KR20050120663A

KR20050120663A - 장기간 작용하는 생물학적 활동 컨쥬게이트들

Info

Publication number: KR20050120663A
Application number: KR1020057017965A
Authority: KR
Inventors: 아베라르도 실바; 존 이 에릭슨; 미첼 에이센스테트; 엘레나 아포니나; 세르게이 굴닉
Original assignee: 세쿠오이아 파마큐티컬스 인코오퍼레이티드
Priority date: 2003-03-24
Filing date: 2004-03-24
Publication date: 2005-12-22
Also published as: AU2004223829A1; CA2520257A1; EP1620120A2; JP2006521361A; WO2004085505A3; NZ543122A; JP2011006419A; NZ567952A; US20070207952A1; EP1620120A4; WO2004085505A2

Abstract

본 발명에서는 알부민과 같은 거대분자들과 반응하여 공유 결합 복합체를 생성하여 생물학적 활성 화합물을 제공하며, 여기에서 상기 생성된 복합체들은 생체 내에서 요구되는 생물학적 활성을 보인다. 보다 상세하게는, 상기 복합체들은 결합기와 단백질에 공유적으로 결합되는 생물학적 활성 부위를 포함하는 복합체들을 분리한다. 상기 복합체들은 정제되고 분리된 단백질을 가지는 레닌(renin) 억제제 또는 바이러스 융합 억제 펩타이드와 같이 생물학적 활성 부위를 컨쥬게이트하여 제조된다. 상기 복합체들은 컨쥬게이트되지 않은 분자들과 비교하여 혈류에서 존속기간이 연장되며, 컨쥬게이트되지 않은 분자와 비교하여 연장된 시간 동안 생물학적 활성을 보인다. 또한 본 발명에서는 바이러스 감염의 억제제이고 및/또는 항-융합화 특성을 보이는 항-바이러스 화합물들을 제공한다. 특히, 본 발명에서는 인간 면역 결핍 바이러스(HIV), 호흡기 신시티움바이러스(respiratory syncytial virus; RSV), 인간 파라인플루엔자 바이러스(human parainfluenza virus; HPV), 홍역 바이러스(measles virus) 및 원숭이 면역결핍 바이러스(simian immunodeficiency virus; SIV)와 같은 바이러스들에 대항하여 억제 활성을 가지고 바이러스 감염의 치료를 위하여 연장된 작용 기간을 가지는 화합물들을 제공한다.

Description

장기간 작용하는 생물학적 활동 컨쥬게이트들{Long acting biologically active conjugates}

본 출원은 2003년 11월 10일자로 출원된 미국 가출원번호 제60/518,892호, 2003년 3월 24일자로 출원된 미국 가출원번호 제60/456,472호 및 2003년 3월 25일자로 출원된 미국 가출원번호 제60/456,952호의 우선권 효력을 청구하며, 본 명세서에서 이들 전체를 참고자료로 통합하여 수록하였다.

본 발명은 공유 결합된 복합체들을 생성하여 알부민과 같은 단백질과 반응하는데 사용될 수 있는 생물학적 활성 화합물에 관한 것이며, 여기에서 상기 복합체들은 생체 내에서 요구되는 생물학적 활성을 보인다. 보다 상세하게는, 상기 복합체들은 결합기 및 단백질에 공유 결합되는 생물학적 활성 부위를 포함하는 복합체들을 분리한다. 하나의 구현예에서, 상기 단백질은 알부민 또는 HSA와 같은 혈액 단백질이다. 또 다른 구현예에서, 상기 단백질은 재조합 HSA이다. 상기 복합체들은 정제되고 분리된 단백질을 가지는 레닌(renin) 억제제 또는 바이러스 융합 억제 펩타이드와 같은 생물학적 활성 부위를 컨쥬게이트하여 제조된다. 상기 복합체들은 컨쥬게이트되지 않은 분자들과 비교하여 혈류에서 존속기간이 연장되며, 컨쥬게이트되지 않은 분자와 비교하여 연장된 시간 동안 생물학적 활성을 보인다. 선택적으로, 본 발명의 상기 화합물들 및 복합체들은 분리되고 정제된다. 또한 본 발명에서는 본 발명의 신규 분리된 복합체들을 포유동물 숙주의 혈류에 투여하는 단계를 포함하여 생체 내에서 요구되는 생물학적 효능을 성취하기 위한 방법을 제공한다.

또한 본 발명에서는 바이러스 감염 억제제인 뉴클레오사이드, 뉴클레오사이드 유사체들, 뉴클레오타이드, 뉴클레오타이드 유사체들, 폴리펩타이드들, 폴리펩타이드 유도체들, 펩타이도유사 화합물(peptidomimetic compounds) 및 이들의 바이오컨쥬게이트된 형태들을 포함하는 화합물들을 제공한다. 또한 본 발명에서는 다제내성(multidrug-resistant) 바이러스 감염을 포함하는 바이러스 감염을 치료하기 위한 작용 기간을 연장시키는 이들 억제제들의 바이오컨쥬게이트된 형태들을 투여하는 방법을 제공한다.

특히, 본 발명에서는 인간 면역결핍 바이러스들(HIV)을 억제하는 화합물들 및 이들의 바이오컨쥬게이트된 형태들 및 다제내성 HIV 감염(mdrHIV)을 포함하는 HIV 감염의 치료를 위한 작용 기간이 연장된 억제제들의 바이오컨쥬게이트된 형태들을 투여하는 방법을 제공한다.

포유동물 숙주에 투여하는데 유용한 특정 활성 펩타이드 및 단백질 치료는 낮은 약물 생체 반응 프로필들을 보이고, 펩타이드 또는 단백질이 특이 표적에 결합하기 전에 종종 빠르게 대사되며 포유동물 시스템에 의해 제거된다. 일반적으로, 한번 투여된 생물학적 활성 제제들은 효소 저하 및 제거에 영향받기 쉽다. 결론적으로, 특정 활성 제제들은 보다 자주 투여되어야 하며, 제제의 혈장 수준에서 원하지 않는 큰 변이의 결과가 부작용 및/또는 반감된 효능을 유도할 수 있다. 효과적인 치료를 위하여 활성 제제는 생물학적 활성의 현저한 상실없이 활성 부위에 전달될 수 있거나 또는 표적 부위에 직접 투여될 수 있어야 한다.

대다수의 약물들은 경구로 투여된다. 일반적으로, 투여량은 약물이 치료 수준을 유지하도록 반복적으로 투여되고, 급류가 원하는 치료 수준들을 초과하는 초기 수준들로 인한 대개 혈액 수준 초과 시간에서 감소되는 것을 요구한다. 다양한 기술적 접근들이 펌프, 방출제어형(controlled release) 또는 서방형(slow release) 타블릿들(tablets) 및 캡슐들, 축적물들(depots) 및 관련 기술들과 같은 의료 시스템에 의한 생물학적 활성 제제들의 투여를 포함하는 이러한 문제들을 해결하기 위하여 설계되었다.

감염에 의해 투여되는 치료 제제들은 생체 내에서 이들의 제한적 존속기간을 과 관련된 유사한 문제들에 직면한다. 더욱이, 반복된 감염은 불편하며 매우 바람직하지 못하다. 따라서, 혈류로 생물학적 활성 제제들의 투여를 용이하게 하고 생체 내에서 연장된 시간 동안 치료 제제들의 효과적인 수준을 유지하는 새로운 방법이 필요성이 대두된다.

HIV / AIDS

후천성 면역 결핍증(AIDS)은 HIV-1의 감염으로 인해 야기되는 치명적인 질병이다. 2002년 말까지 4천 2백만명의 사람들이 전세계에서 HIV-1에 감염되었고, 2천만명 이상이 HIV/AIDS로 사망하였다. HIV의 약물-저항성 계통(drug-resistant strain)은 환자 집단에서 우세하다. 최근 평가들에서 HIV의 약물-저항성 계통이 약물 치료된 HIV-감염 환자들의 50% 이상이다. 약물-저항성 HIV의 유전 비율은 미국에서만 10-15% 사이이다. 또한 매우 근래에 보고된 경우의 평가들은 극적인 증가가 지속된다. 결론적으로, AIDS에 대항하는 약물들 및 백신들의 개발의 필요성이 절실하다.

ADIS 바이러는 1983년 처음 동정되었다. 이것은 다양한 명칭 및 두문자어(acronyme)로 알려졌다. 처음에는 제3의 알려진 T-림프구 바이러스(HTLV-Ⅲ)였고, 면역 시스템의 세포들 안에서 복제하여 완전한 세포 파괴 및 면역 손상을 유발하는 특성을 가진다. AIDS 바이러스는 그들이 복제하는 동안 역전사효소를 사용하는 바이러스의 집단인 레트로바이러스이다. 또한 이러한 특유의 레트로바이러스들은 림프선병 관련 바이러스(lymphadenopathy-associated virus : LAV), AIDS-관련 바이러스(ARV) 및 가장 최근에 인간 면역결핍 바이러스(HIV)로 알려졌다.

바이러스의 다양성

HIV는 원숭이 면역결핍 바이러스(simian immunodeficiency virus; SIV) 및 포유동물에서 면역결핍 질병을 야기하는 다수의 다른 레트로바이러스들을 포함하는 레트로바이러스들의 렌티바이러스과(lentivirus family)의 일원이다. HIV의 두 가지 독특한 유형이 자료에 기재되어 있으며, 즉, HIV-1 및 HIV-2이 있지만 HIV-1으로 감염되는 것이 전세계적으로 보다 일반적이다. 본 명세서에서 사용될 두문자어 HIV는 특별한 언급이 없는 한 일반적으로 모두 HIV-1 바이러스를 말한다. 또한 HIV-1은 메이저(major; M), 아웃라이어(outlier; O) 및 신규(new; N)의 세 개 그룹으로 나뉜다. 대부분의 HIV-1은 열개의 고유한 클레이드(clades), 또는 M 그룹의 아형 중에 하나에 속하는 자료에서 분리한다. 상기 M 그룹 아형은 알파벳 A-J로 나타낸다. 아형 B는 미국과 유럽에서 가장 일반적이다. 그러나, 아형 C는 전세계 HIV의 거의 50%를 차지하고 대부분이 아프리카에서 일반적이다. 고유한 지리적 영역에서 집단을 이루는 경향이 있는 비-C 클레이드들을 가지는 모든 아형들은 아프리카에 존재한다. 아형 동정은 일반적으로 env 유전자의 서열화하고 아형 "지문인쇄(fingerprint)"로 주어진 gp41 서열과 비교하여 결정된다.

바이러스 생존 주기

HIV는 주로 CD4-생성 헬퍼(helper)/유도물질(inducer) T-세포들을 감염시키고, 또한 막 표면에서 CD4 당단백질을 발현하는 다른 세포들도 감염시킨다. 최근 증거는 세포 표면에서 특정 케모카인(chemokine) 수용체들의 공동국재(co-localization)가 효과적인 바이러스 감염에 필수적임을 보여준다. HIV는 CD4+ 림프구들에 세포변성 효과를 가지고, 이들 다수가 엄격하게 절충된 면역 시스템에서 기인하여 여러 해 동안 꾸준히 저하시킨다. 또한 HIV 감염은 신경 기능 퇴보(neurological deterioration) 및 치매를 초래한다. 효과적인 화학치료법으로 치료하지 않으면, HIV 감염은 거의 대부분이 치명적이고 기회감염(opportunistic infection), 암 또는 신경퇴화(neurodegeneration) 질병으로 인해 죽음을 유도한다.

HIV-1 게놈은 아홉 개 이상의 다른 유전자를 포함한다. 가장 큰 유전자는 gag(구조 단백질을 코딩), pol(바이러스 효소-프로테아제, 역전사 효소 및 인테그라아제(integrase)를 코딩) 및 env(외피 당단백질을 코딩)이다. gag , pol 및 env 유전자의 상동성은 모든 레트로바이러스에서 발견된다.

게놈의 gag 및 pol 영역은 다(多)시스트론 전령(傳令) RNA들(polycistronic messenger RNAs)을 인코드한다. 바이러스 다단백질들(polyproteins)은 이어서 pol 유전자의 생성물 자체인 바이러스-인코드된 프로테아제에 의해 성숙한 구조 단백질들 및 효소들로 분절된다. 두 개의 Env 단백질들인 gp120 및 gp41은 세포질 효소에 의해 커다란 전구체(gp160)로부터 분절된다.

다른 HIV-1 유전자 생성물들, 예를 들면, Tat, Rev, Vpr 및 Nef는 바이러스 생존 주기를 조절하는데 개입한다. 또한 Nef는 입자 전염성에 영향을 준다. 유전자는 각각 바이러스 전염성 및 바이러스 입자 성숙에서 Vif 및 Vpu 기능을 생성한다. 바이러스 게놈은 긴 말단 반복 서열들(long terminal repeat sequences; LTRs)에 의해 각 말단 측면에 접한다. LTRs는 전사를 활성화할 수 있고 또한 바이러스 신호들의 조절하에 있는 세포질 단백질들의 결합 부위들을 포함한다. HIV의 상기 복합 조절은 잠복을 설정하는 바이러스를 허용한 다음 다양한 신호들과 빠르게 반응하고 바이러스 단백질들 및 비리온들(virions)을 높은 수준으로 합성하여 많은 수의 자손 바이러스를 생성을 유도하고 방출한 후 감염된 세포의 파괴 및 많은 수의 건강한 CD4+ 림프구들을 재-감염시킨다.

항레트로바이러스 제제:

항레트로바이러스 화학치료 분야는 레트로바이러스, 특히 HIV에 대항하는 효과적인 제제들이 필요한 반응에서 개발되었다. 2002년 말부터 16개의 항레트로바이러스 제제들이 HIV/AIDS의 치료를 위해 FDA의 승인을 받았다. 많은 방법들이 있지만, 대체로 제제는 항레트로바이러스 활성을 보일 수 있으며, 이들 제제의 대부분이 바이러스 역전사효소 또는 바이러스 프로테아제를 억제한다. 고활성 항레트로바이러스 치료법(highly active antiretroviral therapy; HAART)은 바이러스 복제를 강력하게 억제하고 AIDS의 개시를 방해 또는 지연시킬 수 있는 다양한 약물 "칵테일(cocktails)' 또는 셋 이상의 항레트로바이러스 제제의 조합을 말한다(Mitsuya, H., and J. Erickson. 1999. Discovery and development of antiretroviral therapeutics for HIV infection., p. 751-780. In T. C. Merigan and J. G. Bartlet and D. Bolongesi(ed.), Textbook of AIDS Medicine. Williams & Wilkins, Baltimore). 그러나, HIV-1 감염에 대하여 효과적인 장기간 항레트로바이러스 치료를 제공하는 능력은 처음에 검출가능하지 않은 수준에서 유리한 바이러스 억제에 도달하는 이들의 40-50%가 결국 치료 실패를 경험하였고 단지 일부만이 성공하였다(Grabar et al., 2000. Factors associated with clinical and virological failure in patients receiving a triple therapy including a protease inhibitor. Aids. 14: 141-9; Wit et al., 1999. Outcome and predictors of failure of highly active antiretroviral therapy: one-year follow-up of a cohort of human immunodeficiency virus type 1-infected persons. J Infect Dis. 179: 790-8). 더욱이, HIV-1로 감염된 항바이러스 치료-경험이 없는 사람들의 10-40%가 약물-저항성 HIV-1 변이체(Wainberg, M. A., and G. Friedland. 1998. Public health implications of antiretroviral therapy and HIV drug resistance. JAMA. 279: 1977-83)의 유전으로 인해 가능한 HAART(Gulick et al., 1997. Treatment with indinavir, zidovudine, and lamivudine in adults with human immunodeficiency virus infection and prior antiretroviral therapy. N Engl J Med. 337: 734-9; Hammer et al., 1997. A controlled trial of two nucleoside analogues plus indinavir in persons with human immunodeficiency virus infection and CD4 cell counts of 200 per cubic millimeter or less. ADIS Clinical Trials Group 320 Study Team. N Engl J Med. 337: 725-33; Staszewski et al., 1999. Efavirenz plus zidovudine and lamivudine, efavirenz plus indinavir, and indinavir plus zidovudine and lamivudine in the treatment of HIV-1 infection in adults. Study 006 Team. N Engl J Med. 341: 1865-73) 하에서 영구적인 바이러스 복제(플라즈마 HIV RNA>500 카피들/ml)를 가진다. 또한 이들 항-HIV 약물들로 인해 일부 면역학적 재구성만이 진보된 HIV-1 감염을 앓는 환자들에서 달성되었음이 분명하다.

약물 저항성:

HIV의 약물-저항성 돌연변이계의 신속한 출현 및 보급은 최근 약물을 효력없게 하고 치료 실패의 하나의 주요 원인이 된다. 최근 평가들은 북아메리카 항만 HIV에서 약물 경험 환자들의 75% 이상이 다가-약물 '칵테일'에 사용된 16 FDA 승인 항레트로바이러스 제제의 하나 이상에 내성이 있다. 약물-저항성 HIV 균주들은 HIV의 야생형 균주에 감염되고 하나 이상의 항레트로바이러스 제제(Burger, et al., Antivir. Ther., 1998)의 차선적 복용량에 노출된 사람들에게서 발생한다. 항레트로바이러스 제제들은 뉴클레오사이드 역자사효소 억제제들(NRTIs), 비-뉴클레오사이드 역전사효소 억제제들(NNRTIs) 및 프로테아제 억제제들(PIs)의 세 개의 주요 분류가 있다. 약물의 초기 균주는 특이 약물 섭생에 의존하여 선택되고 가끔 다른 같은 분류에 의해 하나의 약물의 대체가 요구되는 HIV에 저항력이 있다. 그러나, 복합 돌연변이에 의한 새로운 균주들의 오버타임 지속적인 선택은 종종 치료를 실패시키는 분류-특이적 약물 저항성을 유도한다. 동일 분류의 약물에서 교차-저항성(cross-resistance)은 놀랍게 높은 비율에서 퍼진다(Erickson, et al., AIDS, 13: S189, (1999); Gulnik, et al , Vitam. Horm., 58: 213(2000); Menendez-Arias, et al., Trends Pharmacol. Sci., 23: 381 (2002)).

약물 부작용들:

약물 저항성이 약물의 차선적 수준의 존재하에서 낮은 수준의 복제를 초래하는 적당한-수용 이론(well-accepted theory)에 기초하여 칵테일에서 모든 약물의 최대내성 복용량(maximum tolerable dose)을 처방하는 항레트로바이러스 치료에서 일반적으로 실시된다. HIV는 만성적인 불치의 감염이기 때문에 최대 복용량에서 항레트로바이러스 약물 칵테일들을 하루 복용하는 필요조건은 매우 높은 피크 약물 수준을 초래한다. 이러한 실시는 많은 이들 약물들의 만성적인 독성들로 인하여 생명을 위협하는 부작용들을 놀랍게 높은 비율로 유도한다(Tozser, et al., Ann. NY Acad. Sci. 946: 145(2001) 재고 참조). HAART 독성과 관련된 보다 심각한 부작용들의 일부는 간 문제들, 심장 질환 및 지방이영양증(lipodystrophy)을 포함한다(Chen, et al., J. Clin. Endocrinol. Metab., 87:4845 (2002); Holstein, et al., Exp. Clin. Endocrinol. Diabetes 109:389 (2001)). 저항성 및 부작용들의 조합은 약물 섭생들에 대한 낮은 점착성으로 인해 결국 40-45% 사이의 치료 실패 비율을 초래한다(Wit, et al., J. Infect. Dis. 179:790 (1999); Fatkenheuer, et al., AIDS 11: F113(1997); Lucas, et al., Ann. Intern. Med. 131: 81(1999); Chen, et al., 41st Intl Conf Antimicrob. Agents Chemother., Abstract I-1914 (2001)). 따라서, 최근 HAART에 걸린 환자들의 실제 수는 치료의 선택을 없앨 것이다.

HAART의 장기간 이점들은 낮은 점착성 및 약물 저항성의 이중적 문제로 인해 제한된다. 이들 문제에 더하여 엄청난 고가의 약물은 HAART에 대한 지구상의 HIV-감염 인구의 접근을 엄격히 제한한다. 따라서, 1) 야생형 및 약물 저항성 바이러스에 대하여 효과적이고, 2) 안전하고 비독성이며, 및 3) 생성 또는 적어도 운반하는데 상대적으로 저렴한 새로운 치료제의 필요성이 요구된다. 이들 필요 조건들은 유효성, 약리학, 안정성 및 약물 작용의 메카니즘의 통상적인 쟁점이 추가되는 경우 각별한 면역성검사를 취한다(De Clercq, Clin Microbiol Rev. 10: 674-93(1997); Erickson et al., AIDS 13: S189-204(1999)).

융합 억제제들 및 연장된 치료에서 이들의 제한:

약물 저항성 문제에 대한 하나의 흥미있는 해결책은 최근 시판되고 있는 것들과 다른 메카니즘을 가지는 약물을 개발하는 것이다. 여기에는 많은 방법이 있으며, 대체로 제제가 세포 배양에서 항-레트로바이러스 활성을 보일 수 있다. 신규한 메카니즘 작용을 가지는 HIV 억제제들은 DeClerq, Curr Med Chem. 8: 1543-72 (2001)에 재고되어 있다. 이들 화합물들 사이에서, HIV 융합("항-융합화 펩타이드들")의 폴리펩타이드 억제제들은 인간 임상 시험들에서 효과를 보였다. HIV는 인간 림프구 및 막결합 CD4 당단백질 및 케모카인 수용체를 생성하는 다른 세포 유형을 감염시킨다. CD4-생성 세포의 HIV 감염에서 초기 단계는 바이러스 막결합 HIV gp41 외피 당단백질을 통한 바이러스 막과 비공유적으로 결합하는 HIV gp120 외피 단백질에 의한 CD4 수용체의 인식이다. gp41 단백질 또는 "융합 단백질"은 융합 펩타이드 및 두 개의 자가-결합 나선 생성 절편(self-associating helix-forming segments)("N-나선" 및 "C-나선")을 포함하는 여러 개의 "융합화(fusiogenic)" 도메인들을 포함한다.

CD4 및 케모카인 수용체들에 대한 gp120 단백질의 인식 및 결합은 융합화 도메인들의 폭로, 세포 막으로의 gp41 삽입 및 두 개의 나선-생성 절편들의 자가-결합을 통한 "헤어핀(hairpin)" 구조를 유발한다. gp41의 헤어핀 구조 생성은 바이러스 및 세포 막의 융합에서 필수적 단계가 되는 것으로 생각되며, 완결하는데 30분 이상 요구되는 느린 과정이다. 정상 세포질 과정들에서 평범한 동안에 막 융합 사건은 또한 합포체(syncytia)의 생성 및 이어지는 세포의 제거 또는 사멸을 유도하는 외피 바이러스들의 세포내 진입 및 건강한 세포들과 바이러스-감염된 세포들의 변종 융합을 포함하는 다양한 질병 상태에 관여한다. 펩타이드들 및 작은 물질들은 표적 세포들의 레트로바이러스 감염을 억제하는 것을 포함하는 막 융합-결합 사건들을 억제하거나 또는 다른 한편으로 파열시키는 것으로 알려져 있다.

다수의 폴리펩타이드들은 융합 반응과 함께 간섭하여 CD4 세포들의 HIV 감염을 억제한다고 기재되어 있다. "항-융합화 펩타이드들"이라 불리는 이들 각각은 gp41의 두 나선-생성 절편들 중 하나의 고유한 아미노산 서열로부터 유도된다(Jiang et al., Curr. Pharmaceut. Design 8: 563(2002)). gp41의 N- 또는 C-나선-생성 영역에서 유래하는 서열들을 구성하는 폴리펩타이드들은 세포 배양 정량에서 항바이러스 활성을 보인다. HIV-1, HIV-2 및 SIV 융합 단백질들의 다양한 분리된, 재조합 형태의 X-선 결정 구조들 및 NMR 용액 구조들은 이들 모두가 역평행(anti-parallel), 나선 다발 형태 폴드(helical bundle-type fold)를 가지는 트라이머(trimers)를 형성하는 것을 보인다. 상기 다발은 각각이 단일 단백질 사슬로부터 두 개의 나선-생성 절편들 사이에서 역평행 결합하여 생성되는 세 쌍의 헤어핀들로 이루어진다. 상기 헤어핀들은 첫번째 또는 N-말단 나선 절편들이 트라이머의 내부 다발과 결합하고, 두번째 또는 C-말단 절편들이 두 개의 인접한 N-말단 나선들에 의해 형성되는 홈(groove)과 서로 작용하는 방법으로 배열된다. 따라서, 헤어핀 구조는 트라이머의 기본적인 빌딩 블럭(building block)과 반대되는 트라이머의 4원 구조로 조립되는 결과를 나타낸다.

DP178(Wild, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91: 9770(1994))를 포함하고, 또한 T-20, C34(Chan, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95:15613(1998)) 및 DP107로 알려진 C-말단 및 N-말단 7가 반복 영역에서 유래하는 펩타이드들은 강력한 항바이러스 활성을 보인다.

미국특허번호 제6,013,263호, 제6,017,536호 및 제6,020,459호는 본 명세서에서 전체를 통합수록하였으며, HIV-1 분리 LAI(HIV-1 LAI)에서 유래하는 gp41의 638-673 아미노산들과 일치하는 36개의 아미노산 펩타이드 DP178 및 HIV-1 LAI에서 유래하는 gp41의 558-595 아미노산들과 일치하는 38개의 아미노산 펩타이드 DP107이 개시되어 있고 둘다 강력한 항-HIV-1 활성을 보인다. 국제공개공보 제WO 00/06599호는 불활성화 gp41에 대한 C34의 용도, 이를 테면 HIV의 세포로의 진입을 막거나 또는 감소시킨다고 알려준다. 이들은 트라이머의 꼬인 코일(coiled coil) 또는 코어(core)에 결합하고, 일시적인 상태 동안에 gp41의 구조가 이로 인해 내인성 C-나선들의 결합을 방해한다고 가정하였다. 34-잔기 펩타이드인 T-20은 약물-경험 환자들에서 사실상 낮은 바이러스 로드(load)를 보인다. 이는 gp41이 새로운 항-HIV 약물들의 개발에 있어서 기대할 만한 표적임을 입증한다. 공교롭게도, T-20의 치료 운반은 그들의 펩타이드적 특성에 의하여 제한된다. T-20은 1.8 시간의 짧은 생존기간을 가지며(Kilby, et al., Nat. Med., 4:1302(1998)), 하루에 두 번 피하 주사로 투여되어야한다. 주사-부위 염증은 일반적인 부작용 반응이고 약물 제형 및 제조하는 면역성 검사는 고가의 치료 비용을 유발한다. 또한 T-20은 생체 내 및 생체 밖에서 모두 약물 저항성을 유도하는 다수의 단일 돌연변이들의 선발을 통하여 무력하게 된다.

백업 FI인 T-1249는 2상 임상시험(Phase Ⅱ clinical trials)에 있다. 이 화합물은 T-20 보다 긴 펩타이드이다. 이것의 주요 이점은 T-20 보다 강력하고 긴 반감기(half-life)를 가진다는 것이다. 그러나, T-1249는 아직 매일 주사하여야 할 필요가 있고 약물 저항성 돌연변이체들이 이 약물을 사용하여 쉽게 선발된다.

이와 같이 많은 폴리펩타이드들, T-20 및 T-1249는 정맥내로 또는 피하로 투여되어야만 하고, 둘 다 빠른 혈청 제거 및 펩티다아제와 프로테아제 활성으로 인하여 본질적으로 생체 내에서 짧은 반감기를 보인다. 이들 약리학적 제한들은 이들 제제들의 치료 효과를 감소시키는 반면, 동시에 고가의 치료 비용을 초래한다.

또한 T-20 및 T-1249와 같이 C34도 빠른 혈청 제거 및 펩티다아제와 프로테아제 활성으로 인하여 본질적으로 생체 내에서 짧은 반감기를 제공한다. 이는 이들의 효과적인 항-바이러스 활성을 크게 차례로 감소시킨다.

선행기술에 기재된 많은 항융합화 폴리펩타이드들 및 펩타이도유사물들이 일반적으로 30-40 아미노산들로 이루어진 유사한 크기에서 T-20 및 T-1249에서 발견된 것과 동일한 제한들을 제공할 것으로 생각할 수 있다.

최근 항레트로바이러스 치료는 생존-위협적 부작용과 생존-위협적 약물 저항성의 개발 사이에서 교체된다. 따라서, 그들의 치료 효과를 절충하지 않은 이들 제제들의 만성적 독성을 감소시킬 수 있는 약물 수준에서 항레트로바이러스 제제를 제공하기 위한 방법의 필요성이 대두된다. 예를 들면, 그 항-융합화 활성에 실제로 영향을 주지 않고 생체 내에서 C34 같은 펩타이드의 반감기를 연장하는 방법이 필요하다. 또한 약물-저항성 HIV 감염, 특히 T-20 및 T-1249에 내성이 있는 바이러스 균주로 인한 감염의 치료에서 효과적인 억제제의 개발이 필요하다. 더 나아가, 야생형 감염의 치료 세팅(setting)에서 약물 저항성 HIV의 발생을 방해 또는 지연시킬 수 있는 제제의 개발이 필요하다.

또한 역전사효소 억제제들 및 프로테아제 억제제들의 반감기를 연장하는 방법이 필요하며, 예를 들면, 이들 제제들은 장기간 기준에서 독성이 적은 복용량으로 투여될 수 있다. 이러한 방법들은 년간 환자 당 요구되는 누적된 약물 양을 최근의 치료들보다 줄일 수 있기 때문에 보다 저렴하게 치료할 수 있다.

선행한 문제들의 검토에서, 약물 저항성 HIV 균주들에 대항하는 억제제들의 필요성이 존재한다. 또한 약물 저항성 HIV gp41에 대항하는 억제제들의 필요성도 존재한다. 또 감염된 개체들에서 약물 저항성 HIV 균주들의 발생을 방해 또는 느리게할 수 있는 HIV의 억제제들의 필요성이 존재한다. 약물 저항성 HIV 균주들을 억제하고, 야생형 HIV 감염의 세팅에서 약물 저항성 균주들의 발생을 느리게 하는 능력을 가지는 억제제들을 "저항성-방균물(resistance-repellent)" 억제제로 정의된다.

또한 연장된 작용 기간을 가지는 HIV 융합 억제제들의 필요성이 존재한다. 생체 내에서 바이러스 복제를 영속적으로 억제하는 연장된 생체 내 반감기를 가지는 억제제들은 "롱 라스팅(long-lasting)" 억제제로 정의된다.

저항성-방균물 억제제 및 롱 라스팅 억제제는 HIV/AIDS의 치료에서 공백 및 유일한 이점들을 각각 나타낸다. 또한 단일 제제에서 이들 두 가지 특성들의 조합은 항바이러스 치료에서 진화적 이점을 나타낸다고 인식될 수 있다. 저항성-방균물 억제제 및 롱 라스팅 억제제 모두 폭넓은 스펙트럼 내구성 억제제들로 정의된다.

프로드럭으로서의 혈청 알부민:

독소루비신-알부민 컨쥬게이트는 종양 성장을 억제하는 프로드럭 제제로서 개시되어 있다(F. Kratz et al., J. Med. Chem. 2000, 43, 1253-1256). 그러나, 컨쥬게이트는 종양 세포의 리소좀(lysosomes) 및 인도좀(indosomes)에서 낮은 pH 값 존재하에 방출되는 약물을 허용하는 산-민감성 결합기로 제조된다. 컨쥬게이트의 제조는 생체 밖 합성 및 비용이 고려된 약물 알부민 컨쥬게이트의 특성을 피하여 설계된다.

도 1은 본 발명의 융합 억제제 펩타이드들의 서열을 보여준다.

도 2는 백서에서 컨쥬게이트되지 않은(SPI-30014Q) vs HSA-컨쥬게이트된(SPI-30014HSA) 융합 억제제 펩타이드의 약동학(pharmacokinetics)을 보여준다.

도 3은 백서에서 컨쥬게이트되지 않은(SPI-70038Q) vs HSA-컨쥬게이트된(SPI-70038HSA) 융합 억제제 펩타이드의 약동학(pharmacokinetics)을 보여준다.

도 4는 백서에서 펩타이드(SPI-30014Q) vs HSA-펩타이드 컨쥬게이트(SPI-30014HSA)의 약동학(pharmacokinetics)을 보여준다.

도 5는 백서에서 펩타이드(SPI-70038) vs HSA-펩타이드 컨쥬게이트(SPI-70038HSA)의 약동학(pharmacokinetics)을 보여준다.

발명의 요약

본 발명은 공유 결합된 복합체들을 생성하여 단백질과 반응하는데 사용될 수 있는 생물학적 활성 화합물에 관한 것이며, 여기에서 상기 복합체들은 생체 내에서 요구되는 생물학적 활성을 보인다. 보다 상세하게는, 상기 복합체들은 항바이러스 화합물 및 결합기와 같은 화합물을 포함하는 복합체들을 분리한 것이고, 혈액 구성성분은 알부민과 같은 단백질이다. 또한 본 발명에서는 항-바이러스 활성과 같이 생체 내에서 요구되는 활성을 달성하는 방법을 제공하며, 본 발명의 신규 분리된 복합체들을 포유동물 숙주의 혈류로 투여하는 단계를 포함한다.

하나의 구현예에서, 활성 성분으로서 본 발명에 의한 항-바이러스 복합체와 같은 정제된 컨쥬게이트를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 본 발명에 의한 약제학적 조성물들은 본 발명의 항-바이러스 복합체들과 같은 하나 이상의 컨쥬게이트를 0.001-100% 선택적으로 포함한다. 이들 약제학적 조성물들은 혈류에 생물학적 활성 제제들을 투여하는 당업계에 알려진 다양한 방법에 의하여 투여 또는 공동-투여될 수 있다. 본 발명의 바람직한 관점에서, 상기 조성물들은 주사로 투여될 수 있다. 다른 바람직한 관점에서, 상기 조성물은 주입을 통해 투여될 수 있다. 상기 조성물은 컨쥬게이트의 완충 식염수 용액을 편리하게 포함할 수 있다.

다른 구현예에서, 생물학적 활성 제제들, 특히 항-바이러스 제제와 같은 치료제들을 포함하는 분리된 컨쥬게이트 복합체들을 운반하는 방법들 및 조성물들을 제공하고, 상기 복합체들은 컨쥬게이트되지 않은 제제들과 비교하여 혈류에서 연장된 반감기를 가지는 제제들을 포함한다.

본 발명은 결합기에 공유적으로 부착 또는 결합된 생물학적 활성 화합물을 사용하는 것을 포함하며, 상기 결합기는 단백질에 존재하는 관능성(functionalities)을 가지는 공유 결합들을 생성하는 능력이 있는 하나 이상의 화학 결합 부위를 포함한다. 숙주의 혈액, 특히 숙주의 혈류로 복합체들이 투여되기 전에 분리된 복합체들을 제조하여, 생물학적 활성 복합체가 컨쥬게이트되지 않은 생물학적 활성 제제와 비교하여 연장된 시간동안 혈류에서 효과적인 치료 효능을 지속하도록 생성된다.

특히, 본 발명에서는 HIV gp41 및 HIV의 저항성-방균물, 롱-라스팅 및 폭넓은 스펙트럼 내구성 억제제들, 이들의 조성물들, 설계 방법 및 구제치료(salvage therapy)와 일차선 양식들(first-line modalities)에서 약물-저항성 HIV 및 wtHIV 감염을 치료하기 위한 이들의 용도를 제공한다. 특히, 이들 화합물들은 gp41 서열에서 자연적으로 발생한 다형성(polymorphisms)을 포함하고 T-20 및 T-1249에 내성을 주는 돌연변이를 포함하는 야생형 HIV 균주들에 대한 활성이 있다. 하나의 구현예에서, 이들 억제제들은 gp41의 N- 및 C-말단 나선 반복 영역의 펩타이드 서열들과 관련된 펩타이드 서열들이다.

다른 구현예에서, 본 발명은 야생형 및 약물-저항성 돌연변이체 gp41 단백질을 표적하고 야생형 및 약물-저항성 HIV 균주들에 대한 항바이러스 활성을 가지는 HIV gp41의 폭넓은 스펙트럼 내구성(지속성) 억제제들의 설계에 관한 것이다. 특히, 이들 화합물들은 gp41의 서열에서 자연적으로 발생하는 다형성을 포함하고 T-20 및/또는 T-1249에 대한 내성을 주는 돌연변이를 포함하는 야생형 HIV 균주들에 대한 활성이 있다. HIV gp41의 폭넓은 스펙트럼 내구성 억제제들의 설계는 안정한 공유 결합을 형성하기 위하여 혈액에서 이용할 수 있는 관능성들과 반응할 수 있는 변형된 펩타이들과 같이 항-바이러스 및/또는 항-융합화 활성을 보이는 펩타이드들의 화학적 반응 변형과 관련된다. 본 발명의 하나의 구현예에서, 변형된 펩타이드들은 안정한 공유 결합을 형성하기 위하여 혈액 구성성분 상에서 아미노기, 히드록시기 또는 티올기와 반응하는 반응기를 포함한다. 본 발명의 다른 구현예에서, 상기 반응기는 알부민과 같은 유동성 혈액 단백질을 포함하는 혈액 단백질 상에서 티올기와 반응하는 말레이미드(maleimide)와 같은 부위를 포함할 수 있다.

보다 상세하게는, 본 발명에서는 안정한 공유 결합을 형성하기 위하여 생체 내 또는 생체 밖에서 혈액 구성성분 상에 티올기와 반응하는 능력이 있는 폭넓은 스펙트럼 내구성 gp41 억제제들을 제공한다. 또한 본 명세서에 개시된 방법으로 생성된 복합체들은 변형되지 않은 화합물보다 안정하고 오랫동안 작용한다. 본 발명에 의해 생성된 이들 복합체들은 대응하는 변형되지 않은 화합물과 비교하여 생체 내에서 연장된 반감기를 가진다. 본 발명의 복합체들은 약 4시간에서 120일의 기간동안 가수분해에 의한 분절 또는 손상으로부터 안정하다.

또 다른 구현예에서, 본 발명은 야생형과 약물-저항성 HIV 균주들에 대한 항바이러스 활성을 가지는 억제제의 바이오컨쥬게이트된 형태와 같은 방법으로 혈청 알부민 같은 유동성 혈액 단백질에 공유적으로 결합된 HIV gp41의 폭넓은 스펙트럼 내구성 억제제들의 바이오컨쥬게이트된 조성물의 설계에 관한 것이다. 특히, 이들 조성물은 gp41의 서열에서 자연적으로 발생한 다형성을 포함하고 T-20 및/또는 T-1249에 대한 내성을 주는 돌연변이를 포함하는 야생형 HIV 균주들에 대한 활성이 있다. 본 발명의 하나의 구현예에서, 바이오컨쥬게이트들은 안정한 공유 결합을 형성하기 위하여 혈액 구성성분 상에서 아미노기, 히드록시기 또는 티올기와 반응하는 반응기를 포함하는 변형된 펩타이드들을 사용하여 생성된다. 본 발명의 다른 구현예에서, 상기 반응기는 알부민과 같은 유동성 혈액 단백질을 포함하는 혈액 단백질 상에서 티올기와 반응하는 말레이미드 같은 부위가 될 수 있다.

또한 본 발명에서는 HIV-1 gp41의 야생형 또는 약물 저항성 돌연변이체와 복합체를 이루는 상기 기재된 화합물을 제공한다.

또 본 발명에서는 약제학적으로 허용가능한 첨가제, 부형제 또는 희석제와 함께 상기 기재된 억제제를 포함하는 약적학적 조성물을 제공한다. 더 나아가 상기 조성물은 부가적 HIV gp41 억제제 및/또는 HIV 프로테아제 억제제 및/또는 HIV 역전사효소 억제제를 포함할 수 있다.

또한 본 발명에서는 상기 기재된 약제학적 조성물을 환자에게 투여하는 단계를 포함하여 HIV 감염을 앓고 있는 환자를 치료하는 방법을 제공한다.

또 다른 구현예에서, 본 발명은 복합체와 공유적으로 결합하는 단백질들과 반응하는데 사용될 수 있는 생물학적 활성 화합물들에 관한 것이며, 여기에서 생성된 복합체들은 생체 내에서 레닌(renin) 억제 활성을 보이는 것을 발견하였다. 보다 바람직하게는, 상기 복합체들은 레닌 억제제 및 결합기를 포함하는 복합체들이 분리된 것이고, 혈액 구성성분은 알부민과 같은 단백질이다. 또한 본 발명에서는 본 발명의 신규 분리된 복합체들을 포유동물 숙주의 혈류에 투여하는 단계를 포함하여 생체 내에서 레닌 활성을 억제하는 방법을 제공한다.

하나의 구현예에서, 활성 성분으로서 본 발명에 의한 정제된 레닌 억제제 복합체를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다. 본 발명에 의한 약제학적 조성물은 본 발명의 하나 이상의 레닌 억제제 복합체들을 0.001-100% 선택적으로 포함할 수 있다. 이들 약제학적 조성물은 혈류에 생물학적 활성 제제들을 투여하는 당업계에 알려진 다양한 방법에 의하여 투여 또는 공동-투여될 수 있다. 본 발명의 바람직한 관점에서, 상기 조성물들은 주사로 투여될 수 있다. 다른 바람직한 관점에서, 상기 조성물은 주입을 통해 투여될 수 있다. 상기 조성물은 컨쥬게이트의 완충 식염수 용액을 편리하게 포함할 수 있다.

용어정의:

다른 상황이 되지 않는다면, 본 명세서 및 청구항에서 사용된 하기 용어들은 이 출원의 목적의 위하여 하기와 같은 의미를 가질 것이다.

본 발명에서 사용한 "복합체(complex)"는 항-바이러스 화합물 또는 레닌 억제제와 같은 생물학적 활성 제제, 결합기 및 알부민과 같은 단백질을 포함하는 화합물이다.

"유도체(derivative)"는 일부 다른 화합물로부터 유도되고 그들의 일반적인 구조를 유지하는 화합물을 의미한다.

분리된 화합물과 같이 "분리된(isolated)"은 그것의 자연 상태에 화합물을 첨가하는 다른 화합물들로부터 실제로 분리된 알부민과 같은 자연적으로 발생하는 화합물이다. 혈액 또는 혈장에서 얻어지는 화합물에 적용하는 "분리된"은 화합물이 항-바이러스 제제 또는 레닌 억제제 등과 같은 생물학적 활성 제제로 컨쥬게이트되기 전에 혈액 또는 혈장 내에 다른 생물학적 화합물들 또는 구성성분들로부터 정제 또는 분리된 혈액 단백질 또는 혈장에서 유래하는 고유의 생물학적 구성성분과 같은 화합물을 의미한다. 분리된 화합물은 생물학적 활성 제제와 반응하는 화합물을 제공하기 전에 실제로 발생하거나 및/또는 실제로 다른 구성성분들로부터 완전히 또는 일부 분리된 또는 정제되는 별개의 물리적 환경에서 존재한다. 본 발명의 분리된 화합물들 및 복합체는 혈액 또는 혈장의 구성성분을 요구하지 않는 반응으로부터 최소한의 방해를 받는 본 발명의 항-바이러스 제제 또는 레닌 억제제 등의 생물학적 활성 제제들과 보다 선택적인 반응 또는 컨쥬게이션을 허용하는 이점을 가진다.

본 발명에서 사용한 "결합기(linker)"는 생물학적 활성 화합물, 결합기 및 단백질을 포함하는 공유 결합 복합체를 생성하기 위하여, 알부민과 같은 단백질 Pr과 생물학적 활성 화합물 AV를 결합 또는 부착하는 결합기를 말한다.

"약제학적으로 허용가능한"은 일반적으로 안정하고 비독성이며 생물학적으로 또는 다른 요구되지 않는 약제학적 조성물을 제조하는데 유용한 것을 말하며, 수의사 용도뿐만 아니라 인간 약제학적 용도로 허용가능한 것을 포함한다.

"약제학적으로 허용가능한 염"은 상기에서 정의한 약제학적으로 허용가능하고 원하는 약리 활성을 가지는 본 발명에 의한 억제제의 염을 의미한다. 이러한 염들은 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산 및 인산 등의 무기산; 또는 아세트산, 프로피온산, 헥산산(hexanoic acid), 헵탄산(heptanoic acid), 사이클로펜탄프로피온산, 글리콜산, 피루브산, 젖산, 말론산(malonic acid), 숙신산, 말산(malic acid), 말레산(maleic acid), 푸말산(fumaric acid), 타르타르산, 시트르산, 벤조산, o-(4-히드록시벤조일)벤조산, 시나민산(cinnamic acid), 만델산(mandelic acid), 메탄술폰산, 에탄술폰산, 1,2-에탄다이술폰산, 2-히드록시에탄술폰산, 벤젠술폰산, 라우릴 술퍼릭산(lauryl sulfuric acid), 글루콘산(gluconic acid), 글루탐산(glutamic acid), 히드록시나프토에산(hydroxynaphthoic acid), 살리실산(salicylic acid), 스테아르산 및 뮤코닉산(muconic acid) 등의 유기산과 함께 생성된 산 첨가 염들을 포함한다.

또한 약제학적으로 허용가능한 염들은 산성 양성자 상태가 무기 또는 유기 염기와 반응하는 능력이 있을 때 생성되는 염기 첨가 염들을 포함한다. 허용가능한 무기 염기들은 수산화 나트륨, 탄산 나트륨, 수산화 칼륨, 수산화 알루미늄 및 수산화 칼슘을 포함한다. 허용가능한 유기 염기들은 에탄올아민, 다이에탄올아민, 트리에탄올아민, 트로메타민(tromethamine) 및 N-메틸글루카민(N-methylglucamine) 등을 포함한다.

"보호된 유도체(protected derivaties)"는 보호기로 차단된 반응 부위 또는 부위들 내의 억제제 유도체들을 의미한다. 보호된 유도체들은 억제제들 또는 항-바이러스 제제들로서 활동할 수 있는 항-바이러스 제제의 억제제 또는 그들 자체를 제조하는데 유용하다. 적절한 보호기의 포괄적인 리스트는 T.W. Greene, Protecting Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, John Wiley & Sons, Inc. 1999에서 발견할 수 있다.

"치료적인 유효량"은 질병을 치료하기 위한 동물에 투여할 때 이러한 질병 치료 효과를 충족하는 양을 의미한다.

"치료" 또는 "치료하는"은 본 발명의 화합물을 투여하는 것을 의미하며, 하기 사항들을 포함한다:

(1) 질병의 병변 또는 전증후군을 아직 경험하지 않거나 또는 드러내지 않은 질병에 미리 조치하여 동물에서 발생하는 질병을 예방.

(2) 질병의 병변 또는 전증후군을 경험하거나 또는 드러내는 동물에서 질병을 억제(예를 들면, 병변 및/또는 전증후군의 발전을 방해), 또는

(3) 질병의 병변 또는 전증후군을 경험하거나 또는 드러내는 동물에서 질병을 개선(예를 들면, 병변 및/또는 전증후군의 역전).

"안정한(stable)": 컨쥬게이트는 표적에 결합하기 전에 절단되지 않으면 안정하고, 알부민과 같은 컨쥬게이트의 거대분자 구성성분은 표적 결합 이전에 실제로 손상되지 않는다. 상기 거대분자는 일부 프로테아제 분열이 발생하더라도 컨쥬게이트가 약 50kDa 이상의 분자량을 유지하는 경우 실제로 손상되지 않는다. 상기 컨쥬게이트는 약 50kDa 이상의 분자량을 유지하는 경우 온전한 것으로 간주된다.

"실제로 유지된다(substantially retains)": 컨쥬게이트는 컨쥬게이트되지 않은 약리학적 활성 부위의 약 10% 이상에서 그것의 활성이 존재하는 경우 약리학적 작용 부위의 활성이 실제로 유지된다(그리고 몰 비율에서 보다 높을 수 있다). 컨쥬게이트의 일반적인 활성은 컨쥬게이트되지 않은 약리학적 작용의 0.1-10배의 활성이 있으며, 더한 활성의 강도가 관찰될 것으로 생각된다.

"약리학적 불활성(pharmacologically inert)": 컨쥬게이트에서 사용된 거대분자를 고려하여 상기 분자는 비독성임을 의미한다. 상기 분자는 컨쥬게이트에서 유래한 고유의 생물학적 활성을 가지거나 또는 가지지 않을 수 있으며, 일반적으로 가지지 않는 것으로 생각된다. "생물학적 활성이 없음(no biological activity)"은 환자의 정상 생리에서 실제로 어떠한 혼란도 제공하지 않는 환자에게 컨쥬게이트되지 않은 담체의 투여하는 것을 의미한다.

"모조-펩타이드(pseudo-peptide)" 또는 "펩타이드 유사물(peptide mimetics)" 또는 "펩타이도유사물(peptidomimetics)"은 펩티드의 구조, 특성들 및 활성들을 모방하여 설계된 펩타이드의 구조적 유사체들인 변형된 펩타이드들을 의미한다. 상기 변형된 펩타이드들은 동일하거나 또는 개선된 생물학적 활성들을 보이는 반면 효소 손상에 대한 내성의 높은 수준으로 인하여 변형되지 않은 펩타이드와 비교하여 생물학적 및 기능적 활성들이 개선되었다.

특별히 다르게 지시한 것을 제외하고 본 명세서에 기재된 모든 펩타이드들에 대하여, 펩타이드 서열은 N-아세틸 화합물 및 C-아미드 유도체 뿐만 아니라, 자유 아미노 및 자유 카르복시 화합물과 같은 N-보호된 유도체들을 나타내는 것임을 이해할 수 있다.

본 발명은 우수한 약리학적 특성을 가지고 포유동물 환자에게 투여되는 경우 지속된 생물학적 활성을 제공하는 생물학적 또는 약리학적 활성 부위 및 거대 분자를의 정제된 컨쥬게이트들을 포함하는 컨쥬게이트들을 제공한다. 특히, 본 발명에서는 약리학적 불활성 거대분자 담체에 공유적으로 컨쥬게이트되는 약리학적 활동 부위에서, 생체 내에서 안정한 약리학적 활동 부위와 담체 사이의 결합기에서, 약리학적 활동 부위의 약리학적 활성을 실제로 유지하는 온전한 화합물에서, 및 포유동물의 약 둘 이상의 컨쥬게이트되지 않은 약리학적 활동 부위로 투여될 때 화합물의 활동 반감기에서 분리된 화합물을 제공한다. 담체는 HSA가 유리하고 컨쥬게이트는 인간 치료 및 예방 방법에 사용된다.

앞서 거대분자 부위들에 결합된 생물학적 활동 분자들을 포함하는 컨쥬게이트들을 기재하였다. 작업의 중요한 몸체는 세포독성 제제 독소루비신과 인간 혈청 알부민(HSA)에 대한 메토트렉세이트(methotrexate)의 컨쥬게이트이다. 이들 방법론에서 논리적 근거는 생체 내에서 요구하는 부위에서 컨쥬게이트의 흡수로 분리되는 불안정한 결합을 통한 HSA에 대한 세포독성 제제를 결합하는 것이다. 일반적으로, 불안정한 결합은 엔도좀(endosome)의 산성 환경으로 세포 흡수되어 분리된다. 따라서, 이러한 방법에서 컨쥬게이트는 생물학적 활성 분자를 방출하여 손상되도록 요구되는 프로드럭으로 본질적으로 나타난다.

다른 작업은 환자의 혈류로 "활성화된" 생물학적 활동 분자들을 주입하는 방법이 기재되어 있으며, 여기에서 활성화된 부위는 원래 위치에서 컨쥬게이트를 제조하는 HSA와 같은 하나 이상의 혈액 단백질들에 결합하는 것으로 가정된다. 이러한 방법은 조성물을 조절하는 무능력 및 컨쥬게이트의 복용량에 관하여 공존하는 불안정을 가지는 컨쥬게이트의 수율을 포함하는 다수의 결점을 가진다. 더욱이, 많은 활성화된 생물학적 활동 분자들은 수 용해도가 제한되고 취급 및 활성화된 부위 투여 문제뿐만 아니라 생체 내 반응성 및 복용량에 관한 불명확함 등으로 인하여 화학적으로 불안정하다.

또 다른 작업은 상기 HSA 및 단백질을 포함하는 융합 단백질들의 제조를 기재하고 있다. 이들 방법들은 물론 재조합 DNA 방법들에 의해 제조될 수 있는 분자의 컨쥬게이트들로 한정된다. 또한 HSA에 대한 펩타이드 또는 단백질의 부착 부위는 HSA의 C- 또는 N-말단으로 한정되고, 부착 특성은 필연적으로 펩타이드 결합을 거친다.

일반적으로, 혈액 단백질 구성성분에 대한 약물의 비-공유 결합 또는 흡착은 단백질 결합이 약리학적 활성을 위해 이용가능한 자유 약물의 농도를 감소시키는 범위에서 분리하게 보인다. 그러나, 본 발명자들은 놀랍게도 생체 밖에서 제조되고 방법들을 통해 유용한 이점들을 제공하는 비-불안정한 결합들을 가지는 거대분자 부위에 결합된 펩타이드 및 비-펩타이드 생물학적 활동 분자들의 컨쥬게이트들 및 앞서 기재된 조성물들을 발견하였다. 특히, 생체 밖 HSA에 공유 결합된 생물학적 활동 분자들에서 제조되는 "위장(cloaks)" 조성물(거대분자 "위장" 생물학적 활동 부위)이 이미 알려진 조성물들에서 뜻밖에 우수한 약리학적, 특히 약동학적 특성을 가짐을 발견하였다.

특히, 본 발명자들은 정제되고 엄격하게 조절된 복용량으로 투여될 수 있는 높은 가용성 컨쥬게이트를 제공하는 HSA와 같은 거대분자에 대한 생물학적 활동 부위의 생체 밖 컨쥬게이션을 발견하였다. 위장된 컨쥬게이트는 컨쥬게이트로 생물학적으로 활동하며, 즉, 생물학적 활성이 요구되지 않는 컨쥬게이트 및 컨쥬게이트 절편에서 유래하는 생물학적 활동 부위를 방출하는 프로드럭으로 활동하지 않는다. 더욱이, 환자에게 한번 투여된 컨쥬게이트는 생체 내에서 놀랍게도 긴 반감기를 가지고, 탁월한 조직 분포를 가지며 컨쥬게이트의 생물학적 활동 부위의 활성과 일치하는 활성을 유지한다. 게다가, 방사성라벨된 컨쥬게이트를 이용한 분석은 투여된 모든 컨쥬게이트가 환자에게 투여되어 생체 내에서 본질적으로 발견될 수 있음을 보여준다. 대조적으로, 컨쥬게이트가 가정상 원래 위치에 생성되는 방사성라벨된 활동 부위를 사용한 분석에서 환자에게 투여된 활성 부위의 20% 이상이 발견되지 않았다. 게다가, 생물학적 활성 부위와 거대분자 사이의 화학 컨쥬게이션은 결합기의 길이 및 특성에서 변화를 허용한다.

편리하게, 생물학적 활성 부위와 거대분자는 생물학적 활동 부위의 "부착소화(haptenization)" 및 컨쥬게이트에 대한 면역 반응의 발생을 피하기 위하여 약 1:1 비율로 결합된다. 더욱이, 생물학적 활동 부위는 거대분자에서 단일 부위에 유리하게 첨가된다. 예를 들면, 일반적으로 HSA의 시스테인 34(C34)에 반응하는 선택적 결합이 사용될 수 있다. C34 사용을 위한 선택 결합 방법은 당업계에 알려진 결합기를 포함하는 말레이미드를 들 수 있다. 적절한 결합기들은 Pierce(Rockford, IL)에서 유래하는 통상적으로 이용가능한 것들이다.

생물학적 활동 부위의 하나 이상의 분자가 거대분자에 결합하는 경우, 거대분자의 단일점에 부착되는 "다가(multivalent)" 결합기를 통해 유리하게 달성된다. 예를 들면, 결합기는 결합기에 대한 다수의 생물학적 활동 부위들의 부착을 허용하는 HSA의 C34에 첨가될 수 있다. 다가 결합기들은 당업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들면, HSA의 C34와 반응하고 결합기에 대한 다수의 생물학적 활동 부위들의 부착을 허용하는 티올기 및 다중 친핵성(multiple nucleophilic)(NH 또는 OH) 또는 친전자성(electrophilic)(활성화된 에스테르)기를 포함할 수 있다.

상기 생물학적 활동 부위는 HSA와 같은 거대분자의 "위장" 효과를 최대화하는 거대분자와 비교하여 상대적으로 작은 크기가 유리하다. 생물학적 활동 부위의 크기를 정확하게 제한할 없음이 당업자에게 자명하지만, 20kD 이하, 10kD 이하 및 유리하게는 7.5 kD 또는 5kD 이하의 분자량을 가지는 분자들이 사용될 수 있다.

거대분자에 생물학적 활동 부위를 결합하는 방법들은 당업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들면, 국제공개공보 제WO 00/76550호에 거론되어 있고, 본 명세서에서 전체를 참고자료로 통합 수록하였다. 또한 이러한 방법들은 융합 억제제 펩타이드들과 레닌 억제제들의 컨쥬게이트를 고려하여 이하 보다 상세히 거론한다. 바이러스 융합 억제제들과 레닌 억제제들의 컨쥬게이션 방법들이 일반적으로 생물학적 활동 부위들의 부착에 적용되고 오직 현재 기술로만 설명하는 것임이 당업자에게 자명할 것이다. 유사하게, 컨쥬게이트를 정제하는 방법(필요하다면)도 당업계에 알려져 있다. 예를 들면, 초과의 생물학적 활동 부위는 컨쥬게이트의 투석에 의해 제거될 수 있으며, 역상 HPLC, 이온 교환 크로마토그래피 및/또는 크기 배제 크로마토그래피 등에 의하여 더 정제될 수 있다.

생물학적 활동 화합물들:

본 명세서에 기재된 방법을 사용하여 "위장"된 폭넓고 다양한 생물학적 및/또는 약리학적 활동 부위들이 본 발명의 범주에 속한다. 또한 하기에 예시된 레닌 억제제들 및 바이러스 융합 억제제들, 약리학적 특성들이 증강되고 특히 원하는 활성이 유지된 본질적인 어떠한 분자도 위장될 수 있다. 위장될 수 있는 그룹의 예로는 펩타이드 및 비-펩타이드 분자들을 들 수 있다. 보다 상세한 예로는 콜레스테롤 저하 및 혈압 저하 화합물과 같이 대사 효과를 가지는 화합물들 및 창상 치유제(wound healing agent), 항생물질(항-감염물질 포함), 항-산화제, 화학치료제, 항암제, 항-염증제 및 항증식 약물(antiproliferative drugs)을 포함하는 신경 질환(neurological disorder)을 치료하기 위한 화합물들(컨쥬게이트는 선택적으로 CNS에 직접 투여될 수 있다)을 들 수 있다. 이들 분자들의 예는 당업계에 잘 알려져 있으며, 오직 설명을 목적으로 하기 물질들을 포함한다:

기질 금속 단백 분해효소(matrix metalloproteinases, MMPs)의 억제제들, 유로키나아제(urokinase) 수용체의 길항제들, 유로키나아제의 억제제들, erb-2 수용체 길항제들, TRAIL 수용체 길항제들, 항혈관형성(antiangiogenic) 펩타이드들, 오피오이드(opiods) 및 고통에 대한 통증 억제(anti-nociceptive) 유사체들, 레닌 억제제들과 같은 항고혈압제; 안지오텐신(angiotensin) 수용체 길항제들; 나트륨배설촉진 펩타이드(natriuretic peptide) 유도체들, 인터페론(C형 간염의 치료를 위한 알파 및 베타 인터페론 포함)과 같은 항바이러스제; 시아노비린(cyanovirin) 유도체들, 인슐린과 같은 대사 질환을 치료하기 위한 화합물들, 프로테이나아제(proteinases)와 같은 박테리아 및 효모 세포외 독성 인자들(extracellular virulence factors), 박테리오파지 리신, 바이러스 진입 및 융합 억제제들(HSV-2-성기 단순포진(HSV-2-genital herpes)과 같은 허피스 바이러스와 같은 바이러스용), 바이러스 당단백질 D-넥틴(nectin)-2 상호작용, CD81, LDL 수용체 및 다른 세포-특이적 및 간-특이적 보조인자와 HCV-E1, E2 당단백질의 상호작용, 말라리아 플라스멥신(plasmepsins), 주혈흡충 아스파르틱 프로테이나아제(schistosomal aspartic proteinase), 이들 단백질 생성물을 조절을 떨어뜨리고 알츠하이머병과 같은 질병을 치료하는데 사용될 수 있는 단백질-비정상적인 접힘구조(misfolding) 질병 또는 약물을 야기하는 단백질들을 안정화시키는 샤페론.

ACE-억제제들, α- 및 β-교감신경 작용제 및 길항제, 아드레노코르티코이드(adrenocorticoids), 호르몬, 알도오스(aldose) 리덕타아제 억제제, 알도스테론 길항제, 5-α 리덕타아제 억제제, 아날제식스(analgesics), 아네스테틱스(anesthetics), 아노렉식스(anorexics), 안텔민틱스(anthelmintics), 안티안(antiacne) 제제들, 항알러지 제제들, 항탈모증 제제들, 항아메바 제제들, 항안드로겐 제제들, 항편도염 제제들, 항부정맥 제제들, 항동맥경화증 제제들, 항관절염/항류마티스염 제제들, 항천식 제제들, 항균 제제들, 아미노그리코사이드 항생물질들, 안사마이신(ansamycins), 항생물질들 및 β-락탐, 린코스아미드(lincosamides), 매크롤리드(macrolides), 폴리펩타이드, 테트라사이클린, 2,4-디아미노피리미딘, 니트로퓨란, 퀴놀론 및 유사체들, 술폰아미드, 술폰, 항생물질, 안티콜레리토제닉(anticholelithogenic) 제제들, 안티콜레스테믹(anticholesteremic) 제제들, 항콜린(anticholinergic) 제제들, 항응고 제제들, 항경련성 제제들, 항진정 제제들, 히드라지드/히드라진, 피롤리돈, 테트라사이클릭, 항당뇨병 제제들, 비구아니드(biguanides), 호르몬, 술포닐우레아 유도체들, 항설사 제제들, 항이뇨 제제들, 항이상운동성(antidyskinetic), 안티에크제마틱(antieczematic), 항구토 제제들, 항간질 제제들, 항에스트로겐 제제들, 항섬유화 제제들, 정장성(antiflatulent) 제제들, 항진균(antifungal) 제제들, 항글루코마 제제들, 망막혈관장벽(blood-brain barrier) 펩타이드들(BBB 펩타이드), RGD 펩타이드들, 글루카곤류 펩타이드들, 안티고나도트로핀(antigonadotropin), 안티고우트(antigout), 항출혈성(antihemorrhagic) 및 항히스타민 제제들; 삼중고리 항진정제, 항고콜레스테롤혈제(antihypercholesterolemic), 항고지혈증제(antihyperlipidemic), 항고지혈증 및 항고당단백질(antihyperlipoproteinemic) 제제들, 아릴옥시알카노산(aryloxyaklanoic acid) 유도체들, 담즙산 제거제(sequestrant), HMG-CoA 리덕타아제 억제제들, 니코틴산 유도체들, 갑상선 호르몬들/유사체들, 안티하이퍼포스파타믹(antihyperphosphatemic), 항고혈압 제제들, 아릴에탄올아민 유도체들, 아릴옥시프로판올아민 유도체들, 벤조티아디아진(benzothiadiazine) 유도체들, n-카르복시알킬 유도체들, 다이히드로피리딘 유도체들, 구아니딘 유도체들, 히드라진/프탈라진(phthalazines), 이미다졸 유도체들, 4원(元) 암모늄 화합물들, 퀴나졸리닐 피페라진 유도체들, 레세르핀 유도체들, 술폰아미드 유도체들, 항갑상선기능장애(antihyperthyroid) 제제들, 항저혈압 제제들, 항갑상선 기능저하증(antihypothyroid) 제제들, 항염증 제제들, 아미노아릴카르복실산 유도체들, 아릴아세트산 유도체들, 아릴부티르산 유도체들, 아릴카르복실산(아릴프로피온산 유도체들 포함), 피라졸(pyrazoles), 피라졸론(pyrazolones), 살리실산 유도체들, 티라진카르복스아미드, 항나병(antileprotic), 항백혈병, 항고지혈증(antilipemic), 항지질증(antilipidemic), 항말라리아, 항조병(antimanic), 안티메테모글로비네믹(antimethemoglobinemic), 항편두통, 항사상균(antimycotic), 항최토제(antinauseant), 항신생물성(antineoplastic) 및 알킬레이팅 제제들, 항대사물질, 효소, 안드로겐, 항부신(antiadrenal), 항안드로겐, 항에스트로겐, 프로게스토겐(progestogens), 유로프로텍티브(uroprotective), 항골다공증 제제들, 안티페이지틱(antipagetic), 항파킨슨병, 항진경(antiperistaltic), 항갈색세포종(antipheochromocytoma), 항폐포자충(antipneumocystis), 항전립선 비대, 항원충제(antiprotozoal), 안티프로조알(antiprozoal), 진양제(antipruritic), 항건선(antipsoriatic) 및 항정신병(antipsychotic) 제제들, 부티로펜(butyrophenes), 페노티아진(phenothiazines), 티옥산텐(thioxanthenes), 해열(antipyretic), 항류마티즘, 항리케차, 항지루성(antiseborrheic) 및 항부패(antiseptic)/멸균(disinfectant) 제제들, 진경제(antispasmodic), 항매독제(antisyphilitic), 항혈전성(antithrombotic), 항결핵, 항종양, 항기침, 항궤양, 항치질(antiurolithic), 항뱀독소(antivenin), 및 항현기증(antivertigo) 제제들과 같은 안토박테리아(antobacterials), 퓨린/피리미디놈(pyrimidinomes), 안티-항불안제(antianxiolytics), 아릴피페라진, 벤조다아제핀(benzodiazepine) 유도체들, 카바메이트, 아스트린전트(astringent), 벤조다이제핀(benzodiazepine) 길항제들, 베타-블로커(beta-blocker), 브론코딜레이터(bronchodilator), 에드린(ephedrine) 유도체들, 칼슘 채널 블로커, 아릴알킬아민, 다이히드로피리딘 유도체들, 피페라진 유도체들, 칼슘 조절자들, 칼슘 공급자들, 암 화학치료 제제들, 모세관 보호제, 탄소 무수물 억제제들, 심장 진정제, 강심제(cardiotonic), 하제(cathartic), 양이온-이온교환 수지, cck 길항제들, 중추 흥분제(central stimulants), 뇌혈관 확장제(cerebral vasodilators), 킬레이팅 제제들, 콜레시스토키닌(cholecystolinin) 길항제, 콜레이톨리틱(choleitholytic) 제제들, 최담(choleretic) 제제들, 콜린성(cholinergic) 제제들, 콜린에스터라아제(cholinesterase) 억제제들, 콜린에스터라아제 반응제(reactivator), cns 촉진제, 지각 활성제(cognition activator), 피임제, 안압 조절제제들, 관상동맥 확장제(vasoliators), 세포보호제(cytoprotectants), 도파민 수용체 길항제, 엑토파라시티사이드(ectoparasiticides), 최토제(emetics), 효소, 소화제, 점액용해제(mucolytic agents), 페니실린 불활성제, 단백질가수분해제, 효소 유도물질, 에스트로겐 길항제, 위 양성자 펌프 억제제들, 위선 분비 억제제들, α-글리코시다아제 억제제들, 생식선-자극 물질들, 성선자극성(gonadotrophic) 호르몬들, 성장 호르몬 억제제들, 성장 호르몬 방출 인자, 성장 촉진제, 조혈제(hematinic), 용혈성황달(hemolytic), 데모스타틱(demostatic), 헤파린 길항제, 간보호제(hepatoprotectant), 히스타민 h.sub.1-수용체 길항제, 히스타민 H2-수용체 길항제, 면역조절제들(immunomodulators), 면역억제제들(immunosuppressants), 근육수축제(inotrophic agents), 각질용해제(keratolytic agents), 수유(lactation) 촉진 호르몬, 지질자극제(lipotrophic agents), 염류 코르티코이드(mineralocorticoids), 소정온제(minor tranquilizer), 동공축소제(miotic agents), 모노아민 옥시다아제 억제제들, 점액용해제(mucolytic agents), 근육 이완제, 눈동자 확장제(mydriatic agents), 마취제, 마취 길항제, 신경이완제, 근육신경 차단제, 신경보호제, NMDA 길항제들, 누트로픽 제제들(nootropic agents), NSAID 제제들, 난소 호르몬, 자궁수축제(oxytocic agents), GP-41 펩타이드, 인슐린분비자극(insulinotropic) 펩타이드 부교감신경흥분제(副交感神經興奮劑 parasympathomimetic agents), 페디쿨리사이드(pediculicides), 펩신 억제제들, 말초혈관 확장제(peripheral vasodilator), 연동 촉진제(peristaltic stimulants), 착색제(pigmentation agent), 혈장증량제(plasma volume expander), 칼륨 채널 활성화제/개시제, 혈압상승제(pressor agent), 프로게스토겐(progestogen), 프로락틴(prolactin) 억제제들, 프로스타글란딘/프로스타글란딘 유사체들, 프로테아제 억제제들, 양성자 펌프 억제제들 역전사효소 억제제들, 스카비사이드(scabicides), 경화제(硬化濟, sclerosing agent), 진정제/최면제, 세로토닌 수용체 작용제들, 세로토닌 수용체 길항제들, 세로토닌 흡수 억제제들, 골격근 이완제, 소마토스타틴(somatostatin) 유사체들, 진경제(spasmolytic agents), 대변 연화제(stool softeners), 숙시닐콜린 효력증진 제(synergists), 교감신경모방제(sympathomimetics), 혈전용해제(thrombolytics), 갑상선 호르몬, 갑상선 억제제들, 갑상선자극 호르몬, 요산배설촉진제(uricosurics), 혈관확장제(vasodilators), 승압제(vasopressors), 및 승압보호제(vasoprotectants).

항바이러스 화합물 및 복합체들:

또한 본 발명에서는 바이러스 질병을 치료하기 위하여 연장된 또는 유지된 활성을 가지는 항-바이러스 화합물들을 제공한다. 또한 본 발명에서는 이들 화합물들을 사용하는 바이러스 질병 치료 방법을 제공한다. 본 발명의 상기 화합물들은 생체 내에서 안정성이 증가되고 펩티다아제 또는 프로테아제 손상으로 인해 손상에 대한 민감성을 감소시킨다. 결과적으로, 본 발명의 화합물들은 현재 이용가능한 항-바이러스 화합물들에 비해 적게 투여될 수 있다. 상기 화합물들은 인간 면역결핍 바이러스(HIV), 인간 호흡기 신시티움바이러스(respiratory syncytial virus; RSV), 인간 파라인플루엔자 바이러스(human parainfluenza virus; HPV), 홍역 바이러스(measles virus) 및 원숭이 면역결핍 바이러스(simian immunodeficiency virus; SIV)를 포함하는 다수의 바이러스들의 감염을 예방 및/또는 치료하는데 사용될 수 있다.

본 발명의 화합물들은 하나 이상의 혈액 구성성분 또는 다양한 다른 혈액 구성성분에 공유 결합하여 그들의 활성을 유지한다. 이 결합은 생체 내 또는 시험관 내에서 수행될 수 있다. 상기 결합이 시험관 내에서 수행되는 경우, 상기 화합물은 환자에게 투여되기 전에 선택적으로 여과에 의하여 더 정제될 수 있다. 자연적으로 발생하는 아미노산들로 구성된 펩타이드 화합물들에서, 상기 공유 결합은 적절한 교차-결합 제제를 사용하는 것과 같은 화학적 수단을 통해 또는 혈액 구성성분을 가지는 융합 단백질을 제조하여 달성될 수 있다. 비-펩타이드 화합물 또는 비-자연적으로 발생한 아미노산을 포함하는 화합물에서, 상기 결합은 화학적 수단으로 달성될 수 있다. 본 발명에서 사용하기에 적절한 혈액 구성성분은 당업자에게 자명할 것이다. 특정 구현예에서, 혈액 구성성분은 인간 혈청 알부민이고 다른 구현예에서 혈액 단백질은 인간 또는 인간화된 항체, 항체 단편 또는 항체 유도체이다. 상기 항체, 항체 단편 또는 항체 유도체는 선택적으로 인간 혈청 알부민과 같이 혈액 구성성분을 특이적으로 결합시키는 항체, 항체 단편 또는 항체 유도체가 될 수 있다.

항-바이러스 화합물들

본 발명의 화합물들은 항-바이러스 활성을 현저하게 잃지 않은 혈액 구성성분에 컨쥬게이트될 수 있는 항-바이러스 활성을 가지는 화합물들을 포함한다. 본 발명의 배경에서, 항-바이러스 활성을 현저하게 잃는 것은 컨쥬게이트된 화합물의 항-바이러스 활성이 원래 위치에 적절한 활성을 획득하기 위하여 몰농도 조건에서 10 이상의 인자에 의해 증가되어야 하는 화합물의 복용량 범위를 감소시키는 상황을 말한다.

본 발명에서 사용하기에 적절한 화합물들은 바이러스의 세포내 진입을 억제하는 바이러스 융합의 펩타이드 억제제들, 뉴클레오사이드 및 바이러스 효소의 뉴클레오사이드 유사체, 비-뉴클레오사이드 및 비-뉴클레오사이드 유사체 및 뉴클레오타이드 및 뉴클레오타이드 유사체 억제제, 바이러스 프로테아제의 억제제들 및 케모카인 공동-수용체 블로커(blockers)를 포함하지만 이에만 한정되는 것은 아니다. 이들 화합물들의 각 예는 당업계에 잘 알려져 있다.

한정되지 않는 대표적인 화합물들은 하기 예들을 포함한다:

시토신-아라비노사이드, 아데닌-아라비노사이드, 아이오독시우리딘(iodoxyuridine) 및 아시클로비르(acyclovir)와 같은 뉴클레오사이드 유사체들;

AZT, ddI, ddC, d4T, 3TC, 아바카비르(abacavir), 테노포비르(tenofovir), 엠트리시타빈(emtricitabine), 암독소비르(amdoxovir), dOTC 및 d4TMP와 같은 뉴클레오사이드 및 뉴클레오사이드 역전사효소 억제제들(NRTIs);

네비라핀(nevirapine), 델라비리딘(delaviridine), 에파비렌즈(efavirenz); 티오카르복사닐리드 UC-781(thiocarboxanilide UC-781), 카프라비린(capravirine), SJ-3366, DPC 083 및 TMC 125/R165335와 같은 비-뉴클레오사이드 역전사효소 억제제들(NNRTIs);

사퀴나비르(saquinavir), 리토나비르(ritonavir), 인디나비르(indinavir), 넬피나비르(nelfinavir), 암프레나비르(amprenavir), 로피나비르(lopinavir), 아타자나비르(antazanavir), 모제나비르(mozenavir), 티프라나비르(tipranavir) 및 TMC-114를 포함하는 프로테아제 억제제들(PIs);

코사란(cosalane) 유도체 및 시아노비린-N(cyanovirin-N)과 같은 바이러스 흡착 억제제들;

TAK-779 및 AMD3100과 같은 공동-수용체 작용제들;

펜타푸사이드 T20(pentafuside T-20), 베툴리닉산(betulinic acid), R70591, VP-14637 및NMS03과 같은 바이러스 융합 억제제들;

및 아조디카르본아미드(azodicarbonamide)와 같은 바이러스 비코팅 억제제들.

사용될 수 있는 다른 항바이러스 화합물들은 라미부딘(lamivudine), 팜사클로비르(famciclovir), 로부카비르(lobucavir) 및 아데포비르(adefovir), 리바비린(Ribavirin), 인테그라아제(integrase) 억제제들(디케토 산(diketo acids)), 전사 억제제들(테마크라진(temacrazine), 플라보피리돌(flavopiridol)), 바이러스 비코팅억제제들(플레코나릴(pleconaril)); RNA 복제효소 억제제들(VP-32947); DNA 폴리머라아제 억제제들(A-5021, L- 및 D-사이클로헥세닐구아닌); 비사이클린 푸로피리미딘(bicyclic furopyrimidine) 유사체들; 시도포비르(cydofovir); 뉴라미니다아제(neuraminidase) 억제제들(자나미비르(zanamivir), 오셀타미비르(oseltamivir), RWJ-270201); 아데포비르 디피복실(adefovir dipivoxil)'; N-글리코실화 억제제들(N-노닐-데옥시노지리마이신(N-nonyl-deoxynojirimycin)); 및 IMP 탈수소효소 및 S-아데노실호모시스테인(S-adenosylhomocysteine) 가수분해효소 억제제들을 포함한다.

특히 HIV 감염 치료를 위하여 화합물은 하기 물질들을 억제하는데 사용될 수 있다:

바이러스 외피 당단백질 gp120에 결합하는 바이러스 흡착(폴리술페이트, 폴리술포네이트, 폴리카르복실레이트, 폴리옥소메탈레이트(polyoxometalates), 폴리뉴클레오타이드 및 음성 전하 알부민);

바이러스 공동수용체들 CXCR4(바사이클람(bicyclam)(AMD3100) 유도체들) 및 CCR5(TAK-779 유도체들)의 장애를 통한 바이러스 진입;

바이러스 외피 당단백질 gp41에 결합하는 바이러스-세포 융합(T-20, T-1249);

NCp7 징크 핑거(zinc finger)-표적 제제를 통한 바이러스 조합 및 비조합(2,2'-디티오비스벤즈아미드(DIBAs), 아자디카르본아미드(azadicarbonamide, ADA));

4-아릴-2,4-디옥소부타노익산(4-aryl-2,4-dioxobutanoic acid) 유도체들과 같은 인테그라아제 억제제를 통한 프로바이러스 DNA 통합; 및

전사(전이활성(transactivation)) 과정의 억제제를 통한 바이러스 mRNA 전사(프라보피리돌(flavopiridol), 플루오로퀴놀론(fluoroquinolones)).

결합기 L1 및 L2 :

다양한 다른 결합기 또는 결합 그룹 L1 및 L2는 항-바이러스 제제를 가지는 혈액 구성성분을 결합하는데 사용될 수 있다. 결합 그룹은 이가 또는 다가가 될 수 있다. 예를 들면, 일반식 I의 복합체에서 L1은 Pr에 부착되는 n-가(n-valent) 및 AV에 부착되는 m-가(m-valent)가 될 수 있고, m과 n은 상기에서 정의한 정수이다. 유사하게, 일반식 Ⅱ의 복합체에서 L2는 Pr에 결합하는 o-가(o-valent) 및 AV에 부착되는 p-가(p-valent)가 될 수 있고 o와 p는 상기에서 정의한 것이다. 결합 그룹에 존재할 수 있는 관능기들의 비독점적인 예로는 N-히드록시숙신이미드 및 N-히드록시술포숙신이미드와 같은 히드록실기를 가지는 화합물들 및 말레이미드-벤조일-숙신이미드, γ-말레이미도-부티릴옥시 숙신이미드 에스테르, 말레이미도프로피온산, N-히드록시숙신이미드, 이소시아네이트, 티오에스테르, 티오노카르복실산 에스테르, 이미노 에스테르, 카르보디이미드, 무수물 또는 에스테르와 같은 다른 화합물들을 들 수 있다.

또한 카르복실레이트, 산성 할로겐화물, 아지도(azido), 다이조(diazo), 카르보디이미드, 무수물, 히드라진, 알데하이드, 티올 또는 아미노와 같은 관능기들을 가지는 특정 결합 그룹들은 아미드, 에스테르, 이민, 티오에테르, 이황화물 또는 치환된 아민 등을 생성하는데 사용될 수 있다. 사용될 수 있는 관능기들의 다른 특정 예들은 아실옥시메틸케톤, 아지리딘(aziridines), 다아조메틸 케톤, 에폭사이드, 요오드-, 브로모- 또는 클로로아세트아미드, α-할로에스테르, α-할로케톤, 술포니움(sulfoiums), 클로로에틸술피드, O-알킬이소우레아, 알킬 할로겐화물, 비닐술폰, 아크릴아미드, 비린피리딘, 유기금속 화합물, 아릴다이술피드, 티오술포네이트, 알데하이드, 니트릴, α-다이케톤, α-케토아미드, α-케토에스테르, 디아미노케톤, 세미카르바존(semicarbazones) 및 다이하이드라지드(dihydrazides)를 포함한다.

결합기로 선택될 수 있는 화합물의 특성 및 유형은 알부민 또는 혈액 구성성분에서 항-바이러스 제제, 결합기 및 관능기 사이에서 요구되는 반응들, 상대적 반응성들, 선택성들, 가역특성(reversibilities) 및 안정성의 유형에 의존한다. 예를 들면, 컨쥬게이트 복합체를 생성하는 특정 반응들은 알킬화 반응, 미첼형(Michael type) 반응, 첨가-제거(addition-elimination) 반응, 황, 카르보닐 또는 시아노기에 첨가 또는 금속 결합의 생성으로부터 생겨난다.

일반적으로, 이들 반응에서 생성되는 공유 결합은 항-바이러스 제제의 활동 생존기간 동안 안정하다. 하나의 구현예에서, 이들 복합체 내에 생성된 공유 결합은 생물학적 활동 서브유닛이 활동 부위에서 방출되도록 의도되지 않으면 안정하게 잔류한다.

결합기들은 다중 항-바이러스 제제들에 알부민과 같은 단백질을 결합하거나 또는 단일 항-바이러스 제제에 다중 알부민을 결합할 수 있는 이관능기 또는 다관능기를 가지는 화합물로 이루어질 수 있다. 특히 바람직한 구현예에서, 결합기는 하나 이상의 항-바이러스 제제들에 HSA를 결합한 다관능기를 포함한다. 하나의 구현예에서, 본 명세서에 기재된 결합 화합물들은 단일 단계내 단백질에 항-바이러스 제제를 결합할 수 있는 화합물들을 포함한다. 다른 구현예에서, 결합 화합물들은 단백질과 더 반응할 수 있는 억제제-결합기 중간물질을 생성하도록 항-바이러스 제제에 첫번째로 결합된다. 또 다른 구현예에서, 결합 화합물들은 항-바이러스 제제와 더 반응할 수 있는 단백질-결합기 중간물질을 생성하도록 단백질과 먼저 반응한다. 상기의 변경된 순서 각각에서, 결합된 화합물들은 선택적으로 일반식 I 또는 일반식 Ⅱ의 복합체를 생성하도록 더 반응을 제공하기 전에 더 정제되거나 및/또는 분리될 수 있다.

이러한 다관능기 화합물들의 비-독점적 예들은 아지도벤조일 히드라지드(azidobenzoyl hydrazide), N-[4-(p-아미도살리실아미노)부틸]-3'-]2'-피리딜디티오)프로피온아미드), 비스-술포숙신이미딜 수베레이트(suberate), 디메틸 아디피미데이트(adipimidate), 다이숙신이미딜 타르트레이트(disuccinimidyl tartrate), N-y-말레이미도부티릴옥시숙신이미드 에스테르, N-히드록시 술포숙신이미딜-4-아미도벤조에이트, N-숙신이미딜[4-아지도페닐]-1,3'-디티오프로이오네이트, N-숙신이미딜[4-요오드아세틸]아미노벤조에이트, 글루타르알데히드 및 숙신이미딜 4-[N-말레이미도메틸]사이클로헥산-1-카르복실레이트를 포함한다.

표준 화학 형질전환을 위한 사용 및 환자에 사용이 편리한 결합기 또는 결합 그룹 또는 원하는 복용량에서 생리적으로 허용가능하고 원하는 기간 동안 혈류 내에서 안정한 화합물을 생성하는 결합기들이 사용될 수 있다. 상기 결합 그룹은 지방족, 지방족고리, 방향족, 헤테로고리 또는 이들의 조합이 될 수 있다. 그룹들의 예들은 알킬렌, 아릴렌, 아르알킬렌(aralkylenes), 사이클로알킬렌 및 폴리에테르 등을 포함하는 결합 그룹으로 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 다관능기 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 및 이들의 유도체들은 결합기로서 사용될 수 있다.

결합 그룹은 결합 사슬 내에 하나 이상의 원자를 가질 수 있으며, 보다 바람직하게는 사슬 내에 1-200개의 원자들을 가지고, 가장 바람직하게는 사슬 내에 2-50개의 원자들을 가진다. 사슬 내의 원자들은 직선이 될 수 있고 또는 사슬이 각각 치환되거나 치환되지 않은 하나 또는 그 이상의 고리가 될 수 있으며, 상기 사슬은 O, N, P 및 S로 이루어진 그룹으로부터 선택된 탄소 또는 헤테로원자를 포함할 수 있다. 상기 고리들은 각각 치환되거나 치환되지 않은 지방족, 헤테로 고리, 방향족 또는 이종방향족 또는 이들의 혼합물이 될 수 있다. 일부 구현예에서, 아미노산들 또는 펩타이드들 또는 상기의 혼합물과 함께 이용한 아미노산들을 결합 그룹으로 사용될 수 있다.

하나의 구현예에서, L1은 결여되고 AV는 Pr에 직접 부착된다. 다른 구현예에서, L2는 결여되고 AV는 Pr에 직접 부착된다.

일반식 I의 복합체에 관한 다른 구현예에서, L1은 하나의 Pr에 하나 이상의 AV를 결합할 수 있는 결합 그룹이고, 여기에서 m은 2 또는 그 이상이다. 하나의 구현예에서, m은 1, 2 또는 3이고 n은 1-30이다. 일반식 I의 복합체에 관한 하나의 바람직한 구현예에서, Pr은 알부민이고 n은 1이다. 다른 특정 구현예에서, Pr은 알부민이고 AV는 항-바이러스 제제이며 n은 2-25이다.

일반식 Ⅱ의 복합체에 관한 다른 구현예에서, L2는 하나의 AV에 하나 이상의 Pr을 결합할 수 있는 결합 그룹이고, 예를 들면, 이 경우 o는 2 또는 그 이상이다. 하나의 구현예에서, Pr은 알부민이고, AV는 항-바이러스 제제이며, o는 1, 2 또는 3이고, p는 1-5이다.

다른 구현예에서, 결합 그룹은 항-바이러스 제제와 같은 억제제가 단백질에 직접 부착되는 항-바이러스 제제만을 포함하여 생성되는 복합체와 같이 선택적으로 카탈라아제 또는 커플링제를 사용하여 단백질과 직접 반응할 수 있는 경우에 결여될 수 있다. 이러한 직접 커플링 반응의 예는 중간물질이 혼합된 무수물의 커플링 반응에 따라 카르복실산의 혼합된 무수물 활성화 커플링 반응이다.

단백질 구성성분 Pr :

다양한 혈액 구성성분들은 본 발명의 분리된 복합체를 제조하는데 사용될 수 있다. 자연적으로 발생하는 혈액 구성성분들은 적혈구를 포함하는 혈액 단백질과 IgM 및 IgG와 같은 면역글로불린들, 혈청 알부민, 트렌스페린(transferrin), p90 및 p38을 포함한다. 바람직한 구현예에서 상기 혈액 구성성분 또는 혈액 단백질은 알부민이다. 보다 바람직하게는, 알부민은 인간 혈청 알부민(HSA) 단백질이다.

또한 본 발명에서 사용된 알부민은 재조합 알부민이 될 수 있다. 예를 들면, 재조합 인간 알부민은 인간 혈청 알부민의 아미노산 서열을 인코딩하는 뉴클레오타이드 코딩 서열을 미생물로 형질전환하여 제조될 수 있다.

일반적으로, 최종 순도들의 매우 넓은 범위를 및 생산물의 수율들을 제공하는 혈액 또는 혈장에서 유래하는 화합물들의 분리에 이용할 수 있는 매우 폭넓은 다른 방법들이 존재한다. 알부민은 혈장에 존재하는 주요 단백질이고 혈액으로부터 추출될 수 있으며, 예를 들면, 일본공개공보 제2003-258728호, 유럽특허 제428,758호 및 제452,753호 및 제6,638,740호에 개시되어 있고 그 안에 인용된 참고자료이다. 다양한 화합물의 분리를 위한 비-독점적 방법들의 다른 예들은 선택성 가역적 침전, 이온 교환 크로마토그래피, 단백질 친화성 크로마토그래피, 소수성 크로마토그래피, 티오필릭(thiophilic) 크로마토그래피(J. Porath et al; FEBS Letters, vol. 185, p.306, 1985; K.L. Knudsen et al., Analytical Biochemistry, vol 201, p.170, 1992) 및 다양한 수지 매트릭스(WO 96/00735; WO96/09116)에 기초할 수 있다. 설정된 순도의 특정 혈액 구성성분들은 상업적으로 이용가능하다.

결합된 화합물 AV - L1 및 AV - L2 의 제조:

하나의 구현예에서, 본 발명의 결합된 AV-L1 및 AV-L2가 제조될 수 있고 더 이상의 정제 및/또는 분리없이 알부민과 함께 컨쥬게이트되는데 사용될 수 있다. 결합된 화합물들의 순도는 결합의 특성, AV의 특성 및 결합기에 AV를 부착하는데 사용되는 반응 및 반응 조건들의 유형에 의존한다. 다른 특정 구현예에서, 정제되지 않은 결합 화합물들이 제조되고, 순도 90% 이상, 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 97% 이상, 및 가장 바람직하게는 98% 이상으로 획득된다.

특정 구현예에서, 본 발명은 AV-L1 또는 AV-L2인 분리된 결합 화합물들을 제조하는 방법에 관한 것이다. 바람직한 구현예에서, 분리된 결합 화합물인 AV-L1 또는 AV-L2는 결합기에 부착되는 항-바이러스 제제들이다. 하나의 구현예에서, 분리된 결합 화합물들은 Pr과 컨쥬게이트되기 전에 정제될 수 있다. 다른 특정 구현예에서, 결합 화합물인 AV-L1 또는 AV-L2는 분리되고, 순도 95% 이상, 바람직하게는 97% 이상, 보다 바람직하게는 98% 이상, 및 가장 바람직하게는 99% 이상으로 획득된다.

상기 결합 화합물들은 화학적 합성으로 당업계에 알려진 표준 방법들을 사용하여 제조될 수 있다. 상기 화합물들은 생체 내 적용을 위하여 적절한 정제된 생성물들을 제공하기 위하여 컬럼 크로마토그래피 또는 HPLC와 같이 당업계에 알려진 표준 방법들을 사용하여 정제될 수 있다. 상기 결합 단백질들은 일반식 I 및 Ⅱ의 복합체를 생성하기 위하여 알부민과 같은 단백질과 더 컨쥬게이트될 수 있다.

혈액 구성성분에 대한 공유 결합:

본 발명에서 사용하기 위한 적절한 혈액 구성성분은 당업계에 알려져 있다. 인간 혈청 알부민("HSA")는 인간 혈액의 주요한 구성성분이고 본 발명에서 사용하기 위하여 특히 적합하다. 특히, HSA는 단백질에 대한 항-바이러스 화합물의 공유결합을 위한 반응성 티올 부위를 제공하는 노출된 표면 시스테인 잔기를 가진다. 티올에 결합하기에 특히 적절한 활성화된 결합기들은 말레이미드와 같은 불포화 사이클린 이미드들, α-요오드- 및 α-브로모 아세테이트와 같은 α-할로 에스테르 및 비닐 피리딘 유도체를 포함한다. 적절한 활성화된 결합기들은 Pierce Chemical(Rockford, IL)로부터 상업적으로 이용가능하다. HSA에 결합하기 위한 적절한 활성화된 화합물들을 제조하기 위한 방법들은 당업계에 알려져 있다. 예를 들면, 미국특허 제5,612,034호 참조, 본 명세서에서 전체를 참고자료로 통합수록하였다.

본 발명의 하나의 변이에서, 결합기는 시스테인 34의 티올기에 특이적으로 결합되고 결합기의 친전자성기 상의 티올기의 친핵성 반응을 통하여 생성될 수 있다.

더욱이, HSA의 유전자는 HSA를 포함하는 융합 단백질들의 사전 준비를 허용하여 클론된다. 치료 적용성을 가지는 이들 융합 단백질들은 혈액 구성성분에 융합되는 폴리펩타이드, 항체 또는 펩타이드 또는 단편 및 이들의 변이체를 포함하지만 이에만 한정되는 것은 아니다. 상기 융합 단백질들은 연장된 저장 수명(shelf-life) 및/또는 연장된 또는 치료 활성을 보인다. 융합 단백질들을 제조하는 방법들은 당업계에 알려져 있다. 예를 들면, 국제공개공보 제WO01/79271호 및 제WO01/79258호 참조, 본 명세서에서 이들 전체를 참고자료로 통합 수록하였다. 융합 단백질들의 제조는 항-바이러스 펩타이드들의 영구적인 유도체들을 제조하는데 융용하다.

항-바이러스 화합물들에 결합하기에 적절한 다른 혈액 구성성분은 면역글로불린("Ig") 분자이다. Igs는 영구적이고 혈액 내에서 상대적으로 높은 농도로 존재한다. 시험관 내에서 커플링을 위하여, Igs는 쉽게 안정화되고 쉽게 분리되는 이점을 가지며, Ig 컨쥬게이트들을 제조하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 게다가, Ig 유전자들은 쉽게 클론되고 재조합 Ig 및 Ig 융합 단백질이 제조된다. 온전한 인간 Igs를 획득하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 들면, 미국특허 제5,969,108호 및 제6,300,064호 참조, 본 명세서에서 이들 전체를 참고자료로 통합 수록하였다. 또한, HSA에 결합하기 위하여 특히 요구되는 결합 활성을 가지는 Igs을 선발하는 파아지 전시 방법들은 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 들면, 미국특허 제5,885,793호, 제5,969,108호 및 제6,300,064호 참조. 본 발명에서 Ig는 당업계에 알려진 적절한 면역글로불린 또는 면역글로불린 유도체이며, 예를 들면, 전체 IgG, IgM, Fab 단편들, F(ab')₂ 단편들 및 단일쇄 Fv 단편들을 포함한다.

본 발명에서 사용하기에 적절한 다른 혈액 구성성분들은 트랜스페린(transferrin), 페리틴(ferritin), 스테로이드 결합 단백질, 티록신(thyroxin) 결합 단백질 및 α-2-매크로글로불린을 포함한다.

펩타이드를 위한 활성화된 결합기들은 리신 측쇄와 같이 측쇄 잔기들과 반응하여 커플될 수 있다. 예를 들면, 활동 에스테르 부위 및 말레이미드 부위를 포함하는 결합기는 리신 측쇄를 통해 활동 에스테르 잔기(N-히드록숙신이미딜 에스테르)에서 또는 펩타이드의 N-말단에서 선택적으로 반응할 수 있다. 비-펩티딜 항-바이러스 화합물들을 위하여, 숙련된 화학자는 친핵성(또는 친전자성) 원자들 또는 활동 에스테르와 같이 적절한 결합 부위와 선택적으로 반응할 수 있는 화합물 상의 그룹을 바로 인지할 수 있다. 적절한 친핵성 부위들은 아미노기 및 히드록시기를 포함하지만 이에만 한정되는 것은 아니다. 예를 들면, 뉴클레오사이드 및 뉴클레오타이드 유사체들을 위하여 히드록실기가 커플링 반응의 친핵성으로 작용할 수 있다. 또한 뉴클레오타이드를 위하여 커플링은 포스포(phospho) 에스테르의 생성에 의해 완성될 수 있다. 유사한 전술들이 다른 항-바이러스 화합물들에서도 이용될 수 있으며, 예를 들면 프로테아제 억제제들 및 다른 효소 억제제들에서 커플링은 효소 활동 부위로부터 먼 친핵성기들을 사용하여 완성될 수 있다.

자연적 및 재조합 HSA와 인간 Igs 모두 상업적으로 이용가능하고 본 발명에서 사용하기에 적절하다.

항바이러스 화합물들은 숙련된 화학자들에게 잘 알려진 합성 방법들을 이용하여 제조될 수 있다. 예를 들면, 펩타이드들은 고상 펩타이드 합성의 잘 알려진 기술을 이용하여 제조될 수 있다. 예를 들면, Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd Ed., Pierce Chemical Company, Rockford, IL (1984) 참조. 유사하게, 펩타이드 단편들은 합성된 다음 함께 조합 또는 결합되어 원하는 서열을 생성할 수 있다.

다른 화합물들은 당업계에 알려진 방법들을 이용하여 또는 알려진 방법들을 수월하게 변형하여 제조할 수 있다.

결합된 화합물들 Pr - L1 및 Pr - L2 의 제조:

본 발명의 특정한 적용을 위하여 Pr로 표시되는 화합물들은 알부민이 될 수 있고, 결합된 화합물들 Pr-L1 및 Pr-L2를 제조하기 위하여 더 이상의 정제 또는 분리없이 일반적인 출처로부터 획득할 수 있다. 다른 구현예에서, 알부민은 본 명세서에 개시된 당업계의 알려진 다양한 방법들을 이용하여 더 정제될 수 있다.

하나의 구현예에서, 결합된 화합물들 Pr-L1 및 Pr-L2는 용액 내에서 Pr와 함께 유도되거나 또는 활성화될 수 있는 결합기 L1 또는 L2를 처리하고 반응이 실제로 완료될 때까지 반응 혼합물을 모니터하여 제조될 수 있다. 특히 바람직한 구현예에서, Pr은 단백질이다. 다른 바람직한 구현예에서, 단백질은 HSA 또는 재조합 HSA이다.

다른 바람직한 구현예에서 획득한 결합 화합물들 Pr-L1 및 Pr-L2는 충분한 순도로 얻어진다; 즉, 결합된 화합물들은 10% 이상의 순도로 얻어지며, 바람직하게는 30% 이상, 보다 바람직하게는 50% 이상의 순도로 얻어진다. Pr이 HSA 또는 재조합 HSA인 경우, 결합된 화합물과 함께 존재할 수 있는 화합물들은 반응하지 않은 HSA 및 HSA 출발 물질에서 존재한 다양한 생물학적 구성성분들로 이루어질 수 있다. 바람직하게는, HSA 또는 재조합 HSA는 건조 성분 기준으로 10% 이상의 순도를 가진다.

초과의 HSA 또는 결합 화합물들과 함께 존재하는 HSA 관련 생물학적 물질들은 AV와 함께 뒤이은 컨쥬게이션 단계를 현저하게 방해하지 않을 것이다. 게다가, 관련된 생물학적 물질들과 컨쥬게이트된 복합체들은 또한 생체 내에서 사용하는데 있어 약리학적으로 안정할 것이다.

그러나, 특정한 구현예에서 결합된 화합물들 Pr-L1 및 Pr-L2의 순도는 간섭 양이 현저하지 않거나 또는 다른 원하지 않는 혈액 구성성분들과 반응하는 컨쥬게이트로부터 획득되는 원하지 않는 부산물의 생성없이 AV와 화합물의 선택적 반응을 용이하게 하기 위하여 건조 성분 기준으로 10% 이상이 될 수 있다. 그러나, HSA 또는 재조합 HSA와 같은 Pr의 원하는 순도는 Ih의 관능기들뿐만 아니라 결합기 상에 있는 관능기들의 특성에 의존한다. 일반적으로, HSA 또는 재조합 HSA의 높은 순도들은 결합기 상의 관능기들이 보다 반응성이 있다면 적은 반응성이 있는 결합기 상의 관능기들보다 원하지 않는 부산물을 생성하는 것이 요구된다.

알부민은 숙주에서 유래하는 플라즈마 또는 혈액 알부민으로부터 얻어지고, 원하는 수준의 순도로 정제되며, 결합기와 결합될 수 있다. 혈액 또는 혈장으로부터 알부민의 정제는 알부민 정제를 위하여 당업계에 알려진 잘 입증된 표준 방법들을 사용하여 수행될 수 있다. 정제된 혈액 알부민을 사용하여 본 발명의 분리된 복합체들은 과능기화된 단백질의 상대적인 동종 집단으로 구성될 것이다.

일반식 I 또는 일반식 Ⅱ의 복합체 제조:

하나의 구현예에서, 일반식 I 또는 일반식 Ⅱ의 복합체들은 Pr과 AV-L1 또는 AV-L2의 컨쥬게이션, AV와 Pr-L1 또는 Pr-L2의 컨쥬게이션 또는 Pr과 AV의 컨쥬게이션에 의해 복합체를 형성하여 제조되며, 여기에서 결합기는 결여된다.

하나의 구현예에서, AV-L1 또는 AV-L2 용액은 컨쥬게이션 반응이 완결되었다고 여겨지는 조건 하에서 Pr과 조합된다. 특정한 구현예에서, 결합된 화합물은 결합기에 부착된 항-바이러스 제제이고, 결합된 화합물은 HSA 수용액에 첨가된다. 생성된 용액은 반응이 실제로 완결될 때까지 항온배양한다.

하나의 구현예에서, AV-L1 또는 AV-L2는 컨쥬게이션 반응이 HSA 상의 단일 부위에 선택적으로 처리하도록 하는 과잉의 HSA와 조합된다. 예를 들면, HSA 상의 단일 부위에서 AV-L1의 생성은 일반식 I의 단일 복합체 동정을 용이하게 허용할 수 있으며, 예를 들면 n은 1이다. 하나의 특정한 구현예에서, HSA와 AV-L1 또는 AV-L2의 컨쥬게이션 반응은 HSA의 단일 시스테인에서 발생한다. 특별한 이론에 의해 결합되지 않고 어떤 이유로 인하여 컨쥬게이션 반응이 동적인 생성물(kinetic product)을 생성한 다음 열역학적 생성물(thermodynamic product)를 생성하는 다른 아미노산 관능기에 재배열되는 시스테인-SH기와 함께 초기에 발생할 수 있을 것으로 생각된다.

다른 구현예에서, 컨쥬게이트 반응은 일반식 I의 복합체를 생성할 수 있으며, 예를 들면, 상기에서 하나 이상의 AV는 일반식 I의 복합체를 생성하기 위하여 단일 HSA에 결합되며 n은 1 이상이 된다. 선택적으로, 결합기 L1이 하나 이상의 AV 기를 부착할 수 있는 다관능기 결합기인 경우 m은 1 이상이 될 수 있다. 하나의 구현예에서, 일반식 I의 복합체는 (AV)m-L1과 관련된 과잉의 Pr을 조합하여 제조될 수 있다. 바람직하게는, (AV)m-L1에 대한 Pr의 비율은 약 50-100이다. 다른 특정한 구현예에서, 상기 비율은 약 10-30이다. 또 다른 특정한 구현예에서, 상기 비율은 약 2-5이다.

하나의 구현예에서, Pr은 약 1.1:1 이상의 비율에서 (AV)m-L1에 첨가되고, 바람직하게는 약 1.2:1 이상, 가장 바람직하게는 약 1.4:1 이상의 비율로 첨가된다. Pr이 알부민인 경우에서, 바람직한 비율들은 알부민당 0.7 자유 티올이 되는 전제를 기초로 한다. 바람직하게는, 생성된 복합체는 알부민과 같은 Pr 구성성분이 컨쥬게이션에 대하여 약 70% 자유 티올만을 가지기 때문에 1:1 복합체로 생성된다. HSA 또는 재조합 HSA와 같은 과잉의 Pr은 약리학적으로 안정하고 더 이상의 정제가 요구되지 않는다. 생성물 혼합물에서 과잉의 Pr이 존재하는 경우, 선택적으로 컨쥬게이트된 복합체는 10% 이상의 순도로 정제될 수 있다. 특정한 구현예에서, 컨쥬게이트된 복합체는 약 20% 또는 약 30%로 정제될 수 있다.

다른 구현예에서, 일반식 I의 복합체는 Pr에 대응하는 과잉의 (AV)m-L1을 조합하여 제조될 수 있다. 바람직하게는, Pr에 대한 (AV)m-L1의 비율이 약 50-100이다. 다른 특정한 구현예에서, 상기 비율은 약 10-30이다. 또 다른 바람직한 구현예에서, 상기 비율은 약 2-5이다. 생성물 혼합물에서 과잉의 (AV)m-L1이 존재하는 경우, 선택적으로 컨쥬게이트된 복합체는 10% 이상의 순도로 정제될 수 있다. 특정한 구현예에서, 컨쥬게이트된 복합체는 약 20% 또는 약 30%로 정제될 수 있다.

다른 구현예에서, 일반식 I 또는 일반식 Ⅱ의 복합체들은 Pr과 (AV)m-L1의 화학양론적 비율(stoichiometric ratio) 또는 L2-(pr)o와 AV의 화학양론적 비율인 1:1 비율로부터 제조될 수 있다. 선택적으로, 이들 제조로부터 생성된 생성물은 10% 이상의 순도로 더 정제될 수 있다. 특정한 구현예에서, 컨쥬게이트된 복합체는 약 20% 또는 약 30%의 순도로 정제될 수 있다. 또 다른 특정한 구현예에서, 1:1 컨쥬게이트된 복합체는 약 90% 이상의 순도로 더 정제될 수 있다.

다른 구현예에서, 알부민에 존재하는 컨쥬게이트된 시스테인은 반응 전에 자유 시스테인을 감소시킨다.

선택적으로, 컨쥬게이트 반응에서 생성된 복합체는 투여 전에 더 정제될 수 있다.

하나의 구현예에서, 컨쥬게이트 반응에서 얻어진 일반식 I 또는 일반식 Ⅱ의 복합체들은 과잉의 HSA 또는 복합체와 함께 존재하는 HSA 관련 생물학적 물질들은 생체 내에서 사용하는 동안 약리학적으로 안정하므로 더 이상의 과정 또는 정제없이 투여될 수 있다.

상기 각각의 구현예들에서, AV는 펩타이드 항-바이러스 제제이고 Pr은 HSA 또는 재조합 HSA이다.

하나의 구현예에서, 결합기 및 알부민을 가지는 보호된 또는 비보호된 항-바이러스 제제를 포함하는 분리된 복합체는 선택적으로 더 정제된 후 숙주로 되돌아갈 수 있다.

본 발명의 방법으로 형성된 복합체들은 생리학, 약물동력학 및 안전성 프로필이 연장된 기간 동안에 잘 입증될 때까지 동물 또는 인간 숙주에서 시험될 수 있다. 일반적으로, 측정된 복합체의 반감기는 약 5-7일이고, 보다 일반적으로는 약 7-10일이며, 바람직하게는 15-20일 또는 그 이상이다. 일반적으로, 기간은 종에 의존적이다. 예를 들면, 인간 알부민의 반감기는 약 17-19일이다. 항-바이러스 제제의 특성, 결합 그룹 및 알부민의 순도에 의존하는 복합체들의 효과적인 치료 농도는 약 한 달 또는 그 이상이다.

반감기는 라벨된 복합체 또는 화합물의 알려진 양의 주사를 혈관내 투여하여일반식 I 또는 일반식 Ⅱ 복합체들, AV-L 화합물, L-Pr 화합물 또는 복합체 또는 화합물을 동위원소(131I, 125I, Tc, Cr, 3H 등등) 또는 형광물질(fluorochrome)로 라벨링한 AV 화합물의 전체 혈액, 혈장 또는 혈청 수준의 순차적인 측정에 의하여 결정된다. 적혈구(반감기 약 60일), 혈소판(반감기 약 4-7일), 내피세포 안쪽 혈관 및 알부민, 스테로이드 결합 단백질, 페리틴, α2-매크로글로불린, 트랜스페린, 치록신 결합 단백질, 면역글로불린, 특히 IgG 등과 같은 장기간 생존 혈액 혈청 단백질이 포함된다. 또한 바람직한 반감기에서, 환자 구성성분들은 본 발명의 화합물의 치료학적 유효량의 결합을 허용하는 세포 계측 또는 충분한 농도에서 바람직하다. 세포질 장기간 생족 혈액 구성성분에 있어서, 세포 계측은 2,000/㎕ 이상, 혈청 단백질 농도는 1㎕/ml 이상, 일반적으로 약 0.01mg/ml, 보다 일반적으로는 약 1mg/ml이 바람직하다.

그러나, 복합체의 특성이 항-바이러스 제제와 같이 제제 AV를 생물학적으로 작동하도록 설계하는 경우, 복합체로부터 분리되고 숙주로 방출되어 복합체의 효과적인 치료 농도를 위한 원하는 반감기 및/또는 생물학적 활동 제제가 상기 측정된 반감기에서 변경된다. 생물학적 활동 제제의 방출 비율은 방출되는 생물학적 제제 상의 원자가 또는 관능기, 결합 그룹의 특성, 단백질의 순도 및 유형, 투여 조성물 및 투여 방법 등에 얼마간 의존한다. 따라서, 혈액의 환경, 혈액의 구성성분, 고유의 효소, 간에서의 활성 또는 다른 제제가 숙주에서 원하는 비율로 생물학적 제제의 방출과 결합 그룹의 분열을 초래하는 경우, 다양한 결합 그룹 및 생물학적 제제들이 사용될 수 있다.

본 발명의 분리된 복합체들은 컨쥬게이트되지 않은 화합물과 비교하여 개선된 약물생체반응, 용해도, 생체이용가능성, 분포 및/또는 면역원성을 가지는 생물학적 활동 화합물을 제공한다.

놀랍게도, 본 발명의 방법에 따라 제조 및 사용되는 경우 일반식 I 및 일반식 Ⅱ의 복합체들은 스스로 AV 구성성분보다 현저하게 오랜 시간 동안 효과적인 치료 농도를 제공한다. 게다가, 본 발명의 복합체들은 스스로 AV 구성성분 투여와 비교하여 개선된 용해도, 분포, 약물생체반응 및 질병 면역원성을 가지는 생물학적 활동 화합물을 제공한다.

본 발명자들은 놀랍게도 정제된 구성성분으로부터 생체 밖에서 제조한 컨쥬게이트를 환자에게 투여하는 것이 환자의 혈류에서 내생적 알부민에 원래 위치에 결합하는 활성화된 화합물을 주사하여 컨쥬게이트의 생체 내 제조에 의하여 제조된 컨쥬게이트와 비교하여 컨쥬게이트의 현저하게 효과적인 조직 생체 분포를 제공함을 발견하였다. 더욱이, 본 발명자들은 실제로 모든 컨쥬게이트들이 생체 내에서 제조된 컨쥬게이트에서 관찰되는 화합물의 극적인 상실과 대조적으로 한 시간동안 또는 심지어 투여하고 하루동안 혈액순환에서 잔존하는 것을 발견하였다. 이 효능은 활동 기질의 주입을 받아야하는 환자의 많은 시간을 감소시키고 또한 단일 투여로 주어져야하는 항-바이러스 제제의 양을 감소시킨다.

본 발명의 배경에서, 조성물의 치료학적 유효량은 환자에게 투여하여 환자의 질병, 이상(condition) 또는 증후군에 효과적이거나 또는 증상 질병, 이상 또는 증후군을 경감하는데 효과적인 등급으로 원하는 생리 효과를 제공하는 경우의 양을 의미하는 것으로 이해된다.

혈액 구성성분 및 펩타이드 항-바이러스를 포함하는 융합 단백질의 제조를 위하여, 융합 단백질을 인코딩하는 유전자들은 프레임 내의 적절한 벡터에 배치되고, 상기 벡터는 적절한 숙주 세포를 형질전환하는데 사용된다. 상기 유전자들은 순서 중에 배치되고(예를 들면, 항-바이러스 펩타이드는 융합 단백질의 N- 또는 C-말단에 배치될 수 있다), 결합기 펩타이드에 의해 직접 융합 또는 분리될 수 있다. 적절한 결합기 펩타이드들은 당업계에 알려져 있으며, 자신의 짧은 이차 구조를 가지고 친수성인 펩타이드 서열을 포함하며, 예를 들면, 글리신 및 세린 잔기의 혼합물을 포함하는 결합기들을 들 수 있다. HSA의 융합 단백질들을 제조하는 방법은 국제공개공보 제WO01/79271호 및 제WO01/79258호에 개시되어 있고 유사한 방법들이 다른 혈액 구성성분들과 융합 단백질들을 제조하는데 사용된다.

특히 세포막과 바이러스 융합을 억제하는 펩타이드들, 보다 구체적으로 HIV의 융합을 억제하는 펩타이드의 용도도 본 발명의 범주에 속한다. 특이적 펩타이드 억제제들은 일반적으로 약 51개 아미노산 이상을 포함하고, 본 명세서에 개시된 서열을 가지는 펩타이드를 포함한다. 특히, 상기 펩타이드는 도 1a 내지 도 1p에서 보여지는 서열을 포함할 수 있다. 이들 서열들은 HIV 분리물에서 발견되는 서열들 및 도 1a 내지 도 1p에서 보여지는 서열보다 긴 펩타이드에서 유래되고 예를 들면, 펩타이드 서열의 잔여분은 보여진 서열에서 N- 또는 C-말단이 될 수 있다. 이러한 부가적 서열들은 이들 HIV 분리물에서 확인된 서열들에 인접하여 발생하는 서열로 이루어지거나 또는 포함할 수 있다.

일반식 I 및 일반식 Ⅱ의 분리된 복합체 투여:

하나의 구현예에서, 본 발명의 분리된 복합체 투여는 환약(bolus)을 이용하여 수행될 수 있지만, 계량된 흐름을 사용하는 주입을 통해 천천히 시간을 초과하여 도입될 수 있다.

본 발명의 복합체는 탈이온수, 인산 완충 식염수, 식염수, 만니톨, 수용성 글루코오스, 알코올 또는 식물성 오일 등의 약제학적으로 허용가능한 배지 내로 투여될 수 있다. 단일 주입은 원하는 경우 1회 이상 주입하여 사용될 수 있다. 상기 복합체는 주입기, 투관침 또는 도뇨관 등을 포함하는 통상적인 수단으로 투여될 수 있다. 특정한 투여 방법은 단일 환약 또는 지속적인 투여 등과 같이투여되는 양에 의존하여 변경될 수 있다. 도입 부위가 본 발명에서 결정적이지 않은 경우 혈관내로 투여될 수 있으며, 바람직하게는 혈류가 빠른 부위에서는 정맥내로, 말초 또는 중심 혈관으로 투여된다. 느린 방출 기술 또는 보호용 매트릭스와 커플되는 투여의 경우에는 다른 루트를 사용할 수 있다.

예를 들어 알부민과 같은 혈액 단백질로부터 분리된 본 발명의 방법에 의해 제조된 분리 복합체의 투여는 알부민과 같은 분리된 혈액 단백질로부터 제조되어지지 않은 복합체 또는 비-컨쥬게이트된 항-바이러스 제제와 비교하여 증가된 시간동안 혈류에서 효율적인 치료효과를 유지하는 항-바이러스성 컨쥬게이트 복합체를 초래하는 것으로 인지된다.

한 실시형태에서 본 발명은 약학적으로 수용가능한 염의 형태로 화합물을 제공한다.

다른 실시형태에서 본 발명은 입체이성질체(stereoisomer)의 혼합물에서 본 발명의 혼합물을 제공한다. 다른 실시형태에서 본 발명은 단일 입체이성질체로서 화합물을 제공한다.

다른 실시형태에서 본 발명은 활성성분으로서 화합물을 함유하는 약학적 조성물을 제공한다. 다른 기타 특이변형에서, 본 발명은 약학적 조성물을 제공하고, 여기서 조성물은 축적물(depot)로서 투여용 정제 또는 고형이다. 다른 특이변형에서 본 발명은 약학적 조성물을 제공하고, 여기서 조성물은 Ⅳ 또는 피하(subcutaneous) 투여용으로 적합한 액체 형태이다. 다른 특이변형에서 본 발명은 약학적 조성물을 제공하고, 여기서 조성물은 비경구적 투여용으로 적합한 액체 형태이다.

모든 실시형태에서 여기의 모든 실시형태, 변형, 및/또는 각각의 화합물들에서 기재되거나 청구된 다른 실시형태, 변형, 또는 기재된 모든 화합물은 명확하게 명시하지 않는다면, 단일 입체 이성질체 또는 입체 이성질체의 혼합물의 형태로 모든 약학적으로 수용가능한 염을 포함하고자 한다. 유사하게, 하나이상의 잠재적 키랄(chiral)센터가 여기서 명시되거나 청구된 실시형태, 변형, 및/또는 각각의 화합물의 하나에 존재할 경우, 가능한 키랄센터는 명확하게 명시되지 않는다면 포함되고자 한다.

본 발명에 의한 화합물의 약물전구체(prodrug) 유도체는 생체안에서 다른 치환기로 변형하는 본 발명의 화합물의 치환기를 변형함으로써 제조될 수 있다. 또한, 약물전구체 자체가 본 발명에 의한 화합물의 범위내에서 포함되는 많은 경우가 있음을 인지한다. 예를들어, 약물전구체는 카르바밀레이트(carbamylating)제제(예로, 1,1-아실록시알킬카르보노클로리데이트, 파라-니트로페닐 카르보네이트 등), 또는 아실레이트(acylating)제제와 화합물을 반응시킴으로써 제조될 수 있다. 약물전구체를 제조하는 방법의 기타 예들은 Saulnier et al(1994), Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, Vol.4,p. 1985에 기재되어 있다.

또한, 본 발명의 화합물의 보호 유도체(protected derivative)가 제조될 수 있다. 보호기(protecting group)의 제조 및 이의 제거에 적용가능한 기술의 예는 T.W. Greene, Protecting Group in Organic Synthesis, 3rd edition, John Wiley & Sons, Inc. 1999에서 확인할 수 있다.

또한, 본 발명의 화합물은 용이하게 제조되거나 용매화합물(solvate)(예로, 수화물)로서 발명의 과정동안 제조될 수 있다. 본 발명의 화합물의 수화물은 디옥산, 테트라하이드로퓨란 또는 메탄올과 같은 유기성 용매를 사용하여 수용성/유기성 용매혼합물로부터 재결정함으로써 용이하게 제조될 수 있다.

여기에서 사용된 "약학적으로 수용가능한 염"은 염의 형태로 사용되는 본 발명에 의한 화합물을 포함하고자 하는 것이며, 상기 염은 화합물의 자유 형태 또는 상이한 염 형태와 비교하여 향상된 약동학(Pharmacokinetic) 성질을 화합물에 부여한다. 또한, 약학적으로 수용가능한 염은 전에 가지고 있지 않았던 바람직한 약동학 성질을 화합물에 초기에 부여하고, 몸에 치료성 활성을 고려하여 화합물의 약력학(Pharmacodynamic)에 영향을 준다. 바람직하게 영향을 줄 수 있는 약동학 성질의 예는 화합물이 세포막을 가로질러 이동하는 방식이며, 화학물의 흡수, 분포, 생물학적인 변형(biotransformation) 및 배출에 직접적 및 긍정적으로 영향을 미칠 수 있다. 약학적 조성물의 투여방법이 중요할 경우, 다양한 해부학적(anatomical), 생리학적 및 병리학적 인자가 결정적으로 생체이용률(bioavailability)에 영향을 미칠 수 있으며, 화합물의 용해도는 보통 사용되는 특정 염 형태의 성질에 의존된다. 당업계의 당업자는 고형 약물형태 뿐만 아니라 액체 용액 및 현탁액이 화합물의 빠른 흡수에 덜 영향을 미치는 반면, 화합물의 수용액이 처리되는 대상의 채내속으로 화합물의 빠른 흡수를 제공할 것이라는 것을 인지할 것이다.

펩티드 및 복합체:

본 발명의 한 실시형태에서, 하기 서열을 함유하는 51 아미노산으로 이루어진 펩티드를 제공한다:

Y1-X-X-Y2-X-X-X-Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6,

상기 서열은 펩티드의 N-말단, C-말단 또는 내부에 위치하며;

Y1은 W, Y, F, H, L, N, Q, E, D, K, 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y2는 W, Y, F, H, L, N, Q, E, D, K, 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y3는 I, V, L, A, S 및 T로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y4는 T, S, I, K, N, H, R, Q, E, 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y5는 I, V, T, K, L, N, Q, D, E, R, 및 H로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y6는 P, G, 및 C를 제외한 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택되며;

각 X는 독립적으로 아미노산이다.

본 발명의 다른 실시형태에서, 하기 서열을 함유하는 51 아미노산으로 이루어진 펩티드를 제공한다:

Y1-X-X-Y2-X-X-X-Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6-Y7,

상기 Y1은 W, Y, F, H, L, N, Q, E, D, K, 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y3는 I, V, L, A, S 및 T로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y7은 I, L, V, N, Q, K, R, H, E 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되며;

각 X는 독립적으로 아미노산이다.

Y1-X-X-Y2-X-X-X-Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6-Y7-X-X-X-Y8,

Y3는 I, V, L, A, S 및 T로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y7는 I, L, V, N, Q, K, R, H, E 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y8은 Q, H, R, N, E, D, K 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되며;

각 X는 독립적으로 아미노산이다.

본 발명의 다른 실시형태에서 하기 서열을 함유하는 51 아미노산으로 이루어진 펩티드를 제공한다;

Y1-X-X-Y2-X-X-X-Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6-Y7-X-X-X-Y8-X-Y9,

Y3는 I, V, L, A, S 및 T로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y8은 Q, H, R, N, E, D, K 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y9는 Q, H, N, E, D, K, R, L 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되며;

각 X는 독립적으로 아미노산이다.

Y1-X-X-Y2-X-X-X-Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6-Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 - Y10,

Y3는 I, V, L, A, S 및 T로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y8은 Q, H, R, N, E, D, K 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y10은 Q, H, N, E, D, K, 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되며;

각 X는 독립적으로 아미노산이다.

Y1-X-X-Y2-X-X-X-Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6-Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 - Y10-X-X-Y11,

Y3는 I, V, L, A, S 및 T로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y8은 Q, H, R, N, E, D, K 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y10은 Q, H, N, E, D, K, 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y11은 N, S, T, V, A, 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되며;

각 X는 독립적으로 아미노산이다.

Y1-X-X-Y2-X-X-X-Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6-Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 - Y10-X-X-Y11 -Y12,

Y3는 I, V, L, A, S 및 T로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y8은 Q, H, R, N, E, D, K 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y10은 Q, H, N, E, D, K, 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y11은 N, S, T, V, A, 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y12는 E, V, K, G, R, Q, D, N, H, T 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되며;

각 X는 독립적으로 아미노산이다.

Y1-X-X-Y2-X-X-X-Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6-Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 - Y10-X-X-Y11 -Y12-X-X-Y13,

Y3는 I, V, L, A, S 및 T로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y8은 Q, H, R, N, E, D, K 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y10은 Q, H, N, E, D, K, 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y11은 N, S, T, V, A, 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y13은 L, I, V, K, 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되며;

각 X는 독립적으로 아미노산이다.

Y1-X-X-Y2-X-X-X-Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6-Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 - Y10-X-X-Y11 -Y12-X-X-Y13-Y14,

Y3는 I, V, L, A, S 및 T로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y8은 Q, H, R, N, E, D, K 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y10은 Q, H, N, E, D, K, 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y11은 N, S, T, V, A, 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y13은 L, I, V, K, 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y14는 L, S, M, Y, N, Q, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되며;

각 X는 독립적으로 아미노산이다.

Y2-X-X-X-Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6-Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 - Y10-X-X-Y11 - Y12-X-X-Y13-Y14,

상기 Y2는 W, Y, F, H, L, N, Q, E, D, K, 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y3는 I, V, L, A, S 및 T로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y8은 Q, H, R, N, E, D, K 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y10은 Q, H, N, E, D, K, 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y11은 N, S, T, V, A, 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y13은 L, I, V, K, 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되며;

각 X는 독립적으로 아미노산이다.

Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6-Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 - Y10-X-X-Y11 - Y12-X-X-Y13 - Y14,

상기 Y3는 I, V, L, A, S 및 T로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y8은 Q, H, R, N, E, D, K 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y10은 Q, H, N, E, D, K, 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y11은 N, S, T, V, A, 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y13은 L, I, V, K, 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되며;

각 X는 독립적으로 아미노산이다.

Y4-X-X-Y5-X-X-Y6-Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 - Y10-X-X-Y11 - Y12-X-X-Y13 - Y14,

상기 Y4는 T, S, I, K, N, H, R, Q, E, 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y8은 Q, H, R, N, E, D, K 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y10은 Q, H, N, E, D, K, 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y11은 N, S, T, V, A, 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y13은 L, I, V, K, 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되며;

각 X는 독립적으로 아미노산이다.

Y5-X-X-Y6-Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 - Y10-X-X-Y11 - Y12-X-X-Y13 - Y14,

상기 Y5는 I, V, T, K, L, N, Q, D, E, R, 및 H로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y8은 Q, H, R, N, E, D, K 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y10은 Q, H, N, E, D, K, 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y11은 N, S, T, V, A, 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y13은 L, I, V, K, 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되며;

각 X는 독립적으로 아미노산이다.

Y6-Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 - Y10-X-X-Y11 - Y12-X-X-Y13 - Y14,

상기 Y6는 P, G, 및 C를 제외한 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y8은 Q, H, R, N, E, D, K 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y10은 Q, H, N, E, D, K, 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y11은 N, S, T, V, A, 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y13은 L, I, V, K, 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되며;

각 X는 독립적으로 아미노산이다.

본 발명의 다른 실시형태에서 하기 서열을 함유하는 51 아미노산으로 이루어진 펩티드를 제공한다.

W-X-X-W-X-X-X-I-X-X-X-T-X-X-I-X-X-L-I-X-X-X-Q-X-Q-Q-X-X-N,

상기 X는 독립적으로 아미노산이다.

W-X1-X2-W-X3-X4-X5-I-X6-X7-X8-T-X9-X10-I-X11-X12-L-I-X13-X14-X15-Q-X16-Q-Q-X17-X18-N-X19-X20-X21-X22-X23,

상기 X1은 M, L, I, Q, T, R 및 K로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X2는 어느 하나의 E, D, Q 및 K 이며;

X3는 E, D, 및 K로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X4는 K, R, E, Q, N, 및 T로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X5는 E, L, R, K 및 Q로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X6는 N, D, S, E, Q, K, R, H, T, I 및 G로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X7은 N, Q, D, E, K, S, T 및 Y로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X8은 Y, F, H, I, V 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X9는 G, K, R, H, D, E, S, T, N, 및 Q로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X10은 K, H, E, Q, T, V, I, L, M, A, Y, F 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X11은 H, K, E, Y 및 F로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X12는 T, S, Q, N, E, D, R, K, H, W, G, A, 및 M으로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X13은 D, E, Q, T, K, R, A, V 및 G로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X14는 D, E, K, H, Q, N, S, I, L, V, A, 및 G로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X15는 S, A, 및 (P)로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X16은 N, K, S, T, D, E, Y, I 및 V로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X17은 E, D, N, K, G 및 V로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X18은 K, R, H, D, E, N, Q, T, M, I 및 Y로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X19는 E, V, Q, M, L, J 및 G로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X20은 Q, N, E, K, R, H, L 및 F로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X21은 E, D, N, S, K, A 및 G로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X22는 L, I 및 Y로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X23은 I, L, M, Q, S 및 Y로 이루어진 군으로부터 선택된다.

본 발명의 한 변형에서 펩티드는 하기 도 1에서 나타내는 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 함유한다.

본 발명의 다른 실시형태에서 하기 일반식 Ⅰ 또는 Ⅱ의 분리된 복합체를 제공한다.

[일반식 Ⅰ]

[일반식 Ⅱ]

상기에서 m은 1~5의 정수이다;

n은 1~100의 정수이다;

o는 1~5의 정수이다;

p는 1~100의 정수이다;

AV는 항바이러스성 화합물이다;

L1 및 L2는 Pr에 AV를 공유적으로 연결하는 다가 연결기(linker)이거나, L1 및 L2가 없다;

Pr은 단백질이며;

여기서 복합체는 생체안에서 항바이러스 활성을 갖는다.

상기 실시형태의 한 변형에서, 항바이러스성 화합물은 펩티드이다. 다른 변형에서 펩티드는 100kDA 이하의 질량을 갖는다. 다른 변형에서, 펩티드는 30kDA 이하의 질량을 갖는다. 다른 변형에서, 펩티드는 10kDA 이하의 질량을 갖는다.

한 특이 변형에서, 펩티드는 펩티도미메틱(peptidomimetic) 이다.

본 발명의 다른 실시형태에서, 펩티드는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 함유하는 51 아미노산으로 이루어진다:

펩티드 DP178(T-20); 및

펩티드 T-1249;

상기에서:

X1은 M, L, I, Q, T, R 및 K로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X2는 어느 하나의 E, D, Q 및 K 이며;

X3는 E, D, 및 K로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X4는 K, R, E, Q, N, 및 T로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X5는 E, L, R, K 및 Q로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X7은 N, Q, D, E, K, S, T 및 Y로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X8은 Y, F, H, I, V 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X11은 H, K, E, Y 및 F로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X15는 S, A, 및 (P)로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X17은 E, D, N, K, G 및 V로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X19는 E, V, Q, M, L, J 및 G로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X20은 Q, N, E, K, R, H, L 및 F로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X21은 E, D, N, S, K, A 및 G로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X22는 L, I 및 Y로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X23은 I, L, M, Q, S 및 Y로 이루어진 군으로부터 선택된다.

여기에서 공개된 51 아미노산으로 이루어진 펩티드의 단편을 함유하는 펩티드 서열은 51 아미노산 펩티드의 N-말단, C-말단 또는 내부 어디에 위치한 51 아미노산의 단편일 수 있다. 하나의 변형에서, 펩티드는 C-말단 아미드(-CONH₂) 및 이의 보호된 유도체이다. 다른 변형에서, 펩티드는 C-말단 에스테르(즉, -COOR, R은 치환되거나 치환되지 않은 (C₁ _~15)알킬류이다.)이다.

선택적으로, 여기에서 공개된 단편을 함유하는 펩티드 서열은 당업계에서 공지된 표준 보호기에 의해 더 보호될 수 있다. 상기 펩티드의 보호된 유도체는 항바이러스성 화합물의 제조에 유용하거나, 부분적으로 또는 전체적으로 보호된 형태로 활성 항바이러스성 화합물로서 자체로 유용하다. 즉, 복합체에서 유도되거나 보호되거나 부분적으로 보호된 펩티드 단편들은 표적에 결합하고 치료성 생물학적 활성을 나타내는 능력을 유지할 수 있다. 예를들어, 펩티드 단편의 아미노기에 대표적 보호기는 아세틸, tert-부톡시카르보닐, 벤질옥시카르보닐 등이다. 적절하고 대표적인 보호기는 T.W. Greene, Protecting Group in Organic Synthesis, 3rd edition, Jphn Wiley & Sons, Inc. 1999에서 확인할 수 있다.

한 실시형태에서, 펩티드 단편의 보호기는 C-말단 아미드 및/또는 N-말단 아세틸기 및 이의 유도체를 포함한다. 펩티드는 -NH, -SH, -OH, -COOH 등을 포함하는 아미노산의 작용기(functional group)를 갖고 있을 수 있으며, 연결기에 부착될 수 있다.

본 발명의 한 변형에서, 상기 실시형태 및 변형의 복합체를 제공하며, 상기 단백질은 혈액성분이다. 다른 변형에서, 혈액성분은 적혈구, 면역글로불린(immunoglobulin), IgM, IhG, 혈청알부민(serum albumin), 트렌스페린(transferrin), P90 및 P38, 훼리틴(Ferritin), 스테로이드 결합단백질(steroid binding protein), 티록신(thyroxin) 결합단백질 및 α-2-마크로(macro)글로부린으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 다른 변형에서, 혈액성분은 인간 혈청알부민이고, 연결기는 펩티드 연결기이다.

다른 특이 변형에서, 혈액성분은 인간혈청 알부민이고, 연결기는 비-펩티드 연결기이다.

본 발명의 하나의 특이 실시형태에서, 복합체는 융합단백질(fusion protein)이다.

본 발명의 하나의 변형에서, 연결기 L1 또는 L2는 생체안에서 가수분해 절단에 안정한 안정한(non-labile) 연결기이다. 따라서, 본 발명의 복합체는 생체안에서 가수분해 절단에 안정한 화합물을 제공한다. 게다가, 본 발명의 화합물은 자체적으로 활성 화합물이고, 간단히 생체안에서 가수분해로 생성되거나 방출되는 펩티드의 약물전구체는 아니다.

WO 00/76550(F.Kratz)에는 자체 또는 재조합 알부민과 같이 티올 결합기에 부착된 스페이서(spacer) 분자에 부착된 약학적 및/또는 진단적 활성 물질을 기재하고 있다. 그러나, 상기 기재는 약학적 화합물 또는 진단적 활성물질의 방출은 저 분자량 활성물질이 약학적으로 활성인 표적 분자와 서로 작용을 해야만 바람직한 것으로 나타낸다. 게다가, Kratz는 스페이서 분자를 가수분해적으로 및/또는 pH-의존적 및/또는 효소적으로 갈라지기 쉬운 화합물로부터 선택되는 것을 가르친다. 바람직하게, 상기 스페이서 분자는 산 민감성 또는 산-불안정한 스페이서이다.

연결기 L1 또는 L2는 소수성 연결기, 친수성 연결기, 또는 하나이상의 연결기가 존재할 경우 이의 조합일 수 있다. 상이한 연결기 L1 또는 L2의 종류는 상이한 용해도 특성 및 세포 침투성(penetrability)을 제공하도록 선택될 수 있다.

본 발명의 항바이러스성 화합물이 하나이상의 연결기에 부착된 펩티드일 경우, L1 또는 L2는 N-말단, C-말단, 리신(lysine), 아스파르트산(aspartic acid), 글루타민산, 또는 시스테인 또는 이들의 조합과 같은 내부 아미노산의 반응성 측쇄에서 펩티드에 부착될 수 있다.

본 발명의 한 변형에서, 연결기 L1 또는 L2는 Pr에 AV를 공유적으로 연결하는 적어도 2개의 작용기를 포함한다. 다른 변형에서, 연결기 L1 또는 L2는 증가된 시간동안 인간 혈청에서 가수분해적으로 안정하다.

본 발명의 복합체는 비-복합된 화합물보다 가수분해적 절단 또는 저하(degradation)에 자체가 더 안정한 화합물로 결정되었다. 한 변형에서, 본 발명의 복합체는 가수분해적 절단 또는 저하에 안정적이고, 인간 혈청에서 4시간~120일의 반감기를 갖고 있다. 특이 변형에서, 본 발명의 복합체는 약 8시간~30일동안 가수분해적 절단 또는 저하에 안정적이다.

한 특이적 변형에서, 연결기 L1 또는 L2가 인간혈청에서 8시간~30일의 반감기동안 안정한 본 발명의 복합체를 제공한다.

상기 변형 및 실시형태의 다른 특이 변형에서, 아실록시메틸케톤(acyloxymethylketone), 아지리딘(aziridine), 디아조메틸(diazomethyl) 케톤, 에폭사이드(epoxides), 아이오도(iodo)-, 브로모- 또는 클로로아세타미드, α-할로에스테르, α-할로케톤, 설포늄(sulfonium), 클로로에틸설파이드, O-알킬이소우레아(alkylisourea), 알킬 할라이드, 비닐술폰, 아크릴아미드, 아크릴레이트, 비닐피리딘, 유기금속성 화합물, 아릴디설파이드, 티오술포네이트, 알데하이드, 니트릴, α-디케톤, α-케토아미드, α-케토에스테르, 디아미노케톤, 세미카르바존(semicarbazone), 및 디히드라지드(dihydrazide)로 이루어진 군에서 선택된 화합물의 유도체이다.

상기 변형 및 실시형태의 다른 특이 변형에서, 연결기 L1 또는 L2는 아지도벤조일(azidobenzoyl) 히드라지드, N-[4-(p-아지도살리실아미노)부틸]-3'-(2'-피리딜디티오)프로피온아미드, 비스-설포석신이미닐 서브에레이트(suberate), 디메틸 아디피미데이트, 디석신이미딜 타르트레이트, N-y-말레이미도부티릴옥시석신이미드 에스테르, N-히드록시 술포석신이미딜-4-아지도벤조에이트, N-석신이미딜[4-아지도페닐]-1,3'-디티오프로피오네이트, N-석신이미딜[4-아이오도아세틸]아미노벤조에이트, 글루타르알데하이드, 석신이미딜 4-[N-말레이미도메틸]시클로헥산-1-카르복실레이트, N-히드록시술포석신이미드, 말레이미드-벤조일-석신이미드, γ-말레이미도-부티릴옥시 석신이미드 에스테르, 말레이미도프로피온산, N-히드록시석신이미드, 이소시아네이트, 티오에스테르, 티오노카르복실산 에스테르, 이미도 에스테르, 카르보디이미드, 무수물 및 카르보네이트 에스테르로 이루어진 군에서 선택된 화합물의 유도체이다.

하나의 특이 실시형태에서, 단백질이 알부민인 본 발명의 복합체를 제공한다. 상기 실시형태의 한 변형에서, 알부민은 HSA 또는 건조물질 기준으로 적어도 10% 순도를 갖는 재조합 HSA이다.

다른 변형에서, 연결은 인간 알부민의 Cys-34에 있다. 다른 변형에서, 연결은 인간 알부민의 리신에 있다.

본 발명의 하나의 특이 변형에서, m이 1, n이 1이고 단백질은 HSA 또는 재조합 HSA인 상기 공개된 복합체를 제공한다. 다른 변형에서, n이 1이고, 단백질은 HSA 또는 재조합 HSA이며, 복합체는 적어도 30%의 순도로 정제된다. 다른 특이 변형에서, m이 1, n이 2이고 단백질은 HSA 또는 재조합 HSA이다.

한 실시형태에서, 복합체는 Pr과 (AV)_m-L1의 화학양론적(stoichiometric) 비율 또는 L2-(Pr)₀와 AV의 화학양론적 비율로 조합함으로써 제조된다. 따라서, Pr에 (AV)_m-L1의 비율, 또는 L2-(Pr)₀에 AV의 비율은 1:1이다. 다른 특이 변형에서, 복합체는 적어도 약 1.3:1의 비율로 (AV)_m-L1에 Pr의 혼합물을 조합함으로써 제조된다.

상기 실시형태의 한 변형에서, L1 및 L2는 없으며, 복합체는 Pr과 활성화된 AV 중간체의 축합에 이어 활성화된 AV의 중간체를 형성함으로써 제조된다. 상기의 변형에서, AV의 활성화된 중간체는 혼합된 무수물 또는 N,N'-카르보닐디이미다졸 시약으로부터 제조된다.

상기 변형에 의해, 복합체는 적어도 약 30%의 순도로 더 정제된다. 뜻밖에, 생체밖 컨쥬게이트 화합물은 생체내 컨쥬게이트된 화합물의 형성을 넘어 예상치못한 장점을 생성하는 것으로 결정적이었다. 예를들어, 상대적으로 불용성 항바이러스 제제의 경우에서 생체밖 컨쥬게이션은 더 가용적인 제제 또는 복합체를 형성한다. 화합물의 향상된 안정성에 더하여, 본 발명의 복합체의 형성은 더 가용적 복합체를 초래하며, 불용성 비컨쥬게이트된 약물의 투여에 걸쳐 투여(주사로)에 중요한 장점이다. 항바이러스성 제제의 생체밖 컨쥬게이션으로 가용성 약물형태를 형성하므로, 본 방법은 안정하고, 생리학적 용액을 제조하도록 한다. 본 발명의 복합체를 함유하는 안정하고 가용적인 용액 조성물을 제조하는 능력은 경구 또는 비경구적 투여에 용이한 복합체의 생리학적 식염수를 제조하도록 한다.

게다가, 생체밖 복합체의 형성은 복합체의 투여가 주입부위에 덜 자극적이고 다른 단백질과 비-특이적 반응을 피하고, 생체내 접근보다 향상된 복합체의 치료적 혈액수준을 나타내므로, 복합체의 생체내 형성보다 바람직한 것으로 알려져 왔다.

다른 실시형태에서, 본 발명은 혈액성분에 공유적으로 연결된 비-펩티드 항-바이러스성 화합물을 함유하는 항-바이러스성 조성물을 제공한다.

상기 각 실시형태 및 변형에 의해 복합체 및 생리학적으로 수용가능한 담체를 함유하는 상기 실시형태 및 변형에 의한 조성물을 제공한다. 한 변형에서, 조성물은 염수(saline)과 형성되거나 염수없이 형성된다. 다른 변형에서, 조성물은 비경구적 투여용이다.

본 발명의 조성물의 투여는 피하, 근육내, 안와내(intraorbital), 관절낭내(intracapsular), 척추내(intraspinal), 자궁내(intrasternal), 뇌내(intracerebral)실(ventricular)(ICV), 정맥내 등과 같은 기타 방법을 통하여 주입하는 것을 포함하는 비경구적 투여를 포함할 수 있다.

상기의 한 변형에서, 조성물은 용액, 사용에 앞서 용매와 조합하는 건조물, 현탁액, 에멀젼 및 액체 농축액으로 이루어진 군에서 선택된다.

본 발명의 다른 실시형태에서 생체안에서 HIV gp41 및 HIV의 활성을 억제하는 방법을 제공하며, 방법은 하기를 포함한다:

상기 실시형태 및 변형의 분리된 컨쥬게이트 복합체를 포유류 숙주의 혈류에 투여하는 단계로, 상기 복합체는 단백질과 반응하여 안정한 공유결합을 형성하는 적어도 하나의 반응성 작용기를 갖는 연결기에 항바이러스성 화합물을 부착함으로써 형성되는 것이고,

상기 분리된 컨쥬게이트 복합체는 비-컨쥬게이트된 항바이러스성 화합물과 비교하여 증가된 시간동안 혈류에서 효율적인 치료효과를 유지하는 양으로 투여되는 것이다.

상기 방법의 한 변형에서, 방법은 상기 실시형태 및 변형에서 공개된 복합체에 적용될 수 있다.

다른 변형에서 방법은 단백질이 HSA 또는 재조합 HSA인 단백질에 적용된다.

상기 방법의 특이 변형에서, 반응성 작용기로 이루어진 연결기는 아실록시메틸케톤(acyloxymethylketone), 아지리딘(aziridine), 디아조메틸(diazomethyl) 케톤, 에폭사이드(epoxides), 아이오도(iodo)-, 브로모- 또는 클로로아세타미드, α-할로에스테르, α-할로케톤, 설포늄(sulfonium), 클로로에틸설파이드, O-알킬이소우레아(alkylisourea), 알킬 할라이드, 비닐술폰, 아크릴아미드, 아크릴레이트, 비닐피리딘, 유기금속성 화합물, 아릴디설파이드, 티오술포네이트, 알데하이드, 니트릴, α-디케톤, α-케토아미드, α-케토에스테르, 디아미노케톤, 세미카르바존(semicarbazone), 및 디히드라지드(dihydrazide)로 이루어진 군에서 선택된 화합물이다.

한 실시형태에서, 생체안에서 항바이러스 활성을 끌어내는 방법을 제공하며, 상기 방법은 하기로 이루어진다:

항바이러스 활성에 유효량을 제공하는데 충분한 양으로 상기 실시형태 및 변형의 복합체를 포유류 숙주의 혈류에 투여하는 단계로;

상기 복합체는 비결합된 항바이러스성 화합물의 생존기간과 비교하여 증가된 시간동안 혈류에서 유지된다.

본 발명의 다른 실시형태에서, 숙주에 항바이러스 활성을 끌어내는 방법을 제공하며, 상기 방법은 하기로 이루어진다:

a) 화합물 AV-L1 또는 AV-L2를 제조하는 단계로, 상기 AV는 60kD 이하의 질량을 갖는 펩티드 항바이러스성 화합물이고, L1 또는 L2는 AV에 공유결합하는 연결기이며;

b) 단백질에 공유결합하도록 화합물 AV-L1 또는 AV-L2에 충분한 시간동안 생체밖에서 분리된 단백질과 화합물 AV-L1 또는 AV-L2를 처리하여 상기 실시형태 및 변형의 단백질 복합체를 형성하는 단계; 및

c) 상기 처리된 단백질 복합체를 숙주에 투여하는 단계.

상기 실시형태의 한 변형에서, 단백질은 알부민이다. 상기의 다른 변형에서, 알부민은 HSA 또는 재조합 HSA이다.

한 변형에 의해, 알부민은 혈액으로부터 얻어지고, 화합물 AV-L1 또는 AV-L2과 알부민을 처리하기에 앞서 혈액으로부터 정제하고 분리한다. 상기 방법의 다른 변형에서, 알부민은 건조물 기준으로 적어도 10%의 순도 수준으로 정제된다. 다른 변형에서, 알부민은 95% 이상의 순도 수준으로 정제된다.

다른 실시형태에서, 본 발명은 숙주에서 항바이러스 활성을 끌어내는 방법을 제공하며, 상기 방법은 하기로 이루어진다:

a) 화합물 AV-L1 또는 AV-L2를 제조하는 단계로, 상기 AV는 60kD 이하의 질량을 갖는 항바이러스성 화합물 펩티드 이고, L1 또는 L2는 AV에 공유결합하는 연결기이며;

b) 하나 이상의 분리된 단백질에 공유결합하도록 화합물 AV-L1 또는 AV-L2에 충분한 시간동안 생체밖에서 분리된 하나 이상의 단백질 Pr과 화합물 AV-L1 또는 AV-L2를 처리하여 상기 실시형태 및 변형의 하나 이상의 변형된 단백질 복합체를 형성하는 단계; 및

c) 상기 변형된 단백질 또는 단백질류를 숙주에 투여하는 단계.

실시형태의 한 변형에서, 단백질은 알부민이다. 다른 변형에서 알부민은 혈액으로부터 얻어지고, 화합물 AV-L1 또는 AV-L2과 처리하기에 앞서 혈액으로부터 정제하고 분리한다. 다른 변형에서 알부민은 HSA 또는 재조합 HSA이다.

한 실시형태에서, 본 발명은 상기 실시형태 및 변형의 복합체 또는 생리학적 수용가능한 염, 및 약제학적으로 수용가능한 담체, 첨가제(excipient), 또는 희석제의 치료적 유효량을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

한 실시형태에서, 본 발명은 HIV 바이러스의 활성을 억제하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 실시형태 및 변형의 복합체, 또는 약제학적으로 수용가능한 염의 유효량의 처리를 필요한 것으로 인지되는 숙주에 투여하는 단계를 포함한다.

한 변형에서, 본 발명은 바이러스성 감염을 앓고 있는 대상을 처리하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 실시형태 및 변형의 조성물의 유효량을 대상에 투여하는 단계를 포함한다. 상기 변형에 의해, 상기 대상은 HIV 감염을 앓고 있다.

다른 실시형태에서, 본 발명은 바이러스성 감염에 노출되는 것으로 의심되어지는 환자에 예방방법을 제공하며, 상기 방법은 대상에 상기 변형의 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.

처리방법

본 발명은 항-바이러스성 제제를 나타내는 특성의 장점이 있다. 본 발명의 화합물에 의해 억제될 수 있는 바이러스는 여기에 기재된 바이러스의 모든 변종에 한정적이지 않지만, 예를들어 US 6,013,263 및 US 6,017,536에서 표 Ⅴ-Ⅶ 및 Ⅸ-ⅩⅣ를 포함한다. 상기 바이러스는 예를들어, HIV-1, HIV-2, 및 인간 T-림프구(lymphocyte) 바이러스(HTLV-I 및 HTLV-Ⅱ)를 포함하는 인간 레트로바이러스(retrovirus), 및 우 백혈병 바이러스(bovine leukosis virus), 고양이 육종바이러스(Feline sarcoma virus), 고양이 백혈병 바이러스(Feline leukemia virus), 원숭이 면역 결핍 바이러스(simian immunodeficiency virus (SIV)), 원숭이의 육종 바이러스(simian sarcoma virus), 원숭이 백혈병 바이러스, 및 양 진행성 폐렴(sheep progress pneumonia)을 포함하는 비-인간 레트로바이러스를 포함한다. 또한, 비-레트로바이러스성 바이러스는 예를들어, 인간 호흡계 발진(Respiratory Syncytial) 바이러스(RSV), 개 홍역 바이러스(canine distemper virus), 뉴캣슬바이러스(Newcastle disease virus), 인간 파라인플루엔자 바이러스(Parainfluenza Virus)(HPIV), 인플루엔자 바이러스(Influenza virus), 홍역 바이러스(Measles Virus,MeV), 엡스타인-바 바이러스(Epstein-Barr Virus), B형 간염 바이러스 (Hepatitis B virus, HBV), 및 원숭이 마손-프힐자 바이러스(Mason-pfizer virus)로 본 발명의 화합물에 의해 억제될 수 있다. 또한, 비-외피형 바이러스(non-enveloped virus)는 특별히 한정되지 않지만, 폴리오바이러스(polio virus)와 같은 피코나바이러스(picornaviruse), A형 간염 바이러스, 엔터바이러스(enteroviruse), 에코바이러스(echovirus), 수족구병 바이러스(Coxsackie Virus), 파필로마 바이러스(papilloma virus)와 같은 파포바바이러스(papovavirus), 아데노바이러스(adenovirus), 및 레오바이러스(reovirus)를 포함하는 것으로 억제될 수 있다.

본 발명의 화합물은 하기에 기재된 방법 및 당업계에 공지된 방법에 의해 환자에게 투여될 수 있다. 화합물 유도체의 치료적 유효 복용량은 당업계의 당업자에 의해 알려진 과정을 통하여 결정될 수 있다.

또한, 화합물은 비감염된 개체에 미리 예방적으로 투여될 수 있다. 이는 개체가 바이러스 유전의 높은 위험이 있는 감염된 개체와 접촉하였을 경우가 발생하는 것과 같이 바이러스에 노출되었을 경우에 유리할 수 있다. 이는 HIV 바이러스와 같이 바이러스 치료가 알려져 있는 않은 경우에 특이 유리할 수 있다. 예로, 본 발명의 화합물의 예방적 투여는 건강한 노동자가 HIV-감염된 개별로부터 혈액에 노출된 상황이거나, 개체가 HIV 바이러스에 잠재적으로 노출되는 높은 위험 활성에 종사할 상황에서 유리할 수 있다.

본 발명의 화합물의 바람직한 투여방법은 정맥내 투여를 통한 것이며, 이는 화합물이 혈류에서 순환하여 원하는 표적에 도착하도록 한다. 그러나, 본 발명의 방법은 환자에 몸에서 화합물의 순환을 허용하는 어떤 투여방법도 포함한다.

본 발명의 화합물 및 약제학적 조성물은 단독 또는 기타 항-바이러스성 화합물과 조합하여 사용될 수 있다. 예를들어, 본 발명의 화합물 및 약제학적 조성물은 약물 '칵테일', 또는 바이러스 반응을 강력하게 억제할 수 있고, AIDS의 공격을 방어하고 지연시킬 수 있는 3종 이상의 항레트로바이러스성(antiretroviral) 제제를 조합하여 사용할 수 있다.

전체적으로 기재된 본 발명은 특별히 한정되지 않은 예를 참조하여 더 인식되고 이해될 수 있다.

본 발명에 의한 화합물은 선택적으로 하기의 일반적인 반응 개요에 따라 합성될 수 있다:

일반식 Ⅰ의 복합체의 제조에 관한 상기 개요에서 알 수 있는 바와 같이, 항바이러스성이 먼저 연결기 L1에 부착하여 항바이러스성-연결기 AV-L1을 형성하고, 이어 단백질 Pr과 반응하여 일반식 Ⅰ의 복합체를 형성한다. 그러나, 먼저 단백질 Pr에 연결기 L1이 부착하여 연결기-단백질 화합물, L1-Pr이 형성되고, 다음 항바이러스성 제제와 연결되어 일반식 Ⅰ의 복합체가 형성될 가능성이 있다. 유사하게, 본 발명은 상기에 기재된 것과 같은 반대 서열을 화합물 Ⅱ의 복합체의 제조에 적용할 수 있다.

실시예 1. HIV 융합 억제제 펩티드의 설계 및 제조.

추정 HIV 융합 억제제 펩티드의 서열은 gp41 트리머릭 나선형 융해성(trimeric helical fusogenic) 복합체의 결정 구조를 사용하여 설계되었다(Jiang et al,2002참조). 펩티드 서열은 융해성 복합체의 N-말단 3중 나선형 단편 중심에 의해 형성된 홈(groove)에 적합할 수 있게 나선형 단편을 형성하도록 설계되었다. 설계된 나선형 펩티드의 내부 결합 및 표면에 노출된 외부의 평가는 모델 펩티드에서 아미노산의 서열 및 조성을 결정하는데 사용되었다. 복합체 형성 후 측쇄에 노출된 아미노산은 모델 펩티드의 용해도 및 기타 물리적-화학적 특성을 향상하도록 변경된다. N-말단 3중 나선형 중심에 결합하는 아미노산은 결합력(binding affinity) 및 항바이러스 활성의 결정적이다.

표 1 및 2에 기재된 펩티드의 대부분은 표면 잔기에서 변화를 반영하며, HIV HXB2 변종에 대하여 동일하게 강력한 항바이러스성 화합물임이 예측되었다. 하기 표 1에 기재된 모든 펩티드는 N-말단 및 C-말단 아미드에서 아세틸기를 갖고 있다.

펩티드는 Tentagel-S-RAM 수지(Rapp polymer), 0.25mmol/g의 표준 고상(solid phase) 기술을 사용하여 제조되었다. 모두는 〉90%의 HPLC 순도 및 정확한 질량내역을 갖고 있었다.

수지위 합성 프로토콜:

1. 해제(deprotection)-25% 피페리딘(piperidine)/DMF(5+25분)

2. 세척-DMF(6×1분)

3. 커플링-음성 카이저 테스트(Kaiser test)에 3 eq. 흐목-아미노산(fmoc amino acid) + 3 eq. TCTU + 6 eq. DIEA; Asn³¹ 및 Lys³³에 3h.

4. 세척-DMF(5×1분)

5. 말단 아세틸화(terminal acetylation)-무수초산(Acetic anhydride)/DIEA

수지로부터 제거:

TFA - m-크레졸 - 티오아니졸(thioanisol) - 트리이소프로필실란(triisopropylsilane)(85:5:5:5) 2h, 진공에서 RT 증발, 에테르로 침전(정제되지 않은 수율 ~80%)

정제

Biosphere C-18 컬럼을 사용한 HPLC

이동상 - A : 물/0.1% TFA, B :아세토니트릴 / 0.1% TFA

구배(gradient) - 10~20%B/10분, 20~40%B/90분

검출 - UV 220㎚

95%이상의 분획을 수집하고 동결건조하였다.

분석:

HPLC: 컬럼-Luna C18

이동상 - A : 물/0.04% H₃PO₄, B : 아세토니트릴/0.04% H₃PO₄

구배 - 5~65%B / 30분

검출 - UV 220㎚

MS [MH]⁺

TCTU = O-(1H-6-클로로벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트(O-(1H-6-Chlorobenzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium tetrafluoroborate)

DIEA = 디이소프로필에틸아민(diisopropylethylamine)

실시예 2. 펩티드의 항바이러스 활성의 평가

펩티드의 항바이러스성 효과를 소수 변경으로 전기에 기재된 것(참조예 1~3)으로 MT4 세포로 세포독성(cytotoxicity) 분석을 사용하여 HIV-1 HXB2 또는 NL4-3에 대하여 분석하였다. MT-4 세포(1.5×10⁴/㎖)를 96웰 미세역가 플레이트(microtiter plates)에 시험 화합물의 다양한 농도 존재하에서 바이러스의 50% 조직배양감염량(Tissue culture infective dose 50; TCID50), 200에 노출하고 37℃에서 5일동안 배양하였다. HIV의 세포독성은 각 웰에 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸리움 브로마이드(MTT) 용액을 0.75 mg/ml의 최종농도가 되도록 부가하고, 37℃에서 1시간동안 배양함으로써 측정하였다. 배양 후, 세포를 이소프로판올/트리톤(Triton)-X 100/HCl(1000:50:25) 용액에 용해하였다. 흡광도(absorbance)를 540 nm 및 640nm에서 마이크로플레이드 리더(Microplate Reader)(Spectramax, Molecular Devices)로 측정하였다. MT-4 세포는 AIDS Research and Reference Reagent Program으로부터 얻었다(ARRRP, Division of AIDS, NIAID, NIH:MT-4 from Dr. D. Richaman). 세포를 ml당 10% 태아혈청(Fetal Bovine Serum), 페니실린 50U, 및 스트렙토마이신(Streptomycin) 50㎍으로 채워진 RPMI 1640 성장배지에서 증식하였다. 분석된 모든 화합물의 IC₅₀ 값은 하기 표 1에 기재하였다.

[참조예]

[표 1]

비변형된 펩티드(peptides)의 항바이러스 활성

*- 2 또는 3회 실험의 평균.

Ac = 아세틸(acetyl)

실시예 3a. 화학적으로-반응하는 변형된 HIV 융합 억제제 펩티드의 제조.

펩티드 2~7의 유사체는 다양한 서열로 약동학적(pharmacokinetic) 활성을 향상하도록 제조과정의 일반적 적용능력을 설명한다. SPI-30014 및 SPI-70038(하기 표 2 참조)는 상기에 기재된 고상 합성기술을 사용하여 제조하였다. N-말단 아세틸화 대신, 흐목-8-아미노-3,6-디옥사옥탄산, TCTU, DIEA로 3시간동안 반응하고, 상기와 같이 세척한 다음, 3-말레이미도프로피온산(maleimidopropionic acid), TCTU, DIEA와 3시간동안 반응하였다. 제거 및 정제는 상기와 같이 진행하였다.

SPI-30014 MH⁺ 4545

SPI-70038 MH⁺ 4673

실시예 3b. 급랭(quenched)되고 변형된 HIV 융합 억제제 펩티드의 제조

비반응된 대조군을 생성하기 위해, 펩티드를 함유하는 말레이미드(maleimide)를 과량의 β-머캅토에탄올(mercaproethanol)을 사용하여 급랭하였다. 결과 급랭된 펩티드(SPI-30014Q 및 SPI-70038Q)는 HSA와 공유적 컨쥬게이트를 형성할 수 없다. 급랭된 유도체를 하기와 같이 제조하였다:

SPI-30014 1mg을 22.0 ul DMSO에 용해하였다. 상기 용액 5 ul을 53mM 수용성 β-머캅토에탄올 45 ul에 부가(최종 농도 47.7mM)하고, 37℃에서 5시간동안 배양하였다. 펩티드:β-머캅토에탄올의 몰비율은 1:51이고, 펩티드의 최종농도는 0.9mM이었다.

유사하게, SPI-70038 1mg을 21.4 ul DMSO에 용해하였다. 상기 용액 5 ul을 53mM 수용성 β-머캅토에탄올 45 ul에 부가(최종 농도 47.7mM)하고, 37℃에서 5시간동안 배양하였다. 펩티드:β-머캅토에탄올의 몰비율은 1:58이고, 펩티드의 최종농도는 0.8mM이었다.

실시예 4. 지속성 HIV 융합 억제제 HSA -펩티드 컨쥬게이트의 제조

SPI-30014 1mg을 22.0 ul DMSO에 용해하였다. 상기 용액 10 ul을 25% HSA(Seracare) 90 ul에 부가하고, 37℃에서 5시간동안 배양하였다. 최종 반응혼합물에서 펩티드:HSA의 몰비율은 1:4이고, 펩티드의 최종농도는 0.9mM이었다.

유사하게, SPI-70038 1mg을 21.4 ul DMSO에 용해하였다. 상기 용액 10 ul을 25% HSA(Seracare) 90 ul에 부가하고, 37℃에서 5시간동안 배양하였다. 최종 반응혼합물에서 펩티드:HSA의 몰비율은 1:4이고, 펩티드의 최종농도는 0.8mM이었다.

결과 HSA-펩티드 컨쥬게이트, SPI-30014HSA 및 SPI-70038HSA을 반응성 중간체(SPI-30014 및 SPI-70038) 및 급랭하고 비컨쥬게이트된 펩티드(SPI-30014Q 및 SPI-70038Q)와 비교하여 항바이러스성 및 약동학적 외형을 평가하였다.

실시예 5. 변형되고 컨쥬게이트된 HIV 융합 억제제 펩티드의 항바이러스 활성의 평가

펩티드; 급랭되고 비컨쥬게이트된 펩티드; 및 펩티드-HSA 컨쥬게이트를 함유하는 말레이미드의 항바이러스성 효과를 상기 실시예 2에 기재된 것과 같이 MT4 세포로 세포독성 분석을 사용하여 HXB2 HIV-1에 대하여 분석하였다. 상기 화합물들의 IC₅₀ 값을 표 2에 기재하였다. 반응적이고 급랭된 펩티드의 활성은 유사하다. 각 HSA-펩티드 컨쥬게이트의 항바이러스 활성은 약 3~4 홀드(fold)로 감소된다.

[표 2]

변형된 펩티드 및 컨쥬게이트의 항바이러스 활성

실시예 6. 지속성 HIV 융합 억제제의 약동학적 성질의 평가

펩티드-HSA 컨쥬게이트(SPI-30014HSA 및 SPI-70038HSA) 및 급랭되고 비컨쥬게이트된 펩티드(SPI-30014Q 및 SPI-70038Q)를 무게 400~500g 정도의 Sprague-Dawley 쥐에게 정맥내적으로 투여하였다. 시험 화합물을 DMSO(펩티드) 또는 인산완충액(PBS; phosphate buffered saline)(HSA-펩티드 컨쥬게이트)에 나타내고, 0.5~0.6 umol/kg의 단독복용량으로 정맥내적으로 투여하였으며, 주입속도는 2.0ml/분; 전체 주입시간 약 20초였다. 혈청시료는 복용 후 5분, 30분, 1, 2, 8, 24, 48 및 72시간에 수집하였다. 쥐 혈장(plasma)에서 항바이러스성 펩티드 및 컨쥬게이트의 농도는 세포계 항바이러스성 생물검정(bioassay)을 사용하여 분석하였다. 혈청시료의 각 시간 포인트에서 초기에 성장배지로 1:10으로 희석하고, 이어 상기에 기재된 MT4 세포 및 HIV-1 HXB2 바이러스를 사용하는 표준 항바이러스 분석에서 분석되는 여러 시리얼(serial) 희석액에 사용하였다. IC₅₀ 값을 결정하고, HIV-1 HXB2의 세포독성 활성의 50%를 억제하기 위해 필요한 시료 혈청의 퍼센트로 표현하였다. 참조시료는 배지에 의해 10-홀드 희석된 동물에 대응하는 프리도오스(predose) 혈청을 함유하도록 제조하였다. 상기 희석된 시료에 수용액 DMSO에서 펩티드 또는 펩티드-HSA 컨쥬게이트의 농도를 부가하였다. 다음, 상기 시료를 시험 시간과 동일한 방법으로 항바이러스성 분석으로 분석하였다. 상기 IC₅₀ 참조값을 결정하여 펩티드 또는 펩티드-HSA 컨쥬게이트의 농도로서 표현하였다. 각 시험시간 혈청시료에서 펩티드 또는 펩티드-HSA 컨쥬게이트의 농도를 대응하는 동물의 혈청에서 참조시료로 얻어진 IC₅₀ 값을 기준으로 산출하였다:

농도(nM) = [IC₅₀ ref(nM)/IC₅₀ (시료혈청의 %)] ×100%

쥐 혈청에서 시험 화합물의 농도 대 시간 분석을 도 2 및 3에 나타내였다(2~3 쥐들의 평균). 비컨쥬게이트된(대조군) 펩티드는 펩티드의 80%를 8시간까지 잃는 것으로 빠른 제거율을 나타낸다. 반대로, 2개의 HSA-펩티드 컨쥬게이트의 말단 반감기는 12~14시간 범위였다. HSA-펩티드 컨쥬게이트의 반감기는 설치류동물(rodent)에서 HSA 단독의 기록된 반감기와 유사하다(15.8시간)(1). 1.M. Gaizutis,Pesce A.J.,Pollak V.E.1975. Renal clearance of human and rat albumins in the rat. Proc. Soc.Exp.Biol.Med.148(4):947-952.

상기 결과는 항바이러스성 화합물의 반감기, 분포 및 배출(elimination)은 클로킹(cloaking) 단백질에 의해 결정되었으며, 항바이러스 활성은 워헤드(Warhead) 펩티드에 의해 결정되었다. 동물에서 혈장 활성의 연장은 컨쥬게이트의 강력한 생물학적 활성의 유지력을 고려하여 예상되지 않는다. 후자의 발견은 분자의 워헤드 부분은 명백하게 노출되는 것을 제안하고, 몸에서 물질대사, 저하, 배출 및 제거과정에 받게되는 것이 예상되었지만, 우리의 결과는 상기 과정으로부터 보호되는 것이 제안된다.

실시예 7: 본 발명의 복합체를 형성하는 컨쥬게이션 반응:

DMSO에 항바이러스 펩티드를 유래하는 말레이미도프로피오닐아미노에톡시에톡시아세틸의 10mM 용액을 HSA의 25% 물 용액에 부가하였다. 반응혼합물에서 최종 펩티드 농도는 1mM이었고, 반응혼합물에서 펩티드:HSA의 몰비율은 1:4이었다. 용액을 37℃에서 5시간동안 배양하였다. 배양이 완성된 다음, 컨쥬게이트를 4℃에 보관하였다.

실시예 8: 본 발명의 복합체를 형성하는 컨쥬게이션 반응:

DMSO에 항바이러스 펩티드를 유래하는 트랜스-4-(말레이미딜메틸)시클로헥산-1-카르보닐의 10mM 용액을 HSA의 25% 물 용액에 부가하였다. 반응혼합물에서 최종 펩티드 농도는 1mM이었고, 반응혼합물에서 펩티드:HSA의 몰비율은 1:4이었다. 용액을 37℃에서 5시간동안 배양하였다. 배양이 완성된 다음, 컨쥬게이트를 4℃에 보관하였다.

실시예 9: 본 발명의 복합체를 형성하는 컨쥬게이션 반응:

DMSO에 항바이러스 펩티드를 유래하는 N-(3-{2-[2-(3-아미노-프로폭시)-에톡시]-에톡시]-에톡시}-프로필)-2-브로모아세트아미드의 10mM 용액을 HSA의 25% 물 용액에 부가하였다. 반응혼합물에서 최종 펩티드 농도는 1mM이었고, 반응혼합물에서 펩티드:HSA의 몰비율은 1:4이었다. 용액을 37℃에서 5시간동안 배양하였다. 배양이 완성된 다음, 컨쥬게이트를 4℃에 보관하였다.

실시예 10: 본 발명의 복합체를 형성하는 컨쥬게이션 반응:

DMSO에 항바이러스 펩티드를 유래하는 말레이미도프로피오닐아미노에톡시에톡시아세틸의 10mM 용액을 HSA의 25% 물 용액에 부가하였다. 반응혼합물에서 최종 펩티드 농도는 1mM이었고, 반응혼합물에서 펩티드:HSA의 몰비율은 1:1이었다. 용액을 37℃에서 5시간동안 배양하였다. 배양이 완성된 다음, 컨쥬게이트를 4℃에 보관하였다.

실시예 11: 본 발명의 복합체를 형성하는 컨쥬게이션 반응:

DMSO에 항바이러스 펩티드를 유래하는 말레이미도프로피오닐아미노에톡시에톡시아세틸의 10mM 용액을 HSA의 25% 물 용액에 부가하였다. 반응혼합물에서 최종 펩티드 농도는 1mM이었고, 반응혼합물에서 펩티드:HSA의 몰비율은 10:1이었다. 용액을 37℃에서 5시간동안 배양하였다. 배양이 완성된 다음, 컨쥬게이트를 4℃에 보관하였다.

분석예 :

실시예 12: HIV 융합의 펩티딜 억제제의 결합분석

HIV 융합의 컨쥬게이트된 억제제의 결합력은 N-말단에 GCN4 단편 및 C-말단에 HIV-1 GP41의 첫 7가(heptad)의 반복단위로부터 17 잔기의 단편을 함유하는 키메릭 펩티드(IQN17)을 사용하여 측정하였다(Cell 99, 103-115). GP41의 이차 7가의 반복단위로부터 28-잔기 펩티드를 카르복실 말단에서 형광분자 Alexa-430으로 라벨화한다(Molecular Probes). 결합은 IQN17로 라벨화된 C28의 적정으로 측정하였다. 결합된 C28 및 비결합된 C28의 농도는 모세관 구역 전기 영동법(CZE: Capillary Zone Electrophoresis)으로 측정하였다. 3 μM C28 및 8μm IQN17에서, 약 80% C28은 IQN17에 결합된다. 비라벨화된 펩티드에서 IQN17와 분리된 50% C28에 대응하는 양을 IC50 값으로 주어진다.

레닌( renin ) 억제제 화합물 및 복합체

본 발명은 단백질과 반응하여 공유적으로 연결된 복합체를 형성하는데 사용될 수 있는 생물학적으로 활성 화합물에 관한 것이며, 결과 복합체는 생체 안에서 레닌 억제 활성을 나타내는 것으로 나타낸다. 더 상세하게, 복합체는 레닌 억제제 및 연결기로 이루어진 복합체로부터 분리되고, 혈액성분은 알부민과 같은 단백질이다. 또한, 본 발명은 본 발명의 신규한 분리된 복합체를 포유류 숙주의 혈류에 투여하는 단계를 포함하여 생체 안에서 레닌 활성을 억제하는 방법을 제공한다.

한 실시형태에서, 약제학적 조성물은 활성 성분으로서 본 발명에 의한 정제된 레닌 억제제 복합체를 포함하는 것을 제공한다. 본 발명에 의한 약제학적 조성물은 선택적으로 본 발명의 하나 이상의 레닌 억제제 복합체 0.001~100%를 포함할 수 있다. 상기 약제학적 조성물은 혈류에 생리학적으로 활성제제를 투여하는 당업계의 공지된 다양한 방법에 의해 투여되거나 함께 투여될 수 있다. 본 발명의 바람직한 측면에서, 조성물은 주사로 투여될 수 있다. 다른 바람직한 측면에서, 조성물은 주입으로 투여될 수 있다.

다른 실시형태에서, 방법 및 조성물은 생리학적으로 활성제제, 특히 레닌 억제제와 같은 치료성 제제를 함유하는 분리된 컨쥬게이트된 복합체의 전달에 제공되며, 상기 제제로 이루어진 복합체는 비-컨쥬게이트된 제제와 비교하여 혈류에 증가된 반감기를 갖는다.

본 발명은 연결기에 공유적으로 부착되거나 연결된 생리학적으로 활성 화합물을 사용하는 것을 포함하며, 상기 연결기는 단백질에 존재하는 기능성으로 공유결합을 형성할 수 있는 적어도 하나의 화학적으로 반응성 부분을 포함하는 것이다. 숙주의 혈액속, 특히 숙주의 혈류로 복합체의 투여 전에 분리된 복합체를 제조함으로써, 생물학적으로 활성 복합체가 비-컨쥬게이트된 생물학적으로 활성제제와 비교하여 증가된 시간동안 혈류에서 유효적 치료효과를 유지하는 것을 나타낸다.

한 실시형태에서, 본 발명은 일반식 Ⅰ 또는 일반식 Ⅱ의 분리된 복합체를 제공한다.

상기에서:

m은 1~5의 정수이고;

n은 1~100의 정수이고;

o는 1~5의 정수이고;

p는 1~100의 정수이고;

Ih는 레닌 억제제이고;

L1 및 L2는 Pr에 Ih을 공유적으로 연결하는 다가 연결기이거나, L1 및 L2는 존재하지 않으며;

Pr은 단백질이고;

상기 복합체는 생체 안에서 레닌 억제제 활성을 갖는다.

다른 실시형태에서, 레닌 억제제 Ih는 펩티드이다. 다른 실시형태에서, 펩티드는 약 60kDA 이하의 질량을 갖는다. 다른 실시형태에서, 펩티드는 약 10kDA 이하의 질량을 갖는다. 다른 실시형태에서, 펩티드는 약 1000DA 이하의 질량을 갖는다.

하나의 특이 실시형태에서, 펩티드는 펩티드 유사체이다. 다른 실시형태에서, 펩티드는 C-말단에서 전이상태(transition state) 유사체이다.

본 실시예에서, C-말단에서 유사 전이 상태는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

다른 실시예에서, Ih는 Iva-Val-Val-Sta-Ala-Sta, Boc-Phe-His-Sta-Ile-AMP, Boc-Phe-His-Sta-Ala-Sta-OMe, Boc-Phe-His-Sta-Leu-NHCH2Ph, Boc-Phe-His-ACHPA-Leu-AMB, Boc-Phe-His-Sta-Leu-AMB, Boc-Pro-Phe-His-Sta-Ile-AMP, Iva-Phe-Nle-Sta-Ala-Sta, Iva-His-Pro-Phe-His-Sta-Ala-Sta, Iva-His-Pro-Phe-His-Sta-Leu-Phe-NH2, Ac-His-Pro-Phe-Val-Sta-Leu-Phe-NH2, Ac-His-Pro-Phe-His-ACHPA-Leu-Phe-NH2, Ac-Trp-Pro-Phe-His-Sta-Ile-NH2, Ac-(HCO-Trp)-Pro-Phe-His-Sta-Ile-NH2, Pro-His-Pro-Phe-His-Sta-Ile-His-D-Lys, Pro-His-Pro-Phe-His-Sta-Ile-Phe-NH2, Z-Arg-Arg-Pro-Phe-His-Sta-Ile-His-Lys(Boc)-OMe, Pro-His-Pro-Phe-His-Phe-Phe-Val-Tyr-Lys, His-Pro-Phe-His-Leu-D-Leu-Val-Tyr-OH, Pro-His-Pro-Phe-His-Leu(CH2NH)Val-Ile-His-Lys(H-142), Boc-Phe-His-Cha-(CH2NH)Val-NH2(S)-Me(Bu), Pro-His-Pro-Phe-His-Leu-Phe-Val-Tyr-OH, Boc-His-Pro-Phe-His-Leu(CH(OH)CH2)Val-Ile-His-OH(H-261),0 및 PEC-Phe-His-ACHPA-ILeNHC(CH2OH)2CH3로 이루어진 그룹으로부터 선택된 레닌 억제제 펩티드이다.

다른 실시예에서, Ih는 Iva-Val-Val-Sta-Ala-Sta, Boc-Phe-His-Sta-Ile-AMP, Boc-Phe-His-Sta-Ala-Sta-OMe, Boc-Phe-His-Sta-Leu-NHCH2Ph, Boc-Phe-His-ACHPA-Leu-AMB, Boc-Phe-His-Sta-Leu-AMB, Boc-Pro-Phe-His-Sta-Ile-AMP, Iva-Phe-Nle-Sta-Ala-Sta, Iva-His-Pro-Phe-His-Sta-Ala-Sta, Iva-His-Pro-Phe-His-Sta-Leu-Phe-NH2, Ac-His-Pro-Phe-Val-Sta-Leu-Phe-NH2, Ac-His-Pro-Phe-His-ACHPA-Leu-Phe-NH2, Ac-Trp-Pro-Phe-His-Sta-Ile-NH2, Ac-(HCO-Trp)-Pro-Phe-His-Sta-Ile-NH2, Pro-His-Pro-Phe-His-Sta-Ile-His-D-Lys, Pro-His-Pro-Phe-His-Sta-Ile-Phe-NH2, Z-Arg-Arg-Pro-Phe-His-Sta-Ile-His-Lys(Boc)-OMe, Pro-His-Pro-Phe-His-Phe-Phe-Val-Tyr-Lys, His-Pro-Phe-His-Leu-D-Leu-Val-Tyr-OH, Pro-His-Pro-Phe-His-Leu(CH2NH)Val-Ile-His-Lys(H-142), Boc-Phe-His-Cha-(CH2NH)Val-NH2(S)-Me(Bu), Pro-His-Pro-Phe-His-Leu-Phe-Val-Tyr-OH, Boc-His-Pro-Phe-His-Leu(CH(OH)CH2)Val-Ile-His-OH(H-261), 및 PEC-Phe-His-ACHPA-ILeNHC(CH2OH)2CH3로 이루어진 그룹으로부터 선택된 레닌 억제제 펩티드이며, Pr은 알부민이다.

특정 실시예에서 링커 L1 또는 L2는 Ih를 Pr에 공유적으로 연결하는 적어도 두개의 작용기를 포함한다. 또 다른 실시예에서 링커 L1 또는 L2는 사람의 혈청에서 연장된 기간동안 가수분해적으로 안정적이다. 특히 링커는 실험대상에 투여될 때, 활성 콘쥬게이트는 연장된 기간동안 혈압을 지속적으로 감소시키는 충분히 가수분해적으로 안정적이다. 특정 실시예들에서 링커는 콘쥬게이트가 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일 이상 또는 14일 이상동안 혈압을 지속적으로 감소시키는 충분히 가수분해적으로 안정적이다. 또 다른 실시예에서 링커 L1또는 L2는 8시간내지 30일 동안의 반감기로 사람의 혈청에서 안정적이다.

본 발명의 다른 실시예에서, 링커 L1 또는 L2는 아실옥시메틸케톤, 아지리딘, 디아조메틸케톤, 에폭사이드, 요오드-, 브로모- 또는 클로로아세트아미드, α-할로에스테르, α-할로케톤, 설포니움, 클로로에틸설파이드, O-알킬이소우레아, 알킬할라이드, 비닐설폰, 아크릴아미드, 아크릴레이트, 비닐피리딘, 오가노메탈릭 화합물, 아릴디설파이드, 티오설포네이트, 알데히드, 니트릴, α-디케톤, α-케토아미드, α-케토에스테르, 디아미노케톤, 세미카바존 및 디하이드라지드로 이루어진 그룹으로부터 선택된 화합물의 유도체이다.

본 발명의 한 실시예에서, 링커 L1 또는 L2는 아지도벤조일 하이드라지드, N-[4-(p-아지도살릭시아미노)부틸]-3'-[2'-피리딜디티오)프로디온아미드), 비스-설포석시니미딜수베라드, 디메틸 아디피미데이트, 디석시니미딜 타트라트, N-y-말레이미도부티릴옥시석시니미드 에스테르, N-히드록시 설포석시니미딜-4-아지도베조아트, N-석시니미딜[4-아지도페닐]-1,3'-디티오프로피오네이트, N-석시니미딜[4-요오드아세틸]아미노벤조아트, 글루탈알데히드, 석시니미딜4-[N-말레이미도메틸]시클로헥산-1-카볼실레이트, N-히드록시설포석시니미드, 마레이미드-벤조일-석시니미드, r-말레이미도-부티리로시 석시니미드 에스테르, 말레이미도프로피오닉산, N-히드록시석시니미드, 이소시아나드, 티오에스테르, 티오노카복시릭산 에스테르, 이미노 에스테르, 카보디이미드, 안히드리드 및 카보네이트 에스테르로 이루어진 그룹으로부터 선택된 화합물의 유도체이다.

본 발명의 한 특정 실시예에서 단백질은 IgM 및 IgG, 혈청 알부민, 트랜스페린, p90및p38과 같은 적혈구 및 면역글로불린으로 이루어진 그룹으로부터 선택되었다. 또 다른 특정 변형으로 단백질은 알부민이다. 다른 변형에서 알부민은 적어도 마른 성분에서 10% 순도를 나타내는 HSA 또는 재조합형 HSA이다. 또 다른 변형에서 링키지(Linkage)는 사람 알부민의 시스-34이며 또 다른 변형에서 링키지는 사람 알부민의 리신이다.

한 실시예에서 본 발명은 식Ⅰ또는 식Ⅱ의 복합물을 제공하며, 여기서 m은 1, n은 1 또는 2, 및 단백질은 HSA 또는 재조합형 HSA이다. 상기 실시예의 다른 변형은, n은 1, 단백질은 HSA 또는 재조합형 HSA이며 복합물은 적어도 30%의 순도로 정제된다. 또 다른 변수에서 m은 1, n은 1 또는 2, 및 단백질은 HSA 또는 재조합형 HSA이다.

한 변형에서 복합물은 Pr와 (Ih)m-L1의 비 또는 L2-(Pr)o와 Ih의 화학양론비로 화합하여 준비한다. 다른 변형에서 복합물은 Pr 대 (Ih)m-L1의 혼합물을 적어도 1.3:1의 비율로 화합하여 준비한다.

또 다른 변형에서, 본 발명은 식Ⅰ또는 식Ⅱ의 복합물을 제공하며, 여기서 L1 및 L2는 부재이며 복합물은 Ih의 활성 중간화합물을 형성하여 준비되고 Pr과 활성 Ih 중간화합물의 축합에 의해 일어난다. 다른 변형에서 Ih의 활성 중간화합물은 안히드리드 또는 N,N'-카르보닐디이다졸 시약의 혼합으로부터 준비한다. 선택적으로 상기 변형에서 복합물은 적어도 30%의 순도로 정제될 수 있다.

본 발명의 실시예에서 레닌 억제제는 100DA정도 미만의 질량을 가지는 펩티도미메틱이다.

다른 실시예에서 식Ⅰ또는 식Ⅱ의 복합물과 생리학적 숙주를 포함하는 조성이 제공된다. 또 다른 실시예에서 상기 조성은 비경구적 투여용으로 조제되었다. 또 다른 실시예에서 상기 조성은 용액, 이용에 앞서 용매와 혼합하기 위한 마른 제품, 현탁액, 에멀젼, 농축액으로 구성된 그룹으로부터 선택된다.

또 다른 실시예에서 본 발명은 다음 방법을 포함하는 생체내에서 활성인 레닌 억제제용 방법을 제공한다:

식Ⅰ또는 식Ⅱ의 분리된 콘쥬게이트 복합물을 포유류의 혈류에 투여한다. 여기서 복합물은 레닌 억제제가 안정된 공유결합을 형성하기 위해 단백질과 반응하는 적어도 하나의 활성 작용기를 갖는 링커에 부착되어 형성된다; 및

분리된 콘쥬게이트 복합물은 효과적인 치료 효과를 유지하기 위한 양으로 비-콘쥬게이트 레닌 억제제와 비교한 연장 기간동안 혈류에 투여된다.

한 변형에서, 본 발명은 상기 임의의 복합물에 따른 복합물임을 특징으로하는 복합물의 방법을 제공한다. 상기 방법의 또 다른 변형에서 단백질은 HSA 또는 재조합형 HSA이다.

상기 방법의 변형에서, 링커는 반응 작용기가 아실옥시메틸케톤, 아지리딘, 디아조메틸케톤, 에폭사이드, 요오드-, 브로모- 또는 클로로아세트아미드, α-할로에스테르, α-할로케톤, 설포니움, 클로로에틸설파이드, O-알킬이소우레아, 알킬할라이드, 비닐설폰, 아크릴아미드, 아크릴레이트, 비닐피리딘, 오가노메탈릭 화합물, 아릴디설파이드, 티오설포네이트, 알데히드, 니트릴, α-디케톤, α-케토아미드, α-케토에스테르, 디아미노케톤, 세미카바존, 및 디하이드라지드로 이루어진 그룹으로부터 선택된 화합물인 것을 포함한다.

한 변형에서 본 발명은 생체내 활성 레닌을 억제하기 위한 방법을 제공한다:

식Ⅰ또는 식Ⅱ의 복합물을 포유류의 혈류에 레닌 억제를 위해 효과적인 양을 제공하기에 충분한 양으로 투여한다;

상기 복합물은 언바운드 레닌 억제제의 수명에 비교하여 연장된 기간에 대해 혈류에서 유지된다.

또 다른 실시예에서, 다음 방법을 포함하는 수용세포에서 활성인 레닌 억제제용 방법을 제공한다:

a) Ih-L1 또는 Ih-L2의 화합물을 준비하며 Ih는 60kD 미만의 질량을 갖는 레닌 억제제 펩티드이며 L1 또는 L2는 공유적으로 Ih에 결합된 링커이다;

b) Ih-L1 또는 Ih-L2의 화합물을 생체 외부에서 분리된 단백질과 조작되며 Ih-L1 또는 Ih-L2의 화합물 단백질을 형성하기 위한 공유결합에 충분한 시간동안이다; 및

c) 조작된 단백질 화합물을 수용세포에 투여한다.

상기 방법의 변형에서 단백질은 알부민이다. 다른 변형에서 알부민은 HSA 또는 재조합형 HSA이다. 상기 방법의 또 다른 변형에서 알부민은 Ih-L1 또는 Ih-L2의 화합물과 조작하기에 앞서 혈액으로부터 얻고 정제하고 혈액으로부터 분리한다. 또 다른 변형에서 알부민은 적어도 마른 성분에서 10%의 순도로 정제된다. 또 다른 변형에서 알부민은 95% 이상의 순도로 정제된다.

다른 실시예에서 본 발명은 하기 방법을 포함하는 수용세포에서 활성인 레닌 억제용 방법을 제공한다:

a) Ih-L1 또는 Ih-L2의 화합물을 준비하고, Ih는 60kD 미만의 질량을 갖는 레닌 억제제 펩티드이며 L1 또는 L2는 공유적으로 Ih에 결합된 링커이다;

b) Ih-L1 또는 Ih-L2의 화합물을 생체 외부에서 분리된 하나 이상의 단백질과 조작하며 이는 Ih-L1 또는 Ih-L2의 하나 이상의 변형된 단백질 화합물을 형성하기 위한 공유결합에 충분한 시간동안이다; 및

c) 변형된 단백질 또는 단백질을 수용세포에 투여한다.

상기 방법의 변형에서 단백질은 알부민이다. 다른 변형에서 알부민은 Ih-L1 또는 Ih-L2의 화합물과 조작하기에 앞서 혈액으로부터 얻고 정제하여 혈액으로부터 분리한다. 또 다른 변형에서 알부민은 HSA 또는 재조합형 HSA이다.

한 실시예에서 약학 조성을 제공하며 상기 복합물 또는 그에 따른 생리학적 수용염 및 약학적 숙주, 결합제 또는 희석제의 치료적으로 효과적인 양을 포함한다. 다른 변형에서 상기 조성의 치료적으로 효과적인 양을 투여를 포함하는 실험대상의 혈압을 감소하는 방법을 제공한다. 또 다른 변형에서 본 발명은 고혈압을 겪는 환자에 대해 상기 방법을 제공한다. 또 다른 변형에서 경증에서 중증의 고혈압을 겪는 환자에 대해 상기 방법을 제공한다.

본 발명의 또 다른 실시예에서 유사 전이상태는 하기 화학식의 혼합물이다:

여기서 :

R은 (C₁ _-10)알킬, (C₆ _-12)시클로알킬, 카르보닐(C_1-10)알킬, 설포닐(C_1-3)알킬, 설피닐(C_1-3)알킬, (C₂ _-12)알케닐, (C₂ _-12)알키닐, 아릴, 아릴(C_1-10)알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴(C_1-10)알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되며 각각은 치환되거나 비치환된다; 및

R'는 (C₁ _-10)알킬, (C₆ _-12)시클로알킬, 카르보닐(C_1-10)알킬, (C₁ _-10)알콕시카보닐, (C₁ _-10)알킬아미노카르보닐, 설포닐(C_1-3)알킬, 설피닐(C_1-3)알킬, (C₂ _-12)알케닐, (C_2-12)알키닐, 아릴, 아릴(C_1-10)알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴(C_1-10)알킬, 알킬설포닐(C_1-10)알킬, 아릴설포닐(C_1-10)알킬, 헤테로아릴설포닐(C_1-10)알킬, (C₁ _-10)알킬포스포네이트 및 (C₁ _-10)알킬 포스포닐로 이루어진 그룹으로부터 선택되며 각각은 치환되거나 비치환된다.

또 다른 실시예에서 유사 전이상태는 하기 화학식의 혼합물이다:

여기서 :

R”는 (C₁ _-4)알킬, (C₆ _-12)시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 비시클로알킬, 카보닐(C_1-10)알킬, 티오카보닐(C_1-3)알킬, 설포닐(C_1-3)알킬, 설피닐(C_1-3)알킬, 아미노, 이미노(C_1-3)알킬, (C₁ _-10)알콕시, 아릴옥시, 헤테로아릴옥시, (C₂ _-12)알케닐, (C₂ _-12)알키닐, 아릴, 아릴(C_1-10)알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴(C_1-10)알킬, (C₉ _-12)비시클로아릴, 헤테로(C_8-12)비시클로아릴, 아미노설포닐, 알킬설포닐, 알킬설포닐(C_1-10)알킬, 아릴설포닐, 아릴설포닐(C_1-10)알킬, 헤테로아릴설포닐, 헤테로아릴설포닐(C_1-10)알킬, 포스포네이트, (C₁ _-10)알킬포스포닐, 설포닐 그룹 및 설피닐 그룹으로 이루어진 그룹으로부터 선택되며 각각은 치환되거나 비치환된다.

여기서 :

R”는 (C₁ _-4)알킬, (C₆ _-12)시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 비시클로알킬, 카보닐(C_1-10)알킬, 티오카보닐(C_1-3)알킬, 설포닐(C_1-3)알킬, 설피닐(C_1-3)알킬, 아미노, 이미노(C_1-3)알킬, (C₁ _-10)알콕시, 아릴옥시, 헤테로아릴옥시, (C₂ _-12)알케닐, (C₂ _-12)알키닐, 아릴, 아릴(C_1-10)알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴(C_1-10)알킬, (C₉ _-12)비시클로아릴, 헤테로(C_8-12)비시클로아릴로 이루어진 그룹으로부터 선택되며 각각은 치환되거나 비치환된다.

본 발명은 비-콘쥬게이트 레닌 억제제에 비해 연장된 수명을 가진 레닌 억제제로서 사용될 수 있는 화합물 및 조성에 관한 것이다.

본 발명은 공유적으로 부착되거나 링킹 그룹에 연결된 생물학적으로 활성 화합물의 이용, 단백질이나 혈액 단백질에 존재하는 기능들과 공유결합을 형성할 수 있는 적어도 하나의 화학적으로 활성인 일부분을 포함하는 링킹 그룹을 포함한다. 한 실시예에서 단백질은 알부민이다. 분리 혼합물이 수용세포 혈액으로 복합물이 투여되기 전에 생체 밖에서 분리된 복합물을 준비함으로써, 특히 수용세포의 혈류에서 생물학적으로 활성 복합물은 비-콘쥬게이트 생물학적 활성제에 비해 연장된 기간동안 효과적인 치료 효과를 유지한다.

유용한 투약에서 연장된 기간은 적어도 2일, 바람직하게는 5일, 더욱 바람직하게는 10일, 더더욱 바람직하게는 15일이 될 것이다.

단백질은 적혈구, 면역글로불린, IgM 및 IgG, 혈청 알부민, 트랜스페린, p90및p38을 포함하는 콘쥬게이트된 것일 수 있다. 바람직한 실시예에서 단백질은 알부민이다. 다른 실시예에서 단백질은 재조합형 알부민이다.

생물학적 활성제 또는 치료제의 다수가 단백질과 콘쥬게이트로서 사용될 수 있다. 바람직한 실시예에서 생물학적 활정제 또는 치료제 Ih는 레닌 억제제이다. Ih로 표현할 수 있는 레닌 억제제는, L1또는 L2로 표현된 링킹 그룹과 반응할 수 있는 활성 작용기를 포함하며 억제제-링킹 그룹 화합물, Ih-L1 또는 Ih-L2 를 형성하기 위함이며 하나 이상의 단백질 Pr과 반응할 수 있다. 한 실시예에서 단백질은 상이한 작용기 수를 가지며 하기 화학식을 형성하기 위해 억제제-링킹 그룹 화합물과 반응할 수 있다.

[식Ⅰ]

또 다른 실시예에서 단백질은 상이한 작용기 수를 가지며 하기 화학식을 형성하기 위해 억제제-링킹 그룹 화합물과 반응할 수 있다.

[식Ⅱ]

여기서 Ih는 생물학적 활성제이며, L1 및 L2는 Pr에 대한 링크 Ih이며 Pr은 혈액 조성, m 및 o는 1-5 사이의 정수, n 및 p는 1-100 사이의 정수이다.

작용기의 수는 알부민과 같은 단백질에 이용할 수 있다. 비-제한적 작용기는 아미노기, 카르복실기 및 티오기를 포함한다. 링킹 그룹 및 링커에 대한 작용기의 종류에 따라 단백질에서 임의의 상기 작용기가 링킹 그룹과 공유결합을 형성하기 위해 사용될 수 있는 반면, 특정 작용기는 그밖의 다른 것들에 대해 바람직하다. 예를 들어, 아민기의 반응은 아미드기를 가지는 콘쥬게이트를 형성할 수 있으며, 카르복실기는 아미드 또는 에스테르기를 가지는 콘쥬게이트를 형성할 수 있으며, 티오기는 티오에테르 또는 티오에스테르를 형성할 수 있다.

생물학적 활성제 Ih :

생물학적 활성제 Ih는 효소억제제와 같은 임의의 화합물일 수 있으며 포유류 수용세포에 투여될 때 바람직한 생물학적 반응을 끌어내고 최소한의 면역 반응을 유발할 것이다. 바람직하게는 생물학적 활성제는 레닌 억제제이다. 더욱 바람직하게는 펩티드 또는 펩티도미메틱 레닌 억제제이다. 본 발명에서 다양한 레닌 억제제를 사용할 수 있다. 펩티드 또는 펩티도미메틱 레닌 억제제의 비-배타적 예는 표에 나타내었다. 바람직하게 레닌 억제제는 60kDA 미만의 질량을 가지는 펩티도미메틱이며 더욱 바람직하게는 10kDA 미만이며 가장 바람직하게는 1000DA 미만이다.

표: 펩티드 또는 펩티도미메틱 레닌 억제제

링커 L1 및 L2 :

상이한 링커나 링킹 그룹 L1 및 L2 의 다양성은 레닌억제제와 혈액조성에 연관되어 사용될 수 있다. 링킹 그룹들은 2가 또는 다원자가일 수 있다. 예를 들어 식Ⅰ의 복합물에서, L1은 Pr에 붙여진 곳에서 n-가, Ih에 붙여진 곳에서 m-가이며 m 및 n은 상기 정의된 것처럼 정수이다. 유사하게 식Ⅱ의 복합물에서, L2는 Pr에 붙여진 곳에서 o-가, Ih에 붙여진 곳에서 p-가이며 o 및 p는 상기 정의된 것과 같다. 링킹 그룹에 존재할 수 있는 작용기의 비배타적 예는 히드록실기를 가지는 혼합물들을 포함하며, N-히드록시석시니미드, N-히드록시설포석시니미드, 및 마레이미드-벤조일-석시니미드, r-마레이미도-부디리록시 석시니미드 에스테르, 마레이미도프로피오닉산, N-히드록시설포석시니미드, 이소시아나트,티오에스테르, 티오노카르복실 산 에스테르, 이미노에스테르, 카르보디이미드, 안히드리드, 또는 에스테르와 같은 다른 화합물들이 있다.

또한 특정 링킹 그룹은 카르복시레이트, 할라이드산, 아지도, 디아조, 카르보디이미드, 안히드리드, 히드라진, 알데히드, 티올 또는 아미드, 에스테르, 이미네, 티오에스테르, 디설피드, 대체된 아미드 등을 형성하기 위해 사용될 수 있는 아미노기와 같은 작용기를 가진다. 다른 작용기들의 구체적인 예로는 아실옥시메틸케톤, 아지리딘, 디아조케틸케톤, 에폭시드, 요오드-, 브로모-, 또는 클로로아세트아미드, α-할로에스테르, α-할로케톤, 설포니움, 클로로에틸설피드, O-알킬이소우레아, 알킬할라이드, 비닐설폰, 아크릴아미드, 비닐피리딘, 올가노메탈릭 화합물, 아릴디설파이드, 티오설포네이트, 알데히드, 니트릴, α-디케톤, α-케토아미드, α-케토에스테르, 디아미노케톤, 세미카바존, 및 디하드라지드를 포함한다.

링커로 선택될 수 있는 혼합물의 형태는 반응의 종류 , 상대적 반응성, 선택성, 가역성, 레닌억제제, 링커와 알부민 또는 혈액 조성에 작용기들 사이에 요구되는 안정성에 의존한다. 예를 들어 복합물을 형성하는 특정 반응들은 알키레이션 반응, 마이클 형 반응, 첨가-제거 반응, 설퍼, 카르보닐, 시아노기 첨가 또는 금속 결합으로부터 생긴다.

전형적으로 상기 반응들로부터 형성되는 공유결합은 레닌억제제의 활성기동안 안정적이다. 한 실시예에서 상기 복합물들에서 형성된 공유결합은 생물학적으로 활성기가 활성기에 놓이지 않는다면 안정적이다.

링커들은 두작용기 또는 다작용기를 가지는 혼합물을 포함하며 알부민과 같은 단백질이 복합 레닌억제제에 연결하거나 단일 레닌 억제제에 복합 알부민을 연결하는데 사용한다. 바람직한 실시예에서 링커는 다작용기, HSA가 하나 또는 그 이상의 레닌 억제제에 연결되는 것을 포함한다. 한 실시예에서 링킹 화합물은 다단계에서 단백질에 레닌 억제제를 연결할 수 있는 임의의 혼합물을 포함한다. 또 다른 실시예에서 링킹 혼합물은 처음 레닌억제제에 연결되며 단백질과 반응할 수 있는 억제제-링커 중간화합물을 형성하기 위함이다. 다른 실시예에서, 링킹 혼합물은 처음 단백질과 반응하며 레닌 억제제와 반응할 수 있는 단백질-링커 중간화합물을 형성하기 위함이다. 상기 각각의 치환에서 선택적으로, 식Ⅰ또는 식Ⅱ의 복합물을 형성하기 위한 반응이 일어나기 전에 연결된 혼합물들은 더 정제되거나 분리될 수 있다.

비배타적 다작용기 혼합물들의 예는 적어도 하나의 작용기를 가지는 혼합물들을 포함하며, 아지도벤조일 하이드라지드, N-[4-(p-아지도살릭시아미노)부틸]-3'-[2'-피리딜디티오)프로디온아미드), 비스-설포석시니미딜수베라드, 디메틸 아디피미데이트, 디석시니미딜 타트라트, N-y-말레이미도부티릴옥시석시니미드 에스테르, N-히드록시 설포석시니미딜-4-아지도베조아트, N-석시니미딜[4-아지도페닐]-1,3'-디티오프로피오네이트, N-석시니미딜[4-요오드아세틸]아미노벤조아트, 글루탈알데히드, 석시니미딜4-[N-말레이미도메틸]시클로헥산-1-카르복실레이트로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

표준 화학치환이 일어나기 쉬우며 그러한 용도에 편리한 임의의 링커 또는 링킹 그룹 또는 생리학적으로 수용할만한 바람직한 투여량이며 혈류에서 바람직한 기간동안 안정적인 혼합물을 형성하는 링커들이 사용될 수 있다. 링킹 그룹은 아리파틱, 알리디크릭, 아로매틱, 헤테로시크릭 또는 그들의 혼합들이 될 수 있다. 링킹 그룹들로 사용될 수 있는 그룹들의 예는 알키렌, 아릴렌, 아랄키렌, 시클로알킬렌, 폴리에스테르 등을 포함한다. 또한 특정 실시예에서 다작용기 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 및 그들의 유도체들이 링커들로 사용될 수 있다.

링킹 그룹들은 링킹 체인에서 적어도 하나의 원자를 가질 수 있으며 바람직하게는 1내지 200개, 더욱 바람직하게는 2에서 50개이다. 체인내 원자들은 선형이거나 하나 이상의 고리들의 부분, 체인은 탄소나 O, N, P 및 S로 이루어진 그룹으로부터 선택된 헤테로원자를 포함할 수 있으며 각각의 치환기 또는 비치환기일 수 있다. 고리는 아리파틱, 헤테로일기, 아로마틱, 헤테로아로마틱 또는 그들의 혼합이 될 수 있으며 각각은 치환되거나 치환되지 않을 수 있다. 실시예에서, 아미노산 또는 페티드 또는 상기의 혼합으로 만든 아미노산은 링킹 그룹으로 사용될 수 있다.

한 실시예에서 L1은 부재이며, Ih는 직접 Pr에 붙는다. 다른 실시예에서 L2는 부재이며, Ih는 직접 Pr에 붙는다.

식Ⅰ의 혼합물의 실시예에서 L1은 하나의 Pr에 하나 이상의 Ih를 연결할 수 있는 링킹 그룹이며 예를 들어 m은 2 이상이다. 한 실시예에서 m은 1,2 또는 3이며 n은 1-30이다. 바람식한 실시예에서 Pr은 알부민이며 n은 1이다. 또 다른 실시예에서 Pr은 알부민이며 Ih는 레닌억제제이며 n은 2-25이다.

식Ⅱ의 혼합물의 실시예에서 L2는 하나의 Ih에 하나 이상의 Pr을 연결할 수 있는 링킹 그룹이며 예를 들어 m은 2 이상이다. 한 실시예에서 Pr은 알부민이며 Ih는 레닌억제제이며 o는 1,2 또는 3이며 p는 1-5이다.

또 다른 실시예에서 링킹 그룹은 억제제가 레닌 억제제와 같은 경우에 부재일 수 있으며 단백질과 직접 반응할 수 있으며 선택적으로 촉매나 결합제를 사용할 수 있다. 이는 단백질에 직접 붙은 레닌 억제제만을 포함한다. 직접 결합 반응의 예는 혼합 한히드리드의 중간물의 결합반응에 의해 일어나는 카르복실산의 혼합 안히드리드 활성 결합 반응이다.

단백질 성분 Pr :

다양한 혈액 성분은 본 발명의 분리 복합물을 준비하기 위해 사용될 수 있다. 자연히 일어나는 혈액 조성은 혈액 단백질을 포함하며, 적혈구, 면역글로불린, IgM 및 IgG, 혈청 알부민, 트랜스페린, p90및p38을 포함하는 것일 수 있다. 바람직한 실시예에서 혈액 성분 또는 혈액 단백질은 알부민이다. 더욱 바람직하게는 알부민은 사람 혈청알부민(HSA) 단백질이다.

본 발명에 사용된 알부민은 재조합 알부민일 수 있다. 예를 들어 재조합 알부민은 미생물을 뉴클레오티드 코딩 시퀀스와 사람 혈청 알부민의 아미노산 시퀀스 인코딩으로 변환함으로써 생산할 수 있다.

일반적으로 수율과 최종 순도의 넓은 범위를 제공하는 혈액이나 혈액 플라즈마 혼합물의 분리에 이용할 수 있는 다양한 광범위한 방법이 존재한다. 알부민은 혈액 플라즈마에 존재하는 주단백질이며 혈액으로부터 추출될 수 있으며 예를 들어 JP 03/258 728, EP 428 758, EP452 753 및 6,638,740 과 그의 참고문헌에 기재되어 있다. 비배타적 다양한 혼합물의 분리 방법의 예는 선택적 가역적 침전, 이온 교환 크로마토그래피, 단백질 친화 크로마토그래피, 히드로포빅 크로마토그래피, 티오피릭 크로마토그래피(J. Porath et al;FEBS Letters, vol85, p.306, 1985; K.L.Knudsen et al, Analytical Biochemistry, vol201, p.170, 1992), 및 다양한 수지 매트릭스들(WO 96/00735; WO 96/09116)에 기초한다. 특정 혈액 성분은 상업적으로 이용가능하다.

연결된 혼합물 Ih - L1 및 Ih - L2 의 제조:

한 실시예에서 본 발명의 연결된 화합물 Ih-L1 및 Ih-L2 은 준비되어 더 이상의 정화나 분리 없이 알부민과 복합하여 사용될 수 있다. 연결된 화합물의 순도는 링커의 성질, Ih의 성질, 반응의 종류 및 반응 조건에 의존한다. 다른 실시예에서 비정화된 연결된 화합물은 적어도 90%의 순도로 획득하여 준비될 수 있으며 바람직하게는 95%, 더욱 바람직하게는 97%, 가장 바람직하게는 98%이상이다.

다른 실시예에서 본 발명은 분리된 연결 화합물 Ih-L1 또는 Ih-L2 의 제조 방법에 관한 것이다. 바람직한 실시예에서 분리된 연결 화합물 Ih-L1 및 Ih-L2 은 링커에 붙는 레닌 억제제이다. 한 실시예에서 분리된 연결 화합물은 Pr과 복합되기 전에 정화될 수 있다. 다른 실시예에서 연결된 혼합물 Ih-L1 또는 Ih-L2 는 분리되고 적어도 95%의 순도로 정화되며 바람직하게는 97%, 더욱 바람직하게는 98%, 가장 바람직하게는 99% 이상이다.

연결된 화합물은 화학제조분야에 알려진 일반적인 방법을 사용할 수 있다. 화합물은 당업계에 알려진 일반적인 방법을 사용하여 정제할 수 있으며 생체내 숙주에 적합한 정제된 제품을 제공하기 위해 컬럼 크로마토그래피 또는 HPLC와 같은 것들이 있다. 연결된 화합물은 더 나아가 단백질과 복합될 수 있으며 식Ⅰ 및 식Ⅱ의 복합물을 형성하기 위한 알부민과 같은 것들이 있다.

연결된 화합물 Pr - L1 및 Pr - L2 의 제조:

본 발명의 실시예에서 Pr-L1 및 Pr-L2 를 준비하기 위해 Pr로 나타낸 화합물은 알부민이 될 수 있으며 더 이상의 정제나 분리 없이 통상의 재료로부터 얻은 것들을 사용할 수 있다. 특정 실시예에서 Pr은 HSA이다. 다른 실시예에서 알부민은 당업계에 알려진 일반적인 방법을 이용하여 정제할 수 있다.

한 실시예에서 연결된 혼합물 Pr-L1 및 Pr-L2 는 Pr과 유도되거나 활성화될 수 있는 링커 L1 또는 L2를 용액에서 조작하고 반응이 완결될 때까지 혼합물의 반응을 모니터링함으로써 준비할 수 있다. 바람직한 실시예에서 Pr은 단백질이다. 다른 바람직한 실시예에서 단백질은 HSA 또는 재조합 HSA이다.

다른 바람직한 실시예에서 얻은 연결된 화합물 Pr-L1 또는 Pr-L2 는 충분히 순순하다; 즉 연결된 화합물은 적어도 10%의 순도로 얻으며 바람직하게는 30%, 더욱 바람직하게는 50% 이상이다. Pr이 HSA 또는 재조합 HSA 인 경우, 연결된 화합물과 같이 존재할 수 있는 화합물은 미반응한 HSA 및 HSA 시작 물질에 존재하는 다양한 생물학적 조성을 포함할 수 있다. 바람직하게는 HSA 또는 재조합 HSA는 적어도 마른 성분에서 10%의 순도이다.

HSA 또는 연결된 화합물과 존재하는 생물학적 물질에 관련된 HSA의 초과는 Ih와 다음 복합 과정을 간섭하기 않는다. 또한 관련된 생물학적 물질과 복합물들은 생체내 용도로 약학적으로 안전하다.

그러나 특정 실시예에서 연결된 화합물 Pr-L1 또는 Pr-L2 의 순도는 적어도 건조물질성분에서 10%이며 양의 간섭없이 다른 원하지않는 혈액 조성과 반응하는 복합물로부터 얻은 물질의 형성없이 Ih와 선택적 반응을 할 수 있기 위함이다. 그러나 바람직한 Pr의 순도는 HSA나 재조합 HSA와 같이 링커에 관련된 작용기뿐만 아니라 Ih의 작용기의 성질에 의존할 것이다. 전형적으로 HSA나 재조합 HSA의 더 높은 순도는 링커에 작용기가 더욱 활성이면 필요하며 비바람직한 물질을 형성할 수 있다.

알부민은 플라즈마나 혈액 알부민으로부터 얻을 수 있으며 원하는 순도로 정제하고 링커에 연결한다. 혈액이나 혈액 플라즈마로부터의 알부민의 순도는 당업계 알려진 방법으로 얻을 수 있다. 정제된 혈액 알부민을 이용하여 분리된 복합물은 상대적으로 기능적 단백질의 동개체를 포함한다.

식Ⅰ 또는 식Ⅱ의 복합물의 제조:

한 실시예에서 식Ⅰ 및 식Ⅱ의 복합물은 Ih-L1 또는 Ih-L2와 Pr의 복합, Pr-L1 또는 Pr-L2 와 Ih의 복합, Pr과 Ih의 복합으로 준비될 수 있다.

한 실시예에서 Ih-L1 또는 Ih-L2는 복합 반응이 끝나는 조건 하에서 결합된다. 특정 실시예에서 연결된 혼합물은 레닌억제제이며 링커에 붙어, HSA의 수용액에 첨가된다. 상기 액은 반응이 종결될 때까지 배양된다.

한 실시예에서 Ih-L1 또는 Ih-L2는 HSA의 단면에 선택적으로 일어나는 복합 반응을 확실히 하기 위해 HSA를 과량으로 결합한다. 예를 들어 Ih-L1의 형성은 식Ⅰ의 단순복합물의 귀속을 쉽게 해주며 예를 들어 n은 1이다. 다른 특정 실시예에서 Ih-L1 또는 Ih-L2의 복합 반응은 단일 시스테인에서 생긴다. 임의의 특정 이론없이 몇몇 반응들에 있어 콘쥬게이트 반응은 시스테인-SH기와 반응할 수 있으며 키네틱제품을 형성하기 위함이며 그 다음 리신과 같은 열역학적 제품을 형성하기 위한 아미노산 작용기에 재배열된다.

다른 실시예에서 콘쥬게이트 반응은 식Ⅰ의 복합물을 형성할 수 있으며 여기서 하나 이상의 Ih는 단일 HSA에 연결되며 즉, n은 1 이상이다. 선택적으로 m은 링커L1이 다기능 링커라면 1이상이다. 한 실시예에서 식Ⅰ의 복합물은 (Ih)m-L1에 대해 Pr의 과잉량으로 혼합하여 준비할 수 있다. 바람직하게 Pr대 (Ih)m-L1의 비율은 50대 100이다. 다른 실시예에서 비율은 10대 30 정도이다. 또 다른 실시예에서 비율은 2대 5정도이다.

한 실시예에서 Pr은 적어도 1.1:1 정도의 비율로 (Ih)m-L1에 첨가되며 더욱 바람직하게는 1.2:1, 가장 바람직하게는 1.4:1이다. Pr이 알부민인 경우에 바람직한 비율은 알부민당 0.7 프리티올이라는 가정에 기초한 것이다. 바람직하게 결과 복합물은 1:1로 형성되며 Pr 조성이 70% 프리티올 정도를 가지기 때문이다. Pr의 과잉은 HSA 또는 재조합 HSA과 같이 약학적으로 안전하며 더 이상의 정제는 필요하지 않다. Pr이 혼합물에서 과잉이라면, 선택적으로 콘쥬게이트 복합물은 적어도 10%의 순도로 정제될 수 있다. 특정 실시예에서 콘쥬케이트 복합물은 적어도 20% 나 30%로 정제될 수 있다.

또 다른 실시예에서 식Ⅰ의 복합물은 Pr에 대해 (Ih)m-L1 과잉량으로 혼합함으로써 준비될 수 있다. 바람직하게 (Ih)m-L1대 Pr의 비율은 50대 100이다. 다른 특정실시예에서 비율은 10대 30이다. 또 다른 특정 실시예에서 비율은 2대 5이다. 혼합물에서 (Ih)m-L1 과잉량인 경우, 선택적으로 콘쥬게이트 복합물은 적어도 10%의 순도로 정제될 수 있다. 특정 실시예에서 콘쥬케이트 복합물은 적어도 20% 나 30%로 정제될 수 있다.

다른 실시예에서 식Ⅰ 및 식Ⅱ의 복합물은 Pr과 (Ih)m-L1의 양론비 또는 L2-(Pr)o와 Ih 의 양론비, 즉 1:1로 준비될 수 있다. 선택적으로 본 제조로부터의 생성물은 적어도 10%dml 순도를 가지도록 정제될 수 있다. 특정 실시예에서 콘쥬게이트 복합물은 적어도 20%나 30%의 순도로 정제될 수 있다. 또 다른 특정 실시예에서 1:1의 콘쥬게이트 복합물은 90%이상의 순도로 정제될 수 있다.

다른 실시예에서 알부민에 존재하는 콘쥬게이트 시스테인은 반응에 앞서 유리크리스틴으로 감소한다.

선택적으로 콘쥬게이트 반응으로부터 형성된 복합물은 투여에 앞서 좀 더 정제될 수 있다.

한 실시예에서 콘쥬게이트 반응으로부터 얻은 식Ⅰ 또는 식Ⅱ의 복합물은 더 이상의 처리나 정제 없이 투여될 수 있는데 생체 내에서 HSA 또는 복합물과 같이 존재하는 생물학적 물질에 관련된 HSA의 과잉은 약학적으로 안전하기 때문이다.

각각의 상기 실시예에서 Ih는 펩티드 또는 펩티도미메틱 레닌 억제제이며 Pr은 HSA 또는 재조합 HSA이다.

한 실시예에서 분리된 복합물은 링커와 함께 보호되거나 보호되지 않는 레닌 억제제를 포함하며 알부민은 선택적으로 좀더 정제되며 이어 수용세포로 돌아온다.

본 발명의 상기 방법에서 형성된 복합물은 동물이나 사람 수용세포에 테스트할 수 있으며 안전성은 연장된 기간에 걸쳐 검증된다. 전형적으로 복합물의 측정된 반감기는 5내지 7일이며 더욱 전형적으로는 적어도 7내지 10일이며 바람직하게는 15내지 20일 이상이다. 일반적으로 영구성은 종에 따라 다르다. 예를 들어 사람 알부민으로 반감기는 17내지 19일이다. 레닌 억제제의 성질, 링킹 그룹과 알부민의 순도에 따라 효과적인 치료 농도는 적어도 1개월 이상이다.

반감기는 전체 혈액의 시리얼 측정, 식Ⅰ 또는 식Ⅱ의 복합물의 플라즈마 또는 혈청 수준, Ih-L 혼합물, L-Pr 혼합물, 하기 복합물을 치환하는 Ih 혼합물, 동위원소 혼합물(즉, 131I, 125I, Tc, Cr, 3H 등) 또는 플로로크롬과 혈관내 화합물이나 치환된 복합물의 알려진 양의 주사에 의해 결정될 수 있다. 적혈구(반감기 60일), 혈소판(반감기 4-7일), 혈맥 내피세포, 알부민과 같은 긴 수명의 혈청 단백질, 스테로이드바인딩단백질, 페린, α2-매크로글로불린, 트랜스페린, 티로신 바인딩 단백질, 면역글로불린, 특히 IgG등이 있다. 또한 반감기에 대해, 주성분은 바람직하게 셀 카운트나 농도가 충분히 약학적으로 본 발명의 화합물의 양에 유용하게 하도록 하는지에 있다. 세포의 긴 수명 혈액 조성에 있어서, 세포는 적어도 2,000/㎕ 이며 혈청 단백질의 농도는 적어도 1㎍/㎖ 이고 보통 적어도 0.01 mg/㎖, 더욱 바람직하게는 1 mg/㎖이다.

그러나 복합물의 성질이 레닌 억제제와 같이 복합물로부터 격리되고 숙주로 들어가면 원하는 생물학적으로 활성제 Ih 과 같으면, 본 복합물의 효과적인 치료 농도를 위한 원하는 반감기와/또는 생물학적 활성제는 측정된 반감기로부터 다양하다. 생물학적 활성제의 해방 속도는 생물학적 제의 결합가는 작용기에 따라 링킹 그룹의 성질, 단백질 종류와 순도, 투여의 조성, 투약방식 등에 따라 달려있다. 따라서 다양한 링킹 그룹과 생물학적 용제는 사용될 수 있으며 혈액의 환경, 혈액의 조성 , 특정 효소, 간에서의 활동성, 다른 용제가 링킹 그룹의 벽개를 야기하는 다른 용제들일 수 있다.

분리된 본 발명의 복합물은 생물학적 활성조성을 제공하고 이는 비콘쥬게이트 혼합물에 비교하여 약동력학적, 용해도, 생체 이용률, 분배도 또는/및 면역발생력을 증가시킨다.

놀랍게도 식Ⅰ 또는 식Ⅱ의 복합물, 본 발명의 방법에 따라 준비될 때 자체적인 Ih 조성보다 상당히 긴 시간동안 효과적인 치료 농도를 제공한다. 또한 본 발명의 복합물은 증가된 용해도, 분배도, 약동력학적 및 Ih 조성자체가 투여되었을 때와 비교하여 면역발생력을 감소시키는 결과를 제공한다.

현 발명자들은 체외에서 준비된 콘쥬게이트 대상에 정제된 조성(특히 HSA, 링커 및 레닌 억제제)의 투여가 콘쥬게이트의 놀라운 효율적인 티슈 생체 분배를 보인다. 또한 본 발명자들은 생체내에서 준비된 콘쥬게이트가 급격한 화합물의 손실을 나타내는 것과 비교하여 충분히 모든 콘쥬게이트가 몇시간 내지 몇일 동안 순환에 남아있다는 것을 발견하였다. 상기 효율은 환자가 활성물질의 주입해야 하는 시간을 감소하고, 또한 단일 투여에서 보이는 레닌 억제제를 감소한다.

본 발명에서, 약물 효과적인 조성의 양은 대상에 투여될 때 적절한 물질적 효과가 환자의 질병이나 상태, 신드롬에 효과적인지 정도에 따른 것으로 이해된다. 특히 항고혈압제의 효과적인 양이나 조성은 고혈압 객체에 투여되어 최고혈압이나 최저혈압을 감소하는 양에 따른 것으로 이해된다.

분리된 식Ⅰ 및 식Ⅱ의 복합물의 투여 :

한 실시예에서 본 발명의 분리된 복합물의 투여는 볼루스를 이용함으로써 얻을 수 있으나 미터 흐름과 같은 것을 이용한 수혈에 의해 천천히 시간에 걸쳐 도입될 수 있다.

본 발명의 복합물은 생리학적 수용매체에서 투여될 수 있으며 예를 들어 디이오나이즈드 워터, 포스파트 버퍼드 사린, 살린, 마니톨, 글루코스 수용액, 알코올, 베지터블 오일과 같은 것들이 있다. 단일 주입은 원한다면 비록 하나 이상의 주입이 사용될지라도 도입될 수 있다. 복합물은 주사기, 투관침, 카테터등을 포함하는 임의의 편리한 수단에 의해 투여될 수 있다. 특정 투여 방식은 단일 볼루스나 연속 투여등이든지 간에 투여되는 양에 따라 다양하다. 투여는 혈관 내일 수 있으며 도입부가 본 발명의 임계점이 아닌 곳에서 바람직하게는 예를 들어 혈관내 말초 또는 중앙 혈관처럼 빠른 혈류인 곳이다. 다른 방법은 투여가 느린 릴리즈 테크닉이나 보호 매트릭스와 같이 합쳐진 곳에서 이용을 찾을 수 있다.

놀랍게도 본 발명의 방법에 따라 준비된 분리된 복합물의 투여는 예를 들어 분리된 알부민과 같은 혈액 단백질로부터 레닌억제제 콘쥬게이트 복합물로 생성되며 이는 분리된 혈액 단백질로부터 준비되지 않은 복합물과 비교했을 때 혈류에서 연장된 기간동안 효과적인 치료 효과를 유지한다.

한 실시예에서 본 발명은 약학적 수용염의 형태로 혼합물을 제공한다.

다른 실시예에서 본 발명은 입체이성체의 혼합으로 존재하는 화합물을 제공한다. 또 다른 실시예에서 본 발명은 단일 입체이성체와 같은 화합물을 제공한다.

또 다른 실시예에서 본 발명은 활성 조성과 같은 화합물을 포함하는 약학적 조성을 제공한다. 또 다른 특정 변형에서 본 발명은 조성이 태블릿이나 디폿과 같은 투약용 고체인 경우 약학적 조성을 제공한다.

또 다른 변형에서, 본 발명은 Ⅳ에 도입된 조성이 액체상인 경우나 피하의 투약인 경우 약학 조성을 제공한다. 또 다른 특정 변형에서, 본 발명은 조성이 경구 투약에 적용된 액체상인 경우 약학 조성을 제공한다.

모든 실시예에서, 임의의 실시예나 변형, 각각의 설명된 화합물이나 여기서 언급된 실시예, 변형, 개개의 화합물들은 단일 입체이성체나 입체이성체의 혼합의 형태에서 모든 약학 수용염을 처리하기 위함이다. 유사하게, 한개 이상의 독립 혼합물이 임의의 실시예, 변형에 존재할 때 키랄중심이 가능한 이들의 언급은 처리하기 위함이다.

본 발명에 따른 화합물의 프로드러그 유도체는 생체내에서 다른 물질로 바뀌는 본 발명의 화합물의 대체물을 변경함으로써 준비할 수 있다. 많은 경우, 프로드러그 자신들은 또한 본 발명에 따른 화합물의 범위내로 떨어진다. 예를 들어 프로드러그는 카바미래이팅제(예를 들어, 1,1-아실로시알킬카르보노클로라데이트, 파라-니트로페닐 카르보네이트 등)또는 아시레이팅제와 함께 혼합물을 반응함으로써 준비된다. 프로드러그를 만드는 방법의 다른 예는 Saulnier et al.(1994), Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, Vol.4, p.1985에 명시되어 있다.

본 발명에 따른 화합물의 보호된 유도체는 제조될 수 있다. 보호기와 그들의 제거의 생성할 수 있는 기술의 예는 T.W. Greene, Protecting Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, John Wiley & Sons, Inc.1999에 명시되어 있다.

본 발명의 화합물은 편리하게 준비될 수 있으며 본 발명의 과정에 따라 하이드레이트와 같은 용매화합물로 형성할 수 있다. 본 발명의 하이드레이트화합물은 수용액/유기 용매 혼합으로부터 재결정하여 얻을 수 있으며 유기 용매는 디오산, 테트라히드로퓨란 또는 메탄올들을 이용한다.

"약학적 수용염"은 임의의 화합물이 본 발명에 따라 그에 따른 염의 형태로 사용되고 특히 염이 유리혼합물이나 다른 염의 혼합물에 비교하여 약동력학적 조성이 증가된 화합물에 참조한다. 약학적 수용염은 또한 적절한 약동력학적 조성을 참조로 형성할 수 있으며 미리 소유하지 않고 인체내 활성을 가지는 화합물의 약동력학에 긍정적인 영향을 미칠 수도 있다. 약동력학적 조성의 예로 화합물이 세포막을 투과하는 방식이나 직접적이고 긍정적으로 흡수, 분배, 생체이동률과 분비로 이동할 수 있다. 약학조성의 투여루트가 중요한 반면 다양한 해부학적, 생리학적, 병리학적 인자들은 생체이용률에 영향을 미칠 수 있고 화합물의 용해도는 특정염의 형태에 따른다. 당업계의 기술의 하나는 수용액이 가장 빠른 흡수를 체내에 제공할 것이라고 하며 고체 투약형태뿐만 아니라 현탁액이 덜 빠른 화합물의 흡수를 야기할 것이라고 한다.

레닌억제제의 이용을 위한 지시

본 발명의 식Ⅰ 및 식Ⅱ의 복합물은 레닌 억제제로 사용될 수 있다. 레닌은 혈압을 제어하는데 있어 중요한 역할을 하는 엔도펩티다아제이다. 레닌안지오텐션 계는 멀티규정된 프로데오리틱 캐스캐이드이며 레닌은 엔지오텐신 Ⅰ에 주기 위해 안지오텐시노겐 단백질 기질을 격리한다. 안지오텐신 컨버팅 효소(ACE)는 디캐펩티드 안지오텐신Ⅰ으로부터 종결 디펩티드의 제거하고 중요한 증합 활성도를 나타내는 안지오텐신Ⅱ 를 형성하기 위함이다. 레닌은 높은 기질 특이성인 아스파틸 프로테아제이며 혈압을 제어하는데 관련있는 레닌-안지오텐신계에서 첫 프로테오리틱 과정이다. 레닌억제제는 영장류[J.Hypertension, 1, 399(1983), J. Hypertension 1(suppl2), 189(1983)]및 사람[LancetⅡ, 1486(1983), Trans.Assoc.Am.Physicians, 96, 365(1983), J. Hypertension, 3, 653(1985)]의 저혈압을 보여주며 따라서 잠재적으로 고혈압 제어에 유용하다.

주사

본 발명은 본 발명의 레닌 억제제의 투여하도록 되어있는 조성에 관련된 것이다. 비경구투여나 피하에 하거나 근육내에 하거나 정맥내에 하는 주사에 의해 특징지어진다. 주사는 임의의 형태로 준비될 수 있으며 예를 들어 수용액이나 현탁액이 있으며 고체형은 주사에 앞서 액체내의 용액이나 현탁액에 적합하다.

본 발명에 따른 주사에 사용될 수 있는 첨가제는 물로만 한정되지 않고 살린, 데스트로스, 글리세롤, 에탄올 또는 DMSO를 포함한다. 주사 조성은 선택적으로 비 독성 보조물의 최소량을 포함하며 젖거나 에멀젼제, PH 버퍼링제, 안정제, 용해강화제, 그밖에 수디움아세테이트, 소르비탄 모노라우라트, 트리에타놀아민오리아트 및 시클로데스트린과 같은 다른 용제들이 있다. 느린-릴리즈나 안정된-릴리즈계의 피하주입은 일정한 투여정도가 유지되는 것(U.S. Pat. No. 3710795)을 예상할 수 있다. 활성 화합물의 퍼센트는 화합물의 활성과 물질의 요구 뿐만아니라 그에 따른 구체적 성질에 따라 높다.

제형의 비경구적 투여는 정맥내, 피하내, 근육내 투여를 포함한다. 비경구적 투여용 준비는 주입을 위해 준비된 살균액, 살균한 건조액을 포함하며, 하기 설명되는 사용되기 전에 용매와 합쳐지도록 분비된 감압하에 동결건조된 파우더와 같으며, 히포데르믹 티블렛, 무균 티블렛, 건조된 비용해성 무균제품, 무균 에멀젼등을 포함한다. 용액은 수용액 또는 비수용액일 수 있다.

정맥내에 투여될 때, 적절한 캐리어의 예는 생리학적 살린 또는 PBS에 한정되지 않고 글루코세, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌글리콜 과 이들의 혼합물과 같은 수용액과 농후제를 포함한다.

병리학적 수용체의 예는 선택적으로 비경구 투여에 사용될 수 있으나 수성용액, 비수성용액, 향균제, 등장액, 완충제, 산화방지제, 마취제, 부양액, 분산제, 유화제, 격리제 또는 킬레이트 시약 및 다른 병리학적 수용체에 한정되는 것은 아니다.

수성용액의 예는 선택적으로 소듐 클로라이드 주입, 링커 주사, 이소토닉 덱스트로스 주사, 스테릴 워터 주사, 텍스트로스 및 락타트 링거 주사등이 사용될 수 있다.

비수성용액의 예는 베지터블 오리진, 면실유, 옥수수유, 세사미 오일 및 땅콩오일의 경화오일이 사용될 수 있다.

정균 이나 정진균 농도에서 향균제는 비경구 조제약에 첨가될 수 있으며 특히 조제약이 다회분의 용기에 포장될 때 및 따라서 제거되어야할 다수의 약수와 저장되도록 지정된다. 사용될 수 있는 향균제의 예로는 페놀 또는 크레졸, 메규리얼, 벤질 알코올, 클로로부타놀, 메틸 및 프로필 P-히드록시벤조익 산 에스테르, 티메로살, 벤잘코니움 클로라이드 및 벤제토니움 클로라이드를 포함한다.

사용될 수 있는 등장액은 소듐클로라이드 및 덱스트로스를 포함한다. 완충제의 예로는 인산염 및 구연산염을 포함한다. 산화방지제의 예로는 중아황산염을 포함한다. 마취제의 예로는 프로캐인 피드로클로라이드를 포함한다. 부양과 분산제의 예로는 소듐 카르보시메틸세루로스, 히드록시프로필 메틸셀루로스 및 폴리비닐프롤리돈을 포함한다. 유화제의 예로는 폴리소르바이트 80(TWEEN80)을 포함한다. 금속 이온의 격리 또는 킬레이트 시약은 EDTA를 포함한다.

약학적 캐리어는 선택적으로 에틸 알코올, 폴리에틸렌 글리콜 및 프로피렌 글리콜을 포함하며 물이 섞일 수 있는 용액과 pH 적정을 위한 소듐 하이드로시드, 하이드로클로릭 산, 시트릭산, 또는 라틱 산을 위함이다.

비경구 제형의 레닌 억제제 복합물의 농도는 적절한 약학적 효과를 생산하기에 충분한 양으로 투요룰 하기 위하여 맞춰질 수 있다. 레닌 억제제 복합물 및 투약의 정확한 농도는 나이, 체중, 환자나 동물의 컨디션에 의존한다.

단위-회 비경구 조제약은 앰플, 물약병, 주사기에서 포장될 수 있다. 모든 비경구 투여를 위한 조제약은 당업계에 알려진 것처럼 살균되어야 한다.

주사는 로컬 및 침투 투약으로 디자인될 수 있다. 전형적으로 치료상 효과적인 투약량은 적어도 0.1%w/w에서 90%정도까지의 농도를 함유하며 바람직하게는 1% w/w이다. 레닌 억제제 복합물은 한번에 투여될 수 있으며 또는 소량의 복용량으로 나누어질 수 있다. 정확한 투약량과 치료 기간은 조성이 비경구적으로 투여된 경우의 위체의 기능이 될 것이며 실험식에 의해 결정될 수 있는 케리어와 다른 변수들이 알려진 테스트 프로토콜이나 체내나 체외 실험 테이터로부터 외삽법에 의한 것으로 이해된다. 임의의 특정 객체에 있어서 구체적인 투약량은 시간에 대해 맞춰지도록 요구되며 개별적인 필요와 전문적인 판단에 따른 것이다. 따라서 농도 범위는 모범적이 되도록 의도되며 범위를 제한하거나 제형의 실시를 제한하는 것은 아니다.

레닌 억제제 복합물은 선택적으로 다른 적절한 형이나 마이크로나이즈에서 정지될 수 있으며 더욱 수용성 활성 물질이나 프로드러그를 생산하기 위해 유도될 수 있다. 결과 혼합물의 형태는 인자들의 수에 의존하며 의도된 투여의 모드와 선택된 캐리어나 부형액에서의 혼합물의 용해도를 포함한다. 효과적인 농도는 질병의 증상을 개선하기에 충분하며 실험식으로 결정될 수 있다.

상기 투여 방법의 적절한 제형은 예를 들어 "Remington: The Science and Practice of Pharmacy", A. Gennaro, ed., 20th edition, (2000), Lippincott, Williams & Wilkins, Philadelphia, PA에서 찾아볼 수 있다.

참고문헌

알부민의 알킬화를 위한 다양한 방법들이 보고되었으며 하기의 예와 같다:

Self-quenched fluorogenic substrares for proteolytic enzymes have been prepared by alkylation of thio; groups in reduced bovine serum albumin with iodoacetamidofluorescein or idoacetamidoeosin. Anal, Biochem. 176:261-264.

Fluorescent derivative with acrylodan. Biophysical Journal Volume 75 August 1998 1084-1096.

The alkylation reagents iodoacetamide, 4-vinylpyridine, and acrylamide are all successful in improving the sequence coverage for albumin.

Alkylation of Cysteines:

Benzyl chlorides: Saunders; BIJOAK; Biochem.J.;28; 1934; 1977; Kwon, Yeondae; Zhang, Ruoheng; Bemquerer, Marcelo P.; Tominaga, Mineko; Hojo, Hironobu; Aimoto, Saburo; Chem.Lett.; EN; 5; 1993; 881-884.

Alkyl halide: Foti, Salvatore; Saletti, Rosaria; Marletta, Donata; Org.Mass Spectrom.; EN; 26; 10; 1991; 903-907; Jin, Lixia; Baillie, Thomas A.; Chen.Res.Toxicol.; EN; 10; 3; 1997; 318-327; Franzen, Henry M.; Nagren, Kjell; Grehn, Leif; Langstroem, Bengt; Ragnarsson, Ulf; J. Chem. Soc. Perkin Trans.1; EN; 1988; 497-502.

Bromoacetamide; Ziegler, E. et al.; Z. Naturforsch.B Anorg. Chem. Org. Chem. Biochem. Biophys. Biol.; GE; 25; 1970; 1417-1420.

Aziridines: Hata, Yoshiteru; Watanabe, Masamichi; Tetrahedron; EN; 43; 17; 1987; 3881-3888.

Methacrylate: Kasai, Takanori; Nishitoba, Tsuyoshi; Shiroshita, Yoshinari; Sakamura, Sadao; Agric. Biol. Chem.; EN; 48; 9; 1984; 2271-2278.

Vinyl sulfones: Horner, L.; Lindel, H.; Phosphorus Sulfur; GE; 15; 1983; 1-8.

α-Halo ketones: Silva, Claudius D'; Seddon, Andrew P.; Douglas, Kenneth t.; J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1; EN; 1981; 3029-3033; Chari, Ravi V.J.; Kozarich, John W.; J. Amer. Chem. Soc.; EN; 105; 24; 1983; 7169-7171.

Haloacetate: Climie, Ian J. G.; Evans, David A.; Tetrahedron; EN; 38; 5; 1982; 697-711.

Unsaturated ketones: Spanton, Stephen G.; Prestwich, Glenn D.; Tetrahedron; EN; 38; 13; 1982; 1921-1930. Biophysical Journal Volume 75 August 1998 1084-1096.

Acrylonitrile: Climie, Ian J. G.; Evans, David A.; Tetrahedron; EN; 38; 5; 1982; 697-711.

Acrylamide: Harrison, M. E.; Baldwin, M. A.; Org. Mass Spectrom.; EN; 24; 1989; 689-693.

β-Chloroketones: Vince, R.; Daluge,S.; J.Med. Chem.; EN; 14; 1971; 35-37.

Epoxide: Jin, Lixia; Baillie, Thomas A.; Chem. Res. Toxicol.; EN; 10; 3; 1997; 318-327.

Allyl halide: Jin, Lixia; Baillie, Thomas A.; Chem. Res. Toxicol.; EN; 10; 3; 1997; 318-327.

본 실시예를 통해 인용된 모든 명세서의 문서는 참고문헌에서 발췌하였다.

레닌 억제제 실시예

레닌억제제 콘쥬게이트 복합물의 제조

본 발명에 따른 화합물의 제조를 위한 다양한 방법들이 개발될 수 있다. 본 화합물의 대표적인 합성 방법은 실시예들에서 제공된다. 그러나 본 발명의 화합물은 다른 고안될 수 있는 합성 루트를 통해서도 합성될 수 있다.

본 발명에 따른 특정 화합물은 화합물(예, 키랄 중심)에 입체화학을 주는 다른 원소들과 연관있는 원소를 가진다. 본 발명에 따른 혼합물의 합성은 상이한 입체이성체(대장체, 편좌우 이성체)의 혼합의 형태를 야기할 수 있다. 특정 입체화학이 정의되지 않으면 화합물의 상술은 상이한 가능한 입체이성체 모두를 포함하도록 계획된다.

상이한 입체이성체의 분리 혼합물을 위한 다양한 방법은 당업계에 알려져 있다. 예를 들어 화합물의 라세믹 혼합은 선택적으로 편좌우 이성체화합물의 쌍을 형성하기 위해 활성 용해제와 반응할 수 있다. 이어 편좌우 이성체는 선택적으로 순수한 대장체를 얻기 위해 분리될 수 있다. 비용해성 복합물은 대장체(크리스탈린 디아스테레오이소메릭염)를 용해하기 위해 사용될 수 있다. 편좌우 이성체는 전형적으로 분명한 물리적 조성(녹는점, 끓는점, 용해도, 반응성 등)을 가지며 상기 비유사성의 장점으로 분리될 수 있다. 예를 들어 편좌우 이성체가 전형적으로 크로마토그래피나 상이한 용해도를 이용한 분리/용해 기술에 의해 분리될 수 있다. 라세믹 혼합물로부터 입체이성체 혼합물의 용해에 사용될 수 있는 보다 상세한 기술은 Jean Jacques Andre Collet, Samuel H. Wilen, Enantiomers, Racemates and Resolutions, John Wiley & Sons, Inc.(1981)에 기술되어 있다.

본 발명에 따른 혼합물은 유리 염기 형태가 약학적으로 수용할만한 무기 또는 유기 산과 반응함으로써 약학적으로 수용할 수 있는 산 첨가 염으로써 준비될 수 있다. 양자택일로 혼합물의 유리산 형태가 약학적으로 수용할만한 무기 또는 유기 염기와 반응함으로써 약학적으로 수용할 수 있는 산 첨가 염으로써 준비될 수 있다. 무기 및 유기 산과 염기들은 약학적으로 수용할 수 있는 염의 준비에 적절하며 본 발명의 실시예의 정의 부분에 상세하게 설명한다. 양자택일로 본 발명의 염의 형태는 시작 재료나 중간화합물의 염을 이용할 수 있다.

본 발명의 유리산이나 유리 염 형태는 염기 첨가 염이나 산 첨가 염의 형태에 따라 준비할 수 있다. 예를 들어 산 첨가염 형태에서 화합물은 적절한 염기(암모니움 하이드로시드용액, 소듐 하이드록사이드 등)를 조작하여 유리염에 따라 바꿀 수 있다. 염기 첨가 염 형태에서 화합물은 적절한 산(하이드로클로릭산 등)을 조작하여 유리산에 따라 바꿀 수 있다.

화합물의 보호 유도체는 당업계에 알려진 일반적인 방법으로 만들 수 있다. 보호기와 제거의 제조에 적용할 수 있는 기술에 대한 상세한 기술은 T.W.Greene, Proctecting Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, John Wiley & Sons, Inc. 1999에 나와있다.

본 발명에 따른 화합물은 유리하게 준비되고, 용매 화합물로써(하이드레이트)본 발명의 과정동안 형성된다. 본 발명의 화합물의 하이드레이트는 편리하게 수용액/유기 용매 혼합물로부터 재결정될 수 있고 유기 용매로써 디옥신, 테트라하이드로퓨한 또는 메탄올 등을 이용한다.

본 발명에 따른 화합물은 라세믹 혼합물을 선택적으로 활성 용해제와 반응함으로써 개별 입체이성체로 준비될 수 있으며 편좌우이성체 혼합물의 쌍을 형성하기 위함이며 편좌우이성체를 분리하고 선택적으로 순순한 대장체를 회복한다. 대장체의 용해가 공유 편좌우이성체 유도체를 이용하여 수용되는 반면, 비용해성 복합물은 선호된다(크리스탈린 다이스테레오이소메릭염). 편좌우이성체는 현저한 물리적 조성(끓는점, 녹는점, 용해도, 반응성등)을 가지며 상기 비유사성의 장점으로 분리될 수 있다. 편좌우이성체는 크로마토그래피로 분리될 수 있으며 바람직하게는 용해도차를 이용한 분리/용해 기술이다. 이어 선택적으로 라세미화를 야기시키지 않을 임의의 실질적인 수단으로 순순한 대장체는 용해제를 통해 회수된다. 본 발명에서 사용된 기호와 컨벤션, 스킴, 실시예들은 과학적 문서, 예를 들어 Journal of the American Chemical Society or the Journal of Biological Chemistry들에 사용된 것들과 일관된다. 표준 싱글-레터 또는 티-레터 약어는 일반적으로 아미노산 잔류물을 나타내는데 사용하며 명시되지 않으면 L-배열이다. 또한 명시되지 않으면 모든 시작 물질은 더이상의 정제없이 상업적 물품으로부터 얻을 수 있다.

본 발명의 레닌억제제를 위한 합성 개요

본 발명에 따른 레닌억제제는 다양한 반응개요에 따라 합성될 수 있다. 몇 가지 도시된 개요들은 하기 예들에 제공된다. 다른 반응 개요는 알려진 방법들로 쉽게 고안될 수 있다.

하기 명시되는 반응에서 작용기를 보호하는 것이 필요하며 예를 들어 최종물질에서 원하는 히드록시, 아미노, 이미노, 티오 또는 카르복실기가 있으며 반응에서 원파지 않는 참여를 피하기 위해서이다. 전형적인 보호기는 표준 실시와 같이 사용될 수 있으며 예를 들어 T.W. Greene and P.G.M. Wuts in "Protective Group in Organic Chemistry" John Wiley and Sons, 1991에서 볼 수 있다.

본 발명에 따른 화합물은 선택적으로 하기의 일반적인 반응 개요에 따라 합성될 수 있다.

식Ⅰ의 복합물의 개요

식Ⅱ의 복합물의 개요

실시예13 : 복합물 형성을 위한 콘쥬게이션 반응

DMSO의 마레이미도프로리오닐아미노에톡시에톡시아세틸 유도체 펩티드 용액 10mM을 HSA의 25% 수용액에 첨가하였다. 혼합물의 반응에서 최종 펩티드 농도는 1mM이며 몰랄 농도는 펩티드 혼합액 : HSA가 1:4였다. 용액은 5시간동안 37℃에서 배양된다. 일단 배양이 끝나면 콘쥬게이트는 4℃에서 저장하였다.

실시예14 : 복합물 형성을 위한 콘쥬게이션 반응

DMSO의 트랜스-4-(말레이미딜메틸)시틀로헥산-1-카르보닐 유도체 펩티드 용액 10mM을 HSA의 25% 수용액에 첨가하였다. 혼합물의 반응에서 최종 펩티드 농도는 1mM이며 몰랄 농도는 펩티드 혼합액 : HSA가 1:4였다. 용액은 5시간동안 37℃에서 배양된다. 일단 배양이 끝나면 콘쥬게이트는 4℃에서 저장하였다.

실시예15 : 복합물 형성을 위한 콘쥬게이션 반응

DMSO의 N-(3-{2-[2-(3-아미노-프로복시)-에톡시]-에톡시-에톡시}-프로필)-2-브로모아세트아미드 유도체 펩티드 용액 10mM을 HSA의 25% 수용액에 첨가하였다. 혼합물의 반응에서 최종 펩티드 농도는 1mM이며 몰랄 농도는 펩티드 혼합액 : HSA가 1:4였다. 용액은 5시간동안 37℃에서 배양된다. 일단 배양이 끝나면 콘쥬게이트는 4℃에서 저장하였다.

실시예16 : 복합물 형성을 위한 콘쥬게이션 반응

DMSO의 말레이미도프로피오닐아미노에톡시에톡시아세틸 유도체 펩티드 용액 10mM을 HSA의 25% 수용액에 첨가하였다. 혼합물의 반응에서 최종 펩티드 농도는 1mM이며 몰랄 농도는 펩티드 혼합액 : HSA가 1:1였다. 용액은 5시간동안 37℃에서 배양된다. 일단 배양이 끝나면 콘쥬게이트는 4℃에서 저장하였다.

실시예17 : 복합물 형성을 위한 콘쥬게이션 반응

DMSO의 말레이미도프로피오닐아미노에톡시에톡시아세틸 유도체 펩티드 용액 10mM을 HSA의 25% 수용액에 첨가하였다. 혼합물의 반응에서 최종 펩티드 농도는 1mM이며 몰랄 농도는 펩티드 혼합액 : HSA가 10:1였다. 용액은 5시간동안 37℃에서 배양된다. 일단 배양이 끝나면 콘쥬게이트는 4℃에서 저장하였다.

혼합물, 조성, 키트등 본 발명의 방법은 다양한 변형과 조절을 할 수 있다. 따라서 본 발명은 청구항과 이에 상응하는 범위에서 다양한 변형이 이루어질 수 있다.

체외분석의 실시예

레닌억제제의 활성을 측정하기 위한 다양한 분석이 Cartledge, et al. Ann. Clin. Biochem. 262-278(2000)에 기술되어 있다.

실시예18 : 체외에서의 레닌억제제 활성 측정

레닌 억제제 활성의 형광 측정

레닌억제제 활성을 측정하는 한가지 방법은 형광 마이크로플레이트 리더기에서의 합성 펩티드 기질의 분열을 이용한다. 레닌의 펩티드 기질은 한 말단에 형광체(5-(아미노에틸)아미노나프탈렌 설포네이트, EDANS)가 연결되어 있고 다른 말단에 비형광체 크로모포어(4'-디메틸아미노아조벤젠-4-카르복실레이트, DABCYL)가 연결되어 있다. 레닌에 의한 분열후, 생성물(펩티드-EDANS)은 초형광체이다. 500μM의 스톡 레닌 기질의 용액은 877μL의 디메틸 설폭시드(DMSO)를 1mg기질에 첨가함으로써 제조할 수 있다. 상기 스톡 용액은 2μM의 최종농도로 분석 완충제로 첨가된다.레닌 함유 용액의 소수량(최종농도의〈3%)은 분석 완충제로 희석된다. 형광 기질의 최초 분열율은 490nm 형광 시그널에서 5-8분, 37℃에서 모니터링 함으로써 측정된다. 본 분석에서 콘쥬게이션는 서브나노몰에서 큰 마이크로몰 활성을 보여준다.

1.J Protein Chem 10, 553 (1991)

2. Anal Biochem 210, 351 (1993)

3. Science 247, 954 (1990)

4. J Protein Chem 9,663 (1990)

레닌억제제 플라즈마의 측정

플라즈마 레닌 활성은 Haber et al.(1)에 의해 최초로 설명된 방법에 기초를 둔다. 간단히, 플라즈마 샘플은 두개의 알리쿼트로 나누어져 하나는 3-18시간동안 37℃에서 배양되고 다른 하나는 얼음에 보관된다. 안지오텐신Ⅰ 농도는 프로토콜 제조에 따라 RIA 또는 ELISA 형태의 상업 키트를 사용한다. 레닌 활성의 측정을 위해 주는 37℃ 알리쿼트에서부터 추출된 안지오텐신Ⅰ 농도는 0-4℃에서 유지된다.

플라즈마에서 레닌의 활성은 분열생성물의 HPLC 분리를 이용하여 레닌 펩티드 기질에 첨가하여 측정될 수 있다. 분열 생성물은 LC-MS 분석에 의해 얻을 수 있다. 양자택일로 펩티드 기질은 형광이나 크로모포어에 의해 변형될 수 있고 스펙트로포토메트릭 디텍션에 의해 허락된다. 플라즈마 단백질은 상기 HPLC 분리를 이용하여 제거될 수 있다.

레닌 억제제 및/또는 레닌 억제제-HSA 콘쥬게이트의 농도는 효조-베이스 분석(2)으로 결정되며 플라즈마 샘플의 잠재적 억제성의 측정은 상업적으로 이용가능한 형광 기질(3)을 pH 7-8로 첨가하여 할 수 있다.

1. Haber E, Koerner T, Page LB , Kliman B, Purnode A.

Application of a radioimmunoassay for angiotensin Ⅰto the physiologic measurements of plasma renin activity in normal human subjects. J Clin Endocrinol Metab. 1969, 29(10): 1349-55

2. Gulnik S., Erickson, J.W., Yu, B. Protease assay for therapeutic drug monitoring. 2003, WO03040390

3. Wang GT , Chung CC , Holzman TF , Krafft GA .

A continuous fluorescence assay of renin activity. Anal Biochem. 1993, 210(2):351-9.

실시예 18 : 체내 실험

콘쥬게이트는 래트에 정맥주사로 투여된다. 알부민과 콘쥬게이트하지 않은 억제제는 제어기로 투여된다. 혈청샘플은 5분, 30분, 1시간, 2시간, 8시간, 24시간, 48시간, 72시간에서 채집된다. 레닌 억제제 활성은 상기 언급된 방법의 하나로 측정된다. 펩티드 또는 펩티드-HSA 콘쥬게이트의 혈청 농도는 교정선에서 계산된다. 상기 실시예에 따라 내린 결론은 하기와 같다:

제어 펩티드는 빠른 제거력으로 정화 특징을 나타냈다

HSA 콘쥬게이트의 종말 반감기 범위는 12-14시간이며 본 종의 HSA의 것과 유사하다.

사람 레닌억제제로 항고혈압성 활성은 고혈압에서 내생 조촉재와 사람 안지오텐시노겐 및 내생 조촉재와 사람 레닌이식 유전자가 이중으로 측정되었다.

Bohlender, et al. Hypertension 428-434 (1997)

레트 레닌의 억제제가 사람과 비교할 때, 레닌 항고혈압성 활성은 소듐 제거된 레트에서 측정될 수 있다.

Allan, et. al. JPET 283:661-665, (1997)

실시예 19 : 레닌 억제제 유도체의 생 활성

상기 기술된 정보는 확실하게 Ih-L-Pr 복합물의 비오틴 고리가 아비딘에 결합한다는 것을 증명한다. 실험의 다음 시리즈는 Ih-L-Pr 복합물이 지정되었으며, 이는 용해성 유리 산형에서 50nM정도의 IC50를 가지며 여전히 목표단백질에 콘쥬게이션된 후에도 생활성이다.

재료 및 방법: 하기 절차는 무균 조건 하에서 행해진다. 래빗 플라즈마는 헤파린 처리된 혈액으로부터 얻는다. 하나는 8ml의 알리쿼트 플라즈마이며 Ih-L-Pr의 5마이크로몰로 60분 동안 상온에서 배양된다. 다른 똑같은 알리쿼트는 Ih-L-Pr 의 5마이크로몰로 유사하게 배양된다. 반응 혼합물은 4℃에서 밤시간 동안 저장된다. 본 샘플들의 알리쿼트는 전체 레닌 억제제의 분석을 위해 RIA에 의해 보관된다. 37℃로 데운후, 플라즈마 샘플은 두개의 자기 래빗으로 주사된다. 이어 래빗은 정의된 간격으로 채취한다. 혈액은 5분 동안 2500rpm으로 원심분리되고 플라즈마의 알리쿼트는 RIA에 의해 분석된다.

결과: Ih-L-Pr 복합물의 NHS 에스테르와 유도된 플라즈마 단백질은 실제로 혈액에서 연장된 기간동안 순환후 생물학적으로 이용가능하며 억제하도록 남겨진 배좌에서 억제제를 유지한다. 또한 검출할수 있는 억제제의 양은 순환에서 혈액의 양에 의해 플라즈마의 희석액의 효과를 위해 정상화된다.

데이타는 유리산의 수치가 빠르게 감소하며 한시간 후에 검출할 수 없다는 것을 보여준다. 반면, Ih-L-Pr 복합물과 같은 변경된 플라즈마 단백질은 레닌 분석에서 억제될 수 있고 콘쥬게이션이 억제제Ih의 생활성도를 파괴하지 않았다는 것을 나타낸다. 또한 관찰된 활성제의 수치는 10일이 될 때까지는 눈에 띄게 감소하지 않았다. 몇몇 풍부한 플라즈마 단백질(알부민 및 이무노글루불린)은 수명이 길고 운송 프로필을 설명한다. 따라서 이러한 결과들은 알부민과 같이 확실히 플라즈마 단백질에 유도된 레닌 억제제의 부착이 몰의 생활성을 파괴시키지 않고 혈액내에서 억제제 Ih의 수명을 상당히 증가시킨다는 것을 증명한다.

상기 결과로부터의 입증은 본 발명의 물질이 식Ⅰ및 식Ⅱ의 복합물의 사용으로 레닌 억제제Ih를 포함하는 조작을 증가시키는 것을 제공한다. 본 발명 물질의 사용으로 레닌 억제제Ih는 연장된 기간동안 유지되며 반복적인 투여가 필요하지 않도록 하며 환자의 수락이 필요하지 않으며 보호가 보장된다. 본 발명의 유도된 레닌 억제제는 프라즈마 단백질과 다른 혈관 조성과 에릴티록시트에 공유 부착되며 남은 생물학적 활성은 면역제닉이다.

본 발명의 실시예에서 상술된 바 이외에도 더 많은 변형과 적용, 이용이 있을 수 있으며 당 업계에 알려진 다양한 방법들을 포함하며 상세하게는 청구항의 범위에 따라 필수적인 것들에 적용될 수 있다.

Claims

하기 서열을 포함하는 51개 이하의 아미노산으로 구성된 펩티드:

Y1-X-X-Y2-X-X-X-Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6

단, 상기 서열은 펩티드의 N-말단, C-말단 또는 내부에 위치하고;

Y1은 W, Y, F, H, L, N, Q, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y2는 W, Y, F, H, L, N, Q, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y3는 I, V, L, A, S 및 T로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y4는 T, S, I, K, N, H, R, Q, E 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y5는 I, V, T, K, L, N, Q, D, E, R 및 H로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y6는 P, G 및 C를 제외한 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택되고;

각 X는 독립적으로 임의의 아미노산임.
하기 서열을 포함하는 51개 이하의 아미노산으로 구성된 펩티드:

Y1-X-X-Y2-X-X-X-Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6 - Y7

단, Y1은 W, Y, F, H, L, N, Q, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y2는 W, Y, F, H, L, N, Q, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y3는 I, V, L, A, S 및 T로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y4는 T, S, I, K, N, H, R, Q, E 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y5는 I, V, T, K, L, N, Q, D, E, R 및 H로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y6는 P, G 및 C를 제외한 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y7는 I, L, V, N, Q, K, R, H, E 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

각 X는 독립적으로 임의의 아미노산임.
하기 서열을 포함하는 51개 이하의 아미노산으로 구성된 펩티드:

Y1-X-X-Y2-X-X-X-Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6 - Y7-X-X-X-Y8

단, Y1은 W, Y, F, H, L, N, Q, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y2는 W, Y, F, H, L, N, Q, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y3는 I, V, L, A, S 및 T로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y4는 T, S, I, K, N, H, R, Q, E 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y5는 I, V, T, K, L, N, Q, D, E, R 및 H로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y6는 P, G 및 C를 제외한 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y7는 I, L, V, N, Q, K, R, H, E 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y8은 Q, H, R, N, E, D, K 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되고;

각 X는 독립적으로 임의의 아미노산임.
하기 서열을 포함하는 51개 이하의 아미노산으로 구성된 펩티드:

Y1-X-X-Y2-X-X-X-Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6 - Y7-X-X-X-Y8-X-Y9

단, Y1은 W, Y, F, H, L, N, Q, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y2는 W, Y, F, H, L, N, Q, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y3는 I, V, L, A, S 및 T로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y4는 T, S, I, K, N, H, R, Q, E 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y5는 I, V, T, K, L, N, Q, D, E, R 및 H로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y6는 P, G 및 C를 제외한 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y7는 I, L, V, N, Q, K, R, H, E 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y8은 Q, H, R, N, E, D, K 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y9는 Q, H, N, E, D, K, R, L 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되고;

각 X는 독립적으로 임의의 아미노산임.
하기 서열을 포함하는 51개 이하의 아미노산으로 구성된 펩티드:

Y1-X-X-Y2-X-X-X-Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6 - Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 - Y10

단, Y1은 W, Y, F, H, L, N, Q, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y2는 W, Y, F, H, L, N, Q, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y3는 I, V, L, A, S 및 T로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y4는 T, S, I, K, N, H, R, Q, E 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y5는 I, V, T, K, L, N, Q, D, E, R 및 H로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y6는 P, G 및 C를 제외한 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y7는 I, L, V, N, Q, K, R, H, E 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y8은 Q, H, R, N, E, D, K 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y9는 Q, H, N, E, D, K, R, L 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y10은 Q, H, N, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

각 X는 독립적으로 임의의 아미노산임.
하기 서열을 포함하는 51개 이하의 아미노산으로 구성된 펩티드:

Y1-X-X-Y2-X-X-X-Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6 - Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 - Y10-X-X-Y11

단, Y1은 W, Y, F, H, L, N, Q, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y2는 W, Y, F, H, L, N, Q, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y3는 I, V, L, A, S 및 T로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y4는 T, S, I, K, N, H, R, Q, E 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y5는 I, V, T, K, L, N, Q, D, E, R 및 H로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y6는 P, G 및 C를 제외한 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y7는 I, L, V, N, Q, K, R, H, E 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y8은 Q, H, R, N, E, D, K 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y9는 Q, H, N, E, D, K, R, L 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y10은 Q, H, N, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y11은 N, S, T, V, A 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

각 X는 독립적으로 임의의 아미노산임.
하기 서열을 포함하는 51개 이하의 아미노산으로 구성된 펩티드:

Y1-X-X-Y2-X-X-X-Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6 - Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 - Y10-X-X-Y11 - Y12

단, Y1은 W, Y, F, H, L, N, Q, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y2는 W, Y, F, H, L, N, Q, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y3는 I, V, L, A, S 및 T로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y4는 T, S, I, K, N, H, R, Q, E 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y5는 I, V, T, K, L, N, Q, D, E, R 및 H로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y6는 P, G 및 C를 제외한 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y7는 I, L, V, N, Q, K, R, H, E 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y8은 Q, H, R, N, E, D, K 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y9는 Q, H, N, E, D, K, R, L 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y10은 Q, H, N, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y11은 N, S, T, V, A 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y12는 E, V, K, G, R, Q, D, N, H, T 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되고;

각 X는 독립적으로 임의의 아미노산임.
하기 서열을 포함하는 51개 이하의 아미노산으로 구성된 펩티드:

Y1-X-X-Y2-X-X-X-Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6 - Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 - Y10-X-X-Y11 - Y12-X-X-Y13 ,

단, Y1은 W, Y, F, H, L, N, Q, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y2는 W, Y, F, H, L, N, Q, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y3는 I, V, L, A, S 및 T로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y4는 T, S, I, K, N, H, R, Q, E 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y5는 I, V, T, K, L, N, Q, D, E, R 및 H로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y6는 P, G 및 C를 제외한 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y7는 I, L, V, N, Q, K, R, H, E 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y8은 Q, H, R, N, E, D, K 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y9는 Q, H, N, E, D, K, R, L 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y10은 Q, H, N, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y11은 N, S, T, V, A 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y12는 E, V, K, G, R, Q, D, N, H, T 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y13은 L, I, V, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

각 X는 독립적으로 임의의 아미노산임.
하기 서열을 포함하는 51개 이하의 아미노산으로 구성된 펩티드:

Y1-X-X-Y2-X-X-X-Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6 - Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 - Y10-X-X-Y11 - Y12-X-X-Y13 - Y14 ,

단, Y1은 W, Y, F, H, L, N, Q, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y2는 W, Y, F, H, L, N, Q, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y3는 I, V, L, A, S 및 T로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y4는 T, S, I, K, N, H, R, Q, E 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y5는 I, V, T, K, L, N, Q, D, E, R 및 H로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y6는 P, G 및 C를 제외한 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y7는 I, L, V, N, Q, K, R, H, E 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y8은 Q, H, R, N, E, D, K 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y9는 Q, H, N, E, D, K, R, L 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y10은 Q, H, N, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y11은 N, S, T, V, A 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y12는 E, V, K, G, R, Q, D, N, H, T 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y13은 L, I, V, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y14는 L, S, M, Y, N, Q, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

각 X는 독립적으로 임의의 아미노산임.
하기 서열을 포함하는 51개 이하의 아미노산으로 구성된 펩티드:

Y2-X-X-X-Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6 - Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 - Y10-X-X-Y11 - Y12-X-X-Y13 - Y14 ,

단, Y2는 W, Y, F, H, L, N, Q, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y3는 I, V, L, A, S 및 T로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y4는 T, S, I, K, N, H, R, Q, E 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y5는 I, V, T, K, L, N, Q, D, E, R 및 H로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y6는 P, G 및 C를 제외한 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y7는 I, L, V, N, Q, K, R, H, E 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y8은 Q, H, R, N, E, D, K 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y9는 Q, H, N, E, D, K, R, L 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y10은 Q, H, N, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y11은 N, S, T, V, A 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y12는 E, V, K, G, R, Q, D, N, H, T 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y13은 L, I, V, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y14는 L, S, M, Y, N, Q, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

각 X는 독립적으로 임의의 아미노산임.
하기 서열을 포함하는 51개 이하의 아미노산으로 구성된 펩티드:

Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6 - Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 - Y10-X-X-Y11 - Y12-X-X-Y13 - Y14 ,

단, Y3는 I, V, L, A, S 및 T로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y4는 T, S, I, K, N, H, R, Q, E 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y5는 I, V, T, K, L, N, Q, D, E, R 및 H로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y6는 P, G 및 C를 제외한 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y7는 I, L, V, N, Q, K, R, H, E 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y8은 Q, H, R, N, E, D, K 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y9는 Q, H, N, E, D, K, R, L 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y10은 Q, H, N, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y11은 N, S, T, V, A 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y12는 E, V, K, G, R, Q, D, N, H, T 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y13은 L, I, V, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y14는 L, S, M, Y, N, Q, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

각 X는 독립적으로 임의의 아미노산임.
하기 서열을 포함하는 51개 이하의 아미노산으로 구성된 펩티드:

Y4-X-X-Y5-X-X-Y6 - Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 - Y10-X-X-Y11 - Y12-X-X-Y13 - Y14 ,

단, Y4는 T, S, I, K, N, H, R, Q, E 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y5는 I, V, T, K, L, N, Q, D, E, R 및 H로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y6는 P, G 및 C를 제외한 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y7는 I, L, V, N, Q, K, R, H, E 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y8은 Q, H, R, N, E, D, K 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y9는 Q, H, N, E, D, K, R, L 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y10은 Q, H, N, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y11은 N, S, T, V, A 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y12는 E, V, K, G, R, Q, D, N, H, T 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y13은 L, I, V, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y14는 L, S, M, Y, N, Q, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

각 X는 독립적으로 임의의 아미노산임.
하기 서열을 포함하는 51개 이하의 아미노산으로 구성된 펩티드:

Y5-X-X-Y6 - Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 - Y10-X-X-Y11 - Y12-X-X-Y13 - Y14 ,

단, Y5는 I, V, T, K, L, N, Q, D, E, R 및 H로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y6는 P, G 및 C를 제외한 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y7는 I, L, V, N, Q, K, R, H, E 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y8은 Q, H, R, N, E, D, K 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y9는 Q, H, N, E, D, K, R, L 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y10은 Q, H, N, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y11은 N, S, T, V, A 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y12는 E, V, K, G, R, Q, D, N, H, T 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y13은 L, I, V, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y14는 L, S, M, Y, N, Q, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

각 X는 독립적으로 임의의 아미노산임.
하기 서열을 포함하는 51개 이하의 아미노산으로 구성된 펩티드:

Y6 - Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 - Y10-X-X-Y11 - Y12-X-X-Y13 - Y14 ,

단, Y6는 P, G 및 C를 제외한 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y7는 I, L, V, N, Q, K, R, H, E 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y8은 Q, H, R, N, E, D, K 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y9는 Q, H, N, E, D, K, R, L 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y10은 Q, H, N, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y11은 N, S, T, V, A 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y12는 E, V, K, G, R, Q, D, N, H, T 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y13은 L, I, V, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y14는 L, S, M, Y, N, Q, E, D, K 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되고;

각 X는 독립적으로 임의의 아미노산임.
하기 서열을 포함하는 51개 이하의 아미노산으로 이루어진 펩티드:

W-X-X-W-X-X-X-I-X-X-X-T-X-X-I-X-X-L-I-X-X-X-Q-X-Q-Q-X-X-N,

단, 각 X는 독립적으로 임의의 아미노산임.
하기 서열을 포함하는 51개 이하의 아미노산으로 이루어진 펩티드:

W-X1-X2-W-X3-X4-X5-I-X6-X7-X8-T-X9-X10-I-X11-X12-L-I-X13-X14-X15-Q-X16-Q-Q-X17-X18-N-X19-X20-X21-X22-X23,

단, X1은 M, L, I, Q, T, R 및 K로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X2는 E, D, Q 및 K 중의 하나이고;

X3는 E, D 및 K로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X4는 K, R, E, Q, N 및 T로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X5는 E, L, R, K 및 Q로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X6는 N, D, S, E, Q, K, R, H, T, I 및 G로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X7는 N, Q, D, E, K, S, T 및 Y로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X8는 Y, F, H, I, V 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X9는 G, K, R, H, D, E, S, T, N 및 Q로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X10은 K, H, E, Q, T, V, I, L, M, A, Y, F 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X11은 H, K, E, Y 및 F로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X12는 T, S, Q, N, E, D, R, K, H, W, G, A 및 M으로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X13은 D, E, Q, T, K, R, A, V 및 G로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X14는 D, E, K, H, Q, N, S, I, L, V, A 및 G로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X15는 S, A 및 (P)로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X16는 N, K, S, T, D, E, Y, I 및 V로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X17은 E, D, N, K, G 및 V로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X18은 K, R, H, D, E, N, Q, T, M, I 및 Y로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X19은 E, V, Q, M, L, J 및 G로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X20은 Q, N, E, K, R, H, L 및 F로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X21은 E, D, N, S, K, A 및 G로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X22는 L, I 및 Y로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X23은 I, L, M, Q, S 및 Y로 이루어진 군으로부터 선택됨.
제16항에 있어서, 상기 펩티드가 도 1에 도시된 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 펩티드.
하기식 I 또는 II의 단리 착물:

[(AV)_m-L1]_N-Pr I

AV-[L2-(Pr)_o]_P II

단, m은 1-5의 정수이고;

n은 1-100의 정수이고;

o는 1-5의 정수이고;

p는 1-100의 정수이고;

AV는 항바이러스성 화합물이고;

L1 및 L2는 AV를 Pr에 공유 연결시키는 다가 링커이거나, L1 및 L2는 부재이고;

Pr은 단백질이고;

상기 착물은 생체내 항바이러스 활성을 가짐.
제18항에 있어서, 상기 항바이러스성 화합물이 펩티드인 착물.
제19항에 있어서, 상기 펩티드의 질량이 약 100 kDA 미만인 착물.
제19항에 있어서, 상기 펩티드의 질량이 약 30 kDA 미만인 착물.
제19항에 있어서, 상기 펩티드의 질량이 약 10 kDA 미만인 착물.
제19항에 있어서, 상기 펩티드가 유사펩티드인 착물.
제19항에 있어서, 상기 펩티드가

Y1-X-X-Y2-X-X-X-Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6 ;

Y1-X-X-Y2-X-X-X-Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6 - Y7 ;

Y1-X-X-Y2-X-X-X-Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6 - Y7-X-X-X-Y8 ;

Y1-X-X-Y2-X-X-X-Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6 - Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 ;

Y1-X-X-Y2-X-X-X-Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6 - Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 - Y10 ;

Y1-X-X-Y2-X-X-X-Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6 - Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 - Y10-X-X-Y11 ;

Y1-X-X-Y2-X-X-X-Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6 - Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 - Y10-X-X-Y11 -Y12;

Y1-X-X-Y2-X-X-X-Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6 - Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 - Y10-X-X-Y11 - Y12-X-X-Y13 ;

Y1-X-X-Y2-X-X-X-Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6 - Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 - Y10-X-X-Y11 - Y12-X-X-Y13 - Y14 ;

Y2-X-X-X-Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6 - Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 - Y10-X-X-Y11 - Y12-X-X-Y13 - Y14 ;

Y3-X-X-X-Y4-X-X-Y5-X-X-Y6 - Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 - Y10-X-X-Y11 - Y12-X-X-Y13 - Y14 ;

Y4-X-X-Y5-X-X-Y6 - Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 - Y10-X-X-Y11 - Y12-X-X-Y13 - Y14 ;

Y5-X-X-Y6 - Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 - Y10-X-X-Y11 - Y12-X-X-Y13 - Y14 ;

Y6 - Y7-X-X-X-Y8-X-Y9 - Y10-X-X-Y11 - Y12-X-X-Y13 - Y14 ;

W-X-X-W-X-X-X-I-X-X-X-T-X-X-I-X-X-L-I-X-X-X-Q-X-Q-Q-X-X-N;

W-X1-X2-W-X3-X4-X5-I-X6-X7-X8-T-X9-X10-I-X11-X12-L-I-X13-X14-X15-Q-X16-Q-Q-X17-X18-N-X19-X20-X21-X22-X23;

펩티드 DP178(T-20); 및

펩티드 T-1249로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 51개 이하의 아미노산으로 이루어진 펩티드:

단, X1은 M, L, I, Q, T, R 및 K로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X2는 E, D, Q 및 K 중의 하나이고;

X3는 E, D 및 K로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X4는 K, R, E, Q, N 및 T로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X5는 E, L, R, K 및 Q로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X6는 N, D, S, E, Q, K, R, H, T, I 및 G로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X7는 N, Q, D, E, K, S, T 및 Y로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X8는 Y, F, H, I, V 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X9는 G, K, R, H, D, E, S, T, N 및 Q로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X10은 K, H, E, Q, T, V, I, L, M, A, Y, F 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X11은 H, K, E, Y 및 F로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X12는 T, S, Q, N, E, D, R, K, H, W, G, A 및 M으로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X13은 D, E, Q, T, K, R, A, V 및 G로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X14는 D, E, K, H, Q, N, S, I, L, V, A 및 G로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X15는 S, A 및 (P)로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X16는 N, K, S, T, D, E, Y, I 및 V로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X17은 E, D, N, K, G 및 V로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X18은 K, R, H, D, E, N, Q, T, M, I 및 Y로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X19은 E, V, Q, M, L, J 및 G로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X20은 Q, N, E, K, R, H, L 및 F로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X21은 E, D, N, S, K, A 및 G로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X22는 L, I 및 Y로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X23은 I, L, M, Q, S 및 Y로 이루어진 군으로부터 선택됨.
제24항에 있어서, 상기 단백질이 혈액 성분인 착물.
제25항에 있어서, 상기 혈액성분이 적혈구 세포, 면역글로불린, IgM, IhG, 혈청 알부민, 트랜스페린, P90 및 P38, 페리틴, 스테로이드 결합 단백질, 티록신 결합 단백질 및 α-2-매크로글로불린으로 이루어진 군으로부터 선택되는 착물.
제25항에 있어서, 상기 혈액성분이 인간 혈청 알부민이고 링커는 펩티드 링커인 착물.
제25항에 있어서, 상기 혈액성분이 인간 혈청 알부민이고 링커는 비펩티드 링커인 착물.
제27항에 있어서, 상기 착물이 융합 단백질인 착물.
제18항에 있어서, 상기 링커 L1 또는 L2가 생체내 가수분해적 분열에 안정적인 안정적 링커인 착물.
제18항에 있어서, 상기 링커 L1 또는 L2가 AV를 Pr에 공유 연결시키는 작용기를 둘 이상 포함하는 착물.
제18항에 있어서, 상기 링커 L1 또는 L2가 연장된 기간 동안 인간 혈청에 가수분해적으로 안정적인 안정적 링커인 착물.
제18항에 있어서, 상기 링커 L1 또는 L2가 8시간 내지 30일의 반감기동안 이간 혈청에 안정적인 착물.
제18항에 있어서, 상기 링커 L1 또는 L2가 아실옥시메틸케톤, 아지리딘, 디아조메틸케톤, 에폭사이드, 이오도-, 브로모- 또는 클로로아세트아미드, α-할로에스테르, α-할로케톤, 설포늄, 클로로에틸설파이드, O-알킬이소우레아, 알킬 할라이드, 비닐술폰, 아크릴아미드, 아크릴레이트, 비닐피리딘, 유기금속 화합물, 아릴디설파이드, 티오설포네이트, 알데히드, 니트릴, α-디케톤, α-케토아미드, α-케토에스테르, 디아미노케톤, 세미카르바존 및 디하이드라지드로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물의 유도체인 착물.
제18항에 있어서, 상기 링커 L1 또는 L2가 아지도벤조일 하이드라지드, N-[4-(p-아지도살리실아미노)부틸]-3'-(2'-피리딜디티오)프로피온아미드, 비스설포석신이미딜 수버레이트, 디메틸 아디피미데이트, 디석신이미딜 타르트레이트, N-이말레이미도부티릴옥시석신이미드 에스테르, N-하이드록시 설포석신이미딜-4-아지도벤조에이트, N-석신이미딜[4-아지도페닐]-1,3'-디티오프로피오네이트, N-석신이미딜[4-이오도아세틸]아미노벤조에이트, 글루타르알데하이드, 석신이미딜 4-[N-말레이미도메틸]사이클로헥산-1-카르복실레이트, N-하이드록시설포석신이미드, 말레이미드-벤조일-석신이미드, γ-말레이미도-부티릴옥시 석신이미드 에스테르, 말레이미도프로피온산, N-하이드록시석신이미드, 이소시아네이트, 티오에스테르, 티오노카르복실산 에스테르, 이미노 에스테르, 카르보디이미드, 무수물 및 카보네이트 에스테르로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물의 유도체인 착물.
제25항에 있어서, 상기 단백질이 알부민인 착물.
제36항에 있어서, 상기 알부민이 건조 물질 기재상에 10% 이상 순수한 HSA 또는 재조합 HSA인 착물.
제36항에 있어서, 상기 연결이 인간 알부민의 Cys-34에 대한 것인 착물.
제36항에 있어서, 상기 연결이 인간 알부민의 리신에 대한 것인 착물.
제18항에 있어서, m이 1이고, n이 1이고, 단백질이 HSA 또는 재조합 HSA인 착물.
제18항에 있어서, 상기 단백질이 HSA 또는 재조합 HSA이고, 착물이 30% 이상의 순도로 더 정제되는 착물.
제18항에 있어서, m이 1이고, n이 2이고, 단백질이 HSA 또는 재조합 HSA인 착물.
제18항에 있어서, 상기 착물이 화학양론적 양의 (AV)_m-L1을 Pr에 연결하거나, 화학양론적 양의 AV을 L2-(Pr)_o에 결합하는 것에 의해 제조되는 착물.
제18항에 있어서, 상기 착물이 Pr 혼합물을 (AV)_m-L1을 적어도 약 1.3:1의 비율로 결합하는 것에 의해 제조되는 착물.
제18항에 있어서, L1 및 L2가 부재이고, 상기 착물이 활성화된 AV 중간체를 형성하고 이어 상기 활성화된 AV 중간체를 Pr과 축합시켜 제조되는 착물.
제45항에 있어서, 상기 활성화된 AV 중간체가 혼합된 무수물 또는 N,N'-카르보닐디이미다졸 제제로부터 제조되는 착물.
제43항 내지 46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 착물이 약 30% 이상의 순도로 더 정제되는 착물.
혈액 성분에 공유 연결된 비-펩디드 항바이러스성 화합물을 포함하는 항바이러스 조성물.
제18항의 착물 및 생리적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물.
제49항에 있어서, 식염수 존재 또는 부재하에서 제형화된 조성물.
제50항에 있어서, 비경구 투여용으로 제형화된 조성물.
제51항에 있어서, 용액, 사용 전에 용액과 결합하는 건조 물질, 현탁액, 유화액 및 액상 농축물로 이루어진 군으로부터 선택되는 조성물.
생체내 HIV gp41 및 HIV 활성을 억제하는 방법으로서,

포유류 숙주의 혈류에 제18항의 단리 복합체 착물을 투여하는 단계를 포함하고,

상기 착물이 단백질과 결합하여 안정적 공유결합을 형성하는 반응성 작용기를 하나 이상 갖는 링커에 항바이러스성 화합물을 부착시킴으로써 형성되고;

상기 단리된 복합체 착물이 비-컨쥬게이트 항바이러스성 화합물에 비해 더 오랜 기간 동안 혈류 내에 유효한 치료효과를 유지할 수 있는 양으로 투여되는 방법.
제53항에 있어서, 상기 착물이 제26항의 착물인 방법.
제53항에 있어서, 상기 단백질이 HSA 또는 재조합 HSA인 방법.
제53항에 있어서, 상기 링커가 아실옥시메틸케톤, 아지리딘, 디아조메틸케톤, 에폭사이드, 이오도-, 브로모- 또는 클로로아세트아미드, α-할로에스테르, α-할로케톤, 설포늄, 클로로에틸설파이드, O-알킬이소우레아, 알킬 할라이드, 비닐술폰, 아크릴아미드, 아크릴레이트, 비닐피리딘, 유기금속 화합물, 아릴디설파이드, 티오설포네이트, 알데히드, 니트릴, α-디케톤, α-케토아미드, α-케토에스테르, 디아미노케톤, 세미카르바존 및 디하이드라지드로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물인 방법.
포유류 숙주의 혈류에 제18항의 단리 복합체 착물을 항바이러스성 활성에 유효한 양을 제공하기에 충분한 양으로 투여하는 단계를 포함하고,

상기 착물이 비결합 항바이러스성 화합물의 수명에 비해 더 오랜 기간 동안 혈류 내에 유지되는, 생체내 HIV gp41 및 HIV 활성을 억제하는 방법.
숙주에 항바이러스성 활성을 유도해내는 방법으로서, 상기 방법이

a) 화합물 AV-L1 또는 AV-L2 (단, AV는 60 kD 미만의 질량을 갖는 펩티드 항바이러스성 화합물이고, L1 또는 L2가 AV에 공유적으로 결합된는 링커임)을 제조하는 단계;

b) 상기 화합물 AV-L1 또는 AV-L2이 단리 단백질에 공유적으로 결합해 제18항의 단백질 착물을 형성하기에 충분한 시간 동안 상기 화합물 AV-L1 또는 AV-L2를 단리 단백질로 생체외 처리하는 단계; 및

c) 상기 처리된 단백질 착물을 숙주에 투여하는 단계를 포함하는 방법.
제58항에 있어서, 상기 단백질이 알부민인 방법.
제59항에 있어서, 상기 알부민이 HSA 또는 재조합 HSA인 방법.
제59항에 있어서, 알부민을 화합물 AV-L1 또는 AV-L2로 처리하기 전에 혈액으로부터 정제되고 단리된 혈액으로부터 알부민이 얻어지는 방법.
제61항에 있어서, 상기 알부민이 건조 물질 기재상에 10% 이상의 순도로 정제되는 방법.
제61항에 있어서, 상기 알부민이 95% 이상의 순도로 정제되는 방법.
숙주에 항바이러스성 활성을 유도해내는 방법으로서, 상기 방법이

a) 화합물 AV-L1 또는 AV-L2 (단, AV는 60 kD 미만의 질량을 갖는 펩티드 항바이러스성 화합물이고, L1 또는 L2가 AV에 공유적으로 결합되는 링커임)을 제조하는 단계;

b) 상기 화합물 AV-L1 또는 AV-L2이 하나 이상의 단리 단백질에 공유적으로 결합해 제18항의 개질 단백질 착물 하나 이상을 형성하기에 충분한 시간 동안 상기 화합물 AV-L1 또는 AV-L2를 하나 이상의 단백질 Pr로 생체외 처리하는 단계; 및

c) 상기 개질된 단백질 또는 단백질들을 숙주에 투여하는 단계를 포함하는 방법.
제64항에 있어서, 상기 단백질이 알부민인 방법.
제65항에 있어서, 상기 알부민이 화합물 AV-L1 또는 AV-L2로 처리하기 전에 혈액으로부터 정제되고 단리된 혈액으로부터 얻어지는 방법.
제65항에 있어서, 상기 알부민이 HSA 또는 재조합 HSA인 방법.
치료학적 유효량의 제18항의 착물, 생리학적으로 허용가능한 그 염, 및 m학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함하는 약학 조성물.
치료에 필요한 유효량의 제18항의 착물, 또는 약학적 허용가능한 그 염을 숙주에 투여하는 단계를 포함하는 HIV 바이러스 작용을 억제하는 방법.
바이러스 감염환자에게 유효량의 제49항의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 바이러스 감염환자 치료 방법.
바이러스 감염환자에게 유효량의 제50항의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 바이러스 감염환자 치료 방법.
바이러스 감염환자에게 유효량의 제51항의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 바이러스 감염환자 치료 방법.
바이러스 감염환자에게 유효량의 제52항의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 바이러스 감염환자 치료 방법.
제70항에 있어서, 상기 환자가 HIV 감염환자인 방법.
제71항에 있어서, 상기 환자가 HIV 감염환자인 방법.
바이러스 감염에 노출될 염려가 있는 환자에게 유효량의 제49항의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 바이러스 감염에 노출될 염려가 있는 환자 예방 방법.
바이러스 감염에 노출될 염려가 있는 환자에게 유효량의 제50항의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 바이러스 감염에 노출될 염려가 있는 환자 예방 방법.
바이러스 감염에 노출될 염려가 있는 환자에게 유효량의 제51항의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 바이러스 감염에 노출될 염려가 있는 환자 예방 방법.
바이러스 감염에 노출될 염려가 있는 환자에게 유효량의 제52항의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 바이러스 감염에 노출될 염려가 있는 환자 예방 방법.
바이러스 감염에 노출될 염려가 있는 환자에게 유효량의 제53항의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 바이러스 감염에 노출될 염려가 있는 환자 예방 방법.
하기식 I 또는 II의 단리 착물:

[(Ih)_m-L1]_N-Pr I

Ih-[L2-(Pr)_o]_P II

단, m은 1-5의 정수이고;

n은 1-100의 정수이고;

o는 1-5의 정수이고;

p는 1-100의 정수이고;

Ih는 레닌 억제제이고;

L1 및 L2는 Ih를 Pr에 공유 연결시키는 다가 링커이거나, L1 및 L2는 부재이고;

Pr은 단백질이고;

상기 착물은 생체내 항바이러스 활성을 가짐.
제81항에 있어서, 상기 레닌 억제제가 펩티드인 착물.
제82항에 있어서, 상기 펩티드의 질량이 약 60 kDA 미만인 착물.
제82항에 있어서, 상기 펩티드의 질량이 약 10 kDA 미만인 착물.
제82항에 있어서, 상기 펩티드의 질량이 약 1000 DA 미만인 착물.
제82항 내지 85항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 펩티드가 유사펩티드인 착물.
제66항에 있어서, 상기 유사 펩티드인 C-말단에 유사 전이 상태인 착물.
제87항에 있어서, 상기 유사 전이상태가 하기식의 화합물인 착물:

단, R은 치환되거나 비치환된 (C1-C10)알킬, (C6-C12)사이클로알킬, 카르보닐(C1-C10)알킬, 설포닐(C1-C3)알킬, 설피닐(C1-C3)알킬, (C2-C12)알케닐, (C2-C12)알키닐, 아릴, 아릴(C1-C10)알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴(C1-C10)알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;

R'는 치환되거나 비치환된 (C1-C10)알킬, (C6-C12)사이클로알킬, 카르보닐(C1-C10)알킬, (C1-C10)알콕시카르보닐, (C1-C10)알킬아미노카르보닐, 설포닐(C1-C3)알킬, 설피닐(C1-C3)알킬, (C2-C12)알케닐, (C2-C12)알키닐, 아릴, 아릴(C1-C10)알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴(C1-C10)알킬, 알킬설포닐(C1-C10)알킬, 아릴설포닐(C1-C10)알킬, 헤테로아릴설포닐(C1-C10)알킬, (C1-C10)알킬포스포네이트 및 (C1-C10)알킬포스포닐로 이루어진 군으로부터 선택됨.
제87항에 있어서, 상기 유사 전이상태는 하기식의 화합물인 착물:

단, R은 치환되거나 비치환된 (C1-C10)알킬, (C6-C12)사이클로알킬, 카르보닐(C1-C10)알킬, 설포닐(C1-C3)알킬, 설피닐(C1-C3)알킬, (C2-C12)알케닐, (C2-C12)알키닐, 아릴, 아릴(C1-C10)알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴(C1-C10)알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;

R"는 치환되거나 비치환된 (C1-C4)알킬, (C6-C12)사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 바이사이클로알킬, 카르보닐(C1-C10)알킬, 티오카르보닐(C1-C3)알킬, 설포닐(C1-C3)알킬, 설피닐(C1-C3)알킬, 아미노, 이미노(C1-C3)알킬, (C1-C10)알콕시, 아릴옥시, 헤테로아릴옥시, (C2-C12)알케닐, (C2-C12)알키닐, 아릴, 아릴(C1-C10)알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴(C1-C10)알킬, (C9-C12)바이사이클로아릴, 헤테로(C8-C12)바이사이클로아릴, 아미노설포닐, 알킬설포닐, 알킬설포닐(C1-C10)알킬, 아릴설포닐, 아릴설포닐(C1-C10)알킬, 헤테로아릴설포닐, 헤테로아릴설포닐(C1-C10)알킬, 포스포네이트, (C1-C10)알킬포스포닐, 설포닐기 및 설피닐기로 이루어진 군으로부터 선택됨.
제87항에 있어서, 상기 유사 전이상태는 하기식의 화합물인 착물:

단, R은 치환되거나 비치환된 (C1-C10)알킬, (C6-C12)사이클로알킬, 카르보닐(C1-C10)알킬, 설포닐(C1-C3)알킬, 설피닐(C1-C3)알킬, (C2-C12)알케닐, (C2-C12)알키닐, 아릴, 아릴(C1-C10)알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴(C1-C10)알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;

R"는 치환되거나 비치환된 (C1-C4)알킬, (C6-C12)사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 바이사이클로알킬, 카르보닐(C1-C10)알킬, 티오카르보닐(C1-C3)알킬, 설포닐(C1-C3)알킬, 설피닐(C1-C3)알킬, 아미노, 이미노(C1-C3)알킬, (C1-C10)알콕시, 아릴옥시, 헤테로아릴옥시, (C2-C12)알케닐, (C2-C12)알키닐, 아릴, 아릴(C1-C10)알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴(C1-C10)알킬, (C9-C12)바이사이클로아릴, 헤테로(C8-C12)바이사이클로아릴, 아미노설포닐, 알킬설포닐, 알킬설포닐(C1-C10)알킬, 아릴설포닐, 아릴설포닐(C1-C10)알킬, 헤테로아릴설포닐, 헤테로아릴설포닐(C1-C10)알킬, 포스포네이트, (C1-C10)알킬포스포닐, 설포닐기 및 설피닐기로 이루어진 군으로부터 선택됨.
제87항에 있어서, 상기 유사 전이상태는 하기식의 화합물인 착물:

단, R은 치환되거나 비치환된 (C1-C10)알킬, (C6-C12)사이클로알킬, 카르보닐(C1-C10)알킬, 설포닐(C1-C3)알킬, 설피닐(C1-C3)알킬, (C2-C12)알케닐, (C2-C12)알키닐, 아릴, 아릴(C1-C10)알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴(C1-C10)알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;

R"는 치환되거나 비치환된 (C1-C4)알킬, (C6-C12)사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 바이사이클로알킬, 카르보닐(C1-C10)알킬, 티오카르보닐(C1-C3)알킬, 설포닐(C1-C3)알킬, 설피닐(C1-C3)알킬, 아미노, 이미노(C1-C3)알킬, (C1-C10)알콕시, 아릴옥시, 헤테로아릴옥시, (C2-C12)알케닐, (C2-C12)알키닐, 아릴, 아릴(C1-C10)알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴(C1-C10)알킬, (C9-C12)바이사이클로아릴 및 헤테로(C8-C12)바이사이클로아릴로 이루어진 군으로부터 선택됨.
제87항에 있어서, 상기 C-말단에 유사 전이상태가

로 이루어진 군으로부터 선택되는 착물.
제81항에 있어서, 상기 Ih가 Iva-Val-Val-Sta-Ala-Sta, Boc-Phe-His-Sta-Ile-AMP, Boc-Phe-His-Sta-Ala-Sta-OMe, Boc-Phe-His-Sta-Leu-NHCH₂Ph, Boc-Phe-His-ACHPA-Leu-AMB, Boc-Phe-His-Sta-Leu-AMB, Boc-Pro-Phe-His-Sta-Ile-AMP, Iva-Phe-Nle-Sta-Ala-Sta, Iva-His-Pro-Phe-His-Sta-Ala-Sta, Iva-His-Pro-Phe-His-Sta-Leu-Phe-NH₂, Ac-His-Pro-Phe-Val-Sta-Leu-Phe-NH₂, Ac-His-Pro-Phe-His-ACHPA-Leu-Phe-NH₂, Ac-Trp-Pro-Phe-His-Sta-Ile-NH₂, Ac-(HCO-Trp)-Pro-Phe-His-Sta-Ile-NH₂, Pro-His-Pro-Phe-His-Sta-Ile-His-D-Lys, Pro-His-Pro-Phe-His-Sta-Ile-Phe-NH₂, Z-Arg-Arg-Pro-Phe-His-Sta-Ile-His-Lys(Boc)-OMe, Pro-His-Pro-Phe-His-Phe-Phe-Val-Tyr-Lys, His-Pro-Phe-His-Leu-D-Leu-Val-Tyr-OH, Pro-His-Pro-Phe-His-Leu(CH₂NH)Val-Ile-His-Lys(H-142), Boc-Phe-His-Cha-(CH₂NH)Val-NH₂(S)-Me(Bu), Pro-His-Pro-Phe-His-Leu-Phe-Val-Tyr-OH, Boc-His-Pro-Phe-His-Leu(CH(OH)CH₂)Val-Ile-His-OH(H-261) 및 PEC-Phe-His-ACHPA-IleNHC(CH₂OH)₂CH₃로 이루어진 군으로부터 선택되는 레닌 억제제 펩티드인 착물.
제81항에 있어서, 상기 Ih가 Iva-Val-Val-Sta-Ala-Sta, Boc-Phe-His-Sta-Ile-AMP, Boc-Phe-HIs-Sta-Ala-Sta-OMe, Boc-Phe-His-Sta-Leu-NHCH₂Ph, Boc-Phe-His-ACHPA-Leu-AMB, Boc-Phe-His-Sta-Leu-AMB, Boc-Pro-Phe-His-Sta-Ile-AMP, Iva-Phe-Nle-Sta-Ala-Sta, Iva-His-Pro-Phe-His-Sta-Ala-Sta, Iva-His-Pro-Phe-His-Sta-Leu-Phe-NH₂, Ac-His-Pro-Phe-Val-Sta-Leu-Phe-NH₂, Ac-His-Pro-Phe-His-ACHPA-Leu-Phe-NH₂, Ac-Trp-Pro-Phe-His-Sta-Ile-NH₂, Ac-(HCO-Trp)-Pro-Phe-His-Sta-Ile-NH₂, Pro-His-Pro-Phe-His-Sta-Ile-His-D-Lys, Pro-His-Pro-Phe-His-Sta-Ile-Phe-NH₂, Z-Arg-Arg-Pro-Phe-His-Sta-Ile-His-Lys(Boc)-OMe, Pro-His-Pro-Phe-His-Phe-Phe-Val-Tyr-Lys, His-Pro-Phe-His-Leu-D-Leu-Val-Tyr-OH, Pro-His-Pro-Phe-His-Leu(CH₂NH)Val-Ile-His-Lys(H-142), Boc-Phe-His-CHa-(CH₂NH)Val-NH₂(S)-Me(Bu), Pro-His-Pro-Phe-His-Leu-PHe-Val-Tyr-OH, Boc-His-Pro-Phe-His-Leu(CH(OH)CH₂)Val-Ile-His-OH(H-261) 및 PEC-Phe-His-ACHPA-IleNHC(CH₂OH)₂CH₃로 이루어진 군으로부터 선택되는 레닌 억제제 펩티드이고, Pr이 알부민인 착물.
제81항에 있어서, 상기 링커 L1 또는 L2가 Ih를 Pr에 공유 연결시키는 작용기를 둘 이상 포함하는 착물.
제81항에 있어서, 상기 링커 L1 또는 L2가 연장된 기간 동안 인간 혈청 내 가수분해적으로 안정적인 착물.
제81항에 있어서, 상기 링커 L1 또는 L2가 8 시간 내지 30일의 반감기 동안 인간 혈청 내에서 안정적인 착물.
제81항에 있어서, 상기 링커 L1 또는 L2가 아실옥시메틸케톤, 아지리딘, 디아조메틸케톤, 에폭사이드, 이오도-, 브로모- 또는 클로로아세트아미드, α-할로에스테르, 할로케톤, 설포늄, 클로로에틸설파이드, O-알킬이소우레아, 알킬 할라이드, 비닐술폰, 아크릴아미드, 아크릴레이트, 비닐피리딘, 유기금속 화합물, 아릴디설파이드, 티오설포네이트, 알데히드, 니트릴, α-디케톤, α-케토아미드, α-케토에스테르, 디아미노케톤, 세미카르바존 및 디하이드라지드로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물의 유도체인 착물.
제81항에 있어서, 상기 링커 L1 또는 L2가 아지도벤조일 하이드라지드, N-[4-(p-아지도살리실아미노)부틸]-3'-(2'-피리딜디티오)프로피온아미드, 비스설포석신이미딜 수버레이트, 디메틸 아디피미데이트, 디석신이미딜 타르트레이트, N-이말레이미도부티릴옥시석신이미드 에스테르, N-하이드록시 설포석신이미딜-4-아지도벤조에이트, N-석신이미딜[4-아지도페닐]-1,3'-디티오프로피오네이트, N-석신이미딜[4-이오도아세틸]아미노벤조에이트, 글루타르알데하이드, 석신이미딜 4-[N-말레이미도메틸]사이클로헥산-1-카르복실레이트, N-하이드록시설포석신이미드, 말레이미드-벤조일-석신이미드, γ-말레이미도-부티릴옥시 석신이미드 에스테르, 말레이미도프로피온산, N-하이드록시석신이미드, 이소시아네이트, 티오에스테르, 티오노카르복실산 에스테르, 이미노 에스테르, 카르보디이미드, 무수물 및 카보네이트 에스테르로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물의 유도체인 착물.
제81항에 있어서, 상기 단백지이 적혈구세포 및 IgM 및 IgG와 같은 면역글로불린, 혈청 알부민, 트랜스페린, p90 및 p38으로 이루어진 군으로부터 선택된 착물.
제100항에 있어서, 상기 단백질이 알부민인 착물.
제101항에 있어서, 상기 알부민이 건조 물질 기재상에 10% 이상 순수한 HSA 또는 재조합 HSA인 착물.
제101항에 있어서, 상기 연결이 인간 알부민의 Cys-34에 대한 것인 착물.
제101항에 있어서, 상기 연결이 인간 알부민의 리신에 대한 것인 착물.
제81항에 있어서, m이 1이고, n이 1 또는 2이고, 단백질이 HSA 또는 재조합 HSA인 착물.
제81항에 있어서, n이 1이고, 상기 단백질이 HSA 또는 재조합 HSA이고, 착물이 30% 이상의 순도로 더 정제되는 착물.
제81항에 있어서, m이 1이고, n이 2이고, 단백질이 HSA 또는 재조합 HSA인 착물.
제81항에 있어서, 상기 착물이 화학양론적 양의 (Ih)_m-L1을 Pr에 연결하거나, 화학양론적 양의 Ih를 L2-(Pr)_o에 결합하는 것에 의해 제조되는 착물.
제81항에 있어서, 상기 착물이 Pr 혼합물을 (Ih)_m-L1을 적어도 약 1.3:1의 비율로 결합하는 것에 의해 제조되는 착물.
제81항에 있어서, L1 및 L2가 부재이고, 상기 착물이 활성화된 Ih 중간체를 형성하고 이어 상기 활성화된 Ih 중간체를 Pr과 축합시켜 제조되는 착물.
제110항에 있어서, 상기 활성화된 Ih 중간체가 혼합된 무수물 또는 N,N'-카르보닐디이미다졸 제제로부터 제조되는 착물.
제108항 내지 111항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 착물이 약 30% 이상의 순도로 더 정제되는 착물.
제108항에 있어서, 상기 레닌 억제제가 질량이 약 1000 DA 미만인 유사펩티드인 착물.
제81항의 착물 및 생리학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물.
제114항에 있어서, 비경구 투여용으로 제형화된 조성물.
제115항에 있어서, 용액, 사용전에 용액과 결합하는 건조 물질, 현탁액, 유화액 및 액상 농축물로 이루어진 군으로부터 선택되는 조성물.
포유류 숙주의 혈류에 제81항의 단리 복합체 착물을 투여하는 단계를 포함하는 생체내 레닌 활성을 억제하는 방법으로서,

상기 착물이 단백질과 결합하여 안정적 공유결합을 형성하는 반응성 작용기를 하나 이상 갖는 링커에 레닌 억제제를 부착시킴으로써 형성되고;

상기 단리된 복합체 착물이 비-컨쥬게이트 레닌 억제제에 비해 더 오랜 기간 동안 혈류 내에 유효한 치료효과를 유지할 수 있는 양으로 투여되는 방법.
제117항에 있어서, 상기 착물이 제100항의 착물인 방법.
제117항에 있어서, 상기 단백질이 HSA 또는 재조합 HSA인 방법.
제117항에 있어서, 상기 링커가 아실옥시메틸케톤, 아지리딘, 디아조메틸케톤, 에폭사이드, 이오도-, 브로모- 또는 클로로아세트아미드, α-할로에스테르, α-할로케톤, 설포늄, 클로로에틸설파이드, O-알킬이소우레아, 알킬 할라이드, 비닐술폰, 아크릴아미드, 아크릴레이트, 비닐피리딘, 유기금속 화합물, 아릴디설파이드, 티오설포네이트, 알데히드, 니트릴, α-디케톤, α-케토아미드, α-케토에스테르, 디아미노케톤, 세미카르바존 및 디하이드라지드로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물인 방법.
포유류 숙주의 혈류에 제81항의 단리 복합체 착물을 레닌 억제에 유효한 양을 제공하기에 충분한 양으로 투여하되, 상기 착물이 비결합 레닌 억제제의 수명에 비해 더 오랜 기간 동안 혈류 내에 유지되는 생체내 레닌 활성을 억제하는 방법.
숙주에 레닌 활성을 억제하는 방법으로서, 상기 방법이

a) 화합물 Ih-L1 또는 Ih-L2 (단, Ih는 60 kD 미만의 질량을 갖는 펩티드 항바이러스성 화합물이고, L1 또는 L2가 AV에 공유적으로 결합되는 링커임)을 제조하는 단계;

b) 상기 화합물 Ih-L1 또는 Ih-L2이 단리 단백질에 공유적으로 결합해 제18항의 단백질 착물을 형성하기에 충분한 시간 동안 상기 화합물 Ih-L1 또는 Ih-L2를 단리 단백질로 생체외 처리하는 단계; 및

c) 상기 처리된 단백질 착물을 숙주에 투여하는 단계를 포함하는 방법.
제122항에 있어서, 상기 단백질이 알부민인 방법.
제123항에 있어서, 상기 알부민이 HSA 또는 재조합 HSA인 방법.
제123항에 있어서, 알부민을 화합물 Ih-L1 또는 Ih-L2로 처리하기 전에 혈액으로부터 정제되고 단리된 혈액으로부터 알부민이 얻어지는 방법.
제125항에 있어서, 상기 알부민이 건조 물질 기재상에 10% 이상의 순도로 정제되는 방법.
제125항에 있어서, 상기 알부민이 95% 이상의 순도로 정제되는 방법.
숙주에 레닌 활성을 억제하는 방법으로서, 상기 방법이

a) 화합물 Ih-L1 또는 Ih-L2 (단, AV는 60 kD 미만의 질량을 갖는 펩티드 항바이러스성 화합물이고, L1 또는 L2가 AV에 공유적으로 결합되는 링커임)을 제조하는 단계;

b) 상기 화합물 Ih-L1 또는 Ih-L2이 하나 이상의 단리 단백질에 공유적으로 결합해 제81항의 개질 단백질 착물 하나 이상을 형성하기에 충분한 시간 동안 상기 화합물 Ih-L1 또는 Ih-L2를 하나 이상의 단백질 Pr로 생체외 처리하는 단계; 및

c) 상기 개질된 단백질 또는 단백질들을 숙주에 투여하는 단계를 포함하는 방법.
제128항에 있어서, 상기 단백질이 알부민인 방법.
제129항에 있어서, 상기 알부민이 화합물 Ih-L1 또는 Ih-L2로 처리하기 전에 혈액으로부터 정제되고 단리된 혈액으로부터 얻어지는 방법.
제129항에 있어서, 상기 알부민이 HSA 또는 재조합 HSA인 방법.
치료학적 유효량의 제81항의 착물, 생리학적으로 허용가능한 그 염, 및 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함하는 약학 조성물.
치료학적 유효량의 제132항의 조성물을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 환자의 혈압 감소 방법.
제133항에 있어서, 상기 환자는 고혈압 환자인 방법.
제134항에 있어서, 상기 환자는 미약한, 보통의 또는 심각한 고혈압 환자인 방법.
거대분자 담체에 공유 컨쥬게이트된 약학척 활성 부분을 포함하는 단리 화합물로서,

상기 담체가 약학적으로 안정적이고,

상기 약학적 활성 부분과 상기 담체간의 연결이 생체내 안정적이고,

상기 온전한 화합물이 상기 약학적 활성 부분의 약학적 활성을 실질적으로 보유하고,

포유류에게 투여될 때 상기 화합물의 활성 반감기가 상기 약학적 활성 부분의 약 2배 이상인 단리 화합물.
제136항에 있어서, 상기 거대분자 담체가 단백질인 화합물.
제136항에 있어서, 상기 거대분자 담체가 상기 포유류에 상동적 기원의 알부민인 화합물.
제138항에 있어서, 상기 알부민이 인간 혈청 알부민인 화합물.
제136항에 있어서, 상기 약학적 활성 부분이 링커 부분을 통해 상기 담체에 컨쥬게이트되는 화합물.
제136항에 있어서, 상기 약학적 활성 부분이 상기 담체에 직접적으로 연결된 화합물.
제136항에 있어서, 두 개 이상의 약학적 활성 부분 분자들이 상기 담체에 컨쥬게이트된 화합물.
제137항에 있어서, 상기 담체에 대한 연결이 상기 담체상의 리신 측쇄를 통하는 것인 화합물.
제137항에 있어서, 상기 담체에 대한 연결이 상기 담체상의 시스테인 측쇄를 통하는 것인 화합물.
제136항에 있어서, 상기 담체가 HSA이고 상기 연결이 HSA의 C34에 대한 것인 화합물.