KR20060088885A - 뉴로펩티드 ｆｆ 리셉터 2의 작용제를 이용한 신경병증성통증 치료 방법 - Google Patents

뉴로펩티드 ｆｆ 리셉터 2의 작용제를 이용한 신경병증성통증 치료 방법 Download PDF

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오드라 엘. 스컬리
로버트 이. 다비스
킴벌리 이. 바노버
루이스 로버토 가르델
젤베 라메
니콜라스 마이클 켈리
파비오 베르토지
블라디미르 세르부킨
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아카디아 파마슈티칼스 인코포레이티드
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Abstract

본 발명은 급성 통각 및 만성 신경병증성 통증을 매개하는 뉴로펩티드 FF 리셉터의 서브타입 발견, 상기 리셉터 서브타입과 선택적으로 상호작용하는 화합물 및, 급성 통증 및 만성 신경병증성 통증 치료 방법에 관한 것이다.
통증, 치료, 작용제, 길항제

Description

뉴로펩티드 ＦＦ 리셉터 2의 작용제를 이용한 신경병증성 통증 치료 방법{TREATING NEUROPATHIC PAIN WITH NEUROPEPTIDE FF RECEPTOR 2 AGONISTS}
관련 출원
본 출원은 스컬리 등의 "뉴로펩티드 FF 리셉터 2 작용제를 이용한 신경병증성 통증 치료 방법"에 대한 2003년 9월 25일자 미국 가출원번호 60/506,130 및 스컬리 등의 "뉴로펩티드 FF 리셉터 2 작용제를 이용한 신경병증성 통증 치료 방법"에 대한 2003년 10월 2일자 미국 가출원번호 60/508,008에 대한 우선권을 주장하며, 이들은 원용에 의해 도면을 포함한 그 전체가 본 발명에 포함된다.
기술분야
본 발명은 급성 통증 및 만성 신경병증성 통증을 매개하는 뉴로펩티드 FF 리셉터 서브타입의 활성을 조절하는 화합물을 이용한, 급성 통증 및 만성 신경병증성 통증의 치료 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 이러한 리셉터 서브타입과 선택적으로 상호작용하는 화합물, 및 상기 화합물의 동정 방법에 관한 것이다.
통증은 인간의 공통된 경험이다. 이는 급성에서부터 만성적인 형태일 수 있으며, 중간 정도의 적당한 수준에서 극심한 강도까지 다양할 수 있다. 6천5백만명 이상의 미국인들이 일정 시기에 통증 상태를 경험하고 있다. 통증으로 인한 직, 간접적인 손실은 일년에 1200억 달러를 초과한다. 급성 통증은 진정제, 항염증제 및 다른 진통제로 치료될 수 있으며, 치료제의 선택은 일반적으로 통증의 정도에 따라 결정된다. 이러한 통증 치료 방법의 목표는, 통증 신호를 전달하는 감각 신호의 전이를 차단하고, 통각 자극에 대한 정동적 반응을 통제하고자 하는 것이다.
염증성 통증 및 급성 통증의 치료에 효과적인 약물은, 통상적으로 더 많은 만성 통증을 치료하는데에는 효과적이지 않다. 만성 통증의 한 형태는, 감각 신경이 손상된 이후에 발생한다. 접촉이나 온도에 대한 민감성이 조금 증가한 수준에서부터 극심한 수준에 이르는 통증을 경험하게 된다. 신경계 기능적 변이 또는 신경계 구조 개편이 관여하는 것으로 추정되어, 이러한 통증의 유형을 신경병증성 통증(Neuropathic pain)이라고 한다.
신경병증성 통증은 임상적으로 관리하기 몹시 어려우며, 매우 흔하다. 미국인의 약 1.5%가 한가지 유형 이상의 신경병증성 통증을 겪고 있을 수 있으며, 이러한 집단은 신경성 유래의 다양한 형태의 요통을 포함시키는 경우 더욱 확대될 수 있다. 그러므로, 신경병증성 통증은 외상, 질환 및 화학적 손상에 의해 초래된 신경 손상과 관련될 수 있다. 신경병증성 통증을 경감시키는 화합물은, 급성 통증(예, 가파펜틴, 3환성 항-우울제) 치료에는 효과적이지 않을 수 있다. 현재 신경병증성 통증에 사용가능한 치료제는, 이러한 유형의 통증을 치료하기 위하여 특별히 설계되지 않았으므로, 이러한 약물들이 효과가 우수하지 않거나 또는 모든 환자들에게 유효하지 않는 점은 놀라운 사실이 아니다. 그러므로, 신경병증성 통증에 보다 더 효과적이며 보다 더 허용가능한 치료제가 요구된다.
발명의 개요
본 발명은 통증 치료에 유효한 화합물을 NPFF2 리셉터과 접촉시키는 단계 및 상기 화합물이 NPFF2 리셉터에 결합하는지 여부를 확인하는 단계를 포함하는, 통증 치료에 유효한 화합물의 동정 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 a) NPFF2 리셉터를 발현하는 재조합 핵산을 포함하는 재조합 세포에 테스트 화합물을 접촉시키는 단계로서, b) 상기 한가지 이상의 NPFF2 리셉터 활성에 작용하는 상기 테스트 화합물의 능력을 판단하고, 상기 재조합 핵산을 포함하지 않는 세포에서의 상기 테스트 화합물이 한가지 이상의 NPFF2 리셉터 활성에 작용하는 능력과 비교하는 단계를 포함하며, 상기 세포는 내인성 핵산으로부터 기능적 NPFF2 리셉터를 발현하지 않으며, 상기 재조합 핵산은 a) 서열번호 1의 핵산, b) 서열번호 2의 아미노산을 코딩하는 핵산, c) 상기 NPFF2의 한가지 이상의 활성을 가지는 리셉터를 코딩하며 서열번호 1의 적어도 20개의 연속 뉴클레오티드의 상보체와 엄격 혼성화 조건에서 혼성화할 수 있는, 적어도 20개의 연속 뉴클레오티드를 포함하는 NPFF2 리셉터를 코딩하는 그 유도체로 이루어진 군으로부터 선택된 NPFF2 리셉터 핵산을 포함하는 것을 특징으로 하는, 한가지 이상의 NPFF2 리셉터 활성에 작용할 수 있는 화합물의 스크리닝 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 생물에 NPFF2 리셉터 서브타입을 활성화시키는 적어도 하나의 화합물의 유효량을 접촉시키는 단계를 포함하는, 임의 타입의 급성 및 만성 통증을 치료하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 NPFF2 리셉터에 적어도 하나의 테스트 화합물을 접촉시키는 단계 및 NPFF2 리셉터의 작용제인 테스트 화합물을 동정하기 위하여 상기 NPFF2 리셉터의 활성 수준 증가를 결정하는 단계를 포함하는, NPFF2 리셉터의 작용제 화합물의 동정 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 NPFF2 리셉터를 발현하는 세포를 배양하는 단계, 세포 또는 세포로부터 추출된 성분을 하나 이상의 테스트 화합물과 배양하는 단계 및 NPFF 리셉터 작용제인 테스트 화합물을 동정하기 위해 NPPF2 리셉터의 활성 증가를 확인하는 단계를 포함하는, NPFF2 리셉터의 작용제 화합물을 동정하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 통증 환자에게 후술된 식I, 식II 또는 식III 중 적어도 하나의 유효량을 접촉시켜, 상기 통증의 하나 이상의 증상을 감소시키는 단계를 포함하는, 통증 치료 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 통각과민 또는 이질통증 환자에게 후술된 식I, 식II 또는 식III 중 적어도 하나의 화합물을 제공하는 단계 및 상기 적어도 하나의 화합물이 개체의 통각과민 또는 이질통증을 감소시키는지를 확인하는 단계를 포함하는, 개체에서 통각과민 또는 이질통증을 경감시키는 화합물의 동정 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 후술된 식I, 식II 또는 식III 중 적어도 하나의 화합물을 NPFF2 리셉터와 접촉시키는 단계 및 NPFF2 리셉터의 작용제인 식I, 식II 또는 식III의 화합물을 동정하기 위하여 상기 NPFF2 리셉터의 활성 수준 증가를 확인하는 단계를 포함하는, NPFF2 리셉터의 작용제인 식I, 식II 또는 식III의 화합물을 동정하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 NPFF2 리셉터를 발현하는 세포를 배양하는 단계, 상기 세포를 후술된 식I, 식II 또는 식III 중 적어도 하나의 화합물과 배양하는 단계, 및 NPFF2 리셉터 작용제인 식I, 식II 또는 식III의 화합물을 동정하기 위하여 상기 NPFF2 리셉터의 활성 수준 증가를 확인하는 단계를 포함하는, NPFF2 리셉터의 작용제 화합물을 동정하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 NPFF2 리셉터를 후술된 식I, 식II 또는 식III 중 적어도 하나의 화합물과 접촉시키는 단계 및 상기 식I, 식II 또는 식III의 화합물이 NPFF2 리셉터에 결합하는지를 확인하는 단계를 포함하는, NPFF2 리셉터의 작용제 화합물을 동정하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 식I 또는 식II의 화합물, 또는 제약학적으로 허용가능한 그의 염, 에스테르, 아미드 또는 프로드럭 화합물을 제공한다.
Figure 112006020866754-PCT00001
Figure 112006020866754-PCT00002
또한, 본 발명은 식III의 화합물, 또는 제약학적으로 허용가능한 그의 염, 에스테르, 아미드 또는 프로드럭 화합물을 제공한다.
Figure 112006020866754-PCT00003
발명의 상세한 설명
뉴로펩티드 FF(NPFF)는 C 말단에 RF-아미드를 포함하고 있으며, 신경전달물질로 작용하는 대표적인 내인성 발현 펩티드 계열이다. NPFF는 중추 신경계, 특히 척수, 시상하부, 시상 및 뇌간에 존재한다. 이 펩티드의 기능 중 하나는 통증을 조절하는 것이다. NPFF가 동물 통증 모델을 이용한 생체내 실험에서 향(pro)-및 항-오피오이드 효과를 모두 발휘할 수 있는 것으로 제시되었다.
이러한 NPFF에 대한 외관상 반대 작용은 다수개 리셉터들의 작용에 의해 매개된다. 실제, NPFF에 의해 활성화되는 G 단백질과 커플을 이룬 2종의 리셉터가 존재하는 것으로 알려져 있다. 이러한 리셉터들은, NPFF1 및 NPFF2이며, 이들은 체내 및 생명체들에서 차별적으로 발현된다. 이들 2종의 리셉터 중 어느 것이 다양한 통증 형태로의 NPFF 작용을 매개하는 것인지는 알려져 있지 않다. 척수, 후근절, 척수 삼차 신경핵 및 시상을 포함한 다양한 뇌 부위에 NPFF2 결합 자리가 있음을 확인한 해부 실험으로, 이 리셉터가 두가지 통증 형태에서 NPFF의 통각 활성을 매개할 수도 있음을 시사한다. 그러나, 하나의 NPFF 리셉터에 대해 선택적인 화합물이 없이는 이러한 주장을 입증하기 불가능하다.
그러므로, NPFF2 리셉터에 결합하는 화합물은 항통각 화합물로서 추가적으로 연구하기 위한 중요한 후보물질이다. 이러한 화합물의 동정은 당업계에서 매우 중요한 일이다.
NPFF1 리셉터 및 관련 리셉터들에 비해 NPFF2 리셉터를 선택적으로 활성화하는 화합물들이 발견되고 있다. NPFF2 리셉터 서브타입과 상호작용하는 화합물들은 지금까지 승인받지 않은 진통 활성을 지니고 있으며, 급성 및 만성 통증에 유효한 치료제들이다. 이러한 사실들은 외상에 의해, 당뇨병, 띠헤르페스(대상포진), 과민성 대장 증후군 또는 암 말기와 같은 질병들에 의해, 또는 화학적 손상, 예컨대 항바이러스 약물을 포함한 약물 요법의 의도하지 않은 결과에 의해 초래된 급성 및 신경병증성 통증의 치료에 있어서, NPFF2 리셉터 작용제의 유용성을 뒷받침하는 실무적인 활용성을 갖는다.
따라서, 본 발명의 화합물 및 방법은 급성 및 만성 통증의 치료에 관한 것이다. 본 발명은 NPFF2 리셉터에 선택적인 화합물들을 개시한다. 또한 본 발명은, 불필요하고 투약 제한적 부작용을 초래하지 않으면서 통증을 통제할 목적으로, NPFF2 리셉터 서브타입과 상호작용하는 화합물을 약리학적으로 활성인 투여량으로 개체에 접촉시키는 단계를 포함하는 통증 치료 방법을 제공한다.
따라서, 본 발명은, 화합물을 NPFF2 리셉터에 접촉시키는 단계 및 상기 화합물의 상기 NPFF2 리셉터 결합성을 판단하는 단계를 포함하는, 통증 치료에 유효한 화합물의 동정 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은
a) NPFF2 리셉터를 발현하는 재조합 핵산을 포함하는 재조합 세포에, 테스트 화합물을 접촉시키는 단계로서, 상기 세포는 내인성 핵산으로부터 기능적 NPFF2 리셉터를 발현하지 않으며;
b) 상기 한가지 이상의 NPFF2 리셉터 활성에 작용하는 상기 테스트 화합물의 능력을 판단하고, 상기 재조합 핵산을 포함하지 않는 세포에서의 상기 테스트 화합물이 한가지 이상의 NPFF2 리셉터 활성에 작용하는 능력과 비교하는 단계를 포함하며,
상기 재조합 핵산은 아래로 이루어진 군으로부터 선택된 NPFF2 리셉터 핵산을 포함하는 것을 특징으로 하는, 한가지 이상의 NPFF2 리셉터 활성에 작용할 수 있는 화합물의 스크리닝 방법에 관한 것이다.
a) 서열번호 1의 핵산;
b) 서열번호 2의 아미노산을 코딩하는 핵산;
c) 한가지 이상의 NPFF2 리셉터 활성을 가지는 리셉터를 코딩하고, 서열번호 1의 적어도 20개의 연속 뉴클레오티드의 상보체와 엄격 혼성화 조건에서 혼성화할 수 있는 적어도 20개의 연속 뉴클레오티드를 포함하는, NPFF2 리셉터를 코딩하는 그 유도체.
특정 예로, 상기 NPFF2 리셉터의 핵산은, 서열번호 2의 아미노산 서열을 코딩하는 적어도 20개의 연속 뉴클레오티드의 상보체와 엄격 혼성화 조건에서 혼성화할 수 있는, 적어도 20개의 연속 뉴클레오티드를 포함하는 서열번호 2의 아미노산 서열 유도체를 코딩한다.
일부 예로, 상기 유도체는 서열번호 2의 아미노산 서열을 코딩하는 연속 뉴클레오티드의 상보체와 엄격 혼성화 조건하에서 혼성화할 수 있는, 적어도 50, 적어도 100, 적어도 150, 적어도 200, 적어도 250, 적어도 300, 적어도 350, 적어도 400, 적어도 450, 적어도 500, 적어도 600, 적어도 700, 적어도 800, 적어도 900, 적어도 1000, 적어도 1100, 적어도 1200, 적어도 1300, 적어도 1400, 또는 적어도 1500개의 연속 뉴클레오티드를 포함한다.
또한, 본 발명은 NPFF2 리셉터 서브타입을 활성화시키는 적어도 하나의 화합물의 유효량을 생물에 접촉시키는 단계를 포함하는, 임의 타입의 급성 및 만성 통증을 치료하는 방법에 관한 것이다.
특정 예로, 상기 통증은 당뇨병, 바이러스 감염, 과민성 대장 증후군, 절단, 암 또는 화학적 손상과 관련된 것이다.
또한, 본 발명은 NPFF2 리셉터를 적어도 한가지 테스트 화합물과 접촉시키는 단계 및 NPFF2 리셉터의 작용제인 테스트 화합물을 동정하기 위하여 상기 NPFF2 리셉터의 활성 수준 증가를 결정하는 단계를 포함하는, NPFF2 리셉터의 작용제 화합물의 동정 방법에 관한 것이다.
특정 예로, 동정한 상기 작용제는 NPFF1이 아닌 NPFF2 리셉터를 활성화시킨다. 다른 예로, 동정한 상기 작용제는 NPFF2 리셉터에 선택적이다.
또한, 본 발명은 NPFF2 리셉터를 발현하는 세포를 배양하는 단계, 세포 또는 세포로부터 추출된 성분을 하나 이상의 테스트 화합물과 배양하는 단계 및 NPFF 리셉터 작용제인 테스트 화합물을 동정하기 위해 NPPF2 리셉터의 활성 증가를 확인하는 단계를 포함하는, NPFF2 리셉터의 작용제 화합물의 동정 방법에 관한 것이다.
특정 예에서, 상기 배양 단계의 세포는 NPFF2 리셉터를 과다발현한다.
또한, 본 발명은 식I 또는 식II의 화합물, 또는 제약학적으로 허용가능한 그의 염, 에스테르, 아미드 또는 프로드럭 화합물을 제공한다.
Figure 112006020866754-PCT00004
Figure 112006020866754-PCT00005
상기 식에서,
R1은 수소, C1-C10의 직쇄 또는 분지형 알킬, C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알케닐, C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알키닐, 및 C3-C10의 사이클로알킬이고;
R2, R3, R4, R5 및 R6은 각각 독립적으로 수소, C1-C10의 직쇄 또는 분지형 알킬, C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알케닐, C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알키닐, C3-C10의 사이클로알킬, 치환 또는 비치환된 아릴 또는 헤테로아릴, 하이드록시, 할로겐화된 에테르, 니트로, 아미노, 할로겐, 퍼할로알킬, -OR7, -N(R7)2, -CN, -C(=Z)R7, -C(=Z)0R7, -C(=Z)N(R7)2, -N(R7)-C(=Z)R7, -N(R7)-C(=Z)N(R7)2, -OC(=Z)R7 및 -SR7로 이루어진 군으로부터 선택되며;
Z는 산소 또는 황이고, 각 R7은 독립적으로 수소, 아릴 또는 헤테로아릴로 선택적으로 치환된 C1-C10 의직쇄 또는 분지형 알킬, 아릴 또는 헤테로아릴로 선택적으로 치환된 C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알케닐, 아릴 또는 헤테로아릴로 선택적으로 치환된 C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알키닐, C3-C10의 사이클로알킬, C5-C10의 사이클로알케닐, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는
R2, R3 및 그것들이 결합된 탄소는, 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 또는 헤테로사이클 고리를 형성하거나, 또는
R3 및 R4 및 그것들이 결합된 탄소는 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 또는 헤테로사이클 고리를 형성하거나, 또는
R4 및 R5 및 그것들이 결합된 탄소는 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 또는 헤테로사이클 고리를 형성하거나, 또는
R5 및 R6 및 그것들이 결합된 탄소는 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 또는 헤테로사이클 고리를 형성하며;
Q는 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 및 헤테로사이클 고리로 이루어진 군으로부터 선택된다.
또한, 본 발명은 식III의 화합물, 또는 제약학적으로 허용가능한 그의 염, 에스테르, 아미드 또는 프로드럭 화합물을 제공한다.
Figure 112006020866754-PCT00006
상기 식에서,
Cy1은 아릴, 융합된 아릴, 헤테로아릴, 융합된 헤테로아릴, 카르보사이클, 사이클로알킬, 융합된 헤테로사이클 및 헤테로사이클로 이루어진 군으로부터 선택되며;
Cy2는 아릴, 융합된 아릴, 헤테로아릴, 융합된 헤테로아릴, 카르보사이클, 사이클로알킬, 융합된 헤테로사이클 및 헤테로사이클로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R8 및 R9는 각각 0-6회 존재하며, 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C1-C8의 직쇄 또는 분지형 알킬, 선택적으로 치환된 C2-C8의 직쇄 또는 분지형 알케닐, 선택적으로 치환된 C2-C8의 직쇄 또는 분지형 알키닐, 선택적으로 치환된 C3-C8의 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 카르보사이클, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 융합된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 융합된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 헤테로사이클, 선택적으로 치환된 융합된 헤테로사이클, 할로알킬, 할로겐, -CN, -NO2, -C(=Z)R7, -C(=Z)OR7, -C(=Z)N(R7)2, -N(R7)2, -N(R7)-C(=Z)R7, -N(R7)-C(=Z)N(R7)2, -N(R7)-S(=O)R7, N(R7)-S(=O)2R7, -OR7, -OC(=Z)R7, -SO3H, -S(=O)2N(R7)2, -S(=O)N(R7)2, -S(=0)2R7, -S(=O)R7 및 -SR7으로 이루어진 군으로부터 선택되며,
Z는 산소 또는 황이고, 상기 R7은 상기 정의된 바와 동일하며;
R10은 수소, 선택적으로 치환된 C1-C8의 직쇄 또는 분지형 알킬, 선택적으로 치환된 C2-C8의 직쇄 또는 분지형 알케닐, 선택적으로 치환된 C2-C8의 직쇄 또는 분지형 알키닐, 선택적으로 치환된 C3-C8의 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 융합된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 융합된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 헤테로사이클 및 선택적으로 치환된 융합된 헤테로사이클로 이루어진 군으로부터 선택되며;
X는 산소, 황, NR7, 선택적으로 치환된 에틸렌 및 아세틸렌으로 이루어진 군으로부터 선택되며, R7은 상기 정의된 바와 동일하다.
전술한 일부 치환기들은 하나 이상의 "R"기를 포함하나, "R" 기는 동일한 번호로 지정되며, 예컨대, 기 N(R7)2는 R7기를 두개 가진다. 동일한 번호로 표시된 "R"기는 동일하거나 또는 상이할 수 있다. 따라서, 예컨대, 메틸아민, 디메틸아민 및 메틸프로필아민은 모두 "N(R7)2"로 표시된다.
용어 "제약학적으로 허용가능한 염"은 투여된 생물에 유의할만한 자극을 초래하지 않으며, 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 잃어버리지 않는 화합물 형태이다. 제약학적 염은, 본 발명의 화합물을 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, p-톨로엔설폰산, 살리실산 등과 같은 무기 산과 반응시켜 수득할 수 있다. 또한, 제약학적 염은, 본 발명의 화합물을 염기와 반응시켜, 암모늄 염, 소듐 또는 포타슘 염과 같은 알칼리 금속 염, 칼슘 또는 마그네슘 염과 같은 알칼라인 토금속 염, 디사이클로헥실아민, N-메틸-D-글루카아민, 트리스(하이드록시메틸)메틸아민과 같은 유기 염기의 염, 및 아르기닌, 라이신 등의 아미노산과의 염과 같은 염을 형성함으로써, 수득할 수 있다.
용어 "에스테르"는 식 -(R)n-COOR'을 가지는 화학 모이어티로, 상기 R 및 R'은 독립적으로 알킬, 사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴(고리 탄소를 통해 결합됨) 및 헤테로알리사이클릭(고리 탄소를 통해 결합됨)으로 이루어진 군으로부터 선택되며, 상기 n은 0 또는 1이다.
"아미드"는 식 -(R)n-C(O)NHR' 또는 -(R)n-NHC(O)R'의 화학 모이어티로, 상기 R 및 R'은 독립적으로 알킬, 사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴(고리 탄소를 통해 결합됨) 및 헤테로알리사이클릭(고리 탄소를 통해 결합됨)으로 이루어진 군으로부터 선택되며, 상기 n은 0 또는 1이다. 아미드는 본 발명의 분자에 부착된 아미노산 또는 펩티드 분자일 수 있으며, 따라서, 프로드럭을 형성한다.
본 발명에 따른 화합물내의 임의의 아민, 하이드록시 또는 카르복시 측쇄는 에스테르화 또는 아미드화될 수 있다. 이를 위한 공정 및 특정 기는 당업자에게 공지되어 있으며, Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Ed. , John Wiley & Sons, New York, NY, 1999과 같은 인용문헌에서 용이하게 찾을 수 있으며, 이는 원용에 의해 본 발명에 포함된다.
"프로드럭"은 생체내에서 모 약물로 변환되는 물질이다. 프로드럭은 어떤 상태에서는 모 약물보다 투여가 용이할 수 있으므로, 종종 유용하다. 예컨대, 이는 경구 투여에 의해 생체이용될 수 있으나, 모 약물은 그렇지 못하다. 또한, 프로드럭은 모 약물에 비해 제약학적 조성물내에서 개선된 용해성을 가질 수도 있다. 예컨대, 비제한적으로, 프로드럭은, 수용성으로 인해 이동에 불리한 세포 막 통과를 용이하게 하기 위하여, 에스테르("프로드럭")으로서 투여되지만, 수용성이 유리한 세포 내부에서는 활성체인 카르복시 산으로 대사적으로 가수분해되는 본 발명의 화합물일 수 있다. 프로드럭의 다른 예는, 펩티드가 활성체를 노출시키도록 대사되는 산 기에 결합된 짧은 펩티드(폴리아미노산)이다.
용어 "방향족"은 공핵 pi 전자계를 가지고 있는 적어도 한개의 고리를 가지는 방향족 기로, 카르보사이클 아릴(예, 페닐) 및 헤테로사이클 아릴기(예, 피리딘)을 모두 포함한다. 상기 용어는, 모노사이클 또는 융합된 고리 폴리사이클(즉, 근접한 탄소 원자 쌍을 공유하는 고리)기를 포함한다. 용어 "카르보사이클"은 하나 이상의 공유결합으로 닫힌 고리 구조를 포함하며 고리의 벡본을 형성하는 원자들이 모두 탄소 원자인 화합물을 의미한다. 따라서, 이 용어는 카르보사이클을 고리의 벡본에 탄소원자가 아닌 적어도 하나의 원자를 함유하는 헤테로사이클과 구별짓는다. 용어 "헤테로방향족" 또는 "헤테로아릴"은 적어도 하나의 헤테로사이클 고리를 포함하는 방향족기를 의미한다.
아릴 고리의 예로는, 벤젠, 치환된 벤젠, 예컨대 톨루엔, 아닐린, 자일렌 등이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
융합된 아릴 고리의 예로는, 나프탈렌 및 치환된 타프칼렌, 안트라센, 및 아줄렌이 있은나, 이에 한정되는 것은 아니다.
헤테로아릴 고리의 예로는, 퓨란, 티오펜, 피롤, 옥사졸, 티아졸, 이미다졸, 피라졸, 이속사졸, 이소티아졸, 옥살디아졸, 트리아졸, 티아디아졸, 피리딘, 피리다진, 피리미딘, 피라진, 트리아진,
Figure 112006020866754-PCT00007
,
Figure 112006020866754-PCT00008
및
Figure 112006020866754-PCT00009
이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, R은 상기 정의한 바와 동일하다.
융합된 헤테로아릴 고리의 예로는, 인돌리진, 인돌, 이소인돌, 벤조퓨란, 벤조티오펜, 인다졸, 벤즈이미다졸, 벤즈티아졸, 퓨린, 퀴놀린, 이소퀴놀린, 신놀린, 프탈라진, 퀴녹살린, 퀴녹살린, 나프티리딘, 프테리딘, 아크리딘, 펜아진이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
용어 "헤테로사이클"은 적어도 하나의 원자는 탄소 원자가 아니고, 3개 내지 15개 단위의 포화 또는 일부 불포화된 고리이다. 상기 용어는 모노사이클기 또는 융합된 고리 폴리사이클(즉, 근접한 탄소 원자의 쌍을 공유하는 고리)기를 포함한다.
헤테로사이클 고리의 예로는, 피롤린, 피롤리딘, 디옥솔란, 이미다졸, 이미다졸리딘, 피라졸린, 피라졸리딘, 피란, 피페리딘, 디옥산, 모폴린, 디티안, 티오모르폴린, 피페라진이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
융합된 헤테로사이클 고리의 예로는, 인돌린, 디하이드로벤조퓨란, 디하이드로벤조티오펜, 카르바졸, 페노티아진, 펜옥사진, 디하이드로인돌, 디하이드로벤즈이미다졸이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
카르보사이클 고리의 예로는, 인덴, 플루오렌, 아다만탄, 노르보르난이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본원에서, 용어 "알킬"은 지방성 탄화수소기이다. 알킬 모이어티는 "포화 알킬"기일 수 있으며, 이는 임의의 알켄 또는 알킨 모이어티를 함유하지 않는 것을 의미한다. 알킬 모이어티는 또한 "불포화 알킬" 모이어티일 수 있으며, 이는 적어도 하나의 알켄 또는 알킨 모이어티를 함유함을 의미한다. "알켄" 모이어티는 적어도 2개의 탄소 원자와 적어도 하나의 탄소-탄소 이중 결합으로 이루어진 군을 의미하며, "알킨" 모이어티는 적어도 2개의 탄소 원자 및 적어도 1개의 탄소-탄소 삼중 결합으로 이루어진 군을 의미한다. 포화 또는 불포화인 알킬 모이어티는, 분지형, 직쇄 또는 사이클일 수 있다.
알킬기는 1 내지 20개의 탄소 원자를 포함할 수 있다(또한 본 정의에서는 숫자 범위가 지정되지 않은 용어 "알킬"에도 해당되지만, 본원에서, "1 내지 20"과 같은 숫자 범위는 주어진 범위내의 각 정수를 의미하며, 예컨대 "1 내지 20개의 탄소 원자"는 알킬기가 탄소 원자 1개, 탄소 원자 2개, 탄소원자 3개, 등 20개 까지의 탄소 원자로 구성될 수 있음을 의미한다.). 또한, 알킬기는 탄소수 1 내지 10을 가지는 중급 알킬일 수 있다. 또한, 알킬기는 탄소수 1 내지 5의 저급 알킬일 수 있다. 본 발명에 따른 화합물의 알킬기는 "C1-C4의 알킬" 또는 유사한 표현으로 표시될 수 있다. 예로서, "C1-C4의 알킬"은 알킬쇄 즉, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, n-부틸, sec-부틸 및 t-부틸로 이루어진 군으로부터 선택되는 알킬쇄내에 1 내지 4개의 탄소 원자가 있음을 의미한다.
알킬기는 치환되거나 치환되지 않을 수 있다. 치환된 경우, 치환기(들)은 사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로알리사이클, 하이드록시, 알콕시, 아릴옥시, 머캅토, 알킬티오, 아릴티오, 시아노, 할로, 카르보닐, 티오카르보닐, O-카르보밀, N-카르바밀, O-티오카르바밀, N-티오카르바밀, C-아미도, N-아미도, S-설폰아미도, N-설폰아미도, C-카르복시, O-카르복시, 이소시아나토, 티오시아나토, 이소티오시아나토, 니트로, 실릴, 트리할로메탄설필 및 모너-및 디-치환된 아미노기를 포함하는 아미노 및 그의 보호된 유도체로부터 개별적으로 및 독립적으로 선택된 하나 이상의 기(들)이다. 전형적인 알킬기로는, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, 3급 부틸, 펜틸, 헥실, 에테닐, 프로페닐, 부테닐, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 치환기가 "선택적으로 치환된"으로 기재된 경우, 치환기는 전술한 치환기들중 하나로 치환될 수 있다.
그 자체이며 숫자의 기재가 없는 치환기 "R"은, 알킬, 사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴(고리 탄소를 통해 결합됨) 및 헤테로알리사이클(고리 탄소를 통해 결합됨)으로 이루어진 군으로부터 선택된 치환기이다.
"O-카르복시"기는 RC(=O)O-기이고, R은 상기 정의된 바와 동일하다.
"C-카르복시"기는 -C(=O)OR 기이고, R은 상기 정의된 바와 동일하다.
"아세틸"기는 -C(=O)CH3 기이다.
"트리할로메탄설포닐"기는 X3CS(=O)2-기이며, X는 할로겐이다.
"시아노"기는 -CN 기이다.
"이소시아나토"기는 -NCO 기이다.
"티오시아나토" 기는 -CNS 기이다.
"이소티오시아나토"기는 -NCS 기이다.
"설피닐"기는 -S(=O)-R 기이고, R은 상기 정의된 바와 동일하다.
"S-설폰아미도"기는 -S(=0)2NR 기이고, R은 상기 정의된 바와 동일하다.
"N-설폰아미도"기는 RS(=O)2NH-기이고, R은 상기 정의된 바와 동일하다.
"트리할로메탄설폰아미도"기는 X3CS(=O)2NR-기이고, X 및 R은 상기 정의된 바와 동일하다.
"O-카르바밀"기는 -OC(=O)-NR 기이고, R은 상기 정의된 바와 동일하다.
"N-카르바밀"기는 ROC(=O)NH-기이고, R은 상기 정의된 바와 동일하다.
"O-티오카르바밀"기는 -OC(=S)-NR기이고, R은 상기 정의된 바와 동일하다.
"N-티오카르바밀"기는 ROC(=S)NH-기이고, R은 상기 정의된 바와 동일하다.
"C-아미도"기는 -C(=O)-NR2 기이고, R은 상기 정의된 바와 동일하다.
"N-아미도"기는 RC(=O)NH-기이고, R은 상기 정의된 바와 동일하다.
용어 "퍼할로알킬"은 하나 이상의 수소 원자가 할로겐 원자로 독립적으로 치환된 알킬기이다.
두개의 치환기와 그것이 부착된 탄소가 고리를 형성하는 경우, 아래 구조
Figure 112006020866754-PCT00010
는 다음 구조의 대표적인 것이다:
Figure 112006020866754-PCT00011
상기 예에서, Rl 및 R2와 이에 부착된 탄소는 6 일원성 방향족 고리를 형성한다.
언급하지 않는 한, 치환기는 "선택적으로 치환된" 것으로 간주되는 경우, 치환기는 사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로사이클, 하이드록시, 알콕시, 아릴옥시, 머캅토, 알킬티오, 아릴티오, 시아노, 할로, 카르보닐, 티오카르보닐, 0-카르바밀, N-카르바밀, O-티오카르바밀, N-티오카르바밀, C-아미도, N-아미도, S-설폰아미도, N-설폰아미도, C-카르복시, O-카르복시, 이소시아나토, 티오시아나토, 이소티오시아나토, 니트로, 실릴, 트리할로메탄설포닐, 및 모노-및 디-치환된 아미노기를 포함하는 아미노, 그리고 그것의 보호된 유도체로부터 개별적으로 및 독립적으로 선택된 하나 이상의 기(들)로 치환될 수 있는 기를 의미한다. 상기 치환기의 보호성 유도체를 형성할 수 있는 보호기는 당업자에게 공지된 것으로, 전술한 Greene and Wuts과 같은 참조문헌에서 확인할 수 있다.
특정 예에서, 식I 또는 II에서 R1은 수소 또는 C1-C10의 직쇄 알킬이다. 일부 예에서, R1은 수소 또는 C1-C5의 직쇄 알킬이다. 또다른 예에서, R1은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸 및 이소펜틸로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 예에서, 식I 또는 II에서 R2는 수소, 하이드록시, 니트로, 아미노, 할로겐, -OR7 및 -N(R7)2로 이루어진 군으로부터 선택되며, R7은 수소 또는 C1-C10의 직쇄 알킬이다. 특정 예에서, R2는 수소, 하이드록시, 니트로, 할로겐 및 -OR7로 이루어진 군으로부터 선택되며, R7은 수소 또는 C1-C3의 직쇄 알킬이다. 다른 예로, R2는 수소, 하이드록시, 니트로, 클로로, 브로모, 메톡시 및 에톡시로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 예들에서, 식 I 또는 II에서 R3는 수소, 하이드록시, 니트로, 아미노, 할로겐, -OR7 및 -N(R7)2로 이루어진 군으로부터 선택되며, R7은 수소 또는 C1-C10의 직쇄 알킬이다. 특정 예에서, R3는 수소, 하이드록시, 니트로, 할로겐 및 -OR7로 이루어진 군으로부터 선택되며, R7은 수소 또는 C1-C3의 직쇄 알킬이다. 다른 예로, R3는 수소, 니트로, 클로로 및 요오도로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명의 예에서, 식I 또는 II에서 R4는 수소, C1-C10의 직쇄 알킬, 하이드록시, 니트로, 아미노, 할로겐, -OR7 및 -N(R7)2로 이루어진 군으로부터 선택되며, R7은 수소 또는 아릴 또는 헤테로아릴로 선택적으로 치환된 C1-C10의 직쇄 또는 분지형 알킬이다. 일부 예에서, R4는 수소, C1-C3의 직쇄 알킬, 하이드록시, 니트로, 아미노, 할로겐, -OR7 및 -N(R7)2로 이루어진 군으로부터 선택되며, 각 R7은 독립적으로 아릴로 선택적으로 치환된 C1-C3의 직쇄 알킬이다. 또다른 예로, R4는 수소, 메틸, 에틸, 하이드록시, 니트로, 아미노, 클로로, 플루오로, 메톡시, 에톡시, 메틸아미노, 디메틸아미노, 디에틸아미노 및 벤질옥시로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 예로, 식I 또는 II에서 R5는 수소, C1-C10의 직쇄 알킬, 하이드록시, 니트로, 아미노, 할로겐, 퍼할로알킬, -OR7 및 -N(R7)2로 이루어진 군으로부터 선택되며, 각 R7은 아릴 또는 헤테로아릴로 선택적으로 치환된 C1-C10의 직쇄 또는 분지형 알킬이다. 다른 예에서, R5는 수소, C1-C3의 직쇄 알킬, 하이드록시, 니트로, 아미노, 할로겐, 퍼할로알킬, -OR7 및 -N(R7)2로 이루어진 군으로부터 선택되며, 각 R7은 독립적으로 아릴로 선택적으로 치환된 C1-C3의 직쇄 알킬이다. 특정 예에서, R5는 수소, 하이드록시, 클로로, 브로모, 트리플루오로메틸 및 메톡시로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 예에서, R6은 할로겐이다.
전술한 바와 같이, 일부 예들에서, R2 및 R3와, 여기에 부착된 탄소가 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 사이클 알킬 또는 헤테로사이클 알킬 고리이다. 일부 예들에서, 상기 고리는 융합된 아릴 고리이며, 페닐일 수 있다.
일부 예들에서, R3 및 R4와, 여기에 부착된 탄소는 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 사이클 알킬 또는 헤테로사이클 알킬 고리를 형성한다. 상기 고리는 융합된 헤테로아릴 고리일 수 있으며, 피롤일 수 있다.
특정 예들에서, R4 및 R5와, 여기에 부착된 탄소는 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 사이클 알킬 또는 헤테로사이클 알킬 고리를 형성한다. 상기 고리는 헤테로사이클 알킬 고리일 수 있으며, 1,3-디옥솔란일 수 있다.
일부 예들에서, R5 및 R6와, 여기에 부착된 탄소는 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 사이클 알킬 또는 헤테로사이클 알킬 고리를 형성한다. 상기 고리는 융합된 아릴 고리일 수 있으며, 페놀일 수 있다.
특정 예에서, Q는 선택적으로 치환된 벤젠, 톨루엔, 아닐린, 자일렌, 나프탈렌, 아줄렌, 퓨란, 티오펜, 피롤, 피롤린, 피롤리딘, 옥사졸, 티아졸, 이미다졸, 이미다졸린, 피라졸, 피라졸린, 피라졸리딘, 이속사졸, 이소티아졸, 트리아졸, 티아디아졸, 피란, 피리딘, 피페리딘, 모르폴린, 티오모르폴린, 피리다진, 피리미딘, 피라진, 피페라진 및 트리아진으로 이루어진 군으로부터 선택된다. Q는 퓨란이다.
당업자는, Q가 선택적으로 치환된 페닐기와 아미노구아니딘 기로 이중으로 치환됨을 인지한다. 또한, 상기 두개의 치환기는 Q의 다른 위치에 있을 수 있음을 인식한다. 상기 두개의 기는 서로 오르토, 메타 또는 파라일 수 있으며, 즉, Q에 서로 인접하거나, 두개의 치환기가 부착된 두개의 고리 원자를 분리하는 1개 이상의 고리 원자를 가질 수 있다. 수득가능한 여러가지 구조의 이성체가 모두 본 발명에 포함된다.
특정 예로, 식I의 화합물은 아래 기 또는 제약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드럭으로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure 112006020866754-PCT00012
Figure 112006020866754-PCT00013
특정 예에서, 식II의 화합물은 아래 화합물 또는 제약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드럭이다:
Figure 112006020866754-PCT00014
특정 예에서, 상기 방법은 신경병증성 통증 치료 방법에 관한 것이다. 본 발명의 방법을 이용하여 사용하기 위한, 특히 바람직한 화합물의 예는, 화합물 1045, 3027, 3099, 1006, 1005, 3093 및 2616으로 표시된다.
Figure 112006020866754-PCT00015
본 발명의 특정 화합물은 광학 이성체를 포함한 입체이성질체로서 존재할 수 있다. 본 발명은 모든 입체이성질체 및 이러한 이성질체들의 라세믹 혼합물 뿐만 아니라 당업자에게 잘 알려진 방법에 따라 분리할 수 있는 각각의 거울상이성질체를 포함한다.
또한, 본 발명은 치료가 필요한 개체를 식별하는 단계 및 본원에서 정의된 식I, II 또는 III의 적어도 하나 이상의 화합물의 유효량을 상기 개체에 접촉시키는 단계를 포함하는 급성 및 만성 통증 치료 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 개시한 NPFF2 화합물이 뉴로펩티드 FF2 리셉터의 특이 작용제임을 발견한 것이다. 따라서, 이러한 작용제는 NPFF2 리셉터에 결합하여 항-통각과민 및 항-이질통증 반응을 유발할 것으로 기대된다. 본원의 NPFF2 리셉터의 작용제는 신경병증 통증 치료에 사용될 수 있다.
그에 따라, 일부 예에서, 식I, II 또는 III의 화합물은 NPFF 리셉터를 활성화한다. 특정 예로, 상기 화합물은 NPFF1 리셉터가 아닌 NPFF2 리셉터를 선택적으로 활성화한다.
특정 예로, 본 발명의 방법에 의해 치료되는 통증은, 당뇨병, 바이러스 감염, 과민성 대장 증후군, 절단, 암, 염증 또는 화학적 손상과 관련되어 있다. 그외 예로, 상기 통증은 신경병증성 통증이다.
특정 예로, 개체에는 통각과민이 존재한다. 일부 예에서는, 통각과민은 열 통각과민이다. 다른 예로, 개체에 이질통증이 존재한다. 이러한 예의 일부들에서, 이질 통증은 촉각 이질통증이다.
또한, 본 발명은 통각과민 또는 이질통증 환자를 식별하는 단계, 상기 환자에게 본원에서 정의된 식I, II 또는 III중 적어도 하나 이상의 화합물을 제공하는 단계, 및 상기 적어도 하나 이상의 화합물이 개체의 통각과민 또는 이질통증을 경감시키는지를 확인하는 단계를 포함하는, 개체에서 통각과민 또는 이질통증을 경감시키는 화합물의 동정 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 본원에서 정의된 식I, II 또는 III의 적어도 하나 이상의 화합물을 NPFF2 리셉터에 접촉시키는 단계, 및 NPFF2 리셉터의 작용제인 식I, II 또는 III의 화합물을 동정하기 위해 NPFF2 리셉터의 활성 수준의 임의 증가를 확인하는 단계를 포함하는, NPFF2 리셉터의 작용제인 식I, II 또는 III의 화합물의 동정 방법에 관한 것이다.
본 발명에서, "작용제"는 리셉터의 기본 활성(즉, 리셉터에 의해 매개된 신호 전이)을 증가시키는 화합물로 정의된다. "길항제"는 리셉터에 대한 작용제의 작용을 차단하는 화합물로 정의된다. "부분 작용제"는 완전한 활성에 비해 제한된 또는 그 이하의 활성을 나타내는 작용제로, 시험관내에서는 리셉터를 활성화시키지 못하며 생체내에서는 길항제로서 작용한다.
용어 "개체"는 동물, 바람직하기로는 포유류이며, 가장 바람직하기로는 인간으로, 치료, 관찰 또는 경험의 대상이다.
용어" 치료학적 유효량"은 지정된 생물학적 또는 의학적 반응을 도출하는 활성 화합물 또는 제약학적 물질의 함량을 나타내는데 사용된다. 이러한 반응은 연구자, 수의자, 의사 또는 그외 임상학자가 연구하는 조직, 계, 동물 또는 인간에서 발생될 수 있으며, 치료되는 질환의 증상 완화를 포함한다.
또한, 본 발명은 NPFF2 리셉터를 발현하는 세포를 배양하는 단계, 상기 세포를 본원에 정의된 식I, 식II 또는 식III 중 적어도 하나의 화합물과 배양하는 단계, 및 NPFF2 리셉터의 작용제인 식I의 화합물을 동정하기 위하여 상기 NPFF2 리셉터의 활성 수준 증가를 확인하는 단계를 포함하는, NPFF2 리셉터의 작용제 화합물을 동정하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 개체에게 NPFF1 리셉터에 대한 약한 부분 작용제(week partial agonist)로 작용하는 식I, II 또는 III의 화합물을 접촉시키는 단계를 포함하는, 개체의 신경병증성 통증 또는 염증성 통증을 치료하는 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 개체에게 NPFF1 리셉터에 대해 길항제 또는 부분 작용제로서 작용하는 식I, II 또는 III의 화합물과, NPFF2 리셉터에 대해 완전한 작용제 또는 부분 작용제로서 작용하는 식I, II 또는 III의 화합물의 조합을 접촉시키는 단계를 포함하는, 개체의 신경병증성 통증 또는 염증성 통증을 치료하는 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 NPFF1 리셉터 길항제 및 NPFF2 리셉터 작용제로서 작용하는 식I, II 또는 III의 화합물을 개체에 접촉시키는 단계를 포함하는, 개체의 신경병증성 통증 또는 염증성 통증을 치료하는 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 NPFF1 리셉터 길항제 및 NPFF2 리셉터의 부분 작용제로서 작용하는 식I, II 또는 III의 화합물을 개체에 접촉시키는 단계를 포함하는, 개체의 신경병증성 통증 또는 염증성 통증을 치료하는 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 NPFF1 리셉터의 부분 작용제 및 NPFF2의 부분 작용제로서 작용하는 식I, II 또는 III의 화합물을 개체에 접촉시키는 단계를 포함하는, 개체의 신경병증성 통증 또는 염증성 통증을 치료하는 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 전술한 식I, II 또는 III의 화합물, 및 생리학적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제 또는 그의 조합을 포함하는 제약학적 조성물에 관한 것이다.
용어 "제약학적 조성물"은 본 발명의 화합물과 다른 화학적 성분, 예컨대 희석제 또는 담체의 혼합물이다. 제약학적 조성물은 상기 화합물의 생물로의 투여를 용이하게 한다. 화합물의 투여하는 여러가지 방법이 당업계에 공지되어 있으며, 경구, 주사, 에어로졸, 비경구 및 국소 투여를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한 제약학적 조성물은 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, p-톨루엔설폰산, 살리실산 등의 무기 또는 유기 산과 화합물을 반응시킴으로써 수득할 수 있다.
용어 "담체"는 화합물의 세포 또는 조직으로의 통합을 용이하게 하는 화합물이다. 그 예로, 디메틸설폭사이드(DMSO)는 수많은 유기 화합물의 생물의 세포 또는 조직으로의 흡수를 촉진시키는 것으로서, 일반적으로 사용되는 담체이다.
용어 "희석제"는 목적한 화합물을 용해시키고 화합물의 생물학적 활성 형태를 안정화시키는, 수내 희석된 화합물이다. 완충화된 용액내 용해된 염은 당업계에서 희석제로 활용된다. 일반적으로 사용되는 완충액은 인간 혈액의 염 상태를 모방한, 포스페이트 완충화된 염수이다. 완충액의 염은 저농도로 용액의 pH를 조절하기 때문에, 완충화된 희석제는 화합물의 생물학적 활성을 거의 변형시키지 않는다.
용어 "생리학적으로 허용가능한"은 화합물이 생물학적 활성 및 특성을 없애지 않는 담체 또는 희석제를 정의한다.
본 발명의 제약학적 조성물은 인간 환자에게 투여되거나, 또는 병용 요법에서처럼 그외 활성 성분이나 적합한 담체 또는 부형제(들)과 혼합된 제약학적 조성물로 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물의 제형화 및 투여 방법은 "Remington's Pharmaceutical Sciences, "Mack Publishing Co. , Easton, PA, 18th edition, 1990"에서 확인할 수 있다.
적합한 투여 경로는, 예컨대 경구, 직장, 경점막, 또는 장 투여; 근육내, 피하, 정맥내, 수질내 주입, 경막내(intrathecal), 직접 뇌실내, 복막내, 비강내, 안내 주입을 포함한 비경구 전달을 포함할 수 있다.
대안적으로는, 전신이 아닌 국소적으로 화합물을 투여할 수 있으며, 예컨대, 통증 부위에 화합물을 직접 주입하거나, 디포트(depot) 형태 또는 서방성 제형으로 화합물을 투여할 수 있다. 또한, 표적화된 약물 전달 시스템 형태, 예컨대 조직-특이적 항체로 코팅된 리포좀 형태로 약물을 투여할 수 있다. 리포좀은 표적화되어 기관에 의해 선택적으로 흡수된다.
본 발명의 제약학적 조성물은 공지된 방법, 예컨대 일반적인 혼합, 용해, 과립화, 당의정-제조, 분말화, 유화, 캡슐에 충진화, 포괄화(entrapping) 또는 정제 공정에 의해 제조될 수 있다.
본 발명에 따른 용도의 제약학적 조성물은, 활성 화합물이 제약학적으로 사용될 수 있는 제조물로의 가공을 용이하게 하는 부형제 및 보조제를 포함하는 하나 이상의 생리학적으로 허용가능한 담체를 이용하여, 일반적인 방법으로 제형화될 수 있다. 적절한 제형은 투여 경로 선택에 따라 결정된다. 당업계, 예컨대 전술한 Remington's Pharmaceutical Sciences에 따라 적합하며 이해가능한 임의의 공지된 방법, 담체 및 부형제를 사용할 수 있다.
주입시, 본 발명의 물질은 수용액, 바람직하기로는 Hanks's 용액, Ringer's 용액 또는 생리 식염 완충액과 같이 생리학적으로 혼화가능한 완충액내에 제형화될 수 있다. 경점막 투여시, 장벽 투과에 적합한 침투제가 제형에 사용된다. 이러한 침투제는 일반적으로 당업계에 공지되어 있다.
경구 투여를 위해, 상기 화합물은 활성 화합물과 당업계에서 잘 알려진 제약학적으로 허용가능한 담체와 조합함으로써 쉽게 제형화할 수 있다. 이러한 담체는 본 발명의 화합물을 정제, 환제, 당의제, 캡슐제, 액제, 젤제, 시럽제, 슬러리제, 현탁제 등의 치료되는 환자에 경구 섭취를 위해 제형화시킬 수 있다. 경구용 제약학적 제조물은, 하나 이상의 고형 부형제과 본 발명의 제약학적 조합과의 혼합에 의해 수득되며, 선택적으로는, 제조된 혼합물의 분말화, 및 필요에 따라 정제 또는 당의제 코어를 얻기 위해 적절한 보조제를 첨가한 후 과립 혼합 가공에 의해 수득할 수 있다. 적절한 부형제는, 특히 당과 같은 필러이며, 락토스, 슈크로스 만니톨 또는 소르비톨; 예컨대 옥수수 전분, 밀 전분, 벼 전분, 감자 전분, 젤라틴, 검 트라가칸트, 메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필메틸-셀룰로스, 소듐 카르복시메틸셀룰로스 및/또는 폴리비닐피롤리돈(PVP)를 포함한다. 필요에 따라, 가교된 폴리비닐 피롤리돈, 한천 또는 알긴산 또는 소듐 알기네이트와 같은 그의 염과 같은 붕괴제가 첨가될 수 있다.
당의정 코어에는, 적합한 코팅제가 제공된다. 이를 위해, 농축 당 용액을 사용할 수 있으며, 선택적으로 아라비아검, 탈크, 폴리비닐 피롤리돈, 카르보폴 젤, 폴리에틸렌 글리콜 및/또는 티타늄 디옥사이드, 락커액 및 적합한 유기 용매 또는 용매 혼합물을 함유할 수 있다. 활성 화합물 투여량의 상이한 조합의 식별 또는 특징화를 위해, 염료 또는 색소를 정제 또는 당의정 코팅제에 첨가할 수 있다.
경구 사용될 수 있는 제약학적 조제물은, 밀어넣기 방식(push-fit)의 젤라틴 캡슐, 젤라틴으로 제조된 연질, 밀봉 젤라틴 캡슐 및 글리세롤 또는 소르비톨과 같은 가소제를 함유한다. 상기 밀어넣기 방식의 캡슐은, 활성 성분을 락토스, 전분류의 결합제, 및/또는 탈크 또는 마그네슘 스테아레이트와 같은 윤활제, 선택적으로 안정화제와 같은 필러와 혼합된 형태로 포함할 수 있다. 연질 캡슐의 경우, 활성 화합물은 적합한 액체, 예컨대 지방성 오일, 액체 파라핀, 또는 액체 폴리에틸렌 글리콜에 용해 또는 현탁될 수 있다. 또한, 안정화제가 첨가될 수 있다. 경구 투여용 모든 제형은 이러한 투여에 적합한 조제 형태여야 한다.
볼 투여용 조성물은 기존 방식으로 제형화된 정제 또는 로젠제의 형태를 취할 수 있다.
흡입 투여를 위해, 본 발명에 따른 용도의 화합물은, 적합한 추진제, 예컨대, 디클로로디플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 카르본 디옥사이드 또는 그외 적정 가스를 사용하여, 가압 팩 또는 분무기 유래의 에어로졸 스프레이 프리젠테이션 형태로 편리하게 전달된다. 가압 에어로졸 경우, 투약 단위는 칭량된 양을 전달하기 위한 밸브를 장착함으로써 결정될 수 있다. 흡입기 또는 취입기로 사용하기 위해, 상기 화합물 및 락토스 또는 전분과 같은 적합한 분말 베이스의 분말 혼합물을 함유하는 캡슐제 및 예컨대 젤라틴의 카트리지가 제조될 수 있다.
상기 화합물은 주입, 예컨대 거환(bolus) 주입 또는 연속 주입에 의해 비경구 투여용으로 제형화될 수 있다. 주입용 제형은, 예컨대 앰플 또는 다중 투여 용기내에 단위 투약 형태로 첨가된 보존제와 함께 존재할 수 있다. 조성물은 현탁제, 용제 또는 오일 또는 수계 비히클내 에멀젼과 같은 형태를 취할 수 있으며, 현탁성 물질, 안정화 물질, 및/또는 분산성 물질과 같은 제형성 물질을 포함할 수 있다.
비경구 투여용 제약학적 제형은, 수용성 형태의 활성 화합물 수용액을 함유한다. 또한, 활성 화합물의 현탁제는 적당한 오일성 주입 현탁제로서 준비될 수 있다. 적합한 친지성 용매 또는 비히클로는, 참께 오일 또는 에틸 올레이트, 트리글리세라이드와 같은 합성 지방산 에스테르와 같은 지방성 오일, 또는 리포좀을 포함한다. 수계 현탁성 주입액은 현탁액의 점성을 증가시키는, 소듐 카르복시메틸 셀룰로스, 소르비톨 또는 텍스트란과 같은 물질들을 포함할 수 있다. 또한, 선택적으로, 상기 현탁액은 고농축 용액 제조가 가능하도록 화합물의 용해성을 증가시키는 적합한 안정화제 또는 물질을 함유할 수도 있다.
대안적으로, 상기 활성 성분은 적합한 비히클, 예컨대 멸균된 피로겐 무함유성 물을 이용하여 구성하기 위해, 사용전에 분말 형태로 있을 수 있다.
또한, 화합물은 예컨대, 코코아 버터 또는 그외 글리세라이드류와 같은 일반적으로 좌제 베이스를 함유하는 좌제 또는 체류 관장액과 같은 직장 조성물로 제조될 수 있다.
상기에 기재한 제형 이외에도, 화합물은 디포트 조제물로서 제형화될 수 있다. 이렇게 장기간 작용하는 제형은, 이식(예, 피하 또는 근육내) 또는 근육내 주사로 투여될 수 있다. 따라서, 예컨대 화합물은 적합한 폴리머성 또는 소수성 물질(예, 허용가능한 오일내 에멀젼으로서) 또는 이온 교환 수지, 또는 난용성 유도체, 예컨대 난용성 염와 함께 제형화될 수 있다.
본 발명의 소수성 화합물을 위학 제약학적 담체는 벤질 알콜, 무극성 계면활성제, 수 혼화성 유기 폴리머 및 수상을 포함하는 공용매 시스템이다. 일반적적으로 사용되는 공용매 시스템은 VPD-공용매 시스템으로, 3% w/v 벤질 알콜, 8% w/v 무극성 계면활성제 폴리솔베이트 80TM, 65% w/v 폴리에틸렌 글리콜 300 및 잔량의 무수 에탄올로 이루어진 용액이다. 본래, 공용매 시스템의 특성은 그것의 용해성과 독성 특징들을 파괴하지 않으면서 상당히 변경될 수 있다는 것이다. 더욱이, 공용매 성분의 본질은 변경될 수 있으며, 예컨대, 다른 저독성 무극성의 계면활성제가 폴리소르베이트 80TM 대신 사용될 수 있으며, 폴리에틸렌 글리콜의 단편 크기는 다양할 수 있고, 다른 생체친화적 폴리머가 폴리에틸렌 글리콜를 치환할 수 있고, 예컨대 폴리비닐 피롤리돈, 다른 당 또는 다당류로 덱스트로스를 대체할 수 있다.
대안적으로, 다른 소수성 제약학적 화합물을 위한 전달 시스템을 채택할 수 있다. 리포좀과 에멀젼은 소수성 약물용 전달 비히클 또는 담체의 예로 잘 알려져 있다. 일반적으로 보다 높은 독성의 댓가를 치루더라도 디메틸설폭사이드와 같은 특정 유기 용매를 사용할 수 있다. 부가적으로, 화합물은 서방성 제형, 예컨대 치료제를 함유하는 소수성 고형 폴리머의 반투과성 기질을 이용하여 전달될 수 있다. 여러가지 서방성 물질들이 확립되어 있으며, 당업자에게 공지되어 있다. 서방성 캡슐은 그것의 화학적 성질에 따라 수 주 내지 100일 이상 화합물을 방출할 수 있다. 치료제의 화학적 성질 및 생물학적 안정성에 따라, 단백질 안정화를 위한 추가적인 전략이 채택될 수 있다.
본 발명의 제약학적 조성물에 사용된 많은 화합물들은, 제약학적으로 혼하가능한 반대 이온을 이용한 염으로서 제공될 수 있다. 제약학적으로 혼화가능한 염은 염산, 황산, 아세트산, 락트산, 주선삭, 말산, 숙신산 등의 다수의 산을 이용하여 형성될 수 있다. 염은 유리 산 또는 염기 형태에 해당되는 것에 비해 수계 또는 다른 프로토닌 용매에 더 잘 용해되는 경향이 있다.
본 발명의 용도에 적합한 제약학적 조성물은, 활성 성분을 의도한 목적을 달성하기 위한 유효량으로 포함하는 조성을 포함한다. 특히, 치료학적 유효량은 치료중인 개체의 질병의 증상 예방, 완화 또는 개선에, 또는 생존율 연장에 유효한 화합물의 양을 의미한다. 치료학적 유효량은 당업자의 능력내에서, 특히, 본 발명의 상세한 설명의 관점에서 결정된다.
본 발명의 제약학적 조성물에 있어서, 실제 제형, 투여 경로 및 투여량은, 환자 상태에 비추어 각 내과의사가 선택할 수 있다(예, Fingl et al. 1975, in "The Pharmacological Basis of Therapeutics", Ch.1 p.1). 전형적으로, 환자에게 투여되는 조성물의 투약 범위는, 환자 체중의 0.5 내지 1000 mg/kg, 또는 1 내지 500 mg/kg, 또는 10 내지 500 mg/kg, 또는 50 내지 100 mg/kg일 수 있다. 투약은 환자에 따라 1일 이상의 기간동안 단회 또는 2회 이상의 연속으로 제공될 수 있다. 본 발명에서 언급된 거의 모든 특정 화합물은, 적어도 일부 증상 치료를 위한 인간에 대한 설정 투여량을 참조한다. 따라서, 대부분의 경우들에서, 본 발명은 동일한 투여량을 사용하거나, 또는 설정된 인간 투여량의 약 0.1% 내지 500%, 또는 약 25% 내지 250%, 또는 50% 내지 100%의 투여량을 사용할 수 있다. 인간에 대한 투여량이 확립되어 있지 않은 경우, 신규 발견된 제약학적 화합물의 경우에 해당되는 것처럼, 인간에 대한 적합한 투여량은 ED50 또는 ID50 값에서 추론하거나, 또는 동물에서의 독성 실험 및 효능 실험으로 정량한 바에 따라 시험관내 또는 생체내 실험에서 유래된 적정 값으로부터 추론할 수 있다.
실제 투여량은 대부분의 경우들에서 약물 바이 약물 베이스(drug-by-drug basis) 상에서 결정될 수 있지만, 투여량에 관한 일부 일반화를 만들 수 있다. 인간 성인 환자에 대한 1일 투여량은, 예컨대 경구 투여시 각 성분 0.1 mg 내지 500 mg, 바람직하기로는 1 mg 내지 250 mg, 예컨대 5 내지 200 mg이거나, 정맥내, 피하 또는 근육내 투여의 경우 각 성분은 0.01 mg 내지 100 mg, 바람직하기로는 0.1 mg 내지 60 mg, 예컨대, 자유 염기로 계산된 본 발명의 제약학적 조성물의 각 성분 또는 제약학적으로 허용가능한 그의 염의 1 내지 40 mg이며, 조성물은 1일 1 내지 4회 투여된다. 대안적으로, 본 발명의 조성물은 연속 정맥내 주입, 바람직하기로는 각 성분의 1일 400 mg까지의 투여량으로 투여될 수 있다. 따라서, 각 성분의 경구 투여에 의한 1일 총 투여량은 전형적으로 1 내지 2000 mg일 것이며, 비경구 투여에 의한 1일 총 투여량은 전형적으로 0.1 내지 400 mg일 것이다. 적합하게는, 상기 화합물은 계속적인 치료 기간동안, 예컨대 1주일 이상 또는 몇 달 또는 몇년간 투여될 것이다.
투여 용량 및 간격은 조절 효과 또는 최소 유효 농도(MEC) 유지에 충분한 활성 모이어티의 혈중 농도를 제공하도록 개별적으로 조절될 수 있다. MEC는 각 화합물에 따라 다양할 것이나, 실험관내 실험 결과로부터 추정할 수 있다. MEC 달성에 필수적인 투여량은 개별 특성 및 투여 경로에 따라 결정될 것이다. 그러나, HPLC 분석 또는 바이오분석을 사용하여 혈중 농도를 결정할 수 있다.
또한, 투여 간격은 MEC 값을 이용하여 결정할 수 있다. 조성물은 시기의 10-90% 동안, 바람직하기로는 30-90% 및 가장 바람직하기로는 50-90% 동안 MEC 이상의 혈중 농도를 유지하는 요법으로 투여되어야 한다.
국소 투여 또는 선택 섭취의 경우, 약물의 국소 유효 농도는 혈중 농도와 관련없을 수 있다.
투여된 조성물의 함량은, 물론 치료를 받는 개체에 따라, 개체의 체중, 통증의 중증도, 투여 방식 및 처방의사의 판단에 따라 결정될 것이다.
조성물은, 적절한 경우, 활성 성분을 함유하고 있는 하나 이상의 단위 투여 형태를 포함할 수 있는 팩 또는 디스펜서내에 존재할 수 있다. 상기 팩은, 예컨대, 금속 또는 플라스틱 호일, 예컨대 블리스터 팩을 포함할 수 있다. 상기 팩 또는 디스펜서에는 투여 설명서가 수반될 수 있다. 상기 팩 또는 디스펜서에는 또한 제조사, 용도 또는 약제 가격을 규제하는 정부기관에 의해 규정된 형태로 용기 관련 주의사항이 수반될 수 있으며, 상기 주의사항은 인간 또는 가축 투여용 약물형에 대한 기관에 의한 승인이 반영되어 있다. 이러한 주의사항은, 예컨대, 처방 약물에 대한 미국 식의약청에 의해 승인받은 표지, 또는 승인된 삽입 제품일 수 있다. 또한, 혼화가능한 제약학적 담체내에 제형화한, 본 발명의 화합물을 포함하는 조성물을 제조하여, 적당한 용기내에 위치시키고, 치료제의 처방 증상을 표시할 수 있다.
도 1은 발 움추림 발생 지연시간(paw withdrawal latency period)을 비교한 막대 그래프이다.
도 2는 촉각 역치 수준을 비교한 막대 그래프이다.
도 3은 꼬리 움추림 발생 지연시간(초)를 비교한 막대 그래프이다.
도 4는 포르말린 유발성 움찔함에 대한 선택적 FF2 리셉터의 효과를 비교한 막대그래프이다. *는 각 단계에서 포르말린 주입한 비히클로 처리된 대조군과 비교시 p<0.05이다.
도 5는 카라기난(carrageenan) 유발성 열 통각과민의 투여량 의존적 역위를 비교한 막대 그래프이다.
도 6은 L5/L6 SNL 유발성 촉각 이질통증의 투여량 의존적 역위를 비교한 막대 그래프이다. *는 각 단계에서 비히클로 처리된 대조군과 비교시 p<0.05이다.
도 7은 화합물 3099를 이용한 L5/L6 SNL 유발성 촉각 이질통증의 투여량 의존적 역위를 비교한 막대 그래프이다. *는 각 단계에서 비히클로 처리된 대조군과 비교시 p<0.05이다.
도 8은 dPQR아미드를 이용한 L5/L6 SNL 유발성 촉각 이질통증의 투여량 의존 적 역위를 비교한 막대 그래프이다. *는 각 단계에서 비히클로 처리된 대조군과 비교시 p<0.05이다.
당업자는 본 발명의 사상에서 벗어나지 않는 범위내에서 여러가지 다양한 변경을 실시할 수 있음을 이해할 것이다. 따라서, 본 발명의 형태는 단지 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명의 범위를 제한하거나 하는 의도는 아닌 것으로 명확히 숙지하여야 한다.
실험 세부사항
화합물의 합성
아래 제법1은 이미노 구아니딘류의 합성을 위한 대표적인 합성 제법이다:
Figure 112006020866754-PCT00016
제법 1
아래 제법2의 다른 조건을 사용할 수 있다:
Figure 112006020866754-PCT00017
제법2
일부 예들에서, 하기 제법3에 나타난 바와 같이 이미노 구안디딘 기를 형성하기 전에 첫 알킬화 단계가 필요하다:
Figure 112006020866754-PCT00018
제법3
일반적인 방법들
96% 에탄올을 사용하였고 용매는 구입하여 사용하였다. 1H NMR 스펙트라는 Varian XL 스펙트로미터상에서 400 MHz에서 기록하였다. 화합물 이동은 ppm으로 기록하고, 중수소화된 용매의 잔사(즉, CHCI3, CH3OH) 양자를 참조하였다. 분할(splitting) 양상은 s=단일, d=이중, t=삼중, q=사중, br.=넓게 분포, m=다중으로 표시하였다. 박층 크로마토그래피(TLC)를 실리카 겔 60F254로 미리 코팅한 알루미늄 시트상에서 수행하였다. 플래쉬 컬럼 크로마토그래피는 하기 기술된 방법으로 Isco CombiFlash SQI6x상에서 실시하였다. 초음파 반응을 Personal Chemistry사의 Smith Creator을 이용하여 수행하였다.
분석용 HPLC, 암모늄 아세테이트 완충액(ZMD)
시스템: 600E 농도 구배 펌프, 2700 샘플 조작기, 996 광다이오도 어레이 검출기 및 전기분무 이온화 인터페이스(Electrospray Ionization Interface)로 이루 어진 Waters LC/ZMD 장비
컬럼: 역상 컬럼(Xterra® MS C18 5 ㎛, 50 x 4.6 mm ID).
이동상: 아세토니트릴/10 mM 암모늄 아세테이트 수용액.
프로그램: 17분. 농도구배 프로그램 10% 아세토니트릴에서 개시, 10분간 100% 아세토니트릴로, 1분간 유지, 0.5분간 10% 아세토니트릴로, 5.5분 유지. 유속은 1 mL/min였다.
분석용 HPLC, 암모늄 아세테이트 완충액(ZQ)
시스템: 2795 분리 모듈, 996 광다이오도 어레이 검출기 및 전기분무 이온화 인터페이스로 이루어진 Waters Alliance HT/ZQ2000 장치
컬럼: 가이드 컬럼 카트리지 시스템이 장착된 역상 컬럼(Xterra® MS C18 3.5 ㎛, 30 x 4.6 mm ID).
이동상: 아세토니트릴/10 mM 암모늄 아세테이트 수용액.
프로그램: 11분. 농도구배 프로그램 10% 아세토니트릴에서 개시, 7분간 90% 아세토니트릴로, 0.5분간 10% 아세토니트릴로, 3분 유지. 유속은 1 mL/min였다.
분석용 HPLC, 암모늄 아세테이트 완충액(ZMD)
시스템: 600E 농도구배 펌프, 2700 샘플 조작기, 996 광다이오도 어레이 검출기 및 전기분무 이온화 인터페이스로 이루어진 Waters LC/ZMD 장치
컬럼: 역상 컬럼(Xterra® MS C18 5 ㎛, 50 x 4.6 mm ID).
이동상: 아세토니트릴/5 mM 암모늄 바이카르보네이트 수용액(pH 9.5로 조정).
프로그램: 17분. 농도구배 프로그램 10% 아세토니트릴에서 개시, 10분간 90% 아세토니트릴로, 1분 유지, 0.5분간 10% 아세토니트릴로, 5.5분 유지. 유속은 1 mL/min였다.
분취 LC/MS법
시스템: 600E 농도구배 펌프, 2700 샘플 조작기, 996 광다이오도 어레이 검출기 및 전기분무 이온화 인터페이스로 이루어진 Waters LC/ZMD 장치
컬럼: 역상 컬럼(Xterra® MS C18 5 ㎛, 19 x 100 mm).
이동상: 아세토니트릴/10 mM 암모늄 아세테이트 수용액.
프로그램: 12분. 농도구배 프로그램 30% 아세토니트릴에서 개시, 8.5분간 100% 아세토니트릴로, 0.5분간 30% 아세토니트릴로, 0.5분 유지. 유속은 17 mL/min였다.
분취 HPLC 법
시스템: Waters Prep4000 장치. 4000 Prep 펌프, Prep LC 조절기, 2487 듀얼 흡광 검출기로 설정.
컬럼: 세미-분취 컬럼(Phenomenex® Luna C18 5 ㎛, 21.1 x 250 mm).
이동상: 아세토니트릴/25 mM 암모늄 아세테이트 수용액.
프로그램: 45분. 농도구배 프로그램 10% 아세토니트릴에서 개시, 5분간 유지, 30분간 80% 아세토니트릴로, 10분 유지. 유속은 20 mL/min였다.
콤비플래쉬 방법1(CombiFlash Method I)(CFI)
샘플을 셀라이트상에 건조 상태로 주입하고, 콤비플래쉬상에서 4 g 실리카 컬럼을 이용하여 EtOAc(3분), EtOAc중의 0-20% MeOH(25분), 및 EtOAc중의 20% MeOH(15분)으로 15 mL/min의 유속으로 정제하였다.
콤비플래쉬 방법2(CF2)
샘플을 셀라이트상에 건조 상태로 주입하고, 콤비플래쉬상에서 4g 실리카 컬럼을 이용하여 헵탄(1분), 헵탄내 0-10%의 EtOAc(30분), 헵탄내 10-15% EtOAc(10분), 및 헵탄내 15% EtOAc(5분)로, 16 mL/min의 유속으로 정제하였다.
콤비플래쉬 방법3(CF3)
샘플을 셀라이트상에 건조 상태로 주입하고, 콤비플래쉬상에서 4g 실리카 컬럼을 이용하여 헵탄(3분), 헵탄내 0-25%의 EtOAc(25분) 및 헵탄내 25% EtOAc(8분)로, 15 mL/min의 유속으로 정제하였다.
콤비플래쉬 방법4(CF4)
샘플을 셀라이트상에 건조 상태로 주입하고, 콤비플래쉬상에서 4 g 실리카 컬럼을 이용하여 헵탄(3분), 헵탄내 0-5%의 EtOAc(25분) 및 헵탄내 15% EtOAc(10분)으로, 15 mL/min의 유속으로 정제하였다.
콤비플래쉬 방법5(CF5)
샘플을 셀라이트상에 건조 상태로 주입하고, 콤비플래쉬상에서 4 g 실리카 컬럼을 이용하여 헵탄(3분), 헵탄내 0-10%의 EtOAc(25분) 및 헵탄내 10% EtOAc(8분)으로, 15 mL/min의 유속으로 정제하였다.
콤비플래쉬 방법6(CF6)
샘플을 셀라이트상에 건조 상태로 주입하고, 콤비플래쉬상에서 10 g 실리카 컬럼을 이용하여 DCM(15분), DCM내 0-10%의 MeOH(40분) 및 DCM내 10% MeOH(10분)으로, 15 mL/min의 유속으로 정제하였다.
일반 공정1(GP1)
EtOH(3 ml) 중의 알데하이드 또는 케톤(5.0 mmol) 및 아미노구아니딘 나이트레이트(50 mmol, 696 mg)을 초음파하에서 120℃(알데하이드) 또는 160℃(케톤)로 10분간 열처리한 다음 실온으로 냉각시켰다. MeOH(20 mL)과 이후 디옥산(4.0 M, 6.0 mL) 중의 HCI을 첨가한 다음, 반응물은 농축하여 건조시켰다. MeOH를 가하고 혼합물은 여과하였다. Et2O를 첨가하여 산물의 결정화를 유발하였다. 산물은 여과 및 고진공하에서 건조하였다.
일반 공정2(GP2)
EtOH(2 ml) 중의 알데하이드 또는 케톤, 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(0.95 또는 1.0 당량)을 70℃에서 18시간 교반한 다음 실온으로 냉각시켰다. 반응물은 여과하고, 침전물은 EtOAc(2회), DMC(2회), Et2O(2회)로 세척한 다음 고진공하에서 건조하였다.
일반 공정3(GP3)
EtOH(2 ml) 중의 알데하이드 또는 케톤, 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(0.95 또는 1.0 당량)을 70℃에서 18시간 교반한 다음 실온으로 냉각시켰다. Et2O(2-20 ml)을 첨가하여 결정화를 유발하였다. 반응물은 여과하고, 침전물은 EtOAc(2회), DMC(2회), Et2O(2회)로 세척한 다음 고진공하에서 건조하였다.
일반 공정4(GP4)
EtOH(2 ml) 중의 알데하이드 또는 케톤, 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(0.95 또는 1.0 당량)을 70℃에서 18시간 교반한 다음 실온으로 냉각시켰다. Et2O을 첨가하였으나, 결정화는 발생되지 않았다. 물(20 ml)을 첨가하고, 수상은 EtOAc(2 x 20 ml)로 세척하였다. NaOH(2M, 5 ml)을 상기 수상에 첨가하고, EtOAc(2 x 20 ml)로 산물을 추출하였다. 유기층은 MgSO2에서 건조하고, 여과 및 농축하였다.
일반 공정5(GP5)
아세톤(1 ml) 중의 3-클로로-4-하이드록시벤즈알데하이드(1.2 mmol, 188 mg)을 알킬 할라이드(1.0 rnmol), 아세톤(1 ml)중의 포타슘 카르보네이트(분말, 1.2 mmol, 166 mg)에 첨가하였다. 반응물은 40℃에서 72시간 가온한 다음 55℃에서 24시간 열처리하였다. 상기 반응물을 냉각시킨 다음 45 ㎛로 여과한 다음 아세톤으로 세척하였다.
일반 공정6(GP6)
EtOH(2 ml) 중의 알데하이드 또는 케톤, 및 아미노구아니딘 하이드로클로라 이드(0.95 또는 1.0 당량)을 70℃에서 18시간 교반한 다음 실온으로 냉각시켰다. Et2O(2-20 ml)을 첨가하여 결정화를 유발하였으나, 그 결과 오일화(oiling)되었다. 그러나, 소량의 DCM을 첨가하여 결정화하였다. 침전물은 EtOAc(2회), DMC(2회), Et2O(2회)로 세척한 다음 고진공하에서 건조하였다.
일반 공정7(GP7)
EtOH(1 ml/mmol) 중의 알데하이드 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(1 당량)을 초음파에서 130℃로 12분 열처리한 다음 실온으로 냉각시켰다. 반응물은 여과하고, 침전물은 EtOAc(2회), DMC(2회), Et2O(2회)로 세척한 다음 고진공하에서 건조하였다.
일반 공정8(GP8)
EtOH(1 ml/mmol) 중의 알데하이드 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(1 당량)을 초음파에서 130℃로 12분 열처리한 다음 실온으로 냉각시켰다. Et2O(2-4 ml)을 첨가하여 결정화를 유발하였다. 반응물은 여과하고, 침전물은 EtOAc(2회), DMC(2회), Et2O(2회)로 세척한 다음 고진공하에서 건조하였다.
실시예들
실시예 1: 1-(4-플루오로벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2001)
4-플루오로벤즈알데하이드(5.0 mmol, 621 mg)을 GP1에 따라 사용하여, 백색 분말의 표제 화합물(2001)을 수득하였다(534 mg, 49%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.13(s, 1H), 7.85(m, 2H), 7.17(m, 2H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=181.1.
실시예 2: 1-[3-(트리플루오로메틸)벤질리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(2002)
3-(트리플루오로메틸)벤즈알데하이드(5.0 mmol, 871 mg)을 GP1에 따라 사용하여, 백색 분말의 표제 화합물(2002)을 수득하였다(643 mg, 48%). 1H NMR(CD3OD) S 8.22(s, 1H), 8.17(m, 1H), 8.05(m, 1H), 7.74(m, 1H), 7.65(m, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=231.1.
실시예 3: 1-[1-(3-브로모페닐)에틸리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(2003)
3'-브로모아세토페논(5.0 mmol, 995 mg)을 GP1에 따라 사용하여 백색 분말의 표제 화합물(2003)을 수득하였다(977 mg, 67%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.12(ap. t, J=1.7 Hz, 1H), 7.84(ddd, J=8.0, 1.7, 1.0 Hz, 1H), 7.59(ddd, J=7.8, 2.0, 1.0 Hz, 1H), 7.35(ap. t, J=8.0 Hz, 1H), 2.36(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=255.1, 257.1
실시예 4: 1-(5-플루오로-2-니트로벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2004)
5-플루오로-2-니트로벤즈알데하이드(5.0 mmol, 846 mg)을 GP1에 따라 사용하 여 베이지 분말의 표제 화합물(2004)을 수득하였다(989 mg, 76%).1H NMR(CD3OD) δ 8.67(d, J=1.6 Hz, 1H), 8.21(dd, J=9.4, 4.9 Hz, 1H), 8.11(dd, J=9.4, 2.9 Hz, 1H), 7.41(m, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=226.1.
실시예 5: 1-[(벤조[1,3]디옥솔-5-일)메틸리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(2005)
벤조[1,3]디옥솔-5-카르브알데하이드(5.0 mmol, 751 mg)을 GP1에 따라 사용하여 백색 분말의 표제 화합물(2005)을 수득하였다(737 mg, 61%). 1H NMR(CD3OD) δ 7.99(s, 1H), 7.47(d, J=1.6 Hz, 1H), 7.15(dd, J=8.0, 1.6 Hz, 1H), 6.87(d, J=8.0 Hz, 1H), 6.01(s, 2H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=207.1.
실시예 6: 1-[(안트라센-9-일)메틸리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(2006)
9-안트르알데하이드(5.0 mmol, 1.03 g)을 GP1에 따라 사용하여 노란 분말의 표제 화합물(2006)을 수득하였다(133mg, 9%). 1H NMR(CD3OD) δ 9.26(s, 1H), 8.65(s, 1H), 8.48(m, 2H), 8.11(m, 2H), 7.61(m, 2H), 7.55(m, 2H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=263.2.
실시예 7: 1-(3,5-디메톡시벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2007)
3,5-디메톡시벤즈알데하이드(2.0 mmol, 332 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP3에 따라 사용하여 백색 분말의 표제 화합물(2007)을 수득하였다(516 mg, 99%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.03(s, 1H), 6.97(d, J=2.3 Hz, 2H), 6.57(t, J=2.3 Hz, 1H), 3.82(s, 6H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=223.3.
실시예 8: 1-(2,4-디클로로벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2008)
2,4-디클로로벤즈알데하이드(2.0 mmol, 350 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP2에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2008)을 수득하였다(461 mg, 86%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.52(s, 1H), 8.18(d, J=8.6 Hz, 1H), 7.55(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.41(m, 1H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=231.2.
실시예 9: 1-(3-플루오로-4-메톡시벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2009)
3-플루오로-4-메톡시벤즈알데하이드(2.0 mmol, 308 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP2에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2009)을 수득하였다(449 mg, 91%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.04(d, J=1.4 Hz, 1H), 7.71(m, 1H), 7.45(m, 1H), 7.14(t, J=8.4 Hz, 1H), 3.92(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=211.2.
실시예 10: 1-(3-브로모-4-플루오로벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2010)
3-브로모-4-플루오로벤즈알데하이드(2.0 mmol, 406 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP2에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2010)을 수득하였다(445 mg, 75%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.20(dd, J=6.8, 2.2 Hz, 1H), 8.08(s, 1H), 7.79(ddd, J=8.6, 4.7, 2.2 Hz, 1H), 7.29(t, J=8.6 Hz, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=259.2, 261.2.
실시예 11: 1-(3,4,5-트리메톡시벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2011)
3,4, 5-트리메톡시벤즈알데하이드(2.0 mmol, 392 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP3에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2011)을 수득하였다(565mg, 97%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.05(s, 1H), 7.14(s, 2H), 3.89(s, 6H), 3.80(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=253.3.
실시예 12: 1-(4-플루오로-3-메틸벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2012)
4-플루오로-3-메틸벤즈알데하이드(2.0 mmol, 276 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP3에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2012)을 수득하였다(433 mg, 93%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.05(s, 1H), 7.75(m, 1H), 7.63(m, 1H), 7.10(t, J=9.2 Hz, 1H), 2.31(d, J= 2.0 Hz, 3H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=295.2
실시예 13: 1-(3-클로로-4-플루오로벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2013)
3-클로로-4-플루오로벤즈알데하이드(2.0 mmol, 317 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP2에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2013)을 수득하였다(391 mg, 77%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.08(s, 1H), 8.06(dd, J=7.2, 2.2 Hz, 1H), 7.74(ddd, J=8.6, 4.7, 2.2 Hz, 1H), 7.32(ap. t, J=8.8 Hz, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=215.2, 217.2.
실시예 14: 1-(3-브로모-4-메톡시벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2014)
3-브로모-4-메톡시벤즈알데하이드(2.0 mmol, 430 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP2에 따라 실시하여 연노란 분말의 표제 화합물(2014)을 수득하였다(568 mg, 92%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.12(d, J=2.2 Hz, 1H), 8.01(s, 1H), 8.11(dd, J=8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.69(d, J=8.6 Hz, 1H), 3.93(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=271.2, 273.2.
실시예 15: 1-(2,5-디플루오로벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2015)
2,5-디플루오로벤즈알데하이드(2.0 mmol, 284 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP2에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2015)을 수득하였다(377 mg, 80%). 1H NMR(CD3OD) 5 8.31(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.92(m, 1H), 7.23(m, 2H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=199.2.
실시예 16: 1-(2,4-디플루오로벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2016)
2,4-디플루오로벤즈알데하이드(2.0 mmol, 284 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP3에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2016)을 수득하였다(418 mg, 89%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.30(s, 1H), 8.16(m, 1H), 7.07(m, 2H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=199.2.
실시예 17: 1-(2,3-디클로로벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2017)
2,3-디클로로벤즈알데하이드(2.0 mmol, 350 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로 클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP2에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2017)을 수득하였다(441 mg, 82%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.60(s, 1H), 8.13(dd, J=8.0, 1.6 Hz, 1H), 7.63(dd, J=8.0, 1.6 Hz, 1H), 7.37(m, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=231.2, 233.2, 235.2.
실시예 18: 1-(4-브로모-2-플루오로벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2018)
4-브로모-2-플루오로벤즈알데하이드(2.0 mmol, 406 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP2에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2018)을 수득하였다(441 mg, 74%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.30(s, 1H), 8.04(m, 1H), 7.46(m, 2H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=259.2, 261.2.
실시예 19: 1-(4-페닐벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2019)
4-바이페닐카르복스알데하이드(2.0 mmol, 364 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP2에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2019)을 수득하였다(440 mg, 80%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.15(s, 1H), 7.88(m, 2H), 7.71(m, 2H), 7.66(m, 2H), 7.46(m, 2H), 7.38(m, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=239.3.
실시예 20: 1-(4-페녹시벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2020)
4-페녹시벤즈알데하이드(2.0 mmol, 396 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP4에 따라 실시하여 연분홍 분말의 표제 화합물(2020)을 수득하였다(384 mg, 75%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.01(s, 1H), 7.67(m, 2H), 7.36(m, 2H), 7.13(m, 1H), 7.01(m, 2H), 6.96(m, 2H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=255.3.
실시예 21: 1-(3-페녹시벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2021)
3-페녹시벤즈알데하이드(2.0 mmol, 396 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP4에 따라 실시하여 연분홍색 분말의 표제 화합물(2021)을 수득하였다(301 mg, 59%). 1H NMR(CD3OD) δ 7.99(s, 1H); 7.30-7.43(m, 4H), 7.10(m, 1H), 7.00(m, 2H), 6.90(m, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=255.3.
실시예 22: 1-(3,5-디-tert-부틸-2-하이드록시벤질리덴아미노)구아니딘(2022)
3,5-디-tert-부틸-2-하이드록시벤즈알데하이드(2.0 mmol, 469 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP4에 따라 실시하여 연노란/갈색 분말의 표제 화합물(2022)을 수득하였다(501 mg, 86%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.19(s, 1H), 7.28(d, J=2.5 Hz, 1H), 7.07(d, J=2.5 Hz, 1H), 1.44(s, 9H), 1.30(s, 9H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=.
실시예 23: 1-(2,3,5-트리클로로벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2023)
2,3,5-트리클로로벤즈알데하이드(2.0 mmol, 419 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP2에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2023)을 수득하였다(410 mg, 68%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.54(s, 1H), 8.26(d, J=2.4 Hz, 1H), 7.72(d, J=2.4 Hz, 1H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=265.1, 267.1, 279.1.
실시예 24: 1-(3,5-디브로모-4-하이드록시벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2024)
3,5-디브로모-4-하이드록시벤즈알데하이드(2.0 mmol, 560 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP2에 따라 실시하여 노란색 분말의 표제 화합물(2024)을 수득하였다(701 mg, 94%). 1H NMR(CD3OD) δ 7.98(s, 2H), 7.96(s, 1H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=335.1, 337.1, 339.1.
실시예 25: 1-(4-이소프로폭시벤질리덴아미노)구아니딘(2025)
4-이소프로폭시벤즈알데하이드(2.0 mmol, 328 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP4에 따라 실시하여 크림 분말의 표제 화합물 (2025)을 수득하였다(295 mg, 67%). 1H NMR(CD3OD) δ 7.98(s, 1H), 7.59(m, 2H), 6.88(m, 2H), 4.62(sept, J=6.0 Hz, 1H), 1.31(d, J=6.0 Hz, 6H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=221.2.
실시예 26: 1-(3,4-디에톡시벤질리덴아미노)구아니딘(2026)
3,4-디에톡시벤즈알데하이드(2.0 mmol, 388 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP4에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2026)을 수득하였다(355 mg, 71%). 1H NMR(CD3OD) δ 7.95(s, 1H), 7.39(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.11(dd, J=8.2, 2.0 Hz, 1H), 6.91(d, J=8.0 Hz, 1H), 4.11(q, J=7.0 Hz, 2H), 4.09(q, J=7.0 Hz, 2H), 1.42(t, J=7.0 Hz, 3H), 1.41(t, J=7.0 Hz, 3H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=251.1.
실시예 27: 1-(3,5-디플루오로벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2027)
3,5-디플루오로벤즈알데하이드(2.0 mmol, 284 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP2에 따라 실시하여 백색 결정의 표제 화합물(2027)을 수득하였다(412 mg, 87%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.12(s, 1H), 7.47(m, 2H), 7.03(tt, J=9.0, 2.4 Hz, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=199.1.
실시예 28: 1-(3,4-디브로모벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드 (2028)
플루오렌-2-카르복스알데하이드(2.0 mmol, 388 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP2에 따라 실시하여 연노란색 분말의 표제 화합물(2028)을 수득하였다(559 mg, 97%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.16(s, 1H), 8.01(br. s, 1H), 7.85(m, 2H), 7.77(m, 1H), 7.57(m, 1H), 7.38(m, 1H), 7.34(dt, J=7.4, 1.2 Hz, 1H), 3.93(s, 2H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=251.1.
실시예 29: l-(3,4-디브로모벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(3093)
3,4-디브로모벤즈알데하이드(2.0 mmol, 528 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP2에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(3093)을 수득하였다(655 mg, 92%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.20(d, J=2.0 Hz, 1H), 8.06(s, 1H), 7.75(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.65(dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=318.8, 320.8, 322.8.
실시예 30: 1-(4-클로로-3-플루오로벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2030)
4-클로로-3-플루오로벤즈알데하이드(2.0 mmol, 317 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP2에 따라 실시하여 백색 결정의 표제 화합물(2030)을 수득하였다(466 mg, 93%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.12(s, 1H), 7.81(m, 1H), 7.56(m, 2H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=215.0, 217.0.
실시예 31: 1-(3-클로로-4-하이드록시벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2031)
3-클로로-4-하이드록시벤즈알데하이드(2.0 mmol, 313 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP2에 따라 실시하여 노란색 분말의 표제 화합물(2031)을 수득하였다(468 mg, 94%). 1H NMR(CD3OD) δ 7.97(s, 1H), 7.84(d, J=2.1 Hz, 1H), 7.52(dd, J=8.4, 2.1 Hz, 1H), 6.94(d, J=8.4 Hz, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=213.1, 215.0.
실시예 32: 1-(4-플루오로-3-니트로벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2032)
2-플루오로-5-포밀벤조니트릴(2.0 mmol, 298 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP2에 따라 실시하여 백색 결정의 표제 화합물(2032)을 수득하였다(452 mg, 93%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.32(dd, J=6.2, 2.2 Hz, 1H), 8.15(s, 1H), 8.14(ddd, J=8.8, 5.2, 2.2 Hz, 1H), 7.45(t, J=8.8 Hz, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=206.1.
실시예 33: 1-(3,5-디메틸-4-하이드록시벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클 로라이드(2033)
3,5-디메틸-4-하이드록시벤즈알데하이드(2.0 mmol, 300 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP2에 따라 실시하여 노란색 분말의 표제 화합물(2033)을 수득하였다(462 mg, 95%). 1H NMR(CD3OD) δ 7.94(s, 1H), 7.39(s, 2H), 2.24(s, 6H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=207.1.
실시예 34: 1-(4-메톡시-2,3-디메틸벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2034)
4-메톡시-2,3-디메틸벤즈알데하이드(2.0 mmol, 328 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP2에 따라 실시하여 노란색 분말의 표제 화합물(2034)을 수득하였다(461 mg, 89%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.45(s, 1H), 7.83(d, J=8.8 Hz, 1H), 6.86(d, J=8.8 Hz, 1H), 3.85(s, 3H), 2.37(s, 3H), 2.17(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=221.1.
실시예 35: 1-[4-클로로-3-(트리플루오로메틸)벤질리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(2035)
4-클로로-3-(트리플루오로메틸)벤즈알데하이드(2.0 mmol, 417 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP2에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2035)을 수득하였다(524 mg, 87%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.24(d, J=2.0 Hz, 1H), 8.18(s, 1H), 8.04(dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.69(d, J=8.4 Hz, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=265.0, 267.0.
실시예 36: 1-(3-브로모-4,5-디메톡시벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(3099)
3-브로모-4,5-디메톡시벤즈알데하이드(2.0 mmol, 490 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP3에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(3099)을 수득하였다(588 mg, 87%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.02(s, 1H), 7.56(d, J=1.9 Hz, 1H), 7.52(d, J=1.9 Hz, 1H), 3.94(s, 3H), 3.85(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=300.9, 302.9.
실시예 37: 1-[3,4-디하이드로-2H-벤조[b][1,4]디옥세핀-7-일)메틸리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(2038)
3,4-디하이드로-2H-벤조[b][1,4]디옥세핀-7-카르브알데하이드(1.0 mmol, 178 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(1.0 mmol, 110 mg)를 GP3에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2038)을 수득하였다(206 mg, 76%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.00(s, 1H), 7.43(d, J=2.2 Hz, 1H), 7.35(dd, J=8.4, 2.2 Hz, 1H), 6.99(d, J=8.4 Hz, 1H), 4.23(t, J=5.6 Hz, 2H), 4.21(t, J=5.6 Hz, 2H), 2.19(pent, J=5.6 Hz, 2H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=235.1.
실시예 38: [(사이클로헥실페닐메틸리덴아미노]구아니딘(2039)
벤조일사이클로헥산(2.0 mmol, 377 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP4에 따라 실시하였다. 조 물질은 CF1의 방법으로 콤비플래쉬상에서 정제하여 크림 분말의 표제 화합물(2039)을 수득하였다(109 mg, 22%). 1H NMR(CD3OD) δ 7.42(m, 2H), 7.35(m, 1H), 7.18(m, 2H), 2.48(m, 1H), 1.85(m, 2H), 1.77(m, 2H), 1.67(m, 1H), 1.14-1.39(m, 5H) ; HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=245.2.
실시예 39: 1-[1-(2,3-디하이드로-벤조[1,4]디옥신-6-일)에틸리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(2040)
1-(2,3-디하이드로-벤조[1,4]디옥신-6-일)에타논(2.0 mmol, 356 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP3에 따라 실시하여 노란색 분말의 표제 화합물(2040)을 수득하였다(492 mg, 91%). 1H NMR(CD3OD) δ 7.42(d, J=2.2 Hz, 1H), 7.37(dd, J=8.6, 2.2 Hz, 1H), 6.86(d, J=8.6 Hz, 1H), 4.27(m, 4H), 2.30(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=235.1.
실시예 40: 1-(4-벤질옥시-3-클로로벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2041)
벤질 브로마이드(1.0 mmol, 171 mg)를 GP5에 따라 사용하고, 조 물질은 CF2로 정제하여 백색 분말의 4-벤질옥시-3-클로로벤즈알데하이드를 수득하였다(224 mg, 91%). 1H NMR(CDCl3) δ 9.86(s, 1H), 7.93(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.73(dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.32-7.48(m, 5H), 7.08(d, J=8.4 Hz, 1H), 5.26(s, 2H).
4-벤질옥시-3-클로로벤즈알데하이드(0.91 mmol, 224 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(0.86 mmol, 95 mg)를 GP3에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2041)을 수득하였다(238 mg, 77%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.01(s, 1H), 7.98(d, J=2.2 Hz, 1H), 7.61(dd, J=8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.47(m, 2H), 7.37(m, 2H), 7.34(m, 1H), 7.19(d, J=8.6 Hz, 1H), 5.24(s, 2H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=303.0, 305.0.
실시예 41: 1-(4-알릴옥시-3-클로로벤질리덴아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2042)
알릴 브로마이드(1.0 mmol, 121 mg)를 GP5에 따라 사용하고, 조 물질은 CF2에 따라 정제하여 연노란색 결정의 4-알릴옥시-3-클로로벤즈알데하이드를 수득하였다(181 mg, 92%). 1H NMR(CDC13) δ 9.85(s, 1H), 7.91(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.74(dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.02(d, J=8.4 Hz, 1H), 6.06(ddt, J=17.2 , 10.6, 5.1 Hz, 1H), 5.49(m, 1H), 5.36(m, 1H), 4.71(dt, J=5.1, 1.7 Hz, 2H).
4-알릴옥시-3-클로로벤즈알데하이드(0.92 mmol, 181 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(0.87 mmol, 96 mg)를 GP3에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2042)을 수득하였다(189 mg, 71%). 1H NMR(CD3OD) δ 7.97(s, 1H), 7.96(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.62(dd, J=8.6, 2.0 Hz, 1H), 7.12(d, J=8.6 Hz, 1H), 6.08(ddt, J=17.4, 10.6, 5.1 Hz, 1H), 5.47(ap. dq, 17.4, 1.6 Hz, 1H), 5.32(ap. dq, J=10.6, 1.6 Hz, 1H), 4.70(dt, J=5.1, 1.6 Hz, 2H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=304.9, 306.9.
실시예 42: 1-(3-클로로-4-메톡시벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2043)
요오도메탄(1.0 mmol, 142 mg)을 GP5에 따라 사용하고, 조 물질은 CF2으로 정제하여 백색 고형의 3-클로로-4-메톡시벤즈알데하이드를 수득하였다(182 mg, 100%). 1H NMR(CDCl3) δ 9.85(s, 1H), 7.90(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.77(dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.04(d, J=8.4 Hz, 1H), 3.99(s, 3H).
3-클로로-4-메톡시벤즈알데하이드(1.0 mmol, 182 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(0.95 mmol, 104 mg)를 GP2에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2043)을 수득하였다(219 mg, 83%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.01(s, 1H), 7.95(d, J=2.2 Hz, 1H), 7.64(dd, J=8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.13(d, J=8.6 Hz, 1H), 3.94(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=227.1, 229.0.
실시예 43: 1-[3-클로로-4-(4-시아노부톡시)벤질리덴아미노]구아니딘 하이드 로클로라이드(2044)
5-브로모펜탄니트릴(1.0 mmol, 162 mg)을 GP5에 따라 사용하고, 조 물질은 CF3으로 정제하여 무색 오일의 5-(2-클로로-4-포밀페녹시)-펜탄니트릴을 수득하였다(151 mg, 63%). 1H NMR(CDCl3) δ 9.85(s, 1H), 7.91(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.76(dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.01(d, J=8.4 Hz, 1H), 4.17(t, J=5.8 Hz, 2H), 2.52(t, J=7.0 Hz, 2H), 2.07(m, 2H), 1.95(m, 2H).
5-(2-클로로-4-포밀페녹시)-펜탄니트릴(0.63 mmol, 151 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(0.60 mmol, 66 mg)를 GP3에 따라 실시하여 연노란색 분말의 표제 화합물(2044)을 수득하였다(161 mg, 77%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.01(s, 1H), 7.97(d, J=2.2 Hz, 1H), 7.63(dd, J=8.8, 2.2 Hz, 1H), 7.13(d, J=8.8 Hz, 1H), 4.18(t, J=5.9 Hz, 2H), 2.59(t, J=7.0 Hz, 2H), 2.01(m, 2H), 1.90(m, 2H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=294.0, 296.0
실시예 44: 1-[3-클로로-4-(3-페녹시프로폭시)벤질리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(2045)
3-(브로모프로폭시)벤젠(1.0 mmol, 215 mg)을 GP5에 따라 사용하고, 조 물질은 CF4로 정제하여 백색 분말의 3-클로로-4-(3-페녹시프로폭시)벤즈알데하이드를 수득하였다(140 mg, 48%). 1H NMR(CDCl3) δ 9.85(s, 1H), 7.90(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.75(dd, J=8.6, 2.0 Hz, 1H), 7.28(m, 2H), 7.06(d, J=8.6 Hz, 1H), 6.93(m, 3H), 4.34(t, J=6.0 Hz, 2H), 4.22(t, J=6.0 Hz, 2H), 2.30(pent, J=6.0 Hz, 2H).
3-클로로-4-(3-페녹시프로폭시)벤즈알데하이드(0.48 mmol, 140 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(0.46 mmol, 50 mg)를 GP3에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2045)을 수득하였다(159 mg, 86%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.01(s, 1H), 7.95(d, J=2.2 Hz, 1H), 7.62(dd, J=8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.25(m, 2H), 7.15(d, J=8.6 Hz, 1H), 6.92(m, 3H), 4.31(t, J=6.0 Hz, 2H), 4.21(t, J=6.0 Hz, 2H), 2.30(pent, J=6.0 Hz, 2H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=347.0, 349.0
실시예 45: 1-[3-클로로-4-(2-페닐에톡시) 벤질리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(2046)
2-브로모에틸 벤젠(1.0 mmol, 185 mg)을 GP5에 따라 사용하고, 조 물질은 CF4로 정제하여 무색 오일의 3-클로로-4-(2-페닐에톡시)벤즈알데하이드를 수득하였다(146 mg, 56%). 1H NMR(CDCl3) δ 9.83(s, 1H), 7.89(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.72(dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.33(m, 4H), 7.27(m, 1H), 6.98(d, J=8.4 Hz, 1H), 4.30(t, J=6.9 Hz, 2H), 3.20(t, J=6.9 Hz, 2H).
3-클로로-4-(2-페닐에톡시)벤즈알데하이드(0.56 mmol, 146 mg) 및 EtOH(2 mL)내의 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(0.55 mmol, 58 mg)를 70℃에서 18시간 교반한 다음 상온으로 냉각시켰다. Et20를 첨가하여 결정화를 유발하였고, 출발물 질인 아미노구아니딘 하이드로클로라이드인 침전물을 여과하여 제거하였다. 여과물에 새로운 침전물이 형성되면, 이를 여과하고 1: 1의 DCM: EtOAc(2 회), Et20(2 회) 세척 및 고진공하에 건조하여, 백색 분말의 표제 화합물(2046)을 수득하였다(70 mg, 35%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.00(s, 1H), 7.95(d, J=2.2 Hz, 1H), 7.60(dd, J=8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.34(m, 2H), 7.29(m, 2H), 7.22(m, 1H), 7.10(d, J=8.6 Hz, 1H), 4.30(t, J=6.7 Hz, 2H), 3.13(t, J=6.7 Hz, 2H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=317.0, 319.0.
실시예 46: 1-(3-클로로-4-헥실옥시벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2047)
1-요오도헥산(1.0 mmol, 212 mg)을 GP5에 따라 사용하고, 조 물질은 CF5로 정제하여 3-클로로-4-헥실옥시벤즈알데하이드를 백색 고형으로 수득하였다(208 mg, 86%). 1H NMR(CDCl3) δ 9.85(s, 1H), 7.90(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.74(dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.01(d, J=8.4 Hz, 1H), 4.12(t, J=6.5 Hz, 2H), 1.87(m, 2H), 1.51(m, 2H), 1.37(m, 4H), 0.91(m, 3H).
3-클로로-4-헥실옥시벤즈알데하이드(0.86 mmol, 208 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(0.82 mmol, 90 mg)를 GP3에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2047)을 수득하였다(141 mg, 49%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.01(s, 1H), 7.95(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.62(dd, J=8.6, 2.0 Hz, 1H), 7.10(d, J=8.6 Hz, 1H), 4.11(t, J=6.5 Hz, 2H), 1.83(m, 2H), 1.53(m, 2H), 1.39(m, 4H), 0.93(m, 3H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=297.1, 299.1.
실시예 47: 1-(3-클로로-4-프로폭시오벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2048)
1-요오도프로판(1.0 mmol, 170 mg)을 GP5에 따라 사용하고, 조 물질은 CF5로 정제하여 3-클로로-4-프로폭시벤즈알데하이드을 백색 고형물로 수득하였다(211 mg, 100%). 1H NMR(CDCl3) δ 9.84(s, 1H), 7.90(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.74(dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.01(d, J=8.4 Hz, 1H), 4.09(t, J=6.5 Hz, 2H), 1.91(m, 2H), 1.09(t, J=7.4 Hz, 3H).
3-클로로-4-프로폭시벤즈알데하이드(1.0 mmol, 211 mg) 및 EtOH(2 mL)내의 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(0.95 mmol, 104 mg)를 70℃에서 18시간 교반한 다음 실온으로 냉각시켰다. 여기에 Et20를 가하여 결정화를 유발하였고, 출발물질 아미노구아니딘 하이드로클로라이드인 침전물은 여과 제거하였다. 여과물에 새로운 침전물이 형성되어, 이를 여과한 다음 EtOAc(2 회), Et20(2 회) 세척하고 고진공하에 건조하여 백색 분말의 표제 화합물(2048)을 수득하였다(70 mg, 24%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.00(s, 1H), 7.95(d, J=2.2 Hz, 1H), 7.61(dd, J=8.6,2.2 Hz, 1H), 7.10(d, J=8.6 Hz, 1H), 4.07(t, J=6.3 Hz, 2H), 1.85(m, 2H), 1.09(t, J=7.4 Hz, 3H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=297.1, 299.1.
실시예 48: 1-[3-클로로-4-(2-메틸프로폭시)벤질리덴아미노]구아니딘 아세테이트(2049)
1-브로모-2-메틸프로판(1.0 mmol, 137 mg)을 GP5에 따라 사용하고, 조 물질은 CF5로 정제하여 3-클로로-4-(2-메틸프로폭시)벤즈알데하이드를 무색 오일로서 수득하였다(5 mg, 2%). 1H NMR(CDC13) δ 9.84(s, 1H), 7.90(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.74(dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.00(d, J=8.4 Hz, 1H), 3.88(d, J=6.4 Hz, 2H), 2.20(m, 1H), 1.09(d, J=6.8 Hz, 6H).
3-클로로-4-(2-메틸프로폭시)벤즈알데하이드(0.02 mmol, 5 mg) 및 EtOH(1 mL)내의 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(0.04 mmol, 4 mg)를 70℃에서 18시간 교반한 다음, 진공하에 농축하였다. 조 물질은 CH3CH: H20(3: 7, 300 ㎕)에 용해시킨 다음 분위용 LC/MS상에서 정제하였다. 원하는 화합물을 포함하고 있는 분획을 진공에서 농축하여 백색 분말의 표제 화합물(2049)을 수득하였다(6 mg, 94%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.02(s, 1H), 7.94(d, J=2.2 Hz, 1H), 7.60(dd, J=8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.09(d, J=8.6 Hz, 1H), 3.88(d, J=6.5 Hz, 2H), 2.13(m, 1H), 1.94(s, 3H), 1.08(d, J=6.7 Hz, 6H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=269.1, 271.1.
실시예 49: 1-[3-클로로-4-(4-메틸펜톡시)벤질리덴아미노]구아니딘 하이드로 클로라이드(2050)
1-브로모-4-메틸펜탄(1.0 mmol, 165 mg)을 GP5에 따라 사용하고, 조 물질은 CF4로 정제하여 3-클로로-4-(4-메틸펜톡시)벤즈알데하이드를 백색 고형물로 수득하였다(162 mg, 67%). 1H NMR(CDCl3) δ 9.84(s, 1H), 7.90(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.74(dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.01(d, J=8.4 Hz, 1H), 4.10(d, J=6.6 Hz, 2H), 1.87(m, 2H), 1.63(m, 1H), 1.38(m, 2H), 0.93(d, J=6.7 Hz, 6H).
3-클로로-4-(4-메틸펜톡시)벤즈알데하이드(0.67 mmol, 162 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(0.64 mmol, 70 mg)를 GP3에 따라 실시하여(그러나, 침전물의 DCM 세척은 생략) 백색 분말의 표제 화합물(2050)을 수득하였다(132 mg, 58%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.00(s, 1H), 7.95(d, J=2.2 Hz, 1H), 7.62(dd, J=8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.10(d, J=8.6 Hz, 1H), 4.10(d, J=6.4 Hz, 2H), 1.84(m, 2H), 1.64(m, 1H), 1.42(m, 2H), 0.95(d, J=6.7 Hz, 6H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=297.1, 299.1.
실시예 50: l-[3-클로로-4-(4-사이클로헥실메톡시)벤질리덴아미노]구아니딘 아세테이트(2051)
브로모메틸사이클로헥산(1.0 mmol, 177 mg)을 GP5에 따라 사용하고, 조 물질은 CF5로 정제하여 3-클로로-4-(4-사이클로헥실메톡시)벤즈알데하이드를 백색 고형 물로 수득하였다(6 mg, 2%). 1H NMR(CDC13) δ 9.84(s, 1H), 7.90(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.74(dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.01(d, J=8.4 Hz, 1H), 3.91(d, J=5.9 Hz, 2H), 1.84-1.95(m, 3H), 1.68-1.82(m, 3H), 1.21-1.39(m, 3H), 1.05-1.20(m, 2H).
3-클로로-4-(4-사이클로헥실메톡시)벤즈알데하이드(0.02 mmol, 6 mg) 및 EtOH(1 mL)내의 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(0.04 mmol, 4 mg)를 70℃에서 18시간 교반한 다음 진공하에 농축하였다. 조 산물은 CH3CH : H20(3: 7, 300 ㎕)에 용해시킨 후 분취용 LC/MS로 정제하였다. 원하는 화합물을 포함하고 있는 분획을 진공하에서 농축하여 무색 오일의 표제 화합물(2051)를 수득하였다(3 mg, 40%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.01(s, 1H), 7.93(d, J=2.2 Hz, 1H), 7.59(dd, J=8.6,2.2 Hz, 1H), 7.08(d, J=8.6 Hz, 1H), 3.91(d, J=5.9 Hz, 2H), 1.94(s, 3H), 1.55-1.95(m, 6H), 1.23-1.41(m, 3H), 1.09-1.22(m, 2H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=309.1, 311.1.
실시예 51: 1-[3-클로로-4-(2-에틸부톡시)벤질리덴아미노]구아니딘 아세테이트(2052)
1-브로모-2-에틸부탄(1.0 mmol, 165 mg)을 GP5에 따라 사용하고, 조 물질은 CF5로 정제하여 3-클로로-4-(2-에틸부톡시)벤즈알데하이드를 무색 오일로 수득하였다(13 mg, 5%). 1H NMR(CDCl3) δ 9.84(s, 1H), 7.90(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.74(dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.02(d, J=8.4 Hz, 1H), 4.01(d, J=5.7 Hz, 2H), 1.77(m, 1H), 1.47-1.59(m, 4H), 0.96(t, J=7.4 Hz, 6H).
3-클로로-4-(2-에틸부톡시)벤즈알데하이드(0.05 mmol, 13 mg) 및 EtOH(1 mL)내의 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(0.10 mmol, 10 mg)를 70℃에서 18시간 교반한 다음 진공하에 농축하였다. 조산물은 CH3CH: H20(3: 7, 300 ㎕)에 용해시킨 다음 분취용 LC/MS로 정제하였다. 원하는 화합물을 포함하고 있는 분획을 진공하에서 농축하여 백색 분말의 표제 화합물(2052)을 수득하였다(5 mg, 27%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.02(s, 1H), 7.93(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.60(dd, J=8.6, 2.0 Hz, 1H), 7.11(d, J=8.6 Hz, 1H), 4.02(d, J=5.7 Hz, 2H), 1.94(s, 3H), 1.72(m, 1H), 1.54(m, 4H), 0.97(t, J=7.5 Hz, 6H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=297.1, 299.1.
실시예 52: 1-(3-클로로-4-옥틸옥시벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2053)
1-요오도옥탄(1.0 mmol, 240 mg)을 GP5에 따라 사용하고, 조 물질은 CF5로 정제하여 3-클로로-4-옥틸옥시벤즈알데하이드를 백색 고형물로 수득하였다(229 mg, 85%). 1H NMR(CDC13) δ 9.84(s, 1H), 7.90(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.74(dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.01(d, J=8.4 Hz, 1H), 4.11(t, J=6.5 Hz, 2H), 1.86(m, 2H), 1.51(m, 2H), 1.25-1.41(m, 8H), 0.89(m, 3H).
3-클로로-4-옥틸옥시벤즈알데하이드(0.85 mmol, 229 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(0.81 mmol, 89 mg)를 GP3에 따라 실시하여(침전물의 DCM 세척은 생략), 백색 분말의 표제 화합물(2053)을 수득하였다(196 mg, 63%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.01(s, 1H), 7.95(d, J=2.2 Hz, 1H), 7.62(dd, J=8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.10(d, J=8.6 Hz, 1H), 4.11(t, J=6.5 Hz, 2H), 1.84(m, 2H), 1.53(m, 2H), 1.26-1.45(m, 8H), 0.91(m, 3H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=325.1, 327.1.
실시예 53: 1-[3-클로로-4-(2-에톡시-에톡시)벤질리덴아미노]구아니딘 아세테이트(2054)
1-브로모-2-에톡시에탄(1.0 mmol, 153 mg)을 GP5에 따라 사용하고, 조 물질은 CF4로 정제하여 3-클로로-4-(2-에톡시-에톡시)벤즈알데하이드를 백색 고형물로 수득하였다(28 mg, 12%). 1H NMR(CDC13) δ 9.84(s, 1H), 7.90(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.74(dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.06(d, J=8.4 Hz, 1H), 4.27(m, 2H), 3.87(m, 2H), 3.64(q, J=7.0 Hz, 2H), 1.24(t, J=7.0 Hz, 3H).
3-클로로-4-(2-에톡시-에톡시)벤즈알데하이드(0.12 mmol, 28 mg) 및 EtOH(1 mL)내의 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(0.12 mmol, 12 mg)를 70℃에서 18시간 교반한 다음 진공하에 농축하였다. 조 산물은 CH3CH: H20(3: 7, 600 ㎕)에 용해시킨 다음 분취용 LC/MS로 정제하였다. 원하는 화합물을 포함하고 있는 분획을 진공하에서 농축하여 연노란색 오일의 표제 화합물(2054)을 수득하였다(22 mg, 52%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.01(s, 1H), 7.94(d, J=2.2 Hz, 1H), 7.61(dd, J=8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.14(d, J=8.6 Hz, 1H), 4.24(m, 2H), 3.85(m, 2H), 3.64(q, J=7.0 Hz, 2H), 1.22(t, J=7.0 Hz, 3H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=285.0, 287.0.
실시예 54: 1-(2-페닐벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2055)
바이페닐-2-카르브알데하이드(2.0 mmol, 364 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(1.9 mmol, 209 mg)를 GP6에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2055)을 수득하였다(440 mg, 80%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.22(m, 1H), 8.05(s, 1H), 7.41-7.54(m, 5H), 7.30-7.39(m, 3H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=239.1.
실시예 55: 1-(3,4-디클로로페닐)-(프로필리덴아미노구아니딘) 하이드로클로라이드(2056)
1-(3,4-디클로로페닐)프로판-1-온(2.0 mmol, 406 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(1.9 mmol, 209 mg)를 GP6에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2056)을 수득하였다(534 mg, 90%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.13(d, J=2.2 Hz, 1H), 7.80(dd, J=8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.58(d, J=8.6 Hz, 1H), 2.82(q, J=7.7 Hz, 2H), 1.19(t, J=7.7 Hz, 3H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=259.0, 261.0, 263.0.
실시예 56: 1-[4-(2-플루오로페닐)벤질리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(2057)
2'-플루오로-바이페닐-4-카르브알데하이드(0.144 mmol, 36 mg) 및 EtOH(2 mL)내의 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(0.13 mmol, 14 mg)를 초음파내에서 120℃로 10분간 열처리한 다음 실온으로 냉각시켰다. 물(20 mL) 및 NaOH(2M, 5 mL)를 첨가하고, EtOAc(2 x 20 mL)로 산물을 추출하였다. 유기층은 물(10 mL), 염수(10 mL)로 세척한 다음 MgS04에서 건조시키고 여과하였다. 에테르(2 M, 0.5 mL)내의 HCl을 첨가하고, 용액을 농축하였다. MeOH/Et2O로부터 재결정하여 크림 분말의 표제 화합물(2057)을 수득하였다(12 mg, 25%) ; 1H NMR(CD3OD) δ 8.14(s, 1H), 7.90(m, 2H), 7.64(m, 2H), 7.52(m, 1H), 7.40(m, 1H), 7.28(m, 1H), 7.21(m, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=257.1.
실시예 57: 1-[3-(2-트리플루오로메틸페닐)벤질리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(2058)
2'-트리플루오로메틸-바이페닐-3-카르브알데하이드(0.132 mmol, 33 mg) 및 EtOH(2 mL)내의 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(0.12 mmol, 13 mg)를 초음파내에서 120℃로 10분간 열처리한 다음 실온으로 냉각시켰다. 수(20 mL) 및 NaOH(2M, 5 mL)를 가하고 EtOAc(2 x 20 mL)로 산물을 추출하였다. 유기층은 수(10 mL), 염수(10 mL)로 세척한 다음 MgS04에서 건조시키고 여과하였다. 에테르(2 M, 0.5 mL)내의 HCl을 첨가하고, 용액을 농축하였다. MeOH/Et2O로부터 재결정하여 백색 분말 의 표제 화합물(2058)을 수득하였다(9 mg, 19%) ; 1H NMR(CD3OD) δ 8.13(s, 1H), 7.86(m, 1H), 7.79(m, 2H), 7.67(m, 1H), 7.58(m, 1H), 7.51(m, 1H), 7.41(m, 2H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=307.1.
실시예 58: 1-(5-클로로-2,3-디메톡시벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(2059)
5-클로로-2,3-디메톡시벤즈알데하이드(2.0 mmol, 401 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(1.9 mmol, 210 mg)를 GP3에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2059)을 수득하였다(449 mg, 80%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.38(d, J=0.4 Hz, 1H), 7.69(dd, J=2.5, 0.4 Hz, 1H), 7.11(d, J=2.5 Hz, 1H), 3.89(s, 3H), 3.87(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=257.0, 259.0.
실시예 59: 1-[2-플루오로-4-(트리플루오로메틸)벤질리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(2060)
2-플루오로-4-(트리플루오로메틸)벤즈알데하이드(2.0 mmol, 384 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(1.9 mmol, 210 mg)를 GP3에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2060)을 수득하였다(478 mg, 88%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.38(s, 1H), 8.33(m, 1H), 7.57(m, 2H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=249.0.
실시예 60: 1-[2,4-비스(트리플루오로메틸)벤질리덴아미노]구아니딘 하이드 로클로라이드(2061)
2,4-비스(트리플루오로메틸)벤즈알데하이드(2.0 mmol, 484 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(1.9 mmol, 210 mg)를 GP3에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2061)을 수득하였다(566 mg, 89%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.61(m, 1H), 8.52(m, 1H), 8.05(m, 1H), 8.02(m, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=299.0.
실시예 61 : 1-[2,3-디플루오로-4-(트리플루오로메틸) 벤질리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(2062)
2,3-디플루오로-4-(트리플루오로메틸)벤즈알데하이드(2.0 mmol, 420 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(1.9 mmol, 210 mg)를 GP3에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2062)을 수득하였다(520 mg, 90%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.36(s, 1H), 8.09(m, 1H), 7.55(m, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=267.0.
실시예 62: 1-[3-플루오로-4-(트리플루오로메틸)벤질리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(2063)
3-플루오로-4-(트리플루오로메틸)벤즈알데하이드(2.0 mmol, 384 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(1.9 mmol, 210 mg)를 GP3에 따라 실시하여 백색 분 말의 표제 화합물(2063)을 수득하였다(469 mg, 86%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.15(s, 1H), 7.92(m, 1H), 7.71-7.79(m, 2H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=249.0.
실시예 63: 1-[3-니트로-4-(트리플루오로메틸)벤질리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(2064)
3-니트로-4-(트리플루오로메틸)벤즈알데하이드(2.0 mmol, 438 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(1.9 mmol, 210 mg)를 GP2에 따라 실시하여 연노란색 분말의 표제 화합물(2064)을 수득하였다(493 mg, 83%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.66(s, 1H), 8.50(m, 1H), 8.42(m, 1H), 8.07(m, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=276.0.
실시예 64: 1-[2-플루오로-3-(트리플루오로메틸) 벤질리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(2065)
2-플루오로-3-(트리플루오로메틸)벤즈알데하이드(2.0 mmol, 384 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(1.9 mmol, 210 mg)를 GP2에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2065)을 수득하였다(500 mg, 92%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.41(m, 1H), 8.39(s, 1H), 7.80(m, 1H), 7.44(m, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=249.0.
실시예 65: 1-[2-플루오로-5-(트리플루오로메틸)벤질리덴아미노]구아니딘 하 이드로클로라이드(2066)
2-플루오로-5-(트리플루오로메틸)벤즈알데하이드(2.0 mmol, 384 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(1.9 mmol, 210 mg)를 GP3에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2066)을 수득하였다(410 mg, 75%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.54(dd, J=6.5, 2.2 Hz, 1H), 8.38(s, 1H), 7.81(m, 1H), 7.42(ap. t, J=9.5 Hz, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=249.0.
실시예 66: 1-[3-플루오로-5-(트리플루오로메틸)벤질리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(2067)
3-플루오로-5-(트리플루오로메틸)벤즈알데하이드(2.0 mmol, 384 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(1.9 mmol, 210 mg)를 GP3에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2067)을 수득하였다(458 mg, 84%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.17(s, 1H), 7.98(br. s, 1H), 7.95(m, 1H), 7.55(m, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=249.0.
실시예 67: 1-[4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)벤질리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(2068)
4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)벤즈알데하이드(2.0 mmol, 384 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(1.9 mmol, 210 mg)를 GP3에 따라 실시하여 백색 분 말의 표제 화합물(2068)을 수득하였다(459 mg, 84%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.21(dd, J=6.7, 2.2 Hz, 1H), 8.17(s, 1H), 8.11(ddd, J=8.6, 4.7, 2.2 Hz, 1H), 7.43(m, 1H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=249.0.
실시예 68: 1-[2-클로로-5-(트리플루오로메틸)벤질리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(2069)
2-클로로-5-(트리플루오로메틸)벤즈알데하이드(2.0 mmol, 417 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(1.9 mmol, 210 mg)를 GP3에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2069)을 수득하였다(486 mg, 85%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.60(s, 1H), 8.55(m, 1H), 7.73(dd, J=8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.69(m, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=265.0, 267.0.
실시예 69: 1-[2-클로로-3-(트리플루오로메틸)벤질리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(2070)
2-클로로-3-(트리플루오로메틸)벤즈알데하이드(2.0 mmol, 417 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(1.9 mmol, 210 mg)를 GP3에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2070)을 수득하였다(518 mg, 90%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.67(s, 1H), 8.44(dd, J=7.9, 1.6 Hz, 1H), 7.88(dd, J=7.9, 1.0 Hz, 1H), 7.57(m, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=265.0, 267.0.
실시예 70: 1-[3-클로로-2-플루오로-5-(트리플루오로메틸)벤질리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(2071)
3-클로로-2-플루오로-5-(트리플루오로메틸)벤즈알데하이드(2.0 mmol, 453 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(1.9 mmol, 210 mg)를 GP3에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2071)을 수득하였다(527 mg, 86%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.50(m, 1H), 8.37(s, 1H), 7.95(m, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=283.0, 285.0.
실시예 71: 1-[(4-플루오로-1-나프탈렌-1-일)메틸리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(2072)
4-플루오로-1-나프탈렌카르복스알데하이드(2.0 mmol, 348 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(1.9 mmol, 210 mg)를 GP3에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2072)을 수득하였다(439 mg, 86%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.84(s, 1H), 8.54(m, 1H), 8.18(m, 1H), 8.14(dd, J=8.2, 5.7 Hz, 1H), 7.74(m, 1H), 7.67(m, 1H), 7.30(dd, J= 10.2, 8.2 Hz, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=231.0.
실시예 72: 1-[4-메톡시-3-(트리플루오로메틸)벤질리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(2073)
4-메톡시-3-(트리플루오로메틸)벤즈알데하이드(2.0 mmol, 408 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(1.9 mmol, 210 mg)를 GP3에 따라 실시하여 백색 분말 의 표제 화합물(2073)을 수득하였다(313 mg, 55%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.09(s, 1H), 8.08(d, J=2.2 Hz, 1H), 8.00(dd, J=8.8, 2.2 Hz, 1H), 7.26(d, J=8.8 Hz, 1H), 3.97(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=261.0.
실시예 73: 1-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)벤질리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(2074)
2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)벤즈알데하이드(2.0 mmol, 408 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(1.9 mmol, 210 mg) 를 70℃에서 18시간 교반한 다음 실온으로 냉각시켰다. 이 반응물을 농촉하고, 조 산물은 최소량의 MeOH에 용해한 다음 Et20를 첨가하여, 2일간 결정화된 표제 화합물(2074)을 백색 결정으로 수득하였다(477 mg, 84%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.50(s, 1H), 8.37(d, J=2.4 Hz, 1H), 7.72(ddd, J=8.8, 2.4, 0.8 Hz, 1H), 7.25(d, J=8.8 Hz, 1H), 3.98(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=261.0.
실시예 74: 1-[나프탈렌-2-일-메틸리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(2075)
2-나프탈데하이드(2.0 mmol, 312 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(1.9 mmol, 210 mg)를 GP2에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2075)을 수득하였다(428 mg, 90%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.27(s, 1H), 8.12(br. s; 1H), 8.08(dd, J=8.6, 1.8 Hz, 1H), 7.85-7.95(m, 3H), 7.55(m, 2H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=213.1.
실시예 75: 1-[5-브로모-2-에톡시벤질리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(2076)
5-브로모-2-에톡시벤즈알데하이드(2.0 mmol, 458 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(1.9 mmol, 210 mg)를 GP6에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2076)을 수득하였다(363 mg, 59%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.45(s, 1H), 8.21(d, J=2.5 Hz, 1H), 7.51(dd, J=8.8, 2.5 Hz, 1H), 7.00(d, J=8.8 Hz, 1H), 4.13(q, J=6.9 Hz, 2H), 1.44(t, J=6.9 Hz, 3H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=285.0, 287.0.
실시예 76: 1-[2,4-디메틸벤질리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(2077)
2,4-디메틸벤즈알데하이드(2.0 mmol, 368 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(1.9 mmol, 210 mg)를 GP3에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(2077)을 수득하였다(342 mg, 79%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.40(s, 1H), 7.85(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.07(m, 2H), 2.44(s, 3H), 2.33(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=191.1.
실시예 77: 1-[4-클로로-3-니트로벤질리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(2078)
4-클로로-3-니트로벤즈알데하이드(2.0 mmol, 371 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(1.9 mmol, 210 mg)를 GP2에 따라 실시하여 연노란색 분말의 표제 화합물(2078)을 수득하였다(487 mg, 92%). 1H NMR(CD3OD) δ8.44(d, J=2.0 Hz, 1H), 8.16(s, 1H), 8.02(dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.73(d, J=8.4 Hz, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=242.0, 244.0.
실시예 78: 1-(4-벤질옥시-2-하이드록시벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(3001)
4-벤질옥시-2-하이드록시벤즈알데하이드(2.0 mmol, 456 mg)을 GP7에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(3001)을 수득하였다(358 mg, 64%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.39(s, 1H), 7.72(d, J=8.8 Hz, 1H), 7.48-7.34(m, 5H), 6.63(dd, J=8.8, 2.5 Hz, 1H), 6.57(d, J=2.4 Hz, 1H), 5.14(s, 2H); HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=285.2.
실시예 79: 1-[(1H-인돌-5-일)메틸리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(3002)
인돌-5-카르복스알데하이드(2.0 mmol, 290 mg)을 GP8에 따라 실시하여 붉은 분말의 표제 화합물(3002)을 수득하였다(266 mg, 65%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.23(s, 1H), 7.95(d, J=1.4 Hz, 1H), 7.73(dd, J=8.6, 1.5 Hz, 1H), 7.49(d, J=8.6 Hz, 1H), 7.34(d, J=3.1 Hz, 2H), 6.57(dd, J=3.1, 0.8 Hz, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=202.2.
실시예 80: 1-(4-부톡시벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(3003)
4-부톡시벤즈알데하이드(2.0 mmol, 356 mg)을 GP7에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(3003)을 수득하였다(355 mg, 76%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.14(s, 1H), 7.78(m, 2H), 7.01(m, 2H), 4.04(t, J=6.4 Hz, 2H), 1.80(m, 2H), 1.55(m, 2H), 1.03(t, J=7.2 Hz, 3H); HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=235.2.
실시예 81: 1-(4-시아노벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(3004)
4-시아노벤즈알데하이드(2.0 mmol, 262 mg)을 GP8에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(3004)을 수득하였다(343 mg, 92%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.25(s, 1H), 8.05(m, 2H), 7.86(m, 2H); HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=188.1.
실시예 82: 1-(2,5-디메톡시벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(3005)
2,5-디메톡시벤즈알데하이드(2.0 mmol, 332 mg)을 GP7에 따라 실시하여 노란 색 분말의 표제 화합물(3005)을 수득하였다(355 mg, 69%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.53(s, 1H), 7.64(dd, J=2.3, 0.6 Hz, 1H), 7.06(m, 2H), 3.90(s, 3H), 3.87(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=223.2.
실시예 83: 1-(2-벤질옥시-3-메톡시벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(3006)
2-벤질옥시-3-메톡시벤즈알데하이드(2.0 mmol, 484 mg)을 GP7에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(3006)을 수득하였다(460 mg, 69%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.35(s, 1H), 7.63(dd, J=6.8, 2.3 Hz, 1H), 7.47-7.35(m, 5H), 7.19(m, 2H), 5.13(s, 2H), 3.98(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=299.3.
실시예 84: 1-[1-(2-메톡시-나프탈렌-1-일)메틸리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(3007)
2-메톡시-1-나프탈데하이드(2.0 mmol, 372 mg)을 GP7에 따라 실시하여 연녹색 분말의 표제 화합물(3007)을 수득하였다(275 mg, 49%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.94(d, J=8.6 Hz, 1H), 8.88(s, 1H), 7.99(d, J=8.9 Hz, 1H), 7.86(d, J=7.9 Hz, 1H), 7.62(m, 1H), 7.45(m, 2H), 4.03(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=243.2.
실시예 85: 1-(4-하이드록시-3-메톡시-5-니트로벤질리덴아미노)구아니딘 하 이드로클로라이드(3008)
4-하이드록시-3-메톡시-5-니트로벤즈알데하이드(2.0 mmol, 394 mg)을 GP7에 따라 실시하여 노란색 분말의 표제 화합물(3008)을 수득하였다(509 mg, 88%). 1H NMR(DMSO) δ 7.69(s, 1H), 7.43(s, 1H), 7.36(s, 1H), 3.50(s, 3H), 2.97(m, 3H, Nh) ; HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=254.2.
실시예 86: 1-(3,4-디하이드록시벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(3009)
3,4-디하이드록시벤즈알데하이드(2.0 mmol, 276 mg)을 GP8에 따라 실시하여 표제 화합물(3009)을 연노란색의 분말로 수득하였다(375 mg, 81%). 1H NMR(CD3OD) δ 7.99(s, 1H), 7.30(d, J=1.9 Hz, 1H), 7.12(dd, J=8.2, 1.9, 1H), 6.85(d, J=8.2, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=195.1.
실시예 87: 1-(3-브로모벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(3010)
3-브로모벤즈알데하이드(2.0 mmol, 370 mg)을 GP8에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(3010)을 수득하였다(363 mg, 66%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.17(s, 1H), 8.12(ap. t, J=1.6 Hz, 1H), 7.78(ap. dt, J=7.8, 1.2 Hz, 1H), 7.64(ddd, J=8.0, 2.0, 1.0 Hz, 1H), 7.41(ap. t, J=8.1 Hz, 1H); HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=241.1, 243.1.
실시예 88: 1-(3,5-디브로모벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(3011)
3,5-디브로모벤즈알데하이드(2.0 mmol, 527 mg)을 GP7에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(3011)을 수득하였다(488 mg, 68%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.11(s, 1H), 8.08(d, J=1.7 Hz, 2H), 7.86(ap. t, J=1.7 Hz, 1H); HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=271.2, 273.2.
실시예 89: 1-[1-(3,4-디클로로페닐)에틸리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(3012)
3,4-디클로로아세토페논(2.0 mmol, 378 mg)을 GP2에 따라 사용하여 백색 분말의 표제 화합물(3012)을 수득하였다(368 mg, 66%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.16(ap. t, J=1.5 Hz, 1H), 7.85(dt, J=8.6, 2.1 Hz, 1H), 7.61(dd, J=8.6, 1.5 Hz, 1H), 2.42(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=245.1, 247.1, 249.1.
실시예 90: 1-(4-n-헥실옥시벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(3013)
4-n-헥실옥시벤즈알데하이드(2.0 mmol, 412 mg)을 GP7에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(3013)을 수득하였다(386 mg, 65%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.12(s, 1H), 7.78(dd, J=6.9, 1.9 Hz, 2H), 7.02(dd, J=6.8, 1.9 Hz, 2H), 4.08(t, J=6.4 Hz, 2H), 1.84(m, 2H), 1.54(m, 2H), 1.43(m, 4H), 0.99(t, J=7.2 Hz, 3H); HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=263.3.
실시예 91: 1-(3,4-디벤질옥시벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(3014)
3,4-디벤질옥시벤즈알데하이드(2.0 mmol, 636 mg)을 GP7에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(3014)을 수득하였다(583 mg, 72%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.05(s, 1H), 7.67(d, J=1.9 Hz, 1H), 7.52-7.45(m, 4H), 7.41-7.31(m, 6H), 7.27(dd, J=8.2, 1.9 Hz, 1H), 7.09(d, J=8.4 Hz, 1H), 5.20(s, 2H), 5.19(s, 2H); HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=375.3.
실시예 92 : 1-[(6-브로모벤조[1,3]디옥솔-5-일)메틸리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(3015)
6-브로모피페로날(2.0 mmol, 458 mg)을 GP8에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(3015)을 수득하였다(539 mg, 84%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.52(s, 1H), 7.76(s, 1H), 7.18(s, 1H), 6.13(s, 2H); HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=285.2, 287.2.
실시예 93: 1-[1-4-브로모페닐)에틸리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(3016)
4-브로모아세토페논(2.0 mmol, 398 mg)을 GP3에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(3016)을 수득하였다(455 mg, 79%). 1H NMR(CD3OD) δ 7.88(m, 2H), 7.63(m, 2H), 2.42(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=255.1, 257.1.
실시예 94: 1-[1-(3-메틸페닐)에틸리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(3017)
3-메틸아세토페논(2.0 mmol, 268 mg)을 GP2에 따라 사용하여 백색 분말의 표제 화합물(3017)을 수득하였다(316 mg, 70%). 1H NMR(CD3OD) δ 7.78(br. s, 1H), 7.72(m, 1H), 7.36(ap. t, J=7.6 Hz, 1H), 7.31(m, 1H), 2.45(s, 3H), 2.42(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=191.2.
실시예 95: 1-(3-메틸벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(3018)
3-메틸벤즈알데하이드(2.0 mmol, 240 mg)을 GP7에 따라 실시하여 표제 화합물(3018)을 연노란색의 분말로 수득하였다(259 mg, 62%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.16(s, 1H), 7.70(br. s, 1H), 7.63(d, J=7.6 Hz, 1H), 7.37(ap. t, J=7.5 Hz, 1H), 7.32(m, 1H), 2.43(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=177.2.
실시예 96: 1-(3,4-디메틸벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(3019)
3,4-디메틸벤즈알데하이드(2.0 mmol, 268 mg)을 GP7에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(3019)을 수득하였다(355 mg, 78%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.12(s, 1H), 7.65(br. s, 1H), 7.55(dd, J=7.8, 1.8 Hz, 1H), 7.25(d, J=7.6 Hz, 1H), 2.37(s, 3H), 2.36(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=191.2.
실시예 97: 1-[1-(4-에틸페닐)에틸리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(3020)
4-에틸아세토페논(2.0 mmol, 296 mg)을 GP2에 따라 사용하여 백색 분말의 표제 화합물(3020)을 수득하였다(209 mg, 44%). 1H NMR(CD3OD) δ 7.86(m, 2H), 7.32(m, 2H), 2.74(q, J=7.6 Hz, 2H), 2.41(s, 3H), 1.30(t, J=7.6 Hz, 3H); HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=205.3.
실시예 98: 1-[1-(3,4-디메틸페닐l에틸리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(3021)
3,4-디메틸아세토페논(2.0 mmol, 296 mg)을 GP2에 따라 사용하여 백색 분말의 표제 화합물(3021)을 수득하였다(415 mg, 87%). 1H NMR(CD3OD) δ 7.74(br. s, 1H), 7.64(m, 1H), 7.23(d, J=8.0, 1H), 2.39(s, 3H), 2.37(s, 3H), 2.35(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=205.3.
실시예 99: 1-(4-n-펜틸벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(3022)
4-n-펜틸벤즈알데하이드(2.0 mmol, 362 mg)을 GP8에 따라 실시하여 백색 분 말의의 표제 화합물(3022)을 수득하였다(247 mg, 47%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.17(s, 1H), 7.76(m, 2H), 7.32(d, J=8.2 Hz, 2H), 2.70(t, J=7.5 Hz, 2H), 1.69(m, 2H), 1.40(m, 4H), 0.96(t, J=7.0 Hz, 3H); HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=233.3.
실시예 100: 1-[1-(4-n-헵틸페닐)에틸리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(3023)
4-n-헥실아세토페논(2.0 mmol, 408 mg)을 GP3에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(3023)을 수득하였다(162 mg, 29%). 1H NMR(CD3OD) δ 7.86(m, 2H), 7.30(d, J=8.6 Hz, 2H), 2.71(t, J=7.4 Hz, 2H), 2.42(s, 3H), 1.69(m, 2H), 1.44-1.35(m, 6H), 0.96(t, J=7.0 Hz, 3H); HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=261.3.
실시예 101: 1-[1-(5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-일)에틸리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(3024)
6-아세틸-1,2,3, 4-테트라하이드로나프탈렌(2.0 mmol, 348 mg)을 GP2에 따라 사용하여 백색 분말의 표제 화합물(3024)을 수득하였다(374 mg, 70%). 1H NMR(CD3OD) δ 7.64(m, 1H), 7.62(br. s, 1H), 7.14(d, J=8.0 Hz, 1H), 2.89-2.82(m, 4H), 2.39(s, 3H), 1.89-1.82(m, 4H); HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트 )[M+H]+=231.3.
실시예 102: 1-(4-에틸벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(3025)
4-에틸벤즈알데하이드(2.0 mmol, 268 mg)을 GP7에 따라 실시하여 표제 화합물(3025)을 연노란색 오일로 수득하였다(272 mg, 60%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.13(s, 1H), 7.74(d, J=8.2 Hz, 2H), 7.31(d, J=8.3 Hz, 2H), 2.71(q, J=7.6 Hz, 2H), 1.27(t, J=7.6 Hz, 3H); HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=191.2.
실시예 103: 1-[1-(2-브로모페닐)에틸리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(3026)
2-브로모아세토페논(2.0 mmol, 398 mg)을 GP2에 따라 사용하여, 두개의 이성체가 7:3으로 혼합된 연분홍색 분말의 표제 화합물(3026)을 수득하였다(355 mg, 61%). 주된 이성체: 1H NMR(CD3OD) δ 7.71(dd, J=8.0, 0.8 Hz, 1H), 7.49(m, 2H), 7.39(m, 1H), 2.43(s, 3H); 소수 이성체 : 1H NMR(CD3OD) δ 7.84(dd, J=8.0, 0.9 Hz, 1H), 7.62(ap. dt, J=7.4, 0.8 Hz, 1H), 7.51(m, 1H), 7.37(m, 1H), 2.39(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=255.2, 257.2(이성체 둘다 함께 용출됨).
실시예 104: 1-{1-[3-(트리플루오로메틸)페닐]에틸리덴아미노}구아니딘 하이드로클로라이드(3027)
3-(트리플루오로메틸)아세토페논(2.0 mmol, 376 mg)을 GP3에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(3027)을 수득하였다(356 mg, 64%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.24(br. s, 1H), 8.22(d, J=8.0 Hz, 1H), 7.79(dd, J=7.6, 0.7 Hz, 1H), 7.69(dt, J=7.8, 0.6 Hz, 1H), 2.48(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=245.2.
실시예 105: 1-{1-[3,5-비스-(트리플루오로메틸페닐]에틸리덴아미노}구아니딘 하이드로클로라이드(3028)
3,5-비스-(트리플루오로메틸)아세토페논(2.0 mmol, 512 mg)을 GP3에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(3028)을 수득하였다(606 mg, 87%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.54(s, 2H), 8.08(s, 1H), 2.53(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=313.2.
실시예 106: 1-[1-(2,5-디메톡시페닐)에틸리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(3029)
2',5'-디메톡시아세토페논(2.0 mmol, 360 mg)을 GP2에 따라 사용하여, 두개의 이성체가 4:1로 혼합된 표제 화합물(3029)을 연노란색의 분말로 수득하였다(402 mg, 75%). 주된 이성체: 1H NMR(CD3OD) δ 7.07-7.03(m, 3H), 3.88(s, 3H), 3.84(s, 3H), 2.37(s, 3H); 소수 이성체: 1H NMR(CD3OD) δ 7.16(br. s, 1H), 7.13(d, J=3.1 Hz, 1H), 6.81(d, J=2.9 Hz, 1H), 3.87(s, 3H), 3.85(s, 3H), 2.33(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=237.3(이성체 둘다 함께 용출됨).
실시예 107: 1-[1-(2-하이드록시-4-메톡시페닐)에틸리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(3030)
2'-하이드록시-4'-메톡시아세토페논(2.0 mmol, 332 mg)을 GP3에 따라 실시하여, 두개의 이성체가 9:1로 혼합된 백색 분말의 표제 화합물(3030)을 수득하였다(473 mg, 92%). 주된 이성체: 1H NMR(CD3OD) δ 7.49(d, J=8.8 Hz, 1H), 6.49(dd, J=8.8, 2.5 Hz, 1H), 6.45(d, J=2.5 Hz, 1H), 3.79(s, 3H), 2.38(s, 3H); 소수 이성체: 1H NMR(CD3OD) δ 7.78(d, J=8.9 Hz, 1H), 6.49(dd, J=8.8, 2.5 Hz, 1H), 6.41(d, J=2.5 Hz, 1H), 3.83(s, 3H), 2.54(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=223.3(이성체 둘다 함께 용출됨).
실시예 108: 1-[1-(4-벤질옥시-2-하이드록시-3-메틸페닐)에틸리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(3031)
4'-벤질옥시-2'-하이드록시-3'-메틸아세토페논(2.0 mmol, 512 mg)을 GP3에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(3031)을 수득하였다(586 mg, 84%). 1H NMR(CD3OD) δ 7.50(m, 3H), 7.45(m, 2H), 7.38(m, 1H), 6.71(d, J=9.0 Hz, 1H), 5.21(s, 2H), 2.49(s, 3H), 2.22(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=313.3
실시예 109: 1-[1-(벤조[1,3]디옥솔-5-일)에틸리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(3032)
3',4'-(메틸렌디옥시)아세토페논(2.0 mmol, 328 mg)을 GP3에 따라 실시하여 표제 화합물(3032)을 연노란색의 분말로 수득하였다(478 mg, 93%). 1H NMR(CD3OD) δ 7.60(d, J=1.7 Hz, 1H), 7.42(dd, J=8.2, 1.7 Hz, 1H), 6.91(d, J=8.2 Hz, 1H), 6.06(s, 2H), 2.38(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=221.2.
실시예 110: 1-(3,4-디클로로벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(1045)
3,4-디클로로벤즈알데하이드(4.0 mmol, 700 mg)을 GP7에 따라 실시하여 백색 분말의 표제 화합물(1045)을 수득하였다(695 mg, 65%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.09(s, 1H), 8.05(d, J=1.9 Hz, 1H), 7.69(dd, J=8.4, 1.9 Hz, 1H), 7.58(d, J=8.4 Hz, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=231.1, 233.1, 235.1.
실시예 111: 1-[1-(4-디메틸아미노페닐)펜틸리덴아미노]구아니딘(3035)
1-(4-디메틸아미노페닐)-펜탄-1-온(0.5 mmol, 102 mg)을 GP8에 따라 사용하고 분취용 HPLC로 정제하여, 조 혼합물을 수득하였다. 원하는 조합 분획을 농축하 고, 20% Na2C03 용액으로 희석한 다음 EtOAc로 추출하였다. 유기층은 Na2S04에서 건조하고, 여과한 다음 진공하에 농축하여, 두개의 이성체가 3:1로 혼합된 백색 분말의 표제 화하물(3035)을 수득하였다(32 mg, 25%). 주된 이성체: 1H NMR(CD3OD) 5 7.31(m, 2H), 6.84(m, 2H), 3.02(s, 6H), 2.63(t, J=7.2 Hz, 2H), 1.52-1.34(m, 4H), 0.94(t, J=7.2 Hz, 3H); 소수 이성체: 1H NMR(CD3OD) δ 7.69(m, 2H), 6.79(m, 2H), 3.30(m, 2H), 3.01(s, 6H), 1.50-1.35(m, 4H), 0.97(t, J=7.2 Hz, 3H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=262.3(이성체 둘다 함께 용출됨).
실시예 112: 1-{4-[에틸-(2-하이드록시에틸)아미노]-2-메틸벤질리덴아미노}구아니딘 하이드로클로라이드(3036)
4-[에틸-(2-하이드록시에틸)아미노]-2-메틸벤즈알데하이드(2.0 mmol, 415 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP7에 따라 사용하였다. 조 물질은 콤비플래쉬상에서 CF6에 따라 실시하여 연노란색 분말의 표제 화합물(30361)을 수득하였다(256 mg, 44%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.32(s, 1H), 7.83(d, J=8.8 Hz, 1H), 6.68(dd, J=8.8, 2.7 Hz, 1H), 6.60(d, J=2.7 Hz, 1H), 3.77(t, J=6.5 Hz, 2H), 3.55(t, J=6.2 Hz, 2H), 3.54(q, J=7.0 Hz, 2H), 2.48(s, 3H), 1.23(t, J=7.0 Hz, 3H); HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=264.3.
실시예 113: 1-(4-디에틸아미노-2-하이드록시벤질리덴아미노)구아니딘 하이 드로클로라이드(3037)
4-디에틸아미노-2-하이드록시벤즈알데하이드(2.0 mmol, 386 mg)을 GP7에 따라 실시하여 표제 화합물(3037)분홍색 분말로 수득하였다(538 mg, 94%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.25(s, 1H), 7.46(d, J=8.9 Hz, 1H), 6.37(dd, J=8.9, 2.5 Hz, 1H), 6.21(d, J=2.5 Hz, 1H), 3.47(q, J=7.0 Hz, 4H), 1.24(t, J=7.0 Hz, 6H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=250.2.
실시예 114: 1-(4-디에틸아미노벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(3038)
4-디에틸아미노벤즈알데하이드(2.0 mmol, 354 mg)을 GP8에 따라 실시하여 표제 화합물(3038)을 연노란색의 분말로 수득하였다(285 mg, 53%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.01(s, 1H), 7.65(d, J=8.4 Hz, 2H), 6.78(d, J=8.1 Hz, 2H), 3.50(q, J=7.0 Hz, 4H), 1.24(t, J=7.0 Hz, 6H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=234.2.
실시예 115: 1-[1-(4-피페리딘-l-일-페닐)에틸리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(3039)
4'-피페리디노아세토페논(2.0 mmol, 406 mg)을 GP3에 따라 실시하여 표제 화합물(3039)을 연노란색의 분말로 수득하였다(493 mg, 84%). 1H NMR(CD3OD) δ 7.83(d, J=8.8 Hz, 2H), 7.01(d, J=8.9 Hz, 2H), 3.35(m, 4H), 2.37(s, 3H), 1.76- 1.70(m, 6H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=260.2.
실시예 116: 1-{4-[메틸-(2-시아노에틸)아미노]벤질리덴아미노}구아니딘 하이드로클로라이드(3040)
3-[(4-포르밀페닐)-메틸아미노]프로피오니트릴(2.0 mmol, 376 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP7에 따라 실시하여 표제 화합물(3040)을 연노란색의 분말로 수득하였다(509 mg, 91%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.07(s, 1H), 7.72(d, J=8.4 Hz, 2H), 6.88(d, J=8.4 Hz, 2H), 3.84(t, J=6.4 Hz, 2H), 3.15(s, 3H), 2.79(t, J=6.5 Hz, 2H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=245.2.
실시예 117: 1-4-[메틸-(2-하이드록시에틸)아미노]벤질리덴아미노}구아니딘 하이드로클로라이드(3041)
4-[메틸-(2-하이드록시에틸)아미노]벤즈알데하이드(2.0 mmol, 358 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP7에 따라 실시하여 표제 화합물(3041)을 연노란색의 분말로 수득하였다(320 mg, 59%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.00(s, 1H), 7.65(d, J=8.0 Hz, 2H), 6.82(d, J=8.0 Hz, 2H), 3.78(t, J=6.4 Hz, 2H), 3.59(t, J=6.4 Hz, 2H), 3.11(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=236.2
실시예 118: 1-(4-디-n-부틸아미노벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(3042)
4-디-n-부틸아미노벤즈알데하이드(2.0 mmol, 466 mg)을 GP7에 따라 실시하여 표제 화합물(3042)을 노란색 분말로 수득하였다(458 mg, 70%). 1H NMR(CD3OD) δ 7.99(s, 1H), 7.62(d, J=8.8 Hz, 2H), 6.72(d, J=8.8 Hz, 2H), 3.40(t, J=7.6 Hz, 4H), 1.65-1.59(m, 4H), 1.46-1.39(m, 4H), 1.02(t, J=7.2 Hz, 6H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=290.2.
실시예 119: 1-(2-메톡시-4-N,N-디에틸아미노벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(3043)
2-메톡시-4-N,N-디에틸아미노벤즈알데하이드(1.0 mmol, 207 mg)을 GP8에 따라 실시하여 두개의 이성체가 9:1로 혼합된 표제 화합물(3043)을 노란색 분말로 수득하였다(152 mg, 57%). 주된 이성체: 1H NMR(CD3OD) δ 8.38(s, 1H), 7.86(d, J=9.0 Hz, 1H), 6.42(m, 1H), 6.26(s, 1H), 3.92(s, 3H), 3.51(q, J=6.8 Hz, 4H), 1.19(t, J=7.0 Hz, 6H); 소수 이성체: 1H NMR(CD3OD) δ 7.63(s, 1H), 7.34(d, J=8.6 Hz, 1H), 6.44(m, 1H), 6.28(s, 1H), 3.96(s, 3H), 3.51(q, J=7.2 Hz, 4H), 0.92(t, J=7.3 Hz, 6H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=264.2(이성체 둘다 함께 용출됨).
실시예 120: 1-(3-시아노벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(4001)
3-시아노벤즈알데하이드(2.0 mmol, 260 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP3에 따라 실시하여 분말의 표제 화합물(4001)을 수득하였다(250 mg, 56%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.26(t, J=1.5 Hz, 1H), 8.19(s, 1H), 8.07(m, 1H), 7.77(m, 1H), 7.62(t, J=7.8 Hz, 1H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=188.1.
실시예 121: 1-[4-트리플루오로메틸) 벤질리덴아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(4002)
4-(트리플루오로메틸)벤즈알데하이드(2.0 mmol, 250 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP3에 따라 실시하여 분말의 표제 화합물(4002)을 수득하였다(400 mg, 75%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.23(s, 1H), 8.01(br. d, J=8.2 Hz, 2H), 7.72(br. d, J=8.3 Hz, 2H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=231.1.
실시예 122: 1-(2,4-디메톡시벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(4003)
2,4-디메톡시벤즈알데하이드(2.0 mmol, 332 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP3에 따라 실시하여 표제 화합물(4003)을 분말로 수득하였다(300 mg, 58%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.39(s, 1H), 7.95(m, 1H), 6.59(m, 2H), 3.87(s, 3H), 3.85(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=223.1.
실시예 123: 1-(2,3-디메톡시벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(4004)
2,3-디메톡시벤즈알데하이드(2.0 mmol, 332 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP3에 따라 실시하여 표제 화합물(4004)을 분말로 수득하였다(370 mg, 72%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.45(s, 1H), 7.62(m, 1H), 7.11(m, 2H), 3.88(s, 3H), 3.87(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=223.1.
실시예 124: l-(4-에톡시벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(4005)
4-에톡시벤즈알데하이드(2.0 mmol, 300 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP3에 따라 실시하여 표제 화합물(4005)을 분말로 수득하였다(290 mg, 60%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.05(s, 1H), 7.71(m, 2H), 6.96(m, 2H), 4.08(q, J=7.0 Hz, 2H), 1.40(t, J=7.0 Hz, 3H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=207.2.
실시예 125: 1-(4-n-프로폭시벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(4006)
4-n-프로폭시벤즈알데하이드(2.0 mmol, 328 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로 클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP3에 따라 실시하여 표제 화합물(4006)을 분말로 수득하였다(250 mg, 49%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.05(s, 1H), 7.72(m, 2H), 6.96(m, 2H), 3.99(t, J=6.5 Hz, 2H), 1.80(dt, J=7.4, 6.7 Hz, 2H), 1.05(t, J=7.4 Hz, 3H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=221.1.
실시예 126: 1-(2,3,6-트리클로로벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(4007)
2,3,6-트리클로로벤즈알데하이드(2.0 mmol, 209 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP3에 따라 실시하여 표제 화합물(4007)을 분말로 수득하였다(470 mg, 78%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.20(s, 1H), 7.81(d, J=7.8 Hz, 1H), 7.68(d, J=7.8 Hz, 1H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=265.0.
실시예 127: 1-(4-클로로벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(4008)
4-클로로벤즈알데하이드(2.0 mmol, 281 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP3에 따라 실시하여 표제 화합물(4008)을 분말로 수득하였다(380 mg, 82%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.12(s, 1H), 7.79(m, 2H), 7.44(m, 2H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=197.1.
실시예 128: 1-(5-브로모-2-플루오로벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(4009)
5-브로모-2-플루오로벤즈알데하이드(2.0 mmol, 406 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP3에 따라 실시하여 표제 화합물(4009)을 분말로 수득하였다(410 mg, 69%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.34(dd, J=6.5, 2.6 Hz, 1H), 8.30(s, 1H), 7.60(ddd, J=8.8, 4.7, 2.6, 1H), 7.15(dd, J=10.2 Hz, J=8.8 Hz, 1H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=259.0.
실시예 129: 1-(2-브로모-5-플루오로벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(4010)
2-브로모-5-플루오로벤즈알데하이드(2.0 mmol, 406 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP3에 따라 실시하여 표제 화합물(4010)을 분말로 수득하였다(450 mg, 76%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.50(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.98(dd, J=9.8, 3.1 Hz, 1H), 7.66(dd, J=8.9, 5.2 Hz, 1H), 7.15(ddd, J=8.9, 7.9 3.1, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=259.0.
실시예 130: 1-(3-클로로벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(4011)
3-클로로벤즈알데하이드(2.0 mmol, 281 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP3에 따라 실시하여 표제 화합물(4011)을 분말로 수득하였다(370 mg, 79%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.11(s, 1H), 7.92(s, 1H), 7.68(d, J=6.5 Hz, 1H), 7.43(m, 2H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=197.1.
실시예 131: 1-(3-플루오로벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(4012)
3-플루오로벤즈알데하이드(2.0 mmol, 248 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP3에 따라 실시하여 표제 화합물(4012)을 분말로 수득하였다(230 mg, 53%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.14(s, 1H), 7.66(d, J=9.9 Hz, 1H), 7.55(d, J=7.6 Hz, 1H), 7.45(dd, J=13.8, 7.7 Hz, 1H), 7.17(m, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=181.1.
실시예 132: 1-(2,3,4-트리메톡시벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(4013)
2,3,4-트리메톡시벤즈알데하이드(2.0 mmol, 392 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP3에 따라 실시하여 표제 화합물(4013)을 분말로 수득하였다(330 mg, 57%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.34(s, 1H), 7.78(d, J=8.9 Hz, 1H), 6.86(d, J=9.0 Hz, 1H), 3.92(s, 3H), 3.90(s, 3H), 3.84(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=253.1.
실시예 133: 1-(3,5-비스트리플루오로메틸벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(4014)
3,5-비스트리플루오로메틸벤즈알데하이드(2.0 mmol, 484 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP3에 따라 실시하여 표제 화합물 (4014)을 분말로 수득하였다(360 mg, 54%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.47(s, 2H), 8.30(s, 1H), 8.02(s, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=299.0.
실시예 134: 1-(5-브로모-2,4-디메톡시벤질리덴아미노)구아니딘 하이드로클로라이드(4015)
5-브로모-2,4-디메톡시벤즈알데하이드(2.0 mmol, 490 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP3에 따라 실시하여 표제 화합물(4015)을 분말로 수득하였다(450 mg, 67%). 1H NMR(CD3OD) δ 8.34(s, 1H), 8.20(s, 1H), 6.69(s, 1H), 3.95(s, 3H), 3.93(s, 3H); HPLC-MS(암모늄 아세테이트)[M+H]+=303.0.
실시예 135: 1-[5-(2-(트리플루오로메틸)페닐)-퓨란-2-일)-메틸렌아미노]구아니딘 하이드로클로라이드(2616)
5-(2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-퓨란카르복스알데하이드(2.0 mmol, 480 mg) 및 아미노구아니딘 하이드로클로라이드(2.0 mmol, 220 mg)를 GP8에 따라 사용하였다. 조 산물은 콤비플래쉬상에서 CF6의 방법으로 정제하여, 두개의 이성체가 9:1로 혼합된 표제 화합물(137FB59-8-HCl)을 연노란색의 분말로 수득하였다(318 mg, 48%). 주된 이성체: 1H NMR(CD3OD) δ 8.07(s, 1H), 7.83(d, J=8.0 Hz, 1H), 7.78(dd, J=8.0, 0.6 Hz, 1H), 7.67(t, J=7.7 Hz, 1H), 7.54(t, J=7.6 Hz, 1H), 7.05(d, J=3.7 Hz, 1H), 6.82(d, J=3.6 Hz, 1H) ; 소수 이성체: 1H NMR(CD3OD) δ 7.84(d, J=8.0 Hz, 1H), 7.79(d, J=8.0 Hz, 1H), 7.72(t, J=7.4 Hz, 1H), 7.61(t, J=7.6 Hz, 1H), 7.50(s, 1H), 7.25(d, J=3.7 Hz, 1H), 6.86(d, J=3.7 Hz, 1H) ; HPLC-MS(암모늄 바이카르보네이트)[M+H]+=297.3(이성체 둘다 함께 용출됨).
화합물의 테스트
실시예 136: 리셉터 선별 및 증폭 기술 분석
기능성 리셉터 분석, 리셉터 선별 및 증폭 기술(R-SAT)를 이용하여, 공지 및 신규 NPFF 작용제의 약리학적 특성을 평가하였다. R-SAT는 미국 특허 5,707, 798,5, 912,132, 및 5,955,281에 개시되어 있으며, 이는 도면을 포함하여 그 전체가 원용에 의해 본 발명에 포함된다.
간략하게 설명하며, NIH3T3 세포는 96 웰 조직 배양 플레이트에서 70-80% 컨플루언스로 배양하였다. Polyfect(Qiagen Inc.)를 이용하여 플라스미드 DNA를 세포에 16-20 시간동안 이동시켰다. R-SAT는 40 ng/well의 리셉터 및 20 ng/well의 베타-갈락토시데이즈 플라스미드 DNA를 이용하여 일반적으로 수행하였다. 사용한 모든 리셉터 및 G-단백질 구조체는 상술한 바와 같이, pSI-유래 포유류 발현 벡터(Promega Inc)내에 위치하고 있다. 공개된 서열(GenBank Accession # AF257210)을 토대로 제작한 올리고데옥시뉴클레오티드 프라이머를 사용하여 테스트 cDNA로부터 NPFF 리셉터 유전자를 증폭하였다. 대규모 형질감염을 위해, 세포에 16-20시간 형질감염시킨 다음, 트립신 처리하여 DMSO 내에서 동결시켰다. 동결 세포를 이후 녹 이고, 약물이 함유된 96 1/2 웰 플레이트의 각 웰당 ~20,000개씩 두었다. 두가지 방법들에서, 세포는 5일간 습윤 대기 조건 5% C02에서 배양하였다. 이후, 플레이트에서 배지를 제거하고 베타-갈락토시다제 기질인 o-니트로페닐 β-D-갈락토피라노사이드(ONPG, 0.5% NP-40가 함유된 PBS내)를 첨가하여, 마커 유전자의 활성을 측정하였다. 발생되는 비색 반응은 스펙트로포토미터 플레이트 리더(Titertek Inc.)에서 420 nm로 측정하였다. 모든 결과는 컴퓨터 프로그램XLFit(IDBSm)로 분석하였다. 효능은 대조군 화합물(예, NPFF2의 경우엔 NPFF)에 의한 최대 반응과 비교한 최대 반응 백분율로 나타내었다. pEC50은 -log(EC50)이며, EC50은 최대 반응율의 50%를 형성하는, 몰 농도 계산치이다.
이러한 실험들로, 가장 의미있는 리셉터인 NPFF1 및 NPFF2 리셉터 서브타입에 대한 이들 물질 각각에 대한 분자 프로파일, 핑거프린트를 제공한다. 표 1에서 볼 수 있는 바와 같이, 특정 화합물을 NPFF1 리셉터에 비해 NPFF2 리셉터를 선택적으로 활성화한다.
Figure 112006020866754-PCT00019
Figure 112006020866754-PCT00020
Figure 112006020866754-PCT00021
Figure 112006020866754-PCT00022
NA = 테스트한 최대 양에서 활성이 검출 안됨.
NT = 테스트 안함
ND = 검출 안됨
효능은 내인성 리간드에 비례한다.
실시예 137: CCI/열 통각과민
랫을 이소플루란을 이용하여 무균 및 가온 조건하에서 마취시켰다. 좌측 사두근을 면도하고, 요오드 용액으로 철저히 문질렀다. 좌골 신경을 좌골 삼분지 말단에 좌골 절흔 수준으로 노출시켰다. 신경은 신경 자체에 외상을 입히지 않으면서 근원 근육 및 연결 조직으로부터 조심스럽게 분리하였다. 4-0 크롬 것트 봉합사를 이용하여 4개의 세미-루즈 봉합사로 가장 가까운 수위에서 시작하여 약 1 mm 떨어진 좌골 절흔 및 좌골 삼분지에 인접한 말단까지 동여 매었다. 동물의 왼쪽 발 또는 신경을 둘러싼 근육조직에서 일부 경력이 관찰될때까지 확대경을 이용하여 봉합사를 팽팽하게 하였다. 근육 절개 부위는 4-0 실크 봉합사로 봉합하고, 피부는 상처 클립으로 고정하였다. 동물이 마취에서 완전히 회복될때까지 면밀히 관찰하였다. 통각과민과 이질통증 실험에서의 외과 처치는 동일하였다.
통각과민 테스트에서, 랫을 투명한 유리 상의 색 플라스틱 박스안에 두고, 31℃ + 1℃로 온도가 유지되는 온도-조절 층에 위치시켰다. 상기 층에는 포컬 라디언트 열원(할로겐 프로젝션 램프 CXL/CXP, 50W, 8v, USHIO, Tokyo)이 포함되어 있다. 열원은 유리 하위에서 이동가능하며, 랫 윗 다리의 발바닥 및에 위치시킬 수 있는 약 3 mm 직경의 라디언트 빔을 가지고 있다.
테스트를 개시하기 위해, 랫은 색 박스안에 두었고, 10-20분간 새로운 환경에 순응하도록 하였다. 라디언트 열원은 이후 뒷다리의 발바닥 아래에 위치시켰다. 열원 활성화시, 타이머를 동시에 작동시켰다. 뒷 다리의 반사 작용이 있을때, 운동 감각으로 타이머 중지와 열원 불활성을 활성화하였다. 열원을 조절하여 무손상 동물에 대한 평균 반응 지연시간을 20초 이하로 하였다. 각각의 랫에서 좌측 뒷다리 후부의 발바닥에 대한, 사전-조작 베이스라인 지연시간을 2일간 3 내지 4회 측정하였다. 처리하기 전 및 후에 2 내지 3회 조작후 좌측 베이스라인 지연(left postoperative baseline latency)을 측정하였다. 조작후 2일 및 4일에 측정한 결과, 통증과민의 정도가 가장 높았으며, 따라서, 본 분석에 활용하였다. 각 동물을 각 테스트에서 적어도 48시간동안 2회 테스트하였다.
열 통각과민증은, 열 자극에 대해 발 움추림 발생 지연시간 감소로 입증된 바와 같이, 외과적으로 처리한 좌측 다리에서 발생되었다. 최대 통각과민증은 조작후 2일에서 4일째에 발생하였다. 외과적으로 처리한 좌측부의 발 움추림 발생 지연시간은 외과처치후 5 내지 12일간에 거쳐 점자 베이스라인 수준으로 돌아왔다. 외과적으로 처리하지 않은 우측 다리는, 12일간의 유사한 다리 움추림 지연 실험에 서 입증된 바와 같이, 외과 조작에 유의할만한 영향을 받지 않았다.
각 군에서 비히클 투여는 열 통각과민을 변화시키지 못하였다. 반대로, NPFF2 선택적 작용제인 화합물 1은 외과적으로 처리한 랫에서 열 통각과민을 투여량 의존적인 양상으로 역위시켰으며, 10 mg/kg 투여량(도 1)에서 통계학적 유의성에 이르렀다.
실시예 138: CCI/촉각 이질통증
상기와 동일한 외과 처치를 한후, CCI 처치후 유의적인 기계적 이질통증의 개시 및 지속은 약 10-14일이었고, 약 2달 계속되었다. 이러한 이질통증 기간(time frame)내에 각 특정 이질통증 실험시, 약물 투여 전 및 후 측정은, log (10* 모발을 구부리는데 필요한 힘, mg)로 표시되고 2-26 g(#'s 4.31-5.46)의 범위를 가지는, 7가닥의 본 프레이(von Frey) 모발로 실시하였다. 각 모발은 좌측 상처난 발바닥 중간에 수직으로 두고, 약간의 구부림을 초래하기에 충분한 힘을 가하여 누르고, 가장 가는 수치의 모발에서 시작해서 가장 두꺼운 모발까지 약 6-8초간 가하였다. 상처난 다리가 심하게 움츠려들때를 양성 반응으로 기록하였고, 이러한 반응은 그 다음 가장 두꺼운 수치의 모발로 동일한 반응을 테스트하여 양성으로 확정하였다. 반응이 2번 관찰되면 이를 수치로 인정하였다. 반응없이 최대 힘 26g 에 이르는 경우, 이는 이질통증 행동에 대한 역치 제한치로 간주하고 수치를 기록하였다. 외과처치후 베이스라인이 6 g 이하로 측정되면, 동물은 이질통증 상태인 것으로 간주하였다. 2일간의 베이스라인 측정은 1일당 1라운드 테스트로 실시하였다. 약물 테스트를 실시한 날에 베이스라인 측정 1라운드를 행하였고, 적절한 전처리를 i.p.로 투여하고, 2라운드 측정치를 기록하였다. 각 동물은 여러가지 실험에 사용하고, 실험당 1회 처리하고 실험들 사이에 적절한 세정 기간을 두었다.
유의할만한 촉각 이질통증은 8일째에 촉발되었고, 외과처치후 35일간 지속되었다. 화합물 1 투여후, 촉각 반응성을 외과처치 시기에 조사하였다. 손상후 비히클을 처리한 군에서의 전처리 수치는, 베이스라인과 통계적으로 유의성이 없었다. 화합물1은 외과적으로 처리한 랫에서의 촉각 이질통증을 투여량 의존적인 방식으로 역위시켰으며, 통계학적 유의성은 3.0 및 10.0 mg/kg 투여량(도 2)이었다.
실시예 139: 급성 열 무통각
약 20 g - 30 g의 수컷 마우스를 테스트 장치에 두었다. 실험 실시일에, 각 마우스를 유리 플랫폼상의 플라스틱 고정대에 위치시켰다. 열원을 유리 플랫폼 하부에서 꼬리 말단에서 약 1 인치 떨어진 꼬리 부분에 맞추었다. 열원(IR45)을 작동시키고, 마우스가 열원으로부터 꼬리를 멀어지도록 움직일때까지 점차 증가시켰다. 마우스가 꼬리를 움직일때까지의 시간을 기록하였다. 만약 동물이 20초내에 반응하지 않으면, 실험자는 열을 끄고 이를 최대 시간으로 시록하였다. 1라운드의 베이스라인 측정을 실시하였다. 테스트 화합물을 투여하고, 적절한 전처리 시간 후 상기 과정을 반복하였다. 급성 통증에 대한 화합물1의 효과는 표 1에 나타내었다. 화합물1은 10.0 mg/kg 투여시(도 3) 유의한 항통각을 나타내었다.
실시예 140: NPFF 리셉터 결합 분석
아래 시약, 보충물 및 방법을 이용하여, 본 발명의 화합물의 NPFF 리셉터에 결합하는 능력을 리셉터 결합 분석으로 용이하게 결정할 수 있다.
1. NPFF 리셉터로 형질감염된 COS세포(또는 NPFF 리셉터를 내인적으로 발현하지 않는 다른 형질간염된 세포주로 치환된 수 있음)를 24웰 배양 플레이트에서 적합한 배양 배지하에서 배양한다.
2. 0.25 nM의 [125I]NPFF 작용액 245 ㎕과 하기 용액(각 용액당 한번) 5 ㎕을 혼합하여 방사표지된 분석액을 제조한다: 50 μM의 미표지된 NPFF 작동액, 0.25 nM [125I] NPFF 작동액, HEPES 용액 단독, 또는 50x 테스트 화합물.
3. 진공원이 부착된 파스테르 피펫을 이용하여 24웰 플레이트에서 배지를 흡입한다. 세포는 세척하지 않는다.
4. 단계 2의 방사표지된 분석액 250 ㎕을 각 분석 웰에 첨가하고, 실온(-22℃)에서 저속의 궤도 교반기상에 60분간 플레이트를 배양한다.
5. 24웰 Brandel 세포 회수기를 이용하여 방사활성 용액을 흡입하여 배양을 종결한다. 상기 웰은 세포 회수기를 이용하여 차가운 HEPES 완충액 0.5 ml로 3회 세척한다.
6. 미세피펫터로 웰에서 용액을 빨아내고, 12 x 75 mm 폴리스티렌 테스트 튜브로 옮긴다. 감마 카운터(Packard, Cobra II)로 분석한다.
7. 특이 결합을 측정하고 해리 상수 Kd를 계산한다.
실시예 142: 그외 실험
52℃ 물에서의 꼬리치기 테스트(tail flick test)에서의 NPFF의 경막내 투여 평가
경막내 장기 내재 카텐터(PE-10; 7.5 cm)를 랫에 이식하여, 허리 척수에 화합물이 전달되도록 하였다. 양성 대조군으로, 랫에 모르핀을 다양한 투여량(3,10 및 30 ㎍)으로 처리하였다. 모르핀은 투약 관련 항통각을 발생시키며, A50은 9.8 ㎍로 계산되었다(8.1 - 12.0; 95% CI). NPFF(100 ㎍) 투여시에는 항통각을 발생시키지 못하였다
52℃ 물에서의 꼬리치기 테스트에서의 화합물 1045의 경막내 투여 평가
경막내 장기 내재 카텐터(PE-10; 7.5 cm)를 랫에 이식하여, 허리 척수에 화합물이 전달되도록 하였다. 화합물 1045 투여시(11.6 또는 115.5 ㎍), 항통각을 유도하지 못하였다.
Figure 112006020866754-PCT00023
52℃ 물에서의 꼬리치기 테스트에서의 1DME의 경막내 투여 평가
경막내 장기 내재 카텐터(PE-10; 7.5 cm)를 랫에 이식하여, 허리 척수에 화합물이 전달되도록 하였다. NPFF 에 의해 형성된 항통각 결손이 펩티드의 분해에 의한 것일 수 있는 가능성을 배제하기 위하여, 1DME(안정한 NPFF 유사체)를 투여하였다. 1DME를 실험한 투여량(5.6, 55.6 또는 556.0 ㎍)으로 투여시, 항통각을 유도하지 못하였다.
화합물 2616-유발성 꼬리치기 이질통증에 대한 dPQR 전신 투여 효과
화합물 2616의 향통각(pronociceptive) 작용이 NFPP1 리셉터를 통해 매개되는지를 확인하기 위해, 화합물 2616을 처리한 랫에 dPQR(Dansyl-Pro-Gln-Arg, NPFF 길항제로 알려짐, Phoenix Pharmaceuticals에서 합성)을 투여하는 약리학적 실험을 실시하였다. 발 움추림의 베이스라인 역치는 천연 랫에서 구하였다. 테스트에 이어, 랫에게 비히클이나 또는 화합물 2616(10 mg/kg, i.p.)을 주었다. 이후, 주입 75분 후에 테스트하였고, 화합물 2616을 복용한 랫의 발 움추림 역치가 비히클을 복용한 랫에 비해 현저하게 감소되었다. 화합물 2616을 복용한 랫의 절반에게 비히클 또는 dPQR(30 mg/kg, i.p.)를 주사하였다. dPQR 투여로 화합물 2616에 의해 유도된 촉각 과민성이 현저하게 중지되었으며, 이는 상기 화합물의 향통각 작용이 NPFF1 리셉터를 통해 매개됨을 시사한다.
핫 플레이트 테스트에서의 화합물 2616의 전신 투여
랫에 비히클 또는 10 mg/kg의 화합물 2616(i.p.)을 주입하고, 52℃ 핫 플레이트 테스트를 이용하여 유해 열 자극에 대한 민감성 변화를 평가하였다. 화합물 2616은 비히클 처리 랫에 비해 핫 플레이트 지연시간을 현저히 감소시켰으며, 이는 열 통각과민이 있음을 의미한다.
몸 회전(barrel rotation)에 대한 NPFF의 측뇌실내 투여 평가
화합물 3093 및 화합물 3099(30 mg/kg, i.p.) 투여 후, 랫은 한 가지 이상의 다음의 양태를 나타내었다: 부동 및 응시(staring), 운동 실조, 뒷다리 벌어짐, , 몸 흔들기, 경련성 사지 외향을 수반한 한쪽으로 눕기, 및 신체 뒤틀림. 이러한 양태는 전형적으로 "몸-회전" 발작에 선행된다.
NPFF(60 ㎍)의 ICV 투여시 몸-회전이 유도된다고 보고된바 있다(Panula, P., A. A. Aarnisalo, and K. Wasowicz, "Neuropeptide FF, a mammalian neuropeptide with multiple functions," Prog Neurobiol, 1996.48 (4-5): p. 461-87). NPFF와 몸-회전에 관한 문헌에서만 언급되었지만, 이러한 효과를 ICV 도관이 이식된 천연 랫을 이용하여 재현해보고자 하였다. 간략하게 개시하면, 3마리 랫중 0마리, 2마리 랫중 1마리, 5마리 랫중 3마리가 NPFF를 60, 120 및 150 ㎍으로 ICV 투여받은 후 각각 몸 회전 발작을 나타내었다.
실시예 143: 포르말린 움찔함(flinching)
천연 SD(Sprague-Dawley) 랫(175-200 g)에 테스트 화합물을 주사하고, 뒷다리 발등에 5.0% 프로말린 용액 50 ㎕을 주사한 다음, 각각의 플라스틱 사육장에 넣어 관찰하였다. 포르말린 주사 후 60분간 통각 반응 횟수(즉, 발 움찔함/때리기/물기)를 측정하였다. 비히클 또는 모르핀, 화합물 3093 또는 화합물 3099중 어느 하나를 10 mg/kg(i.p.)로 랫에 처리하였다. 화합물들은 포르말린 주사하기 15분 전에 투여하였다. 그 결과는 도 4에 나타낸다.
포르말린 모델에서 화합물 3099의 전신 투여 평가
뒷다리 발등에 5.0% 포르말린 용액(50 ㎕)을 주사한 다음 각 플라스틱 사육장에 관찰하기 위해 두어, 강직성 통증 랫 모델을 만들었다. 발 움찔함/때리기/물기를 60분간 측정하였다. 비히클 또는 화합물 3099(10 mg/kg, i.p.)을 포르말린 주사 15분전에 랫에 투여하였다. 화합물 3099는 단계I(포르말린 주사후 0-10 분)에서는 비활성이었으며, 이는 NPFF2 리셉터 선택적 화합물이 급성의 진통제가 아님 을 시사한다. 이러한 사실은 우리의 이전 실험결과와 일치된다. 이와는 대조적으로, 단계II(포르말리 주사후 15-60분)에서는, 화합물 3099가 포르말린-유발성 움찔성을 현저히 중지시켰다(~67.1% 저해). 이 사실은 NPFF2 리셉터 선택적 작용제가 만성 통증 상태(즉, 신경병증 및/또는 염증)에 효과적일 수 있음을 제시한다.
Figure 112006020866754-PCT00024
포르말린 모델에서 화합물 3093의 전신 투여 평가
뒷다리 발등에 5.0% 포르말린 용액(50 ㎕)을 주사한 다음 각 플라스틱 사육장에 관찰하기 위해 두어, 강직성 통증 랫 모델을 만들었다. 발 움찔성/때리기/물기를 60분간 측정하였다. 비히클 또는 화합물 3093(10 mg/kg, i.p.)을 포르말린 주사 15분전에 랫에 투여하였다. 화합물 3093은 단계I(포르말린 주사후 0-10 분)에서는 비활성이었으며, 이는 NPFF2 리셉터 선택적 화합물이 급성의 진통제가 아님을 시사한다. 이러한 사실은 우리의 이전 실험결과와 일치된다. 이와는 대조적으로, 단계II(포르말리 주사후 15-60분)에서는, 화합물 3093은 포르말린-유발성 움추림을 현저히 중지시켰다(~62.1% 저해). 이 사실은 NPFF2 리셉터 선택적 작용제가 만성 통증 상태(즉, 신경병증 및/또는 염증)에 효과적일 수 있음을 제시한다.
Figure 112006020866754-PCT00025
실시예 144: 카라기난-유발성 열 통각과민
해로운 열 자극에 대한 반응성을, 천연 SD(Sprague-Dawley) 웅성 랫(175-200 g)에서 조사하였다. 반응 지연시간은 핫 플레이트 테스트를 이용하여 측정하였다. 랫을 52℃로 유지된 온도가 조절되는 금속 플레이트상의 플렉시 유리 구내에 두었다. 상기 동물이 명백한 통각 반응(즉, 점프, 때리기, 발 구르기, 뒷발 올리기)을 나타낼때까지의 경과 시간을 측정하였다. 테스트 후, 급성 염증성 통증 동물 모델을, 뒷다리에 2% λ-카라기난 이온 100 ㎕을 주입하여 만들었다. 카라기난 주사 3시간 후, 핫 플레이트에서의 지연시간을 다시 측정하였다. 핫 플레이트 지연시간의 현저한 감소는, 열 통각과민이 존재하는 것으로 해석하였다. 랫에 화합물 또는 비히클을 주사한 다음, 약물 주사 후 여러 시점에서 테스트하였다. 실험 결과는 식, % MPE = ((테스트 - 염증 후)/(천연 - 염증 후)) * 100에 의해 최대 가능 효과(Maximum Possible Effect, % MPE)로 변환하였으며, 상기 식에서 테스트 값은 화합물 투여 후의 핫 플레이트 지연시간이고, 감염 후 값은 카라기난 주사 3시간 후 평균 반응이며, 상기 천연 값은 조작 이전의 평균 반응이다. 부가적으로, 테스트 후 부종을 측정하기 위해, 발 두께를 (마이크로미터) 측정하였다. 테스트 화합물 모두 카라기난-유발성 부종 형성을 전도시키지 못하였지만, 이들 화합물은 카라기난- 유발성 열 통각과민을 투여량에 따라 역위시켰다. 그 결과는 도 5에 나타낸다.
카라기난 모델에서 화합물 1045의 전신 투여 평가
급성 염증성 통증 상태를 유발하기 위해, 랫에 2% 카나기난 100 ㎕ 또는 비히클(dH2O)를 주사(i.paw.)하였다. 3시간 후 비히클이 아닌 카라긴 투여 랫에서, 유해한 열 자극에 대한 민감성이 현저하게 증가되었다(즉, 핫 플레이트에서의 지연시간이 감소). 이후 랫에 화합물 1045를 여러가지 투여량으로 처리하고(1, 3 및 10 mg/kg, i.p.), 3시간에 거쳐 핫 플레이트 지연시간을 평가하였다. 화합물 1045는 카라기난 처리 랫에서 열 통각과민을 투여량에 따른 역위를 형성하였다. 상기 화합물의 최대 효과 57.6%이고. A50은 7.8 mg/kg(3.9-16.0, 95% CI)를 나타났다. 비히클 처리 랫에 화합물 1045(10 mg/kg)을 투여한 경우에서는, 유해한 열 자극에 대한 민감성이 현저하게 변이되지 않았으며, 즉, 무통증 상태가 아니었다. 상기 화합물은 카라기난에 의해 유발된 뒷 발의 부종 형성을 현저하게 변이시키진 않았다.
부가적으로, 화합물 1045의 하이드로클로라이드 염의 이후 투여시(10 mg/kg, i.p.), 랫에서 몸을 비트는 행동이 나타났으며, 혼수상태가 나타났다. 이러한 효과는 15 내지 20분간 지속되었다. 이러한 효과는 랫에 10 mg/kg 미만으로 투여한 경우에서는 관찰되지 않았다.
카라기난 모델에서 화합물 3093의 전신 투여 평가
급성 염증성 통증 상태를 유발하기 위해, 랫에 2% 카나기난 100 ㎕ 또는 비 히클(dH2O)를 주사(i.paw.)하였다. 3시간 후 비히클이 아닌 카라긴 투여 랫에서, 유해한 열 자극에 대한 민감성이 현저하게 증가되었다(즉, 핫 플레이트에서의 지연시간이 감소). 이후 랫에 화합물 3093을 여러가지 투여량으로 처리하고(1, 3 및 10 mg/kg, i.p.), 3시간에 거쳐 핫 플레이트 지연시간을 평가하였다. 화합물 3093은 2% 카라기난에 의해 유발된 열 통각과민을 투여량에 따른 역위를 형성하였다. 상기 화합물 3093의 최대 효과는 투여 30-60 분 후에 관찰되었으며, A50은 1.6 mg/kg(1.1 - 2.3, 95% CI)였다. 비히클 처리 랫에 화합물 3093(10 mg/kg)을 투여한 경우에서는, 핫 플레이트 지연시간이 현저하게 변이되지 않았다.
카라기난 모델에서 화합물 3099의 전신 투여 평가
급성 염증성 통증 상태를 유발하기 위해, 랫에 2% 카나기난 100 ㎕ 또는 비히클(dH2O)를 주사(i.paw.)하였다. 3시간 후 비히클이 아닌 카라기난 투여 랫에서, 유해한 열 자극에 대한 민감성이 현저하게 증가되었다(즉, 핫 플레이트에서의 지연시간이 감소). 이후 랫에 화합물 3099를 여러가지 투여량으로 처리하고(1, 3 및 10 mg/kg, i.p.), 3시간에 거쳐 핫 플레이트 지연시간을 평가하였다. 화합물 3099는 2% 카라기난에 의해 유발된 열 통각과민을 투여량에 따른 역위를 형성하였다. 상기 화합물 3099의 최대 효과는 투여 30-60 분 후에 관찰되었으며, A50은 1.1 mg/kg(0.7 - 1.6, 95% CI)였다. 비히클 처리 랫에 화합물 3099(10 mg/kg)을 투여한 경우에서는, 핫 플레이트 지연시간이 현저하게 변이되지 않았다.
실시예 145: L 5 /L 6 SNL-유발성 촉각 이질통증
신경병증성 통증 모델은 김 및 중(Kim SH, Chung JM., "An experimental model for peripheral neuropathy produced by segmental spinal nerve ligation in the rat" Pain, 1992 Sep; 50(3): 355-63)에 의해 개발되었다. 상기 모델에서는 척수와 좌골 신경으로 들어가지 지점 사이의 L5 및 L6 척수 신경의 결착이 요구된다. SNL 수술한 후 7 내지 14일 경과한 후, 랫의 기계적 자극에 대한 이의 반응 역치를 재조사하였다. 발 움추림 역치를 평가하기 위해, 랫은 약 20분간 플렉시유리 구내에 올라가게 하였다. 표준 본 프레이 필라멘트 시리즈(1.56 - 15.0 g, 대수 간격)를, 반응이 나타날때까지 상처난 뒷 발바닥면에 가하였다. 프로빙에 대한 발 움추림 역치는, 기존 방법에 따라 결정하였다(Chaplan SR, Bach FW, Pogrel JW, Chung JM, Yaksh TL., "Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw," J Neurosci Methods, 1994 Ju1; 53 (1): 55-63). 수술전 발 움추림 역치는 거의 0.1 g이었으며, 이후 화합물 투여 이전 및 투여후 다양한 시간에 역치를 결정하였다. 발 움추림 역치의 현저한 감소는 촉각 이질통증의 존재로서 해석된다. 그 결과는 도 6에 나타낸다.
이러한 결과는, 선택적 FF2 리셉터 작용제(예컨대, 화합물 3093 및 3099)가 L5 및 L6 척수 신경의 결착에 의해 유도된 촉각 이질통증을 투여량 의존적으로 역위시킨다는 것을 의미한다. 또한, FF1 리셉터에 대해 더욱 강한 활성을 가지는 화합물들(화합물 1045 및 2616)중 어느 하나는 촉각 이질통증에 대해 거의 효과가 없거 나 또는 촉각 이질통증을 강화시킨다. 또한, 화합물 2616 역시 모의-수술한 랫에서 촉각 이질통을 발생시켰다. 그 결과는 도 7에 나타낸다.
말초 신경 손상 이후에 NPFF 시스템의 내인적 활성을 연구하기 위해, FF1 리셉터 길항제, dPQR의 활성을 신경병증성 통증 모델에서 조사하였다. 이 모델에서, 척수와 좌골 신경으로 들어가지 지점 사이의 L5 및 L6 척수 신경은 결착되어 있다(Kim & Chung, 1992). SNL 수술 후 7 내지 14일 경과한 후, 랫의 기계적 자극에 대한 이의 반응 역치를 재조사하였다. 발 움추림 역치를 평가하기 위해, 랫은 약 20분간 플렉시유리 구내에 올라가게 하였다. 표준 본 프레이 필라멘트 시리즈(1.56 - 15.0 g, 대수 간격)를, 반응이 나타날때까지 상처난 뒷 발바닥면에 가하였다. 프로빙에 대한 발 움추림 역치는, 기존 방법에 따라 결정하였다(Chaplan et al. , 1994). 수술전 발 움추림 역치는 거의 0.1 g이었으며, 이후 화합물 투여 이전 및 투여후 다양한 시간에 역치를 결정하였다. 발 움추림 역치의 현저한 감소는 촉각 이질통증의 존재로서 해석된다. 그 결과는 도 8에 나타낸다.
dPQR의 투여로, L5 및 L6 SNL-유발성 촉각 이질통증이 투여량 의존적으로 역위되었다. 이 결과는, 말초 신경 손상 이후에 신경병증성 통증을 촉진할 수 있는 척수상부(supraspinal)의 FF1 리셉터가 부적절한 수준일 수 있음을 시사한다.
보고서에 따르면, NPFF의 척수 투여는 급성 항통각을 발생시킨다. 그러나, ICV 투여 후, NPFF는 향통각(pronociception)을 초래한다. FF2 리셉터는 뇌와 척수 모두에 위치하지만, FF1 리셉터는 뇌에만 존재하며 척수에는 존재하지 않는 것 으로 입증되었다. 이를 종합해보면, 이러한 결과는 NPFF의 향통각 작용이 척수상부 FF1 리셉터에 의해 매개되는 것을 나타내는 것이다.
FF2 선택적 리셉터 작용제(화합물 3093 및 3099)가 염증성 통각과민과 신경 손상으로 인한 이질통증에 대해 유효하다는 것이 최초 입증되었다. 나아가, FF1 리셉터에 대한 본원에 기재된 화합물의 활성이 증가됨으로써, 통증 완화 효과가 감소되는 것으로 입증되었다. 부가적으로, 화합물 2616과 같은 FF1 작용제의 투여로 인해, 유해한 촉각 자극(즉, 촉각 이질통증)에 대한 민감성이 증가된다. 이러한 민감성 증가는 FF1 길항제인 dPQR을 투여함으로써 완벽하게 차단되었다. 이 결과는, 척수상부의 FF1 및 FF2 리셉터들의 반 작용에 대한 직접적인 최초 증거를 제공한다.
CNS에서 뉴로펩티드의 작용이 내인성 시스템 전역에 조절성 통제를 행사하는 것으로, 일반적으로 받아들이고 있다. NPFF는 통증 감각을 조절하는 것으로 제안되고 있어, 정상적인 조건에서, FF1과 FF2 리셉터들 사이의 상반된 상호작용이 베이스라인 감각 역치의 확립에 관여할 수 있다. 여기서, 내인성 NPFF성 시스템이 점차 활성이 되면, 중요한 척수상부에서의 FF1 리셉터의 활성이 강화되는 것으로 확인되었다. 이러한 결론은, FF1 작용제인 화합물 2616을 천연 랫에 외인적으로 투여한 실험으로부터 뒷받침된다. 또한, 이는 dPQR(FF1 길항제)를 이용한 내인성 FF1 리셉터를 차단하는 경우 감각 역치가 정상화되는 실험에 의해 뒷받침된다.
또한, FF1 길항제와 FF2 작용제의 병용 사용시, 상승적인 양상으로 만성 통증을 봉쇄한다. a) 말초 신경이 손상된 후 척수상부의 FF1 리셉터들의 활성이 증 가되는 것으로 나타나며, b) 척수상부의 FF1 리셉터가 척수상부의 FF2 리셉터의 작용을 대항하며, c) 촉각 이질통증이 척수상부 기작을 통해 매개되므로, 척수상부의 FF1 리셉터의 봉쇄는 노출되는 FF2 리셉터의 무반대 활성을 허용한다.
SNL 모델에서의 화합물 1045의 전신 투여 평가
신경병증성 통증의 랫 모델은 L5 및 L6 척수 신경을 단단히 결착시켜 만들었다. SNL 복용 랫을 수술한 후 약 7-14일이 경과하면, 수술로 인해 무해한 기계 자극에 대한 민감성이 현저하게 증가된다(즉, 발 움추림 역치 감소). 이후 랫에게 여러가지 투여량의 화합물 1045(1, 3 및 10 mg/kg, i.p.)을 처리하였고, 2시간에 거쳐 발 움추림 역치를 조사하였다. 화합물 1045는 SNL 랫에서 촉각 이질통증을 투여량에 따라 역위시켰다. 이 화합물의 최대 효과는 37.9%였다. 화합물 1045를 모의 수술한 랫에게 투여한(10 mg/kg) 경우에는, 무해한 기계적 자극에 대한 민감성이 현저하게 변이되진 않았다.
부가적으로, 화합물 1045(10 mg/kg, i.p.)을 투여한 후, 랫에서 몸을 비트는 행동과 혼수상태가 나타났다. 이러한 효과는 15 내지 20분간 지속되었으며, 모의 수술한 랫과 SNL 랫에서 모두 관찰되었다. 이러한 효과는 랫에 10 mg/kg 미만으로 투여한 경우에서는 관찰되지 않았다.
Figure 112006020866754-PCT00026
SNL 모델에서의 화합물 1045(30 mg/kg)의 전신 투여 평가
SNL 모델에서 화합물 1045의 효과를 증가시키고자, SNL 랫에 30 mg/kg을 투여하였다. 화합물 1045 투여하면, 처음 30분 경과시에 효과가 있었으나, 60분 및 실험 완료 시점까지는, 비히클을 처리한 SNL 랫에서 측정된 발 움추림 역치 이하로 발 움추림 역치 수준이 현저히 감소되었다.
화합물 1045를 30 mg/kg으로 투여하면, 10 mg/kg을 복용한 랫에서도 언급되는 유사한 부작용이 관찰되었다. 그러나, 이러한 작용은 더욱 강하고 지속 시간이 더 길었다(60-90분). 하수증, 발끌며 걷기(shuffling)/발구르기 및 앞/뒷다리 불기를 포함한, 다수의 새로운 부작용이 나타났다.
SNL 모델에서의 화합물 2616의 전신 투여 평가
신경병증성 통증의 랫 모델은 L5 및 L6 척수 신경을 단단히 결착시켜 만들었다. SNL 복용 랫을 수술한 후 약 7-14일이 경과하면, 수술로 인해 무해한 기계 자극에 대한 민감성이 현저하게 증가된다(즉, 발 움추림 역치 감소). 이후 랫에게 여러가지 투여량의 화합물 2616(1, 3 및 10 mg/kg, i.p.)을 처리하였고, 2.5시간에 거쳐 발 움추림 역치를 조사하였다. 화합물 2616은 SNL 랫에서 촉각 이질통증을 투여량에 따라 강화하였다. 또한, 상기 화합물 10 mg/kg은, 모의 수술한 랫의 발 움추림 역치를 현저하게 감소시켰다.
부가적으로, 화합물 2616(10 mg/kg, i.p.)을 투여한 후, 랫에서 몸을 비트는 행동과 혼수상태가 나타났다. 이러한 효과는 60 내지 90분간 지속되었으며, 모의 수술한 랫과 SNL 랫에서 모두 관찰되었다. 이러한 효과는 랫에 10 mg/kg 미만으로 투여한 경우에서는 관찰되지 않았다.
Figure 112006020866754-PCT00027
SNL 모델에서의 dPQR의 전신 투여 효과
신경병증성 통증의 랫 모델은 L5 및 L6 척수 신경을 단단히 결착시켜 만들었다. SNL 복용 랫을 수술한 후 약 7-14일이 경과하면, 수술로 인해 무해한 기계 자극에 대한 민감성이 현저하게 증가된다(즉, 발 움추림 역치 감소). 이후 랫에게 여러가지 투여량의 dPQR(1, 3 및 10 mg/kg, i.p.)을 처리하였고, 3시간에 거쳐 발 움추림 역치를 조사하였다. dPQR 투여로 SNL 랫에서 촉각 이질통증이 투여량에 따라 역위되었다. 이 화합물의 최대 효과는 76.7%이며, A50은 12.3 mg (8.0-18.9; 95% CI)였다. dPQR를 모의 수술한 랫에게 투여한(30 mg/kg) 경우에는, 무해한 기계적 자극에 대한 민감성이 현저하게 변이되진 않았다. dPQR 복용 쥐 모두에서는 부작용이 관찰되지 않았다.
SNL 모델에서의 화합물 3099의 전신 투여 평가
신경병증성 통증의 랫 모델은 L5 및 L6 척수 신경을 단단히 결착시켜 만들었다. SNL 복용 랫을 수술한 후 약 7-14일이 경과하면, 수술로 인해 무해한 기계 자 극에 대한 민감성이 현저하게 증가된다(즉, 발 움추림 역치 감소). 이후 랫에게 여러가지 투여량의 화합물 3099(1, 3 및 10 mg/kg, i.p.)를 처리하였고, 3시간에 거쳐 발 움추림 역치를 조사하였다. NPFF2 선택적 리셉터 작용제인 화합물 3099 투여로 L5/L6 SNL에 의한 촉각 이질통증이 투여량에 따라 역위되었다. 화합물 3099의 최대 효과는 투여 후 30분에 관찰되었으며, A50은 4.1 mg(3.0-5.5; 95% CI)였다. 10 mg/kg을 복용한 쥐에서만, 부작용으로서 하수증 및 혼수상태가 나타났다.
SNL 모델에서의 화합물 3093의 전신 투여 평가
신경병증성 통증의 랫 모델은 L5 및 L6 척수 신경을 단단히 결착시켜 만들었다. SNL 복용 랫을 수술한 후 약 7-14일이 경과하면, 수술로 인해 무해한 기계 자극에 대한 민감성이 현저하게 증가된다(즉, 발 움추림 역치 감소). 이후 랫에게 여러가지 투여량의 화합물 3093(1, 3 및 10 mg/kg, i.p.)을 처리하였고, 3시간에 거쳐 발 움추림 역치를 조사하였다. NPFF2 선택적 리셉터 작용제인 화합물 3093 투여로 L5/L6 SNL에 의한 촉각 이질통증이 투여량에 따라 역위되었다. 화합물 3093의 최대 효과는 투여 후 30분에 관찰되었으며, A50은 6.2 mg(4.5 - 8.1; 95% CI)였다.
SNL 모델에서의 화합물 3099(30 mg/kg)의 전신 투여 평가
SNL 모델에서 화합물 3099의 효능을 증가시키고자, SNL 랫에 30 mg/kg을 투여하였다. SNL-유발성 촉각 이질통증 역위에 거의 완전히 효과가 있지만, 화합물 3099(30 mg/lg, i.p.)는 화합물 3099에서 보고된 바와 유사한 효과를 나타내었다. 특히, 랫은 다음과 같은 한가지 이상의 행동 양태를 나타내었다: 부동 및 응시성(staring), 운동 실조, 뒷다리 벌어짐, 몸 흔들기, 경련성 사지 외향을 수반한 한쪽으로 눕기, 및 신체 뒤틀림. 이러한 양태는 일시적이며, 행동 평가를 방해하진 않았다. 또한, 이러한 행동은 순각적이었서, 테스트 종료 시점에서는 이러한 작용이 해결되었다.
SNL 모델에서의 화합물 3099의 경구 투여 평가
신경병증성 통증의 랫 모델은 L5 및 L6 척수 신경을 단단히 결착시켜 만들었다. SNL 복용 랫을 수술한 후 약 14-28일이 경과하면, 모의 수술군이 아닌 수술군에서 무해한 기계 자극에 대한 민감성이 현저하게 증가된다(즉, 발 움추림 역치 감소). 이후 랫에게 여러가지 투여량의 화합물 3099(6, 60 및 200 mg/kg, i.p.)를 처리하였고, 3시간에 거쳐 발 움추림 역치를 조사하였다. NPFF2 선택적 리셉터 작용제인 화합물 3099 투여로 L5/L6 SNL에 의한 촉각 이질통증이 투여량에 따라 역위되었다. 화합물 3099의 최대 효과는 투여 후 60-90분에 관찰되었으며, A50은 50.5 mg(22.1 - 115.5; 95% CI)였다.
실시예 146: cAMP 분석
하나의 유전자가 형질감염된 대부분의 세포가 다른 유전자로 동시 형질감염될 수 있다는 사실을 이용하여, 형질감염된 세포에서의 cAMP를 측정하기 위한 분석을 확인하였다. 따라서, NPFF1 및 NPFF2 리셉터를 5:1의 비율로 Gs-커플 리셉터 (EP2)와 함께 형질감염시켰다. 형질감염되지 않은 HEK-T 세포는, 10 μM의 높은 투여량에서 PGE2(EP2에 대한 작용제)에 대해 무반응이다. 세포를 EP2 리셉터에 2X EC50(170 nM)인 약 300 nM의 PGE2로 일반적으로 자극하였다. 또한, 세포에 Gi-커플 리셉터의 DNA 함량의 1/2 내지 1/5 수준으로 AC5를 동시 형질감염시켰을때, 일부 경우들에서 상기 분석의 민감도가 개선되었다.
이러한 방법을 NPFF1 및 NPFF2 리셉터를 이용한 HEK-T 세포의 형질감염에 일상적으로 사용하였다. 48시간 후, 백색 바닥 플레이트에 다양한 농도의 NPFF 리간드 및 EP2 300 nM 존재하에서, DiscoveRx 분석 프로토콜을 이용하여 형질감염된 세포 현탁액으로부터 cAMP 분석을 확립하였다. 세포는 37 ℃에서 15분 배양하였다. 배양을 끝낸 다음, 세포를 용혈시켜 DiscoveRx 프로토콜에 따라 상기 분석의 나머지 과정을 실시하였다.
길항제 분석을 위해, 세포를 길항제와 37 ℃에서 15분간 전배양한 다음 작용제와 PGE2를 순서대로 첨가하였다. 세포는 37 ℃에서 15분간 배양한 다음 세포를 용혈시키고 per 키트 프로토콜에 따라 진행하였다.
R-SAT 분석은 실시예 136에서와 같이 수행하였다.
그 결과는 하기 표 2에 나타낸다. 단일 화합물에 대한 다중 실험은 다른 군으로 나타낸다.
표 2
Figure 112006020866754-PCT00028
SEQUENCE LISTING <110> ACADIA PHARMACEUTICALS INC. Scully, Audra L. Davis, Robert E. Vanover, Kimberly E. Gardell, Luis Roberto Lameh, Jelveh Kelly, Nicholas Michael Bertozzi, Fabio <120> TREATING NEUROPATHIC PAIN WITH NEUROPEPTIDE FF RECEPTOR 2 AGONISTS <130> ACADIA.038VPC <150> 60/508,008 <151> 2003-10-02 <150> 60/506,130 <151> 2003-09-25 <160> 2 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 1560 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 tgcctctgcc cacctcttct cttctgcttc catattacag gttcatcatg aatgagaaat 60 gggacacaaa ctcttcagaa aactggcatc ccatctggaa tgtcaatgac acaaagcatc 120 atctgtactc agatattaat attacctatg tgaactacta tcttcaccag cctcaagtgg 180 cagcaatctt cattatttcc tactttctga tcttcttttt gtgcatgatg ggaaatactg 240 tggtttgctt tattgtaatg aggaacaaac atatgcacac agtcactaat ctcttcatct 300 taaacctggc cataagtgat ttactagttg gcatattctg catgcctata acactgctgg 360 acaatattat agcaggatgg ccatttggaa acacgatgtg caagatcagt ggattggtcc 420 agggaatatc tgtcgcagct tcagtcttta cgttagttgc aattgctgta gataggttcc 480 agtgtgtggt ctaccctttt aaaccaaagc tcactatcaa gacagcgttt gtcattatta 540 tgatcatctg ggtcctagcc atcaccatta tgtctccatc tgcagtaatg ttacatgtgc 600 aagaagaaaa atattaccga gtgagactca actcccagaa taaaaccagt ccagtctact 660 ggtgccggga agactggcca aatcaggaaa tgaggaagat ctacaccact gtgctgtttg 720 ccaacatcta cctggctccc ctctccctca ttgtcatcat gtatggaagg attggaattt 780 cactcttcag ggctgcagtt cctcacacag gcaggaagaa ccaggagcag tggcacgtgg 840 tgtccaggaa gaagcagaag atcattaaga tgctcctgat tgtggccctg ctttttattc 900 tctcatggct gcccctgtgg actctaatga tgctctcaga ctacgctgac ctttctccaa 960 atgaactgca gatcatcaac atctacatct acccttttgc acactggctg gcattcggca 1020 acagcagtgt caatcccatc atttatggtt tcttcaacga gaatttccgc cgtggtttcc 1080 aagaagcttt ccagctccag ctctgccaaa aaagagcaaa gcctatggaa gcttatgccc 1140 taaaagctaa aagccatgtg ctcataaaca catctaatca gcttgtccag gaatctacat 1200 ttcaaaaccc tcatggggaa accttgcttt ataggaaaag tgctgaaaaa ccccaacagg 1260 aattagtgat ggaagaatta aaagaaacta ctaacagcag tgagatttaa aaagagctag 1320 tgtgataatc ctaactctac tacgcattat atatttaaat ccattgcttt ttgtggcttt 1380 gcacttcaaa tttttcaaag aatgttctaa ataaaacatt tactgaaagc cctctctggc 1440 aaaaaaatta aaaataaaca aaaatggtca taagatcata aacaatctta tgttgtataa 1500 aaatacgtag agtgacttag acatgtttgc atgaataaat atatttctag agaacagtta 1560 <210> 2 <211> 420 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Asn Glu Lys Trp Asp Thr Asn Ser Ser Glu Asn Trp His Pro Ile 1 5 10 15 Trp Asn Val Asn Asp Thr Lys His His Leu Tyr Ser Asp Ile Asn Ile 20 25 30 Thr Tyr Val Asn Tyr Tyr Leu His Gln Pro Gln Val Ala Ala Ile Phe 35 40 45 Ile Ile Ser Tyr Phe Leu Ile Phe Phe Leu Cys Met Met Gly Asn Thr 50 55 60 Val Val Cys Phe Ile Val Met Arg Asn Lys His Met His Thr Val Thr 65 70 75 80 Asn Leu Phe Ile Leu Asn Leu Ala Ile Ser Asp Leu Leu Val Gly Ile 85 90 95 Phe Cys Met Pro Ile Thr Leu Leu Asp Asn Ile Ile Ala Gly Trp Pro 100 105 110 Phe Gly Asn Thr Met Cys Lys Ile Ser Gly Leu Val Gln Gly Ile Ser 115 120 125 Val Ala Ala Ser Val Phe Thr Leu Val Ala Ile Ala Val Asp Arg Phe 130 135 140 Gln Cys Val Val Tyr Pro Phe Lys Pro Lys Leu Thr Ile Lys Thr Ala 145 150 155 160 Phe Val Ile Ile Met Ile Ile Trp Val Leu Ala Ile Thr Ile Met Ser 165 170 175 Pro Ser Ala Val Met Leu His Val Gln Glu Glu Lys Tyr Tyr Arg Val 180 185 190 Arg Leu Asn Ser Gln Asn Lys Thr Ser Pro Val Tyr Trp Cys Arg Glu 195 200 205 Asp Trp Pro Asn Gln Glu Met Arg Lys Ile Tyr Thr Thr Val Leu Phe 210 215 220 Ala Asn Ile Tyr Leu Ala Pro Leu Ser Leu Ile Val Ile Met Tyr Gly 225 230 235 240 Arg Ile Gly Ile Ser Leu Phe Arg Ala Ala Val Pro His Thr Gly Arg 245 250 255 Lys Asn Gln Glu Gln Trp His Val Val Ser Arg Lys Lys Gln Lys Ile 260 265 270 Ile Lys Met Leu Leu Ile Val Ala Leu Leu Phe Ile Leu Ser Trp Leu 275 280 285 Pro Leu Trp Thr Leu Met Met Leu Ser Asp Tyr Ala Asp Leu Ser Pro 290 295 300 Asn Glu Leu Gln Ile Ile Asn Ile Tyr Ile Tyr Pro Phe Ala His Trp 305 310 315 320 Leu Ala Phe Gly Asn Ser Ser Val Asn Pro Ile Ile Tyr Gly Phe Phe 325 330 335 Asn Glu Asn Phe Arg Arg Gly Phe Gln Glu Ala Phe Gln Leu Gln Leu 340 345 350 Cys Gln Lys Arg Ala Lys Pro Met Glu Ala Tyr Ala Leu Lys Ala Lys 355 360 365 Ser His Val Leu Ile Asn Thr Ser Asn Gln Leu Val Gln Glu Ser Thr 370 375 380 Phe Gln Asn Pro His Gly Glu Thr Leu Leu Tyr Arg Lys Ser Ala Glu 385 390 395 400 Lys Pro Gln Gln Glu Leu Val Met Glu Glu Leu Lys Glu Thr Thr Asn 405 410 415 Ser Ser Glu Ile 420

Claims (36)

  1. 화합물을 NPFF2 리셉터에 접촉시키는 단계; 및
    상기 화합물이 상기 NPFF2 리셉터에 결합하는지를 판단하는 단계를 포함하는, 통증 치료에 유효한 화합물의 동정 방법.
  2. 한가지 이상의 NPFF2 리셉터 활성에 작용할 수 있는 화합물의 스크리닝 방법에 있어서, 상기 방법은
    a) NPFF2 리셉터를 발현하는 재조합 핵산을 포함하는 재조합 세포에 테스트 화합물을 접촉시키는 단계;
    b) 상기 NPFF2 리셉터의 한가지 이상의 활성에 작용하는 상기 테스트 화합물의 능력을 판단하고, 상기 재조합 핵산을 포함하지 않는 세포에서의 상기 테스트 화합물의 한가지 이상의 NPFF2 리셉터 활성에 작용하는 능력과 비교하는 단계를 포함하며,
    상기 세포는 내인성 핵산으로부터 기능적 NPFF2 리셉터를 발현하지 않으며,
    상기 재조합 핵산은
    a) 서열번호 1의 핵산;
    b) 서열번호 2의 아미노산을 코딩하는 핵산;
    c) 한가지 이상의 NPFF2 리셉터 활성을 가지는 리셉터를 코딩하며, 서열번호 1의 적어도 20개의 연속 뉴클레오티드의 상보체와 엄격 혼성화 조건에서 혼성화할 수 있는 적어도 20개의 연속 뉴클레오티드를 포함하는 NPFF2 리셉터를 코딩하는 이의 유도체;
    로 이루어진 군으로부터 선택된 NPFF2 리셉터 핵산을 포함하는 것을 특징으로 하는, 한가지 이상의 NPFF2 리셉터 활성에 작용할 수 있는 화합물의 스크리닝 방법.
  3. 제 2항에 있어서, 상기 NPFF2 리셉터의 핵산은 서열번호 2의 아미노산 서열을 코딩하는 적어도 20개의 연속 뉴클레오티드의 상보체와 엄격 혼성화 조건에서 혼성화할 수 있는 적어도 20개의 연속 뉴클레오티드를 포함하는 서열번호 2의 아미노산 서열 유도체를 코딩하는 것을 특징으로 하는, 스크리닝 방법.
  4. NPFF2 리셉터 서브타입을 활성화하는 적어도 하나의 화합물의 유효량을 생물에 접촉시키는 단계를 포함하는, 임의 타입의 급성 및 만성 통증을 치료하는 방법.
  5. 제 4항에 있어서, 상기 통증은 당뇨병, 바이러스 감염, 과민성 대장 증후군, 절단, 암 또는 화학적 손상과 관련된 통증인 것을 특징으로 하는, 임의 타입의 급성 및 만성 통증을 치료하는 방법.
  6. NPFF2 리셉터에 적어도 하나의 테스트 화합물을 접촉시키는 단계; 및
    상기 NPFF2 리셉터의 작용제인 테스트 화합물을 동정하기 위하여 상기 NPFF2 리셉터의 활성 수준의 증가를 판단하는 단계를 포함하는, NPFF2 리셉터의 작용제인 화합물의 동정 방법.
  7. 제 6항에 있어서, 동정한 상기 작용제는 NPFF1이 아닌 NPFF2 리셉터를 활성화하는 것을 특징으로 하는, NPFF2 리셉터의 작용제 화합물의 동정 방법.
  8. 제 6항에 있어서, 동정한 상기 작용제는 NPFF2 리셉터에 선택적인 것을 특징으로 하는, NPFF2 리셉터의 작용제인 화합물의 동정 방법.
  9. NPFF2 리셉터를 발현하는 세포를 배양하는 단계;
    세포 또는 세포로부터 추출된 성분을 하나 이상의 테스트 화합물과 배양하는 단계; 및
    NPFF 리셉터 작용제인 테스트 화합물을 동정하기 위해, NPPF2 리셉터의 활성 수준의 증가를 판단하는 단계를 포함하는, NPFF2 리셉터의 작용제 화합물의 동정 방법.
  10. 제 7항에 있어서, 상기 배양 단계의 세포는 NPFF2 리셉터를 과다발현하는 것을 특징으로 하는, NPFF2 리셉터의 작용제 화합물의 동정 방법.
  11. 통증 환자에게 아래 구조식을 가지는 식I 또는 식II, 또는 제약학적으로 허 용가능한 그의 염, 에스테르, 아미드 또는 프로드럭 중 적어도 하나를 유효량으로 접촉시켜, 상기 통증의 한가지 이상의 증상이 감소되는 단계를 포함하는, 통증 치료 방법:
    Figure 112006020866754-PCT00029
    Figure 112006020866754-PCT00030
    상기 식에서,
    R1은 수소, C1-C10의 직쇄 또는 분지형 알킬, C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알케닐, C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알키닐, 및 C3-C10의 사이클로알킬이고;
    R2, R3, R4, R5 및 R6은 각각 독립적으로 수소, C1-C10의 직쇄 또는 분지형 알킬, C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알케닐, C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알키닐, C3-C10의 사이클로알킬, 치환 또는 비치환된 아릴 또는 헤테로아릴, 하이드록시, 할로겐화된 에테르, 니트로, 아미노, 할로겐, 퍼할로알킬, -OR7, -N(R7)2, -CN, -C(=Z)R7, -C(=Z)0R7, -C(=Z)N(R7)2, -N(R7)-C(=Z)R7, -N(R7)-C(=Z)N(R7)2, -OC(=Z)R7 및 -SR7로 이루어진 군으로부터 선택되며;
    Z는 산소 또는 황이고, 각 R7은 독립적으로 수소, 아릴 또는 헤테로아 릴로 선택적으로 치환된 C1-C10의 직쇄 또는 분지형 알킬, 아릴 또는 헤테로아릴로 선택적으로 치환된 C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알케닐, 아릴 또는 헤테로아릴로 선택적으로 치환된 C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알키닐, C3-C10의 사이클로알킬, C5-C10의 사이클로알케닐, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는
    R2, R3 및 그것들이 결합된 탄소는 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 또는 헤테로사이클 고리를 형성하거나, 또는
    R3 및 R4 및 그것들이 결합된 탄소는 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 또는 헤테로사이클 고리를 형성하거나, 또는
    R4 및 R5 및 그것들이 결합된 탄소는 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 또는 헤테로사이클 고리를 형성하거나, 또는
    R5 및 R6 및 그것들이 결합된 탄소는 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 또는 헤테로사이클 고리를 형성하며;
    Q는 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 및 헤테로사이클 고리로 이루어진 군으로부터 선택된다.
  12. 제 1항에 있어서, 상기 접촉 단계 이전에 통증 치료가 필요한 개체를 선별하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 통증 치료에 유효한 화합물의 동정 방법.
  13. 제 11항에 있어서, 상기 식I 또는 식 II의 화합물은 NPFF2 리셉터 서브타입을 선택적으로 활성화하는 것을 특징으로 하는, 통증 치료 방법.
  14. 제 11항에 있어서, 상기 통증은 당뇨병, 바이러스 감염, 과민성 대장 증후군, 절단, 암, 염증 또는 화학적 손상과 관련된 통증인 것을 특징으로 하는, 통증 치료 방법.
  15. 제 11항에 있어서, 상기 통증은 신경병증성 통증인 것을 특징으로 하는, 통증 치료 방법.
  16. 제 15항에 있어서, 상기 개체에 통각과민이 존재하는 것을 특징으로 하는, 통증 치료 방법.
  17. 제 15항에 있어서, 상기 개체에 이질통증(allodynia)이 존재하는 것을 특징으로 하는, 통증 치료 방법.
  18. 통각과민 또는 이질통증 환자에게 아래 구조식을 가지는 식I 또는 식II, 또는 제약학적으로 허용가능한 그의 염, 에스테르, 아미드 또는 프로드럭 중 적어도 하나의 화합물을 제공하는 단계; 및
    상기 적어도 하나의 화합물이 개체의 통각과민 또는 이질통증을 감소시키는지를 확인하는 단계를 포함하는, 개체에서 통각과민 또는 이질통증을 경감시키는 화합물의 동정 방법:
    Figure 112006020866754-PCT00031
    Figure 112006020866754-PCT00032
    상기 식에서,
    R1은 수소, C1-C10의 직쇄 또는 분지형 알킬, C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알케닐, C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알키닐, 및 C3-C10 사이클로알킬이고;
    R2, R3, R4, R5 및 R6은 각각 독립적으로 수소, C1-C10의 직쇄 또는 분지형 알킬, C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알케닐, C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알키닐, C3-C10의 사이클로알킬, 치환 또는 비치환된 아릴 또는 헤테로아릴, 하이드록시, 할로겐화된 에테르, 니트로, 아미노, 할로겐, 퍼할로알킬, -OR7, -N(R7)2, -CN, -C(=Z)R7, -C(=Z)0R7, -C(=Z)N(R7)2, -N(R7)-C(=Z)R7, -N(R7)-C(=Z)N(R7)2, -OC(=Z)R7 및 -SR7로 이루어진 군으로부터 선택되며;
    Z는 산소 또는 황이고, 각 R7은 독립적으로 수소, 아릴 또는 헤테로아 릴로 선택적으로 치환된 C1-C10의 직쇄 또는 분지형 알킬, 아릴 또는 헤테로아릴로 선택적으로 치환된 C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알케닐, 아릴 또는 헤테로아릴로 선택적으로 치환된 C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알키닐, C3-C10의 사이클로알킬, C5-C10의 사이클로알케닐, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는
    R2, R3 및 그것들이 결합된 탄소는 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 또는 헤테로사이클 고리를 형성하거나, 또는
    R3 및 R4 및 그것들이 결합된 탄소는 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 또는 헤테로사이클 고리를 형성하거나, 또는
    R4 및 R5 및 그것들이 결합된 탄소는 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 또는 헤테로사이클 고리를 형성하거나, 또는
    R5 및 R6 및 그것들이 결합된 탄소는 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 또는 헤테로사이클 고리를 형성하며;
    Q는 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 및 헤테로사이클 고리로 이루어진 군으로부터 선택된다.
  19. 제 18항에 있어서, 상기 제공 단계 이전에 통각과민 또는 이질통증 환자를 선별하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 개체에서 통각과민 또는 이질통증을 경감시키는 화합물의 동정 방법.
  20. 제 18항에 있어서, 상기 적어도 하나의 화합물은 NPFF1 리셉터가 아닌 NPFF2 리셉터에 선택적인 것을 특징으로 하는, 개체에서 통각과민 또는 이질통증을 경감시키는 화합물의 동정 방법.
  21. 제 18항에 있어서, 상기 통각과민은 열 통각과민인 것을 특징으로 하는, 개체에서 통각과민 또는 이질통증을 경감시키는 화합물의 동정 방법.
  22. 제 18항에 있어서, 상기 이질통증은 촉각 이질통증인 것을 특징으로 하는, 개체에서 통각과민 또는 이질통증을 경감시키는 화합물의 동정 방법.
  23. 아래 구조식을 가지는 식I 또는 식II, 또는 제약학적으로 허용가능한 그의 염, 에스테르, 아미드 또는 프로드럭 중 적어도 하나의 화합물을 NPFF2 리셉터와 접촉시키는 단계; 및
    NPFF2 리셉터의 작용제인 식I 또는 식II의 화합물을 동정하기 위하여 상기 NPFF2 리셉터의 활성 수준의 증가를 확인하는 단계를 포함하는, NPFF2 리셉터의 작용제인 식I 또는 식II의 화합물을 동정하는 방법:
    Figure 112006020866754-PCT00033
    Figure 112006020866754-PCT00034
    상기 식에서,
    R1은 수소, C1-C10의 직쇄 또는 분지형 알킬, C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알케닐, C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알키닐, 및 C3-C10의 사이클로알킬이고;
    R2, R3, R4, R5 및 R6은 각각 독립적으로 수소, C1-C10의 직쇄 또는 분지형 알킬, C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알케닐, C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알키닐, C3-C10의 사이클로알킬, 치환 또는 비치환된 아릴 또는 헤테로아릴, 하이드록시, 할로겐화된 에테르, 니트로, 아미노, 할로겐, 퍼할로알킬, -OR7, -N(R7)2, -CN, -C(=Z)R7, -C(=Z)0R7, -C(=Z)N(R7)2, -N(R7)-C(=Z)R7, -N(R7)-C(=Z)N(R7)2, -OC(=Z)R7 및 -SR7로 이루어진 군으로부터 선택되며;
    Z는 산소 또는 황이고, 각 R7은 독립적으로 수소, 아릴 또는 헤테로아릴로 선택적으로 치환된 C1-C10의 직쇄 또는 분지형 알킬, 아릴 또는 헤테로아릴로 선택적으로 치환된 C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알케닐, 아릴 또는 헤테로아릴로 선 택적으로 치환된 C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알키닐, C3-C10의 사이클로알킬, C5-C10의 사이클로알케닐, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는
    R2, R3 및 그것들이 결합된 탄소는 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 또는 헤테로사이클 고리를 형성하거나, 또는
    R3 및 R4 및 그것들이 결합된 탄소는 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 또는 헤테로사이클 고리를 형성하거나, 또는
    R4 및 R5 및 그것들이 결합된 탄소는 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 또는 헤테로사이클 고리를 형성하거나, 또는
    R5 및 R6 및 그것들이 결합된 탄소는 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 또는 헤테로사이클 고리를 형성하며;
    Q는 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 및 헤테로사이클 고리로 이루어진 군으로부터 선택된다.
  24. NPFF2 리셉터를 발현하는 세포를 배양하는 단계;
    상기 세포를 아래 구조식을 가지는 식I 또는 식II, 또는 제약학적으로 허용가능한 그의 염, 에스테르, 아미드 또는 프로드럭 중 적어도 하나의 화합물과 배양하는 단계; 및
    NPFF2 리셉터의 작용제인 식I 또는 식II의 화합물을 동정하기 위하여 상기 NPFF2 리셉터의 활성 수준 증가를 확인하는 단계를 포함하는, NPFF2 리셉터의 작용제 화합물을 동정하는 방법:
    Figure 112006020866754-PCT00035
    Figure 112006020866754-PCT00036
    상기 식에서,
    R1은 수소, C1-C10의 직쇄 또는 분지형 알킬, C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알케닐, C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알키닐, 및 C3-C10의 사이클로알킬이고;
    R2, R3, R4, R5 및 R6은 각각 독립적으로 수소, C1-C10의 직쇄 또는 분지형 알킬, C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알케닐, C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알키닐, C3-C10의 사이클로알킬, 치환 또는 비치환된 아릴 또는 헤테로아릴, 하이드록시, 할로겐화된 에테르, 니트로, 아미노, 할로겐, 퍼할로알킬, -OR7, -N(R7)2, -CN, -C(=Z)R7, -C(=Z)0R7, -C(=Z)N(R7)2, -N(R7)-C(=Z)R7, -N(R7)-C(=Z)N(R7)2, -OC(=Z)R7 및 -SR7로 이루어진 군으로부터 선택되며;
    Z는 산소 또는 황이고, 각 R7은 독립적으로 수소, 아릴 또는 헤테로아릴로 선택적으로 치환된 C1-C10의 직쇄 또는 분지형 알킬, 아릴 또는 헤테로아릴로 선택적으로 치환된 C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알케닐, 아릴 또는 헤테로아릴로 선택적으로 치환된 C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알키닐, C3-C10의 사이클로알킬, C5-C10의 사이클로알케닐, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는
    R2, R3 및 그것들이 결합된 탄소는 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 또는 헤테로사이클 고리를 형성하거나, 또는
    R3 및 R4 및 그것들이 결합된 탄소는 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 또는 헤테로사이클 고리를 형성하거나, 또는
    R4 및 R5 및 그것들이 결합된 탄소는 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 또는 헤테로사이클 고리를 형성하거나, 또는
    R5 및 R6 및 그것들이 결합된 탄소는 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 또는 헤테로사이클 고리를 형성하며;
    Q는 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 및 헤테로사이클 고리로 이루어진 군으로부터 선택된다.
  25. 제 24항에 있어서, 동정한 상기 작용제는 NPFF1 리셉터가 아닌 NPFF2 리셉터를 활성화는 것을 특징으로 하는, NPFF2 리셉터의 작용제 화합물을 동정하는 방법.
  26. 제 24항에 있어서, 동정한 상기 작용제는 NPFF2 리셉터에 선택적인 것을 특 징으로 하는, NPFF2 리셉터의 작용제 화합물을 동정하는 방법.
  27. NPFF2 리셉터를 아래 구조식을 가지는 식I 또는 식II, 또는 제약학적으로 허용가능한 그의 염, 에스테르, 아미드 또는 프로드럭 중 적어도 하나의 화합물과 접촉시키는 단계; 및
    상기 식I 또는 식II의 화합물이 NPFF2 리셉터에 결합하는지 여부를 확인하는 단계를 포함하는, NPFF2 리셉터의 작용제 화합물을 동정하는 방법:
    Figure 112006020866754-PCT00037
    Figure 112006020866754-PCT00038
    상기 식에서,
    R1은 수소, C1-C10의 직쇄 또는 분지형 알킬, C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알케닐, C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알키닐, 및 C3-C10의 사이클로알킬이고;
    R2, R3, R4, R5 및 R6은 각각 독립적으로 수소, C1-C10의 직쇄 또는 분지형 알킬, C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알케닐, C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알키닐, C3-C10의 사이클로알킬, 치환 또는 비치환된 아릴 또는 헤테로아릴, 하이드록시, 할로겐화된 에테르, 니트로, 아미노, 할로겐, 퍼할로알킬, -OR7, -N(R7)2, -CN, -C(=Z)R7, -C(=Z)0R7, -C(=Z)N(R7)2, -N(R7)-C(=Z)R7, -N(R7)-C(=Z)N(R7)2, -OC(=Z)R7 및 -SR7로 이루어진 군으로부터 선택되며;
    Z는 산소 또는 황이고, 각 R7은 독립적으로 수소, 아릴 또는 헤테로아릴로 선택적으로 치환된 C1-C10의 직쇄 또는 분지형 알킬, 아릴 또는 헤테로아릴로 선택적으로 치환된 C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알케닐, 아릴 또는 헤테로아릴로 선택적으로 치환된 C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알키닐, C3-C10의 사이클로알킬, C5-C10의 사이클로알케닐, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는
    R2, R3 및 그것들이 결합된 탄소는 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 또는 헤테로사이클 고리를 형성하거나, 또는
    R3 및 R4 및 그것들이 결합된 탄소는 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 또는 헤테로사이클 고리를 형성하거나, 또는
    R4 및 R5 및 그것들이 결합된 탄소는 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 또는 헤테로사이클 고리를 형성하거나, 또는
    R5 및 R6 및 그것들이 결합된 탄소는 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 또는 헤테로사이클 고리를 형성하며;
    Q는 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 및 헤테로사이클 고리로 이루어진 군으로부터 선택된다.
  28. 제 21항에 있어서, 상기 동정한 식I 또는 식II의 화합물은 NPFF2 리셉터에 선택적인 것을 특징으로 하는, 개체에서 통각과민 또는 이질통증을 경감시키는 화합물의 동정 방법.
  29. 식I 또는 식II의 화합물, 또는 제약학적으로 허용가능한 그의 염, 에스테르, 아미드 또는 프로드럭 화합물:
    Figure 112006020866754-PCT00039
    Figure 112006020866754-PCT00040
    상기 식에서,
    R1은 수소, C1-C10의 직쇄 또는 분지형 알킬, C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알케닐, C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알키닐, 및 C3-C10의 사이클로알킬이고;
    R2, R3, R4, R5 및 R6은 각각 독립적으로 수소, C1-C10의 직쇄 또는 분지형 알킬, C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알케닐, C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알키닐, C3-C10의 사이클로알킬, 치환 또는 비치환된 아릴 또는 헤테로아릴, 하이드록시, 할로겐화된 에테르, 니트로, 아미노, 할로겐, 퍼할로알킬, -OR7, -N(R7)2, -CN, -C(=Z)R7, -C(=Z)0R7, -C(=Z)N(R7)2, -N(R7)-C(=Z)R7, -N(R7)-C(=Z)N(R7)2, -OC(=Z)R7 및 -SR7로 이루어진 군으로부터 선택되며;
    Z는 산소 또는 황이고, 각 R7은 독립적으로 수소, 아릴 또는 헤테로아릴로 선택적으로 치환된 C1-C10의 직쇄 또는 분지형 알킬, 아릴 또는 헤테로아릴로 선택적으로 치환된 C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알케닐, 아릴 또는 헤테로아릴로 선택적으로 치환된 C2-C10의 직쇄 또는 분지형 알키닐, C3-C10의 사이클로알킬, C5-C10의 사이클로알케닐, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는
    R2, R3 및 그것들이 결합된 탄소는 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 또는 헤테로사이클 고리를 형성하거나, 또는
    R3 및 R4 및 그것들이 결합된 탄소는 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 또는 헤테로사이클 고리를 형성하거나, 또는
    R4 및 R5 및 그것들이 결합된 탄소는 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 또는 헤테로사이클 고리를 형성하거나, 또는
    R5 및 R6 및 그것들이 결합된 탄소는 융합된 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 또는 헤테로사이클 고리를 형성하며;
    Q는 아릴, 헤테로아릴, C5-C10의 카르보사이클 고리 및 헤테로사이클 고리로 이루어진 군으로부터 선택된다.
  30. 식III 또는 제약학적으로 허용가능한 그의 염, 에스테르, 아미드 또는 프로드럭 화합물:
    Figure 112006020866754-PCT00041
    상기 식에서,
    Cy1은 아릴, 융합된 아릴, 헤테로아릴, 융합된 헤테로아릴, 카르보사이클, 사이클로알킬, 융합된 헤테로사이클 및 헤테로사이클로 이루어진 군으로부터 선택되며;
    Cy2는 아릴, 융합된 아릴, 헤테로아릴, 융합된 헤테로아릴, 카르보사이클, 사이클로알킬, 융합된 헤테로사이클 및 헤테로사이클로 이루어진 군으로부터 선택되며;
    R8 및 R9는 각각 0-6번 존재하며, 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C1-C8의 직쇄 또는 분지형 알킬, 선택적으로 치환된 C2-C8의 직쇄 또는 분지형 알케닐, 선택적으로 치환된 C2-C8의 직쇄 또는 분지형 알키닐, 선택적으로 치환된 C3-C8의 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 카르보사이클, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 융합된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 융합된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 헤테로사이클, 선택적으로 치환된 융합된 헤테로사이클, 할로알킬, 할로겐, -CN, -NO2, -C(=Z)R7, -C(=Z)OR7, -C(=Z)N(R7)2, -N(R7)2, -N(R7)-C(=Z)R7, -N(R7)-C(=Z)N(R7)2, -N(R7)-S(=O)R7, N(R7)-S(=O)2R7, -OR7, -OC(=Z)R7, -SO3H, -S(=O)2N(R7)2, -S(=O)N(R7)2, -S(=0)2R7, -S(=O)R7 및 -SR7으로 이루어진 군으로부터 선택되며,
    Z는 산소 또는 황이고, 상기 R7은 상기 정의된 바와 동일하며;
    R10은 수소, 선택적으로 치환된 C1-C8의 직쇄 또는 분지형 알킬, 선택적으로 치환된 C2-C8의 직쇄 또는 분지형 알케닐, 선택적으로 치환된 C2-C8의 직쇄 또는 분지형 알키닐, 선택적으로 치환된 C3-C8의 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 융합된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 융합된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 헤테로사이클 및 선택적으로 치환된 융합된 헤테로사이클로 이루어진 군으로부터 선택되며;
    X는 산소, 황, NR7, 선택적으로 치환된 에틸렌 및 아세틸렌으로 이루어진 군으로부터 선택되며, R7은 상기 정의된 바와 동일하다.
  31. 개체에게 식I, II 또는 III인 NPFF1 리셉터의 길항제를 접촉시키는 단계를 포함하는, 개체의 신경병증성 통증 또는 염증성 통증을 치료하는 방법.
  32. 개체에게 식I, II 또는 III인 NPFF1 리셉터에 대한 약한 부분 작용제(week partial agonist)를 접촉시키는 단계를 포함하는, 개체의 신경병증성 통증 또는 염증성 통증을 치료하는 방법.
  33. 개체에게, NPFF1 리셉터에 대해 길항제 또는 부분 작용제로서 작용하는 식I, II 또는 III의 화합물과, NPFF2 리셉터에 대해 완전한 작용제 또는 부분 작용제로서 작용하는 식I, II 또는 III의 화합물의 조합을 접촉시키는 단계를 포함하는, 개체의 신경병증성 통증 또는 염증성 통증을 치료하는 방법.
  34. NPFF1 리셉터 길항제 및 NPFF2 리셉터 작용제로서 작용하는 식I, II 또는 III의 화합물을 개체에 접촉시키는 단계를 포함하는, 개체의 신경병증성 통증 또는 염증성 통증을 치료하는 방법.
  35. NPFF1 리셉터 길항제 및 NPFF2 리셉터의 부분 작용제로서 작용하는 식I, II 또는 III의 화합물을 개체에 접촉시키는 단계를 포함하는, 개체의 신경병증성 통증 또는 염증성 통증을 치료하는 방법.
  36. NPFF1 리셉터의 부분 작용제 및 NPFF2의 부분 작용제로서 작용하는 식I, II 또는 III의 화합물을 개체에 접촉시키는 단계를 포함하는, 개체의 신경병증성 통증 또는 염증성 통증을 치료하는 방법.
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