KR20070100273A

KR20070100273A - 다발성 경화증 (ｍｓ)의 치료시에 뉴런 및 희돌기교세포를보호하기 위한 특정의 페닐 나프틸 화합물의 용도

Info

Publication number: KR20070100273A
Application number: KR1020077015357A
Authority: KR
Inventors: 진 메릴; 생드린 푼스; 웨인 페트코; 프리데리케 비르츠-브루거; 카렌 챈드로스
Original assignee: 아벤티스 파마슈티칼스 인크.
Priority date: 2005-01-04
Filing date: 2005-12-14
Publication date: 2007-10-10
Also published as: WO2006073724A3; CN101094665A; EP1835896A2; US20070249732A1; AU2005323163A1; WO2006073724A2; CA2593209A1; JP2008526744A; RU2007129852A; IL184391A0; BRPI0519537A2

Abstract

5-클로로-6-(4-하이드록시페닐)-2-나프탈레놀 및 6-(4-하이드록시-페닐)-2-나프탈렌메탄올을 포함한 특정의 비페닐 화합물은 다발성 경화증 환자의 희돌기교세포 및 뉴런에 대한 보호를 제공하는데 유용하다.

5-클로로-6-(4-하이드록시페닐)-2-나프탈레놀, 6-(4-하이드록시-페닐)-2-나프탈렌메탄올, 다발성 경화증, 희돌기교세포, 뉴런

Description

다발성 경화증 (ＭＳ)의 치료시에 뉴런 및 희돌기교세포를 보호하기 위한 특정의 페닐 나프틸 화합물의 용도{Use of certain phenyl napthyl compounds for protection of neurons and oligodendrocytes in the treatment of multiple sclerosis (MS)}

본 발명은 다발성 경화증을 치료하는 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 화학식 I의 화합물, 및 그들의 이성체, 라세메이트, 에난티오머, 이들의 염, 및 이들을 함유하는 약제를 사용하여 다발성 경화증 환자에게서 뉴런 및/또는 희돌기교세포를 보호하는데 관한 것이다.

다발성 경화증 (MS)은 CNS (중추신경계) 미엘린의 손상, 희돌기교세포 세포 사멸 및 축삭 파괴를 유도하여, 심각한 기능적 결손을 야기하는 자가면역질환이다. MS는 남성에게서 보다 여성에게서 2-3배 더 큰 발병률로 나타나며 (Duquette, 등, 1992.Can. J. Neurol. Sci. 19: 466-71), 에스트로겐은 임신의 제2 삼분기(second trimester) 및 제3 삼분기(third trimester) 중에 질병의 중증도를 감소시키는 반면에 (Confavreux 등, 1998. N Eng J Med 339: 285-291), MS의 임상적 증상은 분만 후에 악화되는 것으로 보고되었다 (Evron 등, 1984. Am. J. Reprod. Immunol. 5: 109-113; Mertin and Rumjanek 1985. J. Neurol Sci. 68: 15-24; Grossman, 1989. J. Steroid Biochem. 34: 241-245; Confavreux 등, 1998. N. Engl. J. Med. 339: 285-291). 에스트리올에 의한 치료는 가돌리늄 증진성 병소 및 MRI 용적을 감소시킨다 (Voskuhl and Palaszynski, 2001. Neuroscientist. 7(3): 258-270; Sicotte 등, 2002. Ann Neurol. 52: 421-428). 또한, 에스트로겐은 면역반응 이동, 임상적 증상의 개선 및 설치류 EAE (실험적 알레르기성 뇌척수염 (experimental allergic encephalomyelitis))에서 증진된 미엘린 형성을 야기한다 (Curry and Heim 1966. Nature 81: 1263-1272; Kim 등, 1999. Neurology. 52: 1230-1238; Ito 등, 2002. Clin Immunol. 102(3): 275-282). 에스트로겐은 세포독성 유도된 세포 사멸로부터 희돌기교세포를 보호하는 것으로 보고되었으며 (Takao 등, 2004. J Neurochem. 89: 660-673), 17β-에스트라디올 (E2)은 희돌기교세포 상에서의 다수의 상호연결과정의 정교함을 촉진시키는 것으로 보고되었다 (Zhang 등, 2004. J Neurochem 89: 674-684).

에스트로겐이 세포 생존, 축삭 발아, 재생반응, 시냅스 전달, 및 신경발생을 증진시킴으로써 변성적 질병 및 손상에 대한 반응에서 직접적인 보호적 역할을 나타낸다는 증거가 증가하고 있다. CNS에서는 손상의 부위에서 에스트로겐의 증가된 합성 및 에스트로겐 수용체의 증진된 발현이 있으며 (Garcia-Segura 등, 2001. Prog. in Neurobiol. 63: 29-60), 에스트로겐-매개된 세포 보호는 β-아밀로이드 유도된 세포독성, 흥분독성 및 산화적 스트레스를 포함하는 신경변성의 다수의 시 험관내 모델에서 입증되었다 (Behl 등, 1995. Biochem. Biophys. Res. Commun. 216,473-482; Goodman 등, 1996. J. Neurochem. 66: 1836-1844; Green 등, 1997. J. Neurosci. 17: 511-515; Behl 등, 1999. Trends Pharmacol. Sci. 20: 441-444). 최근의 임상시험은 에스트로겐 대체요법이 또한, 알츠하이머병 및 정신분열증의 위험을 감소시키고, 이들의 발병 및 진행을 지연시킬 수 있음을 시사하였다 (참조예: Garcia-Segura 등, 2001. Prog. in Neurobiol. 63: 29-60). 혈액-뇌장벽을 가로지를 수 있는 친유성 호르몬인 E2는 각성, 주의력, 기분 및 인식을 도와주는 뇌 시스템을 유지시킨다 (Lee and McEwan, 2001. Annu. Rev. Pharmacol. & Toxicol. 41: 569-591). 또한, 천연 에스트로겐, 및 타목시펜과 같은 합성 선택적 에스트로겐 수용체 조절인자 (SERM) 둘 다는 허혈성 뇌졸중에 의해서 야기된 뉴런 손상을 감소시키는 반면에, E2 또는 랄록시펜은 1-메틸-4-페닐-1,2,3,6 테트라하이드로피리딘-유도된 독성으로부터 뉴런을 보호한다 (Callier, 등, 2001. Synapse 41: 131-138; Dhandapani and Brann, 2003. Endocrine 21: 59-66).

에스트로겐의 신경-보호적 효과는 bcl-2 발현의 조절, cAMP 및 미토겐-활성화된 키나제 시그날전달 경로의 활성화, 세포내 칼슘 항상성의 조절, 항산화제 활성의 증진, 및/또는 호르몬-조절된 전사인자로 작용할 수 있는 에스트로겐 수용체 (ER)의 활성화를 통해서 매개된다 (Mangelsdorf, 등, 1995. Cell 83: 835-839; Katzenellenbogen, 등, 1996. Mol. Endocrinol. 10: 119-131; Singer 등, 1996. Neurosci. Lett. 212: 13-16; Singer 등, 1998. Neuroreport 9: 2565-2568; Singer 등, 1999. Neurosci. Lett. 212: 13-16; Weaver 등, 1997. Brain Res. 761: 338- 341; Watters and Dorsa, 1998. J. Neurosci. 18: 6672-6680; Singh 등, 1999. J. Neurosci. 19: 1179-1188; Alkayed 등, 2001. J. Neurosci. 21: 7543-7550; Garcia-Segura 등, 2001. Prog. in Neurobiol. 63: 29-60). 두가지 특정화된 에스트로겐 수용체인 ERα 및 ERβ는 핵전사인자로서 기능을 하는 클래스 I 호르몬 수용체 집단에 속한다. ERα 및 ERβ (mRNA 또는 단백질의 형태)는 슈반 세포 (Schwann cell), 말초신경계의 미엘린 형성 세포, 및 CNS 뉴런, 성상세포 및 희돌기교세포를 포함하는 신경세포 타입에서 발현된다 (Miranda and Toran-Allerand, 1992; Santagati, 등, 1994; Kuiper, 등, 1996; Mosselman, 등, 1996; Thi 등 1998; Platania, 등, 2003). MS에서 상실된 CNS의 미엘린 형성 세포인 희돌기교세포에서, ERα는 핵성인 것으로 보고된 반면에, ERβ는 세포질성이며, 생체내 면역반응성은 세포질 및 수초에서 쉽게 검출될 수 있다 (Zhang 등, 2004. J Neurochem 89: 674-684). 최근에, 문헌 (Arvanitis 등, 2004, J Neurosci Res. 75: 603-613)에는 단리된 CNS 미엘린, 척추 및 뇌 절편의 수초 및 희돌기교세포 원형질막에서 ERβ와의 유사성을 갖는 ER을 보고하였다.

ERβ에서 리간드인 소(小)분자, 또는 고전적인 ERα 이외의 부위에서 에스트로겐의 효과를 우선적으로 모사하는 화합물을 이용하여 MS에서 에스트로겐의 유익한 효과를 모사하고/하거나 증진시키는 것은 소분자가 ERα에 의해서 매개되는 에스트로겐의 적절치 않은 "호르몬" 효과가 없을 수 있다는 점에서 MS의 치료에 대한 이점을 가질 것 같다. 이들 다른 ER 부위는 뉴런에서 확인되고 발생상에서 조절되는, 최근에 확인된 ER-X (Toran-Allerand 2004. Endocrinology 145:1069-1074), 또 는 세포 표면 시그날전달을 유전자 전사와 통합시키는 다양한 경로들을 에스트로겐이 유발하도록 허용하는 GPR30 (Kanda and Watanabe 2003. J Invest Derm 121: 771-780)을 포함할 수 있다.

이들 화합물은 또한, 샤르코-마리-투쓰병 (Charcot-Marie-Tooth disease), 펠리체우스-메르츠바허병 (Pelizaeus-Merzbacher disease), 뇌척수염, 시신경척수염, 부신백질이영양증 (adrenoleukodystrophy), 귈랑-바레 증후군 (Guillian-Barre syndrome), 및 척추 손상, 신경장애 및 신경 손상을 포함하여 미엘린-형성 교세포 (희돌기교세포 또는 슈반 세포)가 손상된 장애를 포함한 그 밖의 다른 수초탈락성 질병의 발생을 치료 또는 예방하기 위해서 사용될 수 있다.

발명의 개요

본 발명의 목적은 다발성 경화증을 치료하기 위한 특정의 비페닐 화합물의 신규한 용도이다.

5-클로로-6-(4-하이드록시페닐)-2-나프탈레놀

및 6-(4-하이드록시-페닐)-2-나프탈렌메탄올

을 포함한 특정의 화합물들은 다발성 경화증 환자의 희돌기교세포 및 뉴런에 대한 보호를 제공하는데 유용하다.

본 발명은 또한, 전술한 화합물과 무기 또는 유기산과의 부가염에 관한 것이다.

하나 또는 그 이상의 비대칭 중심을 함유하는 화합물들은 이성체 형태를 가지며; 이들 이성체 및 혼합물은 본 발명의 일부분을 형성한다. 이들 화합물의 라세메이트 및 에난티오머도 본 발명의 일부분을 형성한다.

하나 또는 그 이상의 비대칭 중심을 함유하는 상기 화합물을 이성체 형태를 가지며; 이들 이성체 및 혼합물은 본 발명의 일부분을 형성한다. 이들 화합물의 라세메이트 및 에난티오머도 본 발명의 일부분을 형성한다.

본 발명의 방법에서 사용되는 화합물은 본 기술분야에서 공지된 합성방법, 예를 들어, 미국 특허 제 6,147,119 호에 기술된 방법에 의해서 제조될 수 있다.

본 발명에서 사용된 용어들은 본 명세서에서 정의된 의미를 갖는다.

a) "약제학적으로 허용되는 염"은 산부가염 또는 염기부가염을 의미하며, 이들은 어떤 것이든지 본 발명의 화합물에 의해서 제조될 수 있다.

"약제학적으로 허용되는 산부가염"은 화학식 I로 표시된 염기 화합물의 비독성 유기 또는 무기 산부가염이다. 적합한 염을 형성하는 무기산의 실례로는 염산, 브롬화수소산, 황산 및 인산, 및 오르토인산일수소나트륨 및 황산수소칼륨과 같은 산 금속염이 포함된다. 적합한 염을 형성하는 유기산의 실례로는 모노-, 디- 및 트리-카복실산이 포함된다. 이러한 산의 실례는 예를 들어, 아세트산, 글리콜산, 락트산, 피루브산, 말론산, 석신산, 글루타르산, 푸마르산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 아스코르빈산, 말레산, 하이드록시말레산, 벤조산, 하이드록시벤조산, 페닐아세트산, 신남산, 살리실산, 2-페녹시벤조산, p-톨루엔설폰산, 및 메탄설폰산 및 2-하이드록시에탄설폰산과 같은 설폰산이다. 모노- 또는 디-산염이 형성될 수 있으며, 이러한 염은 수화되거나 실질적으로 무수물인 형태로 존재할 수 있다. 일반적으로, 이들 화합물의 산부가염은 물 및 다양한 친수성 유기용매에 더 가용성이며, 그들의 유리 염기 형태에 비해서 일반적으로 더 높은 융점을 나타낸다.

"약제학적으로 허용되는 염기부가염"은 화학식 I의 화합물의 비독성 유기 또는 무기 염기부가염을 의미한다. 그의 예는 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 또는 바륨 하이드록사이드와 같은 알칼리 금속 또는 알칼리-토금속 하이드록사이드; 암모니아; 및 메틸아민, 트리메틸아민 및 피콜린과 같은 지방족, 지환족 또는 방향족 유기 아민이다. 에스테르가 가수분해되지 않도록 적절한 염을 선택하는 것이 중요할 수 있다. 적절한 염에 대한 선택기준은 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 알려진 것일 수 있다.

"환자"는 예를 들어, 래트, 마우스, 개, 고양이, 기니아 피그, 및 인간과 같은 영장류와 같은 온혈동물을 의미한다.

b) "치료하다" 또는 "치료하는"은 증상을 완화시키거나, 일시적이거나 영구적인 기준으로 증상의 원인을 제거하거나, 증상의 발현 및 지정된 장애 또는 상태의 진행을 방지하거나 느리게 하는 것을 포함하는 (단, 이들로 제한되지는 않는다) 모든 치료를 의미한다.

c) "치료학적 유효량"은 지정된 장애 또는 상태를 치료하는데 효과적인 화합물의 양을 의미한다.

d) "약제학적으로 허용되는 담체"는 약제학적 조성물, 즉 환자에게 투여할 수 있는 투약형을 형성하도록 본 발명의 화합물과 혼합되는 비-독성 용매, 분산제, 부형제, 보조제 또는 그 밖의 다른 물질이다. 이러한 담체의 한가지 예는 비경구 투여를 위해서 일반적으로 사용되는 약제학적으로 허용되는 오일이다.

(e) "입체이성체"는 그들의 원자의 공간적 배향만이 상이한 개개 분자의 모든 이성체에 대한 일반적 용어이다. 이것은 거울상 이성체 (에난티오머), 기하 (시스/트랜스) 이성체, 및 서로 거울상이 아닌 한 개 보다 많은 키랄 중심을 갖는 화합물의 이성체 (부분입체이성체)를 포함한다.

상술한 상태를 앓고 있는 환자의 치료시에, 화학식 I의 화합물은 경구, 설하, 구강, 피하, 근육내, 정맥내, 경피, 비내, 직장, 국소 등을 포함하는, 치료학적 유효량으로 화합물을 생체이용 가능하도록 만드는 어떤 형태 또는 방식으로도 투여될 수 있다. 제형을 제조하는 기술분야에서 숙련된 전문가는 치료할 상태 또는 질병에 대해서 선택된 화합물의 특정한 특징, 질병의 단계, 환자의 상태, 및 그 밖의 다른 관련 환경에 따라서 적절한 투여의 형태 및 방식을 결정할 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 참고로 포함되어 있는 문헌 (Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, Mack Publishing Co. (1990)을 참고로 한다.

본 발명의 조성물은 예를 들어, 정제, 트로키, 캅셀제, 엘릭서, 현탁액, 용액, 시럽, 웨이퍼 (wafers), 츄잉검 (chewing gums) 등의 형태로 경구로 투여될 수 있으며, 다음의 보조제 중의 하나 또는 그 이상을 함유할 수 있다: 미세결정성 셀룰로즈, 트라가칸트 고무 또는 젤라틴과 같은 결합제; 전분 또는 락토즈와 같은 부형제; 알긴산, 프리모겔 (Primogel), 옥수수 전분 등과 같은 붕해제; 마그네슘 스테아레이트 또는 스테로텍스 (Sterotex)와 같은 윤활제; 콜로이드성 이산화규소와 같은 활주제 (glidants); 및 슈크로즈 또는 사카린과 같은 감미제, 또는 페퍼민트, 메틸 살리실레이트 또는 오렌지 향료와 같은 방향제. 단위 투약형이 캅셀제인 경우에, 이것은 상기한 타입의 물질들 이외에도 폴리에틸렌 글리콜 또는 지방 오일과 같은 액체 담체를 함유할 수 있다. 그 밖의 다른 단위 투약형은 예를 들어, 코팅과 같이 단위투약형의 물리적 형태를 변형시키는 그 밖의 다양한 물질들을 함유할 수 있다. 즉, 정제 또는 환제는 당, 쉘락 또는 그 밖의 다른 장용성 코팅제로 코팅될 수 있다. 시럽은 본 발명의 화합물 이외에도 감미제로서 슈크로즈 및 특정의 보존제, 염료 및 착색제 및 방향제를 함유할 수 있다.

용액 또는 현탁액은 또한 다음의 보조제 중의 하나 또는 그 이상을 포함할 수 있다: 주사용 물, 식염수, 고정 오일, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 그 밖의 다른 합성 용매와 같은 멸균 희석제; 벤질 알콜 또는 메틸 파라벤과 같은 항균제; 아스코르빈산 또는 중아황산나트륨과 같은 항산화제; 에틸렌 디아민테트라아세트산과 같은 킬레이트화제; 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트와 같은 완충제; 및 나트륨 클로라이드 또는 덱스트로즈와 같은 장성 조정제. 비경구 제제는 앰플, 일회용 시린지 또는 수회용량 바이알 내에 봉입될 수 있다.

화학식 I의 화합물이 치료학적으로 작용하는 그들의 능력을 나타내는 투약량 범위는 개개 화합물, 상태의 중증도, 환자, 제형, 환자가 앓고 있는 그 밖의 다른 원질병 상태, 및 환자에게 동시에 투여될 수 있는 다른 약제에 따라서 달라질 수 있다. 일반적으로, 화학식 I의 화합물은 약 0.001 mg/환자의 체중 kg/일 내지 약 100 mg/환자의 체중 kg/일 사이의 용량에서 그들의 치료학적 활성을 나타낼 수 있다.

본 명세서에 언급된 모든 문헌 및 특허의 내용은 본 명세서에 참고로 포함된 것이다.

이하의 실시예는 본 발명을 제한하지 않으면서 본 발명을 설명하는 것이다:

본 발명의 생성물의 약물학적 시험

결합 분석

다수의 화합물을 판베라의 형광 편극화 경쟁시험 키트 (Panvera’s Fluorescence Polarization Competition Assay Kits; cat. nos. P2698 and P2700) 를 사용하여 ERα 및 ERβ 결합에 대해서 시험하였다. 간략하면, ERα 또는 ERβ를 -80℃로부터 얼음 상에서 해동시켰다. 에스트로겐 수용체 및 형광성 리간드 (플루오르몬 (Fluormone) TM) 착물은 ERα에 대해서는 15/1 몰비로, ERβ에 대해서는 10/1 몰비로 형성시켰다 (2X 착물). 시험 화합물의 일련의 희석액을 분석 완충액 중에서 만들고, 검은색의 96-웰 플레이트 내에서 50 ul의 2X 수용체-리간드 착물을 50 ul의 화합물 용액에 첨가함으로써 시험을 개시하였다. 0% 경쟁 (이론상의 최대 편극)은 50 ul의 완충액 및 50 ul의 2X 수용체-리간드 착물을 함유하는 웰에서 측정하였다. 플레이트를 온화하게 진탕한 후에 암실에서 실온으로 배양하였다. 편극값 (mP)은 반응을 시작한 후 7 시간 이하에, 각각 485 nm 및 535 nm의 여기 및 방출 파장에서 파르사이트 형광판독기 (FARCyte Fluorescent reader; Amersham)를 사용하여 판독하였다. 데이터는 비-선형 회귀분석을 사용하여 분석하였으며, IC50 값은 그래프패드 프리즘 (GraphPad Prism)을 사용하여 결정하였다. 에스트라디올이 기준화합물로 사용되었다.

희돌기교세포 독성시험

일차 래트의 희돌기교세포 조상세포는 출생후 2-3 일령의 래트 (스프라그 도울리 (Sprague Dawley))의 대뇌로부터 수득하였다. 뇌척수막을 제거하고, 조직을 기계적으로 분열시켰다. 세포를 T75 플라스크 상에 평판배양하고, DMEM + 10% FBS를 공급하였다.

풍부한 OLP를 성상세포 단일층으로부터 기계적 분리에 의해서 수거하고, 미 토겐, PDGF-AA (10 ng/ml) 및 FGF-2 (10 ng/ml)가 보충된 혈청-부재 배지 (SFM) 내에서 증량시켰다.

성숙한 희돌기교세포를 생성시키기 위하여, 조상세포를 평판배양한지 24 시간 후에 IGF-1 (10 ng/ml)가 보충된 SFM로 옮기고, 세포를 실험적 분석을 하기 전에 7일 동안 이들 조건 하에서 성장시켰다.

세포를 웰당 10,000 개씩 96-웰 플레이트에서 평판배양하였다. 배지를 신선한 배지로 교환하고, 세포를 1 시간 동안 화합물로 전처리하였다. 독소를 다음의 최종 농도를 제공하도록 첨가하였다: Sin-1 10 mM, 캄프토테신 10 μM.

24 시간 후에, 배지를 제거하고 프로메가 사이토톡스 96 키트 (Promega Cytotox 96 kit)(catalog# G1780)를 사용하여 LDH 활성에 대해서 분석하였다. 결과는 독소-유도된 독성으로부터의 보호율 %로서 계산되었다.

이들 화합물은 SIN-1 (3-모르폴리노-시드노니민, 퍼옥시니트라이트를 생성) 및 캄프토테신과 같은 독성제에 의해서 발생되는 세포 사멸로부터의 보호에 있어서의 그들의 효능에 대해서 평가하였다. 시험관내에서 평가된 표적 세포는 설치류 희돌기교세포 조상세포 및 그들의 성숙한 대응물의 일차 배양물이다.

Claims

다발성 경화증이 있는 환자에게 5-클로로-6-(4-하이드록시페닐)-2-나프탈레놀 및 6-(4-하이드록시-페닐)-2-나프탈렌메탄올, 이들의 이성체, 라세메이트 및 에난티오머, 및 이들 화합물의 무기 또는 유기산과의 염으로 구성된 그룹으로부터 선택된 화합물의 치료학적 유효량을 투여하는 것을 포함하여, 다발성 경화증 환자의 뉴런 또는 희돌기교세포를 보호함으로써 다발성 경화증을 치료하는 방법.
제1항에 있어서, 상기 유효량이 매일 투여되며, 약 0.001 내지 약 100 mg/환자의 체중 kg/일의 범위인 방법.