KR20070084295A

KR20070084295A - 아일렛 분리를 위한 췌장 적합성을 판단하는 점수 부여방법

Info

Publication number: KR20070084295A
Application number: KR1020077011167A
Authority: KR
Inventors: 로렌스 가즈다; 알버트 엘. 루빈; 배리 스미스
Original assignee: 더 로고신 인스티튜트
Priority date: 2004-11-17
Filing date: 2005-11-14
Publication date: 2007-08-24
Also published as: AU2005306676A2; RU2355404C2; CN101056988B; KR100890375B1; ATE472608T1; JP2008520240A; AU2005306676B2; PT1812583E; US20060121445A1; CN101056988A; US7413871B2; ES2344796T3; CA2587695A1; DK1812583T3; AU2005306676A1; JP4704439B2; CA2587695C; HRP20100472T1; RU2007122628A; WO2006055501A2

Abstract

치료상으로 유용한 아일렛(islet)의 공급원으로서 췌장을 평가하는 방법이 개시된다. 점수 부여 시스템은 5가지 기준에 의해 제시된다. 3개의 기준이 포지티브(positive) 값이면, 췌장은 치료상으로 유용한 아일렛의 공급원으로서 적합한 것이다.

아일렛(islet), 췌장, 경계 설정, 냉 허혈 손상 시간, 온 허혈 손상 시간

Description

아일렛 분리를 위한 췌장 적합성을 판단하는 점수 부여 방법 {SCORING METHOD FOR DETERMINING PANCREAS SUITABILITY FOR ISLET ISOLATION}

본 출원은 그 전체가 참조로서 포함되어 있으며, 2004년 11월 18일에 출원된 출원번호 제60/629,277호에 대하여 우선권을 주장하는 출원이다.

본 발명은 아일렛(islet) 산물의 질과 양을 개선시키는 방법에 관한 것이다. 아일렛은 동물의 췌장에서 발견되며, 본 발명은 췌장이 양질의 아일렛 산물을 제공할지의 여부를 판단하는 방법에 관한 것이다.

아일렛 교체 치료(islet replacement therapy)는 다양한 질환을 갖는 환자들의 치료에 대한 실용적인 접근법으로 확립되고 있다. 이는 흉부의 기관을 떼어내야 하는 암 환자 (Tzakis, et al., Lancet, 336: 402-405 (1990)); 췌장암 (Clayton, et al., Transplantation, 76: 92-98 (2003); Farney, et al., Surgery, 110: 427-437 (1991); Fontes, et al., Transplant Proc ., 24: 2809 (1992); Obenholzer, et al., Transplantation, 69: 1115-1123 (2000); Robertson, et al., Diabetes, 50: 47-50 (2001)), 및 인슐린에 의존하는 환자들을 포함하며, 아일렛 이식은 치료상의 선택사항이다 (Goss, et al., Transplantation, 74: 1761-1766 (2002); Ricordi, et al., Transplantation, 75: 1524--1527 (2003); Ryan, et al., Diabetes, 50: 710-719 (2001); Shapiro, et al, N. Engl . J. Med, 343: 230-238 (2000)).

전술한 바와 같이, 치료에 있어서 아일렛의 유용성으로 인해, 그것들을 분리시키는 방법을 개발하는 데에 관심이 집중되고 있다. 자동화된 방법을 이용하는 아일렛의 분리에 관한 많은 보고들이 있지만 (Brandhorst, et al., Exp . Clin . Endocrinol Diabetes, 103 Suppl. 2: 3-14 (1995); Cui, et al., Cell Transplant, 6: 48-54 (2001); Marchetti, et al., Transplantation, 52: 209-213 (1991); Miyamoto, et, al., Cell Transplant, 7: 397-402 (1998); Nielsen, et al., Comp . Med., 52: 127-135 (2002); Swanson, et al., Hum . Immunnol, 62: 739-749 (2001); Toomey, et al., Brit . J. Surg ., 80: 240-243 (1993); Toso, et al. Cell Transplant, 9: 297-305 (2000), Wennberg, et al., Transplant . Proc ., 33: 2537 (2001)), 아일렛의 분리는 상당히 어려운 것으로 알려져 있다. 예를 들어, Bosta, et al., J. Investig Med, 43: 555-566 (1995); Krickhahn, et al., Cell Transplant, 11: 827-838 (2002); Krickhahn, et al., Ann Transplant, 6: 48-54 (2001), O'Neil, et al., Cell Transplant, 10: 235-246 (2001), 및 White, et al., Horm . Metab . Res, 31: 579-524 (1999), 이와 관련되는 모든 논제들이 있다.

이하의 본 명세서에 개시되는 발명은 성공적인 아일렛 산출의 가능성을 최대화하는 방법에 관한 것이다. 여기에 제시되어 있는 점수 부여 시스템을 사용함으로써, 임의의 주어진 췌장 아일렛 분리로부터의 양질의 아일렛 산출을 보증하는 기회를 최대화시킬 수 있다.

이것이 어떻게 수행되는지는 이하 설명될 것이다.

도 1a는 본 발명의 방법을 이용하는 것으로서, +3의 점수를 가지며, 이에 따라 유용한 것으로 평가된 췌장의 현미경 사진이다.

도 1b는 -1의 점수를 가짐으로써 유용성이 인정되지 않은 췌장의 현미경 사진이다.

실시예 1

이하의 실시예들에서 이용되는 동물들은 많은 출산 경력을 가진 2살 이상의 암컷들이다. 동물들에 대해 전기적인 충격을 가하고 피를 뽑았다. 그 후 췌장 해부를 위해 내장을 제거하였다. 전기적 충격에서 저온의 행크의 균일한 식염수(Hank's Balanced Salt Solution; HBSS)에 췌장을 놓는 사이의 시간 간격은 일반적으로 10 내지 15 분이다. 냉 허혈 손상 시간(cold ischemia time) 시간은 15 내지 20 분의 범위 내에 있다.

이러한 과정을 상세하게 설명하면, 췌장 전체가 회수되었고, 그 후 약 2 내지 5 mm 두께의 생검(biopsy) 조직 절단부를 제공하기 위해, 간문의(portal) 혈관 주위의 환상(annular) 고리가 우측 및 좌측 엽(lobe) 사이의 연결부에서 횡단선으로 절단되었다.

Ricordi, et al., ed . Pancreatic Islet Cell Transplantation (Austin: R. G. Landes Company, 1992), 132-142 에 따르면, 생검 조직 절단부는 반으로 절단되어 HBSS 또는 디티존 용액(DTZ)에 놓여지게 된다.

그 후 췌장은 2%의 열 불활성화된 돼지 혈청(porcine serum; PS)이 가해진 HBSS에 놓여지고, 아일렛 분리를 위해 실험실로 옮겨진다.

그 후 췌장이 아일렛 분리를 위해 적합한지의 여부를 판단하기 위해, 췌장 생검이 행해진다. 5개의 변수가 평가되었다. 후술하는 바와 같이, 각각의 경우에 있어서, +1 또는 -1 점수는 모두 변수로서 할당되었다.

첫째, 온 허혈 손상 시간(warm ischemia time)이 결정되었다. 이것은 출혈 시작과 냉 보존 용액에 췌장을 놓는 사이의 시간으로서 정의된다. 이것이 15분 이하의 시간 이내에 완료된다면, +1 점이 할당된다. 15분을 초과하는 경우, -1 점이 할당된다. 20분 까지의 온 허혈 손상 시간이 때때로 양질의 아일렛 산물을 생성시키는 반면, 15분의 온 허혈 손상 시간 이후에 그 성공 확률은 떨어진다.

두 번째 기준으로서, 췌장의 색이 관찰되었다. 췌장들 사이의 색 변화는 여러가지 요인들의 결과일 수도 있다. 예를 들어, 동물의 감전사나 스트레스 반응 등의 결과로 인해 췌장이 정맥성 출혈을 보인다면, 그 췌장은 그것을 아일렛 제공자로서 바람직하게 하는 자질들을 보여주지 못하게 된다. 두 가지 조건들은 모두 췌장 내의 혈액 풀링(blood pooling), 헤모글로빈 방출, 및 그것의 세포 밖 공간으로의 확산을 야기할 수 있다. 또한, 이것은 기관(organ)의 색 변화, 보통 갈색 또는 보라색으로의 변화를 야기한다.

췌장의 색은 주관적으로 관찰될 수 있으며, 당업자는 어둡게 염색된 췌장(바람직하지 않은 것으로서 -1점 부여)과 밝게 염색된 췌장(바람직한 것으로서, +1점 부여)을 식별할 수 있으나, 보다 객관적인 테스트에서는 반사되는 입사광의 비율인 "반사율"을 기초로 하여 색을 검출하는 색도계(colorimeter)를 이용한다. 이것이 약 60보다 작다면, -1의 점수가 할당되는 반면, 60보다 크다면 +1의 점수가 할당된다.

기관에 대하여 이용되는 세 번째 기준은 지방 함유량이다. 이것을 판단하기 위해, 약 2x2x.5cm 두께의 생검 샘플을 약 5분 동안 DTZ에 담근다. 염색 이후에, 조직을 10x 배율로 확대하여 해부 현미경으로 관찰한다. 아일렛은 적색으로 나타나고, 지방질 조직은 녹색으로 나타난다. 시야의 영역이 선택되고, 전체 영역 중에 녹색으로 나타나는 부분의 비율이 정해진다. 총 지방 함유량이 약 25%를 초과하면, 기관에 -1의 점수를 할당하는 반면, 지방 함유량이 약 25% 미만이면, +1의 점수를 부여한다.

기관의 지방 함유량을 판단하기 위해 다른 방법들을 사용할 수 있으며, 모두 여기에서 이용될 수 있다.

네 번째 채택된 기준은 아일렛 경계설정(demarcation)이다. 이러한 변수에 있어서, 동일한 염색 및 관찰 방법을 채택한다. 직경이 50㎛ 이상인 아일렛들을 경계설정을 위해 평가한다. 상세하게 설명하면, 2 이상의 DTZ 염색 아일렛 셀 그룹이 아일렛 중심으로부터 방사상으로 방출되고, 통상 매끄러운 것이 무엇인지를 넘어서, 외부 아일렛 경계/면을 뚜렷이 경계 짓는 경우, 이것은 조잡한 경계설정을 초래하게 된다. 50%를 초과하는 아일렛이 경계설정된 경우, 이러한 기준에 대해 +1의 점수가 주어지고, 50% 미만인 경우, -1이 된다.

마지막 기준은 아일렛 사이즈이고, 이것은 고려 대상이 되는 동물의 종에 관하여 아일렛의 평균 직경에 비례하여, 직경에 의해 결정된다. 기록하는 목적에 대해 결정적인 것은 고려 대상이 되는 기관의 아일렛의 평균 직경이 평균 이상인지의 여부이다. 많은 종들에 있어서, 아일렛의 평균 직경은 대략 100 마이크론이다. 이것은 생쥐, 돼지, 및 인간의 아일렛 뿐만 아니라 많은 다른 종들에 대해서도 마찬가지이다. 전술한 바와 같이 검사된 아일렛의 대다수가 직경이 100㎛ 을 초과하면, +1의 점수가 할당되는 반면, 그 외의 경우에는 -1의 점수가 할당된다. 반면, 아일렛의 평균 직경이 돼지의 것과 상이한 경우, 그 종에 관한 평균 직경이 지시대상으로서 사용될 것이다. 예를 들어, 다양한 종류의 물고기들인 틸라피아는 평균 직경이 약 5㎜로서 매우 큰 아일렛을 가지고 있는 것으로 알려져 있다. 틸라피아의 췌장이 고려 대상이 된다면, 컷오프 포인트는 5㎜가 될 것이고, 아일렛의 평균 직경이 5㎜ 보다 크다면 포지티브(positive) 점수가 주어질 것이다.

이러한 다섯 가지 기준에 대한 점수는 검사된 각각의 췌장에 관하여 도표화되었다. 총점이 +1 이상인 경우, 그 기관은 적합한 아일렛 제공자로 간주된다.

+1 이상의 총점을 가지는 10개의 기관들에 대한 예시적인 결과가 아래의 표로 제시되어 있다.

도 1a 및 도 1b의 그림에서, 비교를 위해, +3점의 췌장(도 1a)과 -1점의 췌장에 대한 현미경 사진이 제시된다. 도 1a은 양호한 경계 설정에 따라 큰 아일렛(>100㎛)을 분명히 알 수 있다. 반면에, 도 1b에 도시된 췌장에서는 작고 불명확하게 경계 설정된 아일렛이 나타난다.

여기에 설명되는 프로토콜 표준 하에서, 도 1b에 도시된 췌장은 더 이상 프로세싱될 수 없는 것이지만, 이하의 실시 예에서 논의되는 바와 같이, 비교의 목적으로 프로세싱된다.

실시예 2

실시예 1에서 제시된 평가에 뒤이어, +1점 이상의 췌장뿐만 아니라 -1점의 비교 대상 췌장도 더 프로세싱된다. 선(gland)들로부터 지방과 연결 조직이 제거되었고, 그 후 주요 췌장 관은 16g으로 스테인레스 강의 끝이 무딘 바늘을 통해 배관 삽입된다. 1.5~2.0 g/l의 농도로 HBSS를 함유하는 콜라게나제 P 용액은 30℃에서 50 ml/mm의 비율로 살포되어, 췌장 무게의 그램 당 2ml의 용액을 제공한다.

그 후 췌장은 30℃에서 200ml의 콜라게나제 용액과 함께 500ml의 HBSS 및 2%의 PS로 덮여진다. 39℃에서 물의 외부 순환은 기관을 37℃로 서서히 덥히고, 다이제스테이트(digestate) 온도를 36~37℃로 유지한다. (총 10~20 분, 37℃ 도달 후 5~10분이 경과된 이후에) 기관이 해리된 것으로 나타나고, 수동식 압력에 대해 거의 저항을 나타내지 않는 경우, 소화 작용이 중지된다.

수집된 다이제스테이트는 그 후 원심 분리기로 분리하였고, 표면에 뜨는 것을 빨아들였으며, 그 산물인 펠릿(pellet)은 10%의 PS 및 기관 보존 용액에 현탁하였다. 그 후 아일렛을 50㎖ 튜브에서 1.105, 1.095, 1.085 및 1.05 g/㎤의 밀도 구배, HBSS 플러스 2%의 PS로 불연속의 피콜(Ficoll) 상에서 정화하였다. 튜브는 4℃에서 650g으로 원심분리기로 분리하였고, 아일렛 함유 층들을 수집하였으며, HBSS 플러스 10% PS로 3번 세척하였고, 그 후 해부용 현미경의 도움을 빌려 아일렛이 없는 조직으로 수동으로 정화하였다. 아일렛을 다시 현탁시키고, 2개의 0.5㎖ 샘플들을 아일렛 산물을 계산하는 데에 이용하였다.

도 1a 및 도 1b에 도시된 췌장에 있어서, 예를 들어, +3 값의 췌장에 대한 산물은 98.8%의 순도에서 약 105,000 EIN(동등한 아일렛 수(Equivalent Islet Number)로서, 전술한 Ricordi 등에 의해 정의됨)이다. 반면에, 도 1b의 기관으로부터의 산물은 44,000 EIN이다.

표 1의 10개의 췌장의 평균 산물은 실제로 130,000 EIN이고, 소화된 조직의 그램 당 평균 1,101 EIN 이다. 모든 경우에서 순도는 90% 이상이다. 9개의 기관에 있어서, 아일렛 가시도는 89% 이상이다. 이러한 판단에 대한 방법론들이 이하에서 설명된다.

실시예 3

전술한 바와 같이, 아일렛의 분리에 뒤이어, 순도 및 가시도를 포함하는 다양한 파라미터들을 결정하였다.

순도는 500 EIN을 DTZ로 10분 동안 염색시키는 것에 의해 판단하였고, 그 후 해부용 현미경과 디지털 카메라를 이용하여 표준 이미지 분석을 수행하였다.

가시도는 샘플을 플루오레세인 디아세테이트(FDA) 및 에티듐 브로마이드(EB)로 염색시키는 것에 의해 판단하였다. 상세하게 설명하면, 약 500 EIN을 1㎖의 RPM1, 10% PS, 및 1% 항생물질(antibiotic)/항축동물질(antimyotic)("A/A")에 더하였다. 그 후, 10mg의 FDA와 1㎖의 아세톤으로 만들어진 20㎕의 FDA 염색제, 및 30㎕의 EB와 1㎖의 PBS로 만들어진 200㎕의 EB를 더하였다. 아일렛은 어두운 곳에서 7분 동안 염색하였고, 그 후 아일렛의 10~50의 임의의 샘플들을 형광 현미경으로 관찰하고 촬영함으로써, 표준 이미지 분석을 이용하여 가시도를 판단하였다.

또한, 아일렛의 인슐린 함유량은 산성 알코올 추출 용액(7.2㎖dml 1N HCl, 400㎖의 100% 변성 에탄올)에 약 500 EIN을 넣음으로써 측정하였다. 샘플들은 -20℃에서 저장하였고, 인슐린 RIA를 수행하였다.

실시예 4

여기에서 그리고 이하의 실시예들에서는, 설명된 바와 같이 유용한 것으로 판단되고 분리된 아일렛들을 매크로비즈(macrobeads)에서 이용할 수 있는지의 문제를 검토한다.

정화된 아일렛들을 RPMI 1640 + 10% PS + 1% A/A 에서 2000 EIN/㎖의 양으로 다시 현탁시킨다. 아일렛은 튜브에서 균일하게 분포됨으로써, 각각의 튜브는 2000 EIN으로 1㎖의 현탁액을 포함하고 있다.

중력에 의한 침전물에 잇따라, 표면에 뜨는 것을 제거하고, 최소 기본 매질 플러스 2.5% HEPES 버퍼에서 만들어진 50℃, 0.5㎖의 1.5% 아가로스(agarose)를 각각의 샘플에 더하여 균일하게 혼합하였다. 그 후 현탁액을 무균 미네랄 오일 아래로 방출하여 부드러운 표면과 동등한 아일렛 분포를 가진 4개의 비즈를 만든다.

매크로비즈를 제거하고, 2번 세척하였다(RPMI + 5% PS + 1% A/A). 이러한 매크로비즈는 습한 5% CO₂ 분위기에서, 5~7일 동안 동일한 용액에서 배양시키고, 그 이후에 RPMI + 1% A/A에서 3번 세척하며, 뒤이어 아가로스의 제2 층을 도포하였다. 여기서, MEM의 5% 아가로스, 플러스 60℃의 HEPES 버퍼는 피펫을 통해 무균 플라스틱 스푼으로 전달하며, 각각의 매크로비드는 3~5번 회전하여 균일한 제2 아가로스 코팅을 생성한다. 매끄러운 표면을 형성하기 위한 무균 미네랄 오일로의 전달에 뒤이어, 매크로비즈를 제거하고, RPMI + 2.5% PS + 1% A/A에서 2번 세척하며, 습한 5% CO₂ 플러스 공기에서 37℃로 배양시켰다.

캡슐화된 아일렛들을 함유하고 있는 매크로비즈는 6개월 이상 생존할 수 있는 것으로 판단되며, 방사선 면역 측정법을 통해 그 기간에 걸쳐서 양호한 레벨의 인슐린이 계속 생성된다는 것이 밝혀졌다.

실시예 5

본 실시예는 전술한 바와 같이 분리된 아일렛이 생체 내에서 기능하는지의 여부에 관한 문제를 검토하는 실험들을 설명한다.

수컷이고, 비만 당뇨병이 아니며, 7~9주 정도 된 CB17-PrKdc <scid>/J 마우스를 이용하였다. 일주일의 새 환경 순응 이후에, 동물들에게 당뇨병이 포함된 275㎎/㎏의 스트랩토조토신(streptozotocin)을 투여했다. 9일 후, 그들의 혈액 중 포도당 레벨이 평균 480㎎/dl 이상에 달했을 때, 인슐린 치료를 시작했다.

스트랩토조토신 투여 후 34~35일째 되는 날, 동물들에게 약 1000 EIN의 프로신(procine) 아일렛을 투여했고, 그것은 혈액 덩어리에 이식하였으며, 이것은 이하 보웬 등의 Aust . J. Exp . Biol . Med . Sci ., 58:441-447 (1980)로서 참조로 포함되어 있다. 간략하게 말해서, 아일렛은 현탁액으로부터 펠릿이 되어 나오고 매질을 빨아들인다. 그 후, 5~10㎕의 혈액을 동물로부터 추출하여, 아일렛에 더하고, 덩어리가 되게 한다. 수용체인 동물들은 동일한 양의 케타민(167㎎/dl), 자일라진(xylazine)(33㎎/㎖) 및 식염수로 마취시킨다. 혼합물은 0.5㎖/100g의 양으로 피하에 투여하였다. 왼쪽 옆구리를 약간 절개하여 신장을 드러내고, 신장의 피막을 약간 절개하기 위해 해부용 현미경을 이용하였다. 그 후 피막은 신장으로부터 분리되고, 아일렛/덩어리는 피막 아래에 놓이며, 절개가 봉합되어 동물들이 회복하게 된다.

이식 후 38~39일이 지난 후에, 동물들에게 신장 적출술을 수행하였다. 간략하게 말해서, 마취 이후에, 이식된 신장을 노출시키고, 신장의 혈관을 결찰하여 각각의 동물의 신장을 제거하였다. 5일 후, 동물들은 희생되고, 완결된 아일렛 베타 셀 파괴에 대한 조직학적 확인을 위해 췌장을 수집하였다.

조직 샘플들을 24시간 동안 10%의 중성 버퍼 형성물에 놓고, 그 후 70%의 에틸 알코올로 전달하였다.

그 이후에, 조직들을 파라핀에 담그고, 5㎛ 조각들이 헤마톡실린 및 에오신으로 염색하였다. 표준이 되는 방법을 이용하여, 췌장과 이식된 신장 조각들이 인슐린 및 글루카곤 함유 셀들에 대하여 염색되며, 이들에 대해 연구한다.

아일렛 이식 이후에 모든 생쥐들이 정상 혈당이 되었다. 신장 적출 이후에는, 4일 이내에 생쥐들이 모두 고혈당증이 되었다.

앞서의 실시예들은 본 발명의 특징들을 제시하는데, 그것은 췌장으로부터의 아일렛이 치료상으로 유용한지를 판단하기 위해 췌장을 평가하는 방법이다. 이 방법은 5가지의 특정 기준 중 3가지 이상을 평가하는 것과, 각각의 기준에 값을 할당하는 것을 포함한다. 전술한 바와 같이, 값 선택은 +1 또는 -1이다. 3가지 평가에 따르면, 기관은 +3의 점수를 가지며, 그 후 테스트는 종료될 수 있는데, 마지막 2가지 기준이 -1의 값을 갖는다 해도, 기관이 +1 보다 적은 총점을 갖게 될 수는 없기 때문이다.

5가지 중 3가지 기준이 판단되면, 기관은 +1의 점수를 가지며, 3가지 테스트 이후의 +1점이 +1점 이상의 최종 값을 보증해주지 못하기 때문에, 그 후 4번째 테스트가 수행된다. 기관에 대한 4번째 기준이 결과적으로 +1의 점수를 갖는다면, 4개의 테스트 이후에 +2의 점수를 갖는 경우는 +1보다 적은 점수를 받을 수 없기 때문에, 그 후 테스트가 완료된 것으로 간주될 수도 있다.

4개의 테스트 이후에 기관이 0의 점수를 갖는다면, 5번째 테스트가 방향을 결정하는 결과를 위해 수행되어야 한다.

반대로, 기관이 3개의 테스트 이후에 -3의 점수를 갖는다면, 더 이상 진행할 필요가 없고, 4개의 테스트 이후의 -2점은 최종 테스트가 필요 없도록 한다. (본 발명에 따르면, 3개의 테스트 이후에 유일하게 가능한 점수는 +3, +1, -1, 또는 -3이고, 4개의 테스트 이후에는 +4, +2, 0, -2 및 -4인데, +4 및 -4점은 최종 테스트가 필요 없도록 한다. 따라서, 그렇게 하는 것이 바람직할 수도 있으나, 필요한 것은 아니다.)

어떠한 3개의 테스트를 먼저 수행할지를 선택하는 것은 당업자에게 달려있지만, 온 허혈 손상 시간 기준이 연구자의 제어하에 있는 것이고, 첫 번째 3개의 테스트 중 하나로서 선호될 수도 있다. 첫 번째 3개의 테스트들은 당업자의 선택으로 남겨질 것이다.

여기서 제시된 방법론은 그에 한정되지는 않으나, 소, 돼지, 양, 쥐, 영장류, 인간, 물고기, 또는 다른 종들을 포함하는 임의의 종의 췌장에서 이용될 수도 있다.

본 발명에 따라 선택된 췌장으로부터 얻어지는 아일렛은, 실시예들에서 보여진 바와 같이 이용될 수도 있고, 예를 들어, 여기에 참조로서 포함되는 미국 특허 No. 5,643,569 및 Re 38,027에 제시된 바와 같이, 캡슐화된 매크로비드 형태로 이용될 수도 있다.

본 발명의 다른 형태들은 당업자에게 자명할 것이며, 더 상세하게 설명될 필요가 없다.

사용된 용어 및 표현들은 설명을 위해 사용된 것이고 한정적인 것이 아니며, 그러한 용어 및 표현들을 사용하는 것에 있어서 도시되고 설명된 것들에 관한 임의의 균등물 또는 그들의 일부분들을 제외하려는 의도는 없으며, 본 발명의 범위 내에서 다양한 변형들이 가능하다.

Claims

분리된 췌장(pancreas)이 치료상으로 유용한 아일렛(islet)의 공급원이 되는지의 여부를 판단하는 방법에 있어서,

(ⅰ) 상기 분리된 췌장의 온 허혈 손상 시간(warm ischemia time)을 판단하는 단계를 포함하고,

(ⅱ) 상기 분리된 췌장의 색을 판단하는 단계;

(ⅲ)상기 분리된 췌장의 지방 함유량을 판단하는 단계;

(ⅳ) 상기 췌장에서 아일렛의 경계 설정(demarcation)을 판단하는 단계; 및

(ⅴ) 상기 분리된 췌장으로부터 분리되는 아일렛의 평균 사이즈를 판단하는 단계 중 둘 이상을 더 포함하며,

(a) (ⅰ)에서 상기 온 허혈 손상 시간이 약 15분보다 작으면 +1의 점수를 할당하고, 약 15분보다 크면 -1의 점수를 할당하고,

(b) 상기 색에 대한 반사율이 약 60을 초과하면 +1의 점수를 할당하고, 약 60 미만이면 -1의 점수를 할당하고,

(c) 상기 지방 함유량이 약 25% 미만이면 +1의 점수를 할당하고, 약 25%를 초과하면 -1의 점수를 할당하고,

(d) 상기 경계 설정이 약 50%를 초과하면 +1의 점수를 할당하고, 약 50% 미만이면 -1의 점수를 할당하고,

(e) 아일렛에 대한 평균 직경이 상기 종들에 관한 평균 값 이상인 경우에 +1 의 점수를 할당하고, 상기 종들에 관한 평균 값 미만인 경우에 -1의 점수를 할당하는 것을 특징으로 하며,

최종 점수가 포지티브(positive) 값이면 상기 췌장이 치료상으로 유용한 아일렛의 공급원임을 나타내는 것을 특징으로 하는, 분리된 췌장이 치료상으로 유용한 아일렛의 공급원이 되는지의 여부를 판단하는 방법.
제1항에 있어서,

단계 (ⅰ), 및 단계 (ⅱ) 내지 단계 (ⅴ) 중 3개 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 분리된 췌장이 치료상으로 유용한 아일렛의 공급원이 되는지의 여부를 판단하는 방법.
제1항에 있어서,

단계 (ⅰ) 내지 단계 (ⅴ) 를 모두 포함하는 것을 특징으로 하는, 분리된 췌장이 치료상으로 유용한 아일렛의 공급원이 되는지의 여부를 판단하는 방법.
제1항에 있어서,

단계 (ⅰ), 단계 (ⅱ) 및 단계 (ⅲ)을 포함하는 것을 특징으로 하는, 분리된 췌장이 치료상으로 유용한 아일렛의 공급원이 되는지의 여부를 판단하는 방법.
제1항에 있어서,

단계 (ⅰ), 단계 (ⅱ) 및 단계 (ⅳ)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 분리된 췌장이 치료상으로 유용한 아일렛의 공급원이 되는지의 여부를 판단하는 방법.
제1항에 있어서,

단계 (ⅰ), 단계 (ⅱ) 및 단계 (ⅴ)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 분리된 췌장이 치료상으로 유용한 아일렛의 공급원이 되는지의 여부를 판단하는 방법.
제1항에 있어서,

단계 (ⅰ), 단계 (ⅲ) 및 단계 (ⅳ)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 분리된 췌장이 치료상으로 유용한 아일렛의 공급원이 되는지의 여부를 판단하는 방법.
제1항에 있어서,

단계 (ⅰ), 단계 (ⅲ) 및 단계 (ⅴ)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 분리된 췌장이 치료상으로 유용한 아일렛의 공급원이 되는지의 여부를 판단하는 방법.
제1항에 있어서,

단계 (ⅰ), 단계 (ⅳ) 및 단계 (ⅴ)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 분리된 췌장이 치료상으로 유용한 아일렛의 공급원이 되는지의 여부를 판단하는 방법.
제2항에 있어서,

단계 (ⅰ) 내지 단계 (ⅳ)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 분리된 췌장이 치료상으로 유용한 아일렛의 공급원이 되는지의 여부를 판단하는 방법.
제2항에 있어서,

단계 (ⅰ), 단계 (ⅱ), 단계 (ⅲ), 및 단계 (ⅴ)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 분리된 췌장이 치료상으로 유용한 아일렛의 공급원이 되는지의 여부를 판단하는 방법.
제2항에 있어서,

단계 (ⅰ), 단계 (ⅱ), 단계 (ⅳ), 및 단계 (ⅴ)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 분리된 췌장이 치료상으로 유용한 아일렛의 공급원이 되는지의 여부를 판단하는 방법.
제2항에 있어서,

단계 (ⅰ), 및 단계 (ⅲ) 내지 단계 (ⅴ)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 분리된 췌장이 치료상으로 유용한 아일렛의 공급원이 되는지의 여부를 판단하는 방법.