSA-N Val-Asn-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](C(C)C)N LNYOXPDEIZJDEI-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- XQVRMLRMTAGSFJ-QXEWZRGKSA-N Val-Asp-Arg Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N XQVRMLRMTAGSFJ-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- YTPLVNUZZOBFFC-SCZZXKLOSA-N Val-Gly-Pro Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N1CCC[C@@H]1C(O)=O YTPLVNUZZOBFFC-SCZZXKLOSA-N 0.000 description 1
- AGXGCFSECFQMKB-NHCYSSNCSA-N Val-Leu-Asp Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N AGXGCFSECFQMKB-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- NHXZRXLFOBFMDM-AVGNSLFASA-N Val-Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)C(C)C NHXZRXLFOBFMDM-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- NZYNRRGJJVSSTJ-GUBZILKMSA-N Val-Ser-Val Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NZYNRRGJJVSSTJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 108010070944 alanylhistidine Proteins 0.000 description 1
- 229910001413 alkali metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 1
- 235000019568 aromas Nutrition 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010031045 aspartyl-glycyl-aspartyl-alanine Proteins 0.000 description 1
- 108010038633 aspartylglutamate Proteins 0.000 description 1
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- GVEZIHKRYBHEFX-UHFFFAOYSA-N caerulein A Natural products CC=CCC=CCCC(=O)C1OC1C(N)=O GVEZIHKRYBHEFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- GVEZIHKRYBHEFX-NQQPLRFYSA-N cerulenin Chemical compound C\C=C\C\C=C\CCC(=O)[C@H]1O[C@H]1C(N)=O GVEZIHKRYBHEFX-NQQPLRFYSA-N 0.000 description 1
- 229950005984 cerulenin Drugs 0.000 description 1
- YRALAIOMGQZKOW-HYAOXDFASA-N ceruletide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 YRALAIOMGQZKOW-HYAOXDFASA-N 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 238000012411 cloning technique Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 108010054813 diprotin B Proteins 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 235000021554 flavoured beverage Nutrition 0.000 description 1
- 125000005519 fluorenylmethyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012268 genome sequencing Methods 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 108010059898 glycyl-tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- GRRNUXAQVGOGFE-NZSRVPFOSA-N hygromycin B Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NC)C[C@@H](N)[C@H](O)[C@H]1O[C@H]1[C@H]2O[C@@]3([C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](C(N)CO)O3)O)O[C@H]2[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 GRRNUXAQVGOGFE-NZSRVPFOSA-N 0.000 description 1
- 229940097277 hygromycin b Drugs 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- BBJIPMIXTXKYLZ-UHFFFAOYSA-N isoglutamic acid Chemical compound OC(=O)CC(N)CC(O)=O BBJIPMIXTXKYLZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 150000002614 leucines Chemical class 0.000 description 1
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- XIXADJRWDQXREU-UHFFFAOYSA-M lithium acetate Chemical compound [Li+].CC([O-])=O XIXADJRWDQXREU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910001416 lithium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010073025 phenylalanylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 235000011056 potassium acetate Nutrition 0.000 description 1
- JWMFYGXQPXQEEM-WZBAXQLOSA-N pregnane Chemical group C1CC2CCCC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](CC)[C@@]1(C)CC2 JWMFYGXQPXQEEM-WZBAXQLOSA-N 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- YRALAIOMGQZKOW-UHFFFAOYSA-N sulfated caerulein Natural products C=1C=CC=CC=1CC(C(N)=O)NC(=O)C(CC(O)=O)NC(=O)C(CCSC)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)CNC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(O)=O)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 YRALAIOMGQZKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 t-butyloxycarbonyl Chemical group 0.000 description 1
- BJBUEDPLEOHJGE-IMJSIDKUSA-N trans-3-hydroxy-L-proline Chemical compound O[C@H]1CC[NH2+][C@@H]1C([O-])=O BJBUEDPLEOHJGE-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010020532 tyrosyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12C—BEER; PREPARATION OF BEER BY FERMENTATION; PREPARATION OF MALT FOR MAKING BEER; PREPARATION OF HOPS FOR MAKING BEER
- C12C12/00—Processes specially adapted for making special kinds of beer
- C12C12/002—Processes specially adapted for making special kinds of beer using special microorganisms
- C12C12/004—Genetically modified microorganisms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12C—BEER; PREPARATION OF BEER BY FERMENTATION; PREPARATION OF MALT FOR MAKING BEER; PREPARATION OF HOPS FOR MAKING BEER
- C12C12/00—Processes specially adapted for making special kinds of beer
- C12C12/002—Processes specially adapted for making special kinds of beer using special microorganisms
- C12C12/006—Yeasts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12G—WINE; PREPARATION THEREOF; ALCOHOLIC BEVERAGES; PREPARATION OF ALCOHOLIC BEVERAGES NOT PROVIDED FOR IN SUBCLASSES C12C OR C12H
- C12G1/00—Preparation of wine or sparkling wine
- C12G1/02—Preparation of must from grapes; Must treatment and fermentation
- C12G1/0203—Preparation of must from grapes; Must treatment and fermentation by microbiological or enzymatic treatment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/62—Carboxylic acid esters
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Alcoholic Beverages (AREA)
Abstract
본 발명은 에스테라아제 유전자 및 그의 용도, 구체적으로 향 및 풍미가 우수한 알콜성 음료를 제조하는 양조 효모, 상기 효모를 사용하여 제조한 알콜성 음료, 및 상기 알콜성 음료의 제조 방법에 관한 것이다. 더 구체적으로, 본 발명은 생성물의 향 및 풍미에 기여하는 에스테르를 제조하는 능력이 양조 효모 에스테라아제 Iah1p 를 인코딩하는 IAH1 유전자, 특히 라거 양조 효모에 특이적인 비(非)ScIAH1 유전자의 발현 수준을 조절함에 의해 제어된 효모, 및 상기 효모를 이용한 알콜성 음료의 제조 방법에 관한 것이다.
양조 효모, 에스테르-생성 능력, 알콜성 음료, 에스테라아제 유전자
Description
본 발명은 에스테라아제 유전자 및 상기 유전자의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 특히 향 및 풍미가 우수한 알콜성 음료를 제조하는 양조 효모, 상기와 같은 효모를 사용하여 제조한 알콜성 음료, 및 이러한 알콜성 음료의 제조 방법에 관한 것이다. 더 구체적으로, 본 발명은 양조 효모 내의 에스테라아제 Iah1p 를 암호화하는 IAH1 유전자, 특히 생성물의 향 및 풍미에 기여하는 에스테르를 제조하는 능력이 맥주 효모에 특유한 비(非)ScIAH1 유전자의 발현 수준을 조절함에 의해 제어되는 효모 및 상기와 같은 효모를 이용한 알콜성 음료의 제조 방법에 관한 것이다.
에스테르는 알콜성 음료의 중요한 방향 성분이다. 청주, 와인 및 위스키의 경우, 에스테르 함량을 증가시키면 음료에 화려한 (florid) 향이 제공되며, 또한 풍미에 있어서 높은 평가를 받게 되도록 하는 것으로 알려져 있다. 한편, 에스테르가 맥주에서도 중요한 방향 성분이지만, 과량의 에스테르는 생성되는 에스테르 냄새에 기인하여 환영받지 못한다. 따라서, 알콜성 음료의 유형에 따라 형성되는 에스테르의 양을 적절하게 제어하는 것이 중요하다.
과거에 알콜성 음료의 에스테르 함량을 증가시키기 위해 에스테르를 고 수준 으로 생성하는 효모가 개발되었다. 이전에 보고된, 다량의 에스테르를 생성하는 효모를 효과적으로 분리하는 방법의 예로서는, 효모를 돌연변이유발 처리에 적용하여 (또는 적용하지 않고), 다량의 카프로산을 생성하며 세룰레닌과 같은 지방산 합성효소를 저해하는 약물에 저항성 있는 균주 및 5,5,5-트리플루오로-DL-류신과 같은 류신 유사체에 저항성 있고 다량의 이소아밀 알콜 및 이소아밀 아세테이트를 생성하는 균주를 수득하는 방법(일본 특허 출원 공개 제 2002-253211 호), 및 위치 3 이 히드록실화된 프레그난 골격을 가진 스테로이드를 함유한 배지에서 성장시킨 균주를 획득하는 방법(일본 특허 출원 공개 제 2002-191355 호)이 있다.
한편, 이전에 보고된, 유전 공학 기술을 이용한 효모 개발을 수반한 방법의 예로서는, 양조 효모에서 사카로마이세스 세레비지애 (Saccharomyces cerevisiae) 의 에스테라아제 유전자 ATF1 를 고수준으로 발현시키는 것(일본 특허 출원 공개 제 H06-062849 호), ATF1 의 발현을 저해시키는 것(일본 특허 출원 공개 제 H06-253826 호), 및 양조 효모에서 에스테라아제 유전자 EST2 를 파괴하여 에스테르의 양을 증가시키는 것(일본 특허 출원 공개 제 H09-234077 호) 이 있다.
상기 언급한 바와 같이, 생성물의 에스테르 함량을 증가시키는 돌연변이 균주가 획득되고 있지만, 그 결과로서 예기치 않은 발효 지연 또는 바람직하지 않은 방향 및 풍미 성분의 증가가 관찰되어, 실제 적용을 위한 효모의 개발에 문제가 야기되는 경우가 있다. 따라서, 발효 속도 또는 생성물 품질을 손상시키지 않고 목적량의 에스테르를 생성할 수 있는 효모를 육종하는 방법이 요구된다.
상기 언급한 문제를 해결하기 위해 예의 연구를 수행한 결과, 본 발명의 발명자들은 양조 효모로부터 공지의 단백질들보다 더 유리한 효과를 나타내는 에스테라아제를 인코딩하는 유전자를 동정 및 분리하는데 성공하였다. 게다가, 본 발명의 발명자들은 또한, 효모에 상기 결과적인 유전자를 삽입 및 발현시켜 형질전환 효모를 제조함으로써 형성되는 에스테르의 양이 감소되고 상기 결과적인 유전자의 발현이 억제된 형질전환 효모를 제조함으로써 형성되는 에스테르의 양이 증가됨을 확인하고, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
즉, 본 발명은 양조 효모에 특징적으로 존재하는 신규한 에스테라아제 유전자, 상기 유전자로 인코딩되는 단백질, 상기 유전자의 발현이 조절되는 형질전환된 효모, 및 상기 유전자의 발현이 조절된 효모를 이용하여 생성물에서 형성되는 에스테르의 양을 제어하는 방법에 관한 것이다. 더 구체적으로, 본 발명은 하기 나타낸 폴리뉴클레오티드, 상기 폴리뉴클레오티드를 포함한 벡터, 상기 벡터가 삽입된 형질전환된 효모, 및 상기 형질전환된 효모를 이용한 알콜성 음료의 제조 방법을 제공한다.
(1) 하기로 이루어진 군에서 선택되는 폴리뉴클레오티드:
(a) 서열번호:1 의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드를 포함한 폴리뉴클레오티드;
(b) 서열번호:2 의 아미노산 서열로 이루어진 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한 폴리뉴클레오티드;
(c) 에스테라아제 활성을 가지며 서열번호:2 의 아미노산 서열에서 하나 이상의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 및/또는 부가된 서열로 이루어진 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한 폴리뉴클레오티드;
(d) 에스테라아제 활성을 가지며 서열번호:2 의 아미노산 서열과의 일치성이 60% 이상인 아미노산 서열을 갖는 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한 폴리뉴클레오티드;
(e) 엄격한 조건하에서 서열번호:1 의 뉴클레오티드 서열에 상보적인 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드에 혼성화하며, 에스테라아제 활성을 갖는 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한 폴리뉴클레오티드; 및
(f) 엄격한 조건하에서 서열번호:2 의 아미노산 서열의 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드의 뉴클레오티드 서열에 상보적인 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드에 혼성화하며 에스테라아제 활성을 갖는 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한 폴리뉴클레오티드.
(2) 상기 (1) 에 있어서, 하기로 이루어진 군에서 선택되는 폴리뉴클레오티드:
(g) 서열번호: 2 의 아미노산 서열로 이루어진 단백질을 인코딩하거나, 또는 서열번호: 2 의 아미노산 서열 중 1 내지 10 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 및/또는 부가된 서열을 인코딩하고, 이때 상기 단백질은 에스테라아제 활성을 갖는 폴리뉴클레오티드;
(h) 에스테라아제 활성을 가지며 서열번호: 2 의 아미노산 서열과의 일치성이 90% 이상인 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드; 및
(i) 서열번호: 1 에 혼성화하거나 또는 고도로 엄격한 조건하에서 서열번호: 1 의 뉴클레오티드 서열에 상보적인 뉴클레오티드 서열에 혼성화하며, 에스테라아제 활성을 갖는 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드.
(3) 상기 (1) 에 있어서, 서열번호: 1 로 이루어진 폴리뉴클레오티드를 포함한 폴리뉴클레오티드.
(4) 상기 (1) 에 있어서, 서열번호: 2 로 이루어진 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한 폴리뉴클레오티드.
(5) 상기 (1) 내지 (4) 중 어느 하나에 있어서, DNA 인 폴리뉴클레오티드.
(6) 하기로 이루어진 군에서 선택되는 폴리뉴클레오티드:
(j) 상기 (5) 에 따른 폴리뉴클레오티드 (DNA) 의 전사물에 상보적인 뉴클레오티드 서열의 RNA 를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드;
(k) RNAi 효과를 통해 상기 (5) 에 따른 폴리뉴클레오티드 (DNA) 의 발현을 억제하는 RNA 를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드;
(l) 상기 (5) 에 따른 폴리뉴클레오티드 (DNA) 의 전사물을 특이적으로 절단하는 활성을 가진 RNA 를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드; 및
(m) 공동-억제 효과를 통해 상기 (5) 에 따른 폴리뉴클레오티드 (DNA) 의 발현을 억제하는 RNA 를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드.
(7) 상기 (1) 내지 (5) 중 어느 하나의 폴리뉴클레오티드로 인코딩되는 단백질.
(8) 상기 (1) 내지 (5) 중 어느 하나의 폴리뉴클레오티드를 포함한 벡터.
(8a) 상기 (8) 에 있어서, 하기 구성요소들이 포함된 발현 카세트를 포함한 벡터:
(x) 효모 세포에서 전사될 수 있는 프로모터;
(y) 상기 프로모터에 센스 방향으로 연결된 상기 (1) 내지 (5) 에 기재된 폴리뉴클레오티드 중 어느 하나; 및
(z) 전사 종결 및 RNA 분자의 폴리아데닐화에 대하여 효모에서 기능할 수 있는 신호.
(9) 상기 (6) 의 폴리뉴클레오티드를 포함한 벡터.
(10) 상기 (8) 또는 (9) 의 벡터가 도입된 효모.
(11) 상기 (10) 에 있어서, 상기 (8) 의 벡터를 도입함에 의해 에스테르-생성 능력이 감소되는 효모.
(12) 상기 (9) 의 벡터를 도입함에 의해, 또는 상기 (5) 의 폴리뉴클레오티드 (DNA) 와 관련된 유전자를 파괴함에 의해 상기 (5) 의 폴리뉴클레오티드 (DNA) 의 발현이 억제되는 효모.
(13) 상기 (11) 에 있어서, 상기 (7) 의 단백질의 발현 수준을 증가시킴에 의해 에스테르-생성 능력이 감소되는 효모.
(14) 상기 (10) 내지 (13) 중 어느 하나의 효모를 사용함에 의한 알콜성 음료의 제조 방법.
(15) 상기 (14) 에 있어서, 양조된 알콜성 음료가 맥아 음료인 알콜성 음료의 제조 방법.
(16) 상기 (14) 에 있어서, 양조된 알콜성 음료가 와인인 알콜성 음료의 제조 방법.
(17) 상기 (14) 내지 (16) 중 어느 하나의 방법으로 제조되는 알콜성 음료.
(18) 서열번호: 1 의 뉴클레오티드 서열을 가진 에스테라아제 유전자의 뉴클레오티드 서열에 기초하여 고안된 프라이머 또는 탐침자 (probe) 를 사용하는 것을 포함하는, 시험 효모의 에스테르-생성 능력을 평가하는 방법.
(18a) 상기 (18) 의 방법을 사용함으로써 표적 에스테르-생성 능력을 가진 효모를 선별하는 방법.
(18b) 상기 (18a) 의 방법으로 선별된 효모를 사용함에 의한 알콜성 음료 (예를 들어, 맥주) 의 제조 방법.
(19) 하기를 포함하는 시험 효모의 에스테르-생성 능력을 평가하는 방법: 시험 효모를 배양함; 및 서열번호: 1 의 뉴클레오티드 서열을 갖는 에스테라아제 유전자의 발현 수준을 측정함.
(20) 하기를 포함하는, 효모의 선별 방법: 시험 효모를 배양함; 상기 (7) 의 단백질을 정량하거나 또는 서열번호: 1 의 뉴클레오티드 서열을 가진 에스테라아제 유전자의 발현 수준을 측정함; 및 표적 에스테르-생성 능력에 따른 상기 단백질의 양 또는 상기 유전자 발현 수준을 갖는 시험 효모를 선별함.
(20a) 하기를 포함하는 효모의 선별 방법: 시험 효모를 배양함; 에스테르-생성 능력 또는 에스테라아제 활성을 측정함; 및 표적 에스테르 생성 능력 또는 표적 에스테라아제 활성을 갖는 시험 효모를 선별함.
(21) 상기 (20) 에 있어서, 하기를 포함하는 효모의 선별 방법: 참조 효모 및 시험 효모를 배양함; 각 효모에서 서열번호: 1 의 뉴클레오티드 서열을 갖는 에스테라아제 유전자의 발현 수준을 측정함; 및 상기 참조 효모에서보다 상기 유전자가 더 높거나 또는 더 낮게 발현되는 시험 효모를 선별함.
(22) 상기 (20) 에 있어서, 하기를 포함하는 효모의 선별 방법: 참조 효모 및 시험 효모를 배양함; 각 효모에서 상기 (7) 의 단백질을 정량함; 및 참조 효모에서보다 상기 단백질의 양이 더 많거나 더 적은 시험 효모를 선별함. 즉, 상기 (20) 에 있어서, 하기를 포함하는 효모의 선별 방법: 복수의 효모를 배양함; 각 효모에서 상기 (7) 의 단백질을 정량함; 및 이들 중 상기 단백질의 양이 많거나 또는 적은 시험 효모를 선별함.
(23) 하기를 포함하는 알콜성 음료의 제조 방법: 상기 (10) 내지 (13) 중 어느 하나에 따른 효모 또는 상기 (20) 내지 (22) 중 어느 하나에 따른 방법에 의해 선별된 효모를 사용하여 알콜성 음료의 제조를 위한 발효를 수행함; 및 에스테르의 생성량을 조절함.
도면의 간단한 설명
도 1 은 맥주 발효 시험시의 시간에 따른 세포 성장을 나타낸다. 가로축은 발효 시간을 나타내며, 세로축은 660 nm 에서의 광학 밀도 (OD660) 를 나타낸다.
도 2 는 맥주 발효 시험시의 시간에 따른 추출물 (당) 소비량을 나타낸다. 가로축은 발효 시간을 나타내며, 세로축은 겉보기 추출물 농도 (w/w%) 를 나타낸다.
도 3 은 맥주 발효 시험시의 효모 내의 비(非)ScIAH1 유전자의 발현 프로파일을 나타낸다. 가로축은 발효 시간을 나타내며, 세로축은 검출된 신호의 강도를 나타낸다.
도 4 는 발효 시험시의 시간에 따른 세포 성장을 나타낸다. 가로축은 발효 시간을 나타내며, 세로축은 660 nm 에서의 광학 밀도 (OD660) 를 나타낸다. 기호 "IAH1"은 비(非)ScIAH1 고도 발현 균주를 나타낸다.
도 5 는 맥주 발효 시험시의 시간에 따른 추출물 (당) 소비량을 나타낸다. 가로축은 발효 시간을 나타내며, 세로축은 겉보기 추출물 농도 (w/w%) 를 나타낸다. 기호 "IAH1"은 비(非)ScIAH1 고도 발현 균주를 나타낸다.
도 6 은 발효 시험시의 시간에 따른 세포 성장을 나타낸다. 가로축은 발효 시간을 나타내며, 세로축은 660 nm 에서의 광학 밀도 (OD660) 를 나타낸다. 기호 "iah1"은 비(非)ScIAH1 파괴 균주를 나타낸다.
도 7 은 맥주 발효 시험시의 시간에 따른 추출물 (당) 소비량을 나타낸다. 가로축은 발효 시간을 나타내며, 세로축은 겉보기 추출물 농도 (w/w%) 를 나타낸다. 기호 "iah1"은 비(非)ScIAH1 파괴 균주를 나타낸다.
발명을 실시하기
위한 최선의 양식
본 발명자들은 효모의 에스테라아제 활성을 증가 또는 감소시킴으로써 생성물에서의 에스테르를 제어하는 것이 가능하다는 생각을 품었다. 본 발명자들은 상기 개념에 기초하여 연구하였고, 그 결과, 일본 특허 출원 공개 제 2004-283169 호에 개시된 방법에 따라 맵핑된 라거 양조 효모 게놈 정보에 기초한 라거 양조 효모에 유일한 에스테라아제를 인코딩하는 비(非)ScIAH1 유전자를 분리 및 동정하였다. 상기 유전자의 뉴클레오티드 서열은 서열번호: 1 로 표시된다. 나아가, 상기 유전자로 인코딩되는 단백질의 아미노산 서열은 서열번호: 2 로 표시된다.
1. 본 발명의 폴리뉴클레오티드
먼저, 본 발명은 (a) 서열번호: 1 의 뉴클레오티드 서열의 폴리뉴클레오티드를 포함한 폴리뉴클레오티드; 및 (b) 서열번호:2 의 아미노산 서열의 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 상기 폴리뉴클레오티드는 DNA 또는 RNA 일 수 있다.
본 발명의 표적 폴리뉴클레오티드는 상기 기술한 라거 양조 효모에서 유래한 에스테라아제 유전자를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드에 한정되지 않으며, 상기 단백질에 대한 등가의 기능을 갖는 단백질들을 인코딩하는 다른 폴리뉴클레오티드들도 이에 포함될 수 있다. 등가의 기능을 가진 단백질로서는, 예를 들어, (c) 에스테라아제 활성을 가지며 서열번호: 2 의 아미노산 서열에서 하나 이상의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 및/또는 부가된 서열을 가진 단백질이 있다.
이러한 단백질에는, 에스테라아제 활성을 가지며 서열번호: 2 의 아미노산 서열에서, 예를 들어, 1 내지 100, 1 내지 90, 1 내지 80, 1 내지 70, 1 내지 60, 1 내지 50, 1 내지 40, 1 내지 39, 1 내지 38, 1 내지 37, 1 내지 36, 1 내지 35, 1 내지 34, 1 내지 33, 1 내지 32, 1 내지 31, 1 내지 30, 1 내지 29, 1 내지 28, 1 내지 27, 1 내지 26, 1 내지 25, 1 내지 24, 1 내지 23, 1 내지 22, 1 내지 21, 1 내지 20, 1 내지 19, 1 내지 18, 1 내지 17, 1 내지 16, 1 내지 15, 1 내지 14, 1 내지 13, 1 내지 12, 1 내지 11, 1 내지 10, 1 내지 9, 1 내지 8, 1 내지 7, 1 내지 6 (1 내지 수 개의 아미노산), 1 내지 5, 1 내지 4, 1 내지 3, 1 내지 2, 또는 1 개의 아미노산 잔기가 결실, 치환, 삽입 및/또는 부가된 서열로 이루어진 단백질이 포함된다. 일반적으로, 결실, 치환, 삽입 및/또는 부가의 수는 더 적은 것이 바람직하다. 또한, 이러한 단백질에는, (d) 에스테라아제 활성을 가지며 서열번호: 2 의 아미노산 서열과의 일치성이 약 60% 이상, 약 70% 이상, 71% 이상, 72% 이상, 73% 이상, 74% 이상, 75% 이상, 76% 이상, 77% 이상, 78% 이상, 79% 이상, 80% 이상, 81% 이상, 82% 이상, 83% 이상, 84% 이상, 85% 이상, 86% 이상, 87% 이상, 88% 이상, 89% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상, 99.1% 이상, 99.2% 이상, 99.3% 이상, 99.4% 이상, 99.5% 이상, 99.6% 이상, 99.7% 이상, 99.8% 이상 또는 99.9% 이상인 아미노산 서열을 가진 단백질이 포함된다. 일반적으로, 백분율 동일성이 더 높은 것이 바람직하다.
에스테라아제 활성은, 예를 들어 문헌 [Appl. Microbiol. Biotechnol. 53: 596-600, 2000] 에 기재된 방법으로 측정가능하다.
나아가, 본 발명은 또한 (e) 엄격한 조건하에서 서열번호: 1 의 뉴클레오티드 서열에 상보적인 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드에 혼성화하며 에스테라아제 활성을 가진 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한 폴리뉴클레오티드; 및 (f) 엄격한 조건하에서 서열번호: 2 의 단백질을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열에 상보적인 폴리뉴클레오티드에 혼성화하며 에스테라아제 활성을 가진 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한 폴리뉴클레오티드를 염두에 둔다.
여기서, "엄격한 조건하에서 혼성화하는 폴리뉴클레오티드"란 서열번호: 1 의 뉴클레오티드 서열에 상보적인 뉴클레오티드 서열의 폴리뉴클레오티드 또는 서열번호: 2 의 아미노산 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드의 전부 또는 일부를 탐침자로서 사용하여 콜로니 혼성화 기술, 플라크 혼성화 기술, 서던 (southern) 혼성화 기술 등에 의해 수득된, DNA 등의 뉴클레오티드 서열을 지칭한다. 상기 혼성화 방법은, 예를 들어, 문헌 [Molecular Cloning 제 3 판, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons 1987-1997] 등에 기재된 방법일 수 있다.
본원에 사용된 "엄격한 조건"이라는 용어는 낮은 엄격성 조건, 중간 엄격성 조건 또는 높은 엄격성 조건 중 임의일 수 있다. "낮은 엄격성 조건"은, 예를 들어, 32℃ 에서의 5 x SSC, 5 x Denhardt 용액, 0.5% SDS, 50% 포름아미드이다. "중간 엄격성 조건"은, 예를 들어, 42℃ 에서의 5 x SSC, 5 x Denhardt 용액, 0.5% SDS, 50% 포름아미드이다. "높은 엄격성 조건"은, 예를 들어, 50℃ 에서의 5 x SSC, 5 x Denhardt 용액, 0.5% SDS, 50% 포름아미드이다. 이들 조건하에서, 상동성이 더 높은, DNA 등의 폴리뉴클레오티드는 더욱 높은 온도에서 효율적으로 수득될 것으로 예상되지만, 혼성화 엄격성에는 온도, 탐침자 농도, 탐침자 길이, 이온 세기, 시간, 염 농도 및 기타를 비롯하여 복수의 요인들이 연루되므로, 당업자는 유사한 엄격성을 구현하기 위해 이들 요인들을 적절히 선택할 수 있다.
혼성화를 위해 시판중인 키트를 사용하는 경우에는, 예를 들어, Alkphos Direct Labeling Reagents (Amersham Pharmacia) 를 사용할 수 있다. 이 경우, 첨부된 프로토콜에 따라, 표지된 탐침자와 함께 하룻밤 인큐베이션한 후, 막을 0.1% (w/v) SDS 가 함유된 55℃ 의 1차 세정 완충액으로 세정하여, 혼성화된, DNA 등의 폴리뉴클레오티드를 검출한다.
혼성화될 수 있는 기타 폴리뉴클레오티드에는, 기본 매개변수를 사용하여 FASTA 및 BLAST 와 같은 상동성 검색 소프트웨어로 산출한 바, 서열번호: 2 의 아미노산 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드에 대한 일치성이 약 60% 이상, 약 70% 이상, 71% 이상, 72% 이상, 73% 이상, 74% 이상, 75% 이상, 76% 이상, 77% 이상, 78% 이상, 79% 이상, 80% 이상, 81% 이상, 82% 이상, 83% 이상, 84% 이상, 85% 이상, 86% 이상, 87% 이상, 88% 이상, 89% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상, 99.1% 이상, 99.2% 이상, 99.3% 이상, 99.4% 이상, 99.5% 이상, 99.6% 이상, 99.7% 이상, 99.8% 이상 또는 99.9% 이상인 폴리뉴클레오티드가 포함된다.
아미노산 서열 또는 뉴클레오티드 서열들 간의 일치성은 Karlin 및 Altschul 에 의한 알고리즘 BLAST 를 사용하여 결정할 수 있다(Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 87: 2264-2268, 1990; Proc . Natl Acad . Sci . USA, 90: 5873, 1993). BLAST 알고리즘에 기초한 BLASTN 및 BLASTX 로 불리는 프로그램들이 개발되었다(Altschul SF 등, J. Mol . Biol . 215: 403, 1990). 뉴클레오티드 서열을 BLASTN 을 사용하여 서열분석하는 경우, 매개변수들은, 예를 들어, 스코어 = 100 및 단어 길이 = 12 이다. 아미노산 서열을 BLASTX 로 서열분석하는 경우, 매개변수들은, 예를 들어, 스코어 = 50 및 단어 길이 = 3 이다. BLAST 및 Gapped BLAST 프로그램을 사용할 때, 각 프로그램에 대한 기본 매개변수가 이용된다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드에는, (j) 상기 (5) 에 따른 폴리뉴클레오티드 (DNA) 의 전사물에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 가진 RNA 를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드; (k) RNAi 효과를 통해 상기 (5) 에 따른 폴리뉴클레오티드 (DNA) 의 발현을 억제하는 RNA 를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드; (l) 상기 (5) 에 따른 폴리뉴클레오티드 (DNA) 의 전사물을 특이적으로 절단하는 활성을 가진 RNA 를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드; 및 (m) 공동-억제 효과를 통해 상기 (5) 에 따른 폴리뉴클레오티드 (DNA) 의 발현을 억제하는 RNA 를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드가 포함된다. 이들 폴리뉴클레오티드는 벡터 내로 통합될 수 있는데, 상기 벡터는 상기 (a) 내지 (i) 의 폴리뉴클레오티드 (DNA) 의 발현을 억제하는 형질전환을 위해 세포 내로 도입될 수 있다. 따라서, 상기 DNA 의 발현을 억제시키는 것이 바람직한 경우 이들 폴리뉴클레오티드를 적절히 사용할 수 있다.
본원에 사용된 "DNA 의 전사물에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 가진 RNA 를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드"라는 구절은 소위 안티센스 DNA 를 지칭한다. 안티센스 기술은 특정 내인성 유전자의 발현을 억제하는 방법으로 공지되어 있으며, 다양한 출판물에 기재되어 있다(예컨대, Hirajima 및 Inoue: New Biochemistry Experiment Course 2 Nucleic Acids IV Gene Replication and Expression (Japanese Biochemical Society Ed., Tokyo Kagaku Dozin Co., Ltd.) pp.319-347, 1993 참조). 안티센스 DNA 의 서열은 바람직하게는 상기 내인성 유전자의 전부 또는 일부에 상보적이나, 상기 유전자의 발현을 효과적으로 억제할 수 있는 한 완전히 상보적이지는 않을 수 있다. 전사된 RNA 는 상기 표적 유전자의 전사물에 대한 상보성이 바람직하게는 90% 이상, 및 더욱 바람직하게는 95% 이상이다. 안티센스 DNA 의 길이는 적어도 염기 15 개 이상, 바람직하게는 염기 100 개 이상, 및 더욱 바람직하게는 염기 500 개 이상이다.
본원에 사용된 "RNAi 효과를 통해 DNA 발현을 억제하는 RNA 를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드"라는 구절은 RNA 간섭 (RNAi) 을 통해 내인성 유전자의 발현을 억제하는 폴리뉴클레오티드를 지칭한다. 용어 "RNAi"는, 표적 유전자 서열과 동일하거나 유사한 서열을 가진 이중가닥 RNA 를 세포 내로 도입할 때, 도입된 외래 유전자 및 표적 내인성 유전자의 발현이 모두 억제되는 현상을 지칭한다. 본원에 사용되는 RNA 로서는, 예를 들어, 21 내지 25 개 염기 길이의 RNA 간섭을 유발하는 이중가닥 RNA, 예를 들어, dsRNA (double strand RNA, 이중가닥 RNA), siRNA (small interfering RNA, 소간섭 RNA) 또는 shRNA (short hairpin RNA, 짧은 헤어핀 RNA) 를 들 수 있다. 이러한 RNA 는 리포솜과 같은 전달 시스템을 이용하여 목적하는 부위로 국소적으로 전달될 수 있고, 또는 상기 기재한 이중가닥 RNA 를 생성하는 벡터가 그의 국소적 발현을 위해 사용될 수도 있다. 이러한 이중가닥 RNA (dsRNA, siRNA 또는 shRNA) 를 제조 및 사용하는 방법은 다수의 출판물로부터 공지되어 있다(예컨대 하기 참조: 일본 국내단계 PCT 공개 특허 공보 제 2002-516062 호; US 2002/086356A; Nature Genetics, 24(2), 180-183, 2000 Feb.; Genesis, 26(4), 240-244, 2000 April; Nature, 407:6802, 319-20, 2002 Sep. 21; Genes & Dev., Vol.16, (8), 948-958, 2002 Apr.15; Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 99(8), 5515-5520, 2002 Apr. 16; Science, 296(5567), 550-553, 2002 Apr. 19; Proc Natl. Acad. Sci. USA, 99:9, 6047-6052, 2002 Apr. 30; Nature Biotechnology, Vol.20 (5), 497-500, 2002 May; Nature Biotechnology, Vol. 20(5), 500-505, 2002 May; Nucleic Acids Res, 30:10, e46,2002 May 15).
본원에 사용된 "DNA 의 전사물을 특이적으로 절단하는 활성을 가진 RNA 를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드"라는 구절은 일반적으로 리보자임 (ribozyme) 을 지칭한다. 리보자임은 표적 DNA 의 전사물을 절단하여 상기 유전자의 기능을 저해하는 촉매 활성을 가진 RNA 분자이다. 리보자임의 설계는 공지된 다양한 출판물들에서 발견할 수 있다(예컨대 하기 참조: FEBS Lett. 228: 228, 1988; FEBS Lett. 239: 285, 1988; Nucl. Acids. Res. 17: 7059, 1989; Nature 323: 349, 1986; Nucl. Acids. Res. 19: 6751, 1991; Protein Eng 3: 733, 1990; Nucl. Acids Res. 19: 3875, 1991; Nucl. Acids Res. 19: 5125, 1991; Biochem Biophys Res Commun 186: 1271, 1992). 또한, "공동-억제 효과를 통해 DNA 발현을 억제하는 RNA 를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드"라는 구절은 "공동-억제"에 의해 표적 DNA 의 기능을 저해하는 뉴클레오티드를 지칭한다.
본원에 사용된 "공동-억제"라는 용어는 표적 내인성 유전자와 동일한 또는 그와 유사한 서열을 가진 유전자를 세포 내로 형질전환시킬 때, 도입된 외래 유전자 및 표적 내인성 유전자의 발현이 모두 억제되는 현상을 지칭한다. 공동-억제 효과를 가진 폴리뉴클레오티드의 설계 또한 다양한 출판물들에서 발견할 수 있다(예컨대, 하기 참조: Smyth DR: Curr. Biol. 7: R793, 1997, Martienssen R: Curr. Biol. 6: 810, 1996).
2. 본 발명의 단백질
본 발명은 또한 상기 폴리뉴클레오티드 (a) 내지 (i) 중 어느 하나에 의해 인코딩되는 단백질을 제공한다. 본 발명의 바람직한 단백질은 서열번호:2 의 아미노산 서열에서 1 개 또는 수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 및/또는 부가된 서열을 포함하며, 에스테라아제 활성을 갖는다.
이러한 단백질에는, 서열번호:2 의 아미노산 서열에서 상기 언급한 수의 아미노산 잔기가 결실, 치환, 삽입 및/또는 부가된 서열을 가지며 에스테라아제 활성을 갖는 것들이 포함된다. 또한, 이러한 단백질에는, 서열번호: 2 의 아미노산 서열에 대해 상기 기재된 바와 같은 상동성을 가지며 에스테라아제 활성을 갖는 것들이 포함된다.
이러한 단백질은, 예를 들어, 문헌 [MOLECULAR CLONING 제 3 판, CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, Nuc . Acids . Res ., 10: 6487 (1982), Proc . Natl. Acad . Sci . USA 79: 6409 (1982), Gene 34: 315 (1985), Nuc . Acids . Res ., 13: 4431 (1985), Proc . Natl . Acad . Sci . USA 82: 488 (1985)] 에 기재된, 위치지정 돌연변이를 이용하여 수득할 수 있다.
본 발명의 단백질의 아미노산 서열 중의 하나 이상의 아미노산 잔기의 결실, 치환, 삽입 및/또는 부가는 상기 동일 아미노산 서열 중 임의의 하나 이상의 위치에서 하나 이상의 아미노산 잔기가 결실, 치환, 삽입 및/또는 부가된 것을 의미한다. 결실, 치환, 삽입 및/또는 부가 중 2 개 이상의 유형이 동시에 일어날 수도 있다.
이하에, 상호 치환가능한 아미노산 잔기의 예를 열거한다. 동일한 그룹 내의 아미노산 잔기는 상호 치환가능하다. 이하 상기 그룹들을 제시한다.
그룹 A: 류신, 이소류신, 노르류신, 발린, 노르발린, 알라닌, 2-아미노부탄산, 메티오닌, o-메틸세린, t-부틸글리신, t-부틸알라닌, 시클로헥실알라닌; 그룹 B: 아스파르트산, 글루탐산, 이소아스파르트산, 이소글루탐산, 2-아미노아디프산, 2-아미노수베르산 (2-aminosuberic acid); 그룹 C: 아스파라긴, 글루타민; 그룹 D: 리신, 아르기닌, 오르니틴, 2,4-디아미노부탄산, 2,3-디아미노프로피온산; 그룹 E: 프롤린, 3-히드록시프롤린, 4-히드록시프롤린; 그룹 F: 세린, 트레오닌, 호모세린; 및 그룹 G: 페닐알라닌, 티로신.
본 발명의 단백질은 또한 Fmoc 방법 (플루오레닐메틸옥시카르보닐 방법) 및 tBoc 방법 (t-부틸옥시카르보닐 방법) 과 같은 화학적 합성 방법으로 제조할 수도 있다. 또한, 예를 들어, Advanced ChemTech, PerkinElmer, Pharmacia, Protein Technology Instrument, Synthecell-Vega, PerSeptive, Shimazu Corp. 로부터 구매가능한 펩티드 합성기를 또한 화학적 합성에 사용할 수 있다.
3. 본 발명의 벡터 및 상기 벡터로 형질전환된 효모
이어서 본 발명은 상기 기재된 폴리뉴클레오티드를 포함한 벡터를 제공한다. 본 발명의 벡터는 상기 (a) 내지 (i) 에 기재된 폴리뉴클레오티드 또는 상기 (j) 내지 (m) 에 기재된 폴리뉴클레오티드 중 임의의 것이 포함된 벡터에 관한 것이다. 일반적으로, 본 발명의 벡터는 하기가 성분으로서 포함된 발현 카세트를 포함한다: (x) 효모 세포에서 전사할 수 있는 프로모터; (y) 상기 프로모터에 센스 또는 안티센스 방향으로 연결된 상기 (a) 내지 (i) 중 임의의 것으로 기재된 폴리뉴클레오티드; 및 (z) 전사 종결 및 RNA 분자의 폴리아데닐화에 관하여 상기 효모에서 기능하는 신호.
본 발명에 따르면, 후술되는 알콜성 음료 (예컨대, 맥주) 의 양조시에 상기 기재된 본 발명의 단백질을 고도로 발현시키기 위해서는, 이들 폴리뉴클레오티드를 상기 프로모터에 대해 센스 방향으로 도입하여 상기 (a) 내지 (i) 중 임의의 것으로 기재된 폴리뉴클레오티드 (DNA) 의 발현을 촉진시킨다. 나아가, 후술되는 알콜성 음료 (예컨대, 맥주) 의 양조시에 상기 본 발명의 단백질을 억제하기 위해서는, 이들 폴리뉴클레오티드를 상기 프로모터에 대해 안티센스 방향으로 도입하여 상기 (a) 내지 (i) 중 임의의 것으로 기재된 폴리뉴클레오티드 (DNA) 의 발현을 억제시킨다. 상기 본 발명의 단백질을 억제하기 위해서, 상기 폴리뉴클레오티드를, (j) 내지 (m) 중 어느 하나의 폴리뉴클레오티드가 발현되도록 벡터 내로 도입할 수 있다. 본 발명에 따르면, 표적 유전자 (DNA) 를 파괴하여 상기 기술한 DNA 의 발현 또는 상기 기술한 단백질의 발현을 억제할 수 있다. 표적 유전자 내에서 유전자 산물의 발현에 관련된 영역, 예를 들어, 코딩 영역 또는 프로모터 영역에 또는 이로부터 하나 이상의 염기를 부가 또는 결실시키거나, 또는 이들 영역 전체를 결실시켜 유전자를 파괴시킬 수 있다. 이러한 유전자 파괴는 공지된 출판물들에서 찾아볼 수 있다(예컨대, 하기 참조: Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 76, 4951(1979), Methods in Enzymology, 101, 202(1983), 일본 특허 출원 공개 제 6-253826 호).
효모에 도입된 벡터는 다중복제(multicopy)형 (YEp 형), 단일복제형 (YCp 형), 또는 염색체 통합형 (YIp 형) 중 임의의 것일 수 있다. 예를 들어, YEp24 (J. R. Broach 등, EXPERIMENTAL MAMPULATION OF GENE EXPRESSION, Academic Press, New York, 83, 1983) 는 YEp 형 벡터로 알려져 있고, YCp50 (M. D. Rose 등, Gene 60: 237, 1987) 는 YCp 형 벡터로 알려져 있으며, YIp5 (K. Struhl 등, Proc. Natl . Acad . Sci . USA, 76: 1035, 1979) 는 YIp 형 벡터로 알려져 있고, 이들 모두 용이하게 입수가능하다.
효모에서 유전자 발현을 조정하는 프로모터/종결자는 이들이 양조 효모에서 기능하며, 발효액 중의 구성성분들에 의해 영향을 받지 않는 한 임의의 조합일 수 있다. 예를 들어, 글리세르알데히드류 3-포스페이트 탈수소효소 유전자 (TDH3) 의 프로모터, 또는 3-포스포글리세레이트 키나아제 유전자 (PGK1) 의 프로모터를 사용할 수 있다. 이들 유전자들은, 예를 들어, 문헌 [M. F. Tuite 등, EMBO J., 1, 603 (1982)] 에 상세히 기재된 바와 같이 사전에 클로닝된 것이며, 이들은 공지된 방법으로 용이하게 수득가능하다.
영양요구성 마커는 양조 효모에 대한 형질전환시 선별 마커로 사용될 수 없기 때문에, 예를 들어, 제네티신(geneticin)-저항성 유전자 (G418r), 구리-저항성 유전자 (CUP1) (Marin 등, Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 81, 337 1984) 또는 세룰레닌(cerulenin)-저항성 유전자 (fas2m, PDR4) (각각, Junji Inokoshi 등, Biochemistiy, 64, 660, 1992; 및 Hussain 등, Gene, 101 : 149, 1991) 가 사용될 수 있다.
상기 기재된 바와 같이 구축된 벡터를 숙주 효모에 도입한다. 숙주 효모의 예로서는, 양조하는데 사용될 수 있는 임의의 효모, 예를 들어, 맥주, 와인 및 사케 (sake) 용 양조 효모를 들 수 있다. 구체적으로, 사카로마이세스 (Saccharomyces) 속(屬)과 같은 효모를 사용할 수 있다. 본 발명에 따르면, 라거 양조 효모, 예를 들어, 사카로마이세스 파스토리아누스 (Saccharomyces pastorianus) W34/70 등, 사카로마이세스 칼스버겐시스 (Saccharomyces carlsbergensis) NCYC453 또는 NCYC456 등, 또는 사카로마이세스 세레비지애 (Saccharomyces cerevisiae) NBRC1951, NBRC1952, NBRC1953 또는 NBRC1954 등을 사용할 수 있다. 또한, 사카로마이세스 세레비지애 NCYC90 와 같은 위스키 효모, 일본양조협회 (Brewing Society of Japan) 로부터의 와인 효모 #1, 3 및 4 와 같은 와인 효모, 및 일본양조협회로부터의 사케 효모 #7 및 9 와 같은 사케 효모를 또한 사용할 수 있으나 이들에 한정되지는 않는다. 본 발명에서는, 사카로마이세스 파스토리아누스와 같은 라거 양조 효모를 사용하는 것이 바람직할 수 있다.
효모 형질전환 방법은 일반적으로 사용되는 공지된 방법일 수 있다. 예를 들어, 사용될 수 있는 방법으로는, 이들에 제한되는 것은 아니나, 전기천공 방법 (Meth . Enzym ., 194: 182 (1990)), 스페로플라스트 (spheroplast) 방법 (Proc . Natl. Acad . Sci . USA, 75: 1929(1978)), 리튬 아세테이트 방법 (J. Bacteriology, 153: 163 (1983)), 및 문헌 [Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 75: 1929 (1978), METHODS IN YEAST GENETICS, 2000 Edition: A Cold Spring Harbor Laboratory Course Manual] 에 기재된 방법을 들 수 있다.
더욱 구체적으로, 숙주 효모를 표준 효모 영양 배지 (예컨대, YEPD 배지 (Genetic Engineering. Vol. 1, Plenum Press, New York, 117(1979)) 등) 에서 OD600 nm 가 1 내지 6 이 되도록 배양한다. 상기 배양 효모를 원심분리로 수집하고, 세정한 후, 약 1 내지 2 M 의 농도의 알칼리 금속 이온, 바람직하게는 리튬 이온으로 예비-처리한다. 상기 세포를 약 30℃에서 약 60 분간 방치되도록 한 후, 도입시킬 DNA (약 1 내지 20 ㎍) 와 함께 약 30℃에서 약 60 분간을 더 방치한다. 폴리에틸렌글리콜, 바람직하게는 약 4,000 달톤의 폴리에틸렌글리콜을 최종 농도가 약 20% 내지 50% 가 되도록 첨가한다. 약 30℃에서 약 30 분간 방치한 후, 상기 세포를 약 42℃에서 약 5 분간 가열한다. 바람직하게는, 상기 세포 현탁물을 표준 효모 영양 배지로 세정하고, 소정의 양의 새로운 표준 효모 영양 배지에 첨가한 후, 약 30℃에서 약 60 분간 방치한다. 그 후, 이를 선별 마커로서 항생물질 등이 함유된 표준 한천 배지에 시딩 (seeding) 하여 형질전환체를 수득한다.
다른 일반적인 클로닝 기술은, 예를 들어, 문헌 [MOLECULAR CLONING 제 3 판], 및 문헌 [METHODS IN YEAST GENETICS, A LABORATORY MANUAL (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY)] 에서 찾아볼 수 있다.
4. 본 발명에 따른
알콜성
음료의 제조 방법 및 상기 방법으로 제조된
알콜성
음료
상기 기재된 본 발명의 벡터를 표적 알콜성 생성물을 양조하기에 적합한 효모 내로 도입한다. 상기 효모는 증가된 에스테르의 함량을 가져 향 및 풍미가 강화된 목적하는 알콜성 음료를 제조하는데 사용될 수 있다. 덧붙여, 후술되는 본 발명의 효모 평가 방법에 의해 선별된 효모를 또한 사용할 수 있다. 표적 알콜성 음료에는, 예를 들어, 이들에 제한되는 것은 아니나 맥주, 유탄산 (sparkling) 알콜 음료 (happoushu) 와 같은 맥주맛 음료, 와인, 위스키, 사케 등이 있다. 나아가, 본 발명에 따르면, 필요할 경우, 에스테르 수준이 감소된 목적하는 알콜성 음료는 상기 표적 유전자의 발현이 억제된 양조 효모를 사용하여 제조가능하다. 다시 말해, 알콜성 음료를 제조하기 위한 발효를 위해 상기 기재된 본 발명의 벡터가 도입된 효모, 상기 기재된 본 발명의 폴리뉴클레오티드 (DNA) 의 발현이 억제된 효모 또는 후술되는 본 발명의 효모 평가 방법으로 선별된 효모를 사용하여 에스테르의 생성량을 제어시킴 (증가 또는 감소시킴) 으로써 에스테르 수준이 제어 (증가 또는 감소) 된 원하는 종류의 알콜성 음료를 제조할 수 있다.
이들 알콜성 음료를 제조하기 위해서, 본 발명에 따라 수득된 양조 효모를 모 균주 (parent strain) 대신 사용하는 것을 제외하고는 공지의 기술을 사용할 수 있다. 물질, 제조 장비, 제조 관리 등이 종래의 것과 정확히 동일할 수 있으므로, 에스테르의 함량이 제어된 알콜성 음료의 제조 비용을 증가시킬 필요가 없다. 따라서, 본 발명에 따르면, 향 및 풍미가 우수한 알콜성 음료를 기존의 설비를 사용하여 비용 증가 없이 제조할 수 있다.
5. 본 발명의 효모 평가 방법
본 발명은 서열번호:1 의 뉴클레오티드 서열을 가진 에스테라아제 유전자의 뉴클레오티드 서열에 기초하여 설계된 프라이머 또는 탐침자를 사용하여 시험 효모의 에스테르-생성 능력을 평가하는 방법에 관한 것이다. 이러한 평가 방법을 위한 일반적인 기술은 공지되어 있으며, 예를 들어, WO01/040514, 일본 공개 특허 출원 제 8-205900 호 등에 기재되어 있다. 상기 평가 방법은 하기 기술된다.
먼저, 시험 효모의 게놈을 준비한다. 상기 준비를 위해, Hereford 방법 또는 아세트산칼륨 방법과 같은 공지된 임의의 방법을 사용할 수 있다(예컨대, METHODS IN YEAST GENETICS, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 130 (1990)). 에스테라아제 유전자의 뉴클레오티드 서열 (바람직하게는, ORF 서열) 에 기초하여 설계된 프라이머 또는 탐침자를 사용하여, 수득한 시험 효모 게놈에서 상기 유전자 또는 상기 유전자에 특이적인 서열의 존재 여부를 결정한다. 상기 프라이머 또는 탐침자는 공지의 기술에 따라 설계될 수 있다.
상기 유전자 또는 상기 특이적 서열의 검출은 공지의 기술을 이용하여 실시될 수 있다. 예를 들어, 상기 특이적 서열의 일부 또는 전부가 포함된 폴리뉴클레오티드 또는 상기 뉴클레오티드 서열에 상보적인 뉴클레오티드 서열이 포함된 폴리뉴클레오티드를 하나의 프라이머로 사용하고, 상기 서열의 상류 또는 하류의 서열의 일부 또는 전부가 포함된 폴리뉴클레오티드 또는 상기 뉴클레오티드 서열에 상보적인 뉴클레오티드 서열이 포함된 폴리뉴클레오티드를 또 다른 프라이머로 사용하여 PCR 방법으로 상기 효모의 핵산을 증폭시켜, 증폭된 산물의 존재 여부 및 상기 증폭된 산물의 분자량을 결정한다. 프라이머에 사용된 폴리뉴클레오티드의 염기의 수는 일반적으로 10 염기쌍 (bp) 이상, 바람직하게는 15 내지 25 bp 이다. 일반적으로, 상기 프라이머들 사이의 염기의 수는 적당하게는 300 내지 2000 bp 이다.
PCR 의 반응 조건으로는 특별한 제한이 없으나, 예를 들어, 변성 온도는 90 내지 95 ℃, 어닐링 (annealing) 온도는 40 내지 60℃, 신장 온도는 60 내지 75℃, 및 사이클 횟수는 10 이상일 수 있다. 결과적으로 생성된 반응 산물은, 예를 들어, 아가로오스 겔을 이용한 전기영동으로 분리하여, 증폭된 산물의 분자량을 측정할 수 있다. 상기 방법은, 증폭된 산물의 분자량이 상기 특정 부분의 DNA 분자를 포함하는 크기인지의 여부로 결정되는 바 효모의 에스테르 생성 능력의 예측 및 평가를 가능하게 한다. 또한, 증폭된 산물의 뉴클레오티드 서열을 분석함으로써, 상기 능력을 더욱 정확히 예측 및/또는 평가할 수 있다.
나아가, 본 발명에서는, 시험 효모를 배양하여 서열번호: 1 의 뉴클레오티드 서열을 가진 에스테라아제 유전자의 발현 수준을 측정하여 상기 시험 효모의 에스테르-생성 능력을 평가한다. 상기 에스테라아제 유전자의 발현 수준을 측정함에 있어서, 상기 시험 효모를 배양한 후, 에스테라아제 유전자로부터 생성된 mRNA 또는 단백질을 정량한다. mRNA 또는 단백질의 정량은 공지의 기술을 이용함으로써 실시될 수 있다. 예를 들어, mRNA 는 노던 (Northern) 혼성화 또는 정량적 RT-PCR 로 정량할 수 있고, 단백질은, 예를 들어, 웨스턴 블랏팅 (Western blotting) 으로 정량할 수 있다(CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, John Wiley & Sons 1994-2003).
또한, 시험 효모를 배양하고, 서열번호: 1 의 뉴클레오티드 서열을 갖는 에스테라아제 유전자의 발현 수준을 측정하여 표적 에스테르-생성 능력에 따른 유전자 발현 수준을 가진 시험 효모를 선별함으로써, 목적하는 알콜성 음료를 양조하는데 유리한 효모를 선별한다. 또한, 참조 효모 및 시험 효모를 배양하여 각 효모에서의 상기 유전자의 발현 수준을 측정 및 비교하여, 유리한 시험 효모를 선별할 수도 있다. 더욱 구체적으로, 예를 들어, 참조 효모 및 하나 이상의 시험 효모를 배양하고, 각 효모에서 서열번호: 1 의 뉴클레오티드 서열을 가진 에스테라아제 유전자의 발현 수준을 측정한다. 참조 효모에서보다 상기 유전자가 더 많이 또는 더 적게 발현되는 시험 효모를 선별함으로써, 알콜성 음료를 양조하는데 적당한 효모를 선별할 수 있다.
다르게는, 시험 효모를 배양하고, 에스테르-생성 능력이 더 높거나 더 낮은, 또는 에스테라아제 활성이 더 높거나 더 낮은 효모를 선별함으로써, 목적하는 알콜성 음료를 양조하는데 적당한 효모를 선별할 수 있다.
이들 경우에, 시험 효모 또는 참조 효모는, 예를 들어, 본 발명의 벡터가 도입된 효모, 본 발명의 폴리뉴클레오티드 (DNA) 의 발현이 제어된 효모, 인공적으로 변이유발된 효모 또는 자연적으로 변이유발된 효모일 수 있다. 상기 에스테르-생성 능력은, 예를 들어, 문헌 [Method of J. Am. Soc. Brew. Chem. 49:152-157, 1991] 에 기재된 방법에 의해 측정가능하다. 에스테라아제 활성은, 예를 들어, 문헌 [Appl. Microbiol. Biotechnol. 53: 596-600, 2000] 에 기재된 방법에 의해 측정가능하다. 돌연변이 처리는, 예를 들어, 자외선 조사 및 방사선 조사와 같은 물리적 방법, 및 EMS (에틸메탄 술포네이트) 및 N-메틸-N-니트로소구아니딘과 같은 약품으로의 처리와 관련된 화학적 방법을 비롯한 임의의 방법을 이용할 수 있다(예컨대, 하기 참조: Yasuji Oshima Ed., BIOCHEMISTRY EXPERIMENTS vol. 39, Yeast Molecular Genetic Experiments, pp. 67-75, JSSP).
또한, 참조 효모 또는 시험 효모로 사용된 효모의 예로서는, 양조에 사용될 수 있는 임의의 효모, 예를 들어, 맥주, 와인, 사케 등을 위한 양조 효모를 들 수 있다. 더욱 구체적으로, 사카로마이세스 속과 같은 효모를 사용할 수 있다(예컨대, S. 파스토리아누스, S. 세레비지애 및 S. 칼스버겐시스). 본 발명에 따르면, 라거 양조 효모, 예를 들어, 사카로마이세스 파스토리아누스 W34/70; 사카로마이세스 칼스버겐시스 NCYC453 또는 NCYC456; 또는 사카로마이세스 세레비지애 NBRC1951, NBRC1952, NBRC1953 또는 NBRC1954 등을 사용할 수 있다. 또한, 일본양조협회로부터의 와인 효모 #1, 3 및 4 와 같은 와인 효모; 및 일본양조협회로부터의 사케 효모 #7 및 9 와 같은 사케 효모를 또한 사용할 수 있지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 본 발명에서, 사카로마이세스 파스토리아누스와 같은 라거 양조 효모를 사용하는 것이 바람직할 수 있다. 참조 효모 및 시험 효모는 상기 효모들로부터 임의 조합으로 선택될 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예를 참조하여 더욱 상세히 기술할 것이다. 그러나, 본 발명은 후술되는 실시예에 제한되지 않는다.
실시예
1:
에스테라아제
유전자 (비(非)ScIAH1) 의
클로닝
일본 특허 출원 공개 제 2004-283169 호에 기재된 비교 데이터베이스를 이용한 검색의 결과로서 라거 양조 효모로부터 특이적인 신규한 에스테라아제 유전자 (비(非)ScIAH1) (서열번호: 1) 가 발견되었다. 상기 획득한 뉴클레오티드 서열 정보에 기초하여, 각각 상기 전장 유전자들을 증폭하도록 프라이머들인 비(非)ScIAH1_for (서열번호: 3) 및 비(非)ScIAH1_rv (서열번호: 4) 를 설계하였다. 게놈 서열분석 균주인 사카로마이세스 파스토리아누스 Weihenstephan 34/70 균주 (또한, "W34/70 균주"로 약기됨) 의 염색체 DNA 를 주형으로 사용하여 PCR 을 수행하여, 비(非)ScIAH1 의 전장 유전자를 포함한 DNA 절편 (약 0.7 kb) 을 수득하였다.
이렇게 수득한 비(非)ScIAH1 유전자 절편을 TA 클로닝에 의해 pCR2.1-TOPO 벡터 (Invitrogen) 내로 삽입하였다. 비(非)ScIAH1 유전자의 뉴클레오티드 서열들을 Sanger 방법 (F. Sanger, Science, 214: 1215, 1981) 으로 분석하여 뉴클레오티드 서열을 확인하였다.
실시예
2: 맥주 발효 시험 동안의 비(非)ScIAH1 유전자의 발현 분석
라거 양조 효모인 사카로마이세스 파스토리아누스 W34/70 균주를 사용하여 맥주 발효 시험을 수행한 후, 발효 동안 효모 세포로부터 추출한 mRNA 를 DNA 마이크로어레이로 분석하였다.
맥아즙 (wort) 추출물 농도 12.69%
맥아즙 함량 70 L
맥아즙에 용해된 산소 농도 8.6 ppm
발효 온도 15 ℃
효모 주입율 (pitching rate) 12.8 x 106 개 세포/mL
발효주를 시간에 따라 표본추출하고, 효모 성장 양 (도 1) 및 겉보기 추출물 농도 (도 2) 의 시간에 따른 변화를 관찰하였다. 동시에, 효모 세포의 표본추출을 수행하고, 준비된 mRNA 를 비오틴으로 표지하고, 이를 맥주 효모 DNA 마이크로어레이에 혼성화하였다. GCOS; GeneChip Operating Software 1.0 (Affymetrix Co. 제조) 을 사용하여 신호를 검출하였다. 비(非)ScIAH1 유전자의 발현 패턴은 도 3 에 나타나 있다. 그 결과, 일반적인 맥주 발효에서 비(非)ScIAH1 유전자가 발현된 것이 확인되었다.
실시예
3: 비(非)ScIAH1 유전자 고도 발현 균주의 구축
실시예 1 에 기재된 비(非)ScIAH1/pCR2.1-TOPO 를 제한효소들인 SacI 및 NotI 으로 절단하여, 그의 단백질-인코딩 영역의 전체 길이가 포함된 DNA 절편을 제조하였다. 상기 절편을 제한효소들인 SacI 및 NotI 으로 처리된 pYCGPYNot 에 결찰하여, 비(非)ScIAH1 고도 발현 벡터 비(非)ScIAH1/pYCGPYNot 를 구축하였다. pYCGPYNot 는 YCp-형 효모 발현 벡터이다. 삽입된 유전자는 피루베이트 키나아제 유전자 PYK1 프로모터에 의해 고도 발현된다. 상기 효모에는 제네 티신-저항성 유전자 G418r 이 선별 마커로 포함되고, 대장균 (Escherichia coli) 에는 선별 마커로서 암피실린-저항성 유전자 Ampr 가 포함된다.
상기 방법으로 제조된 고도 발현 벡터를 사용하여, 상기 균주 사카로마이세 스 파스토리아누스 Weihenstephaner 34/70 을 일본 특허 출원 공개 제 H07-303475 호에 기재된 방법으로 형질전환시켰다. 형질전환체를 제네티신 300 mg/L 이 함유된 YPD 플레이트 배지 (1% 효모 추출물, 2% 폴리펩톤, 2% 포도당 및 2% 한천) 에서 선별하였다.
실시예
4: 맥주 발효 시험에서 형성된 에스테르의 양 분석
모 균주 (W34/70 균주) 및 실시예 3 에서 수득한 비(非)ScIAH1 고도 발현 균주를 사용하여 하기 조건 하에서 발효 시험을 수행하였다.
맥아즙 추출물 농도: 12 %
맥아즙 부피: 2 L
맥아즙에 용해된 산소 농도: 8 ppm
발효 온도: 15 ℃
효모 주입율: 5 g/L
효모 성장 (OD660) (도 4) 및 추출물 소비량 (도 5) 에 있어서의 시간-기반 변화를 조사하기 위해서 상기 발효액을 시간에 따라 표본추출하였다. 헤드 스페이스 기체 크로마토그래피를 이용하여 발효 완료시의 고급 알콜 및 추출물 농도의 정량을 수행하였다(J. Am. Soc. Brew. Chem. 49:152-157, 1991).
표 1 에 기재된 바와 같이, 발효 완료시에 형성된 에틸 아세테이트의 양은 모 균주에서는 34.4 ppm 인데 반해, 비(非)ScIAH1 고도 발현 균주에서는 24.0 ppm 이었다. 형성된 이소아밀 아세테이트의 양은 모 균주에서는 2.1 ppm 인데 반해, 비(非)ScIAH1 고도 발현 균주에서는 0.2 ppm 이었다. 상기 결과에 기초하면, 형성된 에틸 아세테이트 및 이소아밀 아세테이트의 양은 비(非)ScIAH1 의 고도 발현에 의해 30 내지 90% 감소한 것으로 명백히 나타났다.
| 모 균주(W34/70) 비(非)ScIAH1 고도 발현 균주 |
| 에틸 아세테이트 34.4 24.0 (70%) |
| 이소아밀 아세테이트 2.1 0.2 (9.5%) |
| 단위: ppm 괄호 안의 값은 모 균주에 대한 상대적 값을 나타냄. |
실시예
5: 비(非)ScIAH1 유전자의 파괴
문헌에 기재된 방법에 따라 약물 저항성 마커 (pFA6a(G418r), pAG25(nat1), pAG32(hph)) 가 포함된 플라스미드를 주형으로 사용하는 PCR 을 이용하여 유전자 파괴용 절편들을 제조하였다(Goldstein 등, Yeast, 15, 1541 (1999)). 비(非)ScIAH1_delta_for (서열번호. 5) 및 비(非)ScIAH1_delta_rv (서열번호. 6) 로 이루어진 프라이머들을 상기 PCR 프라이머들로 사용하였다.
양조 효모 사카로마이세스 파스토리아누스 균주 W34/70 으로부터 분리한 포자 클론 (W34/70-2) 을 상기 기재한 바와 같이 제조된 유전자 파괴용 절편들로 형질전환하였다. 형질전환은 일본 특허 출원 공개 제 H07-303475 호에 기재된 방법에 따라 수행하였고, 형질전환체는 제네티신 300 mg/L, 노르세오트리신 50 mg/L 또는 하이그로마이신 B 200 mg/L 이 함유된 YPD 플레이트 배지 (1% 효모 추출물, 2% 폴리펩톤, 2% 포도당, 2% 한천) 상에서 선별하였다.
실시예
6: 맥주 발효 시험에서 형성된 에스테르의 양 분석
모 균주 (W34/70-2 균주) 및 실시예 5 에서 수득한 비(非)ScIAH1 파괴 균주를 사용하여 하기 조건 하에서 발효 시험을 수행하였다.
맥아즙 추출물 농도: 13 %
맥아즙 부피: 1 L
맥아즙에 용해된 산소 농도: 8 ppm
발효 온도: 15 ℃
효모 주입율: 5 g/L
효모 성장 (OD660) (도 6) 및 추출물 소비량 (도 7) 에 있어서의 시간-기반 변화를 조사하기 위해서 상기 발효액을 시간에 따라 표본추출하였다. 헤드 스페이스 기체 크로마토그래피를 이용하여 발효 완료시의 에스테르 농도의 정량을 수행하였다(J. Am. Soc. Brew. Chem. 49:152-157, 1991).
표 2 에 기재된 바와 같이, 발효 완료시에 형성된 에틸 아세테이트의 양은 모 균주에서는 26.2 ppm 인데 반해, 비(非)ScIAH1 파괴 균주에서는 28.1 ppm 이었다. 형성된 이소아밀 아세테이트의 양은 모 균주에서는 2.3 ppm 인데 반해, 비(非)ScIAH1 파괴 균주에서는 2.9 ppm 이었다. 상기 결과에 기초하면, 형성된 에틸 아세테이트 및 이소아밀 아세테이트의 양은 비(非)ScIAH1 의 파괴에 의해 7 내지 26% 증가한 것으로 명백히 나타났다.
| 모 균주(W34/70-2) 비(非)ScIAH1 파괴 균주 |
| 에틸 아세테이트 26.2 28.1 (107%) |
| 이소아밀 아세테이트 2.3 2.9 (126%) |
| 단위: ppm 괄호 안의 값은 모 균주에 대한 상대적 값을 나타냄. |
본 발명의 알콜성 음료 제조 방법에 따르면, 향 및 풍미가 우수한 알콜성 음료의 제조가 가능한데, 그 이유는 상기 방법이 에스테르의 함량을 제어할 수 있기 때문이다.
더 구체적으로, 본 발명의 알콜성 음료 제조 방법에 따르면, 향 및 풍미가 우수한 알콜성 음료의 제조가 가능한데, 그 이유는 상기 방법이 생성물에 화려한 향을 부여하는 에스테르의 함량을 증가시킬 수 있기 때문이다. 또한, 지나치게 높은 에스테르 함량이 바람직하지 않은 맥주와 같은 맥아 음료의 경우에, 보다 바람직한 향 및 풍미를 가진 알콜성 음료의 제조가 가능한데, 그 이유는 상기 방법이 또한 그에 함유된 에스테르의 양을 감소시킬 수 있기 때문이다.
<110> Suntory Limited
<120> Esterase gene and use thereof
<130> G07-0103
<140> PCT/JP2006/318466
<141> 2006-09-12
<150> JP2005-265918
<151> 2005-09-13
<150> JP2006-47561
<151> 2006-02-23
<160> 6
<170> KopatentIn 1.71
<210> 1
<211> 717
<212> DNA
<213> Saccharomyces sp.
<400> 1
atggaatacg agaagtttct attgttcggg gattccatca ctgaatttgc attcaatact 60
aggcccacag aggatgataa agattattat gctcttggag ccgcgttggt taacgagtat 120
acaagaaaaa tggacatcct tcagcgagga ttcaaagggt acaactccaa gtgggcactg 180
aaggttcttc ctgaaatctt aaacaatgag cccaacattg ccatggccac catctttttc 240
ggtgccaacg atgcatgctt agctggccct caatgtgtgc ctctcttaga atttgtcgat 300
aatataggtc aaatggtgtc tgtcatgaaa gctcatcacg ttcttcctat tattgtaggc 360
ccggcactgg tggatagaga gaagtgggaa aaagcaaggg ctgacgaaac agctctcgga 420
tatgtgcgta ccaacgagaa ctttacagtc tattctgatg cgttagcaaa gctggccgac 480
gacgaaaaaa tccccttcgt gaacttgaat aaagcgtttc aaaagataga cggtgatgcc 540
tggaagagcc tactaacgga tggactacac ttctctgggg aaggatacaa aatcttccat 600
gatgaattga tcaaagccat cgaggcacac tatcctcaat accatcctaa taacatggaa 660
tacaaactaa cagactggag agatgtgttg gatgacggct ccaacatttt gtcttaa 717
<210> 2
<211> 238
<212> PRT
<213> Saccharomyces sp.
<400> 2
Met Glu Tyr Glu Lys Phe Leu Leu Phe Gly Asp Ser Ile Thr Glu Phe
1 5 10 15
Ala Phe Asn Thr Arg Pro Thr Glu Asp Asp Lys Asp Tyr Tyr Ala Leu
20 25 30
Gly Ala Ala Leu Val Asn Glu Tyr Thr Arg Lys Met Asp Ile Leu Gln
35 40 45
Arg Gly Phe Lys Gly Tyr Asn Ser Lys Trp Ala Leu Lys Val Leu Pro
50 55 60
Glu Ile Leu Asn Asn Glu Pro Asn Ile Ala Met Ala Thr Ile Phe Phe
65 70 75 80
Gly Ala Asn Asp Ala Cys Leu Ala Gly Pro Gln Cys Val Pro Leu Leu
85 90 95
Glu Phe Val Asp Asn Ile Gly Gln Met Val Ser Val Met Lys Ala His
100 105 110
His Val Leu Pro Ile Ile Val Gly Pro Ala Leu Val Asp Arg Glu Lys
115 120 125
Trp Glu Lys Ala Arg Ala Asp Glu Thr Ala Leu Gly Tyr Val Arg Thr
130 135 140
Asn Glu Asn Phe Thr Val Tyr Ser Asp Ala Leu Ala Lys Leu Ala Asp
145 150 155 160
Asp Glu Lys Ile Pro Phe Val Asn Leu Asn Lys Ala Phe Gln Lys Ile
165 170 175
Asp Gly Asp Ala Trp Lys Ser Leu Leu Thr Asp Gly Leu His Phe Ser
180 185 190
Gly Glu Gly Tyr Lys Ile Phe His Asp Glu Leu Ile Lys Ala Ile Glu
195 200 205
Ala His Tyr Pro Gln Tyr His Pro Asn Asn Met Glu Tyr Lys Leu Thr
210 215 220
Asp Trp Arg Asp Val Leu Asp Asp Gly Ser Asn Ile Leu Ser
225 230 235
<210> 3
<211> 40
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 3
gagctcatag cggccatgga atacgagaag tttctattgt 40
<210> 4
<211> 42
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 4
ggatcctatg cggccgcctc attattgttt ttttccctga aa 42
<210> 5
<211> 70
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 5
aggtaccttg ggcattatca attttttggc gcattacatt gtagtggaac ccttgacagt 60
cttgacgtgc 70
<210> 6
<211> 70
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 6
gggcgttatg tgaagggaaa ataagtcaat acgtacaaaa ggactactgc cgcacttaac 60
ttcgcatctg 70
Claims (23)
- 하기로 이루어진 군에서 선택되는 폴리뉴클레오티드:(a) 서열번호:1 의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드를 포함한 폴리뉴클레오티드;(b) 서열번호:2 의 아미노산 서열로 이루어진 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한 폴리뉴클레오티드;(c) 에스테라아제 활성을 가지며 서열번호:2 의 아미노산 서열에서 하나 이상의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 및/또는 부가된 서열로 이루어진 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한 폴리뉴클레오티드;(d) 에스테라아제 활성을 가지며 서열번호:2 의 아미노산 서열과의 일치성이 60% 이상인 아미노산 서열을 갖는 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한 폴리뉴클레오티드;(e) 엄격한 조건하에서 서열번호:1 의 뉴클레오티드 서열에 상보적인 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드에 혼성화하며, 에스테라아제 활성을 갖는 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한 폴리뉴클레오티드; 및(f) 엄격한 조건하에서 서열번호:2 의 아미노산 서열의 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드의 뉴클레오티드 서열에 상보적인 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드에 혼성화하며 에스테라아제 활성을 갖는 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한 폴리뉴클레오티드.
- 제 1 항에 있어서, 하기로 이루어진 군에서 선택되는 폴리뉴클레오티드:(g) 서열번호: 2 의 아미노산 서열로 이루어진 단백질을 인코딩하거나, 또는 서열번호: 2 의 아미노산 서열 중 1 내지 10 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 및/또는 부가된 서열을 인코딩하고, 이때 상기 단백질은 에스테라아제 활성을 갖는 폴리뉴클레오티드;(h) 에스테라아제 활성을 가지며 서열번호: 2 의 아미노산 서열과의 일치성이 90% 이상인 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드; 및(i) 서열번호: 1 에 혼성화하거나 또는 고도로 엄격한 조건하에서 서열번호: 1 의 뉴클레오티드 서열에 상보적인 뉴클레오티드 서열에 혼성화하며, 에스테라아제 활성을 갖는 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드.
- 제 1 항에 있어서, 서열번호: 1 로 이루어진 폴리뉴클레오티드를 포함한 폴리뉴클레오티드.
- 제 1 항에 있어서, 서열번호: 2 로 이루어진 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한 폴리뉴클레오티드.
- 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, DNA 인 폴리뉴클레오티드.
- 하기로 이루어진 군에서 선택되는 폴리뉴클레오티드:(j) 제 5 항에 따른 폴리뉴클레오티드 (DNA) 의 전사물에 상보적인 뉴클레오티드 서열의 RNA 를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드;(k) RNAi 효과를 통해 제 5 항에 따른 폴리뉴클레오티드 (DNA) 의 발현을 억제하는 RNA 를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드;(l) 제 5 항에 따른 폴리뉴클레오티드 (DNA) 의 전사물을 특이적으로 절단하는 활성을 가진 RNA 를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드; 및(m) 공동-억제 효과를 통해 제 5 항에 따른 폴리뉴클레오티드 (DNA) 의 발현을 억제하는 RNA 를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드.
- 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드로 인코딩되는 단백질.
- 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드를 포함한 벡터.
- 제 6 항의 폴리뉴클레오티드를 포함한 벡터.
- 제 8 항 또는 제 9 항의 벡터를 포함한 효모.
- 제 10 항에 있어서, 제 8 항의 벡터를 도입함에 의해 에스테르-생성 능력이 감소되는 효모.
- 제 9 항의 벡터를 도입함에 의해, 또는 제 5 항의 폴리뉴클레오티드 (DNA) 와 관련된 유전자를 파괴함에 의해 제 5 항의 폴리뉴클레오티드 (DNA) 의 발현이 억제되는 효모.
- 제 11 항에 있어서, 제 7 항의 단백질의 발현 수준을 증가시킴에 의해 에스테르-생성 능력이 감소되는 효모.
- 제 10 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항의 효모를 사용함에 의한 알콜성 음료의 제조 방법.
- 제 14 항에 있어서, 양조된 알콜성 음료가 맥아 음료인 알콜성 음료의 제조 방법.
- 제 14 항에 있어서, 양조된 알콜성 음료가 와인인 알콜성 음료의 제조 방법.
- 제 14 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항의 방법으로 제조되는 알콜성 음료.
- 서열번호: 1 의 뉴클레오티드 서열을 가진 에스테라아제 유전자의 뉴클레오 티드 서열에 기초하여 고안된 프라이머 또는 탐침자 (probe) 를 사용하는 것을 포함하는, 시험 효모의 에스테르-생성 능력을 평가하는 방법.
- 하기를 포함하는 시험 효모의 에스테르-생성 능력을 평가하는 방법: 시험 효모를 배양함; 및 서열번호: 1 의 뉴클레오티드 서열을 갖는 에스테라아제 유전자의 발현 수준을 측정함.
- 하기를 포함하는, 효모의 선별 방법: 시험 효모를 배양함; 제 7 항에 따른 단백질을 정량하거나 또는 서열번호: 1 의 뉴클레오티드 서열을 가진 에스테라아제 유전자의 발현 수준을 측정함; 및 표적 에스테르-생성 능력에 따른 상기 단백질의 양 또는 상기 유전자 발현 수준을 갖는 시험 효모를 선별함.
- 제 20 항에 있어서, 하기를 포함하는 효모의 선별 방법: 참조 효모 및 시험 효모를 배양함; 각 효모에서 서열번호: 1 의 뉴클레오티드 서열을 갖는 에스테라아제 유전자의 발현 수준을 측정함; 및 상기 참조 효모에서보다 상기 유전자가 더 높거나 또는 더 낮게 발현되는 시험 효모를 선별함.
- 제 20 항에 있어서, 하기를 포함하는 효모의 선별 방법: 참조 효모 및 시험 효모를 배양함; 각 효모에서 제 7 항에 따른 단백질을 정량함; 및 참조 효모에서보다 상기 단백질의 양이 더 많거나 더 적은 시험 효모를 선별함.
- 하기를 포함하는 알콜성 음료의 제조 방법: 제 10 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 따른 효모 또는 제 20 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 따른 방법에 의해 선별된 효모를 사용하여 알콜성 음료의 제조를 위한 발효를 수행함; 및 에스테르의 생성량을 조절함.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JPJP-P-2005-00265918 | 2005-09-13 | ||
| JP2005265918 | 2005-09-13 | ||
| JPJP-P-2006-00047561 | 2006-02-23 | ||
| JP2006047561 | 2006-02-23 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20080055808A true KR20080055808A (ko) | 2008-06-19 |
Family
ID=37686005
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020087005442A KR20080055808A (ko) | 2005-09-13 | 2006-09-12 | 에스테라아제 유전자 및 이의 용도 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20090246316A1 (ko) |
| EP (1) | EP1924598B1 (ko) |
| JP (1) | JP4870089B2 (ko) |
| KR (1) | KR20080055808A (ko) |
| CN (1) | CN1932013B (ko) |
| AU (1) | AU2006289719B2 (ko) |
| CA (1) | CA2621422A1 (ko) |
| DE (1) | DE602006018325D1 (ko) |
| DK (1) | DK1924598T3 (ko) |
| WO (1) | WO2007032523A2 (ko) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP5658489B2 (ja) * | 2010-06-16 | 2015-01-28 | アサヒビール株式会社 | 発酵麦芽飲料の製造方法 |
| CN102146346B (zh) * | 2010-11-24 | 2012-10-17 | 山东省科学院生物研究所 | 一株酿酒酵母及其构建方法与应用 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2100987C (en) * | 1992-07-27 | 1999-06-15 | Kaoru Furuya | A transformant capable of producing d-amino acid oxidase |
| JP3050372B2 (ja) * | 1996-03-04 | 2000-06-12 | 黄桜酒造株式会社 | エステラーゼ遺伝子及びその取得方法、並びに醸造用酵母及びそれを用いたアルコール飲料の製造方法 |
| ATE487796T1 (de) * | 2003-01-17 | 2010-11-15 | Danisco | Verfahren zur in-situ-herstellung eines emulgators in einem nahrungsmittel |
| JP4537094B2 (ja) * | 2003-03-04 | 2010-09-01 | サントリーホールディングス株式会社 | 醸造用酵母遺伝子のスクリーニング法 |
| US20060046253A1 (en) * | 2004-09-02 | 2006-03-02 | Suntory Limited | Method for analyzing genes of industrial yeasts |
-
2006
- 2006-09-12 AU AU2006289719A patent/AU2006289719B2/en not_active Ceased
- 2006-09-12 KR KR1020087005442A patent/KR20080055808A/ko not_active Application Discontinuation
- 2006-09-12 EP EP06798077A patent/EP1924598B1/en not_active Not-in-force
- 2006-09-12 CA CA002621422A patent/CA2621422A1/en not_active Abandoned
- 2006-09-12 WO PCT/JP2006/318466 patent/WO2007032523A2/en active Application Filing
- 2006-09-12 CN CN2006101539039A patent/CN1932013B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2006-09-12 JP JP2007545757A patent/JP4870089B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2006-09-12 US US11/991,065 patent/US20090246316A1/en not_active Abandoned
- 2006-09-12 DK DK06798077.1T patent/DK1924598T3/da active
- 2006-09-12 DE DE602006018325T patent/DE602006018325D1/de active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1924598A2 (en) | 2008-05-28 |
| JP4870089B2 (ja) | 2012-02-08 |
| AU2006289719B2 (en) | 2011-08-04 |
| JP2009507466A (ja) | 2009-02-26 |
| CA2621422A1 (en) | 2007-03-22 |
| EP1924598B1 (en) | 2010-11-17 |
| DK1924598T3 (da) | 2011-02-28 |
| CN1932013B (zh) | 2011-07-27 |
| WO2007032523A2 (en) | 2007-03-22 |
| CN1932013A (zh) | 2007-03-21 |
| WO2007032523A3 (en) | 2007-06-21 |
| US20090246316A1 (en) | 2009-10-01 |
| AU2006289719A1 (en) | 2007-03-22 |
| DE602006018325D1 (de) | 2010-12-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR20090003273A (ko) | 글리세롤-3-포스페이트 탈수소효소 유전자 및 이의 용도 | |
| KR20080003434A (ko) | 카탈라아제 유전자 및 이의 용도 | |
| EP1869172B1 (en) | Branched-chain amino acid aminotransferase gene and use thereof | |
| US20090246317A1 (en) | Acyl-coa: ethanol o-acyltransferase/esterase gene and use thereof | |
| AU2006289720B2 (en) | Alcohol acetyl transferase gene and use thereof | |
| EP1924598B1 (en) | Esterase gene and use thereof | |
| AU2007223600A1 (en) | Gene encoding transcriptional inducer for maltase gene and maltose transporter gene and use thereof | |
| KR20080036586A (ko) | 술페이트 아데닐전이효소 유전자 및 이의 용도 | |
| KR20080012870A (ko) | 카탈라아제 유전자 및 이의 용도 | |
| KR20080049033A (ko) | 글리세롤 채널 유전자 및 그의 용도 | |
| KR20080045114A (ko) | 포스포아데닐릴 술페이트 환원효소 유전자 및 이의 용도 | |
| CA2620803A1 (en) | Tryptophan transporter gene and use thereof | |
| KR20080105106A (ko) | 효모의 응집 특성의 원인이 되는 단백질을 인코딩하는 유전자 및 이의 용도 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| N231 | Notification of change of applicant | ||
| WITN | Application deemed withdrawn, e.g. because no request for examination was filed or no examination fee was paid |