KR20070086084A - 돼지 생식기 및 호흡기 증후군 바이러스 균주 및 조성물 - Google Patents

돼지 생식기 및 호흡기 증후군 바이러스 균주 및 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR20070086084A
KR20070086084A KR1020077013228A KR20077013228A KR20070086084A KR 20070086084 A KR20070086084 A KR 20070086084A KR 1020077013228 A KR1020077013228 A KR 1020077013228A KR 20077013228 A KR20077013228 A KR 20077013228A KR 20070086084 A KR20070086084 A KR 20070086084A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
virus
attenuated
prrs virus
atcc pta
immunogenic composition
Prior art date
Application number
KR1020077013228A
Other languages
English (en)
Other versions
KR101152012B1 (ko
Inventor
리차드 헤세
Original Assignee
인터벳 인터내셔널 비.브이.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 인터벳 인터내셔널 비.브이. filed Critical 인터벳 인터내셔널 비.브이.
Publication of KR20070086084A publication Critical patent/KR20070086084A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101152012B1 publication Critical patent/KR101152012B1/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C07K14/08—RNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C12N7/04—Inactivation or attenuation; Producing viral sub-units
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552—Veterinary vaccine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/10011—Arteriviridae
    • C12N2770/10022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/10011—Arteriviridae
    • C12N2770/10034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/10011—Arteriviridae
    • C12N2770/10061—Methods of inactivation or attenuation

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

본 발명은 돼지 생식기 및 호흡기 증후군 바이러스(PRRSV)의 두 가지 약독화 균주 및 약독화 돼지 생식기 및 호흡기 증후군 바이러스(PRRSV)의 하나 이상의 균주를 포함하는 면역성 조성물에 관한 것이다.

Description

돼지 생식기 및 호흡기 증후군 바이러스 균주 및 조성물{PORCINE REPRODUCTIVE AND RESPIRATORY SYNDROME VIRUS STRAINS AND COMPOSITIONS}
본 발명은 돼지 생식기 및 호흡기 증후군 바이러스(PRRSV)의 두 가지 약독화(attenuated) 균주 및 약독화 돼지 생식기 및 호흡기 증후군 바이러스(PRRSV)의 하나 이상의 균주를 포함하는 면역성 조성물에 관한 것이다.
PRRS는 1987년에 미국에서 처음으로 알려졌다. 이는 미국 북부의 주요 돼지 생산 지역 전역에 걸쳐 빠르게 퍼졌다. 이는 다음으로 유럽에서 나타났고, 최근 PRRSV는 거의 전 세계적인 분포를 갖는다. 많은 돼지 생산업자, 정부, 및 수의사는 PRRS가 현재 세계적 돼지 산업계가 마주치게 된 가장 심각한 경제적 위협 중의 하나라고 믿는다.
이름에서 나타내듯이, PRRS는 모든 나이의 돼지에서(그러나, 어린 돼지에서 가장 흔하고 심각함), 수태한 암컷의 생식 불능(특히 수태 기간 말기에 처음으로 감염되었을 경우), 및 기도 질환을 일으키는 능력에 임상적 특징이 있다. PRRSV 감염은 다른 돼지 병원균의 효과도 강화시키는 것으로 생각된다. 소급 혈청학적 연구(retrospective serological study)에 근거하여, 돼지의 PRRSV로의 많은 감염은 증상이 없거나 또는 명백한 임상적 증상이 적다는 것이 또한 명백해졌다. 따라서, PRRSV는 종종 가축 무리에 접근하여, 이의 존재가 처음 발견되기도 전에 광범위하게 퍼지게 된다.
상기 바이러스는 적어도 몇 달 동안은 감염된 숙주 내에서 생존할 수 있다. 이러한 “보균자”가 감염을 지속시키며, 질병의 제어를 매우 어렵게 만든다. 결론적으로, PRRSV의 경제적 영향을 줄이는 가장 효과적인 수단은 치명적인 종류의 바이러스에 노출되기 전에 감염 가능성이 있는 돼지에게 백신을 접종(면역화)하는 것이다.
PRRSV의 단일 균주로부터 제조한 약독화 백신(Boehingher Ingelheim 제조)이 상업적으로 이용가능하다. 그 중 하나는 기도 질환의 예방을 위해 3 내지 18주 된 돼지에 사용되도록 허가된 것이다(Gorcyca et al., 1995). 그 중 하나는 교배 전에 사용하도록 허가되었다.
다른 약독화 백신은 생식 불능의 예방을 위한 것으로 알려져 왔다(Hesse et al., 1996). 이는 PRRSV의 단일 균주로부터 제조되었고, PRRSV의 단일 균주에 대하여만 시험하였다. 공격(challenge) 후 백신 접종한 젊은 암돼지(gilt)의 기왕반응(anamnestic response)에 근거하여, 공격 균주는 이종(heterologous)으로 기재되었으나; 두 균주, 즉, 백신으로 사용된 것과 면역 공격에 사용된 것이 유전적으로 또는 항원적으로(antigenically) 다르다는 것을 입증할 수 있는 어떤 증거도 제시되지 않았다.
공지된 두 종류의 PRRSV 주 혈청형이 존재한다(Done et al., 1996). 하나(원형(prototype) Lelystad)는 최소한 서유럽에서 분리된 대부분의 균주를 대표한다. 다른 하나(원형(prototype) ATCC 2332)는 최소한 미국 북부와 아시아에서 분리된 대부분의 균주를 대표한다. 또한 원형 내 항원 변이주가 있고(Meng et al., 1995), 미국 북부에서 분리된 균주간의 염기 서열 차이가 이들의 구분을 허용한다(Wesley et al., 1996).
발명의 요약
본 발명의 목적은 PRRSV가 발생시키는 임상 질병으로부터 돼지를 보호할 수 있는 면역성 조성물을 제공하는 것이다. 면역성 조성물은 미국에서 PRRSV로 감염된 돼지로부터 분리된 PRRSV의 두 균주로부터 얻어진다.
본 발명의 또 다른 목적은 PRRS에 대한 다가(polyvalent) 백신으로 유용하게 사용될 수 있는 PRRSV의 약독화 균주를 제공하는 것이다.
본 발명은 상기 표현된 목적에 제한되지 않고, 본 발명의 다른 목적 및 이점은 이하의 설명으로부터 쉽게 명백해질 것이다.
생물학적 물질의 기탁
약독화 균주 PP5 및 LC13을 부다페스트 조약하에 버지니아 마나사스에 소재하는 미국 모식균 배양 수집소("ATCC")에 2004년 11월 4일자로 기탁하고, 각각 기탁 번호 ATCC PTA-6282 및 ATCC PTA-6281을 부여받았다. 37 C.F.R.§1.808에 따라, 생물학적 물질은 두 조건이 부여되었다. 첫째로, 기탁물에 대한 접근이 특허 출원 계속 중에 이루어져, 37 C.F.R.§1.14 및 35 U.S.C.§122 하에 임명된 위원에 의해 결정된 자가 상기 기탁물을 참조할 수 있고; 둘째로, 하나의 예외로서, 기탁자에 의해 부여된 기탁 물질의 공개적 이용에 대한 제한은 특허 허여에 의해 취소 불가능하게 제거된다.
발명의 상세한 설명
“면역성 조성물”이란 본 명세서에서 동물 내에서 면역 반응을 자극할 수 있는 투여가능한 형태의 임의의 종류의 생물학적 물질을 지칭하는 넓은 의미로 정의된다. 이러한 발명의 목적상, 면역성 조성물은 바이러스 그 자체이거나 또는 바이러스의 면역성(항원성) 성분인, 바이러스성 물질을 포함할 수 있다.
본 발명의 면역성 물질은 PRRSV의 2가지 약독화 균주: PP5 및 LC13 중 하나 이상으로부터 제조된다. 각 균주는 개별적으로 안전성 및 면역 반응을 유도할 수 있는 능력이 시험되고, 두 균주로 구성된 다가(polyvalent) 백신은 최소한 각 단가(monovalent) 조성물만큼은 안전하고 효과적일 것이며, 더 나아가 PRRSV의 악성의 야생 균주에 대한 더 넓은 면역성을 제공할 수 있을 것으로 생각된다.
PRRSV의 2가지 균주(균주 PP5 및 LC13)가 면역성 조성물 및 백신으로 개발하기 위해 선택되었다.
PRRSV 균주 PP5
PRRS 바이러스의 악성 분리물을 병든 돼지의 조직 샘플로부터 얻었다. 병든 돼지로부터 얻은 조직의 균질 현탁액을 일차 폐포대식세포에 접종하고, 접종에 의한 세포 병리학적 효과로 바이러스의 존재를 확인하였으나, 배양을 제어하지는 않았다. 이어서 간접 면역형광법으로, PRRS에 특이적인 단일클론 항체와의 반응성으로 분리된 바이러스를 확인하였다. 바이러스로 감염시킨 후 2일 후에, 융합 Marc145 세포의 96-웰 플레이트를 80% 아세톤으로 10 분간 고정시켰다. 그 후 단층을 SDOW17 또는 VO17 단일클론 항체와 배양하였다. 세척 후, 플루오레세인 이소티오시아네이트가 결합된 항마우스 IgG와 배양하고, 세척하고, 현미경법으로 형광을 조사함으로써 단일클론 항체의 각 바이러스와의 반응성을 측정하였다. 형광 양성은 PP5 바이러스에 대한 단일클론 항체 둘 모두에서 나타났다. PP5 바이러스는 조직 배양에서, 연속적 계대배양으로 약독화하였다. 바이러스는 처음에 일차 돼지폐포대식세포(SAM) 배양의 접종을 거치고(첫번째 계대로서), 그 후 총 81 계대수가 되도록 Marc145 세포에서의 연속적 계대배양을 거쳤다. 이러한 과정 동안, 플라크 정제(plaque purification)에 의해 바이러스 클론이 분리되고 표현형이 확인되었다. 면역성 조성물 클론 PP5는 돼지 폐포대식세포의 성장을 약화시키고, 새끼 돼지 및 수태한 암돼지에서 질병 유도를 감소시키기 위해 선택되었다. PP5는 Marc145 세포에서 증식되고, 마스터 시드(master seed) 바이러스로 동결되었다.
PP5는 그 서열의 ORF5 영역에 의해, 다른 분리된 약독화 PRRSV 균주로부터 분화가능하다. PP5 ORF5 서열은 서열번호 1로 나타낸다.
PRRSV 균주 LC13
PRRS 바이러스의 악성 분리물을 병든 돼지의 조직 샘플로부터 얻었다. 병든 돼지로부터 얻은 조직의 균질 현탁액을 일차 폐포대식세포에 접종하고, 접종에 의한 세포 병리학적 효과로 바이러스의 존재를 확인하였으나, 배양을 제어하지는 않았다. 이어서 분리된 바이러스는 간접 면역형광법으로, PRRS에 특이적인 단일클론 항체와 반응하는지를 확인하였다. 바이러스로 감염시킨 후 2일 후에, 융합 Marc145 세포의 96-웰 플레이트를 80% 아세톤으로 10 분간 고정시켰다. 그 후 단층을 SDOW17 또는 VO17 단일클론 항체와 배양하였다. 세척 후, 플루오레세인 이소티오시아네이트가 결합된 항마우스 IgG와 배양하고, 세척하고, 현미경법으로 형광을 조사함으로써 단일클론 항체의 각 바이러스와의 반응성을 측정하였다. 형광 양성은 LC13 바이러스에 대한 단일클론 항체 둘 모두에서 나타났다. LC13 바이러스는 조직 배양에서, 연속적 계대배양으로 약독화하였다. 바이러스는 처음에 일차 돼지폐포대식세포(SAM) 배양에서 분리되고, 그 후 총 67 계대수가 되도록 Marc145 세포에서 연속적 계대배양되었다. 이러한 과정 동안, 플라크 정제에 의해 바이러스 클론이 분리되고 표현형이 확인되었다. 면역성 조성물 클론 (LC13)은 돼지 폐포대식세포의 성장을 약화시키고, 새끼 돼지 및 수태한 암돼지에서 질병 유도를 감소시키기 위해 선택되었다. LC13은 Marc145 세포에서 증식되고, 마스터 시드(master seed) 바이러스로 동결되었다.
LC13은 그 서열의 ORF5 영역에 의해, 다른 분리된 약독화 PRRSV 균주로부터 분화가능하다. LC13 ORF5 서열은 서열번호 2로 나타낸다.
바이러스 조성물 또는 바이러스는 생리 식염수 또는 조직 배양 배지와 같은 약학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제와 함께 효과적인 면역화 투약량으로 제제가 투여되도록 제조된다. “효과적인 양”이라는 표현은 PRRSV의 악성 균주의 공격에 대해 돼지에서 면역을 유도할 수 있는 양을 의미한다. 실질적인 용량의 결정은 당업자의 역량 내이다. 하기 실시예에 근거하여, 1회 투여량이 약 104.5 TCID50/ml인 한가지 구체예가 고려된다.
조성물은 경구, 구비(oronasally) 또는 주사로 투여가능하다. 당업계에 알려진 적절한 보조제가 조성물 제제에 포함될 수 있다. 상기한 바와 같이, 주 면역성 조성물 또는 백신은 각각 사용될 수 있고, 또는 다가 조성물 제제로 어떠한 조합으로도 함께 사용될 수 있다.
하기 실시예는 본 발명의 목적의 성공적인 달성을 설명하기 위해 사용된다. 어떠한 것도 이의 적용 범위를 제한하고자 하는 것은 아니다.
면역성 조성물은 기질로서 MARC145를 사용하여 제조된다(그러나 MAl04 세포와 같은 PRRS 바이러스의 생장을 돕는 대체 세포주가 사용될 수도 있다). MARC145 세포는 5 내지 10%의 우태혈청(fetal bovine serum), 2 mM L-글루타민, 및 항생제(예를 들어, 30 ㎍/ml 겐타마이신)를 포함하는 Eagle's minimum essential media(EMEM)를 사용하여, 적절한 조직 배양 용기(예를 들어, 850 cm2 롤러 바틀)에서 융합성으로 성장시켰다. Dulbecco's modified essential media [DMEM] , Medium 199 등과 같은 MARC145 세포의 성장을 돕는 대체 조직 배양 배지가 사용될 수도 있다. MARC145 세포의 융합 단층은 1:10의 감염다중도(MOI)에서(1:5 내지 1:1000의 범위의 MOI의 것이 사용가능) PP5 또는 LC13으로 접종되었다. 그 후 3 내지 5일 동안 37℃에서 배양하고, 배양 상등액을 경사(decanting)에 의해 수집하였다.
바이러스 용액을 상기와 같이 보충된 EMEM으로 연속 희석하여 역가를 맞추고, 96-웰 조직 배양 플레이트 내에서 융합 MARC145 또는 MA104 세포의 4회 이상 반복되는 웰 내에 웰 당 0.2 ml를 접종하였다. 가습 챔버(humidified chamber) 내에서 37℃, 3-5% CO2로 5일간 배양하고, 세포 병리학적 효과를 관찰하였다. 역가(50% 종점)를 Spearman 및 Karber법에 따라 계산하였다.
사면역성(killed immunogenic) 조성물 또는 사백신(killed vaccine) 제제의 제조에 있어서, 바이러스 용액은 포름알데히드, 글루타르알데히드, 이원(binary) 에틸렌이민, 또는 베타-프로피오락톤과 같은 화학적 불활성화 물질과 배양된다. 바이러스 용액은 그 후 면역성 조성물로 제제화될 때까지 4℃에서 보관된다. 면역성 조성물은 바이러스 용액(예비-불활성화 역가에 근거하여, 105 내지 109 TCID50의 바이러스 포함)을 생리적으로 허용가능한 희석제(예를 들어, EMEM, Hank's Balanced Salt Solution®, 인산버퍼식염수) 및 면역촉진 보조제(예를 들어, 미네랄 오일, 식물유, 수산화알루미늄, 사포닌, 비이온성 계면활성제, 스쿠알렌, 또는 당업계에 공지된 다른 화합물, 단독으로 사용되거나 또는 조합하여 사용됨)와 혼합하여 제조된다. 면역성 조성물은 일반적으로 1 내지 5 ml이다.
생면역성(live immunogenic) 조성물 또는 생백신(live vaccine) 제제에서, 바이러스 용액(약독화 바이러스)은 사용될 때까지 -50℃ 이하에서 냉동 보관된다. 바이러스 용액(일반적으로 106.0 TCID50/1회량을 포함하나, 1O3 .0 내지 1O7 .0 TCID50/1회량의 범위임)은 생리학적으로 적절한 희석제(예를 들어, EMEM, Hank's Balanced Salt Solution®, 인산버퍼식염수) 및 바이러스를 안정화시키도록 고안된 화합물의 생리학적으로 적절한 혼합물로 희석된다. 바이러스를 안정화시키기 위해 단독으로 또는 조합하여 사용될 수 있는 당업계에 공지된 화합물은 수크로오스, 락토오스, N-Z 아민, 글루타치온, 네오펩톤, 젤라틴, 덱스트란, 및 트립톤을 포함한다. 백신은 사용될 때까지 냉동보관(-50℃ 이하)되거나, 4℃에서 보관하여 냉동건조된다. 면역성 조성물 또는 백신은 일반적으로 2 ml(1 내지 5 ml의 범위)의 1회 용량 크기를 갖는다.
PRRS-유도 질병의 예방을 위해, 백신의 1회량을 피내(intradermal), 근육내, 피하, 비강내, 또는 경구 투여함으로써 생면역성 또는 사면역성 조성물로 돼지를 백신 접종한다. 부스터 백신 접종(booster vaccination)은 최초 면역화의 2 내지 4주 후에 투여가능하다. PRRS 관련 질병의 예방을 위해, 백신 접종 계획은 일반적으로 교배 전 최대 6주에 시작되고, 최종적으로는 교배 후 1주까지 가능하다. 새끼 돼지의 호흡기 질환의 예방을 위하여, 백신 접종은 생후 3주와 같이 일찍 이루어져야 한다.
균주 약독화의 예 및 이들의 면역반응 유도 능력
PP5 실험
수태 85일째의 PRRS 혈청음성의 암돼지에 마스터 시드 백신 균주 PP5(1O4 .5 TCID50/ml)를 비강 내로(3 ml/비공) 접종하였다. 모든 암돼지는 예상했던 시간에 분만하였다.
표 1은 PP5 PRRS 바이러스 균주 실험의 결과를 제공한다. 첫번째 PP5-WT군은 야생형(wild type) 바이러스 또는 악성/질병형 대조군이다. PP5-MSV군은 약독화 PP5 균주의 마스터 시드 바이러스이다. PP5-BP는 야생형 바이러스로의 역전(reversion)이 일어났는지 보기 위한, PP5-MSV로부터 5번째 역계대(back passage)(돼지 계대)를 나타낸다.
PP5 실험의 결과를 표 2에 요약하였다. 각각 16% 출산 사망률(parturition mortality) 및 19%의 출산 사망률을 나타내는 PP5-MSV 및 PP5-BP에 비하여, PP5-WT은 69%의 출산 사망률을 나타냈다.
PP5
군 암돼지 # Elisa 항체 출산 사망률 %
PP5-WT 40 NT 100%
PP5-WT 165 0.9 85%
PP5-WT 313 1.3 67%
PP5-WT 1138 1.2 25%
PP5-WT 1156 1.2 45%
PP5-WT 합계 69%
군 암돼지 # Elisa 항체 출산 사망률 %
PP5-MSV 1344 0.511 20%
PP5-MSV 1347 0.002 0%
PP5-MSV 1348 1.005 40%
PP5-MSV 1350 1.151 15%
PP5-MSV 1353 0.899 0%
PP5-MSV 1355 1.188 13%
PP5-MSV 합계 16%
군 암돼지 # Elisa 항체 출산 사망률 %
PP5-BP 1345 0.932 38%
PP5-BP 1346 0.56 13%
PP5-BP 1349 0.515 33%
PP5-BP 1351 0.569 0%
PP5-BP 1352 1.174 27%
PP5-BP 1354 0.624 0%
PP5-BP 합계 19%
PP5의 요약
출산 사망률 %
야생형 바이러스 69% PP5-WT
마스터 시드 바이러스 16% PP5-MSV
역계대 바이러스 19% PP5-BP
LC13 실험
수태 85일째의 PRRS 혈청음성의 암돼지에 마스터 시드 백신 균주 LC13(1O4 .5 TCID50/ml)을 비강 내로(3 ml/비공) 접종하였다. 모든 암돼지는 예상했던 시간에 분만하였다.
표 3은 LC13 PRRS 바이러스 균주 실험의 결과를 제공한다. 첫번째 LC13-WT군은 야생형(wild type) 바이러스 또는 악성/질병형 대조군이다. LC13-MSV군은 약독화 LC13 균주의 마스터 시드 바이러스이다. LC13-BP는 야생형 바이러스로의 역전이 일어났는지 보기 위한, LC13-MSV로부터 5번째 역계대(back passage)(돼지 계대)를 나타낸다.
LC13 실험의 결과를 표 4에 요약하였다. LC13-MSV 및 LC13-BP가 각각 12% 출산 사망률 및 15%의 출산 사망률을 나타내는데 비하여, LC-WT은 86%의 새끼 돼지 출산 사망률을 나타냈다.
LC13
군 암돼지 # Elisa 항체 출산 사망률 %
LC13-WT 187 1.3 75%
LC13-WT 309 NT 100%
LC13-WT 518 0.8 100%
LC13-WT 858 1.2 88%
LC13-WT 1041 1.2 56%
LC13-WT 합계 86%
군 암돼지 # Elisa 항체 출산 사망률 %
LC13-MSV 843 1.0 0%
LC13-MSV 845 0.7 8%
LC13-MSV 846 0.0 0%
LC13-MSV 848 1.1 25%
LC13-MSV 850 1.0 11%
LC13-MSV 합계 12%
군 암돼지 # Elisa 항체 출산 사망률 %
LC13-BP 844 ＜0.1 0%
LC13-BP 847 ＜0.1 31%
LC13-BP 849 ＜0.1 10%
LC13-BP 851 ＜0.1 11%
LC13-BP 853 ＜0.1 0%
LC13-BP 합계 13%
LC13의 요약
출산 사망률 %
야생형 바이러스 86% LC13-WT
마스터 시드 바이러스 12% LC13-MSV
역계대 바이러스 13% LC13-BP
표 1 및 표 3의 효소결합 면역흡수 측정법(Elisa) 항체 데이터는 암돼지의 Elisa 항체 측정법의 결과를 나타낸다. ELISA는 PRRS에 대한 항체를 검출하는데 가장 일반적으로 사용되는 시험법이다. IDEXX Laboratories Inc.에서 제조하는 HerdChek PRRS ELISA는 돼지 혈청 또는 혈장으로부터 항 PRRSV 뉴클레오캡시드(N) 단백질 항체를 검출하기 위한 것이다. 시험 결과는 샘플/포지티브(S/P) 지수에 근거하여 결정된다: 포지티브 = S/P 비 > 0.4, 네거티브 = S/P 비 < 0.4. 표 1 및 표3의 결과에서와 같이, LC13-MSV 및 PP5-MSV 모두 PRRS에 대한 항체를 증가시켰다. 이러한 데이터는 면역성 조성물이라는 증거를 제공한다.
이러한 적용에서의 데이터는 약독화 PRRS 바이러스 균주 PP5 및 LC13 둘 모두가 안전하며, 면역 반응을 유도한다는 것을 명확히 증명해준다.
SEQUENCE LISTING <110> Akzo Nobel Patent Department <120> PORCINE REPRODUCTIVE AND RESPIRATORY SYNDROME VIRUS STRAINS AND COMPOSITIONS <130> mwm <160> 2 <170> PatentIn version 3.2 <210> 1 <211> 603 <212> DNA <213> linear <400> 1 atgttgggga aatgcttgac cgcgggctat tgctcgcgat tgctttcttt gtggtgtatc 60 gtgccgttct gttttgctgt gctcgtcaac gccaacaaca gcagcagctc tcattttcag 120 tcgatttata acttgacgct atgtgagctg aatggcacag attggctggc ttcatccttc 180 aattgggcag tggagacttt tgttgttttt cccgtgttga ctcatattgt ttcctacggt 240 gcacttacca ccagccattt ccttgacaca gttggtctgg tcactgtgtc caccgccggg 300 ttttatcacg ggcggtacgt cttgagtagc atctacgcgg tctgtgccct ggctgcgttg 360 atttgcttcg tcattagatt tgcgaagaac tgcatgtctt ggcgctactc atgtaccaga 420 tataccaact tccttctaga tactaagggc agactctatc gttggcggtc gcctgttatc 480 atagagaaag ggggtaaggt tgaggtcgaa ggccacctga tcgatctcaa aagagttgtg 540 cttgatggtt ccgtggcaac tcctttaacc agagtttcag ctgaacaatg gggtcgtccc 600 tag 603 <210> 2 <211> 603 <212> DNA <213> glycoprotein <400> 2 atgttgggga aatgcttgac cgcgggctgt tgctcgcaat tgtttttttt gtggtttatc 60 gtgccgttct ggtttgctgt gctcgtcaac gccgacagca acaacagctc ccattttcag 120 tcgatttata acttgacgct atgtgagctg aatggcacag attggctggc taaccatttt 180 gattgggcag tggaggcttt tgttatcttt cccgcgttga ctcacattgt ttcctatggt 240 gcacttacca ccagccattt ccttgacaca gttggtctgg ttactgtgtc caccgccggg 300 tttcgtcaca agcggtatgt cttgagtagc atctacgcgg tctgtgccct ggctgcgttg 360 atttgcttcg tcatcagatt tgcgaagaac tgcatgtcct ggcgctactc atgtaccaga 420 tataccaact tccttctaga tactaagggc aggctctatc ggtggcggtc gcctgttatc 480 atagagaaag ggggtaaggt tgaggtcgga ggccacctga tcgacctcaa aagagttgtg 540 cttgatggtt ccgtggcaac tcctttaacc agagtttcag ctgaacaatg gggtcgtccc 600 tag 603

Claims (12)

  1. 돼지 생식기 및 호흡기 증후군에 의해 발생하는 질병에 대한 면역반응을 유도하기 위한 면역성 조성물로서, 약독화 PRRS 바이러스 ATCC PTA-6281, 약독화 PRRS 바이러스 ATCC PTA-6282 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된 효과적인 양의 약독화 PRRS 바이러스; 및 약학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 면역성 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 바이러스가 약독화 PRRS 바이러스 ATCC PTA-6281인 것인 면역성 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 바이러스가 약독화 PRRS 바이러스 ATCC PTA-6282인 것인 면역성 조성물.
  4. 돼지 생식기 및 호흡기 증후군에 의해 발생하는 질병에 대한 면역반응을 유도하기 위한 다가(polyvalent) 면역성 조성물로서, PRRS 바이러스 ATCC PTA-6281 및 PRRS 바이러스 ATCC PTA-6282를 포함하는, 효과적인 양의 2 이상의 약독화 바이러스를 포함하는 면역성 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 보조제를 더욱 포함하는 면역성 조성물.
  6. ATCC 기탁번호 PTA-6282로 나타내는 약독화 돼지 생식기 및 호흡기 증후군 바이러스 PP5.
  7. ATCC 기탁번호 PTA-6281로 나타내는 약독화 돼지 생식기 및 호흡기 증후군 바이러스 LC13.
  8. 돼지 생식기 및 호흡기 증후군으로부터 돼지를 보호하는 방법으로서, 상기 돼지를 약독화 PRRS 바이러스 ATCC PTA-6281, 약독화 PRRS 바이러스 ATCC PTA-6282 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된 효과적인 양의 약독화 PRRS 바이러스로 접종하는 단계를 포함하고, 상기 약독화 PRRS 바이러스는 약학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제로 제제화된 것인 방법.
  9. 제8항에 있어서, 상기 바이러스가 약독화 PRRS 바이러스 ATCC PTA-6281인 것인 방법.
  10. 제8항에 있어서, 상기 바이러스가 약독화 PRRS 바이러스 ATCC PTA-6282인 것인 방법.
  11. 제9항에 있어서, 상기 제제가 보조제를 더욱 포함하는 것인 방법.
  12. 서열번호 1 또는 서열번호 2로 나타내는 ORF5를 갖는 약독화 돼지 생식기 및 호흡기 증후군 바이러스.
KR1020077013228A 2004-11-19 2005-11-09 돼지 생식기 및 호흡기 증후군 바이러스 균주 및 조성물 KR101152012B1 (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US62987304P 2004-11-19 2004-11-19
US60/629,873 2004-11-19
US67400205P 2005-04-21 2005-04-21
US60/674,002 2005-04-21
PCT/US2005/040366 WO2006055331A2 (en) 2004-11-19 2005-11-09 Porcine reproductive and respiratory syndrome virus strains and compositions

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20070086084A true KR20070086084A (ko) 2007-08-27
KR101152012B1 KR101152012B1 (ko) 2012-07-04

Family

ID=36123980

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020077013228A KR101152012B1 (ko) 2004-11-19 2005-11-09 돼지 생식기 및 호흡기 증후군 바이러스 균주 및 조성물

Country Status (14)

Country Link
US (1) US8178103B2 (ko)
EP (1) EP1833508B1 (ko)
JP (1) JP4750125B2 (ko)
KR (1) KR101152012B1 (ko)
CN (1) CN101084011B (ko)
AT (1) ATE479440T1 (ko)
AU (1) AU2005306781B2 (ko)
BR (1) BRPI0518353A2 (ko)
CA (1) CA2587849A1 (ko)
DE (1) DE602005023342D1 (ko)
DK (1) DK1833508T3 (ko)
MX (1) MX2007005968A (ko)
PL (1) PL1833508T3 (ko)
WO (1) WO2006055331A2 (ko)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101345786B1 (ko) * 2010-09-09 2014-02-06 녹십자수의약품(주) 신규한 돼지생식기호흡기증후군 바이러스 및 그의 용도
KR101430223B1 (ko) * 2012-10-09 2014-09-25 전북대학교산학협력단 면역유도능이 증가된 돼지생식기호흡기증후군 바이러스
WO2014148738A1 (ko) * 2013-03-20 2014-09-25 주식회사 옵티팜 신규한 국내형 돼지생식기호흡기증후군 바이러스

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2007251122B2 (en) * 2006-05-12 2013-01-10 Bharat Biotech International Limited A composition useful as a vaccine
CN100523177C (zh) * 2007-01-09 2009-08-05 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 猪繁殖与呼吸综合症病毒弱毒疫苗株及其应用
CN101307305B (zh) * 2008-04-30 2010-06-16 中国动物疫病预防控制中心 一种猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒株及免疫原性物质和疫苗
UA108902C2 (uk) * 2010-11-10 2015-06-25 Вірус північноамериканського репродуктивного та респіраторного синдрому свиней (prrs) та його застосування
DK2675475T3 (en) * 2011-02-17 2015-09-14 Boehringer Ingelheim Vetmed NEW EUROPEAN PRRSV TRIAL
CN102321638B (zh) * 2011-09-06 2013-04-10 南京农业大学 一种新的猪繁殖与呼吸综合征病毒orf5修饰基因及其应用
JP6484241B2 (ja) * 2013-12-03 2019-03-13 インターベット インターナショナル ベー． フェー． ＰＲＲＳおよびローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）に対するブタワクチン
CN106924726B (zh) * 2015-12-29 2021-02-09 普莱柯生物工程股份有限公司 一种用于预防猪繁殖与呼吸综合征的疫苗组合物及其制备方法和应用
CN106039302A (zh) * 2016-06-21 2016-10-26 江苏省农业科学院 猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸疫苗及其制备方法
JP6893765B2 (ja) * 2016-07-15 2021-06-23 森山　雅美 人以外の陸上動物用のウイルス感染症に対する抗体誘導剤とその補助剤

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE206455T1 (de) * 1994-04-11 2001-10-15 Akzo Nobel Nv Europäische vakzinstämme des fortplanzungs- atmungs-syndromsvirus des schweins
ES2102971B1 (es) * 1996-01-25 1998-03-01 Hipra Lab Sa Nueva cepa atenuada del virus causante del sindrome respiratorio y reproductivo porcino (prrs), las vacunas y medios de diagnostico obtenibles con la misma y los procedimientos para su obtencion.
US5976537A (en) * 1996-07-02 1999-11-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine
ATE199022T1 (de) * 1996-10-09 2001-02-15 Akzo Nobel Nv Europäische vakzinstämme des fortplanzungs- atmungs-syndromsvirus des sweins (prrsv)
AU4482200A (en) * 1999-04-22 2000-11-10 United States Department Of Agriculture Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine, based on isolate ja-142
US6406460B1 (en) 2000-07-21 2002-06-18 Agecom, Inc. System and method for automatic needle change warning
WO2002072802A2 (en) * 2001-03-09 2002-09-19 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Live attenuated strains of prrs virus
ATE557082T1 (de) * 2002-04-05 2012-05-15 Boehringer Ingelheim Vetmed Sequenz positionen zur anpassung bei prrsv

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101345786B1 (ko) * 2010-09-09 2014-02-06 녹십자수의약품(주) 신규한 돼지생식기호흡기증후군 바이러스 및 그의 용도
KR101430223B1 (ko) * 2012-10-09 2014-09-25 전북대학교산학협력단 면역유도능이 증가된 돼지생식기호흡기증후군 바이러스
WO2014148738A1 (ko) * 2013-03-20 2014-09-25 주식회사 옵티팜 신규한 국내형 돼지생식기호흡기증후군 바이러스

Also Published As

Publication number Publication date
PL1833508T3 (pl) 2011-02-28
KR101152012B1 (ko) 2012-07-04
DK1833508T3 (da) 2010-12-06
US20090238844A1 (en) 2009-09-24
AU2005306781B2 (en) 2011-12-22
ATE479440T1 (de) 2010-09-15
JP4750125B2 (ja) 2011-08-17
CN101084011A (zh) 2007-12-05
DE602005023342D1 (en) 2010-10-14
WO2006055331A3 (en) 2006-08-10
MX2007005968A (es) 2007-07-20
US8178103B2 (en) 2012-05-15
AU2005306781A1 (en) 2006-05-26
JP2008520238A (ja) 2008-06-19
EP1833508B1 (en) 2010-09-01
BRPI0518353A2 (pt) 2008-11-18
CN101084011B (zh) 2010-06-16
EP1833508A2 (en) 2007-09-19
CA2587849A1 (en) 2006-05-26
WO2006055331A2 (en) 2006-05-26
WO2006055331A9 (en) 2006-10-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101152012B1 (ko) 돼지 생식기 및 호흡기 증후군 바이러스 균주 및 조성물
ES2349041T3 (es) Derivados de hidantoina para el tratamiento de trastornos inflamatorios.
JP3715675B2 (ja) ブタ生殖呼吸症候群ウイルス（ｐｒｒｓｖ）のヨーロッパワクチン株
KR100484041B1 (ko) 돼지생식 및 호흡증후군 바이러스의 유럽백신 균주
FI117513B (fi) Menetelmä PRRS-viruksen viljelemiseksi ja sen käyttö rokotteissa
CA2225388C (en) Low pathogenicity prrs live virus vaccines and methods of preparation thereof
US7309493B2 (en) Inactivated bovine scours vaccines, process and method of preventing bovine scours
EP0835929A1 (en) New attenuated strain of the virus causing the porcine reproductive respiratory syndrome (prrs), vaccines and diagnostic means obtainable with said strain, and production process
EP2319534A1 (en) Hemorrhagic feline calicivirus, calicivirus vaccine and method for preventing calicivirus infection or disease
EP2658570B1 (en) Bovine viral diarrhea virus type 1b vaccine compositions and methods
KR19990087432A (ko) 돼지 생식 및 호흡 증후군 백신
Ramakrishnan et al. Immune response and protective efficacy in sheep immunised with hydroxylamine-inactivated bluetongue virus vaccine
ES2349045T3 (es) Composiciones y cepas del virus del sindrome reproductivo y respiratorio.
KR20240028924A (ko) 높은 중화 항체를 유도하는 돼지 유행성 설사병 바이러스 및 불활화 백신 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
LAPS Lapse due to unpaid annual fee