KR20060086781A - 진세노사이드 유도체 및 그의 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 증강된 항암 효과, 항알러지 효과를 갖는 탄소 24번 위치의 이중결합이 환원된 진세노사이드 유도체 및 이들 화합물을 함유한 의약품의 용도에 관한 것이다.

인삼사포닌, 진세노사이드 유도체, 항암, 암 전이억제, 항알러지

Description

진세노사이드 유도체 및 그의 용도{Ginsenoside derivatives and the uses of them.}

본 발명은 기존의 진세노사이드들 보다 우수한 항암 효과, 항 알러지 효과를 갖는 진세노사이드 유도체 화합물, 이의 제조방법 및 본 화합물을 함유한 약학적 조성물 및 용도에 관한 것이다.

암은 인류가 극복해야 할 최대의 난치병 중의 하나로 현재 많은 항암제가 개발되어 임상에서 사용되고 있으나 이들 기존 항암제들은 1) 암 세포에 대한 세포독성, DNA나 RNA 합성 저해제, 단백질 합성 저해제 등을 목표로 개발되었기 때문에 선택성이 없어 신장, 심장, 골수 등에 심각한 부작용을 유발하고, 2) 암세포를 공격 목표로 하기 때문에 암세포의 이질성이나 유전자적 불안정성으로 인하여 약제 내성 세포의 빈번한 출현으로 항암제의 효능이 현저하게 저하되는 등의 단점을 갖고 있다. 그렇기 때문에 세포 독성이 강하다고 하여 꼭 항암제로 개발될 가능성이 높은 것도 아니며, 세로 독성은 낮으면서도 암 세포가 성장하지 못하게 하거나 암 세포가 정상 세포로 분화되도록 하는 것이 더욱 바람직한 전략이다.

최근의 진보된 암 세포 분자생물학을 이용하여 정확한 작용점을 타겟팅하는 새로운 개념의 항암제 개발 연구가 진행되고 있으며 그 중 현재 세계적으로 가장 경쟁적으로 활발하게 진행되고 있는 분야는 혈관신생저해를 이용한 항암제나 암 전이 억제제의 연구개발과 암 특이적으로 발현이 높은 성장인자수용체의 인산화반응을 저해하는 물질을 이용한 항암제 연구개발이다. 그 결과로 글리벡, 이렛사가 임상적으로 사용되고 있으나 이렛사는 사용 중에는 암세포의 성장이 정지되어 있지만 약물 투여를 중단하면 재발하는 것이 특진이므로 더욱 발전된 항암제의 출현은 인류의 바램이다.

문명이 발전하는 것과 비례하여 알러지 질환은 증가하고, 면역학의 급진적인 발전으로 알러지 질환의 원인 구명 및 치료에 많은 발전이 있었지만, 아직까지 충분한 치료를 위한 약물 개발이 이루어지지 않았고, 또한 기존의 알러지 질환 치료제는 졸림, 현기증, 신경과민 등 부작용이 있기 때문에 부작용은 없으면서 효과가 탁월한 알러지 질환 치료제 특히 아토피 치료제의 개발은 절실히 필요하다.

인삼은 무독한 식물로 수 천년 동안 인체 항상성을 유지하는 강장제로, 만병을 치료하는 치료약으로, 생명을 연장하는 약으로 알려져 왔으며, 생명 연장효과는 항산화효과에 의한 노화 방지 (Korean Biochem. J., 12(1), 33(1979)), 암 발생 억제 및 예방 효과로 인하여 이루어질 수 있다는 가설과 실험적 근거가 제시되었다 (Ann. NY Acad. Sci., 889, 157 (1999), Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev., 4, 401 (1995), The Lancet Oncology, 2, 49 (2001)). 항암 유효 성분으로 진세노사이드 Rg3, Rg5, Rh2, Rh1, 진세노사이드의 장내 미생물 대사체인 화합물 K 등이 알려져 있다 (총설논문 J. Korean Med. Sci., 16(Suppl), S28 (2001), J. Ginseng Res., 28, 1 (2004)), 이들 진세노사이드의 암 전이 억제 및 항암 기전은 암세포의 침투 억제, 접착 억제, 신생혈관 생성 억제 효과로 설명되었다(Biol. Pharm, Bull., 18, 1197 (1995)). 수 없이 많은 연구의 결과로 (관련 총설논문 J. Korean Med. Sci., 16 (Suppl), (2001), J. Ginseng Sci., 27, 151 (2003)) 진세노사이드 Rg3는 중국에서 간암 및 폐암 전이 억제 항암신약 "Rg3 Shenyi Jiaonang"으로 개발되어 시판되고 있다.

인삼으로부터 분리확인 된 진세노사이드는 30여종 이상이고 다양한 생리활성이 알려져 있지만, 인삼에 자연 상태로 함유된 진세노사이드들은 위장관에서의 흡수율이 대단히 낮은 것이 특징이나 20번 위치에 결합된 당이 가수분해되어 없어지거나(예; 진세노사이드 Rg3) 20번 위치에만 당이 한 분자만 남아 있으면 (예; 화합물 K) 소위 활성화된 진세노사이드로서 위장관 흡수도가 높고 빠르다. 진세노사이드 Rh2, Rh1, 화합물 K는 항암 효과도 알려져 있지만, 최근에는 항알러지 효과가 있다고 보고되었다 (Int. Arch. Allergy Immunol., 133, 113 (2004), Planta Med., 69, 518 (2003), 한국특허 공개번호 특2003-0080296호).

그러나 이런 화합물들은 오래 전에 학회에 보고되었으므로 물질 특허성이 결여된 단점을 갖고 있다. 따라서 독성은 적고 효과는 증가하며 물질 특허성이 있는 진세노사이드의 개발이 필요하다.

상기와 같이 부작용이 없으면서 충분한 치료효과를 나타내는 암 치료제 및 알러지 치료제를 개발하기 위하여 연구해 오던 중에 홍삼에 미량으로 존재하는 진 세노사이드 Rg3, Rh2, Rg2, Rh1과 화합물 K, 진세노사이드 F1들의 탄소 24위치의 이중 결합을 수소 환원하여 구조식 1의 화합물을 제조하여 기존의 진세노사이드와 비교 실험하였을 때 암세포 성장억제 효과, 암세포전이억제 효과, 암 치료 효과, 항알러지 효과가 월등히 증가함을 발견하여 본 발명을 완성하게 되었다.

구조식 1 :

구조식 1에서,

R1은 수소, -글루코실(2→1)글루코스, 또는 -글루코스,

R2는 수소, α-히드록시, -α-O-글루코스, 또는 -α-O-글루코실(2→1)람노스,

R3는 수소, 또는 글루코스이다.

이때에 20번 위치가 20(S), 20(R) 또는 20(S, R)인 이성체를 포함한다.

본 발명은 구조식 1의 화합물 및 그의 제조 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 구조식 1의 화합물을 암 치료, 암 전이 억제 및 알러지 치료의 목적으로 사용하는 용도 및 그 조성물에 관한 것이다.

본 발명에서 구조식 1의 화합물은 다음의 방법으로 제조된다. 구조식 2의 화 합물을 수소첨가반응에 의하여 환원하여 제조한다. 이때 사용되는 바람직한 용매는 저급 알칸올 예를 들어 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 또는 이들 중에 선택된 혼합용매, 또는 함수 저급 알칸올에 디옥산, 에틸아세테이트중에서 선택된 것을 혼합하여 사용한다. 바람직한 반응촉매는 팔라디움-챠콜 이며 타 금속 예를 들어 백금, 로디움도 사용될 수 있다. 촉매 량은 반응시킬 화합물의 중량 대비 5내지 50％를 사용한다. 수소화 반응 온도와 압력은 사용하는 기구에 따라 결정되지만 상압 내지 80파운드 psi가 바람직하며 온도는 대략 실온에서 40℃, 반응시간은 3 시간 내지 30시간이다. 반응이 종료된 후 정제할 필요가 있을 경우 실리카겔칼람크로마토그래피법으로 용매는 디클로로메탄, 클로르포름, 메탄올, 에탄올, 물, 에틸아세테이트 들 중에서 선택된 것을 혼합하여 사용한다.

구조식 2 :

R₁는 수소, -글루코실(2→1)글루코스, 또는 -글루코스,

R2는 수소, -α-히드록시, -α-O-글루코스, 또는 -α-O-글루코실(2→1)람노스, R3는 수소, 또는 글루코스이다.

이때에 20번 위치가 20(S), 20(R) 또는 20(S, R)인 이성체를 포함한다.

구조식 2의 화합물은 이미 보고된 문헌의 방법에 따라 홍삼추출물, 인삼엽추출물, 또는 이들에서 분리된 진세노사이드를 산 가수분해 또는 효소분해를 통하여 제조하였다 (일본약학잡지 103, 612 (1983), 약학회지 35, 432(1991), Chem. Pharm. Bull. 24, 2204 (1976), Chem. Pharm. Bull. 39, 2357 (1991), Chem. Pharm, Bull. 35, 1653 (1987)). 각각의 진세노사이드는 인삼의 성분 연구가 수행된 문헌에 기술된 방법대로 이 분야에 종사하는 사람이면 누구나 칼람크로마토그래피법을 구사하여 분리 정제할 수 있는 것이다.

본 발명의 조성물은 의약품으로 사용될 수 있는 바 의약품으로 적용하기 위한 통상의 제형화 방법을 다양하게 적용할 수 있다. 예를 들어 경구적으로 복용 가능한 제제에 통상적으로 사용되는 첨가제, 활탁제, 점착제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 첨가하여 연질캅셀제, 경질캅셀제, 환제, 현탁제, 과립제, 정제 등으로 제조할 수 있다. 주사제는 통상적으로 주사제를 제조하는데 필요한 유화제, 첨가제, 보존제 등을 사용하여 제조하며, 통상적인 방법으로 현탁제 또는 용액 형태로 제조할 수 있다. 항알러지제로 사용할 때는 로션제나 크림제로 제조하여 피부에 도포할 수 있다.

본 발명 화합물의 사람에 대한 1일 투여량은 0.1 내지 10 mg/kg 체중이 적절하며 더욱 바람직하기는 0.3 내지 5 mg/kg 체중이며 선택된 제형으로 제조하여 1일에 2 내지 3회 분복하거나 주사로 투여하거나 피부에 도포한다.

이하, 본 발명을 다음의 실시예에 의거하여 더욱 상세히 설명하겠는 바, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 20(S)-디하이드로진세노사이드 Rg3 (화합물 1)의 제조

참고예 2에서 제조한 20(S)-진세노사이드 Rg3 10 g을 메탄올 200 mL 에 녹이고 10％ 팔라디움-챠콜 600 mg을 가하고 실온에서 Parr 반응기로 40파운드 psi 수소가스 압력하에서 20시간 진탕하여 반응시켰다. 셀라이트를 통과시켜 여과하여 촉매를 제거하고 여액을 감압하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔 200g 칼람에서 디클로로메탄 : 메탄올 : 물 (7:1:0.05→6:1:0.1→5:1:0.1→4:1:0.1) 혼합용매로 크로마토그래피하여 9.7 g의 화합물 1을 얻었다.

융점 209-211℃,

¹³C-NMR(Pyridine-d₅, δppm): 105.97, 105.05, 88.92, 83.36, 78.30, 78.20, 78.04, 77.91, 77.06, 73.14, 71.64, 71.59, 70.97, 62.81, 62.69, 56.36, 54.71, 51.69, 50.37, 48.57, 40.28, 40.00, 39.68, 39.13, 36.91, 36.03, 35.71, 32.05, 31.38, 28.43, 28.09, 27.21, 26.86, 26.70, 22.87, 22.73, 21.99, 18.43, 17.02, 16.58, 16.34, 15.83

실시예 2. 20(R)-디하이드로진세노사이드 Rg3 (화합물 2)의 제조

참고예 2에서 제조한 20(R)-진세노사이드 Rg3 8 g을 메탄올 100 mL, 디옥산 70 mL, 물 10 mL의 혼합용매에 녹이고 5％ 팔라디움-챠콜 (수분50％) 1600 mg을 가하고 40℃에서 Parr반응기로 10 파운드 psi 수소가스압력하에서 26시간 진탕하면서 반응시켰다. 셀라이트를 통과시켜 여과하여 촉매를 제거하고 여액을 감압하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔 200g 칼람에서 5％ 물이 함유된 디클로로메탄 : 메탄 올 (7:1→6:1→5:1→4:1) 혼합용매로 크로마토그래피하여 7.2 g의 화합물 2를 얻었다.

융점 212-214℃,

¹³C-NMR(Pyridine-d₅, δppm): 105.96, 105.05, 88.91, 83.36, 78.30, 78.22, 78.04, 77.92, 77.06, 73.14, 71.64, 71.60, 70.97, 62.81, 62.70, 56.36, 55.33, 51.69, 50.37, 50.57, 48.57, 41.72, 40.28, 40.02, 39.68, 39.13, 36.92, 36.03, 32.05, 31.38, 28.43, 28.09, 26.86, 23.78, 23.72, 22.87, 22.73, 21.98, 18.43, 17.02, 16.58, 16.34, 15.84

실시예 3. 20(S, R)-디하이드로진세노사이드 Rg3 (화합물 3)의 제조

참고예 1에서 제조한 20(S, R)-진세노사이드 Rg3 3 g을 메탄올 50 mL, 디옥산 40 mL, 물 10 mL에 녹이고 5％ 팔라디움-챠콜 (수분 50％) 600 mg을 가하고 40℃에서 Parr반응기로 50 파운드 psi 수소가스 압력하에서 16시간 진탕하면서 반응시켰다. 셀라이트를 통과시켜 여과하여 촉매를 제거하고 여액을 감압하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔 200g 칼람에서 5％물이 함유된 디클로로메탄 : 메탄올 (7:1→6:1→5:1→4:1→3:1) 혼합용매로 크로마토그래피하여 2.6 g의 화합물 3을 얻었다.

융점 208-210℃,

¹³C-NMR(Pyridine-d₅, δppm): 105.97, 105.05, 88.92, 83.36, 78.30, 78.20, 78.04, 77.91, 77.06, 73.14, 71.64, 71.59, 70.97, 62.81, 62.69, 56.36, 55.32, 54.71, 51.69, 50.37, 48.57, 40.28, 41.72, 40.00, 39.68, 39.13, 36.91, 36.03, 35.71, 32.05, 31.38, 28.43, 28.09, 27.21, 26.86, 26.70, 23.79, 23.22, 22.87, 22.73, 21.99, 18.43, 17.02, 16.58, 16.34, 15.83

실시예 4. 20(S)-디하이드로진세노사이드 Rh2 (화합물 4)의 제조

참고예 3에서 제조한 20(S)-진세노사이드 Rh2 300 mg을 메탄올 15 mL에 녹이고 10％ 팔라디움-챠콜 150 mg을 가하고 수소가 들어 있는 고무풍선에 연결하고 30 시간 실온에서 교반하였다. 셀라이트를 통과시켜 촉매를 제거하고 0.45 ㎛ 필터로 여과하고 감압하에서 농축하여 화합물 4를 얻었다.

융점 182-184℃,

¹³C-NMR(Pyridine-d₅, δppm): 106.94, 88.92, 78.30, 78.20, 78.04, 73.14, 71.64, 70.96, 62.81, 56.36, 54.71, 51.69, 50.37, 48.57, 40.28, 40.00, 39.68, 39.13, 36.91, 36.03, 35.71, 32.05, 31.38, 28.43, 28.09, 27.21, 26.86, 26.70, 22.87, 22,73, 21.99, 18.43, 17.02, 16.58, 16.34, 15.83

실시예 5. 20(R)-디하이드로진세노사이드 Rh2 (화합물 5)의 제조

참고예 3에서 제조한 20(R)-진세노사이드 Rh2 250 mg을 에탄올 15 mL와 디옥산 5 mL, 물 2 mL에 녹이고 5％ 팔라디움-챠콜 (수분 50％) 120 mg을 가하고 수소가 들어 있는 고무풍선에 연결하고 30 시간 실온에서 교반하였다. 셀라이트를 통과시켜 촉매를 제거하고 0.45 ㎛ 필터로 여과하고 감압하에서 농축하여 화합물 5를 얻었다.

융점 183-185℃,

¹³C-NMR(Pyridine-d₅, δppm): 106.95, 88.91, 78.30, 78.23, 78.04, 73.14, 71.65, 70.97, 62.81, 56.36, 55.32, 51.69, 50.36, 48.57, 41.72, 40.28, 40.10, 39.68, 39.13, 36.94, 36.03, 32.05, 31.40, 28.43, 28.09, 26.86, 23.80, 23.72, 22.87, 22.74, 21.98, 18.43, 17.02, 16.58, 16.34, 15.84

실시예 6. 20(S, R)-디하이드로진세노사이드 Rh2 (화합물 6)의 제조

참고예 4에서 제조한 20(S, R)-진세노사이드 Rh2 350 mg을 메탄올 15mL, 디옥산 5 mL에 녹이고 10％ 팔라디움-챠콜 170 mg을 가하고 수소가 들어 있는 고무풍선에 연결하고 30 시간 실온에서 교반하였다. 셀라이트를 통과시켜 촉매를 제거하고 0.45 ㎛ 필터로 여과하고 감압하에서 농축하여 화합물 6을 얻었다.

융점 180-182℃,

¹³C-NMR(Pyridine-d₅, δppm): 106.96, 88.92, 78.30, 78.21, 78.06, 73.17, 71.64, 70.98, 62.81, 56.36, 55.32, 54.74, 51.69, 50.37, 48.57, 40.28, 41.72, 40.03, 39.68, 39.14, 36.91, 36.03, 35.73, 32.05, 31.38, 28.43, 28.10, 27.23, 26.86, 26.70, 23.81, 23.22, 22.87, 22.73, 21.99, 18.43, 17.06, 16.58, 16.34, 15.85

실시예 7. 20(S)-디하이드로프로토파낙사디올 (화합물 7)의 제조

참고예 3에서 제조한 20(S)-프로토파낙사디올 300 mg을 메탄올 10 mL과 에틸아세테이트 10 mL에 녹이고 10％ 팔라디움-챠콜 150 mg을 가하고 수소가 들어 있는 고무풍선에 연결하고 24 시간 실온에서 교반하였다. 셀라이트를 통과시켜 촉매를 제거하고 0.45 ㎛ 필터로 여과하고 감압하에서 농축하여 화합물 7을 얻었다.

융점 212-214℃,

실시예 8. 20(R)-디하이드로프로토파낙사디올 (화합물 8)의 제조

참고예 3에서 제조한 20(R)-프로토파낙사디올 300 mg을 에탄을 10 mL과 에틸아세테이트 10 mL에 녹이고 10％ 팔라디움-챠콜 150 mg을 가하고 수소가 들어 있는 고무풍선에 연결하고 30 시간 실온에서 교반하였다. 셀라이트를 통과시켜 촉매를 제거하고 0.45 ㎛ 필터로 여과하고 감압하에서 농축하여 화합물 8을 얻었다.

융점 215-217℃,

실시예 9. 20(S, R)-디하이드로프로토파낙사디올 (화합물 9)의 제조

참고예 4에서 제조한 20(R)-프로토파낙사디올 300 mg을 메탄올 10 mL과 에틸아세테이트 10 mL에 녹이고 10％ 팔라디움-챠콜 150 mg을 가하고 수소가 들어 있는 고무풍선에 연결하고 30 시간 실온에서 교반하였다. 셀라이트를 통과시켜 촉매를 제거하고 0.45 ㎛ 필터로 여과하고 감압하에서 농축하여 화합물 8을 얻었다.

융점 214-216℃,

실시예 10. 20(S)-디하이드로진세노사이드 Rg2 (화합물 10)의 제조

참고예 5에서 제조한 20(S)-진세노사이드 Rg2 300 mg을 메탄올 15 mL에 녹이고 10％ 팔라디움-챠콜 150 mg을 가하고 수소가 들어 있는 고무풍선에 연결하고 28 시간 실온에서 교반하였다. 셀라이트를 통과시켜 촉매를 제거하고 0.45 ㎛ 필터로 여과하고 감압하에서 농축하여 화합물 10을 얻었다.

융점 194-197℃,

¹³C-NMR(Pyridine-d₅, δppm): 101.94, 101.75, 83.35, 79.41, 78.50, 78.38, 74.27, 73.15, 72.58, 72.40, 72.25, 70.98, 70.85, 69.42, 63.07, 60.79, 54.65, 51.74, 50.57, 49.73, 48.86, 46.05, 43.41, 41.14, 40.31, 39.98, 39.59, 39.33, 35.84, 32.16, 31.32, 28.44, 27.72, 26.85, 22.91, 22.74, 21.97, 18.73, 17.62(탄소 2개), 17.16, 16.94

실시예 11. 20(R)-디하이드로진세노사이드 Rg2 (화합물 11)의 제조

참고예 5에서 제조한 20(R)-진세노사이드 Rg2 250 mg을 메탄올 10 mL와 부탄올 10 mL에 녹이고 5％ 팔라디움-챠콜 (50％ 수분) 120 mg을 가하고 수소가 들어 있는 고무풍선에 연결하고 30 시간 실온에서 교반하였다. 셀라이트를 통과시켜 촉매를 제거하고 0.45 ㎛ 필터로 여과하고 감압하에서 농축하여 화합물 11을 얻었다.

융점 198-200℃,

¹³C-NMR(Pyridine-d₅, δppm): 101.94, 101.75, 83.35, 79.41, 78.50, 78.38, 74.27, 73.15, 72.58, 72.40, 72.25, 70.98, 70.85, 69.42, 63.07, 60.79, 54.65, 51.67, 50.57, 49.73, 48.20, 46.05, 43.41, 41.14, 40.07, 39.98, 39.59, 39.33, 35.84, 32.16, 31.32, 28.25, 27.17, 26.63, 22.91, 22.74, 21.36, 18.73, 17.62( 탄소 2개), 17.16, 16.94

실시예 12. 20(S, R)-디하이드로진세노사이드 Rg2 (화합물 12)의 제조

참고예 5에서 제조한 20(S, R)-진세노사이드 Rg2 300 mg을 메탄올 10mL과 프로판올 10 mL에 녹이고 5％ 팔라디움-챠콜 (50％ 수분) 140 mg을 가하고 수소가 들어 있는 고무풍선에 연결하고 30 시간 실온에서 교반하였다. 셀라이트를 통과시켜 촉매를 제거하고 0.45 ㎛ 필터로 여과하고 감압하에서 농축하여 화합물 12을 얻었다.

융점 195-197℃

¹³C-NMR(Pyridine-d₅, δppm): 101.94, 101.75, 83.35, 79.41, 78.50, 78.38, 74.27, 73.15, 72.58, 72.40, 72.25, 70.98, 70.85, 69.42, 63.07, 60.79, 54.65, 51.74, 51.67, 50.57, 49.73, 48.86, 48.22, 46.05, 43.41, 41.14, 40.31, 40.07, 39.98, 39.59, 39.33, 35.84, 32.16, 31.32, 28.44, 28.26, 27.72, 27.17, 26.85, 26.63, 22.91, 22.74, 21.97, 21.36, 18.73, 17.62(탄소 2개), 17.16, 16.94

실시예 13. 20(S)-디하이드로진세노사이드 Rh1 (화합물 13)의 제조

참고예 6에서 제조한 20(S)-진세노사이드 Rh2 320 mg을 메탄올 15 mL에 녹이고 10％ 팔라디움-챠콜 150 mg을 가하고 Parr 반응기에서 80 파운드 psi의 수소가tm 압력으로 3 시간 실온에서 교반하였다. 셀라이트를 통과시켜 촉매를 제거하고 0.45 ㎛ 필터로 여과하고 감압하에서 농축하여 화합물 13을 얻었다.

융점 189-191℃,

¹³C-NMR(Pyridine-d₅, δppm): 105.93, 80.03, 78.53, 78.10, 75.40, 73.15, 71.78, 70.97, 63.03, 61.38, 54.67, 51.67, 50.66, 50.16, 48.85, 45.16, 41.07, 40.32, 40.28, 40.04, 39.63, 39.36, 35.90, 32.14, 31.69, 31.28, 28.42, 27.89, 26.82, 22.92, 22.74, 21.97, 17.65, 17.37, 16.77, 16.35

실시예 14. 20(R)-디하이드로진세노사이드 Rh1 (화합물 14)의 제조

참고예 6에서 제조한 20(R)-진세노사이드 Rh1 250 mg을 메탄올 15 mL에 녹이고 10％ 팔라디움-챠콜 120 mg을 가하고 Parr 반응기에서 60 파운드 psi의 수소가tm 압력으로 10 시간 실온에서 교반하였다. 셀라이트를 통과시켜 촉매를 제거하고 0.45 ㎛ 필터로 여과하고 감압하에서 농축하여 화합물 14를 얻었다.

융점 193-195℃,

¹³C-NMR(Pyridine-d₅, δppm),: 105.93, 80.03, 78.53, 78.10, 75.40, 73.15, 71.78, 70.85, 63.03, 61.38, 54.67, 51.61, 50.66, 50.16, 48.22, 43.36, 41.07, 40.32, 40.28, 40.04, 39.63, 39.36, 35.90, 32.07, 31.69, 31.28, 28.22, 27.14, 26.59, 22.92, 22.74, 21.32, 17.65, 17.07, 16.77, 16.35

실시예 15. 20(S, R)-디하이드로진세노사이드 Rh1 (화합물 15)의 제조

참고예 6에서 제조한 20(S, R)-진세노사이드 Rh1 350 mg을 메탄올 10 mL과 디옥산 5 mL에 녹이고 10％ 팔라디움-챠콜 100 mg을 가하고 Parr 반응기에서 50 파운드 psi 수소가스 압력으로 10 시간 실온에서 교반하였다. 셀라이트를 통과시켜 촉매를 제거하고 0.45 ㎛ 필터로 여과하고 감압하에서 농축하여 화합물 15를 얻었다.

융점 190-192℃,

¹³C-NMR(Pyridine-d₅, δppm): 105.93, 80.03, 78.53, 78.10, 75.40, 73.15, 71.78, 70.97, 70.85, 63.03, 61.38, 54.67, 51.67, 51.61, 50.66, 50.16, 48.85, 48.22, 45.16, 43.36, 41.07, 40.32, 40.28, 40.04, 39.63, 39.36, 35.90, 32.14, 32.07, 31.69, 31.28, 28.42, 28.22, 27.89, 27.14, 26.82, 26.59, 22.92, 22.74, 21.97, 21.32, 17.65, 17.37, 17.07, 16.77, 16.35

실시예 16. 20(S)-디하이드로프로토파낙사트리올 (화합물 16)의 제조

참고예 7에서 제조한 20(S)-프로토파낙사트리올 300 mg을 메탄올 10 mL과 에틸아세테이트 10 mL에 녹이고 10％ 팔라디움-챠콜 100 mg을 가하고 Parr 반응기에서 30 파운드 psi 수소가스 압력으로 16 시간 실온에서 교반하였다. 셀라이트를 통과시켜 촉매를 제거하고 0.45 ㎛ 필터로 여과하고 감압하에서 농축하여 화합물 16을 얻었다.

융점 268-270℃

실시예 17. 20(R)-디하이드로프로토파낙사트리올 (화합물 17)의 제조

참고예 7에서 제조한 20(R)-프로토파낙사트리올 350 mg을 메탄올 10 mL과 에틸아세테이트 10 mL에 녹이고 10％ 팔라디움-챠콜 30 mg을 가하고 Parr 반응기에서 40 파운드 psi 수소가스 압력으로 26 시간 실온에서 진탕하였다. 셀라이트를 통과 시켜 촉매를 제거하고 0.45 ㎛ 필터로 여과하고 감압하에서 농축하여 화합물 17을 얻었다.

융점 271-273℃,

실시예 18. 20(S, R)-디하이드로프로토파낙사트리올 (화합물 18)의 제조

참고예 7에서 제조한 20(S, R)-프로토파낙사트리올 350 mg을 메탄올 10 mL과 에틸아세테이트 10 mL에 녹이고 10％ 팔라디움-챠콜 30 mg을 가하고 Parr 반응기에서 40 파운드 psi 수소가스 압력으로 24 시간 실온에서 진탕하였다. 셀라이트를 통과시켜 촉매를 제거하고 0.45 ㎛ 필터로 여과하고 감압하에서 농축하여 화합물 18을 얻었다.

융점 270-272℃,

실시예 19. 디하이드로진세노사이드 F1 (화합물 19)의 제조

문헌(Chem. Pharm. Bull. 24, 2204 (1976))의 방법으로 인삼엽추출물로부터 분리한 진세노사이드 F1 420 mg을 메탄올 25 mL에 녹이고 10％ 팔라디움-챠콜 100 mg을 넣고 Parr반응기에서 20 파운드 psi의 수소가스 압력으로 실온에서 8시간 진탕하였다. 셀라이트를 통과시켜 촉매를 제거하고 농축하여 얻은 농축물을 실리카겔칼람크로마토그래피하여 (용매; 디클로로메탄: 메탄올 15 : 1 → 10 : 1 → 8 : 1 → 6 : 1) 화합물 19 350 mg을 얻었다.

융점 190-192℃

¹³C-NMR (Pyridine-d₅, δppm): 99.5, 84.7(탄소 2개), 80.4, 79.7, 79.5, 76.4. 72.9, 71.5, 69.0, 64.1, 63.0, 52.9, 52.6, 51.1, 50.3, 48.7, 42.4, 41.6, 41.4, 40.6, 37.8, 33.2, 32.2, 32.1, 29.4, 29.3, 27.9, 24.1(탄소 2개), 23.8, 23.5, 18.8, 18.7, 18.6, 17.7

실시예 20. 디하이드로캄파운드 K (화합물 20)의 제조

선행기술(한국공개특허 특2003-0037005)의 방법에 따라 제조한 화합물 K 730 mg을 메탄올 30 mL에 녹이고 10％ 팔라디움-챠콜 200 mg을 넣고 Parr반응기에서 40 파운드 psi의 수소가스 압력으로 실온에서 15시간 진탕하였다. 셀라이트를 통과시켜 촉매를 제거하고 농축하여 얻은 농축물을 실리카겔칼람크로마토그래피로 (용매; 디클로로메탄 : 메탄올 10 : 1 → 8 : 1 →6 : 1) 정제하여 화합물 20 640 mg을 얻었다.

융점 171-173℃

¹³C-NMR (Pyridine-d₅, δppm): 98.0, 83.2(탄소 2개), 78.9, 78.0, 74.9, 71.4, 70.0, 62.7, 56.1, 51.5, 51.2(탄소 2개), 50.0, 49.2, 39.9(탄소 2개), 39.3(탄소 2개), 37.1(탄소 2개), 36.4, 34.9, 30.6, 28.4, 27.9(탄소 2개), 22.5(탄소 2개), 22.3, 22.0, 17.1, 16.1, 16.0. 15.7

실시예 21. 정제의 제조

화합물 1 5 g, 유당 15 g, 셀룰로오스메틸칼시움 2.5 g 과 결정셀룰로오스 2.5 g을 잘 혼합한 후 정제를 제조하는 통상적인 공정에 따라 타정하여 50 mg 정제를 제조하였다.

실시예 22. 과립제의 제조

화합물 1 5 g, 유당 15 g, 셀룰로오스메틸소디움 2.5 g 과 결정셀룰로오스 2.5 g을 잘 혼합한 후 습식법으로 과립제를 제조하는 통상적인 공정에 따라 과립제를 제조하였다.

실시예 23. 경질캅셀제의 제조

화합물 1 5 g, 유당 10 g, 셀룰로오스메틸칼시움 2.5 g 과 결정셀룰로오스 7.5 g을 잘 혼합한 후 정제를 제조하는 통상적인 공정에 따라 50 mg 경질 캅셀제를 제조하였다.

실시예 24. 연질캅셀제의 제조

화합물 1 5 g, 대두유 42 g, 대두레시틴 1.5 g, 황납 1.5 g을 잘 혼합한 후 연질캅셀제를 제조하는 통상적인 공정에 따라 100 mg 연질캅셀제를 제조하였다.

실시예 25. 주사제의 제조

화합물 1 5 g을 폴리에틸렌글리콜 5g, 에탄올 5ml, 인산화생리식염수 400ml에 가온하여 용해시키고 냉각한 후 인산화생리식염수를 첨가하여 500 ml가 되도록 하여 멸균여과기로 여과하여 통상적인 공정에 따라 10 ml 씩 바이알에 충진하여 주사제를 제조하였다.

실시예 26. 크림제의 제조

화합물 1 5 g, 밀납 15 g, 폴리솔베이트 60 2.5 g, 유동파라핀 15 g, 글리세린 5 g, 프로필렌글리콜 3 g을 정제수를 넣어 100 g으로 하고 통상의 크림제 제조공정에 따라 크림제를 제조하였다.

실시예 27. 크림제의 제조

화합물 13 5 g, 밀납 15 g, 폴리솔베이트 60 2.5 g, 유동파라핀 15 g, 글리세린 5 g, 프로필렌글리콜 3 g을 정제수를 넣어 100 g으로 하고 통상의 크림제 제조공정에 따라 크림제를 제조하였다.

실시예 28. 크림제의 제조

화합물 19 5 g, 밀납 15 g, 폴리솔베이트 60 2.5 g, 유동파라핀 15 g, 글리세린 5 g, 프로필렌글리콜 3 g을 정제수를 넣어 100 g으로 하고 통상의 크림제 제조공정에 따라 크림제를 제조하였다.

실시예 29. 크림제의 제조

화합물 20 5 g, 밀납 15 g, 폴리솔베이트 60 2.5 g, 유동파라핀 15 g, 글리세린 5 g, 프로필렌글리콜 3 g을 정제수를 넣어 100 g으로 하고 통상의 크림제 제조공정에 따라 크림제를 제조하였다.

실시예 30. 연고제의 제조

화합물 1 5 g, 액상파라핀 10 g, 솔비탄세스퀴올리에이트 8 g, 옥틸도데세스-25 10 g, 세틸에틸헥사노에이트 15 g, 글리세린 15 g, 솔비톨 12 g에정제수를 가하여 100 g 으로 하고 통상의 연고제 제조 공정에 의하여 연고제를 제조하였다.

실시예 31. 연고제의 제조

화합물 13 5 g, 액상파라핀 10 g, 솔비탄세스퀴올리에이트 8 g, 옥틸도데세스-25 10 g, 세틸에틸헥사노에이트 15 g, 글리세린 15 g, 솔비톨 12 g에 정제수를 가하여 100 g 으로 하고 통상의 연고제 제조 공정에 의하여 연고제를 제조하였다.

실시예 32. 연고제의 제조

화합물 19 5 g, 액상파라핀 10 g, 솔비탄세스퀴올리에이트 8 g, 옥틸도데세스-25 10 g, 세틸에틸헥사노에이트 15 g, 글리세린 15 g, 솔비톨 12 g에 정제수를 가하여 100 g 으로 하고 통상의 연고제 제조 공정에 의하여 연고제를 제조하였다.

실시예 33. 연고제의 제조

화합물 20 5 g, 액상파라핀 10 g, 솔비탄세스퀴올리에이트 8 g, 옥틸도데세스-25 10 g, 세틸에틸헥사노에이트 15 g, 글리세린 15 g, 솔비톨 12 g에정제수를 가하여 100 g 으로 하고 통상의 연고제 제조 공정에 의하여 연고제를 제조하였다.

참고예 1. 20(S,R)-진세노사이드 Rg3의 제조

인삼의 알콜추출물에서 제조한 프로토파낙사디올계 사포닌 150 g을 50％ 초산수용액 2 L에 녹이고 70℃에서 12시간 가열하였다. 감압하에서 농축하여 용매 1.8 L를 제거하고 남은 반응액을 부탄올 2.5 L에 녹이고 포화중조수용액 400 mL씩 2회 세척하고 마지막으로 물 500 mL로 세척한 후 부탄올층을 감압하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔칼람크로마토그래피 (용매; 디클로로메탄 : 메탄올 : 물 10 : 3 :1)로 분리하여 20(S,R)-진세노사이드 38g을 얻었다.

참고예 2. 20(S)-진세노사이드 Rg3와 20(R)-진세노사이드 Rg3의 제조

참고예 1에서 제조한 20(S,R)-진세노사이드 Rg3 35 g을 피리딘 700 mL에 녹이고 무수초산 700 mL을 가하여 50℃에서 16시간 교반하였다. 반응물을 감압하에서 농축하여 얻은 농축물을 실리카겔칼람크로마토그래피 (용매; 디클로로메탄 : 에틸 아세테이트 6 : 1)하여 20(S)- 진세노사이드 Rg3 아세테이트 26 g, 20(R)-진세노사이드 Rg3 아세테이트 22 g을 얻었다 (참고 문헌: 약학회지 35, 432 (1991)).

20(S)-진세노사이드 Rg3 아세테이트 25 g을 5％ 소디움하이드록사이드 90％ 메탄올용액 1 L에 분산시키고 2시간 가열 환류시켰다. 반응물에서 감압농축하여 용매를 제거하고 부탄올 1 L에 용해시키고 물 300 mL씩 3회 세척하고 부탄올층을 감압하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔칼람크로마토그래피 (용매; 디클로로메탄 : 메탄올 : 물 5 : 1 : 0.1 → 4 : 1 : 0.1 →3: 1: 0.1)하여 20(S)-진세노사이드 Rg3 16.5 g을 얻었다.

20(R)-진세노사이드 Rg3 아세테이트 21 g을 5％ 소디움하이드록사이드 부탄올 1.5 L에 녹이고 4℃에서 16시간 교반하였다. 반응물을 물 300 mL씩 3회 세척하고 부탄올층을 감압하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔칼람크로마토그래피 (용매; 디클로로메탄 : 메탄올 : 물 5 : 1 : 0.1 → 4 : 1 : 0.1 → 3: 1: 0.1)하여 20(R)-진세노사이드 Rg3 13.5 g을 얻었다.

참고예 3. 20(S)-진세노사이드 Rh2, 20(R)-진세노사이드 Rh2, 20(S)-프로토파낙사디올, 20(R)-프로토파낙사디올의 제조

참고예 2에서 제조한 20(S)-진세노사이드 Rg3 2 g을 부탄올 100 mL에 녹이고 소디움하이드록사이드 5 g을 가하고 80℃에서 12시간 교반하였다. 반응물을 물 30 ml씩 3회 세척하고 부탄올층을 감압하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔 100 g으로 칼람크로마토그래피하여 (용매: 디클로로메탄: 메탄올 30:1→20:1→15:1→10:1→5:1→4:1→3:1) 20(S)-진세노사이드 Rh2 580 mg, 20(S)-프로토파낙사디올 450 mg 을 얻었다.

참고예 2에서 제조한 20(R)-진세노사이드 Rg3 2 g을 같은 방법으로 처리하여 20(R)-진세노사이드 Rh2 550 mg, 20(R)-프로토파낙사디올 435 mg을 얻었다.

참고예 4. 20(S, R)-진세노사이드 Rh2, 20(S, R)-프로토파낙사디올의 제조

참고예 1에서 제조한 20(S, R)-진세노사이드 Rg3 2 g을 참고예 3과 같이 처리하여 20(S, R)-진세노사이드 Rh2 570 mg, 20(S, R)-프로토파낙사디올 460 mg을 얻었다.

참고예 5. 20(S)-진세노사이드 Rg2, 20(R)-진세노사이드 Rg2, 20(S, R)-진세노사이드 Rg2의 제조

인삼의 알콜추출물에서 분리한 진세노사이드 Re 3.4 g을 초산 30 mL, 물 35 mL, 메탄올 35 mL에 녹이고 70℃에서 교반하면서 12시간 가열하고 감압하에서 농축하였다. 반응농축물을 실리카겔칼람크로마토그래피 (용매; 디클로로메탄 : 메탄올 : 물 5 : 1 : 0.1 → 4 : 1 : 0.1 → 3: 1: 0.1)하여 20(S, R)-진세노사이드 Rg2 2.1 g을 얻었다.

20(S, R)-진세노사이드 Rg 2 2 g을 피리틴 25 mL에 녹이고 무수초산 25 mL을 가하여 50℃에서 16시간 가온한 후 감압하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔칼람크로마토그래피하여 (용매; 디클로로메탄 : 에틸아세테이트 6 : 1) 20(S)-진세노사이드 Rg2 아세테이트 1.2 g, 20(R)-진세노사이드 Rg2아세테이트 1.1 g을 얻었다.

20(S)-진세노사이드 Rg2 아세테이트 1.1 g을 5％ 소디움하이드록사이드-90％ 메탄올 30 mL에 분산시키고 2시간 동안 가열 환류시켰다. 반응물을 감압하에서 농 축하여 용매를 제거하고 부탄올 100 mL에 녹인 후 물 30 mL씩 3회 세척하고 부탄올층을 감압하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔칼람크로마토그래피 (용매; 디클로로메탄 : 메탄올 : 물 5 : 1 : 0.1 → 4 : 1 : 0.1 → 3: 1: 0.1)하여 20(S)-진세노사이드 Rg2 0.65 g을 얻었다.

20(R)-진세노사이드 Rg2 1.0 g을 5％ 소디움하이드록사이드-90％ 메탄올 20 mL + 부탄올 10 mL에 분산시키고 2시간 동안 가열 환류시켰다. 반응물을 감압하에서 농축하여 용매를 제거하고 부탄올 70 mL에 녹인 후 물 30 mL씩 3회 세척하고 부탄올층을 감압하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔칼람크로마토그래피 (용매; 디클로로메탄 : 메탄올 : 물 5 : 1 : 0.1 → 4 : 1 : 0.1 → 3: 1: 0.1)하여 20(S)-진세노사이드 Rg2 0.6 g을 얻었다.

참고예 6. 20(S)-진세노사이드 Rh1, 20(R)-진세노사이드 Rh1, 20(S, R)-진세노사이드 Rh1의 제조

인삼의 알콜추출물에서 분리한 진세노사이드 Rg1 4.4 g을 초산 30 mL, 물100 mL에 녹이고 70℃에서 교반하면서 12시간 가열하고 감압하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔칼람크로마토그래피 (용매; 디클로로메탄 : 메탄올 : 물 8 : 1 : 0.05 → 7 : 1 : 0.05 → 6 : 1: 0.1 → 5 : 1 : 0.1)하여 20(S, R)-진세노사이드 Rh1 2.7 g을 얻었다.

20(S, R)-진세노사이드 Rh1 2.1 g을 피리틴 25 mL에 녹이고 무수초산 25 mL을 가하여 50℃에서 16시간 가온한 후 감압하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔칼람크로마토그래피하여 (용매; 디클로로메탄 : 에틸아세테이트 7 : 1) 20(S)-진세 노사이드 Rh1 아세테이트 1.3 g, 20(R)-진세노사이드 Rh1 아세테이트 1.1 g을 얻었다.

20(S)-진세노사이드 Rh1 아세테이트 1.2 g을 5％ 소디움하이드록사이드-90％ 메탄올 30 mL에 분산시키고 2시간 동안 가열 환류시켰다. 반응물을 감압하에서 농축하여 용매를 제거하고 부탄올 100 mL에 녹인 후 물 30 mL씩 3회 세척하고 부탄올층을 감압하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔 칼람크로마토그래피 (용매; 디클로로메탄 : 메탄올 : 물 8 : 1 : 0.05 → 7: 1 : 0.05 → 6 : 1: 0.1 → 5 : 1 : 0.1)하여 20(S)-진세노사이드 Rh1 0.82 g을 얻었다.

20(R)-진세노사이드 Rh1 아세테이트 1.0 g을 5％ 소디움하이드록사이드-90％ 메탄올 20 mL + 부탄올 10 mL에 분산시키고 2시간 동안 가열 환류시켰다. 반응물을 감압하에서 농축하여 용매를 제거하고 부탄올 70 mL에 녹인 후 물 30 mL씩 3회 세척하고 부탄올층을 감압하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔칼람크로마토그래피 (용매; 디클로로메탄 : 메탄올 : 물 8 : 1 : 0.05 → 7 : 1 : 0.05 → 6 : 1: 0.1 → 5 : 1 : 0.1)하여 20(S)-진세노사이드 Rh1 0.63 g을 얻었다.

참고예 7. 20(S)-프로토파낙사트리올, 20(R)-프로토파낙사트리올, 20(S, R)-프로토파낙사트리올의 제조

참고예 6에서 제조한 20(S)-진세노사이드 Rh1 300 mg을 5％ 소디움하이드록사이드-부탄올 30 mL에 분산시키고 85℃에서 10시간 가열하였다. 반응물을 물 30 mL씩 3회 세척하고 부탄올층을 감압하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔칼람크로마토그래피 (용매; 디클로로메탄 : 메탄올 20 : 1 → 15 : 1 → 10 : 1 → 8 : 1 ) 하여 20(S)-프로토파낙사트리올 120 mg을 얻었다.

참고예 6에서 제조한 20(R)-진세노사이드 Rh1 300mg을 5％ 소디움하이드록사이드-부탄올 30 mL에 분산시키고 85℃에서 10시간 가열하였다. 반응물을 물 30 mL씩 3회 세척하고 부탄올층을 감압하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔칼람크로마토그래피 (용매; 디클로로메탄 : 메탄올 20 : 1 → 15: 1 → 10 : 1 → 8 : 1 )하여 20(R)-프로토파낙사트리올 130 mg을 얻었다.

참고예 6에서 제조한 20(S, R)-진세노사이드 Rh1 300mg을 5％ 소디움하이드록사이드-부탄올 30 mL에 분산시키고 85℃에서 10시간 가열하였다. 반응물을 물 30 mL씩 3회 세척하고 부탄올층을 감압하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔칼람크로마토그래피 (용매; 디클로로메탄 : 메탄올 20 : 1 → 15 : 1 → 10 : 1→ 8 : 1)하여 20(S, R)-프로토파낙사트리올 140 mg을 얻었다.

실험예 1. 암세포 성장 억제 효과

살포로다민 B방법 (J. National Cancer Institute, 82, 1107 (1990))에 따라 암세포 성장억제 효과를 측정하였다. 세포성장 50％ 저해 농도 ED₅₀ 은 표 1에 나타내었다.

표 1에 나타낸 바와 같이 본 발명의 화합물들은 인간 유래 비소세포 폐암세포 (A549), 난소암 세포( SK-OV-3), 인간 백혈병 세포(K562), 뇌암 세포(XF498), 대장암 세포 (HCT15)에 대하여 기존의 진세노사이드보다 2배 내지 5배 더 강한 항암력을 나타내었다.

표 1. In Vitro 암세포 성장억제 효과

표 1(계속). In Vitro 암세포 성장억제 효과

실험예 2. 인체 암 세포주 HT-1080을 이용한 누드마우스에서 종양 성장억제 효과

암컷 Balb/c 누드마우스 (8주령, 체중 18 g, 군당 8마리)에 암세포 1 x 10⁷ 세포/mL의 농도로 마우스 당 0.3 ml 씩 피하로 이식하였다. 암세포를 이식한 다음날부터 실험 종료 전날까지 시료와 용매 (대조군: 0.2％ 트윈-80 수용액)를 경구로 마우스 체중 20 g당 0.2 ml씩 매일 1회 총 13회 투여하였다. 양성 대조물질 아드리아마이신은 2 mg/kg을 2일에 1회 씩 복강투여하였다. 암세포 이식 후 7일부터 실험 종료일까지 6회 종양의 크기를 개체별로 측정하였다. 종양의 크기는 캘리퍼를 이용하여 3 방향을 측정한 후 다음의 계산식으로 표현하여 표 2에 나타내었다.

종양 부피 = (길이 x 폭 x 높이)/2

표 2에서 보는 바와 같이 본 발명의 화합물 1, 4, 7, 13, 20은 15 mg/kg을 경구 투여하였을 때 우수한 항암작용을 나타내었다.

표 2. 화합물 1의 경구 투여에 의한 종양 성장 억제 효과

실험예 3. 암세포 전이 억제 효과

B16F10 멜라노마 세포를 배양한 후 세포를 트립신-EDTA를 이용하여 분리하고 0.85％ 식염수로 희석하여 2.5 x10⁶ 세포/mL 로 맞추었다. 준비된 암세포 현탁액을 1개 군당 6마리씩으로 한 암컷 S.P.F. C57BL/6마우스에 한 마리당 0.2 ml씩 꼬리정맥내로 주사한 후 4시간 뒤 약물 투여를 시작하여 13일까지 마우스 체중 20 g당 0.2％ 트윈-80수용액에 시료를 현탁시킨 것을 0.2 ml씩 매일 경구 투여하였다. 양성대조군 아드리아마이신 2 mg/kg은 2일에 1회씩 복강 주사하였다. 세포 이식 14일 후 마우스를 부검하여 암세포가 전이된 폐를 적출하여 중성포르말린용액에서 고정하였으며 고정된 폐는 사진 촬영 후 암 콜로니 수를 육안으로 계수하여 표 3에 나 타내었다.

표 3. 암 전이 억제 효과

표 3에서 보는 바와 같이 본 발명의 화합물 1, 7, 13, 20은 20 mg/kg을 경구 투여했을 때 강력한 암세포 전이 억제작용을 나타내었으며 화합물 13을 제외하고는 양성대조군으로 사용한 아드리아마이신 2 mg/kg 복강 투여한 것보다 우수한 효과를 나타내었다.

실험예 4. 항알러지 효과

Katayama의 방법 (Microbiol. Immunol., 22, 89 (1978))에 따라 IgE-의존성 경피 반응을 동물 모델을 이용하여 항알러지 효과를 평가하였다. DNP-HSA에 대한 마우스 IgE 혈청 10 μg을 ICR 마우스 숫컷의 등 양쪽에 피하주사하고, 48시간 후에 DNP-HSA 0.2 g과 에반스 블루 1.6 mg을 인산완충액 생리식염수 0.2 mL에 녹여 꼬리정맥에 주사하였다 (1군 당 6마리). 30분 후에 동물을 희생시키고 등 피부 일정부위를 취하고 1N-KOH 1 mL를 넣고 37℃에서 16시간 추출하고 0.6N 인산-아세톤(5:13) 4 mL를 가하여 진탕하고 여과한 후 추출된 색소를 620 nm에서 비색정량하였다. 시료는 0.2％ 트윈-80 수용액에 현탁하여 DNP-HSA 주사하기 30분 전에 경구 투여하였다.

표 4. 항알러지 효과 비교

표 4에서 보는 바와 같이 본 발명의 화합물들은 대응되는 24번 탄소의 이중결합이 있는 기존화합물보다 항알러지 효과가 31.4％ 내지 83.3％ 증가하였으며, 그 중에서 화합물 13, 화합물 20은 양성 대조 약물로 사용한 아젤라스틴보다 우수한 항알러지 효과를 나타내었다.

실험예 5. 급성독성 실험

체중 20 g 인 ICR계 마우스 20마리 씩을 1개군으로 하고 본 발명에서 제조한 화합물 1, 화합물 4, 화합물 7, 화합물 13, 화합물 19, 화합물 20을 각각 0.5％ 셀 룰로오스메틸셀룰로오스에 현탁시켜 2500 mg/kg을 경구적으로 1일 1회 7일간 투여하였다. 투여하고 2주간 관찰하였으나 사망하는 동물은 없었다.

본 발명은 구조식 1의 신규한 화합물과 이들 화합물의 제조방법을 제공하는 것이다. 본 발명의 화합물은 시험관내 및 생체내에서 항암력이 우수하고 암전이 억제 효과 등이 우수하여 폐암, 간암, 위암, 췌장암, 유방암, 대장암, 자궁경부암, 뇌암, 피부암, 후두암, 백혈병 등에 대한 항암제, 암전이 억제제, 항알러지제로서의 용도를 제공한다. 또한 암 발생 억제효과가 탁월함으로 암예방의 목적으로도 활용할 수 있다. 동물 실험에서 급성독성이 없는 것으로 판명되었기에 안전하게 투여할 수 있는 의약품 및 기능성 소재를 제공할 수 있다.

Claims (10)

1. 다음 구조식 1의 화합물.

   구조식 1 :

   

   구조식 1에서,

   R1은 -글루코실(2→1)글루코스, 또는 -글루코스이고 R2와 R3가 수소인 화합물, 또는

   R2는 a-히드록시, -α-O-글루코스, 또는 -α-O-글루코실(2→1)람노스이고

   R1과 R3가 수소인 화합물, 또는

   R3은 글루코스이고 R1과 R2가 수소이거나, R1은 수소아고 R2가 α-히드록시인 화합물, 또는

   이때에 20번 위치가 20(S), 20(R) 또는 20(S, R)인 이성체를 포함한다.
2. 청구항 1에 있어서, 20(S)-, 20(R)- 또는 20(S, R)-3-O- [β-D-글루코피라노실 (1→2)-β-D-글루코피라노실] 담마란-3β, 12β, 20-트리올의 화합물.
3. 청구항 1에 있어서, 20(S)-, 20(R)- 또는 20(S, R)-3-O-β-D-글루코피라노실 담마란-3β, 12β, 20-트리올의 화합물.
4. 청구항 1에 있어서, 6-O- [α-L-람노피라노실 (1→2)-β-D-글루코피라노실] 담마란 -3β, 6α,12β, 20-테트라올의 화합물.
5. 청구항 1에 있어서, 20(S)-, 20(R)- 또는 20(S, R)-6-O-β-D-글루코피라노실 담마란-3β, 6α, 12β, 20-테트라올의 화합물.
6. 청구항 1에서, 20-O-β-D-글루코피라노실 담마란-3β, 6α, 12β, 20(S)-테트라올의 화합물.

   청구항 1에서, 20-O-β-D-글루코피라노실 담마란-3β, 12β, 20(S)-트리올의 화합물.
7. 구조식 2의 화합물을 수소첨가반응에 의하여 환원하여 구조식 1의 화합물을 제조하는 방법. 즉, 사용되는 용매는 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 물, 디옥산, 에틸아세테이트 중에서 선택된 용매 또는 선택된 용매를 혼합하여 사용한다. 바람직한 반응촉매는 팔라디움-챠콜이며 타 금속 예를 들어 백금, 로디움도 사용될 수 있다. 촉매 량은 반응시킬 화합물의 중량 대비 5내지 50％를 사용한다. 수소화 압력은 상압 내지 80파운드 psi가 바람직하며 온도는 대략 실온에서 40℃, 반응시 간은 3 시간 내지 30시간인 것을 특징으로 하는 제조 방법.

   구조식 2 :

   

   R1은 -글루코실(2→1)글루코스, 또는 -글루코스이고 R2와 R3가 수소인 화합물, 또는

   R2는 α-히드록시, -α-O-글루코스, 또는 -α-O-글루코실(2→1)람노스이고

   R1과 R3가 수소인 화합물, 또는

   R3은 글루코스이고 R1과 R2가 수소이거나, R1은 수소아고 R2가 α-히드록시인 화합물, 또는

   이때에 20번 위치가 20(S), 20(R) 또는 20(S, R)인 이성체를 포함한다.
8. 청구항 1에서 구조식 1의 화합물을 암 치료제, 암 전이 억제제, 항알러지제로 사용하는 약학적 용도.
9. 구조식 3에서, R1, R2, R3은 수소인 화합물, 또는

   R1, R3는 수소, R2는 α-히드록시인 화합물, 또는

   이때에 20번 탄소가 20(S), 20(R), 20(S, R)인 이성체를 포함하는 화합물을 암 치료제, 암 전이 억제제, 항알러지제로 사용하는 약학적 용도.

   구조식 3 :

   
10. 청구항 8, 청구항 9에 있어서, 청구항 1의 구조식 1의 화합물 또는 청구항9의 구조식 3의 화합물을 유효성분으로 하여 제조한 정제, 과립제, 경질캅셀제, 연질캅셀제, 주사제, 크림제 또는 연고제인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.