KR20080039430A - Ｃ형 간염 바이러스의 마크로사이클릭 억제제 - Google Patents

Abstract

화학식 (I)의 HCV 복제 억제제 및 그의 N-옥사이드, 염, 또는 입체이성체, 화합물 (I)을 포함하는 약제학적 조성물 및 화합물 (I)을 제조하는 방법: 각 파선은 원자 C7 및 C8 사이의 임의의 이중 결합을 나타내며; R¹은 수소 또는 C_{1 - 6}알킬을 나타내며; R²는 수소 또는 C_{1 - 6}알킬을 나타내고; n은 3, 4, 5 또는 6을 나타낸다. 화학식 (I)의 HCV 억제제와 리토나비르의 생물학적으로 이용가능한 배합물이 또한 제공된다.

Description

Ｃ형 간염 바이러스의 마크로사이클릭 억제제{MACROCYLIC INHIBITORS OF HEPATITIS C VIRUS}

본 발명은 C형 간염 바이러스(HCV)의 복제에 억제 활성을 지니는 마크로사이클릭 화합물에 관한 것이다. 또한 활성 성분으로 이들 화합물을 함유하는 조성물 뿐 아니라 이들 화합물 및 조성물을 제조하는 방법에 관한 것이다.

C형 간염 바이러스는 전세계적으로 만성 간 질환의 주요 원인이며, 많은 의학 연구의 중심이 되고 있다. HCV는 C형 간염 바이러스 속 중 플라비바이러스 과 바이러스의 구성원이며, 인간 질환, 이를 테면, 뎅기 바이러스 및 황열 바이러스에 관련된 수많은 바이러스를 포함하는 플라비바이러스 속 및 소 바이러스성 설사 바이러스 (BVDV)를 포함하는 동물 페스티바이러스 과와 밀접하게 연관된다. HCV는 약 9,600 염기의 게놈을 갖는 파지티브-센스, 단일-가닥 RNA 바이러스이다. 게놈은 RNA 2차 구조를 결정하는 5' 및 3' 비번역 영역과 약 3,010-3,030 아미노산의 단일 폴리단백질을 암호화하는 중심의 개환 리딩 프레임을 함유한다. 폴리단백질은 숙주와 바이러스 프로테아제에 의해 매개되는, 조정된 일련의 번역과 동시 및 번역후 단백질 내부 분해효소 절단에 의하여 전구 폴리단백질에서 생성되는 10개의 유전자 산물을 암호화한다. 바이러스 구조 단백질은 코어 뉴클레오캡시드 단백질과 두개의 외피 당단백질 E1 및 E2를 포함한다. 비구조(NS) 단백질은 일부 주요한 바이러스 효소 기능(헬리카아제, 폴리머라제, 프로테아제), 뿐 아니라 알려지지 않은 기능의 단백질을 암호화한다. 바이러스 게놈의 복제는 비구조 단백질 5b (NS5B)에 의해 암호화되는 RNA-의존성 RNA 폴리머라제에 의해 매개된다. 폴리머라제 외에, 이기능성 NS3 단백질에서 암호화된 바이러스 헬리카아제 및 프로테아제 기능은 HCV RNA의 복제에 필수적인 것으로 보인다. NS3 세린 프로테아제 외에, HCV는 NS2 영역에서 메탈로프로테아제도 암호화한다.

최초 급성 감염 후에, HCV가 우선적으로 간세포에서 복제되나, 직접적으로 세포 변성되지 않으므로, 감염된 대부분의 개체에서 만성 간염이 발달한다. 특히, 격렬한 T-림프구 반응의 결여와 돌연변이가 되려는 바이러스의 높은 성향은 만성 감염을 높은 비율로 증진시키는 것으로 나타난다. 만성 간염은 간 경화, 말기 간질환 및 HCC(간세포암종)이 되어 간 이식의 주요 원인이 되는 간 섬유증으로 진행될 수 있다.

6개의 주요 HCV 유전자형과 50개 이상의 아형이 존재하며, 이는 지리적으로 다르게 존재한다. HCV 제1 타입은 유럽과 미국에서 우세한 유전자형이다. HCV의 광범위한 유전적인 이질성은 중요한 진단적 및 임상적 의미를 가지며, 이는 아마도, 백신 개발에 어려움과 치료법에 대하여 결여된 반응을 설명할 것이다.

HCV의 전염은 오염된 혈액 및 혈액 산물, 예를 들어 다음의 혈액 수혈 또는 정맥내 약물 사용으로의 접촉을 통하여 발생할 수 있다. 혈액 스크리닝에서 이용되는 진단 테스트를 도입하여 수혈-후 HCV 발병률이 낮아지도록 하였다. 그러나 말기 간 질환으로 천천히 진행된다면, 존재하고 있는 감염은 수십년 동안 심각한 의료 및 경제적인 부담을 지속적으로 나타낼 것이다.

현행 HCV 요법들은 리바비린과 배합한 (페길화) 인터페론-알파(IFN-α)를 기초로 한다. 이러한 배합 요법은 제1 유전자 타입 바이러스에 의해 감염된 환자 중 40% 이상과 제2 및 제3 유전자 타입에 의해 감염된 환자들 중 약 80%에서 지속된 바이러스학적 반응을 나타낸다. 제1 HCV 타입에 대한 제한된 효능 이외에, 배합 요법은 유의적인 부작용이 있으며 많은 환자에서 불충분하게 허용된다. 주요 부작용은 인플루엔자류 증후군, 혈액 장애, 및 신경정신병 증후군을 포함한다. 보다 효과적이고, 간편하며 더욱 허용되는 치료법의 개발이 필요하다.

최근 2종의 펩티도미메틱 HCV 프로테아제 억제제, 즉, WO 00/59929호 공보에 개시된 BILN-2061 및 WO 03/87092호 공보에 개시된 VX-950가 임상시험후보로 주목을 받았다. 많은 유사한 HCV 프로테아제 억제제도 학술 및 특허 문헌에 제안되어 있다. BILN-2061 또는 VX-950의 서방형 투여가 각각의 약물에 대해 내성이 있는 HCV 돌연변이체, 소위 약물 탈출 돌연변이체(drug escape mutant)를 선택하는 것은 이미 명백해져 있다. 이들 약물 탈출 돌연변이체는 HCV 프로테아제 게놈, 특히 D168V, D168A 및/또는 A156S에서 특징적인 돌연변이를 지닌다. 그러므로, 치료 옵션에 따른 결함 환자를 제공하기 위해 상이한 내성 패턴을 지닌 추가의 약물이 필요하게 될 것이고, 복수의 약물과의 배합 요법은 제 1라인 처치(first line treatment)에 대해서도 장래에 표준으로 되기 쉽다.

HIV 약물 및 특히 HIV 프로테아제 억제제의 경험은 부차적으로 적합한 약물 동태학 및 복합제 투약 요법이 신속하게 부적합한 순응 실패를 가져올 것임이 더욱 강조된다. 따라서, 이것은 HIV 요법에 있어서 각각의 약물에 대한 24시간 최저 농도(최소 혈장 농도)가 빈번하게 하루의 대부분에서 IC₉₀ 또는 ED₉₀ 역치 이하로 떨어지게 되는 것을 의미한다. 적어도 IC₅₀, 더욱 현실적으로는 IC₉₀ 또는 ED₉₀의 24시간 최저 레벨이 약물 탈출 돌인변이체의 발달을 늦추는 데 필수적이라고 여겨진다.

이러한 최저 레벨을 얻기 위하여 필요한 약물동태학 및 약물 대사를 얻는 것은 약물 설계에 대한 설득력있는 도전을 제공한다. 다수의 펩타이드 결합을 지닌 종래 기술의 HCV 프로테아제 억제제의 강력한 펩타이드미메틱 성질은 유효한 투여 요법에 대한 약물동태학적 장애를 지닌다.

현재 HCV 치료법의 단점, 이를 테면, 부작용, 제한된 효능, 내성 출현 및 순응 실패를 극복할 수 있는 HCV 억제제가 필요하다.

본 발명은 다음 약리 관련 특성, 예를 들어, 효능, 감소된 세포독성, 개선된 약물동태학적 특성, 개선된 내성 프로필, 허용가능한 용량 및 환의 부하 중 하나 이상에서 우수한 HCV 억제제에 관한 것이다.

본 발명은 화학식 (I)으로 나타낼 수 있는 HCV 복제 억제제 및 그의 N-옥사이드, 염 및 입체이성체에 관한 것이다:

상기 식에서,

각 파선은 원자 C7 및 C8 사이의 임의의 이중 결합을 나타내며;

R¹은 수소 또는 C_{1 - 6}알킬을 나타내며;

R²는 수소 또는 C_{1 - 6}알킬을 나타내고;

n은 3, 4, 5 또는 6을 나타낸다.

본 발명은 화학식 (I-a) 및 (I-b)에 의해 나타낼 수 있는 HCV 복제 억제제의 두 서브 그룹 및 이의 N-옥사이드, 염 및 입체이성체에 관한 것이다:

상기 식에서,

R¹, R² 및 n은 본원에 정의된 바와 같다.

본 발명은 또한, 화학식 (I)의 화합물, 이의 N-옥사이드, 부가 염, 4차 아민, 금속 복합물 및 입체화학적 이성체, 그의 중간체를 제조하는 방법과 화학식 (I)의 화합물의 제조에서 중간체의 용도에 관한 것이다.

본 발명은 의약으로 이용하기 위한 본 화학식 (I)의 화합물 그 자체, 그의 N-옥사이드, 부가염, 4차 아민, 금속 복합물 및 입체이성체에 관한 것이다. 또한 본 발명은 담체 및 본원에 상술한 바와 같은 화학식 (I)의 화합물의 항-바이러스적인 유효량을 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 약제학적 조성물은 상기 언급된 화합물과 다른 항-HCV 제제의 배합물을 포함할 수 있다. 또한, 본 발명은 HCV 감염으로부터 고통받는 대상에 투여하기 위한 상기 언급된 약제학적 조성물에 관한 것이다.

또한 본 발명은 HCV 복제를 억제하기 위한 의약 제조용 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 N-옥사이드, 부가염, 4차 아민, 금속 복합물 또는 입체이성체의 용도에 관한 것이다. 또는 본 발명은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 전구약물, N-옥사이드, 부가염, 4차 아민, 금속 복합물 또는 입체이성체의 유효량의 투여를 포함하여 온혈 동물에서 HCV 복제를 억제하는 방법에 관한 것이다.

달리 언급되는 바가 없으면, 상기에서 그리고 하기에서 이용된 바와 같이 다음 정의가 적용된다.

본원에서 사용되었듯이, 기 또는 기의 일부로서 "C_{1 - 6}알킬"은 1 ~ 6개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 포화 탄화수소 라디칼을 정의하고, 예를 들어 메틸, 에틸, 1-프로필, 2-프로필, 1-부틸, 2-부틸, 2-메틸-1-프로필, 1-펜틸, 2-펜틸, 3-펜틸, 1-헥실, 2-헥실, 2-메틸-1-부틸, 2-메틸-1-펜틸, 2-에틸-1-부틸, 3-메틸-2-펜틸 등을 포함한다. C_{1 - 6}알킬 중에서 가장 중요한 것은 C_{1 - 4}알킬이다.

이후 사용될 때마다, 용어 "화학식 (I)의 화합물", 또는 "본원의 화합물" 또는 유사한 용어는, 화학식 (I)의 화합물, 그의 서브 그룹 각각 및 그 중 임의의 것, 그의 전구약물, N-옥사이드, 부가염, 4차 아민, 금속 복합물 및 입체화학적 이성체를 포함하는 것을 의미한다. 일 구체예는 화학식 (I)의 화합물 또는 본원에 기술된 화학식 (I)의 화합물의 임의의 서브그룹, 및 그의 N-옥사이드, 염, 가능한 입체이성체를 포함한다. 다른 구체예는 화학식 (I)의 화합물 또는 본원에 기술된 화학식 (I)의 화합물의 임의의 서브그룹 및 그의 염 및 가능한 입체이성체를 포함한다.

화학식 (I)의 화합물은 몇몇 키랄 중심을 가지며, 입체화학적 이성체로 존재한다. 본원에서 사용된 용어 "입체화학적 이성체"는 화학식 (I)의 화합물이 가질 수 있는, 같은 결합 순서에 의하지만, 상호교환될 수 없는 다른 3차원 구조를 가진 동일한 원자 결합으로 구성된 모든 가능한 화합물을 정의한다.

(R) 또는 (S)가 치환체내의 키랄 원자의 절대배치를 지정하는데 사용되는 경우와 관련하여, 지정 (designation)은 전체 화합물을 고려하여 수행되고, 분리한 치환체는 고려의 대상이 아니다.

달리 언급되거나, 또는 지시되지 않는 한, 화합물의 화학적 지정은 상기 화합물이 가질 수 있는 모든 가능한 입체화학적 이성체의 혼합물을 포함한다. 상기 혼합물은 상기 화합물의 기본 분자 구조의 모든 디아스테레오머 및/또는 거울상 이성체를 함유할 수 있다. 본 발명의 화합물의 모든 입체화학적 이성체는 순수한 형태 또는 서로 혼합된 상태 모두, 본 발명의 범위내에 포함되는 것으로 의도된다.

본원에서 언급된 화합물 및 중간체의 순수한 입체이성체는 상기 화합물 또는 중간체의 동일한 기본 분자 구조의 다른 거울상 이성체 또는 디아스테레오머가 실질적으로 없는 이성체로 정의된다. 특히, 용어 "입체이성체적으로 순수"는 적어도 80% (즉, 최소 90%의 하나의 이성체 및 최대 10%의 다른 가능한 이성체)에서 100%(즉, 100%의 하나의 이성체 및 다른 것은 전혀 없음) 이하의 입체이성체적 과량을 갖는 화합물 또는 중간체, 더욱 특히, 90%에서 100% 이하의 입체이성체적 과량을 갖고, 더더욱 특히, 94%에서 100% 이하의 입체이성체적 과량을 갖고, 가장 특히, 97%에서 100% 이하의 입체이성체적 과량을 갖는 화합물 또는 중간체에 관한 것 이다. 용어 "거울상 이성체적으로 순수한" 및 "디아스테레오머적으로 순수한"은 유사한 방식으로 이해되어야 하지만, 중요한 혼합물의 각각의 거울상 이성체적 과량,및 디아스테레오머적 과량을 고려해야 한다.

본 발명의 화합물 및 중간체의 순수 입체이성체는 해당 분야에 알려져 있는 방식을 적용하여 수득될 수 있다. 예를 들어, 거울상 이성체는 그들의 디아스테레오머적 염을 광학적으로 활성인 산 또는 염기로 선택적 결정화함으로써 서로 분리될 수 있다. 그의 예는 타르타르산, 디벤조일타르타르산, 디톨루오일타르타르산 및 캄포설폰산이다. 택일적으로, 거울상 이성체는 키랄 정지상을 사용하는 크로마토그래피 기술로 분리될 수 있다. 상기 순수한 입체화학적 이성체는 또한, 적절한 출발 물질의 대응하는 순수한 입체화학적 이성체로부터 유발될 수 있지만, 단, 반응은 입체특이적으로 발생한다. 바람직하게, 만약 특정한 입체이성체를 원한다면, 상기 화합물은 제조의 입체특이적인 방법으로 합성될 것이다. 이들 방법은 거울상 이성체적으로 순수한 출발 물질을 유리하게 사용할 것이다.

화학식 (I)의 화합물의 디아스테레오머적 라세미화합물은 통상적인 방법으로 개별적으로 수득될 수 있다. 유리하게 사용될 수 있는 적절한 물리적 분리 방법은 예를 들어, 선택성 결정화 및 크로마토그래피, 예를 들어, 컬럼 크로마토그래피이다.

일부의 화학식 (I)의 화합물, 그의 N-옥사이드, 염, 용매화물, 4차 아민, 또는 금속 복합물 및 그의 제조에 사용되는 중간체에 대하여, 절대 입체화학 배치는 실험적으로 결정될 수 없다. 해당 분야의 숙련자는 이러한 화합물의 절대배치를 해 당 분야에 알려져 있는 방법, 예를 들어, X-선 회절로 결정할 수 있다.

본 발명은 또한, 본 화합물에서 존재하는 원자의 모든 동위원소를 포함하는 것으로 의도된다. 동위원소는 같은 원자 번호를 갖지만, 다른 질량수를 갖는 원자를 포함한다. 일반적인 예로서, 그리고 제한 없이, 수소의 동위원소는 삼중수소 및 중수소를 포함한다. 탄소의 동위원소는 C-13 및 C-14를 포함한다.

본 문헌에 걸쳐 사용된 용어 "전구약물"은 수득한 유도체의 생체내 생체전환 생성물이 화학식 (I)의 화합물에 정의된 바와 같은 활성 약물이 되도록 하는 약리학적으로 허용가능한 유도체, 예를 들어 에스테르, 아미드 및 포스페이트를 의미한다. 일반적인 전구약물을 기술한 Goodman 및 Gilman에 의한 참조 문헌 (The Pharmacological Basis of Therapeutics, 8th ed, McGraw-Hill, Int. Ed. 1992, "Biotransformation of Drugs", p 13-15)은 본원에 포함된다. 바람직하게, 우수한 수용해성, 증가된 생체이용률을 가진 전구약물은 생체내에서 활성 억제제로 바로 대사화된다. 본 발명의 화합물의 전구약물은 화합물중에 존재하는 작용기를 일상적인 조작으로, 또는 생체내에서 모 화합물이 분리되는 방식으로 변형시킴으로써 제조될 수 있다.

바람직한 것은 생체내에서 가수분해되고, 하이드록시 또는 카복실기를 갖는 화학식 (I)의 화합물로부터 유발되는 약제학적으로 허용가능한 에스테르 전구약물이다. 생체내에서 가수분해되는 에스테르는 인간 또는 동물의 체내에서 가수분해되어 모 산 (parent acid) 또는 알콜을 생성하는 에스테르이다. 카복시에 대하여, 적절한 약제학적으로 허용가능한 에스테르는 본 발명의 화합물에서 임의의 카복시기 에 형성될 수 있는, C1-6알콕시메틸 에스테르, 예를 들어 메톡시메틸, C1-6알카노일옥시메틸 에스테르, 예를 들어 피발로일옥시메틸, 프탈리딜 에스테르, C3-8사이클로알콕시카보닐옥시C1-6알킬 에스테르, 예를 들어 1-사이클로헥실카보닐옥시에틸; 1,3-디옥솔렌-2-오닐메틸 에스테르, 예를 들어 5-메틸-1,3-디옥솔렌-2-오닐메틸; 및 C1-6알콕시카보닐옥시에틸 에스테르, 예를 들어 1-메톡시카보닐옥시에틸을 포함한다.

하이드록시기를 함유한 화학식 (I)의 화합물의 생체내 가수분해되는 에스테르는 무기 에스테르, 예를 들어 포스페이트 에스테르 및 α-아실옥시알킬 에테르 및 에스테르 분해 (breakdown)의 생체내 가수분해가 모 하이드록시기를 제공하는 결과물인 연관된 화합물을 포함한다. α-아실옥시알킬 에테르의 예는 아세톡시메톡시 및 2,2-디메틸프로피오닐옥시-메톡시를 포함한다. 하이드록시에 대한, 일련의 생체내 가수분해되는 에스테르 형성기는 알카노일, 벤조일, 페닐아세틸 및 치환된 벤조일 및 페닐아세틸, 알콕시카보닐 (알킬 카보네이트 에스테르 제공), 디알킬카바모일 및 N-(디알킬아미노에틸)-N-알킬카바모일 (카바메이트 제공), 디알킬아미노아세틸 및 카복시아세틸을 포함한다. 벤조일상의 치환체의 예는 환 질소 원자로부터 메틸렌기를 통해 벤조일 환의 3- 또는 4-위치에 연결된 모르폴리노 및 피페라지노를 포함한다.

치료용으로, 화학식 (I)의 화합물의 염은 상대이온이 약제학적으로 허용가능한 것들이다. 그러나, 약제학적으로 허용가능하지 않은 산 및 염기의 염도 또한, 약제학적으로 허용가능한 화합물의 제조 또는 정제에서 용도를 찾을 수도 있다. 모 든 염은 약제학적으로 허용가능하거나 또는 가능하지 않거나, 본 발명의 범위에 포함된다.

상기 언급된 약제학적으로 허용가능한 산 및 염기 부가염은 화학식 (I)의 화합물이 형성할 수 있는 치료적으로 활성인 비독성 산 및 염기 부가염 형태를 포함하는 것을 의미한다. 약제학적으로 허용가능한 산 부가염은 염기 형태를 이러한 적절한 산으로 처리함으로써 편리하게 수득될 수 있다. 적절한 산은, 예를 들어, 무기산, 예를 들어 할로겐화수소산, 예를 들어, 염산 또는 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등; 또는 유기산, 예를 들어, 아세트산, 프로판산, 하이드록시아세트산, 락트산, 피루브산, 옥살산 (즉, 에탄디오산), 말론산, 숙신산 (즉, 부탄디오산), 말레산, 푸마르산, 말산 (즉, 하이드록시부탄디오산), 타르타르산, 시트르산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 벤젠설폰산, p-톨루엔설폰산, 시클람산, 살리실산, p-아미노살리실산, 파모산 (pamoic acid) 등을 포함한다.

반대로, 상기 염 형태는 적절한 염기로 처리함으로써 유리 염기 형태로 전환될 수 있다.

산성 양자를 함유한 화학식 (I)의 화합물은 또한, 적절한 유기 및 무기 염기로 처리함으로써 그들의 비독성 금속 또는 아민 부가염 형태로 전환될 수 있다. 적절한 염기 염 형태는 예를 들어, 암모늄 염, 알칼리 및 알칼리토금속 염, 예를 들어, 리튬, 나트륨, 포타슘, 마그네슘, 칼슘 염 등, 유기 염기와의 염, 예를 들어, 벤자틴, N-메틸-D-글루카민, 하이드라바민 염, 및 아미노산과의 염, 예를 들어, 아르기닌, 리신 등을 포함한다.

상기에서 사용된 용어 부가염은 또한, 화학식 (I)의 화합물 및 그의 염이 형성할 수 있는 용매화물을 포함한다. 이러한 용매화물은 예를 들어 수화물, 알콜화물 등이다.

상기에서 사용된 용어 "4차 아민"은 화학식 (I)의 화합물이 화학식 (I)의 화합물의 염기성 질소와 적절한 4차화제, 예를 들어, 임의로 치환된 알킬할라이드, 아릴할라이드 또는 아릴알킬할라이드, 예를 들어, 메틸아이오다이드 또는 벤질아이오다이드 사이의 반응으로 형성될 수 있는 4차 암모늄 염을 정의한다. 우수한 이탈기를 가진 다른 반응물이 또한 사용될 수 있고, 예를 들어, 알킬 트리플루오로메탄설포네이트, 알킬 메탄설포네이트 및 알킬 p-톨루엔설포네이트이다. 4차 아민은 양성으로 하전된 질소를 갖는다. 약제학적으로 허용가능한 상대이온은 클로로, 브로모, 아이오도, 트리플루오로아세테이트 및 아세테이트를 포함한다. 선택한 상대이온은 이온 교환 수지를 사용해 도입될 수 있다.

본 발명의 화합물의 N-옥사이드 형태는 하나 또는 수개의 질소 원자가 소위 N-옥사이드로 산화되는 화학식 (I)의 화합물을 포함하는 것을 의미한다.

화학식 (I)의 화합물이 금속 결합, 킬레이팅, 복합물 형성 특성을 가질 수 있고, 따라서, 금속 복합물 또는 금속 킬레이트로 존재할 수 있음을 알 수 있을 것이다. 이러한 화학식 (I)의 화합물의 금속화된 유도체는 본 발명의 범위내에 포함되는 것으로 의도된다.

일부 화학식 (I)의 화합물은 또한, 그의 토토머로 존재할 수 있다. 이러한 형태는 상기 화학식중에 명백하게 지시되지 않았음에도 본 발명의 범위내에 포함되 는 것으로 의도된다.

상기 언급되었듯이, 화학식 (I)의 화합물은 수개의 비대칭 중심을 갖는다. 각각의 이들 비대칭 중심을 더욱 효율적으로 나타내기 위해, 하기 구조 화학식에 나타낸 바와 같은 넘버링 시스템이 사용될 것이다.

비대칭 중심은 마크로사이클의 1, 4 및 6번의 위치 및 피롤리딘 환에서 탄소 원자 3'에 존재한다. 각각의 이들 비대칭 중심은 그들의 R 또는 S 배치로 존재할 수 있다.

1번 위치에서의 입체화학은 바람직하게, L-아미노산의 배치의 입체화학, 즉, L-프롤린의 입체화학에 대응한다.

화학식 (I)의 화합물은 하기의 구조적 일부분에서 나타낸 바와 같은 사이클로프로필기를 포함한다:

상기 식에서,

C₇은 7번 위치의 탄소를 나타내고, 4 및 6번의 탄소는 사이클로프로판 환의 비대칭 탄소 원자이다.

본 발명의 화합물의 다른 부분에서 다른 비대칭 중심이 가능하더라도, 이들 두개의 비대칭 중심의 존재는 화합물이 디아스테레오머의 혼합물로 존재할 수 있음을 의미하고, 예를 들어, 7번 위치에서 탄소가 카보닐에 대하여 신 (syn)으로, 또는 아미드에 대하여 신으로 하기 나타낸 바와 같이 배치된 화학식 (I)의 화합물의 디아스테레오머이다.

일 구체예는 7번 위치의 탄소가 카보닐에 대하여 신으로 배치된 화학식 (I)의 화합물에 관한 것이다. 다른 구체예는 4번 위치의 탄소에서의 배치가 R인 화학식 (I)의 화합물에 관한 것이다. 화학식 (I)의 화합물의 특정한 서브그룹은 7번 위치의 탄소가 카보닐에 대하여 신으로 배치되고, 4번 위치의 탄소에서의 배치가 R인 것들이다.

화학식 (I)의 화합물은 또한 프롤린 잔기를 포함한다. 바람직한 것은 1 (또는 5')번 위치의 치환체 및 3'번 위치의 치환체가 트랜스 배치인 화학식 (I)의 화 합물이다. 특히 중요한 것은, 1번 위치가 L-프롤린에 대응하는 배치를 갖고, 3'번 위치의 치환체가 1번 위치에 대하여 트랜스 배치인 화학식 (I)의 화합물이다. 바람직하게, 화학식 (I)의 화합물은 하기의 화학식 (I-c)의 구조로 나타낸 바와 같은 입체화학을 갖는다:

바람직하게, 점선은 화학식 (I), (I-c) 또는 화학식 (I)의 임의의 서브 그룹의 화합물에서 탄소 원자 7과 8 사이의 이중 결합을 나타낸다. 더욱 바람직하게, 탄소 원자 7 및 8 사이의 이중 결합은 시스 배열이다.

상기 정의된 화학식 (I-b)의 화합물의 서브그룹 및 본원에서 정의된 임의의 다른 서브그룹은 또한, 이러한 화합물의 임의의 N-옥사이드, 부가염, 4차 아민, 금속 복합물 및 입체화학적 이성체를 포함하는 것을 의미하는 것으로 이해된다.

n이 2일 때, "n"으로 괄호가 묶인 부분 -CH₂-는 화학식 (I)의 화합물 또는 화학식 (I)의 화합물의 임의의 서브그룹에서 에탄디일에 대응한다. n이 3일 때, "n"으로 괄호가 묶인 부분 -CH₂-는 화학식 (I)의 화합물 또는 화학식 (I)의 화합물 의 임의의 서브그룹에서 프로판디일에 대응한다. n이 4일 때, "n"으로 괄호가 묶인 부분 -CH₂-는 화학식 (I)의 화합물 또는 화학식 (I)의 화합물의 임의의 서브그룹에서 부탄디일에 대응한다. n이 5일 때, "n"으로 괄호가 묶인 부분 -CH₂-는 화학식 (I)의 화합물 또는 화학식 (I)의 화합물의 임의의 서브그룹에서 펜탄디일에 대응한다. n이 6일 때, "n"으로 괄호가 묶인 부분 -CH₂-는 화학식 (I)의 화합물 또는 화학식 (I)의 화합물의 임의의 서브그룹에서 헥산디일에 대응한다. 화학식 (I)의 화합물의 특별한 서브그룹은 n이 4 또는 5인 이들 화합물이다.

본 발명의 바람직한 구체예는 R¹이 수소 또는 메틸인 화학식 (I)의 화합물 또는 화학식 (I)의 화합물의 임의의 서브그룹이다.

본 발명의 구체예는 R²가 수소 또는 C_{1 - 4}알킬, 예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, tert-부틸 또는 이소부틸인 화학식 (I)의 화합물 또는 화학식 (I)의 화합물의 임의의 서브그룹이다.

본 발명의 화합물의 서브그룹은 R²가 수소인 화학식 (I)의 화합물 또는 화학식 (I)의 화합물의 임의의 서브그룹이다.

본 발명의 또다른 서브그룹은 R²가 메틸인 화학식 (I)의 화합물 또는 화학식 (I)의 화합물의 임의의 서브그룹이다.

화학식 (I)의 화합물은 3개의 빌딩 블록 (building block) P1, P2, P3으로 구성되며, 이는 각각 사인 곡선으로 범위가 정해진다. 빌딩 블록 P1은 추가로, P1' 말단 (tail)을 함유한다. 별표로 표시된 카보닐기는 빌딩 블록 P2 또는 빌딩 블록 P3의 부분일 수 있다. 빌딩 블록 P1과 P2, P2와 P3 및 P1과 P1'의 연결은 아미드 결합의 형성을 포함한다. 블록 (block) P1 및 P3의 연결은 이중 결합 형성을 포함한다. 화합물 (I)의 화합물을 제조하기 위한 빌딩 블록 P1, P1', P2 및 P3의 연결은 임의의 제공된 순서로 수행될 수 있다. 단계 중 하나는 마크로사이클이 형성되는 고리화를 포함한다.

이후 기술된 합성 순서는 라세미화합물, 입체화학적으로 순수한 중간체 또는 최종 생성물 및 임의의 입체이성체적 혼합물에 적용될 수 있음을 의미한다. 라세미화합물 또는 입체화학적 혼합물은 합성 순서의 임의의 단계에서 입체이성체로 분리될 수 있다. 일 구체예에서, 중간체 및 최종 생성물은 화학식 (I- c)의 화합물에서 상술된 입체화학을 갖는다.

일구체예에서, 화합물 (I)은 처음으로 아미드 결합 형성과 그 다음으로 마크 로사이클로 고리화에 수반되는 P3 및 P1 사이의 이중 결합 형성에 의해 제조된다.

바람직한 구체예에서, 상기에 정의된 바와 같이 화학식 (I-a)의 화합물인, C₇ 및 C₈ 사이의 결합이 이중 결합인 화합물 (I)은 하기 반응식에서 약술된 바와 같이 제조될 수 있다:

마크로사이클의 형성은 올레핀 복분해 (metathesis) 반응을 통해, 적절한 금속 촉매, 예를 들어, Miller, S. J., Blackwell, H.E., Grubbs, R.H. J. Am. Chem. Soc. 118, (1996), 9606-9614; Kingsbury, J. S., Harrity, J. P. A., Bonitatebus, P. J., Hoveyda, A. H., J. Am. Chem. Soc. 121, (1999), 791-799; 및 Huang et al., J. Am. Chem. Soc. 121, (1999), 2674-2678에 의해 보고된 Ru계 촉매; 예를 들어 Hoveyda-Grubbs 촉매의 존재하에서 수행될 수 있다.

공기 중에서 안정한 루테늄 촉매, 예를 들어, 비스(트리사이클로헥실포스핀)-3-페닐-1H-인덴-1-일리덴 루테늄 클로라이드 (Neolyst M1^®) 또는 비스(트리사이클로헥실포스핀)-[(페닐티오)메틸렌]루테늄 (IV) 디클로라이드가 사용될 수 있 다. 사용될 수 있는 다른 촉매는 Grubbs 제1 및 제2 발생 (generation) 촉매, 즉, 각각 벤질리덴-비스(트리사이클헥실포스핀)디클로로루테늄 및 (1,3-비스-(2,4,6-트리메틸페닐)-2-이미다졸리디닐리덴)디클로로(페닐메틸렌)-(트리사이클로헥실포스핀)루테늄이다. 또한, 다른 전이 금속, 예를 들어 Mo을 함유한 다른 촉매가 이 반응에 사용될 수 있다.

복분해 반응은 적절한 용매, 예를 들어 에테르, 예를 들어, THF, 디옥산; 할로겐화 탄화수소, 예를 들어, 디클로로메탄, CHCl₃, 1,2-디클로로에탄 등에서 수행될 수 있다. 바람직한 구체예에서, 복분해 반응은 톨루엔 중에서 수행된다. 이들 반응은 증가된 온도에서 질소 분위기하에서 수행된다.

마크로사이클 중에서 C7 및 C8 사이의 연결이 단일 결합인 화학식 (I)의 화합물, 즉, 화학식 (I-b)의 화합물은 화학식 (I-a)의 화합물 중에 C7-C8 이중 결합을 환원시켜 화학식 (I-a)의 화합물로부터 제조될 수 있다. 이러한 환원은 수소로 촉매성 수소화에 의해 귀금속 촉매, 예를 들어, Pt, Pd, Rh, Ru 또는 레이니 (Raney) 니켈의 존재하에서 수행될 수 있다. 중요한 것은 알루미나상의 Rh이다. 수소화 반응은 바람직하게 용매, 예를 들어, 알콜, 예를 들어 메탄올, 에탄올, 또는 에테르, 예를 들어 THF, 또는 그의 혼합물 중에서 수행된다. 물은 또한, 이들 용매 또는 용매 혼합물에 첨가될 수 있다.

말단 P1'는 임의의 합성 단계, 예를 들어, 고리화 전 또는 후, 본원의 상기에서 설명된 바와 같은 고리화 및 환원 전 또는 후에, P1 빌딩 블록에 결합될 수 있다, P1'는 두 부분 사이에 아미드 결합을 형성함으로써, P1에 연결될 수 있다. 일 구체예에서, P1'기는 G가 하기 그룹을 나타내는, 하기 반응식에 약술한 바와 같이 화합물 (I)의 합성의 최종 단계에서 도입된다:

이러한 과정에서, 사이클로프로필설폰아미드(IV)는 아미드 형성 반응, 예를 들어 이후 기술되는 아미드 결합 형성에 대한 임의의 과정에 의해 중간체(III)와 반응된다. 특히 (III)은 커플링제, 예를 들어 N,N'-카보닐-디이미다졸 (CDI), EEDQ, IIDQ, EDCI 또는 벤조트리아졸-1-일-옥시-트리스-피롤리디노-포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (PyBOP®로 상업적으로 구입할 수 있음)로, THF와 같은 용매 중에서 처리되고, 염기, 예를 들어, 트리알킬아민, 예를 들어 트리에틸아민 또는 디이소프로필에틸아민, 또는 1,8-디아자바이사이클[5.4.0]운데크-7-엔 (DBU) 또는 디이소프로필에틸아민의 존재하에서 사이클로프로필설폰아미드(IV)와 반응된다.

상기 반응에서 나타낸 바와 같은 (III)에서 카복실산의 활성화는 하기 화학 식의 아자락톤 중간체로 내부 고리화 반응을 유발할 수 있다:

상기 식에서, R1 및 n은 상기 상술한 바와 같으며, 여기에서 입체중심은 상기 명기된 바와 같은, 특히, (I-c)의 입체화학적 배치를 가질 수 있다. 중간체 (III-a)는 통상적인 방법론을 사용하여 반응 혼합물로부터 분리될 수 있고, 그 후, 분리된 중간체 (III-a)는 (IV)와 반응되거나, 또는 (III-a)을 함유한 반응 혼합물이 (III-a)의 분리없이, (IV)와 추가로 반응될 수 있다. 일 구체예에서, 커플링제와의 반응이 물-비혼합성 용매에서 수행되는 경우, (III-a) 함유 반응 혼합물은 모든 수용해성 부생성물을 제거하기 위해, 물 또는 약간 염기성인 물로 세척될 수 있다. 이렇게 수득한 세척 용액은 그 후, 추가 정제 단계없이, (IV)와 반응될 수 있다. 한편으로, 중간체 (III-a)의 분리는 분리된 생성물에서 특정한 장점을 제공할 수 있고, 임의의 추가적인 정제 후, (IV)와 반응되어, 더 적은 부생성물과 반응의 더 용이한 워크업 (work-up)을 초래할 수 있다.

화학식 (I)의 화합물은 또한 하기 반응 도식에서 개요된 바와 같이 중간체 (V)를 화학식 (VI)의 퀴놀린으로 에테르화하여 제조될 수 있다:

(VI) 중 X는 하이드록시 또는 이탈기 이를 테면, 할리드, 예를 들어, 브로마이드 또는 클로라이드 또는 아릴설포닐기, 예를 들어, 메실레이트, 트리플레이트 또는 토실레이트 등을 나타낸다.

일 구체예에서, (V)와 (VI)의 반응은 O-아릴화 반응이며, X는 이탈기를 나타낸다. 이 반응은 E. M. Smith et al. (J. Med. Chem. (1988), 31, 875-885)에 개시된 과정에 따라 수행될 수 있다. 특히, 이 반응은 염기, 바람직하게는 강염기의 존재 하에, 반응-불활성 용매, 예를 들어, 아미드 결합의 형성에서 언급된 용매 중 하나 중에서 수행된다.

일 구체예에서, 출발 물질 (V)는 하이드록시기로부터 수소를 떨어뜨리기에 충분히 강한 염기, 예를 들어, 알칼리 금속 하이드라이드의 알칼리, 이를 테면, LiH 또는 소듐 하이드라이드 또는 알칼리 금속 알콕사이드, 이를 테면 소듐 또는 포타슘 메톡사이드 또는 에톡사이드, 포타슘 tert-부톡사이드의 존재 하에, 이극성 비양성자성 용매, 예를 들어, DMA, DMF 등과 같은 반응 불활성 용매 중에서 퀴놀린(VI)와 반응한다. 만들어진 알콜레이트는 X가 상기 언급된 바와 같은 적합한 이탈기인 아릴화제(VII)와 반응한다. O-아릴화 반응을 이용한 (V)에서 (I)로의 전환 은 하이드록시기 또는 -O-퀴놀린기를 지닌 탄소에서 입체 화학적 배열을 변화시키지 않는다.

택일적으로 (V)와 (VI)의 반응은 Mitsunobu 반응 (Mitsunobu, 1981, Synthesis, January, 1-28; Rano et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 22, 3779-3792; Krchnak et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 5, 6193-6196; Richter et al., Tetrahedron Lett., 1994, 35, 27, 4705-4706)을 통해 수행될 수도 있다. 이러한 반응은 트리페닐포스핀 및 활성화제, 이를 테면, 디알킬 아조카복실레이트, 예를 들어, 디에틸 아조디카복실레이트(DEAD), 디이소프로필 아조디카복실레이트(DIAD) 등의 존재 하에서 중간체 (V)를 X가 하이드록실인 퀴놀린 (VI)로 처리하는 것을 포함한다. Mitsunobu 반응은 하이드록실기 또는 -O-퀴놀린기를 지니는 탄소에서 입체화학적 배열을 변화시킨다.

R¹이 수소이며, (I-d)에 의해 나타내지는 화학식 (I)의 화합물은 PG가 질소보호기를 나타내는 대응하는 질소-보호 중간체(VII)로부터 제조될 수도 있다. 적합한 N-보호기는 하기에서 기술된다. 일 구체예에서, (VII) 중 PG는 벤질 또는 치환된 벤질, 특히 4-메톡시벤질이다.

상기 반응에서 시작 물질(VII)은 화학식 (I)의 화합물의 제조를 위해 기술된 과정을 따라 제조될 수 있으나, 기 R¹이 PG인 중간체를 이용한다.

택일적으로, 화학식 (I)의 화합물을 제조하기 위해, 우선, 빌딩 블록 P2 및 P1 사이의 아미드 결합이 형성되고, 그 후, P3 빌딩 블록이 P1-P2중 P1 부분에 커플링되고, 이어서 P3과 P2-P1-P3중에 P2 부분 사이의 적절한 아미드 결합이 폐환 (ring closure)과 동시적으로 형성된다. 다시, 말단 P1'는 화학식 (I)의 화합물의 임의의 합성 단계에, 예를 들어, 빌딩 블록 P2 및 P1의 커플링 전 또는 후; P3 빌딩 블록의 P1으로의 커플링 전 또는 후; 또는 빌딩 블록 P3 및 P2의 커플링 전 또는 후 및 폐환 (ring closure)과 동시적으로 P1 빌딩 블록에 결합될 수 있다.

또다른 택일적인 합성 방법론은 빌딩 블록 P2 및 P3 사이에 아미드 결합을 형성하고, 그 후, 빌딩 블록 P1과 P3가 커플링되고, 마지막으로 P1과 P2 사이의 아미드 결합이 폐환과 동시적으로 형성된다는 것이다. 다시, 말단 P1'는 화학식 (I)의 화합물의 임의의 합성 단계에, 예를 들어, 본 경우에, 빌딩 블록 P2 및 P3의 커 플링 전 또는 후; 빌딩 블록 P1 및 P3의 커플링 전 또는 후; 또는 빌딩 블록 P1 및 P2의 커플링 전 또는 후에 폐환 (ring closure)과 동시적으로 P1 빌딩 블록에 결합될 수 있다.

빌딩 블록 P1 및 P3은 탄소 7과 8에서 이중 결합 형성을 통하여 연결될 수 있으며, 필요에 따라, C7-C8 이중 결합이 환원된다. 이에 따라 형성된 P1-P3 블록은 빌딩 블록 P2에 커플링될 수 있고, 즉시 아미드 결합 형성에 의하여 고리화된다. 바람직한 구체예에서, 빌딩 블록 P1-P3는 환원되지 않으며, P2와 커플링되고, 고리화되어 화합물 (I-1)이 형성된다.

임의의 상기 접근법중에서 빌딩 블록 P1 및 P3은 예를 들어, 하기에서 기술된 올레핀 복분해 반응 또는 비티그형 반응 (Wittig type reaction)에 의한 이중 결합 형성으로 연결될 수 있다.

화학식 (I)의 화합물에서 블록 P2와 P3 사이의 아미드 결합 형성은 우레아 부분의 두개의 다른 위치에서 성취될 수 있는 것이 중요하다. 첫번째 아미드 결합 형성은 피롤리딘 환의 질소를 P3 빌딩 블록의 부분인 근접한 활성화 카보닐(별표로 표시)과 반응시키는 것을 포함한다. 대안적인 두번째 아미드 결합 형성은 P2 빌딩 블록의 부분인 별표 표시된 활성화 카보닐과 NHRR¹기의 반응을 포함하며, R¹은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 서브그룹에서 정의된 바와 같고, 여기서 R¹은 추가로 질소-보호기일 수 있으며; R은 P3 알킬 부분이다. 별표 표시된 활성화된 카보닐은 피롤리딘 또는 아민 NHRR¹과 포스진 또는 포스진 유도체를 반응시켜 도입될 수 있다.

개별적인 빌딩 블록이 우선 제조되고, 그 후, 서로 또는 택일적으로 커플링되며, 빌딩 블록의 전구체는 서로 커플링되고, 더 뒤의 단계에서 원하는 분자 조성으로 변형될 수 있다.

각각의 빌딩 블록에서의 작용성이 보호되어 부반응을 피할 수 있다.

아미드 결합의 형성은 표준 순서, 예를 들어, 펩티드 합성에서 아미노산을 커플링시키는데 사용되는 것들을 사용하여 수행될 수 있다. 후자는 하나의 반응물의 카복실기와 다른 반응물의 아미노기를 탈수성 커플링시켜 연결 아미드 결합을 형성하는 것을 포함한다. 아미드 결합 형성은 출발 물질을 커플링제의 존재하에서 반응시키거나, 또는 카복실 작용성을 활성 형태, 예를 들어, 활성 에스테르, 혼합 무수물 또는 카복실산 클로라이드 또는 브로마이드로 전환시킴으로서 수행될 수 있다. 이러한 커플링 반응의 일반적인 기술 및 여기에서 사용되는 시약은 펩티드 화학의 일반 교재, 예를 들어, M. Bodanszky, "Peptide Chemistry", 2nd rev. ed., Springer-Verlag, Berlin, Germany, (1993)에서 찾을 수 있다.

아미드 결합 형성이 있는 커플링 반응의 예는 아자이드법 (azide method), 혼합 탄소(carbonic)-카복실산 무수물 (이소부틸 클로로포르메이트)법, 카보디이미드 (디사이클로헥실카보디이미드, 디이소프로필카보디이미드, 또는 수용해성 카보디이미드, 예를 들어, N-에틸-N'-[(3-디메틸아미노)프로필]카보디이미드)법, 활성 에스테르법 (예: p-니트로페닐 에스테르, N-하이드록시숙신 이미도 에스테르), 우드워드 (Woodward) 시약 K-법, 1,1-카보닐디이미다졸 (CDI 또는 N,N'-카보닐-디이미다졸)법, 인 시약 또는 산화-환원법을 포함한다. 이들 방법중 일부는 적절한 촉 매를 첨가하여, 예를 들어, 카보디이미드법에서 1-하이드록시벤조트리아졸, DBU (1,8-디아자바이사이클로[5.4.0]운데크-7-엔), 또는 4-DMAP를 첨가함으로써 강화될 수 있다. 추가적인 커플링제는 (벤조트리아졸-1-일옥시)트리스-(디메틸아미노) 포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (그 자체로, 또는 1-하이드록시- 벤조트리아졸 또는 4-DMAP의 존재하에서); 또는 2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라-메틸우로늄 테트라플루오로보레이트, 또는 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트이다. 이들 커플링 반응은 용액 (액상) 또는 고체상으로 수행될 수 있다.

바람직한 아미드 결합 형성은 N-에틸옥시카보닐-2-에틸옥시-1,2-디하이드로퀴놀린 (EEDQ) 또는 N-이소부틸옥시-카보닐-2-이소부틸옥시-1,2-디하이드로퀴놀린 (IIDQ)을 사용하여 수행된다. 전통적인 무수물 절차와 달리, EEDQ 및 IIDQ는 염기나 낮은 반응 온도를 요구하지 않는다. 전형적으로, 절차는 유기 용매 (다양한 종류의 용매가 사용될 수 있음)중에 카복실 및 아민 성분의 등몰량 (equimolar amount)이 반응하는 것을 포함한다. 그 후, EEDQ 또는 IIDQ가 과량으로 첨가되고, 혼합물은 실온에서 교반된다.

커플링 반응은 바람직하게, 불활성 용매, 예를 들어 할로겐화된 탄화수소, 예를 들어, 디클로로메탄, 클로로포름, 2극성 비양자성 용매, 예를 들어 아세토니트릴, 디메틸포름아미드, 디메틸아세트아미드, DMSO, HMPT, 에테르, 예를 들어 테트라하이드로푸란 (THF)중에서 수행된다.

많은 예에서, 커플링 반응은 적절한 염기, 예를 들어, 3차 아민, 예를 들어, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민 (DIPEA), N-메틸-모르폴린, N-메틸피롤리딘, 4-DMAP 또는 1,8-디아자바이사이클[5.4.0]운데크-7-엔 (DBU)의 존재하에서 수행된다. 반응 온도는 0 ℃ 및 50 ℃ 사이의 범위일 수 있고, 반응 시간은 15분 및 24시간 사이일 수 있다.

서로 연결된 빌딩 블록중의 작용기는 원하지 않는 결합의 형성을 피하기 위해 보호될 수 있다. 사용될 수 있는 적절한 보호기는 예를 들어, Greene, "Protective Groups in Organic Chemistry", John Wiley & Sons, New York (1999) 및 "The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology", Vol. 3, Academic Press, New York (1987)에 열거된다.

카복실기는 쪼개져서 카복실산을 제공할 수 있는 에스테르로 보호될 수 있다. 사용될 수 있는 보호기는 하기를 포함한다:

1) 알킬 에스테르, 예를 들어 메틸, 트리메틸실릴 및 tert-부틸;

2) 아릴알킬 에스테르, 예를 들어 벤질 및 치환된 벤질; 또는

3) 순한 염기 또는 순한 환원제 (mild reductive)에 의해 쪼개질 수 있는 에스테르, 예를 들어, 트리클로로에틸 및 펜아실 에스테르.

아미노기는 다양한 N-보호기, 예를 들어 하기에 의해 보호될 수 있다:

1) 아실기, 예를 들어 포르밀, 트리플루오로아세틸, 프탈릴 및 p-톨루엔설포닐;

2) 방향족 카바메이트기, 예를 들어 벤질옥시카보닐 (Cbz 또는 Z) 및 치환된 벤질옥시카보닐, 및 9-플루오레닐메틸옥시카보닐 (Fmoc);

3) 지방족 카바메이트기, 예를 들어 tert-부틸옥시카보닐 (Boc), 에톡시카보닐, 디이소프로필메톡시-카보닐 및 알릴옥시카보닐;

4) 사이클릭 알킬 카바메이트기, 예를 들어 사이클로펜틸옥시카보닐 및 아다만틸옥시카보닐;

5) 알킬기, 예를 들어 트리페닐메틸, 벤질 또는 치환된 벤질, 예를 들어 4-메톡시벤질;

6) 트리알킬실릴, 예를 들어 트리메틸실릴 또는 t.Bu 디메틸실릴; 및

7) 티올 함유 기, 예를 들어 페닐티오카보닐 및 및 디티아숙시노일.

중요한 아미노 보호기는 Boc 및 Fmoc이다.

바람직하게 아미노 보호기는 다음 커플링 단계 이전에 쪼개진다. N-보호기의 제거는 해당 분야에 알려져 있는 순서에 따라 수행될 수 있다. Boc기가 사용될 때, 선택 방법은 순수하거나, 또는 디클로로메탄중의 트리플루오로아세트산, 또는 디옥산중, 또는 에틸 아세테이트중의 HCl이다. 수득한 암모늄 염은 그 후, 커플링 전에, 또는 염기성 용액, 예를 들어 수성 완충제, 또는 3차 아민과 디클로로메탄 또는 아세토니트릴 또는 디메틸포름아미드중에서 인 시추 (in situ)로 중화된다. Fmoc기가 사용될 때, 선택 시약은 디메틸포름아미드중에 피페리딘 또는 치환된 피페리딘이나, 임의의 2차 아민이 사용될 수 있다. 탈보호는 0 ℃ 및 실온 사이의 온도에서, 보통 약 15-25 ℃, 또는 20-22 ℃에서 수행된다.

빌딩 블록의 커플링 반응에서 간섭할 수 있는 다른 작용기도 역시 보호될 수 있다. 예를 들어 하이드록실기는 벤질 또는 치환된 벤질 에테르, 예를 들어, 4-메 톡시벤질 에테르, 벤조일 또는 치환된 벤조일 에스테르, 예를 들어, 4-니트로벤조일 에스테르, 또는 트리알킬실릴기 (예를 들어, 트리메틸실릴 또는 tert-부틸디메틸실릴)로 보호될 수 있다.

추가적인 아미노기는 선택적으로 쪼개질 수 있는 보호기에 의해 보호될 수 있다. 예를 들어, Boc가 α-아미노 보호기로 사용될 때, 하기의 측쇄 보호기가 적절하다: 추가적인 아미노기를 보호하는데 사용될 수 있는 p-톨루엔설포닐 (토실) 부분; 하이드록시기를 보호하는데 사용될 수 있는 벤질 (Bn) 에테르; 및 추가적인 카복실기를 보호하는데 사용될 수 있는 벤질 에스테르. 또는, Fmoc가 α-아미노 보호용으로 선택될 때, 보통 tert-부틸 기반의 보호기가 허용가능하다. 예를 들어, Boc는 추가적인 아미노기에; tert- 부틸 에테르는 하이드록실기에; 그리고, tert-부틸 에스테르는 추가적인 카복실기에 사용될 수 있다.

임의의 보호기는 합성 순서의 임의의 단계에서 제거될 수 있지만, 바람직하게는 반응 단계에 포함되지 않는 임의의 작용성의 보호기는 마크로사이클의 형성 (build-up)의 완료 후 제거된다. 보호기의 제거는 보호기의 선택에 의해 지시되는, 해당 분야의 숙련자에게 잘 알려져 있는 어떠한 방식으로도 수행될 수 있다.

화학식 (II)의 중간체는 중간체(VIII)와 알켄아민 (IX)을 카보닐 도입제의 존재하에서 반응시켜 하기 반응식에 약술한 바와 같이 제조될 수 있다.

L은 O-보호기 PG¹ 또는 하기 그룹을 나타낸다:

O-보호기는 본원에 언급된 그룹 중 임의의 것일 수 있고, 특히 벤조일 또는 치환된 벤조일기, 이를 테면, 4-니트로벤조일일 수 있다.

카보닐 (CO) 도입제는 포스겐, 또는 포스겐 유도체, 예를 들어 카보닐 디이미다졸 (CDI) 등을 포함한다. 일 구체예에서 (VIII)는 CO 도입제와 적절한 염기 및 용매의 존재하에서 반응되고, 이는 상술한 아미드 형성 반응에서 사용된 염기 및 용매일 수 있다. 특정한 구체예에서, 염기는 탄산수소염, 예를 들어, NaHCO₃ 또는 3차 아민, 예를 들어 트리에틸아민 등이고, 용매는 에테르 또는 할로겐화된 탄화수소, 예를 들어, THF, CH₂Cl₂, CHCl₃ 등이다. 그 후, 아민 (IX)를 첨가하여, 중간체 (XII) 또는 (XII-a)을 상기 반응식에서와 같이 수득한다. 유사한 반응 조건을 사용 하는 택일적인 경로는 가장 먼저, CO 도입제를 아민 (IX)과 반응시키고, 그 후, 이렇게 형성된 중간체를 (VIII)와 반응시키는 것을 포함한다.

L이 PG¹일 때, (VIII)와 (IX)의 반응으로 중간체 (II-a)가 수득된다. 이들은 예를 들어, PG¹이 벤조일 또는 치환된 벤조일일 때, 알칼리 금속 수산화물 (LiOH, NaOH, KOH)과의 반응으로, 특히, PG¹이 4-니트로벤조일인 경우, 물 및 수용해성 유기 용매, 예를 들어 알칸올 (메탄올, 에탄올) 및 THF를 포함하는 수성 매질 중에서 LiOH와 반응되어, 탈보호될 수 있다. 만들어진 알콜(예를 들어 L이 수소인 중간체 (II-a))은 (V)와 (VI)의 반응을 위해 상기에 개시된 바와 같은 중간체 (VI)와 반응하며, 이 반응으로 중간체 (II)가 수득된다.

화학식 (III)의 중간체는 처음으로 에스테르 중간체 (X)를 마크로사이클 에스테르 (XI)로 고리화하며, 차례로 다음과 같은 대응하는 마크로사이클 카복실산 (III)으로 전환되어 제조될 수 있다:

L이 상기 상술한 바와 같고, PG²가 카복실 보호기, 예를 들어 상기 언급된 카복실 보호기 중 하나, 특히, C_{1 - 4}알킬 또는 벤질 에스테르, 예를 들어, 메틸, 에틸, 또는 t.부틸 에스테르이다. PG¹기는 공지된 방법론, 예를 들어, 수성 매질 중에서 알칼리 금속 수산화물로 처리함으로써 제거될 수 있는, 예를 들어, 메틸 또는 에틸 에스테르일 수 있고, 약산성 조건하에서 제거될 수 있는 t.부틸 에스테르일 수 있으며, 강산 또는 촉매성 수소화에 의해 제거될 수 있는 벤질 에스테르일 수 있다. L이 라디칼 (a)일 때, 본 반응 시퀀스로 중간체 (III)이 수득된다. 이들은 또한 O-보호기인 L을 제거하고 이에 따라 형성된 알콜을 상기 개시된 바와 같은 중간체 (VI)로 에테르화하여 제조될 수 있다.

화학식 (VII)의 중간체는 PG가 상기 상술된 바와 같은 질소-보호기인 중간체 (XII)를 마크로사이클 (VII-a) 내에서 이중 결합을 지닌 중간체 (VII)로 고리화하고, 마크로사이클 (VII-b)의 그 위치에서 단일 결합을 지닌 대응하는 중간체 (VII)로 환원시켜 제조될 수 있다:

L은 상기에서 상술한 바와 같다. L이 라디칼 (a)일 때, 이 반응 시퀀스로 중간체 (VII-a) 또는 (VII-b)가 수득된다. 이는 또한 O-보호기인 L을 제거하고, 이에 따라 형성된 알콜을 상기 개시된 바와 같은 중간체 (VI)로 에테르화하여 제조될 수 있다. 상기 시퀀스에서 설포닐아미드기는 에스테르(예를 들어, 상기 상술한 바와 같은 -OPG²기)일 수 있으며, 이는 제거되고, 앞서 언급된 과정을 따라 사이클로프로필아미드(IV)와 축합될 수 있다.

사이클로프로필설폰아미드기는 임의의 합성 단계에, 상기 개시된 바와 같이 마지막 단계로서, 또는 그 전에, 다음 반응식에 나타낸 바와 같은 마크로사이클 형성 전에, 도입될 수 있다.

L은 상기 정의된 바와 같고, PG²가 상기 상술한 바와 같은 카복실 보호기를 나타내며, L¹은 질소-보호기(상기 언급된 바와 같은 PG)이거나 L¹이

(b)기이며, 여기서, R¹ 및 n은 상기 언급된 바와 같거나, R¹은 또한 질소-보호기(상기 상술한 바와 같은 PG기)를 나타낼 수 있다. 명백하게, R¹이 질소-보호기를 나타낼 때, 합성 경로의 목적하는 단계에 제거될 수 있다. L¹이 (b)기를 나타내는 중간체(XIV)는 중간체 (II) 또는 (II-a)에 상응되며, 상기 상술한 바와 같이 더욱 처리 될 수 있다.

P1 및 P2 빌딩 블록의 커플링

P1 및 P2 빌딩 블록은 상기 개시된 과정에 따른 아미드 형성 반응을 이용하여 연결된다. P1 빌딩 블록은 카복실 보호기 PG²((XVI-a)에서와 같음)를 가질 수 있거나, P1'기((XVI-b)에서와 같음)에 연결될 수 있다. L²는 수소 또는 상기 언급된 바와 같은 L기 일 수 있다.

상기 반응식의 순서에서, 사이클로프로필 아미노산 (XVI-a) 또는 (XVI-b)는 아미드 형성 반응, 이를 테면 상기 기술된 표준 펩티드 커플링 조건을 이용하여, P2 빌딩 블록의 산 기능에 결합된다. 이용된 보호기를 위한 적절한 조건을 이용하여 (XIII)에서 산 보호기를 제거하고, 상기 개시된 바와 같은 사이클로프로필설폰 아미드(IV)를 커플링시켜, 중간체(XIV)가 수득된다.

일 구체예에서, L¹는 기 (b)이고, 이들 반응은 P1에서 P2-P3로의 커플링을 포함하고, 이는 상기 언급된 중간체 (X) 또는 (II)를 야기한다. 다른 구체예에서, L¹는 상술된 바와 같은 N-보호기 PG이고, 커플링 반응은 중간체 (XV-a)를 야기하며, 이로부터 기 PG는 상기 언급된 반응 조건을 사용하여 제거될 수 있고, 중간체 (XIII-a)가 된다:

일 구체예에서, 본 반응의 PG는 BOC 기이다. 부가적으로 L³가 수소인 경우, 출발 물질은 Boc-L-하이드록시프롤린이다. L²기는 O-보호기 PG¹일 수 있으며, 이는 출발물질(XV)에 도입되며, 여기서 L²는 수소이며, 이는 PG기를 향하여 선택적으로 절단가능하다.

P3 및 P2 빌딩 블록의 커플링

P3 및 P2 빌딩 블록은 우레아 형성 반응을 이용하여 (VII)와 (IX)의 커플링을 위하여 상기 개시된 과정을 따라 연결된다. 일반적인 방법은 다음 반응 도식에 나타냈으며, 여기서 L은 상기 상술한 바와 같고 L³는 -O-PG²기 또는 하기 그룹이다:

(XVIII)에서 R¹은 상기에서 상술한 바와 같으나, 질소-보호기일 수 있고, 이는 합성 경로 중 원하는 단계에서 질소탈보호제로 제거될 수 있다. (XVIII)에서 R³이 -OPG²인 경우, PG²기는 제거될 수 있고, 만들어진 산은 사이클로프로필 아미노산 (XVI-a) 또는 (XVI-b)와 커플링되어, L¹이 라디칼 (b)인 중간체 (XIII) 또는 (XIV)가 수득된다.

화학식 (I)의 화합물을 위한 빌딩 블록 P1, P1', P2 및 P3는 공지된 중간체로부터 시작하여 제조될 수 있다. 수많은 합성을 이하에서 더욱 자세하게 기술하였다.

P2 빌딩 블록의 합성

빌딩 블록 P2는 O-아릴화 반응, 예를 들어, 상기 개시된 과정을 따라, 하기 반응식에 나타낸 바와 같이 제조될 수 있으며, 여기서, L¹은 상기 상술한 바와 같고, 특히 N-보호기 PG이며, X는 상기 정의된 바와 같고, L⁴는 하이드록시, 상기 언급된 카복실보호기 중 임의의 것과 같은 카복실 보호기인 PG²를 지닌 -OPG² 기이거나; L⁴는 P1 기, 이를 테면, 상기 정의된 바와 같은 (c) 또는 (d)기이다.

출발 물질 (XIX)는 (V) 및 (VI)로 시작하여 (I-d)의 합성을 위해 상기 언급된 바와 같은 시약 (VI)와 반응된다. 상기 개시된 바와 유사하게, 본 반응은 하이드록시 함유 탄소 원자에서 입체화학적 머무름 (이탈기인 X와 아릴화) 및 전위(미쯔노부 반응)으로 수행된다. 이탈기인 X와의 아릴화에서, L⁴는 하이드록시이고, 미쯔노부 반응에서 L⁴는 -OPG²기일 수 있다.

일 구체예에서, L¹기는 Boc인 PG이며, 출발 물질 (VIII)은 상업적으로 입수가능한 Boc-L-하이드록시프롤린 또는 이의 임의의 다른 입체 이성체이다.

(XX)에서 L⁴가 -OPG²인 경우, 카복실보호기 PG²는 상기 개시된 과정을 따라 하이드록시프롤린 유도체(XVII)로 제거될 수 있다. 일 구체예에서, PG¹은 Boc이며, PG2는 저급 알킬 에스테르, 특히 메틸 또는 에틸 에스테르이다. 후자의 에스테르가 산으로 가수분해되는 것은 표준 과정에 따라, 예를 들어, 메탄올 또는 에탄올 중 염산으로의 산 가수분해 또는 금속 수산화물, 이를 테면, 수산화나트륨, 바람직하게 수산화리튬에 의하여 수행될 수 있다.

중간체 (VI)는 공지의 시작 물질을 이용하여 공지된 방법을 따라 제조될 수 있다. 그것들은 하기에 나타낸 바와 같이 제조될 수 있다:

디클로로메탄과 같은 용매 중의 하나 이상의 Lewis 산 이를 테면, 삼염화 붕소 및 삼염화 알루미늄의 존재 하에 아실화제, 이를 테면 염화 아세틸 등을 이용하여, 상업적으로 또는 종래에 공지된 방법을 통하여 입수가능한 3-메톡시아닐린(XXII)을 Friedel-Craft 아실화하면 (XXIII)가 제공된다. 카복실레이트기를 위한 활성화제, 예를 들어 POCl₃의 존재 하에서, 바람직하게 염기 조건 하, 이를 테면, 피리딘 중, (XXIII)를 4-이소프로필-티아졸-2-카복실산(XXIV)와 커플링시킨 다음, 환-닫힘과 tert-부탄올 중 포타슘 tert-부톡사이드와 같은 염기 조건 하에서 탈수소로 퀴놀린 유도체(VI-a)가 생성된다. 후자는 예를 들어, (XII)와 할로겐화제, 이를 테면, 포스포릴 클로라이드 등이나 아릴설포닐 클로라이드, 이를 테면, 토실 클로라이드의 반응에 의하여 LG가 이탈기인 (VI-b)로 전환될 수 있다.

2-카복시-4-이소프로필-티아졸(XXIV)는 공지의 과정을 따라, 특히 하기와 같이 합성된다:

에틸 티오옥사메이트(XXVI)는 β-브로모케톤(XXVII)와 반응하여 티아졸릴 카복실산 에스테르(XXVIII)를 형성하며, 이는 대응하는 산(XXIV)으로 가수분해된다. 이러한 중간체 중 에틸 에스테르는 상기 정의된 바와 같은 다른 카복실 보호기 PG²에 의하여 치환될 수 있다.

중간체 (XXIII)는 Brown et al. J. Med. Chem. 1989, 32, 807- 826에 기재된 바와 같이 또는 다음 반응식에 요약된 바와 같이 제조될 수 있다.

상업적으로 입수가능한 출발 물질 에틸아세틸 아세테이트 및 에톡시메틸렌 말로노니트릴은 적합한 염기 이를 테면, 소듐 에톡사이드 및 용매, 이를 테면 에탄올 등의 존재 하에서 반응된다. 이러한 반응으로 중간체 (XXIX)가 수득된다. 후자는 예를 들어, 염기, 이를 테면, 알칼리 금속 하이드록사이드, 예를 들어, NaOH 또는 LiOH와 함께 적합한 용매, 이를 테면 에탄올/물 중에 가수분해되어, (XXX)가 생산된다. 중간체 (XXX)의 중간체 (XXXI)로의 탈카복실화는 기포 생성이 멈출 때까지 증가된 온도에서, 바람직하게 염기성 용매, 이를 테면, 퀴놀린의 존재 하에서 수행된다. 적합한 용매(이를 테면, DMF 등) 중 적합한 염기(예를 들어, K₂CO₃)의 존재 하에서, 특히 메틸화제, 이를 테면 MeI로 중간체 (XXXI)를 메틸화하여 (XXXII)가 수득된다. 후자는 그리그나드(Grignard) 시약과, 이를 테면, MeMgBr과 적합한 용매(예를 들어, THF) 중에서 반응한 다음, 이를 테면 HCl 수용액과 가수분해하여 중간체 (XXIII)가 수득된다.

P1 빌딩 블록의 합성

P1 단편의 제조에서 이용되는 사이클로프로판 아미노산은 상업적으로 입수할 수 있거나, 종래에 공지된 방법을 이용하여 제조될 수 있다.

아미노-비닐-사이클로프로필 에틸 에스테르(XVI-a)는 WO00/09543에 기술된 과정에 따라 또는 PG²가 상기 상술한 바와 같은 카복실 보호기인 다음 반응식에 나타낸 바와 같이 수득될 수 있다:

염기의 존재 하에서 상업적으로 입수할 수 있거나 쉽게 수득할 수 있는 이민 (XXXIII)를1,4-디할로부텐과 처리하여 (XXXIV)가 수득되며, 이는 가수분해 후 카복실기에 대한 알릴 치환체 신을 지닌 사이클로프로필 아미노산 (XVI-a)이 수득된다. 거울상 이성체 혼합물 (XVI-a)의 분할로 (XVI-a-1)를 얻었다. 종래에 공지된 과정, 이를 테면, 효소적 분리; 키랄산으로의 결정화; 또는 화학적 유도체화를 이용하거나; 또는 키랄 컬럼 크로마토그래피에 의해 분할을 수행하였다.

설폰아미드 유도체(XVI-b)는 다음 반응식에 요약된 바와 같이 수득될 수 있 으며, 여기서 R² 및 PG는 상기에서 상술한 바와 같다.

(XVI-c)와 설폰아미드(IV)의 반응은 아미드 형성 과정이며, 이는 상기 개시된 과정에 따라 수행될 수 있다. 본 반응으로 중간체 (XVI-d)가 수득되며, 여기서, 아미노 보호기는 상기 개시된 바와 같은 표준 방법에 의하여 제거된다. 그 다음, 이는 목적하는 중간체 (XVI-b)가 된다. 첫번째로 N-보호기 PG가 도입되고 그 다음 PG² 기가 제거되어 출발 물질 (XVI-c)이 중간체 (XVI-a)로부터 제조될 수 있다.

P3 빌딩 블록의 합성

P3 빌딩 블록(IX)은 본 분야에 숙련자에게 공지된 방법에 따라 제조될 수 있다. 이러한 방법 중 하나를 하기 반응식에 나타내었으며, 보호 아민(XXXVI), 특히 모노아실화 아민, 이를 테면 트리플루오로아세트아미드 또는 Boc-보호 아민로 부터 시작된다.

본 반응식에서, LG는 상기 상술한 바와 같은 N-보호기이며, 특히 BOC 또는 트리플루오로아세틸이고; R¹ 및 n은 상기 정의된 바와 같고, 여기서, R¹은 또한 PG 기를 향하여 선택적으로 절단될 수 있는 질소-보호기일 수 있다. LG는 상기 상술한 바와 같은 이탈기이며, 특히 LG는 클로로 또는 브로모이다. R¹이 질소-보호기를 나타내는 경우, 이는 합성 경로의 원하는 단계에서 질소 탈보호제로 제거될 수 있다.

모노아실화 아민 (XXXVI)을 강염기, 이를 테면 소듐 하이드라이드로 처리하였으며, 그 다음 할로C_{3 - 8}알케닐(XXXVII)와 반응하여 대응하는 보호 아민 (XXXVIII)가 된다. (XXXVIII)의 탈보호로 (IX)가 수득된다. 탈보호는 PG 기에 의존할 것이며, 이에 따라 PG가 Boc이면, 탈보호는 상대적으로 약산, 예를 들어, 트리플루오로아세트산으로 성취될 수 있거나, PG가 트리플루오로아세틸일 때, 제거는 염기, 이를 테면, 수산화나트륨으로 성취된다.

R¹이 수소인 중간체 (IX)는 알케닐아민의 가브리엘(Gabriel) 합성을 통하여 제조될 수도 있으며, 이는 프탈이미드(XXXIX)를 염기, 이를 테면, 수산화칼륨 및 (XXXX)와 처리한 다음, 가수분해하여 알케닐아민(IX-a)를 생산할 수 있다.

상기 반응식에서, LG는 할로겐이며, n은 상기 정의된 바와 같다.

화학식 (I)의 화합물은 3가 질소를 그의 N-옥사이드 형태로 전환하는 공지된 과정에 따라 대응하는 N-옥사이드 형태로 전환될 수 있다. 상기 N-산화 반응은 일반적으로 화학식 (I)의 출발 물질을 적절한 유기 또는 무기 과산화물과 반응시켜 수행될 수 있다. 적절한 무기 과산화물은 예를 들어, 과산화수소, 과산화 알칼리금속 또는 알칼리 토금속, 예를 들어, 과산화 나트륨, 과산화 칼륨을 포함하며; 적절한 유기 과산화물은 과산화산, 예를 들어, 벤젠카보-퍼옥소산 또는 할로 치환된 벤젠카보퍼옥소산, 예를 들어, 3-클로로벤젠-카보퍼옥소산, 퍼옥소알칸산, 예를 들어, 퍼옥소아세트산, 알킬하이드로퍼옥사이드, 예를 들어, tert-부틸 하이드로-퍼옥사이드를 포함할 수 있다. 적합한 용매는 예를 들어, 물, 저급 알코올, 예를 들어, 에탄올 등, 탄화수소, 예를 들어 톨루엔, 케톤, 예를 들어, 2-부탄온, 할로겐화 탄화수소, 예를 들어 디클로로메탄 및 그러한 용매의 혼합물이다.

화학식 (I) 화합물의 순수 입체 이성체는 공지된 과정을 적용하여 수득될 수 있다. 디아스테레오머는 물리적 방법, 이를 테면 선택적 결정화 및 크로마토그래피 기술, 예를 들어, 역류 분배, 액체 크로마토그래피 등에 의하여 분리될 수 있다.

화학식 (I)의 화합물은 공지된 분할 방법에 따라 서로 분리될 수 있는 거울상 이성체의 라세미 혼합물로 수득될 수 있다. 충분하게 염기성이거나 산성인 화학식 (I)의 라세미 화합물은 적합한 키랄 산, 각각 키랄 염기와 반응하여 대응하는 디아스테레오머 염 형태로 전환될 수 있다. 그 다음 상기 디아스테레오머 염 형태가 예를 들어 선택 또는 분별 결정에 의해 분리되며, 거울상 이성체는 알칼리 또는 산에 의해 그로부터 해방된다. 화학식 (I)의 화합물의 거울상 이성체를 분리하는 선택적인 방법은 액체 크로마토그래피, 특히 키랄 정지상을 이용하는 액체 크로마토그래피를 포함한다. 상기 순수한 입체화학적 이성체는 또한, 적절한 출발 물질의 대응하는 순수한 입체화학적 이성체로부터 유도될 수 있으나, 단, 반응은 입체특이적으로 발생한다. 바람직하게, 만약 특이 입체이성체를 원한다면, 상기 화합물은 입체특이적 제조 방법으로 합성수 있다. 이들 방법은 유리하게 거울상 이성체적으로 순수한 출발 물질을 사용할 것이다.

다른 면에서, 본 발명은 본원에 상술된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 본원에 상술된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물의 서브그룹 중 임의의 화합물의 치료적 유효량과 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 본원에서 치료적 유효량은 감염된 대상 또는 감염될 위험에 있는 대상에서 바이러스 감염 및 특히 HCV 바이러스 감염에 예방적으로 활성이 있거나, 이를 안정하게 하거나, 이를 감소시키기에 충분한 양이다. 또다른 면에서, 본 발명은 본원에 상술된 바와 같은 약제학적 조성물을 제조하는 방법에 관한 것이며, 이는 약제학적으로 허용되는 담체를 본원에 상술된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 본원에 상술된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물의 서브그룹 중 임의의 화합물의 치료적 유효량과 혼합하는 것을 포함한다.

이에 따라, 본 발명의 화합물 또는 이의 임의의 서브그룹은 투여 목적을 위하여 다양한 약제학적 형태로 제제화될 수 있다. 적절한 조성물은 보통 전신 투여 약물로 사용되는 것으로 언급된 모든 조성물일 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물을 제조하기 위하여, 활성 성분으로서 특정 화합물의 유효량, 임의로 부가 염 형 태 또는 금속 복합물는 약제학적으로 허용되는 담체와 잘 혼합된 혼합물로 결합되고, 이러한 담체는 투여에 바람직한 제조 형태에 의존하여 매우 다양한 형태를 취할 수 있다. 이들 약제학적 조성물은 특히 경구, 직장, 경피 투여 또는 비경구 주사에 적합한 단위 제형이 바람직하다. 예를 들어 경구 제형으로 조성물을 제조하는데 있어서, 임의의 통상 약제 매질은 이를 테면 현탁액, 시럽, 엘릭시르, 에멀젼 및 용액과 같은 경구 액체 제제의 경우 물, 글리콜, 오일, 알코올 등; 또는 분말, 환약, 캡슐, 및 정제의 경우 전분, 슈가, 카올린, 윤활제, 결합제, 붕해제 등과 같은 고체 담체가 사용될 수 있다. 이들의 투여 용이성으로, 정제와 캡슐이 가장 유용한 경구 단위 제형을 대표하며, 이 경우 고체 약제 담체가 분명히 사용된다. 비경구 조성물을 위해, 담체는 다른 성분, 예를 들어 용해도를 돕는 성분이 포함될 수 있지만, 통상 무균수를 적어도 대부분 포함할 것이다. 예를 들어, 담체가 식염수, 글루코스 용액 또는 식염수와 글루코스 용액의 혼합물을 포함하는, 주사가능한 용액이 제조될 수 있다. 적합한 액체 담체, 현탁화제 등이 사용될 수 있는 주사가능한 현탁액이 또한 제조될 수 있다. 사용 직전 액체 제제로 전환되는 고체 제제가 포함된다. 경피 투여에 적합한 조성물에서, 담체는 임의로 침투 증진제 및/또는 적합한 습윤제를 포함하며, 임의로 어떠한 특성의 적합한 첨가제와 소량 비율로 배합되며, 첨가제는 피부 상에 상당한 유해 효과를 유발하지 않는다.

본 발명의 화합물은 경구 흡입 또는 통기를 통해 투여하기 위하여 본 분야에 이용된 방법과 제제의 수단으로 경구 흡입 또는 통기를 통해 투여될 수 있다. 이에 따라, 일반적으로 본 발명의 화합물은 용액, 현탁액 또는 건조 분말의 형태로 폐로 투여될 수 있으며, 용액이 바람직하다. 경구 흡입 또는 통기를 통하여 용액, 현탁액 또는 건조 분말을 전달하기 위해 발달된 임의의 시스템은 본 화합물의 투여에 적합하다.

이에 따라, 본 발명은 또한 화학식 (I)의 화합물 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하며 경구 흡입 또는 통기에 의해 투여되기 적합한 약제학적 조성물을 제공한다. 바람직하게, 본 발명의 화합물은 분무 또는 연무된 용량으로 용액의 흡입을 통해 투여된다.

상기 언급된 약제학적 조성물은 투여 용이성과 투여량의 균일성을 위해 단위 제형으로 제제화되는 것이 특히 바람직하다. 본원에 이용된 단위 제형은 단위 투여량으로 적합한 물리적 분할 단위를 뜻하며, 각 단위는 필요한 약제학적 담체와 회합되어 목적하는 치료 효과를 나타내도록 계산된 활성 성분의 일정량을 함유한다. 이 단위 제형의 일예는 정제(금이 새겨있거나 코팅된 정제 포함), 캡슐, 환제, 좌제, 분말 패킷, 웨이퍼, 주사 용액 또는 현탁액 등, 및 그의 분할된 다중회분이다.

화학식 (I)의 화합물은 항바이러스성을 나타낸다. 본 발명의 화합물 및 방법을 이용하여 치료할 수 있는 바이러스 감염과 그의 연관된 질환은 HCV 및 다른 병원성 플라비바이러스, 이를 테면 황열, 뎅기열(1-4형), 세인트루이스 뇌염, 일본 뇌염, 머레이계곡 뇌염, 웨스트 나일 바이러스 및 쿤진 바이러스에 의한 감염을 포함한다. HCV와 연관된 질환은 경화증, 말기 간 질환 및 HCC를 유발하는 진행성 간 섬유증, 염증 및 괴사를 포함하며; 다른 병인성 플라비바이러스에서 질환은 황열, 뎅기열, 출혈열 및 뇌염을 포함한다. 더욱이, 본 발명의 수많은 화합물은 HCV의 돌 연변이 스트레인(strain)에 대하여 활성이 있다. 또한, 본 발명의 많은 화합물은 바람직한 약물동태학적 프로필을 나타내며, 허용되는 반감기, AUC(곡선 아래 영역) 및 피크치를 포함하는 생체이용률에서 유용한 특성을 가지며, 바람직하지 않은 현상, 이를 테면 불충분하게 빠른 개시 및 조직 잔류가 없다.

화학식 (I)의 화합물의 HCV에 대한 시험관내 항바이러스성을 Lohmann et al.(1999) Science 285:110-113을 기준으로 하고, Krieger et al.(2001) Journal of Virology 75: 4614-4624(실시예 섹션에 더욱 구체화됨)에 의해 변형된 세포 HCV 레플리콘(replicon) 시스템에서 시험하였다. 이 모델은 HCV에 대한 완전 감염 모델이 아니지만, 현재 이용가능한 자기 HCV RNA 복제의 가장 확고하고 효율적인 모델로서 널리 인정되고 있다. 이 세포 모델에서 항-HCV 활성을 지닌 화합물은 포유 동물에서 HCV 감염의 치료에 추가 개발을 위한 후보군으로서 고려된다. HCV 레플리콘 모델에서 세포독성 또는 세포 증가 억제 효과를 나타내며 그 결과 HCV RNA 또는 연결된 리포터 효소 농도의 감소를 야기하는 화합물들로부터 HCV 기능을 특이하게 간섭하는 화합물들을 구분하는 것은 중요하다고 이해될 것이다. 예를 들어 레사주린과 같은 플루오로게닉 레독스 염료를 이용하여 미토콘드리아 효소의 활성을 기초로 세포의 세포독성을 평가하는 분석이 본 분야에서 알려져 있다. 또한, 세포의 카운터-스크린은 연결된 리포터 유전자 활성, 이를테면 반딧불이 루시퍼라제의 비선택적 억제 평가를 위해 존재한다. 적합한 세포형은 발현이 구조적으로 활성인 유전자 프로모터에 의존하는 루시퍼라제 리포터 유전자의 안정한 형질감염에 의해 구비될 수 있으며, 이러한 세포는 비선택적 억제제를 제거하기 위해 카운터스크린으로서 사용될 수 있다.

그의 항바이러스성, 특히 항-HCV 특성 때문에, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 임의의 서브그룹, 전구 약물, N-옥사이드, 부가염, 4차 아민, 금속 복합물 및 입체화학적 이성체는 바이러스 감염, 특히 HCV 감염된 개체의 치료와 이러한 감염의 예방에 유용하다. 일반적으로, 본 발명의 화합물은 바이러스, 특히 HCV와 같은 플라비바이러스에 감염된 온혈 동물의 치료에 유용할 수 있다.

더욱이, 본 발명의 화합물 또는 이의 임의의 서브그룹은 의약으로 이용될 수 있다. 상기 의약으로서 용도 또는 치료 방법은 바이러스 감염, 특히 HCV 감염과 연관된 증상을 없애기 위하여 유효량을 바이러스 감염 대상에, 또는 바이러스 감염에 감수성인 대상에 전신 투여하는 것을 포함한다.

또한, 본 발명은 바이러스 감염, 특히 HCV 감염의 치료 또는 예방을 위한 의약의 제조에서 본 화합물 또는 이의 임의의 서브그룹의 용도에 관한 것이다.

게다가, 본 발명은 바이러스에 의해 감염된, 또는 바이러스, 특히 HCV에 의해 감염될 위험에 있는 온혈 동물을 치료하는 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 본원에 상술한 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 본원에 상술한 바와 같은 화학식 (I) 화합물의 임의의 서브그룹의 화합물의 항-바이러스적 유효량을 투여하는 것을 포함한다.

또한 공지된 항-HCV 화합물, 이를 테면, 인터페론-α (IFN-α), 페길화 인터페론-α 및/또는 리바비린과 화학식 (I)의 화합물의 배합물이 배합 요법에서 의약으로 이용될 수 있다. 용어 "배합 요법"은 바이러스 감염의 치료에서 특히 HCV 감 염의 치료에서, 동시, 분리 또는 연속적 이용을 위하여 배합된 제제로, 필수로 (a) 화학식 (I)의 화합물 및 임의로 (b) 또다른 항-HCV 화합물을 함유하는 산물에 관한 것이다.

항-HCV 화합물은 HCV 폴리머라제 억제제, HCV 프로테아제 억제제, HCV 생활 주기에서 또다른 표적의 억제제 및 면역조절제, 항바이러스제 및 이의 배합물로부터 선택된 제제를 함유한다.

HCV 폴리머라제 억제제는 NM283 (발로피시타빈), R803, JTK-109, JTK-003, HCV-371, HCV-086, HCV-796 및 R-1479를 포함하나 이에 한정되지 않는다.

HCV 프로테아제의 억제제(NS2-NS3 억제제 및 NS3-NS4A 억제제)는 WO02/18369의 화합물 (참조예, 페이지 273, 9-22째줄 및 페이지 274, 4째줄 내지 페이지 276, 11째줄); BILN-2061, VX-950, GS-9132 (ACH-806), SCH-503034 및 SCH-6를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 이용될 수 있는 또다른 제제는 WO-98/17679, WO-00/056331 (Vertex); WO 98/22496 (Roche); WO 99/07734, (Boehringer Ingelheim), WO 2005/073216, WO2005073195 (Medivir) 및 구조적으로 유사한 제제에 개시되었다.

HCV 생활 주기에서 다른 표적의 억제제는 NS3 헬리카제; 메탈로-프로테아제 억제제; 안티센스 올리고뉴클레오티드 억제제, 이를 테면 ISIS-14803, AVI-4065 등; siRNA's 이를 테면 SIRPLEX- 140-N 등; 벡터-암호화된 짧은 헤어핀 RNA (shRNA); DNAzymes; HCV 특이적 리보자임 이를 테면 헵타자임, RPI.13919 등; 침입 억제제 이를 테면 HepeX-C, HuMax-HepC 등; 알파 글루코시다제 억제제 이를 테면 셀고시비르(celgosivir), UT-231B 등; KPE-02003002; 및 BIVN 401을 포함한다.

면역조절제는 천연 및 재배합 인터페론 아형 화합물, 이를 테면 α-인터페론, β-인터페론, γ-인터페론, ω-인터페론 등, 이를 테면 Intron A®, Roferon-A®, Canferon-A300®, Advaferon®, Infergen®, Humoferon®, Sumiferon MP®, Alfaferone®, IFN-beta®, Feron® 등; 폴리에틸렌 글리콜 유도체화 (페길화) 인터페론 화합물, 이를 테면 PEG 인터페론-α-2a (Pegasys®), PEG 인터페론-α-2b (PEG-Intron®), 페길화 IFN-α-con1 등; 인터페론 화합물의 지속성 제제 및 유도체, 이를 테면, 알부민-융합 인터페론 알부페론 α 등; 세포에서 인터페론의 합성을 자극하는 화합물, 이를 테면 레지퀴모드(resiquimod) 등; 인터류킨; 제 1형 헬퍼 T 세포 반응의 발달을 증진시키는 화합물, 이를 테면 SCV-07 등; TOLL-유사 수용체 작용제 이를 테면 CpG-10101 (액틸론), 이자토리빈 등; 티모신 α-1; ANA-245; ANA-246; 히스타민 디하이드로클로라이드; 프로파게르마늄; 테트라클로로데카옥사이드; 앰플리젠; IMP-321; KRN-7000; 항체, 이를 테면 씨바시르(civacir), XTL-6865 등; 및 예방 및 치료 백신, 이를 테면 InnoVac C, HCV E1E2/MF59 등을 포함하나 이에 한정되지 않는다.

다른 항바이러스제는 리바비린, 아만타딘, 비라미딘, 니타족사니드; 텔비부딘; NOV-205; 타리바비린; 내부 리보좀 침입의 억제제; 넓은-스펙트럼 바이러스 억제제, 이를 테면 IMPDH 억제제 (예를 들어, US5,807,876, US6,498,178, US6,344,465, US6,054,472, WO97/40028, WO98/40381, WO00/56331의 화합물 및 마이코페놀산 및 이의 유도체이며, VX-950, 메리메포디브 (VX-497), VX-148, 및/또는 VX-944를 포함하나 이에 한정되지 않는다); 또는 상기한 것 중 임의의 배합물을 포 함하나 이에 한정되지 않는다.

이에 따라, HCV 감염을 없애거나 치료하기 위하여, 화학식 (I)의 화합물은 예를 들어 인터페론-α (IFN-α), 페길화 인터페론-α 및/또는 리바비린, 뿐 아니라 HCV 에피토프에 대하여 표적화된 항체, 소간섭 RNA(siRNA), 리보자임, DNAzyme, 안티센스 RNA, 예를 들어 NS3 프로테아제, NS3 헬리카제 및 NS5B 폴리머라제의 소분자 길항제에 기초한 치료제와 배합되어 공동-투여될 수 있다.

이에 따라, 본 발명은 HCV 바이러스에 감염된 포유동물에서 HCV 활성을 억제하는 데 유용한 의약을 제조하기 위한, 상기에서 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 임의의 서브그룹의 용도에 관한 것이며, 여기에서 상기 의약은 배합 요법으로 이용되고, 상기 배합 요법은 바람직하게 화학식 (I)의 화합물 및 또다른 HCV 억제 화합물, 예를 들어 (페길화) IFN-α 및/또는 리바비린을 포함한다.

또다른 면에서, 본원에 상술된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물과 항-HIV 화합물의 배합물이 제공된다. 후자는 바람직하게 생체 이용률을 개선시키는 약물 대사 및/또는 약물동태학에 긍정적인 효과를 가지는 HIV 억제제이다. 그러한 HIV 억제제의 예는 리토나비르이다.

이와 같이, 본 발명은 (a) 화학식 (I)의 HCV NS3/4a 프로테아제 억제제 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염; 및 (b) 리토나비르 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 배합물을 제공한다.

화합물 리토나비르 및 이의 약제학적으로 허용되는 염과 그것의 제조 방법은 WO94/14436에 공지되어 있다. 리토나비르의 바람직한 제형에 대하여 US6,037, 157 및 여기에 인용된 문서: US5,484,801, US08/402,690, 및 WO95/07696 및 WO95/09614를 참조한다. 리토나비르는 다음 화학식을 갖는다:

다른 구체예에서, (a) 화학식 (I)의 HCV NS3/4a 프로테아제 억제제 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염; 및 (b) 리토나비르 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 배합물은 본원에 설명된 바와 같은 화합물에서 선택된 추가의 항-HCV 화합물을 포함한다.

본 발명의 일구체예에서, 본원에 설명된 바와 같은 배합물의 제조 방법이 제공되며, 이는 화학식 (I)의 HCV NS3/4a 프로테아제 억제제 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 리토나비르 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 배합하는 단계를 포함한다. 본 발명의 선택적인 구체예는 배합물이 본원에 설명된 바와 같은 하나 이상의 부가 제제를 포함하는 방법을 제공한다.

본 발명의 배합물은 의약으로 이용될 수 있다. 상기 의약으로의 용도 또는 치료 방법은 HCV 및 다른 병원성 플라비- 및 페스티바이러스와 연관된 증상을 없애기에 유효한 양을 HCV-감염된 대상에 전신 투여하는 것을 포함한다. 결과적으로, 본 발명의 배합물은 포유동물에서 HCV 감염과 연관된 감염 또는 질환을 치료, 예방 또는 없애는데, 특히, HCV 및 다른 병원성 플라비- 및 페스티바이러스와 연관된 증 상을 치료하기에 유용한 의약의 제조에서 이용될 수 있다.

본 발명의 일구체예에서, 약제학적으로 허용되는 부형제와 본원에 개시된 구체예 중 임의의 것에 따른 배합물을 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다. 특히, 본 발명은 (a) 화학식 (I)의 HCV NS3/4a 프로테아제 억제제 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 치료적 유효량 (b) 리토나비르 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 치료적 유효량 및 (c) 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 임의로, 약제학적 조성물은 HCV 폴리머라제 억제제, HCV 프로테아제 억제제, HCV 생활 주기에서 또다른 표적의 억제제 및 면역조절제, 항바이러스제 및 이의 배합물에서 선택된 추가 제제를 더 포함한다.

조성물은 적합한 약제학적 제형, 이를 테면 상기 개시된 제형으로 제제화될 수 있다. 각각의 활성 성분은 개별적으로 제제화될 수 있으며, 제제는 공동-투여되거나 둘다를 포함하는 하나의 제제로 투여될 수 있고, 필요에 따라 다른 활성 성분이 제공될 수 있다.

본원에 이용된 바와 같은 용어 "조성물"은 특정 성분을 함유하는 산물, 뿐 아니라 특정 성분의 배합물로부터 직접적으로 또는 간접적으로 만들어지는 산물을 포함하는 것을 의미한다.

일구체예에서, 본원에 제공된 배합물은 HIV 치료법에서 동시, 분리 또는 연속적 이용을 위한 결합된 제제로 제제화될 수도 있다. 그러한 경우, 일반식 (I)의 화합물 또는 이의 임의의 서브그룹은 다른 약제학적으로 허용되는 부형제를 함유하는 약제학적 조성물로 제제화되며, 리토나비르는 개별적으로 다른 약제학적으로 허 용되는 부형제를 함유하는 약제학적 조성물로 제제화된다. 통상적으로, 이러한 두 분리된 약제학적 조성물은 동시, 분리 또는 연속적 이용을 위한 키트의 부분일 수 있다.

이에 따라, 본 발명의 배합물의 개별 성분은 분리된 또는 단일 배합 형태로 동시에 또는 치료법을 진행하는 동안 다른 시간에 개별적으로 투여될 수 있다. 이에 따라, 본 발명은 모든 연속적인 또는 교대의 치료 요법을 포함하는 것으로 이해될 것이며, 용어 "투여"는 적절하게 이해될 것이다. 바람직한 구체예에서, 분리 제형은 거의 동시에 투여된다.

일구체예에서, 본 발명의 배합물은 화학식 (I)의 HCV NS3/4a 프로테아제 억제제가 단독으로 투여될 때의 생체이용률과 비교하여 상기 화학식 (I)의 HCV NS3/4a 프로테아제 억제제의 생체이용률을 임상적으로 개선시키기에 충분한 양의 리토나비르 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 함유한다.

또다른 구체예에서, 본 발명의 배합물은 화학식 (I)의 HCV NS3/4a 프로테아제 억제제가 단독으로 투여될 때의 적어도 하나의 약물동태학적 변수와 비교하여, 12 시간에 t_{1 /2}, C_min, C_max, C_ss, AUC 또는 24시간에 AUC로부터 선택되는 화학식 (I)의 HCV NS3/4a 프로테아제 억제제의 적어도 하나의 약물동태학적 변수를 증가시키기에 충분한 양의 리토나비르 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 함유한다.

다른 구체예는 본원에 정의된 바와 같으며 치료적 유효량의 상기 배합물의 성분을 포함하는 배합물을 개선이 필요한 개체에 투여하는 것을 포함하여 HCV NS3/4a 프로테아제 억제제의 생체이용률을 개선시키는 방법에 관한 것이다.

또다른 구체예에서, 본 발명은 12 시간에 t_{1 /2}, C_min, C_max, C_ss, AUC 또는 24시간에 AUC로부터 선택되는 화학식 (I)의 HCV NS3/4a 프로테아제 억제제의 적어도 하나의 약물동태학적 변수의 개선제로써 리토나비르 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도에 관한 것이나; 단, 상기 용도는 인간 또는 동물 몸에서 시험되지 않는다.

본원에서 이용된 용어 "개체"는 치료, 관찰 또는 실험의 목적인 동물, 바람직하게는 포유 동물, 가장 바람직하게는 인간을 나타낸다.

생체이용률은 체순환에 도달하는 투여량의 부분으로 정의된다. t_{1 /2}은 혈장 농도가 본래 값의 반으로 떨어지는 시간 또는 반감기를 나타낸다. C_ss는 항정 상태 농도, 예를 들어, 약물의 주입 속도와 제거 속도가 같은 농도이다. C_min은 투여 기간 동안 측정된 가장 낮은 농도(최소)로 정의된다. C_max는 투여 기간 동안 측정된 가장 높은 농도(최고)로 정의된다. AUC는 정의된 기간의 시간 동안 혈장 농도-시간 곡선 아래 영역으로 정의된다.

본 발명의 배합물은 이 배합물에 구성된 특정 투여 범위의 각 성분이 인간에 투여될 수 있다. 상기 배합물에 구성된 성분은 함께 또는 분리하여 투여될 수 있다. 화학식 (I)의 HCV NS3/4a 프로테아제 억제제 또는 이의 임의의 서브그룹 및 리토나비르 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 에스테르는 일일 당 0.02 내지 5.0 그램 정도의 투여 레벨을 가질 수 있다.

화학식 (I)의 HCV NS3/4a 프로테아제 억제제 및 리토나비르가 배합되어 투여될 때, 화학식 (I)의 HCV NS3/4a 프로테아제 억제제 대 리토나비르의 중량비는 적절하게 약 40:1 내지 약 1:15, 또는 약 30:1 내지 약 1:15, 또는 약 15:1 내지 약 1:15, 전형적으로 약 10:1 내지 약 1:10, 및 더욱 전형적으로 약 8:1 내지 약 1:8 범위이다. 약 6:1 내지 약 1:6, 또는 약 4:1 내지 약 1:4, 또는 약 3:1 내지 약 1:3, 또는 약 2:1 내지 약 1:2, 또는 약 1.5:1 내지 약 1:1.5의 화학식 (I)의 HCV NS3/4a 프로테아제 억제제 대 리토나비르의 중량비가 또한 유용하다. 일면에서, 화학식 (I)의 HCV NS3/4a 프로테아제 억제제의 중량은 리토나비르의 중량과 동일하거나 이보다 더 크며, 여기에서, 화학식 (I)의 HCV NS3/4a 프로테아제 억제제 대 리토나비르의 중량비는 적절하게 약 1:1 내지 약 15:1, 전형적으로 약 1:1 내지 약 10: 1, 및 더욱 전형적으로 약 1:1 내지 약 8:1의 범위이다. 약 1:1 내지 약 6:1, 또는 약 1:1 내지 약 5:1, 또는 약 1:1 내지 약 4:1, 또는 약 3:2 내지 약 3:1, 또는 약1:1 내지 약 2:1 또는 약 1:1 내지 약 1.5:1 범위의 화학식 (I)의 HCV NS3/4a 프로테아제 억제제 대 리토나비르의 중량비가 또한 유용하다.

본원에 이용된 용어 "치료적 유효량"은 본 발명의 관점 내에서, 연구자, 수의사, 의사 또는 다른 임상의에 의해 조사되는 조직, 계, 동물 또는 인간에서 생물학적 또는 의학적 반응을 도출해내는 활성 화합물 또는 성분 또는 약제학적 제제의 양을 의미하며, 이는 치료되는 질환 징후의 경감을 포함한다.

본 발명이 둘 이상의 제제를 포함하는 배합물을 의미하기 때문에, "치료적 유효량"은 결합된 효과가 원하는 생물학적 또는 의학적 반응을 도출해낼 수 있도록 함께 취한 약제의 양이다. 예를 들어, (a) 화학식 (I)의 화합물 및 (b) 리토나비르를 포함하는 조성물의 치료적 유효량은 함께 취하여 치료적으로 유효한 결합된 효과를 지닐 때 화학식 (I)의 화합물 및 리토나비르의 양일 것이다.

일반적으로, 하루에 항바이러스에 효율적인 양은 체중 kg당 0.01 mg 내지 500 mg, 더욱 바람직하게 체중 kg 당 0.1 mg 내지 50 mg라고 고려된다. 필요량을 하루 중 적절한 간격에 둘, 셋, 넷 이상의 (단위-)투여로 투여하는 것이 적절할 수 있다. 상기 (단위-)투여는 예를 들어, 단위 제형 당 1 내지 1000 mg 및 특히 5 내지 200 mg의 활성 성분을 함유하는 단일 제형으로 제제화될 수 있다.

투여의 정확한 용량과 빈도는 이용되는 화학식 (I)의 특정 화합물, 치료될 특정 증상, 치료될 증상의 중증도, 나이, 체중, 성별, 장애의 범위 및 특정 환자의 일반적 신체 상태, 뿐 아니라 개체가 취하고 있는 다른 의약에 의존하며, 본 분야의 숙련자에게 공지된 것에 따른다. 더욱이, 상기 하루 유효량은 치료되는 대상의 반응 및/또는 본 발명의 화합물을 처방하는 의사의 판단에 따라 더 낮아지거나 더 증가될 수 있다. 이에 따라, 상기 언급된 하루 유효량은 가이드라인일 뿐이다.

일 구체예에 따라, 화학식 (I)의 HCV NS3/4a 프로테아제 억제제 및 리토나비르는 일일 한번 또는 두번, 바람직하게는 경구로 공동-투여될 수 있으며, 여기에서 투여량 당 화학식 (I)의 화합물의 양은 약 1 내지 2500 mg이며, 투여량 당 리토나비르의 양은 약 1 내지 2500 mg이다. 또다른 구체예에서, 하루 한번 또는 두번 공동-투여되는 투여량은 약 50 내지 약 1500 mg의 화학식 (I)의 화합물과 약 50 내지 약 1500 mg의 리토나비르이다. 또다른 구체예에서, 하루 한번 또는 두번 공동-투여되는 투여량은 약 100 내지 약 1000 mg의 화학식 (I)의 화합물과 약 100 내지 약 800 mg의 리토나비르이다. 다른 구체예에서, 하루 한번 또는 두번 공동-투여되는 투여량은 약 150 내지 약 800 mg의 화학식 (I)의 화합물과 약 100 내지 약 600 mg의 리토나비르이다. 또다른 구체예에서, 하루 한번 또는 두번 공동-투여되는 투여량은 약 200 내지 약 600 mg의 화학식 (I)의 화합물과 약 100 내지 약 400 mg의 리토나비르이다. 또다른 구체예에서, 하루 한번 또는 두번 공동-투여되는 투여량은 약 200 내지 약 600 mg의 화학식 (I)의 화합물과 약 20 내지 약 300 mg의 리토나비르이다. 또다른 구체예에서, 하루 한번 또는 두번 공동-투여되는 투여량은 약 100 내지 약 400 mg의 화학식 (I)의 화합물과 약 40 내지 약 100 mg의 리토나비르이다.

하루 한번 또는 두번의 투여량을 위한 화학식 (I) 의 화합물(mg)/리토나비르 (mg)의 바람직한 배합물은 50/100, 100/100, 150/100, 200/100, 250/100, 300/100, 350/100, 400/100, 450/100, 50/133, 100/133, 150/133, 200/133, 250/133, 300/133, 50/150, 100/150, 150/150, 200/150, 250/150, 50/200, 100/200, 150/200, 200/200, 250/200, 300/200, 50/300, 80/300, 150/300, 200/300, 250/300, 300/300, 200/600, 400/600, 600/600, 800/600, 1000/600, 200/666, 400/666, 600/666, 800/666, 1000/666, 1200/666, 200/800, 400/800, 600/800, 800/800, 1000/800, 1200/800, 200/1200, 400/1200, 600/1200, 800/1200, 1000/1200, 및 1200/1200를 포함한다. 하루 한번 또는 두번의 투여량을 위한 화학식 (I)의 화합물(mg)/리토나비르 (mg)의 바람직한 배합물은 1200/400, 800/400, 600/400, 400/200, 600/200, 600/100, 500/100, 400/50, 300/50, 및 200/50을 포함한다.

본 발명의 일구체예에서, HCV 감염을 치료하거나 HCV의 NS3 프로테아제를 억제하는 데 효율적인 조성물; 및 조성물이 C형 간염 바이러스에 의한 감염을 치료하는 데 이용될 수 있음을 설명하는 표지를 포함하는 포장재를 포함하는 제품이 제공되며, 여기에서 상기 조성물은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 임의의 서브그룹 또는 본원에 기술된 바와 같은 배합물을 포함한다.

본 발명의 또다른 구체예는 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 임의의 서브그룹 또는 화학식 (I)의 HCV NS3/4a 프로테아제 억제제 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 리토나비르 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 결합한 본 발명에 따른 배합물을 HCV NS3/4a 프로테아제, HCV 성장 또는 둘다를 억제하는 제약의 잠재력을 결정하는 테스트 또는 어세이에서 표준 또는 시약으로 이용하기에 유효한 양으로 포함하는 키트 또는 용기에 관한 것이다. 본 발명의 이러한 면은 약제학적 연구 프로그램에서 그의 용도를 찾을 수 있다.

본 발명의 화합물 및 배합물은 고-효율 표적-분석 물질 어세이, 이를 테면, HCV 치료에서 상기 배합물의 효능 측정을 위한 것에 이용될 수 있다.

실시예

하기 실시예는 본 발명을 설명하려는 것이며, 이에 한정되지 않는다.

실시예 1: 하기 화합물 (9)에 나타낸 바와 같은 특정 입체 화학을 갖는 N-[ 18-[2-(4-이소프로필티아졸-2-일)-7-메톡시퀴놀린-4-일-옥시]-2,15-디옥소-3,14,16-트리아자트리사이클로[14.3.0.0^4,6]노나데크-7-엔-4-카보닐]-(사이클로프로필) 설폰아미드의 제조

단계 A

포스포러스 옥시클로라이드 (20 mL) 중 2-(4-이소프로필티아졸-2-일)-7-메톡시퀴놀린-4-올 (1, 3.6 g) 용액을 100℃에서 40분 동안 가열하였다(반응은 LC-MS로 모니터함). 그 다음, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 과량의 포스포러스 옥시클로라이드를 증발시켰다. 잔류성 오일을 NaHCO₃ 포화 용액으로 분배하고, 디에틸에테르 (3x70 mL)로 추출하였다. 결합된 유기 추출물을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 회전 증발에 의하여 농축시키고, 실리카(헥산)의 짧은 패드를 통과시켜 백색 분말로서 3.6 g (62%)의 목적 산물 2를 얻었다.

단계 B

DMSO (80 mL) 중 상기 화학식에 나타낸 바와 같은 특정 입체 화학을 지닌 Boc-4-하이드록시프롤린 (2.6 g, 11.2 mmol) 교반 용액에 포타슘 tert-부톡사이드 (3.8 g, 3 당량)을 첨가하였다. 대략 1시간 동안 교반한 다음, 4-클로로-2-(4-이소프로필티아졸-2-일)-7-메톡시퀴놀린 (2, 3.6 g, 11.2 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 물(350 mL)로 희석시키고, 1N HCl로 중화하였다. 만들어진 현탁액을 에틸아세테이트 (3 x 100 mL)로 추출하고, 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시켰다. 건조 후 회전 증발에 의하여 밤새 고진공하에 여과 및 농축시켜, 3.6 g (62 %)의 목적 산물 3을 얻었다: HPLC에 의한 순도 >95%, m/z = 514 (M+H)⁺.

단계 C

산 3 (3.6 g, 7 mmol)을 상기 화학식에 나타낸 바와 같은 특정 입체화학을 갖는 1-아미노-2-비닐-사이클로프로판-카복실산 에틸 에스테르 하이드로클로라이드(1.47g, 7.6 mmol)와 혼합한 다음, DMF 중에 용해하였다. 반응 혼합물을 아르곤으로 플러쉬(flush)시키고, 얼음 배쓰 중에서 냉각시키고, DIPEA (1.5 mL)를 조금씩 첨가하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 0℃에서 10-15분 동안 교반하고, 아르곤 하에 0℃에서 HATU (2.93g, 7.7 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 0℃에서 40분 후(반응을 LC-MS로 모니터함), 반응 혼합물을 회전 증발에 의하여 농축시킨 다음(완전 건조 아님), NaHCO₃ 포화 용액과 혼합하고, EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 회전 증발에 의하여 농축시켰다. 실리카 (DCM) 다음 YMC 실리카 (200 g, 헥산/EA 구배 3:2 내지 2:3) 상에서 컬럼 크로마토그래피에 의하여 정제하여, 백색 분말로서 3.81 g (84%)의 표적 산물 4를 얻었다.

단계 D

CH₂Cl₂ (30 mL) 및 트리플루오로아세트산 (30 mL) 중 4 (3.81g, 5.8 mmol)의 용액을 실온에서 약 1.5시간 동안 교반하였다. 그 다음, 용매를 증발시키고 잔류물을 NaHCO₃ (100 mL) 및 디에틸에테르 (3x100 mL)로 분배하였다. 디에틸에테르층을 결합시키고, 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조하고 증발시켜 3.13 g (98.3%)의 표적 산물 5를 얻었다: m/z = 551 (M+H)⁺.

단계 E

NaHCO₃ (1.0 g)를 테트라하이드로푸란 (50 mL) 중 5 (1.4g, 2.5 mmol)의 용 액에 첨가하였다. 그 다음, 포스겐 (5 mL, 톨루엔 중 1.9 M)을 아르곤 하에 0℃에서 첨가하였다. 만들어진 현탁액을 실온에서 40분 동안 교반하였다 (LC-MS로 모니터). 그 다음, 반응 혼합물을 여과하고, THF (2 x 30 mL)로 세척하였다. 여액을 회전 증발로 농축하고, CH₂Cl₂ (50 mL) 중에 재용해하였다. NaHCO₃ (1.0 g) 및 N-메틸헵트-6-에닐아민 (1.5 g, 13 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반한 다음, 여과하였다. 실리카겔(에테르) 상 크로마토그래피로 정제하여 1.42 g (84%)의 표적 산물 6을 얻었다: m/z = 690 (M+H)⁺.

단계 F

무수 디클로로에탄 (900 mL, 0.0023M 용액) 중 6 (1.42 g, 2 mmol)의 용액을 대략 15분 동안 아르곤으로 버블링하였다. 그 다음, 호베이다-구럽(Hoveyda-Grubbs) 1차 촉매 (120 mg, 12 mol%)을 첨가하고, 반응 혼합물을 16시간 동안 가열하면서 느린 유속의 아르곤과 함께 환류교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, MP-TMT 팔라듐 스캐빈져(scavenger) (약 200 mg)를 혼합물에 첨 가하였다. 2.5시간 후, 스캐빈져를 여과하여 제거하고, 50 mL CH₂Cl₂ 로 세척하였다. 수득된 용액을 회전 증발로 농축시켰다. 잔사를 YMC 실리카 (100 g, EtOAc/헥산 1:1) 상 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 806 mg (57%)의 표적 산물 7을 얻었다: m/z = 662 (M+H)⁺.

단계 G

수 (6 mL) 중 리튬 하이드록시드 (300 mg)를 테트라하이드로푸란 (12 mL) 및 메탄올 (6 mL) 중 마크로사이클 에스테르 7 (806 mg, 2.1 mmol) 용액에 첨가하였다. 50 ℃에서 1시간 후, 증발시켜 부피를 반으로 줄이고, 물 (30 mL)을 첨가하였다. 산성화 (pH = 2) 후, 클로로포름으로 추출하여, 백색 분말로서 760 mg의 표적 산물 8을 얻었다: m/z = 662 (M+H)⁺.

단계 H

무수 THF (10 mL) 중 산 8 (760 mg, 1.2 mmol) 및 CDI (389 mg, 2.4 mmol, 2 당량)의 용액을 N₂ 하에 2시간 동안 환류시키며 가열하였다. 임의로 아자락톤 유도체가 필요에 따라 분리될 수 있다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, WO03/053349에 개시된 바와 같이 제조된 설폰 아미드 (436 mg, 3.6 mmol, 3 당량) 및 DBU (0.5 mL, 3 mmol)의 무수 THF(10 mL) 용액을 첨가하였다. 만들어진 용액을 55℃에서 18 시간 동안 가열하였다(LC-MS로 모니터함). 그 다음, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 용매를 증발시키고, 잔사를 EtOAc과 물(HCl을 이용하여 pH를 3.0으로 적정)로 분배하였다. 조 물질을 컬럼 크로마토그래피(EtOAc/석유 에테르 1:1)로 정제하여, 최대 20%의 시작 설폰아미드(NMR 결정)로 오염된 380 mg의 표적 산물을 얻었다. 이러한 물질은 미리 패킹된 컬럼 (에테르 대 에테르/THF 구배, 3:1) 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 컬럼 크로마토그래피 (YMC 실리카 50 g, 에테르, 다음 에테르-메탄올 9:1)에 의한 3차 정제로 연한 노란색 분말로서 176 mg의 표제 화합물을 얻었으며, 이는 분취용 HPLC에 의하여 추가로 정제하여 노 란빛을 띄는 분말로서 55 mg의 표제 산물을 얻었다.

실시예 2: 하기 화합물 (16)에 나타낸 바와 같은 특정 입체화학을 갖는 N-[17-(2-(4-이소프로필티아졸-2-일)-7-메톡시퀴놀린-4-일-옥시)-13-메틸-2,14-디옥소-3,13,15-트리아자트리사이클로[13.3.0.0^4,6]옥타데크-7-엔-4-카보닐](사이클로프로필)설폰아미드 합성.

과정 A:

단계 A

DMSO (80 mL) 중 상기 화학식에 나타낸 바와 같은 특이 입체화학을 갖는 BOC-4-하이드록시프롤린(2.59 g, 11.2 mmol) 교반 용액에 포타슘-tert-부톡사이드 (3.77 g, 33.6 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 퀴놀린 클로라이드 2 (3.57 g, 11.2 mmol)를 첨가하고, 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 H₂O (350 mL)로 희석하고, EtOAc (100 mL)로 세척하고, 1 M HCl를 이용해 약 pH 3으로 산성화하였다. 만들어진 현탁액을 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하고, 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시켰다. 증발시킨 후, 화합물 10 (3.60 g, 62 %)을 얻었다.

단계 B

화합물 10 (3.60 g, 7.02 mmol)을 DMF (20 mL) 중에 용해시켰다. 그 다음, 1-아미노-2-비닐-사이클로프로판카복실산 에틸 에스테르 하이드로클로라이드 (1.47 g, 7.68 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 아르곤으로 플러쉬시키고 0℃로 냉각하였다. DIPEA (3.00 mL, 17.2 mmol) 및 HATU (2.93g, 7.66 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 40분 동안 교반하였다. 용액을 증발시키고, NaHCO₃ 포화 용액과 혼합하고 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 결합된 유기층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조하고 증발시켰다. 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc 3:2 → 헥산/EtOAc 2:3)로 백색 분말로 화합물 11 (3.81g, 84 %)을 얻었다.

단계 C

CH₂Cl₂ (30 mL) 및 TFA (30 mL) 중 11 (3.81g, 5.86 mmol)의 용액을 실온에서 1.5 시간 동안 교반하였다. 그 다음, 휘발성 물질을 증발시켰다. NaHCO₃ 포화 용액(100 mL)을 수득된 오일에 첨가하고, 슬러리를 디에틸에테르 (3 x 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 결합시키고, 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시켰으며, 증발시켜, 화합물 12 (3.13 g, 98 %)를 얻었다.

단계 D

THF (40 mL) 중 화합물 12 (1.41 g, 2.56 mmol) 용액에 NaHCO₃ (4 큰술) 및 톨루엔 중 포스겐(1.93 M, 4.0 mL, 7.7 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 격렬하게 교반한 후, 여과 및 증발시켰다. 잔사를 CH₂Cl₂ (40 mL) 중에 용해시키고, NaHCO₃ (3 큰술) 및 헥스-5-에닐-메틸아민 하이드로클로라이드 (770 mg, 5.15 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 밤새 교반한 다음, 반응 혼합물을 여과하고, 약 3 g의 실리카를 첨가하고, 슬러리를 건조되도록 증발시켰다. 플래쉬 컬럼 크로마토그래피(디에틸에테르 → 디에틸에테르 중 3 % 메탄올)를 수행하여, 화합물 13 (1.57 g, 89 %)을 연한 노란색 분말로서 얻었다.

단계 E

화합물 13 (1.53 g, 2.18 mmol)을 1,2-디클로로에탄 (1.50 L) 중에 용해시키고, 용액을 N₂로 탈기시켰다. 호베이다 구럽 1차 촉매 (95 mg, 0.16 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 밤새 N₂하에 환류시켰다. 용액을 60℃로 냉각시킨 후, 1 큰술의 스캐빈져 MP-TMT를 첨가하였다. 반응 혼합물을 3시간 동안 교반하고(실온으로 냉각시키 면서), 여과 및 증발시켰다. 잔사를 CH₂Cl₂ 중에 용해시키고, 약 3 g의 실리카를 첨가하고, 슬러리가 건조되도록 증발시켰다. 플래쉬 컬럼 크로마토그래피(디에틸에테르 → 디에틸에테르 중 3 % 메탄올) 후, 화합물 14 (1.09 g, 74 %)를 백색 프리즘으로서 얻었다.

단계 F

화합물 14 (1.00 g, 1.51 mmol)를 THF/메탄올/H₂O 2:1:1 (200 mL) 중에 용해시켰다. LiOH 수용액 (1 M, 15.1 mL, 15.1 mmol)을 실온에서 10분에 걸쳐 점적 첨가하고, 만들어진 반응 혼합물을 실온에서 20 시간 동안 교반하였다. 용액을 1 M HCl을 이용하여 약 pH 1로 산성화하고, THF 및 메탄올이 거의 모두 제거될 때까지 농축시켰다. 만들어진 슬러리를 CH₂Cl₂로 4회 추출하고, 유기 상을 풀링(pool)하고, 건조 (MgSO₄), 및 증발시켜 화합물 15 (960 mg, 100 %)를 연한 노란색 분말로 얻었다.

단계 G

THF (75 mL) 중 화합물 15 (960 mg, 1.51 mmol) 용액을 N₂ 하에 놓은 다음, 카보닐디이미다졸 (CDI) (510 mg, 3.14 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N₂ 하에서 1시간 동안 환류시킨 다음, 실온으로 냉각시켰다. 임의로 아자락톤 유도체를 필요에 따라 분리시킬 수 있다. 사이클로프로필-설폰아민 (550 mg, 4.54 mmol) 및 DBU (530 μL, 540 mg, 3.54 mmol)를 첨가하고, 용액을 N₂하에 55℃에서 밤새 교반하였다. 용매를 증발시키고, 불순한 잔류물을 CH₂Cl₂ 중에 용해시켰다. 약 3g의 실리카를 첨가하고, 슬러리가 건조되도록 증발시켰다. 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (디에틸에테르 → 디에틸에테르 중 5 % 메탄올)을 수행하여 백색 분말로서 화합물 16 (960 mg, 86 %)을 얻었다.

과정 B: 산 15의 대안적 합성

단계 A

상기 화학식에서 나타낸 바와 같은 특정 입체화학을 갖는 Boc-보호 4-하이드록시프롤린 (10.2 g, 44.1 mmol), HATU (18.7 g, 49.2 mmol) 및 사이클로프로필 에스테르 (9.31 g, 48.6 mmol)를 DMF (120 mL) 중에 용해시키고, 0℃로 냉각시켰다. 디이소프로필에틸아민 (DIPEA) (30.0 mL, 172 mmol)을 첨가하였다. 용액을 실온으로 가온시키고, 밤새 교반하였다. CH₂Cl₂ (~80 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 NaHCO₃ 포화 수용액, 시트르산, H₂O 및 염수로 세척한 다음 건조 (MgSO₄)하였다. 약 30 g의 실리카를 첨가하고, 슬러리가 건조되도록 증발시켰다. 플래쉬 컬럼 크로마토그래피(디에틸에테르 → 디에틸에테르 중 7% 메탄올)로 정제하여 백색 분말로서 화합물 17 (13.0 g, 80 %)을 얻었다.

단계 B

화합물 17 (8.11 g, 22.0 mmol), p-니트로벤조산 (5.51 g, 33.0 mmol) 및 Ph₃P (8.66 g, 33.0 mmol)를 THF (100 mL) 중에 용해시켰다. 용액을 0℃로 냉각시키고, DIAD (6.50 mL, 33.0 mmol)를 점적 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고, 밤새 교반하였다. NaHCO₃ 포화 수용액 (60 mL)을 첨가하고, 혼합물을 CH₂Cl₂ 로 수회 추출하였다. 유기상을 풀링하고, 건조(MgSO₄)시킨 후, 약 40g의 실리카를 첨가하고, 슬러리를 건조될때 까지 증발시켰다. 플래쉬 컬럼 크로마토그래피(펜탄/디에틸에테르 2:1 → 펜탄/디에틸에테르 1:2 → 디에틸에테르 중 2 % 메탄올)를 이용하여 정제하여, Boc-보호 중간체 (9.50 g, 83 %)를 백색 분말로서 얻었다. 이 중간체 (9.50 g, 18.4 mmol)를 CH₂Cl₂ (66 mL) 중에 용해하고, 용액을 0℃로 냉각시켰다. TFA (33 mL)를 점적 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 증발시키고, CH₂Cl₂ (100 mL)를 첨가하고, pH 약 8이 될 때까지 Na₂CO₃ (0.50 M) 수용액을 첨가하였다. 분리 후, 유기 상을 건조(MgSO₄)시키고 증발시켜, 연한 노란색 분말로서 화합물 18 (7.68 g, 83 %)을 얻었다.

단계 C

THF (240 mL) 중 화합물 18 (6.90 g, 16.5 mmol) 용액에 NaHCO₃ (15 큰술) 및 톨루엔 중 포스겐(1.93 M, 18.0 mL, 34.7 mmol)을 첨가하였다. 화합물을 실온에서 1시간 동안 격렬하게 교반한 다음, 여과 및 증발시켰다. 잔사를 CH₂Cl₂ (250 mL) 중에 용해시키고, NaHCO₃ (15 큰술) 및 헥스-5-에닐-메틸아민 하이드로클로라이드 (5.00 g, 33.4 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 밤새 교반한 다음, 반응 혼합물을 여과하고, 약 17 g의 실리카를 첨가하고, 슬러리가 건조될 때까지 증발시켰다. 플래쉬 컬럼 크로마토 그래피 (디에틸에테르 → 디에틸에테르 중 3 % 메탄올)를 수행하여 백색 분말로 화합물 19 (8.00 g, 87 %)를 얻었다.

단계 D

화합물 19 (1.61 g, 2.90 mmol)를 1,2-디클로로에탄 (1.50 L) 중 용해시키고, 용액을 N₂로 탈기시켰다. 호베이다 구럽 1차 촉매(125 mg, 0.21 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 N₂ 하에 밤새 환류시켰다. 용액을 60℃로 냉각시킨 다음, 1 큰술의 스캐빈져 MP-TMT를 첨가하였다. 반응 혼합물을 3 시간 동안 교반하고(실온으로 냉각 시키면서), 여과 및 증발시켰다. 잔사를 CH₂Cl₂ 중에 용해시키고, 약 3g의 실리카를 첨가한 다음, 슬러리가 건조될 때까지 증발시켰다. 플래쉬 컬럼 크로마토 그래피 (디에틸에테르 → 디에틸에테르 중 3 % 메탄올)를 수행하여, 회색을 띄는 분말로서 화합물 20 (1.13 g, 74 %)을 얻었다.

단계 E

화합물 20 (200 mg, 0.38 mmol)을 THF/메탄올/물 (2:1:1, 20 mL)의 혼합물 중에 용해시키고, 얼음-배쓰 중에서 냉각시켰다. LiOH 수용액 (1 M, 1.9 ml, 1.9 mmol)을 천천히 가하였다. 혼합물을 0℃에서 4 시간 동안 교반한 다음, 1 M HCl로 중화시키고, CH₂Cl₂로 추출하였다. 유기층을 NaHCO₃ 포화 수용액, H₂O 및 염수로 세척하였다. 건조(MgSO₄) 및 증발시킨 다음, 불순한 잔류물을 플래쉬 컬럼 크로마토그래피(CH₂Cl₂ 중 2 % 메탄올 → CH₂Cl₂ 중 4% 메탄올)로 정제하여, 회색을 띄는 분말로서 화합물 21 (115 mg, 80 %)을 얻었다.

단계 F

화합물 21 (100 mg, 0.26 mmol), Ph₃P (100 mg, 0.38 mmol) 및 2-(4-이소프로필-티아졸-2-일)-7-메톡시퀴놀린-4-올 (1) (117 mg, 0.39 mmol)를 THF (10-15 mL) 중에 혼합하고, 슬러리를 얼음-배쓰에서 0℃로 냉각하였다. DIAD (77 μL, 0.39 mmol)를 점적 첨가하였다. 그 다음, 얼음-배쓰를 제거하고, 혼합물을 실온에서 12 시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시키고, 조생성물을 THF/메탄올/H₂O 2:1:1 (12 mL) 중에 용해하였다. LiOH 수용액 (1 M, 3.80 mL, 3.80 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 물을 첨가하여 부피를 두배로 증가시키고, 슬러리를 디에틸에테르로 추출하였다. 수상을 1 M HCl을 이용하여 약 pH 1으로 산성화시키고, CH₂Cl₂로 추출하였다. CH₂Cl₂상을 건조 (MgSO₄) 및 증발시켰다. 목적하는 산물을 플래쉬 컬럼 크로마토그래피(과량의 퀴놀린 1이 용리될 때까지 디에틸에테르 중 2% 메탄올, 그 다음, CH₂Cl₂ 중 10 % 메탄올)를 이용하여 수득하여 화합물 15 (71 mg, 42%)를 얻었다.

실시예 3: 하기 화합물 (26)에 나타낸 바와 같은 특정 입체화학을 갖는 사이클로프로판설폰산 {17-[2-(4-이소프로필티아졸-2-일)-7-메톡시퀴놀린-4-일옥시]-2,14-디옥소-3,13,15-트리아자-트리사이클로[13.3.0.0^4,6]-옥타데크-7-엔-4-카보닐}-아미드 제조.

단계 A: 하기 화합물 (22)에 나타낸 바와 같은 특정 입체화학을 갖는 1-({1-[헥스-5-에닐-(4-메톡시벤질)-카바모일]-4-[2-(4-이소프로필티아졸-2-일)-7-메톡시퀴놀린-4-일옥시]-피롤리딘-2-카보닐}-아미노)-2-비닐-사이클로프로판 카복실산 에틸 에스테르 제조.

실시예 1, 단계 D에서 제조된 화합물 5(1.97g, 3.58 mmol)를 약 200 mg NaHCO₃ (2 작은술) 및 THF (20 ml)와 혼합하였다. 톨루엔 중 3 ml 1.9M 포스겐을 반응 혼합물에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 약 1.5 시간 동안 교반하였다. 반응을 LC-MS로 모니터하였다. 시작 물질이 사라지고 클로로카보닐 중간체의 피크 (LC-MS 데이터에 따라 >90%)가 형성되었다. 반응 혼합물을 여과하고, 회전 증발로 농축시켰다. 그 다음 그것을 CH₂Cl₂ 중 용해시키고, 헥스-5-에닐-(p-메톡시-벤조일)아민 (0.9 g)을 100-150 mg (1 스푼) NaHCO₃와 함께 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 다음, 여과하고, 실리카 상의 컬럼 크로마토그래피(EtOAc/석유 에테르)로 정제하여, 순수 표제 화합물 22(1.42g, 84 %)를 얻었다. MS (M⁺) 797.

단계 B: 하기 화합물 (23)에 나타낸 바와 같은 특정 입체화학을 갖는 17-[2-(4-이소프로필티아졸-2-일)-7-메톡시퀴놀린-4-일옥시]-13-(4-메톡시벤질)-2,14-디옥소-3,13,15-트리아자-트리사이클로[13.3.0.0^4,6]옥타데크-7-엔-4-카복실산 에틸 에스테르 제조

단계 A에서 제조된 바와 같은 화합물 22 (1.68 g, 2.1 mmol)를 무수 디클로로-에탄 (CaH으로 증류, 약 800 ml) 중에 용해시키고, 약 10 분 동안 아르곤으로 버블링하였다. 그 다음, 호베이다 1차 촉매 (88 mg, 7 m올%)를 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 느린 유속의 아르곤과 함께 교반하면서 16시간 동안 100℃로 가열하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 MP-TMT 팔라듐 스캐빈져 (약 100 mg)을 첨가하고, 혼합물을 2.5 시간 동안 교반하였다. 여과하여 스캐빈져를 제거하고, 100 ml의 CH₂Cl₂ 로 세척하였다. 수득된 용액을 회전 증발로 농축시키고, 고 진공 하에 건조시켜, 표제 화합물을 얻었다(m/z = 599, (M+H)⁺), HPLC 순도 79% (다이오드 어레이), 95% (ELSD). 수율 63%.

단계 C: 하기 화합물 (24)에 나타낸 바와 같은 특정 입체화학을 갖는 17-[2-(4-이소프로필티아졸-2-일)-7-메톡시퀴놀린-4-일옥시]-13-(4-메톡시벤질)-2,14-디옥소-3,13,15-트리아자-트리사이클로[13.3.0.0^4,6]옥타데크-7-엔-4-카복실산의 제조

단계 B에서 제조된 바와 같은 화합물 23 (910 mg, 1.2 mmol)을 30 mL THF, 15 mL 메탄올 및 15 mL H₂O 중 용해하였다. 1M LiOH (10 mL) 수용액을 용액에 첨가하였다. 반응을 50℃에서 2 시간 동안 교반하여, 모든 출발문질이 반응하도록 하였다(LC-MS로 체크). 반응 혼합물을 시트르산으로 산성화시키고, 클로로포름(3x75 mL)으로 추출하고 염수로 세척하였다. 유기상을 MgSO₄로 건조시켰다. 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피(에틸 아세테이트/헥산 구배로부터 시작된 구배 2:1)로 정제하여 연한 노란색 고체로서 표제 화합물 (24)를 얻었다 (864 mg). HPLC 순도 96%.

단계 D: 하기 화합물(25)에 나타낸 바와 같은 특정 입체화학을 갖는 사이클로프로판설폰산 [17-[2-(4-이소프로필티아졸-2-일)-7-메톡시퀴놀린-4-일옥시]-13 -(4-메톡시벤질)-2,14-디옥소-3,13,15-트리아자-트리사이클로-[13.3.0.0^4,6]옥타데크-7-엔-4-카보닐]-아미드의 제조

화합물 24 (50 mg, 0.068 mmol, 1 당량)를 CDI (44 mg, 3 당량)과 혼합하고, 2 ml 마이크로파 바이얼에서 THF (1,0 mL) 중에 용해하였다. 캡을 붙이고 바이얼을 아르곤으로 플러쉬하였다. 마이크로파로 100℃에서 12 분 동안 활성화를 수행하였다(보통; 미리-교반 없음). 반응을 LC-MS(활성화된 중간체로 100% 전환 - 기질보다 적은 질량 : M⁺-16)로 체크하였다. 임의로, 아자락톤 유도체는 필요에 따라 분리될 수 있다. 사이클로프로필 설폰아미드 (49 mg, 4 당량)를 THF와 혼합하고 DBU (60μl, 4 당량)을 분리된 바이얼로 첨가하였다. 완전한 활성화 후, 혼합물을 주사기로 반응 바이얼에 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 1 시간 동안 마이크로파로 가열하였다. 반응 혼합물을 회전 증발로 농축시키고, EtOAc 및 물과 혼합하고, 3M HCl을 한 방울 첨가하였다. 수 상을 EtOAc (3x15ml)로 세척하였다. 결합된 유기 추출물을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시켰다. 건조제를 여과시키고, 회전 증발로 농축시킨 다음, 조 생성물을 YMC 실리카 상 컬럼 크로마토그래피(~70 mg, 에틸 아세테이트, R_f=0.7, 시작 설폰아미드 0.6)로 정제하였다. 목적하는 산물을 함유하는 분획을 결합시키고, 회전 증발로 농축시켜, 86% 순도의 표제 화합물 25 (83 mg, 수율 98%)을 얻었다. 화합물은 다음 단계에서 추가의 정제 없이 이용하였다.

단계 E: 하기 화합물 (26)에 나타낸 바와 같은 특정 입체화학을 갖는 사이클로프로판설폰산 {17-[2-(4-이소프로필티아졸-2-일)-7-메톡시퀴놀린-4-일옥시]- 2,14-디옥소-3,13,15-트리아자-트리사이클로[13.3.0.0^4,6]옥타데크-7-엔-4-카보닐} -아미드 제조.

화합물 25 (65 mg, 0.077 mmol)를 4 mL DCM 중에 용해시켰다. 2 mL TFA를 첨가하고, 용액을 20분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 NaHCO₃ 및 CHCl₃와 함께 분리용 펀넬(funnel)에 부었다. CHCl₃ (3x50 mL)로 추출하고, NaHCO₃ (2x50 mL) 및 염수로 세척하였다. 유기상을 MgSO₄로 건조시키고, 회전 증발로 농축시켰다. 조 생성물을 YMC 실리카 상 플래쉬 크로마토그래피(20 g, 디에틸 에테르)로 정제하여, 백색 고체로서 산물 26을 얻었다 (25 mg, 수율 45%).

실시예 4: 하기 화합물 (28)에 나타낸 바와 같은 특정 입체화학을 갖는 1-메틸-사이클로프로판설폰산 [17-[2-(4-이소프로필-티아졸-2-일)-7-메톡시퀴놀린-4-일옥시]-2,14-디옥소-3,13,15-트리아자-트리사이클로-[13.3.0.0^4,6]옥타데크-7-엔-4-카보닐]-아미드의 제조

단계 A: 하기 화합물 (27)에 나타낸 바와 같은 특정 입체화학을 갖는 1-메틸-사이클로프로판설폰산 [17-[2-(4-이소프로필-티아졸-2-일)-7-메톡시퀴놀린-4-일옥시]-13-(4-메톡시벤질)-2,14-디옥소-3,13,15-트리아자-트리사이클로[13.3.0.0^4,6]옥타데크-7-엔-4-카보닐]-아미드의 제조

사이클로프로필 설폰아미드 (WO2004/043339에 개시된 바와 같이 제조) 대신에, 1-메틸-사이클로프로필 설폰아미드를 이용하여 실시예 3의 단계 D에 기재된 과정을 수행하고, 실리카 상 컬럼 크로마토그래피(디에틸 에테르로 용리)로 정제한 후 백색 고체로서 표제 화합물 (27)(24.5 mg, 43%)을 얻었다.

단계 B: 하기 화합물 (28)에 나타낸 바와 같은 특정 입체화학을 갖는 1-메틸 -사이클로프로판설폰산 [17-[2-(4-이소프로필-티아졸-2-일)-7-메톡시퀴놀린-4-일옥시]-2,14-디옥소-3,13,15-트리아자-트리사이클로-[13.3.0.0^4,6]옥타데크-7-엔-4-카보닐]-아미드의 제조,

화합물 27 (20 mg, 0.023 mmol)을 3 ml 메틸엔 클로라이드 중에 용해시키고, 1 ml TFA를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 20 분 동안 교반하였다. HPLC는 출발 물질의 부재를 나타낸다. NaHCO₃ (5 ml) 포화 용액을 반응 혼합물에 첨가하고, 만들어진 혼합물을 CH₂Cl₂로 추출하였다. 유기 추출물을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 회전 증발로 농축하였다. 만들어진 오일을 YMC 실리카(20 g, 디에틸 에테르) 상 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 분말로서 표제 화합물 (28) (14.7 mg, 85%)을 얻었다. HPLC 순도 > 95%.

실시예 5: 하기 화합물 (33)에 나타낸 바와 같은 특정 입체화학을 갖는 1-메틸-사이클로프로판설폰산 [18-[2-(4-이소프로필-티아졸-2-일)-7-메톡시퀴놀린-4-일옥시]-2,15-디옥소-3,14,16-트리아자-트리사이클로-[14.3.0.0_4,6]노나데크-7-엔-4-카보닐]-아미드의 제조

단계 A: 하기 화합물 (29)에 나타낸 바와 같은 특정 입체화학을 갖는 1-[[1-[헵트-6-에닐-(4-메톡시벤질)-카바모일]-4-[2-(4-이소-프로필티아졸-2-일)-7-메톡시퀴놀린-4-일옥시]-피롤리딘-2-카보닐]-아미노]-2-비닐-사이클로프로판카복실산 에틸 에스테르의 제조

헥스-5-에닐-(p-메톡시벤질)-아민 대신 헵트-6-에닐-(p-메톡시벤질)-아민을 이용하여, 실시예 3의 단계 A에 기재된 과정을 따라 표제 화합물 29를 제조하였다.

단계 B: 하기 화합물 (30)에 나타낸 바와 같은 특정 입체화학을 갖는 18-[2-(4-이소프로필티아졸-2-일)-7-메톡시퀴놀린-4-일옥시]-14-(4-메톡시벤질)-2,15-디옥소-3,14,16-트리아자-트리사이클로[14.3.0.0^4,6]노나데크-7-엔-4-카복실산 에틸 에스테르의 제조.

단계 A로부터 수득된 화합물 (29)를 실시예3의 단계 B에 나타낸 과정에 따라 처리하여 표제 화합물 (30)을 얻었다.

단계 C: 하기 화합물 (31)에 나타낸 바와 같은 특정 입체화학을 갖는 18-[2-(4-이소프로필티아졸-2-일)-7-메톡시퀴놀린-4-일옥시]-14-(4-메톡시벤질)-2,15-디옥소-3,14,16-트리아자-트리사이클로[14.3.0.0^4,6]노나데크-7-엔-4-카복실산의 제조.

단계 B로부터 수득된 화합물 (30)을 실시예 3의 단계 C에 나타낸 과정을 따라 처리하여, 표제 화합물 (31)을 얻었다.

단계 D: 하기 화합물 (32)에 나타낸 바와 같은 특정 입체화학을 갖는 1-메틸 -사이클로프로판설폰산 [18-[2-(4-이소프로필-티아졸-2-일)-7-메톡시퀴놀린-4-일옥시]-14-(4-메톡시벤질)-2,15-디옥소-3,14,16-트리아자-트리사이클로[14.3.0.0^4,6]노나데크-7-엔-4-카보닐]-아미드의 제조

상기 단계 C에서 수득된 화합물 (31)을 DBU (4 당량, THF 중 1M 용액) 대신 염기로서 LiHMDS를 이용하여 실시예 3의 단계 D에 나타낸 과정에 따라 처리하였다. 반응은 실온에서 2시간 후에 완료되었다. 실리카 상 컬럼 크로마토그래피로 정제한 후, 표제 화합물 (32)을 백색 고체로서 얻었으며, 다음 단계에서 추가의 정제 없이 이용하였다.

단계 E: 하기 화합물 (33)에 나타낸 바와 같은 특정 입체화학을 갖는 1-메틸-사이클로프로판설폰산 [18-[2-(4-이소프로필-티아졸-2-일)-7-메톡시퀴놀린-4-일옥시]-2,15-디옥소-3,14,16-트리아자-트리사이클로-[14.3.0.0^4,6]노나데크-7-엔-4-카보닐]-아미드의 제조

상기 단계 D에서 수득된 화합물 (32)(100 mg)를 실시예 3의 단계 E에 나타낸 과정에 따라 처리하여, 표제 화합물 (33) (55 mg, 73%)을 얻었다.

실시예 6: 화학식 (I) 화합물의 활성

레플리콘 어세이

세포 어세이의 HCV RNA 복제 억제 활성에 대해 화학식 (I)의 화합물을 분석하였다. 화학식 (I)의 화합물이 세포 배양에서 작용하는 HCV 레플리콘에 대한 활성을 보유하고 있음이 어세이에서 나타났다. 세포 어세이는 다중-표적 스크리닝 전략에서, Lohmann et al.에 의해 문헌(1999) Science vol. 285 pp. 110-113에 제시되고, 변형법이 Krieger et al.에 의해 문헌 (2001) Journal of Virology 75: 4614-4624에 기재된 이시스트론 발현 작제물을 기준으로 하였다. 본질적으로, 이 방법은 다음과 같다.

어세이에서 안정하게 형질감염된 세포주 Huh-7 luc/neo(이하 Huh-Luc로 지칭함)를 이용하였다. 이 세포주는 리포터 부분(FfL-루시퍼라제) 및 선별가능한 마커 부분(neo^R, 네오마이신 포스포트랜스퍼라제)이 앞에 있는, 뇌심근염 바이러스(EMCV)로부터 내부 리보솜 결합 부위(IRES)에서 번역된 HCV 1b형의 야생형 NS3-NS5B 영역 을 포함하는 이시스트론 발현 작제물을 암호화하는 RNA를 지닌다. 이 작제물은 HCV 1b형으로부터 5' 및 3' NTRs(비번역 영역)과 접하여 있다. G418(neo^R)의 존재하에 레플리콘 세포의 연속 배양은 HCV RNA의 복제에 의존한다. 자발적으로 그리고 높은 수준으로 복제하고, 특히 루시퍼라제를 암호화하는 HCV RNA를 발현하는, 안정하게 형질감염된 레플리콘 세포를 항바이러스 화합물을 스크리닝하는데 사용하였다.

다양한 농도로 첨가된 시험 및 대조 화합물의 존재하에 레플리콘 세포를 384 웰 플레이트에서 평판 배양하였다. 3일간 배양한 후, 루시퍼라제 활성을 분석함으로써(표준 루시퍼라제 어세이 기질 및 시약과 Perkin Elmer ViewLux^Tm ultraHTS 마이크로플레이트 이미저를 이용함) HCV 복제를 측정하였다. 대조 배양에서 레플리콘 세포는 억제제의 부재하에 높은 루시퍼라제 발현율을 갖는다. 루시퍼라제 활성에 서 화합물의 억제 활성을 Huh-Luc 세포 상에서 모니터하였고, 각 시험 화합물에 대해 투여량-반응 곡선을 작제하였다. 그 후 EC50 값을 계산하였으며, 이 값은 검측된 루시퍼라제 활성 수준, 또는 더 구체적으로, 유전학적으로 연결된 HCV 레플리콘 RNA가 복제하는 능력을 50%까지 감소시키는데 필요한 화합물의 양을 나타낸다.

억제 어세이

본 시험관내 어세이의 목적은 본 발명의 화합물에 의한 HCV NS3/4A 프로테아제 복합체의 억제를 측정하는 것이다. 본 어세이로 HCV NS3/4A 단백질 가수 분해 활성을 억제하는 데 본 발명의 화합물이 얼마나 효율적인지 알 수 있다.

전장 C형 간염 NS3 프로테아제 효소의 억제는 Poliakov, 2002 Prot Expression & Purification 25 363 371에 개시된 바와 같이 측정하였다. 간단하게, 데프시펩티드 물질, Ac-DED(Edans)EEAbuψ[COO]ASK(Dabcyl)-NH₂ (AnaSpec, San Jose, USA)의 가수 분해를 펩티드 공동 인자 KKGSVVIVGRIVLSGK (Ake Engstrom, Department of Medical Biochemistry and Microbiology, Uppsala University, Sweden)의 존재 하에서 분광광도로 측정하였다. [Landro, 1997 #Biochem 36 9340-9348]. 이 효소(1 nM)를 50 mM HEPES, pH 7.5, 10 mM DTT, 40% 글리세롤, 0.1% n-옥틸-D-글루코시드 중에 25 μM NS4A 공동 인자 및 억제제와 함께 30℃에서 10분 동안 인큐베이션하였으며, 반응을 0.5 μM 물질의 첨가에 의해 개시하였다. 억제제를 DMSO 중에 용해시키고, 30초 동안 초음파 처리하고, 보텍싱(vortex)하였다. 측정 사이에 용액을 -20℃에 보관하였다.

어세이 샘플에서 DMSO의 최종 농도를 3.3%로 적정하였다. 공개된 방법에 따라 내부 필터 효과를 위해 가수분해율을 보정하였다. [Liu, 1999 Analytical Biochemistry 267 331-335]. Km (0.15 μM)의 고정 값과 경쟁 억제 모델을 이용한 비-선형 회귀 분석에 의하여 Ki 값을 측정하였다(GraFit, Erithacus Software, Staines, MX, UK). 두 반복값 중 최소치를 모든 측정에서 수행하였다.

다음 표 1에 상기 실시예 중 임의의 것에 따라 제조된 화합물을 열거하였다. 시험된 화합물의 활성도를 나타내었다.

실시예 7: 화학식 (I) 화합물의 투과성

본 실시예는 인간 위장관의 세포를 통한 화합물 (I)의 화합물의 전달을 측정하였다. 본 어세이는 공지된 40 내지 60의 계대수(passage number)를 갖는 Caco-2 세포를 이용하였다.

꼭대기 (A)에서 기저측 (B)으로 전달

모든 화합물을 2-4웰에서 테스트하였다. 기저측과 꼭대기 세포는 각각 1.5 mL 및 0.4 mL의 전달 완충액 (TB)를 함유하며, 시험 물질의 표준 농도는 10 μM이었다. 더욱이, 모든 시험 용액 및 완충액은 1% DMSO를 함유한다. 실험 전에, 전달 플레이트를 10% 혈청을 함유한 배양 배지로 30분 동안 미리 코팅하여, 플라스틱 물질로의 비특이적 결합을 막았다. 21 내지 28일 후, 필터 지지 상 배양에서 세포는 투과성 실험의 준비가 되었다.

전달 플레이트 제1 번은 각각 3줄의 4웰로 구성된다. 제1 줄은 "세척"으로 표시하고, 제2 줄은 "30분"으로 제3 줄은 "60분"으로 표시하였다. 전달 플레이트 제2 번은 3줄의 4웰로 구성되며, 제4 줄은 "90분", 제5 줄은 "120분"으로 표시하였고, 남아있는 줄은 할당되지 않았다.

꼭대기 세포로부터 배양 배지를 제거하고, 인서트(insert) 없는 2 플레이트 중 전달 플레이트 (플레이트 제 1번)에서 세척 줄(제 1번)으로 인서트를 전달하였으며, 이는 제1 내지 제5 줄에서 1.5 mL 전달 완충액 (HBSS, 25 mM HEPES, pH 7.4)으로 제조하였다. A→B 스크리닝에서 기저측 웰 중 TB는 1% 소 혈청 알부민을 함유한다.

0.5 mL 전달 완충액 (HBSS, 25 mM MES, pH 6.5)를 인서트에 첨가하고, 세포 단층을 폴리믹스 쉐이커, 37℃에서 30분 동안 전달 완충액 시스템으로 평형화시켰다. 완충액 시스템으로 평형화시킨 다음, 각 웰에서 EVOM 젓가락 기기에 의한 결상피 전기 저항(trans epithelial electrical resistance(TEER)를 측정하였다. TEER 수치는 웰당 보통 400 내지 1000 Ω이었다 (이용된 계대수에 의존).

전달 완충액 (TB, pH 6.5)을 꼭대기 측으로부터 제거하고, 인서트를 30분 줄(제2 줄)에 전달하고, 테스트 물질을 함유하는 신선한 425 μL TB (pH 6.5)를 꼭대기(공여자) 웰에 첨가하였다. 폴리믹스 쉐이커, 37℃에서 플레이트를 약 150 내지 300 rpm의 낮은 쉐이킹 속도로 인큐베이션하였다. 제2 줄에서 30분 인큐베이션 후, 인서트를 새로운 미리-가온된 기저측(수여자) 웰에 매 30분 마다 옮겼다; 제3 줄 (60분), 제4 줄(90분) 및 5 (120분).

~2분 후와 실험의 마지막에, 25 μL의 샘플을 꼭대기 용액으로부터 취하였다. 이러한 샘플은 실험의 시작과 마지막에서 공여자 샘플을 대표한다. 300 μL을 기저측(수여자) 세포로부터 각 계획된 시간에 취하고, TEER의 포스트(post) 값을 실험의 마지막에 측정하였다. 모든 수집된 샘플에 아세토니트릴을 샘플 중 50%의 최종 농도로 첨가하였다. HPLC 또는 LC-MS로 분석할 때까지 수집된 샘플을 -20℃에서 보관하였다.

기저측에서 꼭대기로의 전달

모든 화합물을 2-4웰에서 테스트하였다. 기저측과 꼭대기 세포는 각각 1.55 mL 및 0.4 mL의 TB를 함유하며, 시험된 물질의 표준 농도는 10 μM이었다. 더욱이, 모든 시험 용액 및 완충액은 1% DMSO를 함유한다. 실험 전에, 전달 플레이트를 10% 혈청을 함유한 배양 배지로 30분 동안 미리 코팅하여, 플라스틱 물질로의 비특이적 결합을 막았다.

21 내지 28일 후, 필터 지지 상 배양에서 세포는 투과성 실험의 준비가 되었다. 꼭대기 웰로부터 배양 배지를 제거하고 인서트를 인서트 없는 새로운 플레이트 중 세척줄(제1 줄)로 전달하였다. 전달 플레이트는 3줄의 4웰로 구성된다. 제1 줄은 "세척"을 나타내고, 제3 줄은 "실험 줄"을 나타낸다. 전달 플레이트는 세척줄 제1 줄에서 1.5 mL TB (pH 7.4)로, 실험줄 제3 줄(공여자 측)에서 시험 물질을 함유하는 1.55 mL TB (pH 7.4)로 미리 준비하였다.

0.5 mL 전달 완충액 (HBSS, 25 mM MES, pH 6.5)를 제1 줄에서 인서트에 첨가하고, 세포 단층을 폴리믹스 쉐이커, 37℃에서 30분 동안 전달 완충액 시스템으로 평형화시켰다. 완충액 시스템으로 평형화시킨 다음, 각 웰에서 EVOM 젓가락 기기에 의한 TEER 수치를 측정하였다. 전달 완충액 (TB, pH 6.5)을 꼭대기 측으로부터 제거하고, 인서트를 제3 줄에 전달하고, 신선한 400 μL TB (pH 6.5)를 인서트에 첨가하였다. 30 분 후, 250 μL를 꼭대기(수여자) 웰로부터 회수하고, 신선한 전달 완충액으로 교체하였다. 이후, 250 μL의 샘플을 회수하고, 120분의 실험의 마지막까지 매 30분 마다 신선한 전달 완충액으로 교체하였고, 실험의 마지막에 10개의 최종 TEER 포스트 값을 측정하였다. ~2분 후와 실험의 마지막에, 25 μL 샘플을 기저측(공여자) 부분으로부터 취하였다. 이러한 샘플은 실험의 시작과 마지막에서 공여자 샘플을 대표한다.

모든 수집된 샘플에 아세토니트릴을 샘플 중 50%의 최종 농도로 첨가하였다. HPLC 또는 LC-MS로 분석할 때까지 수집된 샘플을 -20℃에서 보관하였다.

누적 흡수 분율, FA_cum 대 시간 결정.

FA_cum를 하기 수학식 1로부터 계측하였다:

상기 식에서, C_RI는 간격 I의 마지막에서 수여자의 농도를 나타내며, C_DI는 간격 I의 시작에서 공여자의 농도를 나타낸다. 선형 관계를 수득하였다. 투과성 계수(P_app, cm/s)를 하기 수학식 2로부터 계측하였다:

상기 식에서, k는 시간(분)의 작용에 따른 누적 흡수 분율 (FA_cum)의 선형 회귀에 의해 수득된 경사로 정의되는 전달률(분^-1)을 나타내며, V_R은 수용 챔버에서 부피(mL)를 나타내고, A는 필터의 면적(cm²)을 나타낸다.

표 2: 참조 화합물

인간에서 흡수 카테고리	마커	인간에서 흡수율(%)
수동 전달
저(0-20%)	만니톨 메토트렉세이트	16 20
중(21-75%)	아씨클로버	30
고(76-100%)	프로프라놀올 카페인	90 100
활성 전달
아미노산 전달자	L-페닐알라닌	100
활성 유출
PGP-MDR1	디곡신(Digoxin)	30

다음 표 3은 상기에 개시된 투과성 어세이에서 시험될 때 본 발명에 따른 화합물의 대표적인 선택을 위하여 10^-6 cm/s로 나타낸 투과성 결과(P_app)를 나타낸다.

표 3

실시예 8: 리토나비르에 의한 HCV NS3/4a 프로테아제 억제제의 시험관 내 대사 차단

대사 차단 실험에서 3 μM 시험 화합물을 부스터로 작용하는 10 μM 리토나비르와 함께 이용하여 다른 HCV NS3/4a 프로테아제 억제제를 시험하였다.

시험 화합물 및 리토나비르를 인산 칼륨 완충액(pH = 7.4)중에 현탁된 인간 간 마이크로솜(microsome)(단백질 농도 1 mg/ml)에 첨가하여, 3 μM 시험 화합물 및 10 μM 리토나비르 농도의 최종 반응 혼합물을 얻었다. 비-부스팅 평형 반응에서, 리토나비르를 첨가하지 않았다. 끓인 인간 간 마이크로솜을 블랭크(blank) 실험에 이용하였다. 2% NaHCO₃ 중 글루코오스-6-포스페이트 탈수소효소 (1.5 U/ml), D-글루코오스-6-포스페이트 (2 mg/ml, 7.1 mM), β-니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드 포스페이트 (β-NADP, 0.5 mg/ml, 653.2 μM)로 구성된 보조인자 혼합물(1 : 3 비율)을 첨가한 다음, 반응 혼합물을 37℃에서 30분 또는 120분 동안 인큐베이션한 후, 온도를 95℃로 가온시켜 반응을 정지시켰다. 시험 화합물 농도는 HPLC-MS로 측정하였다.

결과를 하기 표 4에 나타내었다. 수치는 지시된 인큐베이션 시간 후 검출된 시험 화합물을 초기 시험 화합물 농도와 비교한 퍼센트이다. 각 수치는 두개의 독립된 실험 결과의 평균이다.

화합물 번호	30'		120'
	검출된 화합물 %		검출된 화합물 %
	비-부스팅	리토나비르	비-부스팅	리토나비르
16	71	93	20	102
9	44	88	0	100

상기 실험은 10 μM 리토나비르의 첨가에 의한 시험 화합물 (3 μM) 대사의 거의 완벽한 차단을 나타낸다.

실시예 9: 개에서 화합물 9번의 약물동태학에서 리토나비르의 생체 내 효과

50% PEG400/물 중 제제를 이용하여 10 mg/kg으로 단일 투여 후, 수컷 비글 개에서 화합물 9번의 경구 약물동태학과 10 mg/kg 리토나비르를 이용한 "부스팅" 효과를 측정하였다.

6 마리의 수컷 비글 개(체중 8-10kg)를 임의로 각각 3 마리의 2 그룹(부스팅 및 비-부스팅)으로 나누었다. 미처리 또는 비히클-처리 대조 동물을 포함하였다. 투여 전, 동물을 밤새 금식시키고(약 12시간 공복 기간), 투여 전부터 투여 후 6시간까지 어떤 음식물도 급식하지 않았다. 마시는 물은 실험에 걸쳐 입수가능하도록 하였다.

비-부스팅 그룹으로부터의 개에 5 mg/ml 50% PEG400/물로 제제화된 화합물 9번을 10 mg/kg으로 단일 경구 투여하였다. 부스팅 그룹으로부터의 개에 화합물 9번을 10 mg/kg으로 단일 경구 투여하기 약 30분 전에 리토나비르®(리토나비르, 100mg/캡슐)의 연질 캡슐을 단일 투여하였다. 약물 제제를 위 튜브를 이용하여 경구 급식으로 투여하였다.

화합물 9번의 투여 후 0.5시간, 1시간, 2시간, 4시간, 8시간 및 24 시간에 3ml의 혈액 샘플을 수집하였다. HPLC-MS를 이용하여 혈장 농도를 결정하였다. 결과는 하기 표 5에 나타내었으며, 비-부스팅 그룹과 비교하여 부스팅 그룹의 약물동태학적 파라미터를 배수 변화로 나타내었다.

약물동태학적 파라미터	리토나비르로 부스팅될 때 화합물 9번에서 배수 증가
Cmax	31
AUC	55

이러한 결과는 개에서 전체적으로 55-배 증가된 AUC로 표현되어 리토나비르가 화합물 9번의 약물동태학을 실질적으로 증진시키는 것을 나타낸다.

Claims (15)

1. 하기 화학식 (I)의 화합물, 그의 N-옥사이드, 염 및 입체이성체:

   

   상기 식에서,

   파선은 원자 C7과 C8 사이의 임의의 이중 결합을 나타내며;

   R¹은 수소 또는 C_{1 - 6}알킬을 나타내며;

   R²는 수소 또는 C_{1 - 6}알킬을 나타내고;

   n은 3, 4, 5 또는 6을 나타낸다.
2. 제 1항에 있어서, 하기 화학식 (I-a)를 갖는 화합물:

   
3. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 하기 화학식 (I-b)를 갖는 화합물:

   
4. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, n이 4 또는 5인 화합물.
5. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, R¹이 수소 또는 메틸인 화합 물.
6. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, R²가 수소인 화합물.
7. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, R²가 메틸인 화합물.
8. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, 하기로부터 선택되는 화합물:

   

   

   
9. 제 1항 내지 제 8항 중 어느 한 항에 있어서, N-옥사이드 또는 염을 제외한 화합물.
10. (a) 제 1항 내지 제 9항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같은 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염; 및

    (b) 리토나비르, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는 배합물.
11. 담체 및 활성 성분으로 항바이러스적 유효량의 제 1항 내지 제 9항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제 10항의 배합물을 포함하는 약제학적 조성물.
12. 의약으로 사용하기 위한, 제 1항 내지 제 9항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제 10항의 배합물.
13. HCV 복제를 억제하는 의약을 제조하기 위한, 제 1항 내지 제 9항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제 10항의 배합물의 용도.
14. 유효량의 제 1항 내지 제 9항 중 어느 한 항의 화합물 또는 유효량의 각 성분의 제 10항의 배합물을 투여하는 것을 포함하여, 온혈 동물에서 HCV 복제를 억제하는 방법.
15. (a) 특히, 올레핀 복분해 반응과 동반하여, 하기 반응식에 예시된 바와 같이 마크로사이클로 고리화하여 C₇ 과 C₈ 사이에 이중 결합을 형성함으로써, C₇ 과 C₈ 사이의 결합이 이중 결합인 화학식 (I)의 화합물[제 2항에서 정의된 바와 같은 화학식 (I-a)의 화합물]을 제조하고:

    (b) 화학식 (I-a)의 화합물 중에 C₇-C₈ 이중 결합을 환원시켜, 화학식 (I-a)의 화합물을 마크로사이클 중 C₇ 과 C₈ 사이의 연결이 단일 결합인 화학식 (I)의 화합물, 즉, 제 3항에 정의된 바와 같은 화학식 (I-b)의 화합물로 전환시키며:

    (c) 다음 반응식에 예시한 바와 같이 아미드 형성 반응을 통하여 사이클로프로필설폰아미드(IV)를 중간체 (III)와 반응시키고;

    (d) 다음 반응식에 예시한 바와 같이 중간체 (V)를 화학식 (VI)의 퀴놀린으로 에테르화시키고;

    (e) PG가 질소 보호기를 나타내는 대응하는 질소-보호 중간체 (VII)로부터, (I-d)로 나타내어지는, R¹이 수소인 화학식 (I)의 화합물을 제조하며:

    (f) 화학식 (I)의 화합물을 작용기 변형 반응으로 서로 전환시키거나; 또는

    (g) 화학식 (I)의 화합물의 유리 형태를 산 또는 염기와 반응시킴으로써 염 형태를 제조하는 것을 포함하는 제 1항 내지 제 9항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 제조 방법:

    

    

    

    

    상기 식에서,

    (VI) 중 X는 하이드록시 또는 이탈기를 나타내며; 특히 이 반응은 X가 이탈기를 나타내는 경우, O-아릴화 반응이거나, X가 하이드록시인 경우 미츠노부(Mitsunobu) 반응이다.