KR20080026924A - A composition comprising low molecular weight hyaluronic acid or the salt thereof - Google Patents

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김기수
김영희
김진국
박선희
유희종
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Abstract

A composition comprising a low molecular weight hyaluronic acid is provided to show moisturizing, wrinkle improving, wound healing and anti-inflammatory effects and be permeated into skin more easily than a high molecular weight hyaluronic acid. A composition for moisturizing, improving wrinkles, healing wound and preventing inflammation comprises a low molecular weight hyaluronic acid having a weight average molecular weight of 500-10,000 Da and represented by the formula(1) or a salt thereof as an effective ingredient. In the formula(1), n is an integer from 1 to 25; R is H, an alkali metallic salt of Li, Na, and K, an alkali earth metallic salt of Mg and Ca, ammonia, or a salt of an organic amine such as ethylene diamine, cyclohexylamine, aniline, ethanolamine, diethanolamine, triethanolamine, ethylamine, propylamine, arylamine, diethylamine, butylamine, isobutylamine, triethylamine, pentylamine, t-butylamine, and an isopropylamine. The composition is in the form of a skin external application composition such as cream, gel, patch, spray, ointment, plaster, lotion, liniment, paste type or cataplasma, or a cosmetic composition such as skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, lotion, milk lotion, moisture lotion, nutritive lotion, massage cream, nutritive cream, moisture cream, hand cream, foundation, essence, nutritive essence, pack, soap, cleansing foam, cleansing lotion, cleaning cream, body lotion or body cleanser.

Description

저분자량 히알루론산 또는 그 염을 함유하는 조성물{A composition comprising low molecular weight hyaluronic acid or the salt thereof} A composition comprising low molecular weight hyaluronic acid or the salt thereof

도 1은 동물실험에서 저분자량 히알루론산 또는 저분자량 히알루론산나트륨염의 처리에 따른 피부장벽 회복효과를 나타낸 도이고,1 is a diagram showing the skin barrier recovery effect according to the treatment of low molecular weight hyaluronic acid or low molecular weight sodium hyaluronate salt in animal experiments,

도 2는 저분자량 히알루론산 또는 저분자량 히알루론산나트륨염의 농도별 세포생존률을 나타낸 도이며,2 is a diagram showing the cell survival rate by concentration of low molecular weight hyaluronic acid or low molecular weight sodium hyaluronate salt,

도 3은 저분자량 히알루론산 또는 저분자량 히알루론산나트륨염의 iNOS 생성 억제 효과를 나타낸 도이다.3 is a diagram showing the iNOS production inhibitory effect of low molecular weight hyaluronic acid or low molecular weight sodium hyaluronate salt.

본 발명은 무게평균 분자량 500~10,000 달톤을 가지는 저분자량 히알루론산 또는 그 염을 함유하는 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a composition containing a low molecular weight hyaluronic acid or a salt thereof having a weight average molecular weight of 500 to 10,000 Daltons.

히알루론산(hyaluronic acid)은 고점도성, 보습성, 생체 적합성 등의 특징을 지닌 수용성 다당류의 생체 고분자 물질로서 콜라겐 및 엘라스틴과 함께 피부 3대 요소 중의 하나이다. 히알루론산은 β-D-글루쿠론산 (glucuronic acid)과 β-D-N-아세틸글루코사민이 상호베타 결합으로 이뤄진 직쇄상의 긴 고분자 물질로서, 그 분자량은 기원, 제조 및 정제방법에 따라 0.1× 106 ~ 10× 106 달톤으로 매우 다양하다. 수용액상에서 점성, 탄성 및 보습성을 가지며, 이러한 성질은 히알루론산의 분자량과 농도에 좌우된다. 뮤코 다당류 중에서도 비교적 입수가 용이하며, 특이한 물리화학적 및 생리적 성질을 지니고 있어, 그 자체 또는 그 유도체가 여러 분야에 광범위하게 사용되고 있다. 일반적으로 사용되고 있는 고분자 히알루론산의 주요 용도로는 안과 수술용, 경주용 말의 무릎 관절 치료용, 화장품의 보습제용으로의 사용(미국 특허 출원 제844,833호 및 미국 특허 출원 제467,925호) 및 관절질환치료제(국제특허출원 WO99/59603호)등에 사용되고 있다. Hyaluronic acid (hyaluronic acid) is a biopolymer of water-soluble polysaccharides with high viscosity, moisture retention, biocompatibility, etc. It is one of the three major elements of skin along with collagen and elastin. Hyaluronic acid is a linear long polymer substance composed of β-D-glucuronic acid and β-DN-acetylglucosamine formed by mutual beta linkage, and its molecular weight is 0.1 × 10 6 depending on the origin, preparation and purification method. ~ 10 × 10 6 Daltons, very diverse. It is viscous, elastic and moisturizing in aqueous solution, and this property depends on the molecular weight and concentration of hyaluronic acid. Among mucopolysaccharides, they are relatively easy to obtain, have unique physicochemical and physiological properties, and their own or derivatives thereof are widely used in various fields. Commonly used polymer hyaluronic acid is mainly used for ophthalmic surgery, the treatment of knee joints of race horses, as a moisturizer for cosmetics (US Patent Application No. 844,833 and US Patent Application No. 467,925) and joint diseases It is used for therapeutic agents (international patent application WO99 / 59603).

한편, 분자량 수십만에서 수백만의 고분자 히알루론산은 고점도로 인하여 고농도로의 사용이 어렵기 때문에 화장품 또는 주사제 등의 의약품에 사용상 농도의 제한을 받으며, 식품으로 이용시 생체이용률이 떨어지는 단점을 가지고 있다. On the other hand, the molecular weight of hundreds of millions of polymer hyaluronic acid is difficult to use at high concentrations due to the high viscosity is limited in the concentration in use in pharmaceuticals such as cosmetics or injections, and has a disadvantage in that the bioavailability is lowered when used as food.

반면, 수천에서 수만의 분자량을 가지는 저분자량 히알루론산은 종래의 고분자량의 것에 비해 증가된 용해도로 인하여 고농도로 사용이 가능하고, 끈적임이 없는 등의 특성을 가지고 있으며, 당의 중합도가 10~14당의 저분자량 히알루론산과 그의 염이 혈관형성촉진작용이 있는 것이 보고 되어있다(slevin M. et al., J Biol Chem., 25;277(43), pp41046-59, 2002). On the other hand, low molecular weight hyaluronic acid, which has a molecular weight of several thousand to tens of thousands, can be used in high concentration due to the increased solubility compared with that of the conventional high molecular weight, and has no characteristics such as non-stickiness, and the polymerization degree of sugar is 10-14 sugars. It has been reported that low molecular weight hyaluronic acid and its salts promote angiogenesis (slevin M. et al., J Biol Chem ., 25; 277 (43) , pp41046-59, 2002).

고분자량 히알루론산의 저분자량화 방법으로는 여러 가지 방법들이 공지 되 어 있는데, 고온가열 및 초음파를 이용하는 방법(Motohashi et al., Journal of Chromatography, 435, pp335-342, 1988; Bothner et al., Int . J. Biol . Macrmol ., p10, 1998), 산 또는 염기 촉매에 의한 방법(일본특허공개 소 63-57602, 일본특허공개 평 1-266102), 차아염소산등의 염소계 산화제를 이용한 방법(일본특허공개 평 2-245193), 과황산암모늄등의 분해촉매를 이용한 방법(한국등록특허 제 10-0369517) 및 히알루로니다아제 효소를 사용한 저분자량 히알루론산을 수득하는 방법(A. Sattor et al., J. Invest. Dermato1. 103, pp576-579, 1994, 일본특허공개 소 62-79790, 일본특허공개 평 11-124401) 등이 공지되어 있다. Various methods are known as low molecular weight methods of high molecular weight hyaluronic acid, using high temperature heating and ultrasonic waves (Motohashi et al., Journal of Chromatography , 435 , pp335-342, 1988; Bothner et al., Int . J. Biol . Macrmol . , P10 , 1998), a method using an acid or a base catalyst (Japanese Patent Laid-Open No. 63-57602, Japanese Patent Application Laid-Open No. 1-266102), a method using a chlorine-based oxidizing agent such as hypochlorous acid (Japan Japanese Patent Application Laid-Open No. 2-245193), a method using a decomposition catalyst such as ammonium persulfate (Korean Patent No. 10-0369517) and a method of obtaining a low molecular weight hyaluronic acid using a hyaluronidase enzyme (A. Sattor et al. , J. Invest. Dermatol . 103 , pp576-579, 1994, Japanese Patent Application Laid-Open No. 62-79790, Japanese Patent Application Laid-Open No. 11-124401) and the like.

그러나 상기 문헌 어디에도 본 발명의 조성물이 보습, 주름개선, 상처치유 및 염증에 대한 개선 효과 및 고분자량 히알루론산에 비하여 피부투과도가 우수함이 교시되거나 개시된 바 없다.However, none of the above documents teaches or discloses that the composition of the present invention is excellent in moisturizing, wrinkle improvement, wound healing and inflammation, and excellent skin permeability compared to high molecular weight hyaluronic acid.

따라서 이에 본 발명자들은, 저분자량 히알루론산 또는 그 염 자체 혹은 이를 함유하는 제형을 가지고 보습, 주름개선, 상처치유 및 염증에 관한 실험, 무모생쥐의 피부를 이용한 피부투과도 실험 및 Caco-2 세포를 이용한 세포투과도 실험를 통하여, 본 발명의 저분자량 히알루론산 또는 그 염이 지금까지 알려진 기타 조성물보다 훨씬 우수한 효과하며, 고분자량 히알루론산에 비하여 우수한 피부투과도를 가짐을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.Therefore, the present inventors have a low-molecular weight hyaluronic acid or its salt or a formulation containing the same, moisturizing, wrinkle improvement, wound healing and inflammation experiments, skin permeability experiments using the skin of hairless mice and Caco-2 cells Through the cell permeability experiment, the present invention was completed by confirming that the low molecular weight hyaluronic acid or salt thereof of the present invention is far superior to other compositions known to have an excellent skin permeability compared to high molecular weight hyaluronic acid.

본 발명의 목적은 주름개선, 보습, 상처치유 및 항염 효과를 갖는 무게평균 분자량 500~10,000 달톤의 저분자량 히알루론산 또는 그 염을 유효성분으로 함유하는 기존의 고분자량 히알루론산보다 피부투과가 용이한 피부외용제 조성물 및 화장료 조성물을 제공하는 것이다.An object of the present invention is easier to penetrate the skin than conventional high molecular weight hyaluronic acid containing a low molecular weight hyaluronic acid or a salt thereof having a weight average molecular weight of 500 ~ 10,000 Daltons or its salt as an active ingredient having wrinkle improvement, moisturizing, wound healing and anti-inflammatory effect It is to provide an external skin composition and a cosmetic composition.

본 발명은 고분자 히알루론산보다 피부투과가 용이하며, 보습, 주름개선, 상처치유 및 항염 효과를 갖는 무게평균 분자량 500 내지 10,000 달톤의 저분자량 히알루론산 또는 그 염을 유효성분으로 함유하는 보습, 주름개선, 상처치유 및 염증의 예방 및 치료용 피부외용제 조성물을 제공한다.The present invention is easier to penetrate the skin than polymer hyaluronic acid, moisturizing, wrinkle improvement, moisturizing, wrinkle improvement and low molecular weight hyaluronic acid having a weight average molecular weight of 500 to 10,000 Daltons or its salt as an active ingredient Provided is an external skin composition for preventing and treating wound healing and inflammation.

본원에서 정의되는 저분자량 히알루론산 또는 그 염은 구체적으로는 하기 일반식 (I)로 표기되는 화합물 또는 그 염을 포함한다. Low molecular weight hyaluronic acid or a salt thereof as defined herein specifically includes a compound represented by the following general formula (I) or a salt thereof.

Figure 112006068616142-PAT00001
(Ⅰ)
Figure 112006068616142-PAT00001
(Ⅰ)

상기 식에서 n은 1 내지 25의 정수이고;N is an integer from 1 to 25;

R은 수소원자 혹은 약학적으로 허용 가능한 염이다.R is a hydrogen atom or a pharmaceutically acceptable salt.

본 발명의 바람직한 화합물군으로는 n이 1 내지 20의 정수, 보다 바람직하게는 n이 1 내지 10의 정수인 화합물군들을 포함하고, 상기 R치환기는 약학적으로 허용 가능한 염을 포함한다. Preferred compound groups of the present invention include compound groups where n is an integer of 1 to 20, more preferably n is an integer of 1 to 10, and the R substituent includes a pharmaceutically acceptable salt.

상기의 화학식 (Ⅰ)의 약학적으로 허용 가능한 염은, 달리 지시되지 않는 한, 화학식 (Ⅰ)의 화합물에 존재할 수 있는 산성기의 염을 포함하며, 산성기의 염으로는 리튬, 나트륨, 칼륨의 알카리 금속류염, 마그네슘, 칼슘 등의 알카리 토금속류염, 암모니아 또는 에틸렌디아민, 사이클로헥실아민, 아닐린, 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 에틸아민, 프로필아민, 아릴아민, 디에틸아민, 부틸아민, 이소부틸아민, 트리에틸아민, 펜틸아민, t-부틸아민, 이소프로필아민의 유기아민류와의 염을 들 수 있고, 바람직하게는 나트륨, 칼륨, 칼슘과의 염 또는 암모니아, 생리학적으로 허용 가능한 아민과의 염을 들 수 있으며, 이들 염들은 당업계에서 알려진 염의 제조방법이나 제조과정을 통하여 제조될 수 있다. Pharmaceutically acceptable salts of the above formula (I) include salts of acidic groups which may be present in compounds of formula (I) unless otherwise indicated, and salts of acidic groups include lithium, sodium, potassium Alkali metal salts such as alkali metal salts, magnesium, calcium, ammonia or ethylenediamine, cyclohexylamine, aniline, ethanolamine, diethanolamine, triethanolamine, ethylamine, propylamine, arylamine, diethylamine, butyl Salts with organic amines such as amine, isobutylamine, triethylamine, pentylamine, t-butylamine, and isopropylamine, and preferably salts with sodium, potassium, calcium or ammonia, and physiologically acceptable Salts with possible amines, and these salts can be prepared by methods or processes for preparing salts known in the art.

본 발명의 저분자량 히알루론산 또는 그 염의 무게평균 분자량은 500 내지 10,000 달톤, 바람직하게는 500 내지 5,000 달톤, 보다 바람직하게는 500 내지 1,000 달톤임을 특징으로 한다.The low molecular weight hyaluronic acid or salt thereof has a weight average molecular weight of 500 to 10,000 Daltons, preferably 500 to 5,000 Daltons, more preferably 500 to 1,000 Daltons.

본 발명의 조성물에 대해 세포 실험 및 동물 실험을 실시한 결과, 주름개선, 보습 및 염증에 대한 개선 효과를 확인하였으므로 본 발명의 조성물은 피부외용제 조성물 및 화장료 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.As a result of conducting cell experiments and animal experiments for the composition of the present invention, it was confirmed that the effect of improving wrinkles, moisturizing and inflammation, the composition of the present invention can be usefully used as a topical skin composition and cosmetic composition.

본원에서 정의되는 염증은 일반적인 염증질환을 포함하며, 각종 피부염, 전신성 홍반성 낭창, 망막염, 위염, 간염, 장염, 췌장염, 신장염, 바람직하게는 피부염을 포함하고, 상기 알레르기는 과민증(anaphylaxis), 알러지성 비염(allergic rhinitis), 천식(asthma), 알러지성 결막염, 알러지성 피부염, 아토피성 피부염(atopic dermatitis), 접촉성 피부염, 두드러기(urticaria), 곤충 알러지, 식품 알러지, 약품 알러지, 바람직하게는 알러지성 피부염, 아토피성 피부염, 접촉성 피부염을 포함한다.Inflammation as defined herein includes common inflammatory diseases, including various dermatitis, systemic lupus erythematosus, retinitis, gastritis, hepatitis, enteritis, pancreatitis, nephritis, preferably dermatitis, the allergy being anaphylaxis, allergy Allergic rhinitis, asthma, allergic conjunctivitis, allergic dermatitis, atopic dermatitis, contact dermatitis, urticaria, insect allergies, food allergies, drug allergies, preferably allergies Sexual dermatitis, atopic dermatitis, contact dermatitis.

본 발명의 조성물을 함유하는 피부외용 약학조성물은 주름개선, 보습 및 염증 효과를 갖는 피부외용제로서 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용제 형태의 약학조성물로 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다. The external skin pharmaceutical composition containing the composition of the present invention is a skin external preparation having wrinkle improvement, moisturizing and inflammatory effects, such as a cream, gel, patch, spray, ointment, warning agent, lotion agent, linen agent, pasta agent or cataplasmase agent. It can be prepared and used as a pharmaceutical composition in the form of external preparations for the skin, but is not limited thereto.

본 발명의 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 조성물은 1일 0.0001 내지 100 ㎎/㎏으로, 바람직하게는 0.001 내지 10 ㎎/㎏으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. Preferred dosages of the compositions of the present invention vary depending on the condition and weight of the patient, the extent of the disease, the form of the drug, the route of administration and the duration, and may be appropriately selected by those skilled in the art. However, for the desired effect, the composition of the present invention is preferably administered at 0.0001 to 100 mg / kg, preferably at 0.001 to 10 mg / kg. Administration may be administered once a day or may be divided several times. The dosage does not limit the scope of the invention in any aspect.

또한, 본 발명은 고분자 히알루론산보다 피부투과가 용이하며, 보습, 주름개선, 상처치유 및 항염 효과를 갖는 무게평균 분자량 500 내지 10,000 달톤의 저분자 히알루론산 또는 그 염을 유효성분으로 함유하는 보습, 주름개선, 상처치유 및 염증의 예방 및 개선용 화장료 조성물을 제공한다.In addition, the present invention is easier to penetrate the skin than the polymer hyaluronic acid, moisturizing, wrinkles containing a low molecular weight hyaluronic acid or a salt having a weight average molecular weight of 500 to 10,000 Daltons as an active ingredient having moisturizing, wrinkle improvement, wound healing and anti-inflammatory effect It provides a cosmetic composition for the improvement, prevention of wound healing and inflammation.

고분자 히알루론산보다 피부투과가 용이하며, 보습, 주름개선, 상처치유 및 항염 효과를 갖는 상기 일반식(Ⅰ)으로 표기되는 무게평균 분자량 500 ~ 10,000 달톤의 저분자량 히알루론산 또는 그 염을 유효성분으로 함유하는 보습, 주름개선, 상처치유 및 염증의 예방 및 개선용 화장료 조성물It is easier to penetrate the skin than polymer hyaluronic acid, and has a low molecular weight hyaluronic acid or its salt having a weight average molecular weight of 500 to 10,000 Daltons represented by the general formula (I), which has moisturizing, wrinkle improvement, wound healing and anti-inflammatory effects as an active ingredient. Cosmetic composition for preventing and improving moisturizing, wrinkle improvement, wound healing and inflammation

본 발명의 조성물은 보습, 주름개선, 상처치유 및 염증에 대한 개선 활성을 갖는 화장품 및 세안제 등에 다양하게 이용될 수 있다.The composition of the present invention can be used in a variety of cosmetics and cleansing agents and the like having moisturizing, wrinkle improvement, wound healing and improvement activities for inflammation.

본 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 화장수, 스킨, 로션, 영양로션, 영양크림, 맛사지크림, 에센스, 팩 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 미용액 등이 있다.Products to which the composition can be added include, for example, cosmetics such as lotion, skin, lotion, nourishing lotion, nourishing cream, massage cream, essence and pack, and cleansing, face wash, soap, treatment, essence, etc. have.

본 발명의 화장료는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함한다.Cosmetics of the present invention comprises a composition selected from the group consisting of water-soluble vitamins, oil-soluble vitamins, polymer peptides, polymer polysaccharides, sphingolipids and seaweed extract.

수용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 그들의 염 (티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체 (아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)도 본 발명에서 사용할 수 있는 수용성 비타민에 포함된다. 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득할 수 있다.The water-soluble vitamins may be any compound that can be incorporated into cosmetics, but preferably vitamin B1, vitamin B2, vitamin B6, pyridoxine, pyridoxine, vitamin B12, pantothenic acid, nicotinic acid, nicotinic acid amide, folic acid, vitamin C, vitamin H, and the like. Their salts (thiamine hydrochloride, sodium ascorbate salt, etc.) and derivatives (ascorbic acid-2-sodium phosphate salt, ascorbic acid-2-magnesium phosphate salt, etc.) may also be used in the water-soluble vitamins that can be used in the present invention. Included. The water-soluble vitamins can be obtained by conventional methods such as microbial transformation, purification from microorganism culture, enzyme or chemical synthesis.

유용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E(d1-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤) 등을 들 수 있으며, 그들의 유도체(팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산 dl-알파 토코페롤, 니코틴산dl-알파 토코페롤비타민 E, DL-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르 등) 등도 본 발명에서 사용되는 유용성 비타민에 포함된다. 유용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 취득할 수 있다.The oil-soluble vitamin may be any compound that can be formulated into cosmetics, but preferably vitamin A, carotene, vitamin D2, vitamin D3, vitamin E (d1-alpha tocopherol, d-alpha tocopherol, d-alpha tocopherol), and the like. And derivatives thereof (ascorbic palmitate, ascorbic stearate, ascorbic acid dipalmitate, dl-alpha tocopherol acetate, dl-alpha tocopherolvitamin E, DL-pantothenyl alcohol, D-pantothenyl alcohol, pantothenyl ethyl) Ethers, etc.) are also included in the oil-soluble vitamins used in the present invention. Oil-soluble vitamins can be obtained by conventional methods such as microbial transformation, purification of microorganism culture, enzyme or chemical synthesis.

고분자 펩티드로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 콜라겐, 가수 분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴, 케라틴 등을 들 수 있다. 고분자 펩티드는 미생물의 배양액으로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 정제 취득할 수 있으며, 또는 통상 돼지나 소 등의 진피, 누에의 견섬유 등의 천연물로부터 정제하여 사용할 수 있다.The polymer peptide may be any compound as long as it can be incorporated into cosmetics. Preferably, collagen, hydrolyzed collagen, gelatin, elastin, hydrolyzed elastin, keratin, and the like can be given. Polymeric peptides can be purified and obtained by conventional methods such as purification from microbial cultures, enzymatic methods or chemical synthesis methods, or can be purified and used from natural products such as dermis and pig silk such as pigs and cattle.

고분자 다당으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨, 콘드로이틴 황산 또는 그 염(나트륨염 등) 등을 들 수 있다. 예를 들어, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 등은 통상 포유 동물이나 어류로부터 정제하여 사용할 수 있다.The polymer polysaccharide may be any compound as long as it can be incorporated into cosmetics. Preferably, hydroxyethyl cellulose, xanthan gum, sodium hyaluronate, chondroitin sulfate or a salt thereof (sodium salt, etc.) may be mentioned. For example, chondroitin sulfate or its salt can be normally purified from a mammal or fish.

스핑고 지질로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질 등을 들 수 있다. 스핑고 지 질은 통상 포유류, 어류, 패류, 효모 또는 식물 등으로부터 통상의 방법에 의해 정제하거나 화학 합성법에 의해 취득할 수 있다.The sphingolipid may be any compound as long as it can be blended into cosmetics. Preferably, ceramide, phytosphingosine, sphingosaccharide lipid, etc. may be mentioned. Sphingolipids can usually be purified from mammals, fish, shellfish, yeasts or plants by conventional methods or obtained by chemical synthesis.

해초 엑기스로는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 갈조 엑기스, 홍조 엑기스, 녹조 엑기스 등을 들 수 있으며, 또, 이들의 해초 엑기스로부터 정제된 칼라기난, 아르긴산, 아르긴산나트륨, 아르긴산칼륨 등도 본 발명에서 사용되는 해초 엑기스에 포함된다. 해초 엑기스는 해초로부터 통상의 방법에 의해 정제하여 취득할 수 있다.The seaweed extract may be any compound as long as it can be blended into cosmetics. Preferably, the seaweed extract may include brown algae extract, red algae extract, green algae extract, and the like. Also, calginine, arginic acid, sodium arginate, Potassium arginate and the like are also included in the seaweed extract used in the present invention. Seaweed extract can be obtained by purification from seaweed by conventional methods.

본 발명의 화장료에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다.In addition to the said essential component, you may mix | blend the cosmetics of this invention with the other components normally mix | blended with cosmetics as needed.

이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.Other components that may be added include fats and oils, moisturizers, emollients, surfactants, organic and inorganic pigments, organic powders, ultraviolet absorbers, preservatives, fungicides, antioxidants, plant extracts, pH adjusters, alcohols, pigments, flavorings, Blood circulation accelerators, cooling agents, restriction agents, purified water and the like.

유지 성분으로서는 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지, 식물 유지 등을 들 수 있다.Examples of the fat or oil component include ester fats, hydrocarbon fats, silicone fats, fluorine fats, animal fats, and vegetable fats and oils.

에스테르계 유지로서는 트리2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디 핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴,카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜 레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등의 에스테르계 등을 들 수 있다.As ester fats and oils, glyceryl tri2-ethylhexanoate, cetyl 2-ethylhexanoate, isopropyl myristate, butyl mystinate, isopropyl palmitate, ethyl stearate, octyl palmitate, isocetyl isostearate, and stearic acid Butyl, ethyl linoleate, isopropyl linoleate, ethyl oleate, isocetyl acid isocetyl, isostyl acid isostearyl, isostaryl palmitate, octylate acid octyldodecyl, isostearic acid isetyl, diethyl sebacate, adipine Acid isopropyl, isoalkyl neopentane, tri (capryl, capric acid) glyceryl, trimethyl ethyl trimethylol propane, triisostearic acid trimethylol propane, tetra 2-ethylhexanoic penta erythritol Cetyl caprylate, lauric acid decyl, hexyl laurate, decyl myristin, myristin acid myristyl, myritic acid cetyl, stearyl stearate, decyl oleate, rininooleic acid Teyl, isostearyl laurate, isotridecyl myristin, isocetyl palmitate, octyl stearate, isocetyl stearate, isodecyl oleate, octyl dodecyl oleate, octyl dodecyl linoleate, isopropyl isopropyl acid, 2-ethylhexanoate cetostearyl, 2-ethylhexanoate stearyl, hexyl isostearate, ethylene glycol dioctanoate, ethylene glycol dioleate, propylene glycol dicapric acid, propylene glycol di (capryl, capric acid), Dicaprylic acid propylene glycol, dicapric acid neopentyl glycol, dioctanoate neopentyl glycol, tricaprylate glyceryl, triundecyl glyceryl, triisopalmitinate glyceryl, triisostearate glyceryl, octylate octadodode Sil, isostearyl octanoate, octyl isononanoate, hexyldecyl neodecanoate, octyldodecyl neodecanoate, isocetyl isostearate, isstearyl isostearate, Sothete octylate, polyglycerol oleate, polyglycerine isostearate, triisocetyl citrate, triisoalkyl citrate, triisooctyl citrate, lauryl lactate, myritic lactate, octyl lactate, octyl lactate Ethyl, acetyl triethyl citrate, acetyl tributyl citrate, trioctyl citrate, diisostearyl malic acid, 2-ethylhexyl hydroxystearate, di2-ethylhexyl succinate, diisobutyl adipicate, diisopropyl sebacinate, Dioctyl sebacate, cholesteryl stearate, cholesteryl isostearic acid, cholesteryl hydroxystearate, cholesteryl oleate, dihydrocholesteryl oleate, physteryl isostearate, phytic oleate, 12-Steloylhydroxystearate isocetyl, 12-Steloylhydroxystearate stearyl, 12-steal One hydroxy stearic acid and the like esters such as cetearyl source.

탄화 수소계 유지로서는 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스, 와셀린 등의 탄화 수소계 유지 등을 들 수 있다.Hydrocarbon-based fats and oils, such as squalene, a liquid paraffin, alpha-olefin oligomer, isoparaffin, ceresin, paraffin, a liquid isoparaffin, polybutene, microcrystal wax, and a vaseline, etc. are mentioned as a hydrocarbon-type fats and oils.

실리콘계 유지로서는 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산ㆍ메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산ㆍ메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유, 아미노 변성 실리콘유 등을 들 수 있다.Examples of the silicone-based oils and fats include polymethylsilicone, methylphenylsilicone, methylcyclopolysiloxane, octamethylpolysiloxane, decamethylpolysiloxane, dodecamethylcyclosiloxane, dimethylsiloxane, methylcetyloxysiloxane copolymer, dimethylsiloxane and methylsteoxysiloxane copolymer, and alkyl. Modified silicone oil, amino modified silicone oil and the like.

불소계 유지로서는 퍼플루오로폴리에테르 등을 들 수 있다.Perfluoro polyether etc. are mentioned as fluorine-based fats and oils.

동물 또는 식물 유지로서는 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인(杏仁)유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지(牛脂), 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린, 경화피마자유 등의 동물 또는 식물 유지를 들 수 있다.Animal or vegetable oils include avocado oil, almond oil, olive oil, sesame oil, rice bran oil, soybean oil, soybean oil, corn oil, rapeseed oil, almond oil, palm kernel oil, palm oil, castor oil, sunflower oil, grape seed oil. , Cottonseed oil, Palm oil, Cucumber nut oil, Wheat germ oil, Rice germ oil, Shea butter, Walnut colostrum oil, Marker demia nut oil, Meadow home oil, Egg yolk oil, Uji, Horse oil, Mink oil, Orange rape oil, Jojoba oil And animal or plant fats and oils such as candeler wax, carnava wax, liquid lanolin and hardened castor oil.

보습제로서는 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자, 지용성 고분자 등을 들 수 있다.Examples of the moisturizing agent include a water-soluble low molecular moisturizer, a fat-soluble molecular moisturizer, a water-soluble polymer, and a fat-soluble polymer.

수용성 저분자 보습제로서는 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜B(중합도 n = 2 이상), 폴리프로필렌글리콜(중합도 n = 2 이상), 폴리글리세린B(중합도 n = 2 이상), 락트산, 락트산염 등을 들 수 있다.Water-soluble low molecular humectants include serine, glutamine, sorbitol, mannitol, pyrrolidone-sodium carboxylate, glycerin, propylene glycol, 1,3-butylene glycol, ethylene glycol, polyethylene glycol B (polymerization degree n = 2 or more), polypropylene Glycol (polymerization degree n = 2 or more), polyglycerol B (polymerization degree n = 2 or more), lactic acid, lactic acid salt, etc. are mentioned.

지용성 저분자 보습제로서는 콜레스테롤, 콜레스테롤에스테르 등을 들 수 있다.Examples of the fat-soluble low molecular humectants include cholesterol and cholesterol esters.

수용성 고분자로서는 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성 키틴, 키토산, 덱스트린 등을 들 수 있다.Examples of the water-soluble polymer include carboxyvinyl polymer, polyasparaginate, tragacanth, xanthan gum, methyl cellulose, hydroxymethyl cellulose, hydroxyethyl cellulose, hydroxypropyl cellulose, carboxymethyl cellulose, water soluble chitin, chitosan, and dextrin. Can be.

지용성 고분자로서는 폴리비닐피롤리돈ㆍ에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈ㆍ헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르, 고분자 실리콘 등을 들 수 있다.Examples of the fat-soluble polymers include polyvinylpyrrolidone-eicosene copolymers, polyvinylpyrrolidone-hexadecene copolymers, nitrocellulose, dextrin fatty acid esters, polymer silicones, and the like.

에몰리엔트제로서는 장쇄아실글루타민산콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산, 라놀린지방산콜레스테릴에스테르 등을 들 수 있다.Examples of the emollient include long-chain acyl glutamic acid cholesteryl esters, hydroxy stearic acid cholesterol, 12-hydroxystearic acid, stearic acid, rosin acid, lanolin fatty acid cholesteryl esters, and the like.

계면 활성제로서는 비이온성 계면 활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제, 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.As surfactant, nonionic surfactant, anionic surfactant, cationic surfactant, amphoteric surfactant, etc. are mentioned.

비이온성 계면 활성제로서는 자기 유화형 모노스테아르산글리세린, 프로필렌글리콜지방산에스테르, 글리세린지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔 비탄지방산에스테르, POE(폴리옥시에틸렌)솔비탄지방산에스테르, POE 솔비트지방산에스테르, POE 글리세린지방산에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산에스테르, POE 경화피마자유, POE 피마자유, POEㆍPOP (폴리옥시에틸렌ㆍ폴리옥시프로필렌) 공중합체, POEㆍPOP 알킬에테르, 폴리에테르변성실리콘, 라우린산알카놀아미드, 알킬아민옥시드, 수소첨가대두인지질 등을 들 수 있다.Examples of nonionic surfactants are self-emulsifying glycerin monostearate, propylene glycol fatty acid esters, glycerin fatty acid esters, polyglycerol fatty acid esters, sol nonfatty acid esters, POE (polyoxyethylene) sorbitan fatty acid esters, POE sorbitan fatty acid esters, and POE. Glycerin fatty acid ester, POE alkyl ether, POE fatty acid ester, POE hardened castor oil, POE castor oil, POE / POP (polyoxyethylene / polyoxypropylene) copolymer, POE / POP alkyl ether, polyether modified silicone, lauric acid Alkanolamide, alkylamine oxide, hydrogenated soybean phospholipid, etc. are mentioned.

음이온성 계면 활성제로서는 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인삼염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염, 퍼플루오로알킬인산에스테르 등을 들 수 있다.Anionic surfactants include fatty acid soaps, alpha-acyl sulfonates, alkyl sulfonates, alkyl allyl sulfonates, alkyl naphthalene sulfonates, alkyl sulfates, POE alkyl ether sulfates, alkylamide sulfates, alkyl phosphates, POE alkylphosphates, and alkylamides. Phosphates, alkyloylalkyltaurine salts, N-acylamino acid salts, POE alkyl ether carboxylate salts, alkyl sulfosuccinate salts, sodium alkyl sulfo acetates, acylated hydrolyzed collagen peptide salts, perfluoroalkyl phosphate esters, and the like. have.

양이온성 계면 활성제로서는 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드, 라놀린 유도체 제 4급 암모늄염 등을 들 수 있다.As cationic surfactant, alkyl trimethylammonium chloride, stearyl trimethyl ammonium chloride, stearyl trimethyl ammonium chloride, cetostearyl trimethyl ammonium chloride, distearyl dimethyl ammonium chloride, stearyl dimethyl benzyl ammonium bromide, behenyl trimethyl ammonium chloride, chloride Benzalkonium, diethylaminoethyl stearate, dimethylaminopropyl stearate, lanolin derivatives, quaternary ammonium salts, and the like.

양성 계면 활성제로서는 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형, 아미드아민형 등의 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.Examples of amphoteric surfactants include the carboxybetaine type, the amide betain type, the sulfobetain type, the hydroxysulfobetain type, the amide sulfobetain type, the phosphobetaine type, the aminocarboxylate type, the imidazoline derivative type, and the amideamine type. An amphoteric surfactant etc. are mentioned.

유기 및 무기 안료로서는 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이 카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체등의 무기 안료 ; 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트수지, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트오렌지 등의 유기 안료 및 이들의 무기 안료와 유기 안료의 복합 안료 등을 들 수 있다.Organic and inorganic pigments include silicic acid, silicic anhydride, magnesium silicate, talc, sericite, mica, kaolin, bengala, clay, bentonite, titanium film mica, bismuth oxychloride, zirconium oxide, magnesium oxide, zinc oxide, titanium oxide, oxide Inorganic pigments such as aluminum, calcium sulfate, barium sulfate, magnesium sulfate, calcium carbonate, magnesium carbonate, iron oxide, ultramarine blue, chromium oxide, chromium hydroxide, coloramine and composites thereof; Polyamide, polyester, polypropylene, polystyrene, polyurethane, vinyl resin, urea resin, phenol resin, fluorine resin, silicon resin, acrylic resin, melamine resin, epoxy resin, polycarbonate resin, divinylbenzene, styrene copolymer, Organic pigments such as silk powder, cellulose, CI pigment yellow, CI pigment orange, and composite pigments of these inorganic pigments and organic pigments;

유기 분체로서는 스테아르산칼슘 등의 금속비누 ; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염 ; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염 ; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염 ; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파-파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산 ; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드 ; 알파-아미노카프릴산, 알파-아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산 ; 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 사불화에틸렌 등을 들 수 있다.As organic powder, Metal soaps, such as a calcium stearate; Alkyl phosphate metal salts such as sodium cetylinate, zinc lauryl acid and calcium laurate; Acylamino acid polyvalent metal salts such as N-lauroyl-beta-alanine calcium, N-lauroyl-beta-alanine zinc, and N-lauroylglycine calcium; Amide sulfonic acid polyvalent metal salts, such as N-lauroyl-taurine calcium and N-palmitoyl-taurine calcium; N-epsilon-lauroyl-L-lysine, N-epsilon-palmitolyzine, N-alpha-paratoylol nitin, N-alpha-lauroyl arginine, N-alpha-cured fatty acid acyl arginine -Acyl basic amino acid; N-acyl polypeptides, such as N-lauroyl glycyl glycine; Alpha-amino fatty acids such as alpha-aminocaprylic acid and alpha-aminolauric acid; Polyethylene, polypropylene, nylon, polymethyl methacrylate, polystyrene, divinylbenzene-styrene copolymer, ethylene tetrafluoride and the like.

자외선 흡수제로서는 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리신산페닐, 살리신 산옥틸, 살리신산벤질, 살리신산부틸페닐, 살리신산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산-2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모노-2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시계피산이소프로필, 디이소프로필ㆍ디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p-(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸 등을 들 수 있다.Examples of the ultraviolet absorber include paraaminobenzoic acid, ethyl paraaminobenzoate, amyl paraaminobenzoic acid, octyl paraaminobenzoate, ethylene glycol salicylate, phenyl salicylate, octyl salicylate, benzyl salicylate, butylphenyl salicylate, homomentyl salicylic acid and benzyl cinnamic acid. , Paramethoxy cinnamic acid-2-ethoxyethyl, paramethoxy cinnamic acid octyl, diparamethoxy cinnamic acid mono-2-ethylhexaneglyceryl, paramethoxy cinnamic acid isopropyl, diisopropyl diisopropyl cinnamic acid ester mixture, wuro Canonic acid, ethyl urokanoate, hydroxymethoxybenzophenone, hydroxymethoxybenzophenonesulfonic acid and salts thereof, dihydroxymethoxybenzophenone, dihydroxymethoxybenzophenone sodium sulfonate, dihydroxybenzophenone , Tetrahydroxybenzophenone, 4- tert -butyl-4'-methoxydibenzoylmethane, 2,4,6-trianilino- p- (carbo-2'-ethylhexyl-1'-oxy) -1 , 3,5-triazine, 2- (2-hi And the like can be mentioned hydroxy-5-methylphenyl) benzotriazole.

살균제로서는 히노키티올, 트리클로산, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 크로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살리칠산, 진크필리티온, 염화벤잘코늄, 감광소 301 호, 모노니트로과이어콜나트륨, 운데시렌산 등을 들 수 있다.As fungicides, hinokithiol, trichloric acid, trichlorohydroxydiphenyl ether, chlorhexidine gluconate, phenoxyethanol, resorcin, isopropylmethylphenol, azulene, salicylic acid, ginxitlionone, benzalkonium chloride, photosensitive Sodium No. 301, sodium mononitroguicol, undecylenic acid, and the like.

산화 방지제로서는 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필, 엘리소르빈산 등을 들 수 있다.Examples of the antioxidant include butylhydroxyanisole, propyl gallic acid, and erythorbic acid.

pH 조정제로서는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨, 인산일수소나트륨 등을 들 수 있다.Examples of the pH adjuster include citric acid, sodium citrate, malic acid, sodium malate, fmaric acid, sodium pmarate, succinic acid, sodium succinate, sodium hydroxide, sodium dihydrogen phosphate, and the like.

알코올로서는 세틸알코올 등의 고급 알코올을 들 수 있다.Examples of the alcohol include higher alcohols such as cetyl alcohol.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가 능하지만, 총무게에 대하여 바람직하게는 0.01 - 5 % 중량 백분율, 보다 바람직하게는 0.01 - 3 % 중량 백분율로 배합된다.Moreover, the compounding component which may be added other than this is not limited to this, In addition, although all the said components can be mix | blended within the range which does not impair the objective and effect of this invention, Preferably it is 0.01-5% weight with respect to gross weight. Percentage, more preferably 0.01-3% by weight.

본 발명의 화장료는 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다.The cosmetic of the present invention may take the form of a solution, an emulsion, a viscous mixture, or the like.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 화합물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함한다.Ingredients included in the cosmetic composition of the present invention may include components commonly used in cosmetic compositions in addition to the compound as an active ingredient, for example, conventional auxiliary agents such as stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments and flavorings. And carriers.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액, 모발화장료 등을 들 수 있다.The cosmetic composition of the present invention may be prepared in any formulation commonly prepared in the art, and includes, for example, milky lotion, cream, lotion, pack, foundation, lotion, essence, hair cosmetic, and the like.

구체적으로, 본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저의 제형을 포함한다.Specifically, the cosmetic composition of the present invention skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, lotion, milk lotion, moisturizing lotion, nutrition lotion, massage cream, nutrition cream, moisturizing cream, hand cream, foundation, essence, nutrition essence, Formulations of packs, soaps, cleansing foams, cleansing lotions, cleansing creams, body lotions and body cleansers.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a paste, cream or gel, animal carriers, vegetable fibers, waxes, paraffins, starches, tracantes, cellulose derivatives, polyethylene glycols, silicones, bentonites, silicas, talc or zinc oxide, etc. may be used as carrier components. Can be.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이 용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.When the formulation of the present invention is a powder or a spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used, in particular, in the case of a spray, additionally chlorofluorohydrocarbon, propane Propellant such as butane or dimethyl ether.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.When the formulation of the present invention is a solution or emulsion, a solvent, solvating or emulsifying agent is used as the carrier component, such as water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1 Fatty acid esters of, 3-butylglycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or sorbitan.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.When the dosage form of the present invention is a suspension, liquid carrier diluents such as water, ethanol or propylene glycol, suspending agents such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, microcrystalline Cellulose, aluminum metahydroxy, bentonite, agar or tracant and the like can be used.

본 발명의 제형이 계면 활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a surfactant-containing cleansing, the carrier component is an aliphatic alcohol sulfate, an aliphatic alcohol ether sulfate, a sulfosuccinic acid monoester, isethionate, an imidazolinium derivative, a methyltaurate, a sarcosinate, a fatty acid amide ether. Sulfates, alkylamidobetaines, aliphatic alcohols, fatty acid glycerides, fatty acid diethanolamides, vegetable oils, linolin derivatives or ethoxylated glycerol fatty acid esters and the like can be used.

본 발명의 저분자량 히알루론산 또는 그 염은 피부외용 약학조성물 또는 화장료 조성물 총 무게에 대하여 0.001 내지 90 중량%, 바람직하게는 0.01 내지 10 중량%로 사용이 가능하다. The low molecular weight hyaluronic acid or salt thereof of the present invention may be used in an amount of 0.001 to 90% by weight, preferably 0.01 to 10% by weight, based on the total weight of the external skin pharmaceutical composition or cosmetic composition.

이하, 본 발명을 하기 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail by the following Examples and Experimental Examples.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.However, the following Examples and Experimental Examples are merely illustrative of the present invention, and the content of the present invention is not limited by the following Examples and Experimental Examples.

실시예Example 1. 효능평가 시험을 위한 조성물의 제조 1. Preparation of composition for efficacy evaluation test

하기 표 1의 조성예로 화장료 조성물(조성예 1, 2 및 비교조성예 1)을 제조하였다.A cosmetic composition (composition examples 1 and 2 and comparative composition example 1) was prepared in the composition example of Table 1 below.

번호number 원 료Raw material 조성예 1Composition example 1 조성예 2Composition example 2 조성예 3Composition example 3 비교 조성예 1Comparative composition example 1 (중량 %)(weight %) 1One 저분자량 히알루론산 (무게평균 분자량 5,000 달톤)  Low molecular weight hyaluronic acid (weight average molecular weight 5,000 daltons) 0.50.5 -- -- -- 22 저분자량 히알루론산 나트륨염 (무게평균 분자량 5,000 달톤)  Low molecular weight sodium hyaluronate salt (weight average molecular weight 5,000 daltons) -- 0.50.5 -- -- 33 고분자량 히알루론산 (무게평균 분자량 1.1 × 106 달톤)High molecular weight hyaluronic acid (weight average molecular weight 1.1 × 10 6 daltons) -- -- 0.50.5 -- 44 스테아린산Stearic acid 0.50.5 0.50.5 0.50.5 0.50.5 55 세틸알코올Cetyl alcohol 0.80.8 0.80.8 0.80.8 0.80.8 66 글리세릴모노스테아레이트Glyceryl Monostearate 2.02.0 2.02.0 2.02.0 2.02.0 77 폴리옥시에틸렌소르비탄모노스테아레이트Polyoxyethylene sorbitan monostearate 0.50.5 0.50.5 0.50.5 0.50.5 88 솔비탄세스퀴올레이트Sorbitan sesquioleate 0.20.2 0.20.2 0.20.2 0.20.2 99 스쿠알란Squalane 8.08.0 8.08.0 8.08.0 8.08.0 1010 왁스Wax 0.60.6 0.60.6 0.60.6 0.60.6 1111 카르복시비닐폴리머Carboxy Vinyl Polymer 0.10.1 0.10.1 0.10.1 0.10.1 1212 글리세린glycerin 2.02.0 2.02.0 2.02.0 2.02.0 1313 트리에탄올아민Triethanolamine 0.10.1 0.10.1 0.10.1 0.10.1 1414 정제수Purified water 잔량Remaining amount 잔량Remaining amount 잔량Remaining amount 잔량Remaining amount system 100.0100.0 100.0100.0 100100 100100

실험예Experimental Example 1. 피부장벽 회복 시험  1. Skin Barrier Recovery Test

1-1. 실험동물의 준비1-1. Preparation of Laboratory Animals

6주령의 수컷 무모생쥐(Skh/hrl)를 (주) 샘타코 (경기도 오산시, Korea)에서 공급받아 클린 케이지에 약 5일간 적응시켜 실험하였으며, 물과 사료((주) 샘타코, 경기도 오산시, Korea)는 자유롭게 섭취하도록 하였고, 온도( 23 ± 2 ℃ ), 습도( 55 ± 10 % ) 및 명암주기는 12 시간으로 자동으로 조절되도록 하였다.Six-week-old male hairless mice (Skh / hrl) were supplied from Samtaco (Osan, Gyeonggi-do, Korea) and adapted to a clean cage for about 5 days. Water and feed (Samtaco, Osan, Gyeonggi-do) Korea) was freely ingested, temperature (23 ± 2 ℃), humidity (55 ± 10%) and contrast period was automatically adjusted to 12 hours.

1-2. 피부장벽 회복 시험1-2. Skin Barrier Recovery Test

상기 표 1의 조성예로 제조한 조성예 1, 조성예 2, 조성예 3 및 비교 조성예 1의 손상피부에 대한 피부장벽의 회복에 미치는 효과를 평가하기 위해, 상기 실험예 1-1의 무모생쥐의 등(2 × 2 cm, 4개 구획)에 아세톤을 1일 2회씩 5일 동안 주기적으로 도포하여 무모생쥐 등피부의 장벽기능을 손상시킨 다음, 베이포미터(Vapometer, delfin 사)로 경피수분손실량(TEWL, transepidermal water loss)을 측정하여 피부장벽 회복효과를 평가하였다. 손상된 피부의 최초(0 시간)의 TEWL을 측정하고, 이후 조성예 1, 조성예 2, 조성예 3 및 비교조성예 1을 2.5 ul/cm2 씩 도포한 후, 건조시킨 다음, 각 1, 7, 12, 24, 36, 48 시간에 각 도포부위의 TEWL을 베이포메터로 측정하였다. 측정단위는 g/m2hr이며, 모든 TEWL 실험은 온도 23~25℃및 상대습도 38~42%에서 시행하였다. In order to evaluate the effect on the recovery of the skin barrier on the damaged skin of Composition Example 1, Composition Example 2, Composition Example 3 and Comparative Composition Example 1 prepared by the composition examples of Table 1, the hair loss of Experimental Example 1-1 Acetone was applied to the back of the mouse (2 × 2 cm, 4 compartments) twice a day for 5 days to impair the barrier function of the back skin of the hairless mice, and then percutaneously with a vaometer (Vapometer, delfin). The recovery of skin barrier was evaluated by measuring the amount of water loss (TEWL, transepidermal water loss). The TEWL of the first (0 hour) of damaged skin was measured, and then 2.5 ul / cm 2 of Composition 1, Composition 2, Composition 3, and Comparative Composition 1 were obtained. After each application, it was dried and the TEWL of each coating site was measured with a vapor meter at 1, 7, 12, 24, 36 and 48 hours. The unit of measurement was g / m 2 hr. All TEWL experiments were conducted at 23-25 ℃ and 38-42% relative humidity.

그 실험결과, 조성예 1 및 2를 도포한 처리군이 비교조성예 1을 도포한 군에 비하여 더 빠르게 장벽손상을 회복시켜 정상 피부로 되돌리는 것을 확인할 수 있었다. 반면, 조성예 3을 도포한 처리군은 비교조성예 1을 도포한 처리군에 비하여 약간 우수할 뿐, 조성예 1 및 조성예 2를 도포한 처리군에 비하여 손상회복효과가 미비하였다. 이는 고분자량 히알루론산의 피부흡수도가 저분자량 히알루론산에 비하여 낮은 점에서 기인하는 것으로 사료된다. (도 1 참조)As a result of the experiment, it was confirmed that the treatment groups coated with Composition Examples 1 and 2 recovered barrier damage faster and returned to normal skin than the group coated with Comparative Composition 1. On the other hand, the treatment group coated with Composition Example 3 was only slightly better than the treatment group coated with Comparative Composition Example 1, and the damage recovery effect was inferior to the treatment groups coated with Composition Examples 1 and 2. This may be due to the fact that the skin absorption of high molecular weight hyaluronic acid is lower than that of low molecular weight hyaluronic acid. (See Figure 1)

실험예Experimental Example 2.  2. 피부보습력Skin moisture 시험 exam

피험자 20명을 대상으로 상기 실시예 1의 표 1의 조성예로 제조한 조성예 1, 조성예 2, 조성예 3 및 비교조성예 1로 제조된 화장료 조성물의 피부 보습력을 하기와 같이 측정하였다. 측정기기로 코네오미터(Corneometer CM820: Courage , Khazaka 사)를 이용하여 수분함량에 따른 피부의 정전부하용량을 측정함으로써 피부 보습력을 평가하였다. The skin moisturizing power of the cosmetic composition prepared in the composition example 1, composition example 2, composition example 3 and comparative composition example 1 prepared in the composition example of Table 1 of Example 1 was measured as follows. The skin moisturizing power was evaluated by measuring the electrostatic load capacity of the skin according to moisture content using a corneometer (Corneometer CM820: Courage, Khazaka) as a measuring device.

각 피험자들은 실험 전 실험부위를 물로 세정한 후, 30분 동안 외적환경에 적응시켰다. 실험 환경조건은 실내온도 23~25℃ 및 상대습도 38~42%로 동일하게 유지하였다. 시료를 각각 10 ul씩 상완 내측(2 × 2 cm) 로 도포하고, 1분간 건조시킨 다음, 각 도포부위에 정제수 20 ul씩 도포하고, 티슈로 수분을 닦아낸 직후로부터 1분 간격으로 0분에서 10분까지 각 도포 부위의 피부표면의 정전용량을 코네오미터로 측정하여 전도도(conductance, %)를 하기 수학식 1에 따라 계산하였다.Each subject was rinsed with water before the experiment and allowed to adjust to external environment for 30 minutes. Experimental environmental conditions were kept the same at room temperature 23-25 ℃ and relative humidity 38-42%. 10 ul each sample was applied to the inside of the upper arm (2 × 2 cm), dried for 1 minute, and then 20 ul of purified water was applied to each application site, and at 0 minutes at 1 minute intervals immediately after wiping off the moisture with a tissue. The capacitance of the skin surface of each application site up to 10 minutes was measured with a coneometer and the conductivity (%) was calculated according to the following Equation 1.

전도도 (%) = 각 분당 5회 측정 평균 Cv 값 - 시료적용 전 Cv 값 / 시료 적용 직후 (0분) 측정된 값 - 시료적용 전 Cv 값 × 100Conductivity (%) = average Cv value measured 5 times per minute-Cv value before sample application / immediately after sample application (0 minutes)-Cv value before sample application × 100

그 실험결과, 하기 표 2에서 보이는 바와 같이, 일반적으로 우수한 보습력을 가지고 있다고 알려진 고분자량 히알루론산을 함유하는 조성예 3이 가장 우수한 피부보습력을 보여주었으며, 그 다음으로 조성예 1 및 조성예 2이 조성예 3에 비하여 약간 낮지만 비교 조성예 1보다는 우수한 피부보습력를 보여주어 저분자량 히알루론산 역시 우수한 피부보습력를 가지고 있음을 알 수 있었다.As a result of the experiment, as shown in Table 2, Composition Example 3 containing high molecular weight hyaluronic acid generally known to have excellent moisturizing power showed the best skin moisturizing power, and then Composition Example 1 and Composition 2 Although slightly lower than that of Composition Example 3, it showed excellent skin moisturizing ability than Comparative Composition Example 1, and it was found that low molecular weight hyaluronic acid also has excellent skin moisturizing ability.

시 료 시 간(분)         Sample time (minutes) 조성예 1Composition example 1 조성예 2Composition example 2 조성예 3Composition example 3 비교조성예 1Comparative Composition 1 00 100.00 100.00 100.0100.0 100.00 100.00 100.0100.0 1One 75.2175.21 73.43 73.43 80.27 80.27 67.0967.09 22 64.2964.29 57.7057.70 72.14 72.14 57.61 57.61 33 62.3362.33 57.26 57.26 68.9768.97 48.80 48.80 44 51.29 51.29 48.2148.21 59.6559.65 37.14 37.14 55 44.9044.90 42.92 42.92 51.2851.28 32.02 32.02 66 41.7441.74 39.87 39.87 46.2446.24 25.42 25.42 77 39.5439.54 36.89 36.89 44.1244.12 20.13 20.13 88 35.3135.31 32.94 32.94 40.8640.86 20.60 20.60 99 33.8933.89 31.45 31.45 39.2739.27 19.20 19.20 1010 31.6731.67 30.88 30.88 39.4239.42 19.71 19.71

실험예Experimental Example 3. 3. 세포독성에 관한 실험Cytotoxicity Test

저분자 히알루론산 및 그 염에 대한 세포독성을 알아보기 위하여 섬유아세포(Human Skin fibroblast, ATCC, CRL-2310)를 배양하여 MTT 분석법[3-(4,5-dimethylthylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide reduction test]을 문헌에 기재된 방법을 응용하여 하기와 같이 수행하였다(T. Mosmann et al,, J. Immunol. Methods, 65, p55, 1983).MTT assay [3- (4,5-dimethylthylthiazol-2-yl) -2,5 by culturing fibroblasts (Human Skin fibroblast, ATCC, CRL-2310) to investigate the cytotoxicity of low molecular weight hyaluronic acid and its salts -diphenyltetrazolium bromide reduction test] was performed using the method described in the literature (T. Mosmann et al, J. Immunol. Methods , 65 , p55, 1983).

3-1. 세포배양3-1. Cell culture

사람 섬유아세포를 5x104 개/ml의 농도로 하여 24웰 배양판에 접종하였다. 배지는 소태아혈청(FBS, fetale bovine serum) 10%를 함유한 DMEM(Dubelcco'S Modified Eagle Medium; BRL, USA)를 사용하였다. Human fibroblasts were seeded in 24-well culture plates at a concentration of 5 × 10 4 / ml. Medium was used DMEM (Dubelcco'S Modified Eagle Medium; BRL, USA) containing 10% fetal bovine serum (FBS).

접종 24시간 후, 소태아혈청 2%를 함유한 DMEM으로 교체하고, 저분자량 히알루론산 및 그 염의 시료를 농도별로 첨가한 후 3일 동안 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 배양하였다. 24 hours after the inoculation, the cells were replaced with DMEM containing 2% fetal bovine serum, and samples of low molecular weight hyaluronic acid and salts thereof were added at different concentrations , and then cultured in a 37 ° C., 5% CO 2 incubator for 3 days.

3-2. 세포생존율 측정3-2. Cell viability measurement

상기 실험예 3-1의 배양된 세포의 상등액을 제거하고 다시 5% 인산완충용액(PBS, phosphate buffered saline) 200ul씩을 가하여 세척하였다. The supernatant of the cultured cells of Experimental Example 3-1 was removed and washed again by adding 200ul of 5% phosphate buffered saline (PBS).

MTT(시그마 사, USA)용액을 웰(well)당 1.0㎖씩 가한 후, 4시간 후에 MTT를 제거하고 DMSO(dimethyl sulfoxide)를 웰당 1.0㎖씩 가한 후, 12시간 37℃에서 인큐베이션 후 570nm에서 흡광도를 측정하였다. MTT (Sigma, USA) solution was added 1.0 ml per well, MTT was removed after 4 hours and DMSO (dimethyl sulfoxide) was added 1.0 ml per well, followed by incubation at 37 ° C. for 12 hours and absorbance at 570 nm. Was measured.

세포의 생존율은 하기 수학식 2에 따라 계산하였다. Cell viability was calculated according to the following equation.

세포생존률(Cell viability)(%) = 시료 OD570nm 값 / 대조구 OD570nm 값 × 100Cell viability (%) = sample OD 570 nm value / control OD 570 nm value × 100

그 실험결과, 1,000 ug/ml의 농도 범위에서 저분자량 히알루론산 및 그의 염 이 섬유아세포에 대해서 전혀 독성이 없음을 알 수 있었다. 따라서, 이 후 세포 실험에 있어서 최고 농도를 1,000 ug/ml로 하여 실험을 수행하였다. (도 2 참조)As a result, it was found that low molecular weight hyaluronic acid and its salts were not toxic to fibroblasts in the concentration range of 1,000 ug / ml. Therefore, the experiment was then performed with the highest concentration of 1,000 ug / ml in the cell experiment. (See Figure 2)

실험예Experimental Example 4.  4. 엘라스타제Elastase 억제 효과  Inhibitory effect

저분자량 히알루론산 및 그 염에 대하여 이 등의 방법에 따라 엘라스타제 활성저해 효과를 하기와 같이 측정하였다(Lee et al. J. Cosmetic Science, 49, pp285-297, 1998).The low-molecular-weight hyaluronic acid and its salts were measured as follows according to the method of elastase inhibitory activity (Lee et al. J. Cosmetic Science , 49 , pp 285-297, 1998).

완충액은 0.267M 염산 (HCl)액으로 pH 8.0이 되도록 조정한 0.267M 트리스(Tris) 액을 사용하였으며, 기질액은 엘라스타제 기질 Succ-Ala-Ala-Ala-p-니트로아닐라이드(nitroanilide) 표준품(시그마사, USA)을 8.8 mM로 제조한 것을 사용하였고, 효소액으로는 돼지 췌장 엘라스타제(Porcine Pancreatic Elastase) 표준품을 10 ㎍/㎖가 되도록 제조한 것을 사용하였다.The buffer solution was 0.267M Tris solution adjusted to pH 8.0 with 0.267M hydrochloric acid (HCl) solution, and the substrate solution was the elastase substrate Succ-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide. A standard product (Sigma, USA) was prepared at 8.8 mM, and the enzyme solution was prepared such that porcine pancreatic elastase standard product was 10 μg / ml.

엘라스타제 활성을 측정하기 위하여, 완충액 60 ㎕에 기질액 20 ㎕, 시료 100 ㎕를 넣어 섞고, 효소액 20㎕를 넣어 흔들어 섞어 25℃에서 15분간 반응시키고, p-니트로아닐린(nitroaniline)의 생성량은 파장 410 nm에서 흡광도(B)를 측정하여 구하였다.In order to measure the elastase activity, 60 μl of the buffer solution was mixed with 20 μl of substrate solution and 100 μl of sample, and 20 μl of enzyme solution was mixed and shaken to react for 15 minutes at 25 ° C., and the amount of p -nitroaniline was produced. Absorbance (B) was measured and measured at a wavelength of 410 nm.

또한, 완충액 60 ㎕에 기질액 20 ㎕, 정제수 20 ㎕ 및 시료 100 ㎕를 넣어 위와 같은 방법으로 조작하여 얻은 용액을 대조액으로 하여 흡광도(C)를 측정하였다.In addition, absorbance (C) was measured using 60 µl of the buffer solution, 20 µl of the substrate solution, 20 µl of purified water and 100 µl of the sample.

따로 시료 대신 정제수 100 ㎕를 가지고 검액과 같은 방법으로 조작하여 얻 은 액을 공시험액으로 하여 그 흡광도(A)를 측정하였다.Separately, the absorbance (A) was measured using 100 μl of purified water instead of the sample, which was obtained by the same method as the test solution.

효소액 및 검액 대신 정제수 120 ㎕를 넣어 검액과 같은 방법으로 조작하여 얻은 액을 색보정액으로 하여 그 흡광도(D)를 측정하였다. 120 μl of purified water was added instead of the enzyme solution and the sample solution, and the absorbance (D) was measured using the solution obtained by the same method as the sample solution as the color correction solution.

하기 수학식 3에 따라 엘라스타제 억제율(%)을 구하고, 그 실험결과를 하기 표 3에 기재하였다. Elastase inhibition rate (%) was calculated according to the following Equation 3, and the experimental results are shown in Table 3 below.

엘라스타제 저해율(%) = [1 - (B-C)/(A-D)] × 100% Elastase Inhibition = [1-(B-C) / (A-D)] × 100

시료sample 무게평균 분자량Weight average molecular weight IC50 (ug/ml)IC 50 (ug / ml) 저분자량 히알루론산 Low molecular weight hyaluronic acid 2,0502,050 453453 5,0005,000 510510 8,3008,300 572572 저분자량 히알루론산 나트륨염 Low Molecular Weight Sodium Hyaluronate 2,1002,100 461461 5,0005,000 497497 8,1008,100 583583

실험예Experimental Example 5.  5. 콜라게나제Collagenase 억제 효과 Inhibitory effect

시험관 내에서 콜라게나제 효소에 대한 억제 효과를 알아보기 위하여 한국등록특허 10-0515418에 공지된 방법을 응용하여 하기와 같이 실험을 수행하였다. In order to determine the inhibitory effect on collagenase enzyme in vitro, the experiment was performed by applying a method known in Korea Patent No. 10-0515418.

저분자량 히알루론산 및 그 염의 실험 농도는 500 ug/ml 및 최고 실험 가능농도인 1,000 ug/ml으로 하였다. 아조 염색약 함유 콜라겐(Azo dye-impregnated collagen; 시그마 사) 5 mg과 0.1M 인산칼륨 완충용액(pH 7.8) 1ml에 시료를 500 ul를 첨가한 후, 정제수로 총 부피가 2ml가 되게 하였다. Experimental concentrations of low molecular weight hyaluronic acid and its salts were set to 500 ug / ml and the highest experimental concentration of 1,000 ug / ml. 500 mg of the sample was added to 5 mg of azo dye-impregnated collagen (Sigma) and 1 ml of 0.1 M potassium phosphate buffer (pH 7.8), and the total volume was made to be 2 ml with purified water.

그 후, 37℃에서 1 분간 전처리를 하고 콜라게나제(타입 IA, 시그마 사)를 최종 0.01 단위(unit)가 되게 넣어 준 후, 20분간 반응시켰다. Thereafter, pretreatment was performed at 37 ° C. for 1 minute, and collagenase (type IA, Sigma Co., Ltd.) was added to a final 0.01 unit, followed by reaction for 20 minutes.

얼음물에 냉침시킨 후, 3,500rpm에서 10분간 원심 분리하여 상층액의 흡광도를 520 nm에서 측정하였다. 대조군은 시료 대신 DMSO(시료를 녹인 용매) 500 ul를 첨가한 후, 정제수로 총 부피가 2 ml가 되게 하여 사용하였다. After cooling in ice water, the absorbance of the supernatant was measured at 520 nm by centrifugation at 3,500 rpm for 10 minutes. As a control, 500 ul of DMSO (sample dissolved solvent) was added instead of the sample, and the total volume was 2 ml with purified water.

측정된 흡광도를 이용히여 하기 수학식 4에 따라 콜라게나제 저해율(%)를 계산하였다. (표 4 참조)Using the measured absorbance, the collagenase inhibition rate (%) was calculated according to Equation 4 below. (See Table 4)

저분자량 히알루론산 및 그 나트륨염의 각 시료에 대한 콜라게나제 저해 효과는 큰 차이가 없었고, 모두 500 ug/ml 농도에서 50%가 넘는 저해 효과를 보이고 있어 주름 생성을 탁월하게 억제할 수 있음을 확인하였다.The collagenase inhibitory effect of each sample of low molecular weight hyaluronic acid and its sodium salt was not significantly different, and all showed an inhibitory effect of more than 50% at the concentration of 500 ug / ml. It was.

콜라게나제 저해율(%) Collagenase inhibition rate (%)

= [1 - (각 농도 시료의 효소 활성도/대조군의 효소 활성도)] × 100= [1-(enzyme activity of each concentration sample / enzyme activity of control)] × 100

시료sample 무게평균 분자량Weight average molecular weight 콜라게나제 저해율 (%)Collagenase Inhibition Rate (%) 500 ug/ml500 ug / ml 1,000 ug/ml 1,000 ug / m l 저분자량 히알루론산 Low molecular weight hyaluronic acid 2,0502,050 72.372.3 75.475.4 5,0005,000 51.351.3 66.866.8 8,3008,300 50.250.2 57.957.9 저분자량 히알루론산 나트륨염 Low Molecular Weight Sodium Hyaluronate 2,1002,100 65.265.2 72.772.7 5,0005,000 50.150.1 60.960.9 8,1008,100 51.351.3 58.658.6

실험예Experimental Example 6.  6. MMPMMP -1 -One mRNAmRNA 발현 저해 효과 Expression inhibitory effect

피부내의 콜라겐 붕괴를 촉진하는 메트릭스 메탈로프로티나제(Matrix Metallo-Preoteinase)-1에 대한 유전자 발현 저해 효과를 알아보기 위해 문헌에 기재된 방법을 응용하여 하기와 같은 방법으로 역전사 중합효소 연쇄반응(RT-PCR, Reverse transcription - polymerase chain reaction)을 실시하였다(Choe T. et al., J. Cosmet . Sci., 54, pp229-238, 2003). To investigate the gene expression inhibitory effect on Matrix Metallo-Preoteinase-1 that promotes collagen breakdown in the skin, the method described in the literature was applied to reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT). -PCR, Reverse transcription-polymerase chain reaction (Choe T. et al., J. Cosmet . Sci ., 54 , pp 229-238, 2003).

소디움 니트로프루사이드(SNP, Sodium Nitroprusside, 시그마 사)는 세포내에서 산화질소를 발생시키는 물질로서 사용되며(Brune B and Lapetina EG., J. Biol. Chem., 264, pp8455-8458, 1989), 사람 섬유아세포에서 MMP-1과 2의 발현을 증가시킨다. 또한 산화질소는 다기능성 메신저로서 작용하여 MMP-1, SNP에 의해 유도성 산화질소 생성 효소(iNOS, inducible Nitric Oxide Synthase)가 활성화되면 세포내 산화질소의 양이 증가하여 MMP의 발현이 증가된다고 보고되어 있다(Choe T et al., J. Cosmet . Sci., 54, pp.229-238, 2003).Sodium Nitroprusside (SNP) is used as a substance that generates nitric oxide in cells (Brune B and Lapetina EG., J. Biol. Chem ., 264 , pp8455-8458, 1989). , Increases the expression of MMP-1 and 2 in human fibroblasts. In addition, nitric oxide acts as a multifunctional messenger, and when MMP-1 and SNP are activated by inducible nitric oxide synthase (iNOS), the amount of intracellular nitric oxide increases and thus the expression of MMP is increased. (Choe T et al., J. Cosmet . Sci ., 54 , pp . 229-238 , 2003).

6-1. 세포배양6-1. Cell culture

섬유아세포를 100mm 디쉬에 1 x 106개/ml의 밀도로 분주한 후, 24시간동안 37℃에서 배양하였다. 소디움 니트로프루사이드 50 uM을 산화질소의 공급원으로 사용하여 배지에 첨가하고 저분자량 히알루론산 및 그 염을 1,000 ug/ml의 농도가 되게 첨가하였으며, 대조군으로 EGCG 25 uM을 첨가한 뒤 각각 24시간 동안 37℃에서 배양하였다. Fibroblasts were dispensed at a density of 1 × 10 6 cells / ml in 100 mm dishes and then incubated at 37 ° C. for 24 hours. Sodium nitroprusside 50 uM was added to the medium using a source of nitric oxide and low molecular weight hyaluronic acid and its salt were added to a concentration of 1,000 ug / ml, and EGCG 25 uM was added as a control for 24 hours each. Incubated at 37 ° C.

6-2. RNA 분석6-2. RNA analysis

세포의 배지를 제거하고 트리졸(Trizol; 인비트로젠 사) 1ml를 첨가하여 인비트로젠 사의 RNA 분리법에 따라 RNA를 분리하였다. 자외선 검출기를 이용하여 260nm에서 정량한 후, 역전사 중합효소 연쇄반응을 실시하였다. 역전사 중합효소 연쇄반응은 올인원 역전사 중합효소 연쇄반응 키트(All-in-one RT-PCR kit; 수퍼바이오 사)를 사용하였고, 프라이머와 반응 조건은 하기 표 5 및 표 6과 같으며, 올인원 역전사 중합효소 연쇄반응 키트의 메뉴얼에 따라 실험하였다. Cells were removed from the medium and 1 ml of Trizol (Invitrogen) was added to separate RNA according to the RNA separation method of Invitrogen. After quantification at 260nm using an ultraviolet detector, reverse transcription polymerase chain reaction was performed. Reverse transcription polymerase chain reaction was used an all-in-one reverse transcription polymerase chain reaction kit (All-in-one RT-PCR kit; Superbio), the primers and the reaction conditions are shown in Table 5 and Table 6 below, all-in-one reverse transcription polymerization The experiment was carried out according to the manual of the enzyme chain reaction kit.

MMP-1 프라이머MMP-1 Primer 센스sense Seq. ID 1: 5'-TGGGAGCAAACACATCTGA-3'Seq. ID 1: 5'-TGGGAGCAAACACATCTGA-3 ' 안티센스 Antisense Seq. ID 2: 5'-ATCACTTCTCCCCGAATCGT-3'Seq. ID 2: 5'-ATCACTTCTCCCCGAATCGT-3 ' 반응 조건Reaction conditions 50℃에서 30분간 역전사 후, 96℃에서 3분간 역전사 효소를 불활성화, 94℃ 1분, 48℃ 1분, 72℃ 1분간 29 싸이클(cycle)로 중합 반응.After reverse transcription at 50 ° C. for 30 minutes, the reverse transcriptase was inactivated at 96 ° C. for 3 minutes, followed by polymerization at 29 cycles of 94 ° C. for 1 minute, 48 ° C. for 1 minute, and 72 ° C. for 1 minute.

액틴(Actin) 프라이머 Actin primer 센스sense Seq. ID 3: 5'-GAGACCTTCAACACCCCAGCC-3'Seq. ID 3: 5'-GAGACCTTCAACACCCCAGCC-3 ' 안티센스 Antisense Seq. ID 4: 5'-GGCCATCTCTTGCTCGAAGTC-3'Seq. ID 4: 5'-GGCCATCTCTTGCTCGAAGTC-3 ' 반응 조건Reaction conditions 50℃에서 30분간 역전사 후, 96℃에서 3분간 역전사 효소를 불활성화, 94℃ 1분, 62℃ 1분, 72℃ 1분간 22 싸이클(cycle)로 중합 반응After reverse transcription at 50 ° C for 30 minutes, inactivation of reverse transcriptase at 96 ° C for 3 minutes, polymerization reaction at 22 cycles of 94 ° C for 1 minute, 62 ° C for 1 minute, and 72 ° C for 1 minute

MMP-1 발현 억제 효과를 측정한 실험결과는 액틴에 대해 보정을 하여 나타내었고, 하기 표 7에서 보이는 바와 같이, 소디움 니트로프루사이드로 유도된 MMP-1의 활성을 저분자량 히알루론산 및 그 염이 탁월하게 억제시킴을 확인할 수 있었다.Experimental results of the MMP-1 expression inhibitory effect was shown by correcting for actin, as shown in Table 7 below, low-molecular-weight hyaluronic acid and its salts to show the activity of MMP-1 induced by sodium nitroprusside This excellent inhibition was confirmed.

시료 sample 무게평균 분자량Weight average molecular weight MMP-1 발현정도 (%, 액틴에 대해 보정한 값)MMP-1 expression level (%, corrected for actin) 대조군Control 100100 소디움 니트로프루사이드 (SNP)Sodium Nitroprusside (SNP) 133133 SNP + 저분자 히알루론산 1,000 ug/mlSNP + Low Molecular Hyaluronic Acid 1,000 ug / ml 2,0502,050 5757 5,0005,000 6363 8,3008,300 6565 SNP + 저분자 히알루론산나트륨염 1,000 ug/mlSNP + Low Molecular Hyaluronic Acid Salt 1,000 ug / ml 2,1002,100 6161 5,0005,000 6868 8,1008,100 6868 SNP + EGCG 25uMSNP + EGCG 25uM 6060

실험예Experimental Example 7. 염증억제효과 측정 7. Inflammation inhibitory effect

생쥐의 대식세포인 Raw264.7 세포를 이용하여 염증의 억제 효과를 문헌에 기재된 방법을 응용하여 하기과 같이 측정하였다(Green L. et al., Anal. Biochem ., 126, pp131-138, 1982). Raw264.7 cells, which are macrophages of mice, were used to measure the inhibitory effect of inflammation as described below (Green L. et al., Anal. Biochem ., 126 , pp131-138, 1982).

지질다당으로 염증을 유도하고, 유도성 산화질소 생성 효소의 활성 및 COX -2(Cyclooxygenase-2) 유전자 발현을 확인하였다.     Inflammation was induced with lipopolysaccharide, and the activity of inducible nitric oxide producing enzyme and COX-2 (Cyclooxygenase-2) gene expression were confirmed.

7-1. 세포 배양7-1. Cell culture

페놀-레드(phenol-red)가 들어있지 않은 소태아혈청 10%를 함유한 DMEM에 세포 8 x 105개/ml를 현탁시켜 24웰 배양판에 접종하여 부착시켰다. 하루 후, 시료를 100 ug/ml, 500 ug/ml 및 1,000 ug/ml의 농도별로 처리하여 18시간 배양하고, 1 ug/ml의 지질다당(LPS, lipopolysaccharide; 시그마 사)을 처리하여 세포 염증을 유발한 후, 24시간 동안 배양하였다. 8 x 10 5 cells / ml of the cells were suspended in DMEM containing 10% fetal bovine serum without phenol-red and inoculated in a 24-well culture plate. One day later, the samples were treated at 100 ug / ml, 500 ug / ml and 1,000 ug / ml concentrations for 18 hours, and 1 ug / ml lipopolysaccharide (LPS, lipopolysaccharide; Sigma Co.) was treated for cellular inflammation. After induction, the cells were incubated for 24 hours.

7-2. 산화 질소 활성측정7-2. Nitric Oxide Activity Measurement

상기 실험예 7-1의 방법으로 배양된 세포의 상층액을 회수하여 96웰 플레이트에 100 ul씩 넣고 그리스 시약(Griess reagent; 시그마 사)을 동량 첨가하여 상온에서 10분간 가볍게 흔들어 준 다음, 570nm에서 흡광도를 측정하였다. 아질산 나트륨(Sodium nitrate; 알드리치 사, USA)를 표준품으로 하여 검량선을 작성하고, 각각의 시료를 100 ug/ml, 500 ug/ml 및 1,000 ug/ml의 농도로 처리한 배양액 중의 산화 질소 생성량을 구하였다. 지질다당을 처리한 군의 산화 질소의 생성량을 100%로 하여 각 시료의 생성량을 구하였다.      The supernatant of the cells cultured by the method of Experimental Example 7-1 was recovered, and 100 ul each was added to a 96-well plate, and the same amount of Greases reagent (Sigma) was added thereto, and gently shaken at room temperature for 10 minutes, followed by 570 nm. Absorbance was measured. A calibration curve was prepared using sodium nitrate (Aldrich, USA) as a standard, and the amount of nitric oxide produced in the culture solution of each sample at 100 ug / ml, 500 ug / ml and 1,000 ug / ml was determined. It was. The amount of nitrogen oxide produced in the lipopolysaccharide-treated group was 100% to determine the amount of each sample produced.

그 실험결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 저분자량 히알루론산 및 그 염은 농도 의존적으로 유도성 산화질소 생성 효소(iNOS, inducible Nitric Oxide Synthase)의 생성을 억제함을 확인할 수 있었다.      As a result, as shown in Figure 3, it was confirmed that low molecular weight hyaluronic acid and its salts inhibit the production of inducible nitric oxide synthase (iNOS) in a concentration-dependent manner.

7-3. COX-2 유전자 발현 측정7-3. COX-2 gene expression measurement

상기 실험예 7-1의 방법으로 배양된 세포의 배지를 제거하고 트리졸 (Trizol; 인비트로젠 사) 1ml를 첨가하여 인비트로젠 사의 RNA 분리법에 따라 RNA를 분리하고, 자외선 검출기를 이용하여 260nm에서 정량한 후, 역전사 중합효소 연쇄반응을 실시하였다. 역전사 중합효소 연쇄반응은 올인원 역전사 중합효소 연쇄반응 키트(All-in-one RT-PCR kit; 수퍼바이오 사)를 사용하였고, 프라이머와 반응 조건은 하기 표 8과 같으며 올인원 역전사 중합효소 연쇄반응 키트의 메뉴얼에 따라 실험하였다.      Remove the medium of the cells cultured by the method of Experimental Example 7-1 and add 1 ml of Trizol (Trizol; Invitrogen) to separate RNA according to the RNA separation method of Invitrogen, 260nm using an ultraviolet detector After quantification at, reverse transcription polymerase chain reaction was performed. Reverse transcription polymerase chain reaction was used for the All-in-one reverse transcription polymerase chain reaction kit (All-in-one RT-PCR kit; Superbio), the reaction conditions with the primers are shown in Table 8 below All-in-one reverse transcription polymerase chain reaction kit Experiment according to the manual.

COX-2 프라이머COX-2 primer 센스sense Seq. ID 5: 5'-CTGAAGCCCACCCCAAAC-3'Seq. ID 5: 5'-CTGAAGCCCACCCCAAAC-3 ' 안티센스 Antisense Seq. ID 6: 5'-AACCCAGGTCCTCGCTTATG-3'Seq. ID 6: 5'-AACCCAGGTCCTCGCTTATG-3 ' 반응 조건Reaction conditions 50℃에서 30분간 역전사 후, 96℃에서 3분간 역전사 효소를 불활성화, 94℃ 30초, 55℃ 30초, 72℃ 1분간 32 싸이클(cycle)로 중합 반응.After reverse transcription at 50 ° C. for 30 minutes, the reverse transcriptase was inactivated at 96 ° C. for 3 minutes, followed by polymerization at 32 cycles of 94 ° C. 30 seconds, 55 ° C. 30 seconds, and 72 ° C. for 1 minute.

COX-2 발현 억제 효과를 측정한 결과는 액틴에 대해 보정을 하여 나타내었고, 하기 표 9에서 보이는 바와 같이, 지질다당으로 유도된 COX-2의 활성을 저분자량 히알루론산 및 그 염이 탁월하게 억제시킴을 확인할 수 있었다.As a result of measuring the inhibitory effect of COX-2 expression was shown by correcting for actin, as shown in Table 9, low-molecular-weight hyaluronic acid and its salts inhibit the activity of lipopolysaccharide-induced COX-2. Sikkim could be confirmed.

시료 sample 무게평균분자량Weight average molecular weight COX-2발현 저해 효과 (%, 액틴에 대해 보정한 값)Inhibitory effect of COX-2 expression (%, corrected for actin) 대조군Control 100100 지질다당Lipopolysaccharide 148148 지질다당 + 저분자 히알루론산 1,000 ug/mlLipopolysaccharide + low molecular weight hyaluronic acid 1,000 ug / ml 2,0502,050 108108 5,0005,000 126126 8,3008,300 129129 지질다당 + 저분자 히알루론산 나트륨염 1,000 ug/mlLipopolysaccharide + Low Molecular Hyaluronic Acid Sodium Salt 1,000 ug / ml 2,1002,100 119119 5,0005,000 128128 8,1008,100 131131

실험예Experimental Example 8. 상처 치유 실험  8. Wound Healing Experiment

제제예Formulation example 8-1. 위약(placebo) 8-1. Placebo

(제제 1) (The first)

프로필렌글리콜 100.0mgPropylene Glycol 100.0mg

하이드록시프로필메틸셀룰로스 15.5mgHydroxypropylmethylcellulose 15.5mg

물 884.5mgWater 884.5mg

상기 성분들을 격렬히 교반하여 혼합한다. The components are mixed by vigorous stirring.

제제예Formulation example 8-2.  8-2. 저분자량Low molecular weight 히알루론산(무게평균 분자량 2,000) 0.25% Hyaluronic acid (weight average molecular weight 2,000) 0.25%

(제제 2) 저분자량 히알루론산(무게평균 분자량 2,050) 2.5 mg(Formulation 2) 2.5 mg of low molecular weight hyaluronic acid (weight average molecular weight 2,050)

프로필렌글리콜 99.0 mgPropylene Glycol 99.0 mg

하이드록시프로필메틸셀룰로스 15.5 mgHydroxypropylmethylcellulose 15.5 mg

물 883 mg883 mg of water

활성성분인 저분자량 히알루론산을 격렬히 교반하면서 물에 가한 후 여기에 다른 성분을 가한다. The low molecular weight hyaluronic acid as an active ingredient is added to water with vigorous stirring, and then other ingredients are added thereto.

제제예Formulation example 8-3.  8-3. 저분자량Low molecular weight 히알루론산(무게평균 분자량 5,000) 0.25% Hyaluronic acid (weight average molecular weight 5,000) 0.25%

(제제 3) 저분자량 히알루론산(무게평균 분자량 5,000) 2.5 mgPreparation 3 low molecular weight hyaluronic acid (weight average molecular weight 5,000) 2.5 mg

프로필렌글리콜 99.0 mgPropylene Glycol 99.0 mg

하이드록시프로필메틸셀룰로스 15.5 mgHydroxypropylmethylcellulose 15.5 mg

물 883 mg883 mg of water

활성성분인 저분자량 히알루론산을 격렬히 교반하면서 물에 가한 후 여기에 다른 성분을 가한다. The low molecular weight hyaluronic acid as an active ingredient is added to water with vigorous stirring, and then other ingredients are added thereto.

본 발명의 저분자량 히알루론산을 함유하는 상기 제제예 8-1, 8-2 및 8-3의 제제예를 이용하여 상처 치유 실험을 문헌에 기재된 방법을 응용하여하기와 같은 방법으로 시행하였다(Takami, M. et al., 藥劑學, 53(3), pp185, 1993).Wound healing experiments were carried out by applying the method described in the literature using the formulation examples of Formulation Examples 8-1, 8-2 and 8-3 containing the low molecular weight hyaluronic acid of the present invention (Takami , M. et al., Science, 53 (3) , pp 185, 1993).

평균 체중 150g의 6주령 수컷 위스터 쥐(wistar rat; (주) 샘타코, korea) 40마리를 사용하여 이를 각 10마리씩 4군으로 나누어 비교군, 제제 1 군(위약 군), 제제 2 군 및 제제 3 군으로 하여 실험하였다. 이들을 에테르로 마취시킨 후, 옆구리의 털을 뽑고 살균 처리한 다음, 펀치를 사용하여 흉부의 피부로부터 두 개의 원형 피부 박편(직경 1cm)을 떼어냄으로써 상처를 만들었다. 상기한 외과적 처치를 행한지 1일 후에 1일 1회의 치유를 시작하였다. Forty six-week-old male Wistar rats (Samtako, Korea) with an average body weight of 150 g were divided into four groups of ten animals each for comparison, group 1 (placebo), group 2, and Experiment was carried out as the formulation 3 group. After anesthesia with ether, the flanks were pulled and sterilized, and then wounds were made by using a punch to remove two circular skin flakes (1 cm in diameter) from the skin of the chest. Healing was started once a day 1 day after the above surgical procedure.

비교군은 마른 가아제 패드로, 제제 1 군(위약 군), 제제 2 군 및 제제 3 군은 각각의 시험제제인 제제예 8-1, 8-2 및 8-3의 성분으로 적신 가아제 패드로 상처부위를 덮고 접착 테이프로 고정시켜 실험 실시 10일 후, 상처의 완전 치유여부를 확인하였다.The comparative group was a dry gauze pad, and the formulation 1 group (placebo group), the formulation 2 group and the formulation 3 group were wound with the gauze pad moistened with the components of Formulation Examples 8-1, 8-2 and 8-3, respectively, of the test formulation. Covering the site and fixed with adhesive tape 10 days after the experiment, the wound was checked for complete healing.

처리군Treatment group 사용동물수Number of animals used 치유동물수Healing Animals 비교군Comparison 1010 33 제제 1 군Formulation group 1 1010 55 제제 2 군Formulation group 2 1010 88 제제 3 군Formulation group 3 1010 77

비교군의 상처 및 위약으로 처리한 두 개의 상처(제제 1 군)에 비해 제제 2 군 및 3 군으로 처리한 상처의 치유정도가 더 빠른 것을 확인 할 수 있었다. (표 10 참조)Compared to the wounds of the comparative group and the two wounds treated with placebo (Group 1), the wounds treated with Formulation Group 2 and Group 3 were faster. (See Table 10)

실험예Experimental Example 9.  9. CacoCaco -2 세포를 이용한 With -2 cells 저분자량Low molecular weight 히알루론산 및 그 염의 세포투과도 실험 Cell Permeability Experiment of Hyaluronic Acid and Its Salts

9-1. 세포 배양9-1. Cell culture

Caco-2 세포를 소태아혈청 10%를 함유한 DMEM에 세포 3.6 x 104개/웰을 현탁시켜 24웰 배양판에 접종하여 면적이 0.33 cm2인 HTS-Transwell 인서트(Costar, Cambridge사, USA)에서 배양하였다. 배지는 논에센셜 아미노산(nonessential amino acids, JHR Biosciences, USA), 1% L-글루타민 (알드리치 사, USA), 100 U/ml 페니실린G(알드리치 사, USA) 및 100 ug/ml 의 스트렙토마이신(JHR 비이오사이언스 사, USA)을 포함하였다. 배지는 매 이틀마다 교체해주었으며, 37℃, 상대습도 95% 및 5% CO2 조건하에서 배양하였다. 단층배양은 계대수가 20~40이 되는 세포로 약 21일간 진행하였으며, TEER 값이 400Ωcm2 이상이 되는 세포만을 선택하여 실험을 수행하였다. TEER값은 Millicell-ERS(Millipore, USA)로 측정하였다.Caco-2 cells were suspended in DMEM containing 10% fetal bovine serum and inoculated in a 24 well culture plate by suspending 3.6 x 10 4 cells / well into HMEM-Transwell with an area of 0.33 cm 2 . The cells were cultured in an insert (Costar, Cambridge, USA). The medium contains non-essential amino acids (JHR Biosciences, USA), 1% L-glutamine (Aldrich, USA), 100 U / ml penicillin G (Aldrich, USA) and 100 ug / ml of streptomycin (JHR). Biosciences, USA). The medium was changed every two days and incubated under 37 ° C., 95% relative humidity and 5% CO 2 conditions. Monolayer culture was carried out for about 21 days with cells having passages of 20 to 40, and the experiment was performed by selecting only cells having a TEER value of 400Ωcm 2 or more. TEER values were measured by Millicell-ERS (Millipore, USA).

10-2. 10-2. 저분자량Low molecular weight 히알루론산 및 그 염의  Of hyaluronic acid and its salts CacoCaco -2 세포 투과 실험-2 cell permeation experiment

실험을 수행하기 전에 10 mM HEPES(N-2-hydroxyethylpiperazine-Before performing the experiment, 10 mM HEPES (N-2-hydroxyethylpiperazine-

N'-2-ethanesulfonic acid; 시그마사, USA)를 함유하는 HBSS 완충용액 배지로 교체하였으며, 상층구획과 하층구획이 모두 pH 7.4임을 확인하였다. 단층배양세포는 완충용액으로 2회 세척하였으며 TEER 값의 보전을 확인 후, 사용하였다. N'-2-ethanesulfonic acid; Sigma, USA) was replaced with HBSS buffer medium containing, and the upper and lower compartments were confirmed to be pH 7.4. Monolayer cultured cells were washed twice with buffer solution and used after confirming the integrity of the TEER value.

저분자량 히알루론산 및 그 염은 500 ug/ml의 농도로 만들었으며, 대조군으로 무게평균분자량 110만의 고분자 히알루론산 나트륨염((주)바이오랜드, korea)을 동일 농도로 하여 실험하였다. 상층구획의 용액부피는 0.2 ml이고 하층구획의 용액부피는 0.6 ml이며 37℃에서 2시간 배양하였다. 2시간 후, 하층구획의 저분자량 히알루론산 및 그 염 및 고분자량 히알루론산의 농도를 GPC(gell permeation chromatography)로 분석하였다. The low molecular weight hyaluronic acid and its salt were made at a concentration of 500 ug / ml, and the weight average molecular weight of 1.1 million high molecular weight hyaluronic acid sodium salt (Bioland, Korea) was used as a control. The solution volume of the upper compartment was 0.2 ml and the solution volume of the lower compartment was 0.6 ml and incubated at 37 ° C. for 2 hours. After 2 hours, the concentrations of low molecular weight hyaluronic acid, its salts, and high molecular weight hyaluronic acid in the lower compartments were analyzed by GPC (gell permeation chromatography).

9-3. 9-3. 겔침투Gel Penetration 크로마토그래피 ( Chromatography ( GPCGPC ) 분석) analysis

겔침투 크로마토그래피(GPC, gell permeation chromatography)는 VP-10AD, RID-10A(shimadzu, Japan) 기기를 이용하였으며, 컬럼(column)은 울트라하이드로겔(UltrahydrogelTM) 120. 250 (7.8× 300 mm, WATERS, USA)을 사용하였다. 용출액은 0.1M 질산나트륨용액을 사용하였으며, 유속은 0.5 ㎖/분으로 하였다. 분자량 분석을 위한 표준물질로서는 에틸렌글리콜 고분자를 사용하였다. Gel permeation chromatography (GPC) was performed using a VP-10AD, RID-10A (shimadzu, Japan) instrument, and the column was ultrahydrogel TM 120. 250 (7.8 × 300 mm, WATERS, USA). As the eluate, 0.1 M sodium nitrate solution was used, and the flow rate was 0.5 ml / min. Ethylene glycol polymer was used as a standard for molecular weight analysis.

9-4. 9-4. 저분자량Low molecular weight 히알루론산 및 그 염의  Of hyaluronic acid and its salts CacoCaco -2 세포 투과도 계산-2 cell permeability calculation

GPC 분석에 의해 얻어진 Caco-2 세포를 투과한 저분자량 히알루론산 및 그 염 및 대조군인 고분자 히알루론산 나트륨염의 농도를 가지고 세포 투과도를 하기 수학식 5에 따라 계산하였다.Cell permeability was calculated according to Equation 5 below with the concentrations of low molecular weight hyaluronic acid and salts thereof penetrating Caco-2 cells obtained by GPC analysis, and the high molecular weight sodium hyaluronate salt as a control.

세포 투과도 = 하층구획 최종시료 농도 / 상층구획 초기시료 농도 × 100Cell Permeability = Lower Section Final Sample Concentration / Upper Section Initial Sample Concentration × 100

그 실험 결과, 하기 표 11에 나타난 바와 같이, 고분자량 히알루론산 나트륨염은 세포투과도가 0에 가까운 반면, 저분자량 히알루론산 및 저분자량 히알루론산 나트륨염은 세포투과도가 고분자량 히알루론산에 비하여 현저하게 우수함을 확인할 수 있다.As a result, as shown in Table 11, the high molecular weight hyaluronic acid sodium salt has a cell permeability close to zero, while the low molecular weight hyaluronic acid and the low molecular weight hyaluronic acid sodium salt have a significantly higher cell permeability than the high molecular weight hyaluronic acid. It can be confirmed that excellent.

시료sample 무게평균 분자량Weight average molecular weight 세포투과도Cell permeability 저분자량 히알루론산 Low molecular weight hyaluronic acid 2,0502,050 30.24 ± 0.4530.24 ± 0.45 5,0005,000 28.31 ± 0.3828.31 ± 0.38 8,3008,300 18.78 ± 0.5618.78 ± 0.56 저분자량 히알루론산 나트륨염 Low Molecular Weight Sodium Hyaluronate 2,1002,100 33.95 ± 0.3233.95 ± 0.32 5,0005,000 29.43 ± 0.1829.43 ± 0.18 8,1008,100 20.85 ± 0.3520.85 ± 0.35 고분자 히알루론산 나트륨염 Polymeric hyaluronic acid sodium salt 1.1 × 106 1.1 × 10 6 0.32 ± 0.080.32 ± 0.08

실험예Experimental Example 10. 쥐의 피부를 이용한  10. Using mouse skin 저분자량Low molecular weight 히알루론산 및 그 염의 피부투과도 실험 Skin Permeability Experiment of Hyaluronic Acid and Its Salts

10-1. 쥐의 피부의 준비10-1. Preparation of the Skin of Rats

임신 경험이 없는 생후 8주령의 암컷 ICR 마우스(ICR mouse; (주) 샘타코, korea)를 에테르로 마취시킨 후, 목뼈를 분리하였으며, 털을 1 mm 이하로 깎았다. 그 후, 등과 배의 피부를 벗겨 내었다. 이 피부는 진피(dermis)까지로 여기서 진피 부분은 제거하였다. Eight weeks-old female ICR mice (ICR mouse; Samtako, Korea), who had no pregnancy experience, were anesthetized with ether, and then the cervical bones were separated and their hair was shaved to 1 mm or less. Thereafter, the skin of the back and abdomen was removed. The skin is up to the dermis, where the dermis is removed.

진피의 제거는 트립신 용액으로 진피의 단백질을 트립신화시켜 녹여내는 방법으로 하기과 같이 수행하였다. 페트리디쉬에 여과지를 깔고, pH 8인 인산완충용액을 이용한 1%의 트립신 (알드리치 사, USA) 용액을 여과지에 포화 흡수시킨 후, 피부의 진피 면을 여과지에 밀착시켜 37℃ 배양기에 4시간 유지시켰다. Removal of the dermis was performed as follows by trypsinizing and dissolving the protein of the dermis with a trypsin solution. Filter paper was placed on Petri dish, 1% trypsin (Aldrich, USA) solution using pH 8 phosphate buffer solution was saturated and absorbed by filter paper, and the dermis of skin was adhered to filter paper and maintained at 37 ℃ incubator for 4 hours. I was.

피부를 배양기에서 꺼낸 후, 탈 이온수에 넣어 약하게 교반하여 트립신 용액을 씻어내었다. 수차례 씻어낸 후, 위의 방법을 한번 더 반복하였다. 상기와 같은 방법으로 준비한 피부는 진공하에서 건조하여 냉동 (-20 ℃) 보관하여 사용하였다. After removing the skin from the incubator, the deionized water was gently stirred and the trypsin solution was washed away. After washing several times, the above method was repeated once more. The skin prepared in the same manner as above was dried under vacuum and stored frozen (-20 ° C.).

10-2. 10-2. 저분자량Low molecular weight 히알루론산 및 그 염의 피부 투과 실험 Skin Permeation Experiment of Hyaluronic Acid and Its Salts

저분자량 히알루론산 및 그 염의 피부 투과 실험은 프란츠 셀(franz diffusion cell, Iwaki, japan)을 사용하였다. 포집부의 부피는 4.6 ml이며, 투과면적은 0.64 cm2이었다. 피부는 표피를 하위구획(lower compartment)으로 향하게 고정시키고, 교반기로 교반시키면서 37℃로 유지시켰다. 하위구획은 pH 7.4의 인산완충용액으로 채우고 상위구획(upper compartment)에는 탈 이온수 1 ml에 저분자량 히알루론산 1 mg을 넣어 혼합하였다. In the skin permeation experiment of low molecular weight hyaluronic acid and its salt, Franz diffusion cell (Iwaki, Japan) was used. The volume of the collection part was 4.6 ml, and the permeation area was 0.64 cm 2 . The skin was fixed at 37 ° C. with the epidermis fixed in the lower compartment and stirred with a stirrer. The lower compartment was filled with a phosphate buffer solution of pH 7.4, and the upper compartment was mixed with 1 mg of low molecular weight hyaluronic acid in 1 ml of deionized water.

저분자량 히알루론산 및 그 염의 피부 투과도는 하위구획에서 48시간 후, 농도를 GPC로 분석하여 구하였다. 대조군으로 무게평균분자량 110만의 고분자 히알루론산 나트륨염((주)바이오랜드, Korea)을 사용하였으며, 사용량 및 실험방법은 동일하게 실행하였다. GPC 분석은 실험예 9-3과 동일한 방법으로 실시하였다.The skin permeability of low molecular weight hyaluronic acid and salts thereof was determined after 48 hours in the lower compartment by analyzing the concentration by GPC. As a control, a weight average molecular weight of 1.1 million polymer hyaluronic acid sodium salt (Bioland, Korea) was used, and the amount of use and the experimental method were the same. GPC analysis was performed in the same manner as in Experiment 9-3.

10-3. 10-3. 저분자량Low molecular weight 히알루론산 및 그 염의 피부투과도 계산 Calculation of skin permeability of hyaluronic acid and its salts

GPC 분석에 의해 얻어진 시료의 농도로 하기 수학식 6에 따라 투과도를 계산하였다.Permeability was calculated according to the following equation (6) as the concentration of the sample obtained by GPC analysis.

피부 투과도 = 하층구획 최종시료 농도 / 상층구획 초기시료 농도 × 100Skin Permeability = Lower Section Final Sample Concentration / Upper Section Initial Sample Concentration × 100

그 실험결과, 하기 표 12에 나타난 바와 같이, 고분자량 히알루론산 나트륨 염은 피부투과도가 0에 가까운 반면, 저분자량 히알루론산 및 저분자량 히알루론산 나트륨염은 세포투과도 실험의 결과에서 본 바와 같이, 고분자량 히알루론산 나트륨염에 비하여 매우 우수한 결과를 나타내었다. As a result of the experiment, as shown in Table 12, the high molecular weight hyaluronic acid sodium salt has a skin permeability close to zero, while the low molecular weight hyaluronic acid and the low molecular weight hyaluronic acid sodium salt are high as shown in the results of the cell permeability experiment. Very good results were obtained compared to the molecular weight sodium salt of hyaluronic acid.

시료sample 무게평균 분자량Weight average molecular weight 피부 투과도Skin permeability 저분자량 히알루론산 Low molecular weight hyaluronic acid 2,0502,050 39.87 ± 0.2639.87 ± 0.26 5,0005,000 33.41 ± 0.2933.41 ± 0.29 8,3008,300 29.02 ± 0.3529.02 ± 0.35 저분자량 히알루론산 나트륨염 Low Molecular Weight Sodium Hyaluronate 2,1002,100 41.47 ± 0.3841.47 ± 0.38 5,0005,000 31.89 ± 0.4931.89 ± 0.49 8,1008,100 30.16 ± 0.3230.16 ± 0.32 고분자 히알루론산 나트륨염 Polymeric hyaluronic acid sodium salt 1.1 × 106 1.1 × 10 6 0.53 ± 0.130.53 ± 0.13

실험예Experimental Example 11. 인체  11. The human body 첩포실험Patch experiment (Patch test)(Patch test)

본 발명에 따른 상기 조성물에 대하여 피부 자극 정도를 알아보기 위하여 실시예 1의 조성예 1,2 및 비교조성예 1에 대하여 피부 첩포실험을 하기와 같이 실시하였다. In order to determine the degree of skin irritation with respect to the composition according to the present invention, skin patch experiments were carried out on the composition examples 1 and 2 and the comparative composition example 1 of Example 1 as follows.

피검자는 20~50세의 시험 부위에 피부 질환이 없는 사람으로 선정하였으며 총 15명에게 실시하였다. 첩포 부위인 상박부를 70% 에탄올로 닦아내고 건조시킨 후, 핀챔버(fin chamber)를 사용하여 바셀린을 공시험으로 하고, 실시예 1의 조성물 1,2 및 비교조성물 1을 0.02g씩 가하여 인체 상박부에 24시간 첩포하고, 첩포 제거 후 1시간 이내에 피부반응을 검사한 후, 다음날(48시간 후) 다시 검사하였다. The subjects were selected to have no skin disease at the test site of 20 ~ 50 years old. After wiping the upper arm of the patch area with 70% ethanol and drying, petroleum jelly was used as a blank test using a fin chamber. It was patched for 24 hours, the skin reaction was examined within 1 hour after the patch was removed, and then examined again the next day (after 48 hours).

피부 반응 판정은 하기 표 13의 검사기준에 의해 판정하고, 피부 자극 유발 가능성의 평가는 하기 수학식 7에 따라 계산된 평균반응률로 하였으며, 실시예 1의 조성예 1,2 및 비교조성예 1에 따른 화장료에 대한 피부 첩포실험 결과를 하기 표 14에 나타내었다.The skin response was determined by the test criteria of Table 13 below, and the evaluation of the skin irritation probability was performed using the average response rate calculated according to Equation 7 below. Skin patch test results for the cosmetic according to the following are shown in Table 14.

평균반응률(%) = [Σ(24시간 후 반응 피검자수 × 점수) + Σ(48시간 후 반응 피검자수 × 점수)] × 100 / (총 검사횟수 × 최대점수 × 전체피검자수)Average response rate (%) = [Σ (Number of response subjects after 24 hours × score) + Σ (Number of response subjects after 48 hours × score)] × 100 / (Total number of tests × maximum score × total number of subjects)

피부반응Skin reaction 점수score 반 응 정 도Reaction - - 00 반응없음no response ±± 1One 미약한 양성 반응 (홍반)Weak positive reaction (erythema) ++ 22 양성 반응 (홍반)Positive reaction (erythema) ++++ 33 강한 양성 반응 (홍반, 부종)Strong positive reaction (erythema, edema) ++++++ 44 심한 양성 반응 (홍반, 부종, 수포)Severe positive reactions (erythema, edema, blisters)

시험물질Test substance 24시간 후 반응 있는 피검자수(명)Number of subjects who responded after 24 hours (persons) 48시간 후 반응 있는 피검자수(명)Number of subjects who responded after 48 hours (persons) 평균반응률 (%)Average response rate (%) 00 1One 22 33 44 00 1One 22 33 44 조성물 1Composition 1 1414 1One 00 00 00 1414 1One 00 00 00 0.060.06 조성물 2Composition 2 1515 00 00 00 00 1414 1One 00 00 00 0.060.06 비교조성물 1Comparative Composition 1 1515 00 00 00 00 1515 00 00 00 00 0.000.00

인체 첩포실험 결과, 저분자량 히알루론산 또는 그 염을 함유하는 조성물은 무자극 범위에 속하여 인체에 안전한 물질임을 확인하였다.As a result of the human patch test, it was confirmed that the composition containing the low molecular weight hyaluronic acid or a salt thereof is a substance that is safe for the human body, belonging to the non-irritating range.

하기에 본 발명의 조성물을 함유하는 피부외용제 조성물 및 화장료 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.Hereinafter, the preparation examples of the external preparation for skin and the cosmetic composition containing the composition of the present invention will be described, but the present invention is not intended to be limited thereto but merely to be described in detail.

제제예Formulation example 1. 친수성 연고제 1. Hydrophilic Ointment

번호number 원 료Raw material 제제예1Formulation Example 1 (중량%)(weight%) 1One 저분자량 히알루론산   Low molecular weight hyaluronic acid 0.50.5 22 백색 바세린  White vaseline 25.025.0 33 스테아릴 알콜  Stearyl alcohol 22.022.0 44 에칠(또는 메칠)p-옥시벤조에이트  Ethyl (or methyl) p-oxybenzoate 미량a very small amount 55 프로필렌 글리콜  Propylene glycol 12.012.0 66 라우릴 황산 나트륨  Sodium lauryl sulfate 15.015.0 77 프로필 p-옥시벤조에이트  Propyl p-oxybenzoate 미량a very small amount system 100100

제제예Formulation example 2. 유연 화장수 2. flexible lotion

번호number 원 료Raw material 제제예2Formulation Example 2 (중량%)(weight%) 1One 저분자량 히알루론산  Low molecular weight hyaluronic acid 0.50.5 22 부틸렌 글리콜Butylene Glycol 4.04.0 33 글리세린glycerin 8.08.0 44 카르복시비닐폴리머Carboxy Vinyl Polymer 0.060.06 55 디소디움 에틸렌디아민테르라아세틱에시드Disodium ethylenediamineteracetic acid 0.010.01 66 에탄올ethanol 7.07.0 77 에탄올아민Ethanolamine 0.20.2 88 소르비탄모노스테아레이트Sorbitan monostearate 0.80.8 99 하이드로지네이티드 캐스터 오일Hydrogenated Castor Oil 0.40.4 1010 페닐메티콘Phenylmethicone 3.53.5 1111 파라옥시안식향산프로필Paraoxybenzoic acid propyl 0.20.2 1212 파라옥시안식향산메틸Methyl paraoxybenzoate 0.20.2 1313 정제수Purified water 잔량Remaining amount system 100.0100.0

제제예Formulation example 3. 영양화장수 3. Nutritional Cosmetics

번호number 원 료Raw material 제제예3Formulation Example 3 (중량%)(weight%) 1One 저분자량 히알루론산  Low molecular weight hyaluronic acid 0.50.5 22 스테아린산Stearic acid 1.01.0 33 세틸알코올Cetyl alcohol 1.01.0 44 글리세릴모노스테아레이트Glyceryl Monostearate 1.01.0 55 폴리옥시에틸렌소르비탄모노스테아레이트Polyoxyethylene sorbitan monostearate 1.01.0 66 솔비탄세스퀴올레이트Sorbitan sesquioleate 1.01.0 77 유동파라핀Liquid paraffin 4.04.0 88 카르릴릭/카프릭글리세라이드Carlylic / Capricglycerides 4.04.0 99 스쿠알란Squalane 3.03.0 1010 카르복시비닐폴리머Carboxy Vinyl Polymer 0.10.1 1111 부틸렌글리콜Butylene glycol 5.05.0 1212 에탄올아민Ethanolamine 0.20.2 1313 파라옥시안식향산프로필Paraoxybenzoic acid propyl 0.20.2 1414 파라옥시안식향산메틸Methyl paraoxybenzoate 0.20.2 1515 정제수Purified water 잔량Remaining amount system 100.0100.0

제제예Formulation example 4. 영양크림 4. Nutrition Cream

번호number 원 료Raw material 제제예4Formulation Example 4 (중량%)(weight%) 1One 저분자량 히알루론산  Low molecular weight hyaluronic acid 0.50.5 22 스테아린산Stearic acid 2.02.0 33 세틸알코올Cetyl alcohol 2.02.0 44 글리세릴모노스테아레이트Glyceryl Monostearate 2.02.0 55 폴리옥시에틸렌소르비탄모노스테아레이트Polyoxyethylene sorbitan monostearate 0.50.5 66 솔비탄세스퀴올레이트Sorbitan sesquioleate 0.50.5 77 글리세릴모노스테아레이트/글리세릴스 테아레이트/폴리옥시에틸렌스테아레이트Glyceryl Monostearate / Glyceryl Stearate / Polyoxyethylene Stearate 1.01.0 88 왁스Wax 1.01.0 99 유동파라핀Liquid paraffin 4.04.0 1010 카르릴릭/카프릭글리세라이드Carlylic / Capricglycerides 4.04.0 1111 스쿠알란Squalane 4.04.0 1212 카르복시비닐폴리머Carboxy Vinyl Polymer 0.30.3 1313 부틸렌글리콜Butylene glycol 5.05.0 1414 글리세린glycerin 3.03.0 1515 에탄올아민Ethanolamine 0.50.5 1616 파라옥시안식향산프로필Paraoxybenzoic acid propyl 0.20.2 1717 파라옥시안식향산메틸Methyl paraoxybenzoate 0.20.2 1818 정제수Purified water 잔량Remaining amount system 100.0100.0

제제예Formulation example 5. 에센스 5. Essence

번호number 원 료Raw material 제제예5Formulation Example 5 (중량%)(weight%) 1One 저분자량 히알루론산  Low molecular weight hyaluronic acid 0.50.5 22 시토 스테롤Cytostolol 1.701.70 33 폴리글리세릴 2-올레이트Polyglyceryl 2-oleate 1.501.50 44 세라마이드Ceramide 0.10.1 55 세테아레스-4Ceteares-4 1.21.2 66 콜레스테롤cholesterol 1.51.5 77 디세틸포스페이트Dicetylphosphate 0.40.4 88 농글리세린Concentrated glycerin 5.05.0 99 선플라우어오일Sunflower oil 15.015.0 1010 카르복시비닐폴리머Carboxy Vinyl Polymer 0.20.2 1111 산탄검Xanthan Gum 0.20.2 1212 방부제antiseptic 미량a very small amount 1313 향료Spices 미량a very small amount 1414 정제수Purified water 잔량Remaining amount system 100.0100.0

제제예Formulation example 6.  6. 유화형Oil painting 화운데이션Foundation

번호number 원 료Raw material 제제예6Formulation Example 6 (중량%)(weight%) 1One 저분자량 히알루론산  Low molecular weight hyaluronic acid 2.02.0 22 밀납Beeswax 2.02.0 33 사이크로메치콘Pyromethicone 2.02.0 44 유동파라핀Liquid paraffin 5.05.0 55 스쿠알란Squalane 5.05.0 66 스테아린산 Stearic acid 2.02.0 77 친유성 모노스테아린산 글리세린Lipophilic monostearic acid glycerin 3.03.0 88 카프릴릭/카프릭글리세라이드Caprylic / Capricglycerides 4.04.0 99 글리세린glycerin 4.04.0 1010 프로필렌글리콜Propylene glycol 3.03.0 1111 부틸렌글리콜Butylene glycol 3.03.0 1212 에탄올아민Ethanolamine 1.01.0 1313 알루미늄마그네슘실리케이트Aluminum Magnesium Silicate 0.50.5 1414 안료Pigment 1212 1515 방부제antiseptic 미량a very small amount 1616 향료 Spices 미량a very small amount 1717 정제수Purified water 잔량Remaining amount system 100.0100.0

본 발명의 무게평균 분자량 500~10,000 달톤을 가지는 저분자량 히알루론산 또는 그 염을 함유하는 조성물은 보습, 주름개선, 상처치유 및 항염 효과를 갖으면서 고분자 히알루론산보다 피부투과가 용이하여 피부외용제 조성물 및 화장료 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.The composition containing the low molecular weight hyaluronic acid or a salt thereof having a weight average molecular weight of 500 ~ 10,000 Daltons of the present invention has a moisturizing, wrinkle improvement, wound healing and anti-inflammatory effect and is easier to penetrate the skin than the polymeric hyaluronic acid composition, and It can be usefully used as a cosmetic composition.

<110> BIOLAND LTD. <120> A composition comprising low molecular weight hyaluronic acid or the salt thereof <160> 6 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> sense for MMP-1 primer <400> 1 tgggagcaaa cacatctga 19 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense for MMP-1 primer <400> 2 atcacttctc cccgaatcgt 20 <210> 3 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> sense for ACTIN primer <400> 3 gagaccttca acaccccagc c 21 <210> 4 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense for ACTIN primer <400> 4 ggccatctct tgctcgaagt c 21 <210> 5 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> sense for COX-2 primer <400> 5 ctgaagccca ccccaaac 18 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense for COX-2 primer <400> 6 aacccaggtc ctcgcttatg 20 <110> BIOLAND LTD. <120> A composition comprising low molecular weight hyaluronic acid or          the salt young <160> 6 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> sense for MMP-1 primer <400> 1 tgggagcaaa cacatctga 19 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense for MMP-1 primer <400> 2 atcacttctc cccgaatcgt 20 <210> 3 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> sense for ACTIN primer <400> 3 gagaccttca acaccccagc c 21 <210> 4 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense for ACTIN primer <400> 4 ggccatctct tgctcgaagt c 21 <210> 5 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> sense for COX-2 primer <400> 5 ctgaagccca ccccaaac 18 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense for COX-2 primer <400> 6 aacccaggtc ctcgcttatg 20

Claims (10)

고분자 히알루론산보다 피부투과가 용이하며, 보습, 주름개선, 상처치유 및 항염 효과를 갖는 하기 일반식(Ⅰ)으로 표기되는 무게평균 분자량 500 내지 10,000 달톤의 저분자량 히알루론산 또는 그 염을 유효성분으로 함유하는 보습, 주름개선, 상처치유 및 염증의 예방 및 치료용 피부외용제 조성물:It is easier to penetrate skin than polymer hyaluronic acid, and has low molecular weight hyaluronic acid or its salt having a weight average molecular weight of 500 to 10,000 Daltons represented by the following general formula (I), which has moisturizing, wrinkle improvement, wound healing and anti-inflammatory effects as an active ingredient. External skin composition for moisturizing, wrinkle improvement, wound healing and prophylaxis and treatment containing:
Figure 112006068616142-PAT00002
(Ⅰ)
Figure 112006068616142-PAT00002
(Ⅰ)
상기 식에서 n은 1 내지 25의 정수이고;N is an integer from 1 to 25; R은 수소원자 혹은 리튬, 나트륨, 칼륨의 알카리 금속류염, 마그네슘, 칼슘의 알카리 토금속류염, 암모니아 또는 에틸렌디아민, 사이클로헥실아민, 아닐린, 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 에틸아민, 프로필아민, 아릴아민, 디에틸아민, 부틸아민, 이소부틸아민, 트리에틸아민, 펜틸아민, t-부틸아민, 이소프로필아민의 유기아민류와의 염.R is a hydrogen atom or an alkali metal salt of lithium, sodium or potassium, an alkali metal salt of magnesium or calcium, ammonia or ethylenediamine, cyclohexylamine, aniline, ethanolamine, diethanolamine, triethanolamine, ethylamine, propylamine And salts with organic amines such as arylamine, diethylamine, butylamine, isobutylamine, triethylamine, pentylamine, t-butylamine and isopropylamine.
제 1항에 있어서, 상기 n이 1 내지 25의 정수인 화합물임을 특징으로 하는 피부외용제 조성물.The composition for external application for skin according to claim 1, wherein n is a compound having an integer of 1 to 25. 제 1항에 있어서, 상기 저분자량 히알루론산 및 그 염의 분자량은 500 내지 10,000 달톤임을 특징으로 하는 피부외용제 조성물.According to claim 1, wherein the low molecular weight hyaluronic acid and the external composition of the skin, characterized in that the molecular weight of 500 to 10,000 Daltons. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, 염의 종류는 리튬, 나트륨, 칼륨의 알카리 금속류염, 마그네슘, 칼슘 등의 알카리 토금속류염, 암모니아 또는 에틸렌디아민, 사이클로헥실아민, 아닐린, 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 에틸아민, 프로필아민, 아릴아민, 디에틸아민, 부틸아민, 이소부틸아민, 트리에틸아민, 펜틸아민, t-부틸아민, 이소프로필아민의 유기아민류와의 염임을 특징하는 피부외용제 조성물.The salt according to any one of claims 1 to 3, wherein the salt is an alkali metal salt of lithium, sodium, potassium, alkaline earth metal salt such as magnesium, calcium, ammonia or ethylenediamine, cyclohexylamine, aniline, ethanolamine Salts with organic amines such as diethanolamine, triethanolamine, ethylamine, propylamine, arylamine, diethylamine, butylamine, isobutylamine, triethylamine, pentylamine, t-butylamine and isopropylamine. A skin external composition for use. 제 1항에 있어서, 상기 조성물은 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제인 피부외용제 조성물. The composition for external application for skin according to claim 1, wherein the composition is a cream, gel, patch, spray, ointment, warning, lotion, linen, pasta or cataplasma. 고분자 히알루론산보다 피부투과가 용이하며, 보습, 주름개선, 상처치유 및 항염 효과를 갖는 하기 일반식(Ⅰ)으로 표기되는 무게평균 분자량 500 내지 10,000 달톤의 저분자량 히알루론산 또는 그 염을 유효성분으로 함유하는 보습, 주름개선, 상처치유 및 염증의 예방 및 개선용 화장료 조성물.   It is easier to penetrate skin than polymer hyaluronic acid, and has low molecular weight hyaluronic acid or its salt having a weight average molecular weight of 500 to 10,000 Daltons represented by the following general formula (I), which has moisturizing, wrinkle improvement, wound healing and anti-inflammatory effects as an active ingredient. Cosmetic composition for the prevention and improvement of moisturizing, wrinkle improvement, wound healing and inflammation containing.
Figure 112006068616142-PAT00003
(Ⅰ)
Figure 112006068616142-PAT00003
(Ⅰ)
제 6항에 있어서, 상기 n이 1 내지 25의 정수인 화합물 및 그 염임을 특징으로 하는 화장료 조성물.The cosmetic composition according to claim 6, wherein n is an integer of 1 to 25 and a salt thereof. 제 6항에 있어서, 상기 저분자량 히알루론산 및 그 염의 분자량은 500 내지 10,000 달톤임을 특징으로 하는 화장료 조성물.7. The cosmetic composition according to claim 6, wherein the low molecular weight hyaluronic acid and its salt have a molecular weight of 500 to 10,000 Daltons. 제 6항에 있어서, 상기 일반식 (Ⅰ)의 R의 염은 리튬, 나트륨, 칼륨의 알카리 금속류염, 마그네슘, 칼슘 등의 알카리 토금속류염, 암모니아 또는 에틸렌디아민, 사이클로헥실아민, 아닐린, 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 에틸아민, 프로필아민, 아릴아민, 디에틸아민, 부틸아민, 이소부틸아민, 트리에틸아민, 펜틸아민, t-부틸아민, 이소프로필아민의 유기아민류와의 염임을 특징으로 하는 화장료 조성물.The salt of R of the general formula (I) is an alkali metal salt of lithium, sodium, potassium, alkaline earth metal salt such as magnesium, calcium, ammonia or ethylenediamine, cyclohexylamine, aniline, ethanolamine Salts with organic amines such as diethanolamine, triethanolamine, ethylamine, propylamine, arylamine, diethylamine, butylamine, isobutylamine, triethylamine, pentylamine, t-butylamine and isopropylamine. Cosmetic composition characterized in that. 제 6항에 있어서, 상기 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저의 제형로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 제형을 가짐을 특징으로 하는 화장료 조성물.   According to claim 6, wherein the composition is a skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, lotion, milk lotion, moisturizing lotion, nutrition lotion, massage cream, nutrition cream, moisturizing cream, hand cream, foundation, essence, nutrition essence, A cosmetic composition, characterized in that it has at least one formulation selected from the group consisting of packs, soaps, cleansing foams, cleansing lotions, cleansing creams, body lotions and body cleansers.
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