KR20060131749A

KR20060131749A - 면역원성 조성물

Info

Publication number: KR20060131749A
Application number: KR1020067009353A
Authority: KR
Inventors: 클라우딘 엘비레 마리 브룩; 케더린 마리 기슬라인 제라르드; 즈덴카 루드밀라 조낙
Original assignee: 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이.; 스미스클라인 비참 코포레이션
Priority date: 2003-10-13
Filing date: 2004-10-11
Publication date: 2006-12-20
Also published as: GB0323968D0; CO5700789A2; WO2005039630A2; JP2007508273A; ZA200602948B; WO2005039630A3; AU2004283458A1; BRPI0415315A; EP1684802A2; IS8387A; NO20061911L; IL174542A0; CN1893974A; MA28106A1; RU2006111849A; US20070212328A1; CA2541693A1

Abstract

본 발명은 감염성 질환, 암, 자가면역 질환 및 관련 질환의 치료 또는 예방에 사용되는 조합 요법에 관한 것이다.

Description

면역원성 조성물{IMMUNOGENIC COMPOSITIONS}

본 발명은 감염성 질환, 암, 자가면역 질환 및 관련 질환의 치료 또는 예방에 사용되는 조합 요법에 관한 것이다. 특히, 조합 요법은 TH-1 사이토카인, 특히 IL-18, 및 항원 및 CpG 애쥬번트를 포함하는 면역원성 조성물, 특히 백신의 투여를 포함한다. 특히, 본 발명은 종양전 병변 또는 암의 치료를 위한 IL-18 또는 이의 생체활성 단편 또는 변이체 및 종양 관련 항원 및 CpG 애쥬번트를 포함하는 면역원성 조성물의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 추가로 본 발명에 따른 용도에 적합한 복합 제제 및 약학적 키트에 관한 것이다. 본 발명의 치료 방법 및 약학적 제조물은 종양의 예방 및 면역 요법 적용, 특히 예방 및/또는 치료에 적합한 면역 반응의 자극에 유용하다.

본 발명의 배경

암은 유전적 변형으로 인해 단일한 세포로부터 발생하는 질환이다. 막대한 재정 및 인력의 투자에도 불구하고, 암은 사망의 주요 원인중 하나로 남아있다. 이러한 종양의 임상적 발견은 대부분 비교적 질환의 후기에서 발생하고, 원발성 종양이 외과적 수술에 의해 제거될 수 있는 경우에, 다양한 기관에 자리잡은 미세한 전이의 존재가 이미 발생한다. 암을 발생시키는 메커니즘의 이해에 많은 발전이 있음에도 불구하고, 전이성 암의 치료 및 초기 단계의 종양의 보다 악성의 전이성 병변으로의 진행을 예방에 있어서 발달은 거의 없었다. 화학요법은 종종 상기 세포들을 완전하게 제거할 수 없고, 이는 회귀성 질환의 발생원으로 존재하게 된다.

TH-1 유형 사이토카인, 예를들어 INF-γ, TNFα, IL-2, IL-12, IL-18 등이 투여된 항원에 대한 세포 매개성 면역 반응의 유도에 흔히 사용되는 경향이 있다. 대조적으로, 고수준의 Th-2 유형 사이토카인(예를들어, IL-4, IL-5, IL-6 및 IL-10)이 체액성 면역 반응의 유도에 흔히 사용되는 경향이 있다. 인터페론-감마(IFNg) 유도 인자로 공지된 인터루킨-18(IL-18)은 또한 질환(예를들어, 암)에 대한 환자 자신의 면역계를 자극하는 면역조절 효과를 지닌 다면발현성 사이토카인으로 기재되어 있다. IL-18은 면역 반응 초기에 발현되고, 체액성 및 세포성 면역 반응 둘 모두에 작용하고, 보다 나은 TH-1 유형 프로파일로의 반응을 유도한다. 이는 활성화된 항원제시세포에 의해 발생되고, 여러 생체활성, 특히 나이브(naive) CD4 T세포로부터 Th1 세포로의 분화를 촉진하고, 내추럴 킬러(NK) 세포, 내추럴 킬러 T(NKT) 세포를 자극하고, 주로 감마 인터페론(IFN-감마)를 분비하는 세포독성 T 세포인 활성화된 T 세포의 증식을 유도하는 생체활성을 지니는 것으로 보고되었다(Okamura H. et al. 1998, Adv. Immunol. 70: 281-312). IL-18은 또한 Fas 유도 종양 사멸을 매개하고, IL-1a 및 GMCSF의 생성을 촉진하고, 항혈관형성 활성을 지닌다.

IL-18은 선천면역 및 Th1 및 Th2 매개성 반응을 자극하는 능력을 지닌다. IL-12의 존재하에서, IL-18은 Th1 세포, 비극성화된 T 세포, NK 세포, B 세포 및 수지상 세포에 작용하여 IFNg를 생성할 수 있다. IL-12의 도움 없이, IL-18은 T 세포, NK 세포, 비만 세포 및 호염기구에서 IL-4 및 IL-13 생성을 유도하는 잠재성이 있다.

IL-18은 내인성의 사이토카인 유도 항암 면역 반응의 중요한 성분인 IFN-감마의 생성을 통해 종양 퇴행을 유도하는 것으로 밝혀졌다. 다양한 종양 동물 모델에서 효력이 입증되었다(Jonak Z et al. 2002, J. Immunother. 25, S20-S27; Akamatsu S; et al. 2002, J. Immunother. 25, S28-S34). 기타 작용제와 결합된 IL-18, 특히 화학요법 작용제와 결합된 IL-18을 포함하는 조성물이 기재되어 있다(US 6,582,689). IL-18은 또한 백신을 위한 애쥬번트로서 작용하는 것으로 기재되어 있다(WO 99/56775; WO 03/031569).

CpG 함유 올리고누클레오티드(CpG 디누클레오티드가 메틸화되지 않았음)가 또한 주로 Th1 반응을 유도한다. 상기 올리고누클레오티드는 널리 공지되어 있고, 예를들어 WO 96/02555, WO 99/33488 및 미국 특허 제 6,008,200호 및 제 5,856,462호에 기재되어 있다. 면역자극 DNA 서열은 또한, 예를들어 문헌[Sato et al., Science 273:352]에 기재되어 있다. 메틸화되지 않은 CpG 디누클레오티드(이하 “CpG”)를 함유하는 면역자극 올리고누클레오티드는 전신 및 점막 경로 둘 모두로 투여되는 경우 애쥬번트가 되는 것으로 당 분야에 공지되어 있다(WO 96/02555, EP 468520, Davis et al., J.Immuol, 1998, 160(2):870-876; McCluskie and Davis, J.Immunol., 1998, 161(9):4463-6). CpG는 DNA에 존재하는 시토신-구아노신 디누클레오티드 모티프의 약어이다. 전통적으로, BCG의 DNA 단편이 항종양 효과를 발 휘할 수 있는 것으로 관찰되었다. 추가의 연구에서, BCG 유전자 서열로부터 유래된 합성 올리고누클레오티드는 (시험관내 및 생체내에서) 면역자극 효과를 유도할 수 있음이 밝혀졌다. 이러한 연구의 연구자들은 중추 CG 모티프를 포함하는 특정 팔린드롬 서열이 상기 활성을 수행하는 것으로 결론내렸다. 면역자극에서의 CG 모티프의 중추적인 역할은 문헌[Krieg, Nature 374, p546 1995]에 공표되어 후에 밝혀졌다. 상세한 분석은 CG 모티프가 특정 서열 환경에 존재하고, 이러한 서열이 세균 DNA에 공통적으로 존재하나, 척추동물 DNA에 드문 것으로 나타났다. 면역자극 서열은 종종 퓨린, 퓨린, C, G, 피리미딘, 피리미딘이고, 여기서 디누클레오티드 CG 모티프는 메틸화되지 않았으나, 기타 메틸화되지 않은 CpG 서열은 면역자극성인 것으로 공지되어 있고, 이는 본 발명에 사용될 수 있다.

6개의 누클레오티드의 특정 조합에서, 팔린드롬 서열이 존재한다. 하나의 포티프의 반복 혹은 다른 모티프의 조합이건 간에, 이러한 모티프의 다수는 동일한 올리고누클레오티드에 존재할 수 있다. 이러한 면역자극성 서열 함유 올리고누클레오티드의 하나 이상의 존재는 내추럴 킬러 세포(인터페론 γ를 생성하고, 세포용해 활성을 지님) 및 대식세포를 포함하는 다양한 면역 서브셋을 활성화시킬 수 있다(Wooldrige et al Vol 89(no. 8), 1977). 이러한 공통서열을 지니지 않는 기타 메틸화되지 않은 CpG 함유 서열은 현재 면역조절성인 것으로 밝혀졌다.

백신내로 포뮬레이팅되는 경우에, CpG는 일반적으로 자유 항원과 함께 자유 용액내로 투여되거나(WO 96/02555; McCluskie and Davis, supra) 항원에 공유적으로 컨쥬게이팅되거나(PCT Publication No. WO 98/16247), 알루미늄 히드록시드와 같은 담체와 함께 포뮬레이팅된다((Hepatitis surface antigen) Davis et al. supra; Brazolot-Millan et al., Proc.Natl.Acad.Sci., USA, 1998, 95(26), 15553-8).

본 발명은 TH-1 사이토카인, 예를들어 IL-18 및 항원 및 CpG 애쥬번트를 포함하는 면역원성 조성물의 결합 투여가 매우 효능이 있고, 감염성 질환, 원발성 및 전이성 신생물 질환(즉, 암), 자가면역 질환 및 관련 질환의 매우 내성의 예방 또는 치료를 제공하고, 종양 관련 항원을 발현하는 인간 암 세포의 성장을 억제시키는데 특히 효과적인 놀라운 발견에 관한 것이다.

발명의 진술

따라서, 안전하고 효과적인 양의 ⅰ) 항원 또는 이의 면역원성 유도체 및 CpG 애쥬번트를 포함하는 면역원성 조성물, 특히 백신, 및 ⅱ) IL-18 폴리펩티드 또는 이의 생체활성 단편 또는 변이체를 환자에게 투여하는 것을 포함하여, 환자의 항원에 대한 향상된 면역 반응을 유도시키는 방법이 제공된다. 또 다른 구체예에서, 본 발명은 미리 확립된 종양(원발성 종양 및 전이성 종양)을 치료하거나 암 재발을 예방하는 것을 포함하여, 환자의 암의 중증도를 감소시키는 방법을 제공하고, 상기 방법은 안전하고 효과적인 양의 ⅰ) IL-18 폴리펩티드 또는 이의 생체활성 단편 또는 변이체 및 ⅱ) 항원 또는 이의 면역원성 유도체 및 CpG 애쥬번트를 포함하는 면역원성 조성물, 특히 백신을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함한다.

한 구체예에서, IL-18 폴리펩티드는 뮤린 또는 인간 IL-18 폴리펩티드 또는 이의 생체활성 단편 또는 유도체이다. 또 다른 구체예에서, 항원은 종양 관련 항원이다. 따라서, 한 구체예에서, 본 발명은 미리 확립된 종양(원발성 종양 및 전이성 종양)을 치료하거나 암, 특히 유방암, 폐암(특히 비소세포 폐 암종), 흑색종, 직장결장암, 난소암, 전립선암, 방광암, 두경부 편평 암종, 위 및 기타 GI(위장관)암, 특히 식도암, 백혈병, 림프종, 골수종, 형질세포종의 재발을 예방하는 것을 포함하여, 환자의 암의 중증도를 감소시키는 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 ⅰ) 종양 관련 항원 또는 이의 면역원성 유도체 및 CpG를 포함하는 면역원성 조성물, 특히 백신, 및 ⅱ) IL-18 폴리펩티드 또는 이의 생체활성 단편 또는 변이체를 포유동물에게 투여하는 것을 포함한다.

본 발명은 또한 활성 성분으로서 개별적 성분인 (1) IL-18 폴리펩티드 또는 이의 생체활성 단편 또는 변이체 및 (2) 항원 및 CpG 애쥬번트를 포함하는 면역원성 조성물을 포함하는, 감염성 질환, 원발성 종양 및 전이성 종양을 포함하는 암, 자가면역 질환 및 관련 질환의 예방 및/또는 치료를 위한 복합 제제로서, 활성 성분이 동시에 사용되거나, 개별적으로 사용되거나, 순차적으로 사용되는 복합 제제에 관한 것이다. 한 구체예에서, 결합된 제조물 내의 면역원성 조성물은 3D-MPL, QS21, QS21 및 콜레스테롤의 혼합물, 알루미늄 히드록시드, 알루미늄 포스페이트, 토코페롤, 및 수중유 에멀션 또는 두 개 이상의 상기 애쥬번트의 조합물을 포함하는 군으로부터 선택된 추가의 면역자극 화학물질을 함유한다. 예를들어, 추가의 애쥬번트는 사포닌, 예를들어 QS-21이다.

관련 양태에서, 본 발명은 또한 활성 성분으로서 개별적 성분인 (1) IL-18 폴리펩티드 또는 이의 생체활성 단편 또는 변이체 및 (2) 항원 또는 이의 면역원성 유도체 및 CpG 애쥬번트를 포함하는 면역원성 조성물을 포함하는, 감염성 질환, 원발성 종양 및 전이성 종양을 포함하는 암, 및 자가면역 질환의 예방 및/또는 치료를 위한 약학적 키트로서, 활성 성분이 동시에 사용되거나, 개별적으로 사용되거나, 순차적으로 사용되는 약학적 키트를 제공한다.

본 발명은 추가로 안전하고 효과적인 양의 (1) IL-18 폴리펩티드 또는 이의 생체활성 단편 또는 변이체 및 (2) 항원 또는 이의 면역원성 유도체 및 CpG 애쥬번트를 포함하는 면역원성 조성물을 환자에게 투여함으로써, 보호적 면역 반응을 달성하거나 질환의 중증도를 감소시키는 약제의 제조에서의 상기 두 성분의 용도에 관한 것이다.

본 발명은 추가로 상기 면역원성 조성물을 제조하기 위한 방법, 질환, 특히 암의 예방 및/또는 치료를 위한 상기 조성물의 용도, 및 인간을 포함하는 포유동물의 종양 또는 암세포의 성장을 억제시키기 위한 상기 조성물의 용도에 관한 것이다.

상세한 설명

본 발명의 한 형태에서, 면역원성 조성물 내의 CpG 애쥬번트는 세 개 이상, 예를들어 여섯 개 이상의 누클레오티드에 의해 분리된 하나, 또는 두 개 이상의 디누클레오티드 CpG 모티프를 함유한다. 본 발명의 올리고누클레오티드는 통상적으로 데옥시누클레오티드이다. 한 구체예에서, 올리고누클레오티드 내의 인터누클레오티드(internucleotide)는 포스포로디티오에이트, 또는 포스포로티오에이트 결합이나, 혼합된 인터누클레오티드 결합을 지닌 올리고누클레오티드를 포함하여 포스포다이에스테르 및 기타 인터누클레오티드 결합이 본 발명의 범위 내에 포함된다. 포스포로티오에이트 올리고누클레오티드 또는 포스포로디티오에이트를 생성시키는 방법은 US 5,666,153, US 5,278,302 및 WO 95/26204에 기재되어 있다.

올리고누클레오티드의 예는 하기의 서열을 지닌다. 이러한 서열은 포스포로티오에이트 변형된 인터누클레오티드 결합을 함유할 수 있다.

올리고 1(SEQ ID NO:1): TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT (CpG 1826)

올리고 2(SEQ ID NO:2): TCT CCC AGC GTG CGC CAT (CpG 1758)

올리고 3(SEQ ID NO:3): ACC GAT GAC GTC GCC GGT GAC GGC ACC ACG

올리고 4(SEQ ID NO:4): TCG TCG TTT TGT CGT TTT GTC GTT (CpG 2006, CpG 7909로도 공지됨)

올리고 5(SEQ ID NO:5): TCC ATG ACG TTC CTG ATG CT (CpG 1668)

대안적 CpG 올리고누클레오티드는 사소한 결손 또는 첨가를 지닌 상기 서열을 포함할 수 있다.

본 발명에서 사용된 CpG 올리고누클레오티드는 당 분야에 공지된 임의의 방법(예를들어, EP 468520)에 의해 합성될 수 있다. 편리하게는, 상기 올리고누클레오티드는 자동화된 합성기를 이용하여 합성될 수 있다.

본 발명에 사용된 올리고누클레오티드는 통상적으로 데옥시누클레오티드이다. 한 구체예에서, 올리고누클레오티드 내의 인터누클레오티드 결합은 포스포로디티오에이트, 또는 포스포로티오에이트 결합이나, 포스포다이에스테르가 본 발명의 범위 내에 포함된다. 다양한 인터누클레오티드 결합을 포함하는 올리고누클레오티드, 예를들어 혼합된 포스포로티오에이트 포스포다이에스테르가 고려된다. 올리고누클레오티드를 안정화시키는 기타 인터누클레오티드 결합이 사용될 수 있다.

항원은 감염성 생물체, 예를들어 종양 관련 항원 또는 이의 면역원성 유도체 또는 유도체로부터 유래된 항원일 수 있다. IL-18 폴리펩티드는 뮤린 또는 인간 IL-18 폴리펩티드 또는 이의 생체활성 단편일 수 있다. 면역원성 조성물 및 IL-18은 항원 특이적 항체의 유도에서 상승작용적으로 작용할 수 있고, 통상적으로 TH-1 유형 면역계와 관련된 체액성 및/또는 세포성 면역 반응의 유도 또는 향상에 유효할 수 있다. 면역 반응의 향상은 체액성 및/또는 세포 매개성 면역 반응, 또는 종양 크기 및/또는 하중(load)의 감소에 의해 결정되는 바에 따라 면역 반응에서의 전체적인 증가를 의미한다. 상승작용은 IL-18 폴리펩티드 또는 이의 면역원성 단편 또는 변이체가 본 발명의 면역원성 조성물을 이용한 결합 요법으로 투여되는 경우에 면역 반응을 유도할 수 있고, 이러한 면역원성 조성물의 존재가 IL-18 폴리펩티드 또는 이의 면역원성 단편 또는 변이체의 효능을 향상시킬 수 있는 것을 의미한다. 면역 반응의 유도의 과정은 예방, 질환의 중증도의 감소(암의 경우에는, 미리 확립된 종양, 원발성 또는 전이의 감소, 또는 암 재발의 예방을 포함함) 및/또는 요법일 수 있다.

따라서, 한 구체예에서, ⅰ) 감염성 생물체로부터 유래된 항원, 또는 종양 관련 항원 및 CpG 애쥬번트를 포함하는 효과적인 양의 면역원성 조성물, 및 ⅱ) IL-18 또는 이의 생체활성 단편 또는 변이체를 포유동물에게 투여하는 것을 포함하여, 포유동물의 항원에 대한 면역 반응을 유도하는 방법이 제공된다. 한 구체예에서, 상기의 두 치료 성분은 순차적으로 투여된다. 즉, 상기 면역원성 조성물은 IL-18의 투여에 의해 프라이밍(prime)된 체액성 및/또는 세포성 면역 반응을 부스팅(boosting)시키기 위해 사용된다. 대안적으로, 또 다른 구체예에서, 본 발명에 따른 면역원성 조성물은 이후 IL-18을 투여받는 개체의 체액성 및/또는 세포성 면역 반응을 프라이밍시키기 위해 사용된다. 또 다른 구체예에서, 상기 두 치료 성분은 두 개의 상이한 부위에서의 공동투여를 통하거나 동일한 제조물 내에서 혼합되어 동시에 투여된다. 당업자는 면역원성 조성물 및 IL-18 폴리펩티드 둘 모두가 1회 또는 반복적으로 투여될 수 있음을 이해할 것이다.

본 발명의 범위 내에서 고려되는 결합 요법은 단독으로 사용되는 성분에 비해 최소한 유효하거나, 효능을 증가시킬 수 있다. 특히, 암의 분야에서, 결합 치료는 두 개의 항암 제제를 결합하고, 부가적인 방식, 예를들어 상이한 작용 메커니즘을 통해 상승작용적으로 각각 수행되어 인간 종양 세포에 대한 향상된 세포독성 반응을 일으킬수 있다는 점에서 유리하다.

관련 구체예에서, 활성 성분으로서 (1) IL-18 폴리펩티드 또는 이의 생체활성 단편 또는 변이체 및 (2) 항원 및 CpG 애쥬번트를 포함하는, 감염성 질환, 및 암의 예방 및/또는 치료를 위한 복합 제제(예를들어, 약학적 키트 또는 약학적 멀티바이얼 팩)로서, 활성 성분이 동시에 사용되거나, 개별적으로 사용되거나, 순차적으로 사용되는 복합 제제가 제공된다.

결합된 제조물은 활성 성분을 함유하는 하나 이상의 단위 용량 형태를 함유할 수 있는 약학적 제조물, 또는 약학적(멀티바이얼) 팩 또는 조제 장치를 의미한다. 예를들어, 상기 팩은 금속 또는 플라스틱 호일, 예를들어 수포(blister) 팩일 수 있다. 팩 또는 조제 장치는 투여를 위한 사용법을 동반할 수 있다. IL-18 폴리펩티드 및 면역원성 조성물을 두 개의 분리된 조성물로서 투여하려는 경우, 이들은 예를들어 멀티팩의 형태로 존재할 수 있다. 본 발명에 따라 동시에 투여되거나, 개별적으로 투여되거나 순차적으로 투여되는 활성 성분은 단지 공지된 작용제의 혼합재가 아니라, IL-18 폴리펩티드의 사용이 NK 세포 활성화 및 T 세포 매개성 면역 반응 및 사이토카인 생성을 포함하는 면역계의 선천 및 적응 성분 둘 모두를 자극시켜, 면역원성 조성물의 효능을 증가시키는 놀라운 가치 있는 특성을 지닌 신규 조합물이다. 이는 신규하고 효과적인 치료를 일으킨다. 이는 또한 키트-오브-파츠(kit-of-parts)로 명명된 복합 제제가 별개의 또는 순차적인 적용이 가능하도록 하기 위해 복합 제제의 성분이 결합된 형태, 예를들어 조합물 형태로 존재할 필요가 없음을 의미한다. 따라서, 키트-오브-파츠의 표현은 조성물의 물리적 분리의 견지에서 진정한 조합물일 필요가 없음을 의미한다.

복합 제제는 암의 치료 또는 예방, 특히 암의 중증도의 감소 또는 암 재발의 예방에 사용될 수 있다. 본원에 기재된 결합 요법으로부터 효과를 볼 수 있는 암은 조절되지 않는 세포 성장 및 증식, 종양전 병변, 원발성 종양 및 전이성 종양 병변으로 특징되는 임의의 질환을 포함하고, 유방 암종, 폐암(특히, 비소세포 폐-NSCLC- 암종), 흑색종, 직장결장암, 난소암, 전립선암, 방광암, 두경부 편평 암종, 위 및 기타 GI(위장관)암, 특히 식도암, 백혈병, 림프종, 골수종 및 형질세포종을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

펩티드(즉, 약 50개 미만의 아미노산)를 포함하는 예시적 항원 또는 이의 유도체 및 단편은 암(-고환) 항원으로 공지된 MAGE(흑색종 항원 엔코딩 유전자)의 패밀리에 의해 엔코딩된 항원을 포함한다(Gaugler B. et al. J. Exp. Med., 1994, 179: 921; Weynants P. et al. Int. J. Cancer, 1994, 56: 826; Patard J.J. et al. Int. J. Cancer, 1995, 64: 60). MAGE 단백질을 발현하는 암은 MAGE-관련 종양으로서 공지되어 있다. MAGE 유전자는 MAGE 1, MAGE 2, MAGE 3(흑색종 항원 엔코딩 유전자-3), MAGE 4, MAGE 5, MAGE 6, MAGE 7, MAGE 8, MAGE 9, MAGE 10, MAGE 11, MAGE 12를 포함하는 밀접하게 관련된 유전자의 패밀리에 속하며, 이는 크로모좀 X에 위치하고 있고, 이들의 코딩 서열은 서로 64 내지 85%의 상동성을 지닌다(De Plaen E. et al., Immunogenetics, 1994, 40, 360-369). 이들은 때때로 MAGE A1, MAGE A2, MAGE A3, MAGE A4, MAGE A5, MAGE A6, MAGE A7, MAGE A8, MAGE A9, MAGE A10, MAGE A11, MAGE A12(MAGE A 패밀리)로서 공지되어 있다. 단백질의 두 개의 다른 군은 또한 비록 거의 멀리 관련되어 있으나 MAGE 패밀리의 일부이다. 이들은 MAGE B 및 MAGE C 군이다. MAGE B 패밀리는 MAGE B1(또한, MAGE Xp1 및 DAM 10으로 공지됨), MAGE B2(또한, MAGE Xp2 및 DAM 6으로 공지됨), MAGE B3 및 MAGE B4를 포함하고, MAGE C 패밀리는 현재 MAGE C1 및 MAGE C2를 포함한다. 일반 용어에서, MAGE 단백질은 단백질의 C 말단으로 위치한 코어 서열 기호를 포함하는 것으로 정의될 수 있다(예를들어, 309개의 아미노산 단백질인 MAGE A1에 대해서는, 코어 기호는 아미노산 195-279에 해당됨).

따라서, 코어 기호의 공통 패턴은 하기에 기재되어 있고, 여기서 x는 임의의 아미노산이고, 소문자 잔기는 보존되어 있고(보존적 변이체도 허용됨) 및 대문자 잔기는 완전하게 보존되어 있다.

코어 서열 기호:

LixvL(2x)I(3x)g(2x)apEExiWexl(2x)m(3-4x)Gxe(3-4x)gxp(2x)IIt(3x)VqexYLxYxqVPxsxP(2x)yeFLWGprA(2x)Et(3x)kv

보존적 치환은 널리 공지되어 있고, 일반적으로 서열 정렬 컴퓨터 프로그램에서 결여 스코어링 매트릭스으로서 나타난다. 이들 프로그램은 PAM250(Dayhoft M.O. et al., 1978, "A model of evolutionary changes in proteins", In "Atlas of Protein sequence and structure" 5(3) M.O. Dayhoft (ed.), 345-352), National Biomedical Research Foundation, Washington, and Blosum 62 (Steven Henikoft & Jorja G. Henikoft(1992), "Amino acid substitution matrices from protein blocks"), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89 (Biochemistry): 10915-10919를 포함한다.

일반적 용어에서, 하기의 군 내의 치환은 보존적 치환이나, 군 사이의 치환은 비보존적인 것으로 간주된다. 군은 하기와 같다:

ⅰ) 아스파테이트/아스파라긴/글루타메이트/글루타민

ⅱ) 세린/트레오닌

ⅲ) 리신/아르기닌

ⅳ) 페닐알라닌/티로신/트립토판

ⅴ) 루신/이소루신/발린/메티오닌

ⅵ) 글리신/알라닌

일반적으로 본 발명의 상황에서, MAGE 단백질은 MAGE A1의 아미노산 195 내지 279를 지닌 코어 영역과 약 50% 동일할 것이다.

MAGE-3은 흑색종의 69%에서 발현되고(Gaugler B. et al. J. Exp. Med., 1994, 179: 921), 또한 NSCLC의 44%(Yoshimatsu T. J Surg Oncol., 1998, 67, 126-129), 소세포 폐 암종(SCLC)의 75%(Traversari C. et al., Gene Ther. 1997, 4: 1029-1035), 두경부 편평 세포 암종의 48%, 방광 전이 세포 암종의 34%, 식도 암종의 57%, 결장암의 32% 및 유방암의 24%(Van Pel A. et al., Immunol. Rev., 1995, 145: 229; Inoue H. et al. Int. J. Cancer, 1995, 63: 523; Nishimura S et al., Nihon Rinsho Meneki Gakkai Kaishi 1997, Apr, 20(2): 95-101)에서 검출될 수 있다. 여러 CTL 에피토프는 각각의 MHC 클래스 Ⅰ 분자 HLA.A1, 또는 HLA.A2(Van der Bruggen P.et al., Eur.J.Immunol., 1994, 24, 3038-3043) 및 HLA.B44(Herman, J. et al., Immunogenetics, 1996, 43, 377-383) 대립유전자에 대한 특이적 결합 모티프를 지니는 MAGE-3 단백질 상에서 확인되었다.

기타 예시적 항원 또는 이로부터 유래된 유도체 또는 단편은 MAGE 항원, 예를들어 WO 99/40188에 기재된 MAGE 항원, PRAME (WO 96/10577), BAGE, RAGE, LAGE 1(WO 98/32855), LAGE 2(NY-ESO-1으로도 공지됨, WO 98/14464), XAGE(Liu et al, Cancer Res, 2000, 60:4752-4755; WO 02/18584) SAGE, 및 HAGE(WO 99/53061) 또는 GAGE(Robbins and Kawakami, 1996, Current Opinions in immunology 8, pps 628-636; Van den Eynde et al., International Journal of Clinical & Laboratory Research (submitted 1997); Correale et al.(1997), Journal of the National Cancer Institute 89, p293)를 포함한다. 게다가, 이들 항원은 광범위한 종양 유형, 예를들어 흑색종, 폐 암종, 육종 및 방광 암종에서 발현된다.

한 구체예에서, 전립선 항원, 예를들어 전립선 암 항원 또는 전립선 특이적 분화 항원(PSA), PAP, PSCA(PNAS 65(4) 1735-1740 1998), PSMA 또는 프로스타아제로서 공지된 항원이 사용된다.

한 구체예에서, 전립선 항원은 P501S 또는 이의 단편이다. 또한 프로스테인으로 명명된 P501S(Xu et al., Cancer Res. 61, 2001, 1563-1568)는 WO 98/37814의 SEQ ID NO:113으로 공지된 553개의 아미노산 단백질이다. 면역원성 단편 및 이의 일부는 상기 참조된 특허 출원에 기재된 바와 같이 20개 또는 20개 이상, 50 또는 50개 이상, 또는 100개 또는 100개 이상의 인접 아미노산을 포함하고, 본 발명에 의해 특히 고려된다. 단편은 WO 98/50567(PS108 항원)에 기재되어 있고, 이는 전립선 암 관련 단백질로서 기재되어 있다(WO 99/67384의 SEQ ID NO:9). 기타 단편은 전장 P501S 단백질의 아미노산 51-553, 34-553 또는 55-553이다. 특히, 작제물 1, 2 및 3(도 2, SEQ ID NO:27-32 참조)가 특히 고려되고, 효모 시스템에서 발현될 수 있으며, 예를들어 상기 폴리펩티드를 엔코딩하는 DNA 서열은 효모 시스템에서 발현될 수 있다.

프로스타아제는 254 아미노산 길이의 전립선 특이적 세린 프로테아제(트립신 유사)이고, 이는 잠재적인 분비 기능을 의미하는 보존된 세린 프로테아제 촉매 트라이어드(triad)인 H-D-S 및 아미노 말단의 프레-프로펩티드 서열을 지닌다(P. Nelson, Lu Gan, C. Ferguson, P. Moss, R. linas, L. Hood & K. Wand, "Molecular cloning and characterisation of prostase, an androgen-regulated serine protease with prostate restricted expression, In Proc. Natl. Acad. Sci. USA(1999) 96, 3114-3119). 추정상의 글리코실화 부위가 기재되어 있다. 예상된 구조는 기타 공지된 세린 프로테아제와 매우 유사하고, 이는 성숙한 폴리펩티드가 단일한 도메인으로 폴딩됨을 나타낸다. 성숙한 단백질은 224 아미노산의 길이이고, 자연적으로 가공되는 것으로 보이는 하나 이상의 A2 에피토프를 지닌다. 프로스타아제 누클레오티드 서열 및 이로부터 유도된 폴리펩티드 서열 및 동족체는 문헌 퍼거슨(Ferguson) 외의 문헌[Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999, 96, 3114-3119] 및 국제 특허 출원 WO 98/12302(및, 이에 상응하는 승인된 US 5,955,306), WO 98/20117(및, 이에 상응하는 승인된 US 5,840,871 및 US 5,786,148)(전립선 특이적 칼리크레인) 및 WO 00/04149(P703P)에 기재되어 있다.

기타 전립선 특이적 항원은 WO 98/37418, 및 WO/004149에 공지되어 있다. 또 다른 항원은 STEAP이다(PNAS 96 14523 14528 7-12 1999).

본 발명의 상황에 유용한 기타 종양 관련 항원은 Plu-1(J Biol. Chem 274(22) 15633-15645, 1999), HASH-1, HASH-2(Alders, M. et al., Hum. Mol. Genet. 1997, 6, 859-867), 크립토(Cripto)(Salomon et al Bioassays 199, 21 61-70, US patent 5654140), CASB616(WO 00/53216), 크립틴(Criptin)(US 5,981,215)를 포함한다. 추가적으로, 암의 요법의 백신에 특히 적절한 항원은 또한 티로시나아제, 텔로메라아제, P53, NY-Br1.1(WO 01/47959) 및 WO 00/43420에 기재된 바와 같은 이의 단편, B726(WO 00/60076, SEQ ID NO:469 및 463; WO 01/79286, SEQ ID NO:474 및 475), P510(WO 01/34802 SEQ ID NO:537 및 538) 및 서바이빈을 포함한다.

본 발명은 또한 유방암 항원, 예를들어 Her-2/neu, 마마글로빈(US patent 5,668,267), B305D(WO 00/61753 SEQ ID NO:299, 304, 305 및 315), 또는 WO 00/52165, WO 99/33869, WO 99/19479, WO 98/45328에 기재된 것과의 조합이 유용하다. Her-2/neu 항원은 특히 US 특허 5,801,005에 기재되어 있다. Her-2/neu는 전체 세포외 도메인(대략 아미노산 1-645를 포함함) 또는 이의 단편 및 대략 C 말단 580 아미노산의 전체 세포내 도메인 또는 최소한 이의 면역원성 부분을 포함할 수 있다. 특히, 세포내 부분은 인산화 도메인 또는 이의 단편을 포함해야 한다. 이러한 작제물은 WO 00/44899에 기재되어 있다. 하나의 작제물은 ECD-PhD로서 공지되어 있고, 두 번째 작제물은 ECD 델타PhD(WO 00/44899 참조)로서 공지되어 있고, 이는 dHER2로도 명명되어 있다. 본원에서 사용되는 Her-2/neu는 래트, 마우스 또는 인간으로부터 유래될 수 있다.

특정 종양 항원은 작은 펩티드 항원(즉, 약 50개 미만의 아미노산)이다. 예시적 펩티드는 뮤신 유래 펩티드, 예를들어 MUC-1(예를들어, US 5,744,144; US 5,827,666; WO 88/05054, US 4,963,484 참조)를 포함한다. 특별히 고려되는 것은 MUC-1 펩티드의 하나 이상의 반복체 단위, 또는 두 개 이상의 상기 반복체를 포함하는 MUC-1 유래 펩티드이고, 이는 SM3 항체에 의해 인식된다(US 6,054,438). 기타 뮤신 유래 펩티드는 MUC-5로부터의 펩티드를 포함한다.

대안적으로, 상기 항원은 인터루킨, 예를들어 IL13 및 IL14일 수 있다. 또는 상기 항원은 많은 암의 치료, 또는 면역거세(immunocastration)에 유용한 자가 펩티드 호르몬, 예를들어 전체 길이 생식샘자극호르몬 방출 호르몬(GnRH, WO 95/20600), 짧은 10개의 아미노산 길이 펩티드일 수 있다. 기타 종양 특이적 항원은 종양 특이적 강글리오시드, 예를들어 GM2 및 GM3를 포함하나 이에 제한되지 않는다.

항원은 또한 바이러스, 세균 또는 기생충, 예를들어 인간 면역결핍 바이러스 HIV-1(예를들어, tat, nef, 역전사효소, gag, gp120 및 gp160), 인간 단순헤르페스 바이러스, 예를들어 gD 또는 이의 유도체 또는 조기 발현 단백질, 예를들어 HSV1 또는 HSV2으로부터의 ICP27, 사이토메갈로바이러스((특히, 인간)(예를들어, gB 또는 이의 유도체), 로타바이러스(생-약독화 바이러스를 포함함), 엡슈타인 바 바이러스(예를들어, gp350 또는 이의 유도체), 수두대상포진 바이러스(예를들어, gpⅠ, II 및 1E63), 또는 간염바이러스, 예를들어 B형 간염바이러스(예를들어, B형 간염 표면 항원 또는 이의 유도체), A형 간염바이러스, C형 간염바이러스 및 E형 간염바이러스, 또는 기타 바이러스 병원체, 예를들어 파라믹소바이러스: 호흡기 세포융합 바이러스(예를들어, F 및 G 단백질 또는 이들의 유도체), 파라인플루엔자 바이러스, 홍역 바이러스, 이하선염 바이러스, 인간 파필로마 바이러스(예를들어, HPV6, 11, 16, 18, ..), 플라비바이러스(예를들어, 황열병 바이러스, 뎅기 바이러스, 진드기매개뇌염 바이러스, 일본뇌염 바이러스) 또는 인플루엔자 바이러스(난세포 또는 MDCK 세포에서 성장하는 전체의 생(生) 또는 비활성화된 바이러스, 인플루엔자 바이러스, 또는 전체 플루 바이로솜(R. Gluck, Vaccine, 1992, 10, 915-920에 기재됨) 또는 이들의 정제 또는 재조합 단백질, 예를들어 HA, NP, NA, 또는 M 단백질, 또는 이들의 조합물)를 포함하거나, 세균 병원체, 예를들어 임균 및 수막염균을 포함하는 나이세리아종(예를들어, 협막다당류 및 이의 접합체, 트랜스페린 결합 단백질, 락토페린 결합 단백질, PilC, 부착소); 화농성 연쇄구균(예를들어, M 단백질 또는 이의 단편, C5A 프로테아제, 지질타이코산), 무유성 연쇄상구균, S.뮤탄스; 헤모필루스 듀크레이; 브란하멜라 카타랄리스로도 공지된 모락셀라 카타랄리스를 포함하는 모락셀라종(예를들어, 고분자량 또는 저분자량 부착소 및 인베이신); 보르데텔라 백일해(예를들어, 퍼탁틴, 퍼투시스 독소 또는 이들의 유도체, 선형 적혈구응집소, 아데닐레이트 사이클라제, 섬모), 보르데텔라 파라퍼투시스 및 보르데텔라 기관지패혈증균을 포함하는 보르데텔라종; 결핵균(예를들어, ESAT6, 항원 85A, -B 또는 -C), 소결핵균, 나병균, 계결핵균, 파라결핵성 장염균, 치구균을 포함하는 미코박테륨종; 레지오엘라 프네우모필라를 포함하는 레지오넬라종; 장독성 대장균(예를들어, 집락형성 인자, 열민감독소 또는 이의 유도체, 내열성 독소 또는 이의 유도체), 장출혈성 대장균, 장병원성 대장균(예를들어, 시가독소 유사 독소 또는 이의 유도체)을 포함하는 대장균종; 콜레라균(예를들어, 콜레라 독소 또는 이의 유도체)을 포함하는 비브리오종; 시겔라 손네이균, 시겔라 디센테리아이균, 시게라 플렉스네리이균을 포함하는 시겔라종; 예르시니아 엔테로콜리티카(예를들어, Yop 단백질), 예르시니아 페스티스균, 예르시니아 슈도튜베르큘로시스균을 포함하는 예르시니아종; 빈창자캄필로박터균(예를들어, 독소, 부착소 및 인베이신) 및 캄필로박터 콜리균을 포함하는 캄필로박터종; 장티푸스균, 파라티푸스균, 살모넬라 콜라라수이스, 살모넬라엔테리티디스를 포함하는 살모넬라종; 단구성 리스테리아를 포함하는 리스테리아종; 헬리코박터 필로리(예를들어, 요소분해효소, 카탈라아제, 공포화 독소)를 포함하는 헬리코박터종; 녹농균을 포함하는 슈도모나스종; 황색포도구균, 표피포도구균을 포함하는 포도구균종; 엔테로코쿠스 파이칼리스균, 엔테로코쿠스 페슘을 포함하는 엔테로코쿠스종; 파상풍균(예를들어, 파상풍 독소 및 이의 유도체), 보툴리누스균(예를들어, 보툴리눔 독소 및 이의 유도체), 클로스트리디움 디피실(예를들어, 클로스트리듐 독소 A 또는 B 및 이들의 유도체)을 포함하는 클로스트리듐종; 탄저균(예를들어, 보툴리늄 독소 및 이의 유도체)을 포함하는 바실러스종; 디프테리아균(예를들어, 디프테리아 독소 및 이의 유도체)을 포함하는 코리네박테륨종; 보렐리아 부르그도페리(예를들어, OspA, OspC, DbpA, DbpB), 보렐리아 가리니(예를들어, OspA, OspC, DbpA, DbpB), 보렐리아 아프젤리(예를들어, OspA, OspC, DbpA, DbpB), 보렐리아 안데르소니(예를들어, OspA, OspC, DbpA, DbpB), 보렐리아 헤름시를 포함하는 보렐리아종; 에를리키아 에쿠이 및 인간 과립성백혈구에이를리히병의 작용제를 포함하는 에를리키아종; 리케치아 리케치를 포함하는 리케치아종; 클라미디아 트라코마티스(예를들어, MOMP, 헤파린 결합 단백질), 클라미디아 뉴모니애(예를들어, MOMP, 헤파린 결합 단백질), 클라미디아 씨타시를 포함하는 클라미디아종; 렙토스피라 인테로간스를 포함하는 렙토스피라종; 매독균(예를들어, 희귀 외막 단백질), 트레포네마 덴티콜라, 트레포네마 히오디센테리아이를 포함하는 매독균종을 포함하거나, 기생충, 예를들어 플라스파듐 팔시파룸을 포함하는 열원충종; 원충(예를들어, SAG2, SAG3, Tg34)을 포함하는 톡소플라스마종; 이질아메바를 포함하는 아메바종; 바베시아 미크로티를 포함하는 바베시아종; 크루스파동편모충을 포함하는 파동편모충종; 람블편모충을 포함하는 편모충종; 큰리슈만편모충을 포함하는 리슈만편모충종; 주폐포자충종을 포함하는 폐포자충종; 질트리코모나스를 포함하는 트리코모나스종; 만손주혈흡충을 포함하는 주혈흡충종을 포함하거나, 효모, 예를들어 칸디다 알비칸스를 포함하는 칸디다종; 크립토콕쿠스 네오포르만스를 포함하는 크립토코쿠스종을 포함하는, 인간에게 병원성인 공급원으로부터 유래될 수 있다.

결핵균에 대한 기타 특이적 항원은, 예를들어 Tb Ra12, Tb H9, Tb Ra35, Tb38-1, Erd 14, DPV, MTI, MSL, mTTC2 및 hTCC1(WO 99/51748)이다. 결핵에 대한 단백질은 또한 결핵의 두 개 이상, 또는 세 개의 폴리펩티드가 더 큰 단백질에 융합된 융합 단백질 및 이의 변이체를 포함한다. 융합물은 Ra12-TbH9-Ra35, Erd14-DPV-MTI, DPV-MTI-MSL, Erd14-DPV-MTI-MSL-mTCC2, Erd14-DPV-MTI-MSL, DPV-MTI-MSL-mTCC2, TbH9-DPV-MTI(WO 99/51748)을 포함할 수 있다.

클라미디아에 대한 대부분의 항원은, 예를들어 고분자량 단백질(HWMP)(WO 99/17741), ORF3(EP 366 412), 및 잠정 막단백질(Pmps)를 포함한다. 백신 포뮬레이션의 기타 클라미디아 항원은 WO 99/28475에 기재된 군으로부터 선택될 수 있다.

세균 항원은 폐렴연쇄구균(예를들어, 캡슐 모양의 다당류 및 이의 접합체, PsaA, PspA, 스트렙토리신, 콜린 결합 단백질) 및 단백질 항원 뉴몰리신(Biochem Biophys Acta, 1989, 67, 1007; Rubins et al., Microbial Pathogenesis, 25, 337-342), 및 이들의 돌연변이 무독화된 유도체(WO 90/06951; WO 99/03884)를 포함하는 스테렙토코커스 종으로부터 유래될 수 있다. 기타 세균 항원은 H.인플루엔자 유형 B(예를들어, PRP 및 이의 접합체), 논-타이피어블(non-typeable) H.인플루엔자, 예를들어 OMP26, 고분자량 부착소, P5, P6, 단백질 D 및 지질단백 D, 및 핌브린 및 핌브린 유래 펩티드(US 5,843,464) 또는 이들의 멀티플 카피 변이체 또는 융합 단백질을 포함하는 헤모필루스 종으로부터 유래될 수 있다.

B형 간염 표면 항원의 유도체는 당 분야에 널리 공지되어 있고, 특히 유럽 특허 출원 EP-A-414 374; EP-A-0304 578, 및 EP 198-474에 기술된 PreS1, PreS2 S 항원을 포함한다. 한 구체예에서, HBV 항원은 HBV 중합효소이다(Ji Hoon Jeong et al, 1996, BBRC 223, 264-271; Lee H. J. et al, Biotechnol. Lett. 15, 821-826). 특히 CHO 세포에서 발현시에, HIV 유래 항원, 예를들어 HIV-1 항원 gp120이 또한 고려된다.

본 발명의 면역원성 조성물은 인간 파필로마 바이러스(HPV 6a, 6b, 11, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 및 68), 특히 생식기 사마귀의 원인이 되는 것으로 여겨지는 HPV 혈청형, 및 자궁경부암의 원인이 되는 HPV 바이러스(HPV16, HPV18등)으로부터 유래된 항원을 포함할 수 있다. 적합한 HPV 항원은 E1, E2, E4, E5, E6, E7, L1 및 L2이다. 생식기 사마귀 예방법, 요법, 융합물의 형태의 예는 L1 입자 또는 캡소머, 및 HPV 6 및 HPV 11 단백질 E6, E7, L1, 및 L2로부터 선택된 하나 이상의 항원을 포함하는 융합 단백질을 포함한다. 융합 단백질의 형태의 예는 WO 96/26277에 기재된 L2E7, 및 WO 99/10375에 기재된 단백질 D(1/3)-E7이다. HPV 경부 감염 또는 경부암, 예방 또는 치료 백신, 조성물은 HPV 16 또는 18 항원을 포함할 수 있다. 예를들어, L1 또는 L2 항원 단량체, 또는 L1 또는 L2 항원은 바이러스 유사 입자(VLP)로서 함께 존재하거나, L1 단독 단백질이 VLP 또는 캡소머 구조로 단독으로 존재한다. 이러한 항원, 바이러스 유사 입자 및 캡소머는 그 자체로서 공지되어 있다. 예를들어, WO 94/00152, WO 94/20137, WO 94/05792, 및 WO 93/02184를 참조하라.

추가적인 조기 단백질은 단독으로 또는 융합 단백질은, 예를들어 E7, E2 또는 E5와 같은 융합 단백질로서 포함될 수 있고, 본 발명의 구체예는 L1E7 융합 단백질을 포함하는 VLP(WO 96/11272)를 포함한다. HPV 16 항원은 HPV 16으로부터 단백질 D-E6 또는 E7 융합물을 형성시키는 조기 단백질 E6 또는 E7과 단백질 D 담체의 융합, 또는 이의 조합물 E6, 또는 E6 또는 E7과 L2의 조합물을 포함할 수 있다(WO 96/26277). 대안적으로, HPV 16 또는 18 조기 단백질 E6 및 E7은 단일 분자, 예를들어 단백질 D-E6/E7 융합체로 존재할 수 있다. 기타 융합체는 임의적으로 HPV18로부터의 E6 및 E7 단백질의 둘 중 하나 또는 둘 모두를, 예를들어 단백질 D-E6 또는 단백질 D-E7 융합 단백질 또는 단백질 D E6/E7 융합 단백질의 형태로 함유할 수 있다. 융합체는 기타 HPV 스트레인, 예를들어 스트레인 HPV31 또는 33으로부터의 항원을 포함할 수 있다.

말라리아를 야기시키는 기생충으로부터 유래된 항원이 또한 고려된다. 예를들어, 플라스모디아 팔시파룸(Plasmodia falciparum)으로부터의 항원은 RTS,S 및 TRAP를 포함한다. RTS는 B형 간염바이러스의 표면(S) 항원에 대한 B형 간염 표면 항원의 프레S2의 4개의 아미노산 부분을 통해 연결된 플라스모디아 팔시파룸의 포자소체(CS) 단백질의 모든 C 말단 부분을 실질적으로 포함하는 하이브리드 단백질이다. 이의 전체 구조는 WO 93/10152에 기재되어 있다. 효모에서 발현되는 경우, RTS는 지질단백 입자로서 생성되고, HBV로부터 S 항원과 함께 공동발현되는 경우, RTS,S로서 공지된 혼합된 입자를 생성한다. TRAP 항원은 WO 90/01496에 기재되어 있다. 본 발명의 한 구체예는 항원 제조물이 RTS,S 및 TRAP 항원의 조합물을 포함하는 융합체이다. 융합체의 성분이 되기 위한 적당한 후보자인 기타 플라스모디아 항원은 플라스모디움 종 내에서의 P.팔시파룸 MSP1, AMA1, MSP3, EBA, GLURP, RAP1, RAP2, 시퀘스트린(sequestrin), PfEMP1, Pf332, LSA1, LSA3, STARP, SALSA, PfEXP1, Pfs25, Pfs28, PFS27/25, Pfs16, Pfs48/45, Pfs230 및 이들의 유사체이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 “면역원성 조성물”은 환자에게 투여된 후, 상기 환자의 면역 반응에 긍정적으로 영향을 주는 조성물을 의미하는 가장 광범위한 의미로 사용된다. 면역원성 조성물은 환자에게 세포성 면역 반응, 예를들어 CTL 또는 체액성 면역 반응, 예를들어 항체의 유발의 향상된 전신적 또는 국소적 면역 반응을 제공한다. 특히, 본 발명에 따른 면역원성 조성물은 유효량의 항원 폴리펩티드/단백질, 특히 종양 관련 항원, 또는 이들의 면역원성 유도체, 특히 이들의 단편, 또는 엔코딩 폴리누클레오티드 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 포뮬레이션이다. 안전하고 효과적인 양은 필요시 애쥬번트와 함께 인간에게 투여되는 경우, 검출가능한 면역 반응, 예를들어 체액성 반응(항체) 또는 세포성 반응을 생성시키는 단백질의 용량을 의미하거나, 통상적인 백신 접종자에서의 현저한 해로운 부작용 없이 면역계를 면역조절할 수 있는 능력을 의미한다. 상기 양은 특이적 면역원의 사용 및 이의 존재 방법에 따라 다양할 것이다. 일반적으로, 각각의 용량은 1-5000 ㎍의 단백질, 예를들어 1-1000 ㎍의 단백질, 예를들어 1-500 ㎍, 예를들어 1-100 ㎍, 예를들어 1 내지 50 ㎍를 포함할 것으로 기대된다. 특정 백신에 대한 최적의 양은 피검체의 적절한 면역 반응의 관찰을 포함하는 표준 연구에 의해 확인될 수 있다. 최초의 백신접종 후, 피검체는 충분한 간격을 둔 1회 이상의 부스터 예방접종을 수여할 수 있다. 백신 제조물은 일반적으로 문헌[Vaccine Design, “The subunit and adjuvant approach"(eds. Powell M.F. & Newman M.J.).(1995) Plenum Press New York)]에 기재되어 있다. 리포솜 내의 피막형성은 문헌[Fullerton, US Patent 4,235,877]에 기재되어 있다.

면역원성 항원 폴리펩티드는 상기 폴리펩티드를 발현하는 환자로부터의 항혈청 및/또는 T 세포를 이용하는 면역분석(예를들어, ELISA 또는 T 세포 자극 분석) 내에서 검출가능하게 반응하는 폴리펩티드를 의미한다. 면역원성 활성에 대한 스크리닝은 당업자에게 널리 공지된 기술을 이용하여 수행될 수 있다. 예를들어, 상기 스크린은 문헌[Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988]에 기재된 것과 같은 방법을 이용하여 수행될 수 있다. 한 예시적 구체예에서, 폴리펩티드는 고형의 지지대 상에 고정될 수 있고, 고정된 폴리펩티드에 대한 혈청 내에서 항체의 결합을 가능케 하도록 환자의 혈청과 접촉될 수 있다. 이후, 결합되지 않은 혈청은 제거될 수 있고, 결합된 항체는, 예를들어 ¹²⁵I-라벨링된 단백질 A를 이용하여 검출될 수 있다.

본 발명의 폴리펩티드 항원은 SDS PAGE에 의해 시각화되는 바와 같이, 예를들어 80% 이상의 순도 또는, 예를들어 90%의 순도로 제공된다. 폴리펩티드 항원은 SDS PAGE에 의해 단일의 밴드로서 나타난다.

항원, 예를들어 이의 면역원성 단편 또는 일부, 특히 종양 관련 또는 종양 특이적 항원의 면역원성 유도체가 또한 본 발명에 포함된다. 본원에서 사용되는 “면역원성 단편”은 그 자체가 폴리펩티드를 인식하는 B 세포 및/또는 T 세포 표면 항원 수용체와 면역적으로 반응성(즉, 특이적으로 결합함)인 단편이다. 면역원성 부분은 일반적으로 널리 공지된 기술, 예를들어 문헌[Paul, Fundamental Immunology, 3rd ed., 243-247(Raven Press, 1993)] 및 본원에 인용된 참조문헌에 기술된 기술을 이용하여 확인될 수 있다. 이러한 기술은 항원 특이적 항체, 항혈청 및/또는 T 세포주 또는 클론과 반응될 수 있는 능력에 대해 폴리펩티드를 스크리닝하는 것을 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 항혈청 및 항체는 이들이 항원에 특이적으로 결합하는 경우에 “항원 특이적”이다(즉, 이들은 ELISA 또는 기타 면역검정에서 단백질과 반응하고, 관련이 없는 단백질과는 검출가능하게 반응하지 않는다). 이러한 항혈청 및 항체는 본원에 기재된 바, 및 널리 공지된 기술을 이용하여 제조될 수 있다.

한 구체예에서, 폴리펩티드의 면역원성 부분은 실질적으로 전장의 폴리펩티드의 반응도(예를들어, ELISA 및/또는 T 세포 반응도 검정) 보다 낮은 수준에서 항혈청 및/또는 T 세포와 반응하는 부분이다. 면역원성 부분의 면역원성 활성의 수준은 전장 폴리펩티드에 대한 면역원성의 약 50% 이상, 또는 약 70% 이상 또는 약 90% 초과일 수 있다. 몇몇 예에서, 면역원성 부분은 전장 폴리펩티드에 해당하는 수준, 예를들어 약 100% 또는 150% 또는 그 이상의 면역원성 활성을 초과하는 면역원성 활성의 수준을 지니는 것으로 확인될 수 있다. 특정 기타 구체예에서, 예시적 면역원성 부분은 N 말단 선도 서열 및/또는 막통과 도메인이 결손된 펩티드를 포함할 수 있다. 기타 예시적 면역원성 부분은 성숙한 단백질에 비해 작은 N 및/또는 C 말단 결손(예를들어, 약 1-50개의 아미노산, 예를들어 약 1-30개의 아미노산, 예를들어 약 5-15개의 아미노산)을 함유할 것이다.

또 다른 구체예에서, 본 발명의 예시적 면역원성 조성물, 예를들어 백신 조성물은 상기 기술된 폴리펩티드중 하나 이상을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하고, 상기 폴리펩티드는 시험관내에서 생성된다. 폴리누클레오티드는 임의의 다양한 공지된 전달 시스템 내에서 투여될 수 있다. 게다가, 다수의 유전자 전달 기술은 문헌[Rolland, Crit. Rev. Therap. Drug Carrier Systems 15:143-198, 1998], 및 본원에 인용된 참조문헌과 같이 당 분야에 널리 공지되어 있다. 적절한 폴리누클레오티드 발현 시스템은, 물론 환자에서의 발현을 위한 필수 조절 DNA 조절 서열(예를들어, 적합한 프로모터 및 종료 신호)을 함유할 것이다. 대안적으로, 세균 전달 시스템은 세균 세포 표면상에서 폴리펩티드의 면역원성 부분을 발현하고 에피토프를 분비하는 세균(예를들어, 바실러스-칼메테-구에린(Bacillus-Calmette-Guerrin))의 투여를 포함할 것이다.

본 발명의 한 구체예에서, 폴리누클레오티드는 예를들어 문헌[Ulmer et al., Science 259:1745-1749, 1993 and reviewed by Cohen, Science 259:1691-1692, 1993]에 기재된 바와 같은 “네이키드(naked)” DNA로서 투여/전달된다. 네이키드 DNA의 흡수는 세포로 효과적으로 전달되는 생물분해성 비드로 DNA를 코팅함으로써 증가될 수 있다. 한 구체예에서, 조성물은 피부내로 전달된다. 특히, 조성물은, 예를들어 문헌 [Haynes et al. J Biotechnology 44: 37-42(1996)]에 기술된 바와 같은, 비드(예를들어, 금)상으로 벡터를 코팅한 후, 고압하에서 표피로 투여되는 것을 포함하는 유전자총(gene gun)(특히, 입자 봄바르드먼트) 투여에 의해 전달된다.

한 예시적 예에서, 가스 구동 입자 가속은 파우더젝트 파르마슈티컬즈(Powderject Pharmaceuticals) PLC(Oxford, UK) 및 파우더젝트 백신즈 인크.(Powderject Vaccines Inc.)(Madison, WI)에 의해 제조된 것과 같은 장치를 이용함으로써 수행될 수 있고, 이의 몇몇 예는 U.S. 특허 제 5,846,796호; 제 6,010,478호; 제 5,865,796호; 제 5,584,807호; 및 EP 특허 제 0500 799호에 기재되어 있다. 이러한 방법은 바늘이 없는 전달 방법을 제공하고, 여기서 극미 입자의 건조 분말 포뮬레이션, 예를들어 폴리누클레오티드는 수동 장치에 의해 생성된 헬륨 가스 제트 내에서 고속으로 가속화되고, 입자가 관심 목표 조직, 통상적으로 피부로 추진된다. 입자는 0.4 내지 4.0 ㎛, 예를들어 0.6 내지 2.0 ㎛ 직경의 금 비드일 수 있고, DNA 접합체는 금 비드상으로 코팅된 후, “유전자 총”으로 배치하기 위해 카트리지 또는 카세트 내에 넣어진다.

관련 구체예에서, 본 발명의 조성물의 가스 구동의 바늘이 없는 주입에 유용할 수 있는 기타 장치 및 방법은 바이오젝트 인크.(Bioject Inc.)(Portland, OR)에 의해 제공된 것을 포함하고, 이의 몇몇 예는 U.S. 특허 제 4,790,824호; 제 5,064,413호; 제 5,312,335호; 제 5,383,851호; 제 5,399,163호; 제 5,520,639호 및 제 5,993,412호에 기재되어 있다.

따라서, 특정 구체예에서, 본원에 기재된 면역원성 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 임의의 다수의 공지된 바이러스 기초 시스템을 이용하여 발현시키기 위해 적합한 포유동물 숙주 세포내로 주입된다. 한 예시적 구체예에서, 레트로바이러스는 유전자 전달 시스템을 위한 편리하고 효과적인 플랫폼을 제공한다. 본 발명의 폴리펩티드를 엔코딩하는 선택된 누클레오티드 서열은 당 분야에 공지된 기술을 이용하여 벡터내로 삽입되고, 레트로바이러스 입자로 패키징될 수 있다. 이후, 재조합 바이러스는 분리되고, 피검체에게 전달된다. 다수의 예시적 레트로바이러스 시스템이 기재되어 있다(예를들어, U.S. Pat. No. 5,219,740; Miller and Rosman (1989) BioTechniques 7:980-990; Miller, A. D. (1990) Human Gene Therapy 1:5-14; Scarpa et al. (1991) Virology 180:849-852; Burns et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:8033-8037; and Boris-Lawrie and Temin(1993) Cur. Opin. Genet. Develop. 3:102-109).

게다가, 다수의 예시적 아데노바이러스 기초 시스템이 또한 기재되어 있다. 숙주 게놈으로 통합되는 레트로바이러스와 달리, 아데노바이러스는 염색체외로 존재하고, 이에따라 삽입 돌연변이유발과 관련된 위험을 최소화시킨다(Haj-Ahmad and Graham(1986) J. Virol. 57:267-274; Bett et al.(1993) J. Virol. 67:5911-5921; Mittereder et al.(1994) Human Gene Therapy 5:717-729; Seth et al. (1994) J. Virol. 68:933-940; Barr et al.(1994) Gene Therapy 1:51-58; Berkner, K.L.(1988) BioTechniques 6:616-629; and Rich et al.(1993) Human Gene Therapy 4:461-476). 인간은 때때로 통상적인 인간 아데노바이러스 혈청형, 예를들어 AdHu5에 의해 감염되므로, 개체군의 현저한 비율이 아데노바이러스에 대한 중화 항체 반응을 지니게 되고, 이는 재조합 백신 기초 시스템에서의 이종 항원에 대한 면역 반응에 영향을 줄 것이다. 비인간 영장류 아데노바이러스 벡터, 예를들어 침팬지 아데노바이러스 68(AdC68, Fitzgerald et al.(2003) J. Immunol 170(3):1416-22))은 미리 존재하는 중화 항체 반응의 불이익이 없는 대안적 아데노바이러스 시스템을 제공할 것이다.

다양한 아데노 관련 바이러스(AAV) 벡터 시스템이 또한 폴리누클레오티드 전달을 위해 개발되어졌다. AAV 벡터는 당 분야에 널리 공지된 기술을 이용하여 용이하게 작제될 수 있다. 문헌[U.S. Pat. Nos. 5,173,414 and 5,139,941; International Publication Nos. WO 92/01070 and WO 93/03769; Lebkowski et al. (1988) Malec. Cell. Biol. 8:3988-3996; Vincent et al. (1990) Vaccines 90 (Cold Spring Harbor Laboratory Press); Carter, B. J. (1992) Current Opinion in Biotechnology 3:533-539; Muzyczka, N. (1992) Current Topics in Microbiol. and Immunol. 158:97-129; Kotin, R. M. (1994) Human Gene Therapy 5:793-801; Shelling and Smith (1994) Gene Therapy 1:165-169; and Zhou et al. (1994) J. Exp. Med. 179:1867-1875]를 참조하라.

유전자 전달에 의한 본 발명의 폴리펩티드를 엔코딩하는 핵산 분자의 전달에 유용한 추가의 바이러스 벡터는 폭스(pox) 패밀리의 바이러스, 예를들어 백시니아 바이러스 및 조류 폭스바이러스로부터 유래된 벡터를 포함한다. 예를들어, 신규 분자를 발현하는 백시니아 바이러스 재조합체는 하기와 같이 작제될 수 있다. 폴리펩티드를 엔코딩하는 DNA가 우선 적절한 벡터 내로 삽입되고, 이는 백시니아 프로모터 및 인접 백시니아 DNA 서열, 예를들어 티미딘 카나아제(TK)를 엔코딩하는 서열에 인접한다. 이후, 이러한 벡터는 백시니아와 함께 동시에 감염되는 세포를 전달시키기 위해 사용된다. 상동 재조합은 백시니아 프로모터와 관심 폴리펩티드를 엔코딩하는 유전자를 바이러스 게놈으로 삽입되도록 한다. 생성된 TK.sup.(-) 재조합체는 5-브로모데옥시우리딘의 존재하에서 세포를 배양하고, 이에 내성인 바이러스 플라크를 고름으로써 선택될 수 있다.

백시니아 기초 감염/트랜스펙션 시스템은 편리하게는 생물체의 숙주세포에서 본원에 기재된 하나 이상의 폴리펩티드의 유도가능한 일시적 발현 또는 공동발현을 제공하는데 사용될 수 있다. 이러한 특정 시스템에서, 세포는 먼저 박테리오파아지 T7 RNA 중합효소를 엔코딩하는 백시니아 바이러스 재조합체를 이용하여 시험관내에서 감염된다. 이러한 중합효소는 T7 프로모터를 지니는 주형을 전사하는 경우에만 정교한 특이성을 나타낸다. 감염후, 세포는 T7 프로모터에 의해 구동되는 폴리투클레오티드 또는 관심 폴리누클레오티드와 함께 트랜스펙션된다. 세포질에서 백시니아 바이러스 재조합물로부터 발현된 중합효소는 트랜스펙션된 DNA를 RNA로 전사시키고, 이는 숙주 전사 기관에 의해 폴리펩티드로 전사된다. 상기 방법은 고수준의 일시적인 많은 양의 RNA 및 이의 전사 생성물의 세포질 생성을 제공한다. 문헌[Elroy-Stein and Moss, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1990) 87:6743-6747; Fuerst et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1986) 83:8122-8126] 참조.

대안적으로, 조류폭스바이러스, 예를들어 조류폭스 및 카나리아 발진 바이러스가 또한 관심 코딩 서열을 전달하는데 사용될 수 있다. 포유동물 병원체로부터 면역원을 발현하는 재조합 조류폭스 바이러스는 비조류 종으로 투여되는 경우 보호적 면역성을 수여하는 것으로 공지되어 있다. 조류폭스 벡터의 사용은 인간 및 기타 포유동물종에서 특히 바람직한데, 이는 상기 조류폭스 속(genus)의 일원이 조류 종에서만 민감하게 생산적으로 복제될 수 있어 포유동물 세포에서는 전염되지 않기 때문이다. 재조합 조류폭스 바이러스를 생산하는 방법은 당 분야에 공지되어 있고, 이는 상기에 백시니아 바이러스의 생성에 대해 기재된 바와 같이 유전적 재조합을 이용한다. WO 91/12882; WO 89/03429; 및 WO 92/03545 참조.

임의의 다수의 알파바이러스 벡터, 예를들어 US 특허 제 5,843,723호; 제 6,015,686호; 제 6,008,035호 및 제 6,015,694호에 기재된 벡터가 또한 본 발명의 폴리누클레오티드 조성물의 전달을 위해 사용될 수 있다. US 특허 제 5,505,947호 및 제 5,643,576호에서 발현될 수 있는 예시적 예로 베네주엘라 말 열 뇌염(Venezuelan Equine Encephalitis, VEE)에 기초한 특정 벡터가 또한 이용될 수 있다.

항원 펩티드를 엔코딩하는 누클레오티드 서열을 포함하는 벡터가 예방적으로 또는 치료적으로 유효한 양으로 투여된다. 투여되는 양은 입자 매개 전달을 위해 일반적으로 용량당 누클레오티드의 기타 경로에 대해 16 ㎎, 예를들어 1 pg 내지 10 ㎍, 예를들어 10 ㎍ 내지 16 ㎎의 범위이다. 정확한 양은 면역화되는 환자의 체중 및 투여 경로에 따라 매우 다양할 수 있다.

네이키드 폴리누클레오티드 또는 벡터를 환자에게 도입시키기 위한 적절한 기술은 또한 적절한 비히클을 이용한 국소 적용을 포함한다. 핵산은 통상적으로 피부로 투여되거나, 점막, 예를들어 비내, 경구, 질내 또는 직장내 투여로 투여될 수 있다. 네이키드 폴리누클레오티드 또는 벡터는 약학적으로 허용되는 부형제, 예를들어 인산염완충식염수(PBS)와 함께 존재할 수 있다. DNA 흡수는 별개 또는 DNA 포뮬레이션에 포함된 촉진 작용제, 예를들어 부피바카인의 사용에 의해 추가로 촉진될 수 있다. 수용체에 핵산을 직접적으로 투여하는 기타 방법은 US 5,697,901에 기재된 초음파, 전기 자극, 전기 천공 및 마이크로시딩(microseeding)을 포함한다.

핵산 작제물의 흡수는 여러 공지된 트랜스펙션 기술, 예를들어 트랜스펙션 작용제의 사용을 포함하는 기술에 의해 향상될 수 있다. 이러한 작용제의 예는 양이온성 작용제, 예를들어 칼슘 포스페이트 및 DEAE-덱스트란 및 리포펙탄트(lipofectant), 예를들어 리포펙탐 및 트랜스펙탐을 포함한다. 투여되는 핵산의 투여량은 변경될 수 있다.

또 다른 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 항체, 또는 혈청, 또는 항체의 도메인, 예를들어 Fab 및 F(ab')2 단편을 포함한다. 예를들어, 항체는 모노클로날 항체 또는 이의 단편이다. 유효량은 통상적으로 환자 체중의 ㎏ 당 100 ㎍ 내지 500 ㎎, 예를들어 1 ㎎ 내지 50 ㎎이다. 따라서, 본 발명의 방법은 수동적 면역요법 또는 수동적 면역예방을 포함한다.

본 발명의 면역원성 조성물 및 IL-18 폴리펩티드는 다수의 경로, 예를들어 근내, 피하, 복막내 및 정맥내 경로에 의해 전달될 수 있다.

본 발명에 따른 IL-18 폴리펩티드 또는 이의 생체활성 단편은 주로 Th-1 유형의 면역 반응을 유도하는 것이다. 고수준의 Th1 유형 사이토카인(예를들어, IFN-γ, TNFα, IL-2, IL-12, IL-18 등)은 투여되는 항원에 대한 세포 매개성 면역 반응을 유도하는 경향이 있다. 대조적으로, 고수준의 Th2 유형 사이토카인(예를들어, IL-4, IL-5, IL-6 및 IL-10)은 체액성 면역 반응을 유도하는 경향이 있다. 사이토카인의 패밀리의 리뷰를 위해, 문헌[Mosmann and Coffman, Ann. Rev. Immunol. 7:145-173, 1989]를 참조하라. "IL-18" or "IL-18 폴리펩티드"는 EP 0692536, EP 0712931, EP 0767178 및 WO 97/2441에 기재된 바와 같은 IL-18 폴리펩티드를 의미한다. IL-18 폴리펩티드 유도체 또는 변이체는 도 1에 도시된 바와 같은 SEQ ID NO:6(인간 IL-18) 또는 SEQ ID NO:7(뮤린 IL-18)의 폴리펩티드와 SEQ ID NO:6 및 SEQ ID NO:7의 전장에 걸쳐 각각 70% 이상의 동일성, 예를들어 80% 이상의 동일성, 예를들어 90% 이상의 동일성, 예를들어 95% 이상의 동일성, 예를들어 97-99% 이상의 동일성을 지니는 아미노산 서열을 포함하는 단리된 폴리펩티드를 포함한다. 이러한 폴리펩티드는 SEQ ID NO:6 및 SEQ ID NO:7의 아미노산을 각각 포함하는 것을 포함한다. IL-18 폴리펩티드는 SEQ ID NO:6 및 SEQ ID NO:7에 배열된 아미노산 서열을 지닐 수 있다. IL-18 단편이 또한 고려되고, 이는 IL-18의 생물학적(항원 또는 면역원성) 활성, 예를들어 IFN-γ의 유도를 나타낼 수 있는 IL-18의 단편이다. IL-18 생체활성 단편 및/또는 IL-18 면역원성 단편이 사용될 수 있다.

IL-18 폴리펩티드는 성숙한 단백질의 형태일 수 있거나, 더 큰 단백질, 예를들어 융합 단백질의 일부일 수 있다. IL-18 변이체가 또한 고려되고, 이는 잔기가 유사한 특성을 지닌 또 다른 잔기로 치환된 보존 아미노산 치환에 의해 변화된 폴리펩티드이다. 통상적인 이러한 치환은 Ala, Val, Leu 및 Ile; Ser 및 Thr; 산성 잔기 Asp 및 Glu; Asn 및 Gln; 염기성 잔기 Lys 및 Arg; 방향족 잔기 Phe 및 Tyr에 존재한다. 변이체는 임의의 조합으로 치환되거나, 결손되거나 첨가된 다수, 5-10, 1-5, 1-3, 1-2 또는 1개의 아미노산이 사용될 수 있다. IL-18 생체활성 단편이 또한 고려된다. "생체활성 단편"은 전장 IL-18과 실질적으로 동일한 생체활성을 보유하는 IL-18의 단편을 의미한다. 생체활성은 임의의 하기의 특성, 즉 내추럴 킬러(NK) 세포 활성 및 Th1 세포 반응(NK, NKT의 활성화, 활성화된 T 세포의 증식)의 증가, 항-혈관형성 활성, 활성화된 NK, NKT 세포 및 T 세포상에서의 Fas 리간드의 발현의 향상, IFNg, GM-CSF 및 기타 사이토카인, 예를들어 Th1 유형의 사이토카인의 생성 증가, 선천면역 및 Th1 및 Th2 매개성 반응을 자극하는 능력을 의미한다.

특히, IL-18의 생체활성 단편은 KG-1 분석 시스템에 의해 시험관 내에서 측정시에 IFNg의 생성을 증가시키는 능력을 보유하는 단편이다. 인간 IL-18 수용체를 발현하는 인간 골수성 단구 세포주(KG-1)는 IFNg의 생성(분비)(ELISA에 의해 측정됨) 및 NfKB의 활성화를 증가시킴으로써 IL-18을 이용한 치료에 반응할 것이다(Matsuko Taniguchi et al, J. Immunological Methods, 1998, 217, 97-102).

본 발명에 따른 IL-18 폴리펩티드는 임의의 적합한 방식으로 제조될 수 있다. 이는 자연 발생 폴리펩티드, 재조합적으로 또는 합성적으로 생성되는 상기 폴리펩티드 등을 분리하는 것을 포함한다. 이러한 제법은 당 분야에 널리 공지되어 있다.

본 발명에 따른 면역원성 조성물은 유리하게는 약학적으로 허용되는 부형제 또는 담체를 포함한다. 담체 분자는 담체 생물체, 예를들어 생(生) 세균 벡터 또는 세균 담체 스트레인, 물, 염수 또는 면역자극 화학물질을 포함하는 다양한 형태를 포함할 수 있다. 담체는 물, 염수 또는 기타 완충 생리용액일 수 있다. 담체 분자는 또한 다공성의 중합 입자, 예를들어 마이크로비드 또는 나노입자, 및 금속염 입자, 예를들어 알루미늄 히드록시드, 알루미늄 포스페이트 또는 칼슘 포스페이트, 또는 마그네슘 포스페이트, 아이언 포스페이트, 칼슘 카르보네이트, 마그네슘 카르보네이트, 칼슘 설페이트, 마그네슘 히드록시드, 또는 복염, 예를들어 암모늄-아이언 포스페이트, 칼륨-아이언 포스페이트, 칼슘-아이언 포스페이트, 칼슘-마그네슘 카르보네이트, 또는 임의의 상기 염의 혼합물을 포함할 수 있다.

본원에서 제공된 바와 같은 복합 제제의 투여후, 환자는 Th1 및 Th2 유형 반응을 포함하는 면역 반응을 지지할 것이다.

본 발명의 구체예에서, 면역원성 조성물은 또 다른 애쥬번트, 예를들어 주로 Th1 유형의 면역 반응을 유도하는 애쥬번트를 추가로 포함할 것이다. Th1 유도 애쥬번트는 지질다당류 유래 애쥬번트, 예를들어 장내세균 지질다당류(LPS), 3D-MPL, QS21, QS21 및 콜레스테롤의 혼합물, 및 CpG 올리고누클레오티드 또는 두 개 이상의 상기 애쥬번트의 혼합물을 포함하는 애쥬번트의 군으로부터 선택될 수 있다. 주로 Th1 유형 반응을 유도하기 위한 특정 애쥬번트는, 예를들어 모노포스포릴 지질 A의 조합물, 예를들어 3-데-0-아실화된 모노포스포릴 지질 A와 알루미늄염의 조합물을 포함할 수 있다. MPL^® 애쥬번트는 코릭사 코포레이션(Corixa Corporation)(Seattle, WA; 참조, 예를들어, US Patent Nos. 4,436,727; 4,877,611; 4,866,034 및 4,912,094)에서 시판된다.

한 구체예에서, 본 발명에 따른 면역원성 조성물은 사포닌 애쥬번트, 예를들어 Quil A의 비독성 단편, 예를들어 QS-17 또는 QS-21, 예를들어 QS-21을 추가로 포함할 수 있다.

사포닌은 문헌[Lacaille-Dubois, M and Wagner H.(1996. A review of the biological and pharmacological activities of saponins. Phytomedicine vol 2 pp 363-386)]에 교시되어 있다. 사포닌은 식물 및 해양동물계에 널리 분포된 스테로이드 또는 트리테르펜 글리코시드이다. 사포닌은 진탕시 비말하는 수중 콜로이드 용액으로 형성되고, 콜레스테롤을 침전시키는 것으로 기재되어 있다. 사포닌이 세포막에 근접하는 경우, 이들은 막을 파열시키는 막내의 기공과 유사한 구조를 생성시킨다. 적혈구의 용혈은 이러한 현상의 예이고, 이는 일정한(모두는 아님) 사포닌의 특성이다.

사포닌은 전신 투여를 위한 백신내의 애쥬번트로서 공지되어 있다. 애쥬번트 및 개별적 사포닌의 용혈 활성은 당 분야에서 광범위하게 연구되어 있다(Lacaille-Dubois and Wagner, supra). 예를들어, Quil A(남아메리카의 나무, 퀼라자 사포나리아 몰리나(Quillaja Saponaria Molina)의 나무껍질로부터 유래됨), 및 이의 단편이 US 5,057,540 및 문헌["Saponins as vaccine adjuvants", Kensil, C. R., Crit Rev Ther Drug Carrier Syst, 1996, 12 (1-2):1-55]; 및 EP 0 362 279 B1에 기재되어 있다. Quil A 또는 이의 단편을 포함하는 면역 자극 복합체(ISCOMS)로 명명된 입자 구조가 백신의 제조에 사용되어 왔다(Morein, B., EP 0 109 942 B1). 이들 구조는 애쥬번트 활성을 지니는 것으로 보고되었다(EP 0 109 942 Bi; WO 96/11711). 용혈성 사포닌 QS21 및 QS17(Quil A의 HPLC 정제된 단편)은 효능있는 전신성 애쥬번트로 기재되어 있고, 이들의 생성 방법이 US 특허 제 5,057,540호 및 EP 0 362 279 B1에 기재되어 있다. 또한, 이들 참조문헌에는 전신성 백신을 위한 효능있는 애쥬번트로서 작용하는 QS7(Quil-A의 비용혈 단편)의 용도가 기재되어 있다. QS21의 용도는 문헌[Kensil et al. (1991. J. Immunology vol 146, 431-437)]에 추가로 기재되어 있다. QS21 및 폴리소르베이트 또는 시클로덱스트린의 조합물이 또한 공지되어 있다(WO 99/10008). QuilA의 단편, 예를들어 QS21 및 QS7을 포함하는 입자 애쥬번트 시스템이 WO 96/33739 및 WO 96/11711에 기재되어 있다.

전신성 백신 접종 연구에 사용되는 기타 사포닌은 기타 식물종, 예를들어 집소필라(Gypsophila) 및 사포나리아로부터 유래된 것들을 포함한다(Bomford et al., Vaccine, 10(9):572-577, 1992).

사포닌은 또한 점막으로 적용되는 백신 연구에 사용된 것으로 공지되어 있고, 이는 면역 반응의 유도에 가변적인 성공을 충족시킨다. Quil-A 사포닌은 항원이 비내로 투여되는 경우 면역 반응의 유도에 영향이 없는 것으로 기존에 밝혀졌다(Gizurarson et al. 1994. Vaccine Research 3, 23-29). 한편, 다른 저자들도 이러한 애쥬번트를 성공리에 사용하였다(Maharaj et al., Can.J.Microbiol, 1986, 32(5):414-20; Chavali and Campbell, Immunobiology, 174(3):347-59). Quil A 사포닌을 포함하는 ISCOM이 위내 및 비내 백신 포뮬레이션에 사용되었고, 애쥬번트 활성을 나타냈다(Mcl Mowat et al., 1991, Immunology, 72, 317-322; Mcl Mowat and Donachie, immunology Today, 12, 383-385). QuilA의 비독성 단편인 QS21은 또한 경구 또는 비내 애쥬번트로서 기재되어 있다(Sumino et al., J.Virol., 1998, 72(6):4931-9; W0 98/56415).

하나의 향상된 포뮬레이션은 CpG 함유 올리고누클레오티드와 사포닌 유도체의 혼합물, 예를들어 W0 00/09159 및 W0 00/62800에 기재된 CpG 및 QS21의 조합물을 포함할 수 있다. 이러한 포뮬레이션은 수중유 에멀션 및 토코페롤을 추가로 포함할 수 있다. 따라서, 추가의 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 임의로 수중유 에멀션에 포뮬레이팅된 CpG 올리고누클레오티드 및 사포닌, 예를들어 QS21의 조합물을 포함한다. 포뮬레이션은 임의로 3D-MPL^® 애쥬번트를 추가로 포함할 수 있다. QS-21은 WO 96/33739에 기재된 바와 같이 콜레스테롤로 켄칭되는 경우 덜 반응성인 조성물로 제공될 수 있다.

또 다른 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 장내세균 지질다당류 유래 애쥬번트, 예를들어 모노포스포릴 지질 A, 예를들어 3-데-O-아실화된 모노포스포릴 지질 A를 추가로 포함한다.

장내세균 지질다당류(LPS)가 면역계의 효능 있는 자극제임이 오래전에 공지되었으나, 이의 애쥬번트의 용도는 이의 독성 효과에 의해 제외되어 왔다. 환원 말단 글루코사민으로부터의 코어 카르보히드레이트 및 포스페이트의 제거에 의해 생성된 LPS의 비독성 유도체인 모노포스포릴 지질 A(MPL)는 문헌[Ribi et al (1986, Immunology and lmmunopharmacology of bacterial endotoxins, Plenum Publ. Corp., NY, p407-419)]에 기재되어 있고, 하기의 구조를 지닌다:

MPL의 추가의 독성이 제거된 변형은 이당류 백본의 3-위치로부터 아실 사슬을 제거하여 생성되고, 3-O-데아실화된 모노포스포릴 지질 A(3D-MPL)로 명명된다. 이는 GB 2122204B에 교시된 방법에 의해 정제되고 제조될 수 있고, 상기 참조는 또한 디포스포릴 지질 A, 및 이의 3-O-데아실화된 변이체의 제법을 기재한다. 3D-MPL의 한 형태는 직경 0.2 ㎛ 미만의 소입자 크기를 지니는 에멀션의 형태이고, 이의 제조 방법은 WO 94/21292에 기재되어 있다. 모노포스포릴 지질 A 및 표면활성제를 포함하는 수성 포뮬레이션은 WO 98/43670A2에 기재되어 있다.

본 발명의 애쥬번트 조합물에서 포뮬레이팅되는 세균 지질다당류 유래 애쥬번트는 세균 공급원으로부터 정제되고 가공될 수 있거나, 합성될 수 있다. 예를들면, 정제된 모노포스포릴 지질 A는 문헌[Ribi et al 1986 (supra)]에 기재되어 있고, 살모넬라종으로부터 유래된 3-O-데아실화된 모노포스포릴 또는 디포스포릴 지질 A는 GB 2220211 및 US 4,912,094에 기재되어 있다. 기타 정제 및 합성 지질다당류는 문헌[(W0 98/01139; US 6,005,099 and EP 0 729 473 B1; Hilgers et al., 1986, lnt.Arch.Allergy.lmmunol., 79(4):392-6; Hilgers et al., 1987, Immunology, 60(1):141-6; and EP0549074B1)]에 기재되어 있다. 사용될 수 있는 세균 지질다당류 애쥬번트는 US 6,005,099 및 EP 0729 473B1에 기재된 3D-MPL 및 β(1-6) 글루코사민 이당류이다.

따라서, 본 발명에 사용될 수 있는 LPS 유도체는 LPS 또는 MPL 또는 3D-MPL의 구조와 유사한 구조인 면역자극제이다. 본 발명의 또 다른 양태에서, LPS 유도체는 아실화된 단당류일 수 있고, 이는 상기 MPL 구조에 대한 서브-포션(sub-portion)이다.

하나의 이당류 애쥬번트는 하기의 구조식의 정제 또는 합성 지질 A이다:

여기서, R2는 H 또는 PO3H2일 수 있고, R3는 아실 사슬 또는 β-히드록시미리스토일 또는 하기의 구조식을 지니는 3-아실옥시아실 잔기이고:

여기서, X 및 Y는 0 내지 약 20의 값을 지닌다.

3D-MPL 및 퀼라자 사포니아 몰리나의 나무껍질로부터 유래된 사포닌의 조합물은 EP 0761231B에 기재되어 있다. WO 95/17210에는 면역자극제 QS21, 임의로 3D-MPL로 포뮤레이팅된 스쿠알렌, α-토코페롤, 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올리에이트(TWEEN80)에 기초한 애쥬번트 에멀션 시스템이 기재되어 있다.

따라서, 또 다른 구체예에서, 본 발명에 따른 면역원성 조성물은 (1) 항원 또는 이의 면역원성 단편 및 (2) CpG 애쥬번트와, 예를들어 사포닌 애쥬번트, 예를들어 QS21, 예를들어 이의 콜레스테롤로 켄칭된 형태, 3D-MPL, 및 수중유 에멀션을 포함하는 목록으로부터 선택된 하나 이상의 애쥬번트의 조합물을 포함한다.

한 추가의 구체예에서, 본 발명에 따른 면역원성 조성물은 CpG 애쥬번트에 대한 모노포스포릴 지질 A의 조합물을 포함하고, WO 94/00153에 기재된 바와 같이 모노포스포릴 지질 A와 사포닌 애쥬번트의 조합물, 예를들어 3D-MPL^® 애쥬번트와 QS21의 조합물을 포함하거나, WO 96/33739에 기재된 바와 같이 QS21이 콜레스테롤로 켄칭되는 경우의 덜 반응성인 조성물을 포함할 수 있다. 기타 포뮬레이션은 QS-21외에 수중유 에멀션 및 토코페롤을 포함할 수 있다. CpG 애쥬번트에 첨가될 수 있는 또 다른 포뮬레이션은 WO 95/17210에 기재된 수중유 에멀션 중의 QS21, 3D-MPL^® 애쥬번트 및 토코페롤의 조합물을 이용하는 포뮬레이션이다. 따라서, 본 발명에 따른 면역원성 조성물은 항원, 예를들어 종양 관련 항원, CpG 애쥬번트, 사포닌 애쥬번트, 예를들어 QS-21를, 임의로 QS-21외에 수중유 에멀션 및 토코페롤을 포함하는 3D-MPL^® 애쥬번트와 임의로 함께 포함한다. 예를들어, QS-21은 콜레스테롤로 켄칭된다.

대안적으로, 본 발명에 따른 면역원성 조성물 내에 존재하는 경우 사포닌 애쥬번트는 키토산 또는 기타 다중양이온 중합체, 폴리락티드 및 폴리락티드-코-글리콜리드 입자, 폴리-N-아세틸 글루코사민 기초 중합체 매트릭스, 다당류 또는 화학적으로 변형된 다당류로 구성된 입자, 리포솜 및 지질 기초 입자, 글리세롤 모노에스테르로 구성된 입자 등으로 구성된 비히클과 결합될 수 있다. 사포닌은 또한 콜레스테롤의 존재하에서 포뮬레이팅되어 미립자 구조, 예를들어 리포솜 또는 ISCOM을 형성할 수 있다. 더욱이, 사포닌은 비-미립자 용액 또는 현탁액, 또는 미립자 구조, 예를들어 파우실라멜라(paucilamelar) 리포솜 또는 ISOCOM에서 폴리옥시에틸렌 에테르 또는 에스테르와 함께 포뮬레이팅될 수 있다. 사포닌은 또한 부형제, 예를들어 카르보폴(Carbopol^R)과 포뮬레이팅되어, 점도를 증가시키거나, 분말 부형제, 예를들어 락토오스와 함께 건조 분말 형태에서 포뮬레이팅될 수 있다.

백신 및 면역원성 조성물은 단위-용량 또는 다중-용량 용기, 예를들어 밀봉된 앰풀 또는 바이얼에 존재할 수 있다. 이러한 용기는 사용때까지 포뮬레이션의 무균을 유지시키기 위해 밀봉될 수 있다. 일반적으로, 포뮬레이션은 현탁액, 용액 또는 오일중 에멀션 또는 수성 비히클로 보관될 수 있다. 대안적으로, 백신 또는 면역원성 조성물은 사용 직전에 멸균 액체 담체의 추가만을 필요로 하는 동결건조된 상태로 보관될 수 있다.

임의의 다양한 전달 비히클이 종양 세포를 목표로 하는 항원 특이적 면역반응의 생성을 촉진시키기 위해 면역원성 조성물 및 백신 내에서 사용될 수 있다. 본 발명의 한 구체예에 따라서, 본원에 기재된 면역원성 조성물은 항원 제시 세포(APC), 예를들어 수지상 세포, 대식세포, B 세포, 단핵구 및 효과적인 APC가 되도록 설계될 수 있는 기타 세포를 통해 숙주로 전달된다. APC 세포는 항원을 제시하는 능력을 증가시키고, T 세포 반응의 활성화 및/또는 유지를 개선시키고, 그 자체로서 항종양 효과를 지니고/거나 수여자와 면역적으로 양립가능하도록(즉, 매치된 HLA 일배체형) 유전적으로 변형될 수 있으나, 꼭 변형될 필요는 없다. APC는 일반적으로 종양 및 종양-주변 조직을 포함하는 임의의 다양한 생물학적 유동체 및 기관으로부터 분리될 수 있고, 자가, 동종 또는 이종 세포일 수 있다.

본 발명의 특정 구체예는 항원 제시 세포로서 수지상 세포 또는 이의 전구세포를 사용할 수 있다. 수지상 세포는 매우 효능있는 APC이고(Banchereau J. & Steinman R.M., Nature, 1998, 392:245-251), 예방적 또는 치료적 항종양 면역을 유도하기 위한 생리학적 애쥬번트로서 유효한 것으로 나타났다(참조: Timmerman J.M. and Levy R., Ann. Rev. Med, 1999, 50:507-529). 일반적으로, 수지상 세포는 이들의 통상적인 외형(시험관내에서 보이는 명백한 세포질 가공(수상돌기)을 지니는, 본위치에서 별 모양임), 고효율로 항원을 흡수, 가공 및 제시하는 이들의 능력, 나이브 T 세포 반응을 활성화시키는 이들의 능력에 기초하여 확인될 수 있다. 물론, 수지상 세포는 생체내 또는 생체외에서 일반적으로 수지상 세포에서 발견되지 않는 특이적 세포 표면 수용체 또는 리간드를 발현하도록 설계될 수 있고, 이러한 변형된 수지상 세포는 본 발명에 의해 고려된다. 수지상 세포에 대한 대안으로서, 분비 소포 항원 로딩된 수지상 세포(엑소솜)이 백신 내에서 사용될 수 있다(참조: Zitvogel L. et al., Nature Med., 1998, 4:594-600). 따라서, 본원에 기재된 폴리펩티드로 로딩되어 시험관내에서 변형되거나, 본원에 기재된 폴리펩티드를 발현하도록 시험관내에서 유전적으로 변형된 유효량의 수지상 세포 또는 항원 제시 세포 및 약학적으로 유효한 담체를 포함하는 면역자극 포뮬레이션, 예를들어 백신이 제공된다.

수지상 세포 및 전구세포는 말초혈, 골수, 종양 침윤 세포, 종양주위 조직 침윤 세포, 림프절, 비장, 피부, 제대혈 또는 임의의 기타 적절한 조직 또는 유동체로부터 수득될 수 있다. 예를들어, 수지상 세포는 말초혈로부터 수거된 단핵구의 배양을 위해 사이토카인, 예를들어 GM-CSF, IL-4, IL-13 및/또는 TNFα의 조합물을 첨가함으로써 생체외에서 분화될 수 있다. 대안적으로, 말초혈, 제대혈 또는 골수로부터 수거된 CD34 포지티브 세포는 배양 배지에 수지상 세포의 분화, 성숙 및 증식을 유도하는 GM-CSF, IL-3, TNFα, CD40 리간드, 지질다당류(LPS), flt3 리간드 및/또는 기타 화합물(들)을 첨가함으로써 수지상 세포로 분화될 수 있다. 수지상 세포는 편리하게는 "미성숙" 및 "성숙" 세포로 분류되고, 이는 두개의 널리 특징화된 표현형 사이를 구별하기 위한 간단한 방식이다. 그러나, 이러한 명명법은 모든 가능한 분화의 중간 단계를 배제하고자 하는 바가 아니다. 미성숙 수지상 세포는 높은 항원 흡수 및 가공 능력을 지니는 APC로 특징화되고, 이는 Fcγ 수용체 및 만노오스 수용체의 높은 발현과 관련이 있다. 성숙한 표현형은 통상적으로 상기 마커의 낮은 발현을 특징으로 하나, 세포 표면 분자의 높은 발현은 T 세포 활성화, 예를들어 클래스 Ⅰ 및 클래스 Ⅱ MHC, 부착 분자(예를들어, CD54 및 CD11) 및 공동자극 분자(예를들어, CD40, CD80, CD86 및 4-1BB)의 활성화의 원인이 된다.

APC는 일반적으로 종양 단백질(예를들어, MAGE-3, Her2/neu, 또는 이들의 유도체)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드로 트랜스펙션되어, 종양 폴리펩티드, 또는 이의 면역원성 부분이 세포 표면에서 발현될 수 있다. 이러한 트랜스펙션은 생체외에서 발생할 수 있고, 이후 이러한 트랜스펙션된 세포를 포함하는 조성물 또는 백신은 본원에 기재된 바와 같이 치료 목적을 위해 사용될 수 있다. 대안적으로, 수지상 세포 또는 기타 항원 제시 세포를 목표로 하는 유전자 전달 비히클은 환자에게 투여되어, 생체내에서 발생하는 트랜스펙션을 일으킬 수 있다. 수지상 세포의 생체내 및 생체외 트랜스펙션은, 예를들어 일반적으로 당 분야에 공지된 임의의 방법, 예를들어 WO 97/24447에 기재된 방법, 또는 문헌[Mahvi D.M. et al., Immunology and Cell Biology, 1997, 75:456-460]에 기재된 유전자 총 방법을 이용하여 수행될 수 있다. 수지상 세포의 항원 로딩은 수지상 세포 또는 전구 세포를 종양 폴리펩티드, DNA(네이키드 또는 플라스미드 벡터내) 또는 RNA, 또는 항원 발현 재조합 세균 또는 바이러스(예를들어 백시니아, 조류폭스, 아데노바이러스 또는 렌티바이러스 벡터)와 함께 인큐베이션시킴으로써 달성될 수 있다.

기타 적절한 전달 시스템은 항원 물질이 적절한 약학적 담체와 혼합되고 백신으로서 사용될 수 있도록 항원 물질이 생물분해성 중합체/미세구에 통합되거나 콘쥬게이팅된 미세구를 포함한다. 용어 "미세구"는 일반적으로 충분히 구체이고 10 ㎚ 내지 2㎜의 직경을 지니는 콜로이드 입자를 기재하는데 사용된다. 매우 광범위한 자연 및 합성 중합체로부터 제조된 미세구는 다양한 생물의학 적용에서의 용도가 밝혀졌다. 이러한 전달 시스템은 특히 효력을 제공하기 위한 다중 치료에 요구되는 생체 내에서 짧은 반감기를 지니거나, 비교적 높은 분자량으로 인해 생물학적 유동체에 불안정하게 존재하거나 위장관으로부터 완전히 흡수되지 않는 단백질에 특히 유리하다. 여러 중합체가 단백질 방출을 위한 매트릭스로서 기재되어 있다. 적절한 중합체는 젤라틴, 콜라겐, 알지네이트, 덱스트란을 포함한다. 전달 시스템은 생물분해성 폴리(DL-락트산)(PLA), 폴리(락티드-코-글리콜리드)(PLG), 폴리(글리콜산)(PGA), 폴리(ε-카프로락톤)(PCL), 및 공중합체 폴리(DL-락틱-코-글리콜산)(PLGA)를 포함할 수 있다. 기타 시스템은 친수성 폴리-(에틸렌 글리콜)(PEG) 및 소수성 폴리(부틸렌 테레프탈레이트)(PBT), 또는 폴리(에티켄 글리콜)-테레프탈레이트/폴리(-부틸렌 테레프탈레이트)(PEGT/PBT)에 기초한 반복체 블록을 함유하는 이종성 히드로겔, 예를들어 폴리(에테르 에스테르) 멀티블록 공중합체를 포함할 수 있다(Sohier et al. Eur. J. Pharm and Biopharm, 2003, 55, 221-228). 시스템은, 예를들어 PLGA, PLA 및 PEGT/PBT의 1 내지 3개월 동안의 지효성 방출을 제공할 수 있다.

치료 방법은 관련된 환자의 크기 및 종, 투여되는 핵산 백신 및/또는 단백질 조성물의 양, 투여 경로, 사용되는 임의의 애쥬번트 화합물의 효력 및 용량 및 숙련된 의사에게 명백한 기타 요인에 따라 현저하게 다양할 수 있다.

본 발명은 하기의 비제한적인 실시예에 대한 참조에 의해 추가로 기재될 것이다:

실시예 Ⅰ

CpG 기초 면역원성 조성물을 이용한 백신 제조물

Ⅰ.1. - 리포솜 포뮬레이션 내에 QS21 & CpG를 함유하는 면역원성 제조물 (AS15 애쥬번트):

이러한 애쥬번트 시스템 AS15는 WO 00/62800에 기존에 기재되어 있다. AS15는 두개의 애쥬번트 시스템, AS01B 및 AS07A의 신규 조합물이다. AS01B는 3D-MPL 및 QS21을 함유하는 리포솜으로 구성되고, AS07A는 인산 완충 식염수 중의 CpG 7909(CpG 2006으로도 공지됨)로 구성된다.

3D-MPL은 그람-네거티브 세균인 살모넬라 미네소타의 지질다당류(LPS)로부터 유래된 면역자극제이다. MPL은 데아실화되었고, 지질 A 부분 상에 포스페이트기가 없다. 이러한 화학적 처리는 독성을 극적으로 감소시키는 반면, 면역 자극 특성은 유지시킨다(Ribi, 1986). 리비 이뮤노케미스트리(Ribi Immunochemistry)은 MPL을 GSK-바이오로지칼즈(GSK-Biologicals)로 생성하고 공급한다.

QS21은 남아메리카의 나무 퀼라자 사포나리아 몰리나의 나무 껍질로부터 추출한 천연 사포닌 분자이다. 나무껍질의 미정제 추출물로부터 개개의 사포닌을 분리시키기 위해 개발된 정제 기술은 기원 성분에 비하여 더욱 강한 애쥬번트 활성 및 더욱 낮은 독성을 입증하는 트리테르펜 글리코시드인 특별한 사포닌인 QS21의 분리를 가능케 한다. QS21은 다양한 서브유닛 Ags에 대한 MHC 클래스 Ⅰ 제한된 CTL을 활성화시킬 뿐만 아니라, Ag 특이적 림프구 증식을 자극시키는 것으로 밝혀졌다(Kensil, 1992). 아퀼라(정식으로는 캠브리지 바이오테크 코포레이션(Cambridge Biotech Corporation))는 QS21을 GSK-바이오로지칼즈로 생성하고 공급한다.

CpG: CpG ODN 7909는 24개의 염기 길이의 합성 단일 스트랜드 포스포로티오 에이트 올리고데옥시누클레오티드(ODN)이다. 이의 염기 서열 5'-T CG T CG TTTTGT CG TTTTGT CG TT-3'는 인간 면역계의 자극에 대해 최적화되어 있다. CpG DNA 또는 CpG 모티프를 함유하는 합성 ODN은 수지상 세포, 단핵구 및 대식세포를 활성화시켜 TH1 유사 사이토카인을 분비하고, 세포용해 T 세포의 생성을 포함하는 TH1 T 세포 반응을 유도하고, NK 세포가 IFNg를 분비하고 이의 용해 활성을 증가시키는 것을 자극하고, 또한 B 세포를 활성화시켜 증식시키는 것으로 공지되어 있다(Krieg A at al. 1995 Nature 374: 546, Chu R et al. 1997 J. Exp. Med. 186: 1623). CpG 7909는 인간 게놈의 임의의 공지된 서열에 대한 안티센스가 아니다. CpG 7909는 콜리 파르마슈티컬 그룹, 인크(Coley Pharmaceutical Group, Inc. MA, US)에 의해 개발되고 생성된 전매 애쥬번트이다.

CpG를 이용하는 포뮬레이션:

주사 일에 포뮬레이션을 수행하였다. 한 마리의 마우스에 대한 주사 부피는 50 또는 100 ㎕이었다. 리포솜 중의 CpG, 3D-MPL 및 QS21을 함유하는 통상적인 포뮬레이션을 하기와 같이 수행하였다: 등장성을 위해 20 ㎍ 내지 25 ㎍의 항원을 H₂O 및 PBS(pH 7.4)로 희석시켰다. 5분 후, 1/5의 QS21/콜레스테롤 중량비(DQ로 언급됨)로 리포솜과 혼합된 QS21(0.5 ㎍)를 포뮬레이션에 첨가하였다. 30분 후, 10 ㎍의 CpG(ODN 2006)를 첨가하고, 30분 후 보존제로서 1 ㎍/㎖의 티오메르살을 첨가하였다. 모든 인큐베이션을 교반과 함께 실온에서 수행하였다.

I.2. - CpG 및 AS02(AS02는 수중유 에멀션 중의 QS21 & 3-데-O-아실화된 모 노포스포릴 지질 A(3D-MPL)임)를 함유하는 면역원성 제조물

애쥬번트 시스템 AS02는 WO 95/17210에 기존에 기재되어 있다.

3D-MPL은 상기에 기재된 바와 같다.

QS21은 상기에 기재된 바와 같다.

오일/물 에멀션은 2개의 오일(토코페롤 및 스쿠알렌), 및 에멀션화제로서 트윈 80을 함유하는 PBS의 수성상으로 제조된 유기상으로 구성된다. 상기 에멀션은 5%의 스쿠알렌, 5%의 토코페롤, 0.4%의 트윈 80으로 구성되고, 180 ㎚의 평균 입자 크기를 지니고, SB62로 공지된다(참조: WO 95/17210).

에멀션 SB62(2배 농도)의 제조:

트윈 80을 인산 완충 식염수(PBS)에 용해시켜 PBS중 2% 용액을 생성시켰다. 100 ㎖의 2배 농도 에멀션을 생성시키기 위해, 5 g의 DL 알파 토코페롤 및 5 ㎖의 스쿠알렌을 볼텍싱하여 완전하게 혼합시켰다. 90 ㎖의 PBS/트윈 용액을 첨가하고 완전하게 혼합시켰다. 이후, 생성된 에멀션을 주사기를 통해 통과시키고, M110S 미세유체 기계를 이용하여 최종적으로 미세유체화시켰다. 생성된 오일 비말은 약 180 ㎚의 크기를 지닌다.

CpG를 이용하는 포뮬레이션:

오일/물 에멀션 중의 3D-MPL 및 QS21를 함유하는 통상적인 포뮬레이션을 하기와 같이 수행하였다: 20 ㎍ 내지 25 ㎍ 항원을 10배 농도의 PBS(pH 6.8) 및 H₂O에서 희석시키고, CpG 올리고누클레오티드(100 ㎍) 및 보존제로서 1 ㎍/㎖의 티오메 르살을 포함하여 SB62(50 ㎕), MPL(20 ㎍), QS21(20 ㎍)을 연속적으로 첨가하였다. 각각의 성분의 양은 필요에 따라 다양할 수 있다. 모든 인큐베이션은 교반과 함께 실온에서 수행하였다.

실시예 Ⅱ

TC1 Her2 치료 모델에서의 AS15로 애쥬번트화된 Her2/neu 백신과 mIL18의 병용 효과

Ⅱ.1. 실험 계획

백신

Her-2/neu 백신은 ECD-PhD이고 전체 세포외 도메인(아미노산 1-645를 포함함) 및 인산화 도메인을 포함하는 세포내 도메인의 면역원성 부분을 포함한다. 이러한 백신 작제물은 WO 00/44899에 기재되어 있고, dHER2로 언급된다.

dHER2 단백질을 H2O, 사카로오스 및 NaH2PO4/K2HPO4의 혼합물중에 항원을 희석시킴으로써 CpG로 공동-동결건조시켰다. 5분 후, CpG ODN 7909를 첨가하여 625 ㎍/㎖의 Her2neu, 1250 ㎍/㎖의 CpG, 3.15%의 사카로오스 및 5 mM PO4(pH 7)를 함유하는 최종 벌크를 수득하고, 동결건조시켰다. 최종 벌크를 3일 주기에 따라 동결건조시켰다. 즉석의 포뮬레이션을 위해, CpG 및 항원을 함유하는 동결건조된 케이크를 100 ㎍/㎖의 MPL 및 DQ를 함유하는 625 ㎕의 AS01B 희석제를 이용하여 재현탁시켰다.

동물에게 25 ㎍의 Her2/neu, 50 ㎍의 CpG 및 5 ㎍의 MPL 및 DQ를 함유하는 50 ㎍을 주사하였다.

HER-2/neu를 발현하는 종양 모델

본 실험에 사용된 종양 모델: 재조합 레트로바이러스 엔코딩 HER-2/neu를 이용한 TC1 세포(Dr T.C. Wu(John's Hopkins University Baltimore)에 의해 제공됨)의 레트로바이러스 형질도입에 의해 TC1HER2를 생성시켰다.

개별적인 클론을 분리시키고, 증폭하고, HER2/neu 및 MHC 클래스 I 발현의 안정성을 유세포분석에 의해 확증하였다.

마우스의 군:

0일째에 5 마리의 암컷 CB6F1 마우스의 4개의 군에게 2 x 10e6 TC1Her2 cl8 세포로 피하 공격(challenge)한 후, 하기중 하나로 백신 접종시켰다:

- gr1: PBS 투여

- gr2: 7일 내지 27일 동안 매일 1OO ㎍의 mIL18(뮤린)을 피하 주사

- gr3: 7일 및 14일째에 AS15 중 25 ㎍의 dHER2 단백질을 근내 투여

- gr4: 백신 및 mIL18의 조합물 투여

Ⅱ.2. 생체내 종양 성장 및 사망률:

결과를 도 2 및 표 1에 나타내었다.

표 1: TC1HER2 종양 공격 후 27일째에 종양이 제거된 마우스의 백분율

PBS	0%
mIL18	20%(사망률: 2/5)
dHER2/AS15	0%
dHER2/AS15 mIL18	60%(2/5가 작은 종양으로 발달)

Ⅱ.3 결론

뮤린 재조합 IL-18의 반복된 주사와 병용된 애쥬번트(AS15)에서 포뮬레이팅 된 재조합 정제 HER-2/neu 단백질(dHER2)의 조합물의 사용에 기초한 백신 방법은 백신 조성물 또는 IL-18 단독을 사용하는 백신 접종 방법에 비해 HER2/neu 항원을 발현하는 미리 확립된 종양에 대한 개선된 결과를 발생시켰다. AS15 애쥬번트에 포뮬레이팅된 재조합 dHER 단백질의 용도에 기초한 백신 접종은 HER2/neu 항원을 발현하는 상기 종양 세포를 이용한 공격에 대해 매우 효과적으로 마우스를 보호하는 것으로 이전에 밝혀졌었다. 이러한 보호는 HER2/neu 항원에 대해 특이적이고, 장기간의 면역 기억의 유도와 관련이 있다. 종양이 미리 확립된 보다 설득력 있는 치료 모델에서, 백신 접종은 성장하는 종양에 단지 제한적인 영향을 지녀 덜 유효한 것으로 나타났다(이러한 조건하에서 마우스는 종양을 완전하게 없애지 못한다). 그러나, 놀랍게도 상기 치료가 동시에 주어지는 경우, 상승작용이 관찰되고, 마우스의 60%가 완전하게 종양이 제거되는 반면, 40%는 단지 작은 종양을 발달시킨다. 결론으로, mIL-18 및 표 1에 나타낸 백신을 병용하는 것은 명백하게 이롭다. 이는 백신에 의한 HER2/neu 특이적 T 세포 반응의 유도 및 IL-18의 반복된 주사에 의한 면역계의 활성화 둘 모두가 종양 회귀를 수득하는데 중요함을 의미한다.

실시예 Ⅲ

TC1 Mage3 치료 모델에서의 AS15로 애쥬번트화된 MAGE-3 백신과 mIL18의 병용 효과

Ⅲ.1. 실험 계획

백신

Mage3를 코딩하는 DNA 플라스미드(PcDNA3 Mage3)의 표준적인 트랜스펙션에 의해 TC1 기원 세포를 유전적으로 변형시킴으로써 Mage3 종양 항원을 발현하는 종양 모델(TC1 Mage3)을 생성시켰다. Mage3를 코딩하는 PcDNA3 플라스미드로 기원 TC1 세포(T.C. Wu (John's Hopkins University, Baltimore)에 의해 제공됨)를 트랜스펙션시킴으로써 상기 종양 모델을 생성시켰다. 키트 제공자(Gibco BRL Life Technologies, cat no 18324-012)의 권고에 따라 리포펙타민을 이용하여 트랜스펙션을 수행하였다.

이러한 세포는 종양발생적이고, 2 10e6 TC1 Mage3 세포로 공격된 마우스의 100%가 종양을 발달시켰다.

0일째에 5 마리의 암컷 C57BL/6 마우스의 4개의 군에게 2 x 10e6 TC1Mage3 세포로 피하 공격한 후, 하기중 하나로 백신 접종시켰다:

- gr1: PBS 투여

- gr3: 7일 및 14일째에 AS15 중 10 ㎍의 Mage3 단백질을 근내 투여

- gr4: 백신 및 mIL18의 조합물 투여

종양 회귀를 유도하기 위한 AS15 백신 접종, IL18 주사 및 병용 치료의 능력을 평가하였다. 면역 파라미터에서의 백신 접종 및/또는 IL18 치료의 영향을 또한 측정하였다(림프구 증식, 사이토카인 생성...).

SEQUENCE LISTING <110> GlaxoSmithKline Biologicals s.a. Bruck, Claudine Gerard, Catherine Jonak, Zdenka <120> Immunogenic compositions <130> VB60529 <140> PCT/EP2004/011621 <141> 2004-10-11 <150> GB0323968.8 <151> 2003-10-13 <160> 7 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CpG 1826 <400> 1 tccatgacgt tcctgacgtt 20 <210> 2 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CpG 1758 <400> 2 tctcccagcg tgcgccat 18 <210> 3 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CpG sequence <400> 3 accgatgacg tcgccggtga cggcaccacg 30 <210> 4 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CpG 2006, also known as CpG 7909 <400> 4 tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt 24 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CpG 1668 <400> 5 tccatgacgt tcctgatgct 20 <210> 6 <211> 157 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn 1 5 10 15 Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp 20 25 30 Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile 35 40 45 Ile Ser Met Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Gly Met Ala Val Thr Ile 50 55 60 Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile 65 70 75 80 Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys 85 90 95 Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Ser Val Pro Gly His Asp Asn Lys 100 105 110 Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu 115 120 125 Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu 130 135 140 Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp 145 150 155 <210> 7 <211> 157 <212> PRT <213> murine <400> 7 Asn Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn 1 5 10 15 Asp Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Glu Asp Met 20 25 30 Thr Asp Ile Asp Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile 35 40 45 Tyr Met Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser 50 55 60 Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile 65 70 75 80 Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser 85 90 95 Asp Leu Ile Phe Phe Gln Lys Arg Val Pro Gly His Asn Lys Met Glu 100 105 110 Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu 115 120 125 Asp Asp Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp 130 135 140 Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser 145 150 155

Claims

안전하고 효과적인 양의 1) IL-18 폴리펩티드 또는 이의 생체활성 단편 또는 변이체, 및 2) 항원 또는 이의 면역원성 유도체 및 CpG 애쥬번트를 포함하는 면역원성 조성물을 포유동물에게 투여하는 것을 포함하여, 포유동물에서 항원에 대한 면역 반응을 향상시키는 방법.
제 1항에 있어서, 항원 또는 이의 면역원성 유도체가 인간 면역결핍 바이러스 HIV-1, 인간 단순포진 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 로타바이러스, 엡슈타인 바 바이러스, 수두대상포진 바이러스, 간염바이러스, 예를들어 B형 간염바이러스, A형 간염바이러스, C형 간염바이러스 및 E형 간염바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스, 파라인플루엔자 바이러스, 홍역 바이러스, 이하선염 바이러스, 인간 유두종 바이러스, 플라비바이러스 또는 인플루엔자 바이러스, 나이세리아종, 모락셀라종, 보르데텔라종; 결핵균을 포함하는 미코박테리움종; 장독성 대장균을 포함하는 대장균종; 살모넬라종; 리스테리아종; 헬리코박터종; 황색포도구균, 표피포도구균을 포함하는 포도구균종; 보렐리아종; 클라미디아 트라코마티스, 클라미디아 뉴모니애를 포함하는 클라미디아종; 열대열원충을 포함하는 열원충종; 톡소플라스마종, 캔디다종으로 이루어진 군으로부터 선택된 생물체로부터 유래됨을 특징으로 하는 방법.
안전하고 효과적인 양의 1) IL-18 폴리펩티드 또는 이의 생체활성 단편 또는 변이체 및 2) 종양 관련 항원 또는 이의 면역원성 유도체 및 CpG 애쥬번트를 포함하는 면역원성 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하여, 환자에서 암의 중증도를 감소시키는 방법.
제 3항에 있어서, 종양 관련 항원 또는 이의 면역원성 유도체가 MAGE 패밀리, PRAME, BAGE, LAGE 1, LAGE 2, SAGE, HAGE, XAGE, PSA, PAP, PSCA, 프로스테인(prostein), P501S, HASH2, 크립토(Cripto), B726, NY-BR1.1, P510, MUC-1, 프로스타아제(Prostase), STEAP, 티로시나아제, 텔로메라아제, 서바이빈(survivin), CASB616, P53, 또는 her 2 neu로부터의 항원을 포함하는 군으로부터 선택됨을 특징으로 하는 방법.
제 1항 내지 제 4항중 어느 한 항에 있어서, IL-18 폴리펩티드 또는 이의 생체활성 단편 또는 변이체 및 면역원성 조성물이 동시에 투여되거나, 개별적으로 투여되거나, 임의의 순서로 순차적으로 투여됨을 특징으로 하는 방법.
제 5항에 있어서, IL-18 폴리펩티드 또는 이의 생체활성 단편 또는 변이체 및 면역원성 조성물이 약학적 복합 제제의 형태로 동시에 투여됨을 특징으로 하는 방법.
제 1항 내지 제 6항중 어느 한 항에 있어서, IL-18 폴리펩티드 또는 이의 생체활성 단편 또는 유도체의 기원이 인간 또는 뮤린임을 특징으로 하는 방법.
제 7항에 있어서, IL-18이 SEQ ID NO:6 또는 SEQ ID NO:7의 폴리펩티드 또는 이들의 생체활성 단편 또는 유도체임을 특징으로 하는 방법.
제 1항 내지 제 7항중 어느 한 항에 있어서, CpG 애쥬번트가 퓨린, 퓨린, C, G, 피리미딘, 피리미딘을 순서대로 포함함을 특징으로 하는 방법.
제 1항 내지 제 8항중 어느 한 항에 있어서, CpG 애쥬번트가 TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT (SEQ ID NO:1); TCT CCC AGC GTG CGC CAT (SEQ ID NO:2); ACC GAT GAC GTC GCC GGT GAC GGC ACC ACG (SEQ ID NO:3); TCG TCG TTT TGT CGT TTT GTC GTT (SEQ ID NO:4); TCC ATG ACG TTC CTG ATG CT (SEQ ID NO:5)를 포함하는 군으로부터 선택됨을 특징으로 하는 방법.
제 1항 내지 제 8항중 어느 한 항에 있어서, CpG 애쥬번트가 3개 이상의 뉴클레오티드에 의해 분리된 2개 이상의 메틸화되지 않은 CG 반복체를 함유함을 특징으로 하는 방법.
제 11항에 있어서, 면역자극성 올리고뉴클레오티드가 6개의 뉴클레오티드에 의해 분리된 2개 이상의 메틸화되지 않은 CG 반복체를 함유함을 특징으로 하는 방법.
활성 성분으로서 개별적 성분인 (1) IL-18 폴리펩티드 또는 이의 생체활성 단편 또는 변이체 및 (2) 항원 및 CpG 애쥬번트를 포함하는, 감염성 질환, 암, 자가면역 질환 및 관련 질환의 예방 및/또는 치료를 위한 면역원성 조성물을 포함하는 복합 제제로서, 활성 성분이 동시에 사용되거나, 개별적으로 사용되거나, 순차적으로 사용되는 복합 제제.
제 13항에 있어서, 성분(1) 및 (2)가 하나의 조성물로 혼합됨을 특징으로 하는 복합 제제.
제 13항 또는 제 14항에 있어서, 면역원성 조성물이 종양 관련 항원 또는 이의 면역원성 유도체를 포함하고, 암에 대해 예방적으로 또는 치료적으로 활성임을 특징으로 하는 복합 제제.
제 15항에 있어서, 종양 관련 항원 또는 이의 면역원성 유도체가 MAGE 패밀리, PRAME, BAGE, LAGE 1, LAGE 2, SAGE, HAGE, XAGE, PSA, PAP, PSCA, 프로스테인, P501S, HASH2, 크립토, B726, NY-BR1.1, P510, MUC-1, 프로스타아제, STEAP, 티로시나아제, 텔로메라아제, 서바이빈, CASB616, P53, 또는 her 2 neu로부터의 항 원을 포함하는 군으로부터 선택됨을 특징으로 하는 복합 제제.
제 13항 내지 제 16항중 어느 한 항에 있어서, IL-18 폴리펩티드 또는 이의 생체활성 단편 또는 유도체의 기원이 인간 또는 뮤린임을 특징으로 하는 복합 제제.
제 17항에 있어서, IL-18이 SEQ ID NO:6 또는 SEQ ID NO:7의 폴리펩티드 또는 이들의 생체활성 단편 또는 유도체임을 특징으로 하는 복합 제제.
제 13항 내지 제 18항중 어느 한 항에 있어서, CpG 애쥬번트가 제 9항 내지 제 12항중 어느 한 항에 규정된 것임을 특징으로 하는 복합 제제.
제 13항 내지 제 19항중 어느 한 항에 있어서, 면역원성 조성물이 3D-MPL, QS21, QS21 및 콜레스테롤의 혼합물, 알루미늄 히드록시드, 알루미늄 포스페이트, 토코페롤, 및 수중유 에멀션 또는 2개 이상의 상기 애쥬번트의 조합물을 포함하는 군으로부터 선택된 면역자극성 화학물질을 추가로 포함함을 특징으로 하는 복합 제제.
제 20항에 있어서, 면역원성 조성물 애쥬번트가 3D-MPL, CpG, QS21, 콜레스테롤, 수중유 에멀션을 포함함을 특징으로 하는 복합 제제.
제 21항에 있어서, 수중유 에멀션이 스쿠알렌, 토코페롤 및 폴리옥시에틸렌소르비탄 모노올레에이트(트윈 80)을 포함함을 특징으로 하는 복합 제제.
제 20항에 있어서, 면역원성 조성물이 QS21, 콜레스테롤 및 CpG 애쥬번트를 포함함을 특징으로 하는 복합 제제.
제 13항 내지 제 23항중 어느 한 항에 있어서, 둘 모두의 활성 성분이 주사용 용액의 형태임을 특징으로 하는 복합 제제.
활성 성분으로서 개별적 성분인 (1) IL-18 폴리펩티드 또는 이의 생체활성 단편 및 (2) 항원 또는 이의 면역원성 유도체 및 CpG 애쥬번트를 포함하는, 감염성 질환, 암, 및 자가면역 질환의 예방 및/또는 치료를 위한 면역원성 조성물을 포함하는 약학적 키트(kit)로서, 활성 성분이 동시에 사용되거나, 개별적으로 사용되거나, 순차적으로 사용되는 약학적 키트.
제 25항에 있어서, 면역원성 조성물이 종양 관련 항원 또는 이의 면역원성 유도체를 포함하고, 암에 대해 예방적으로 또는 치료적으로 활성임을 특징으로 하는 약학적 키트.
제 26항에 있어서, 종양 관련 항원 또는 이의 면역원성 유도체가 MAGE 패밀리, PRAME, BAGE, LAGE 1, LAGE 2, SAGE, HAGE, XAGE, PSA, PAP, PSCA, 프로스테인, P501S, HASH2, 크립토, B726, NY-BR1.1, P510, MUC-1, 프로스타아제, STEAP, 티로시나아제, 텔로메라아제, 서바이빈, CASB616, P53, 또는 her 2 neu로부터의 항원을 포함하는 군으로부터 선택됨을 특징으로 하는 약학적 키트.
제 13항 내지 제 23항중 어느 한 항에 있어서, 의약으로 사용됨을 특징으로 하는 복합 제제.
제 1항 내지 제 12항중 어느 한 항에 있어서, 제 13항 내지 제 24항중 어느 한 항에 따른 복합 제제를 사용하는 것을 포함함을 특징으로 하는 방법.
감염성 질환, 암, 자가면역 질환 및 관련 질환에 걸려 있거나 이에 민감한 환자, 및 항원 또는 이의 면역원성 유도체 및 CpG 애쥬번트를 포함하는 면역원성 조성물로 이미 프라이밍(priming)된 환자의 예방 및/또는 치료를 위한 약제의 제조에 있어서 IL-18 폴리펩티드 또는 이의 생체활성 단편 또는 유도체의 용도.
감염성 질환, 암, 자가면역 질환 및 관련 질환에 걸려 있거나 이에 민감한 환자, 및 IL-18 폴리펩티드 또는 이의 생체활성 단편 또는 유도체로 프라이밍된 환자의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서 항원 또는 이의 면역원성 유도체 및 CpG 애쥬번트를 포함하는 면역원성 조성물의 용도.
제 30항 또는 제 31항에 있어서, 항원이 종양 관련 항원이고, 암이 유방암, 폐암, NSCLC, 결장암, 흑색종, 난소암, 방광암, 두경부 편평 흑색종, 식도암을 포함하는 군으로부터 선택됨을 특징으로 하는 용도.
제 30항 내지 제 32항중 어느 한 항에 있어서, IL-18 폴리펩티드 또는 이의 생체활성 단편 또는 유도체의 기원이 인간 또는 뮤린임을 특징으로 하는 용도.
제 33항에 있어서, IL-18이 SEQ ID NO:6 또는 SEQ ID NO:7의 폴리펩티드 또는 이들의 생체활성 단편 또는 유도체임을 특징으로 하는 용도.
제 30항 내지 제 34항중 어느 한 항에 있어서, CpG 애쥬번트가 제 9항 내지 제 12항중 어느 한 항에 규정된 것임을 특징으로 하는 용도.