KR20050084210A - 수생 종 유래의 형광 단백질 - Google Patents
수생 종 유래의 형광 단백질 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20050084210A KR20050084210A KR1020057010402A KR20057010402A KR20050084210A KR 20050084210 A KR20050084210 A KR 20050084210A KR 1020057010402 A KR1020057010402 A KR 1020057010402A KR 20057010402 A KR20057010402 A KR 20057010402A KR 20050084210 A KR20050084210 A KR 20050084210A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- nucleic acid
- fluorescent protein
- lys
- amino acid
- gly
- Prior art date
Links
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 title claims abstract description 85
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 title claims abstract description 85
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 74
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 70
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 69
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 69
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 45
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 28
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 28
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 claims abstract description 28
- 108010054624 red fluorescent protein Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 57
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims description 35
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 34
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 27
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 23
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 23
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 23
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 21
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 20
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 18
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 10
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 7
- 108091005971 Wild-type GFP Proteins 0.000 claims description 6
- 241000252212 Danio rerio Species 0.000 claims description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 5
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 5
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 5
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 5
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 5
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 4
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 claims description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 16
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims 2
- 241000006867 Discosoma Species 0.000 abstract description 22
- 241000894159 Montastraea cavernosa Species 0.000 abstract description 4
- 241000006271 Discosoma sp. Species 0.000 abstract description 2
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 abstract 1
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 abstract 1
- 238000011896 sensitive detection Methods 0.000 abstract 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 43
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 39
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 18
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 13
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 12
- 108010017391 lysylvaline Proteins 0.000 description 12
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 11
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 11
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 11
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 11
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 10
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 10
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 9
- 238000010183 spectrum analysis Methods 0.000 description 9
- VCSABYLVNWQYQE-UHFFFAOYSA-N Ala-Lys-Lys Natural products NCCCCC(NC(=O)C(N)C)C(=O)NC(CCCCN)C(O)=O VCSABYLVNWQYQE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- VIINVRPKMUZYOI-DCAQKATOSA-N Arg-Met-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O VIINVRPKMUZYOI-DCAQKATOSA-N 0.000 description 8
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- MTFVYKQRLXYAQN-LAEOZQHASA-N Ile-Glu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O MTFVYKQRLXYAQN-LAEOZQHASA-N 0.000 description 8
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 description 8
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 8
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 8
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 8
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 8
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 8
- 241000894007 species Species 0.000 description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 6
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 6
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 6
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 6
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 5
- 238000002866 fluorescence resonance energy transfer Methods 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 5
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- GJLXVWOMRRWCIB-MERZOTPQSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-acetamido-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanamide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)C1=CC=C(O)C=C1 GJLXVWOMRRWCIB-MERZOTPQSA-N 0.000 description 4
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 4
- GWFSQQNGMPGBEF-GHCJXIJMSA-N Ala-Asp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N GWFSQQNGMPGBEF-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 4
- CBCCCLMNOBLBSC-XVYDVKMFSA-N Ala-His-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CBCCCLMNOBLBSC-XVYDVKMFSA-N 0.000 description 4
- AWZKCUCQJNTBAD-SRVKXCTJSA-N Ala-Leu-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN AWZKCUCQJNTBAD-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- VCSABYLVNWQYQE-SRVKXCTJSA-N Ala-Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O VCSABYLVNWQYQE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- WQKAQKZRDIZYNV-VZFHVOOUSA-N Ala-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O WQKAQKZRDIZYNV-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 4
- XQNRANMFRPCFFW-GCJQMDKQSA-N Ala-Thr-Asn Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N)O XQNRANMFRPCFFW-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 4
- XSLGWYYNOSUMRM-ZKWXMUAHSA-N Ala-Val-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XSLGWYYNOSUMRM-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- KMSHNDWHPWXPEC-BQBZGAKWSA-N Arg-Asp-Gly Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O KMSHNDWHPWXPEC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 4
- FKQITMVNILRUCQ-IHRRRGAJSA-N Arg-Phe-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FKQITMVNILRUCQ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 4
- KZXPVYVSHUJCEO-ULQDDVLXSA-N Arg-Phe-Lys Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 KZXPVYVSHUJCEO-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 4
- OWSMKCJUBAPHED-JYJNAYRXSA-N Arg-Pro-Tyr Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 OWSMKCJUBAPHED-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 4
- JEPNYDRDYNSFIU-QXEWZRGKSA-N Asn-Arg-Val Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(O)=O JEPNYDRDYNSFIU-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 4
- GWNMUVANAWDZTI-YUMQZZPRSA-N Asn-Gly-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(=O)N)N GWNMUVANAWDZTI-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- FTSAJSADJCMDHH-CIUDSAMLSA-N Asn-Lys-Asp Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N FTSAJSADJCMDHH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 4
- QDXQWFBLUVTOFL-FXQIFTODSA-N Asn-Met-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N QDXQWFBLUVTOFL-FXQIFTODSA-N 0.000 description 4
- BCADFFUQHIMQAA-KKHAAJSZSA-N Asn-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O BCADFFUQHIMQAA-KKHAAJSZSA-N 0.000 description 4
- VHQOCWWKXIOAQI-WDSKDSINSA-N Asp-Gln-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O VHQOCWWKXIOAQI-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- POTCZYQVVNXUIG-BQBZGAKWSA-N Asp-Gly-Pro Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O POTCZYQVVNXUIG-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 4
- WSGVTKZFVJSJOG-RCOVLWMOSA-N Asp-Gly-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O WSGVTKZFVJSJOG-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 4
- HOBNTSHITVVNBN-ZPFDUUQYSA-N Asp-Ile-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N HOBNTSHITVVNBN-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 4
- SPKCGKRUYKMDHP-GUDRVLHUSA-N Asp-Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N SPKCGKRUYKMDHP-GUDRVLHUSA-N 0.000 description 4
- SPWXXPFDTMYTRI-IUKAMOBKSA-N Asp-Ile-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SPWXXPFDTMYTRI-IUKAMOBKSA-N 0.000 description 4
- BPTFNDRZKBFMTH-DCAQKATOSA-N Asp-Met-Lys Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N BPTFNDRZKBFMTH-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- VNXQRBXEQXLERQ-CIUDSAMLSA-N Asp-Ser-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N VNXQRBXEQXLERQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 4
- BJDHEININLSZOT-KKUMJFAQSA-N Asp-Tyr-Lys Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O BJDHEININLSZOT-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 4
- SQIARYGNVQWOSB-BZSNNMDCSA-N Asp-Tyr-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O SQIARYGNVQWOSB-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 4
- 101100505161 Caenorhabditis elegans mel-32 gene Proteins 0.000 description 4
- YYLBXQJGWOQZOU-IHRRRGAJSA-N Cys-Phe-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)[C@H](CS)N YYLBXQJGWOQZOU-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 4
- MLZRSFQRBDNJON-GUBZILKMSA-N Gln-Ala-Lys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N MLZRSFQRBDNJON-GUBZILKMSA-N 0.000 description 4
- WLODHVXYKYHLJD-ACZMJKKPSA-N Gln-Asp-Ser Chemical compound C(CC(=O)N)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N WLODHVXYKYHLJD-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 4
- RONJIBWTGKVKFY-HTUGSXCWSA-N Gln-Thr-Phe Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)O RONJIBWTGKVKFY-HTUGSXCWSA-N 0.000 description 4
- KKCUFHUTMKQQCF-SRVKXCTJSA-N Glu-Arg-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KKCUFHUTMKQQCF-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- WOSRKEJQESVHGA-CIUDSAMLSA-N Glu-Arg-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WOSRKEJQESVHGA-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 4
- SRZLHYPAOXBBSB-HJGDQZAQSA-N Glu-Arg-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SRZLHYPAOXBBSB-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 4
- DSPQRJXOIXHOHK-WDSKDSINSA-N Glu-Asp-Gly Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O DSPQRJXOIXHOHK-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- HUFCEIHAFNVSNR-IHRRRGAJSA-N Glu-Gln-Tyr Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 HUFCEIHAFNVSNR-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 4
- PXXGVUVQWQGGIG-YUMQZZPRSA-N Glu-Gly-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N PXXGVUVQWQGGIG-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- MTAOBYXRYJZRGQ-WDSKDSINSA-N Glu-Gly-Asp Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O MTAOBYXRYJZRGQ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- CAVMESABQIKFKT-IUCAKERBSA-N Glu-Gly-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N CAVMESABQIKFKT-IUCAKERBSA-N 0.000 description 4
- INGJLBQKTRJLFO-UKJIMTQDSA-N Glu-Ile-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O INGJLBQKTRJLFO-UKJIMTQDSA-N 0.000 description 4
- ATVYZJGOZLVXDK-IUCAKERBSA-N Glu-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O ATVYZJGOZLVXDK-IUCAKERBSA-N 0.000 description 4
- JDUKCSSHWNIQQZ-IHRRRGAJSA-N Glu-Phe-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O JDUKCSSHWNIQQZ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 4
- CHDWDBPJOZVZSE-KKUMJFAQSA-N Glu-Phe-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O CHDWDBPJOZVZSE-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 4
- KKBWDNZXYLGJEY-UHFFFAOYSA-N Gly-Arg-Pro Natural products NCC(=O)NC(CCNC(=N)N)C(=O)N1CCCC1C(=O)O KKBWDNZXYLGJEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- TZOVVRJYUDETQG-RCOVLWMOSA-N Gly-Asp-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CN TZOVVRJYUDETQG-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 4
- SABZDFAAOJATBR-QWRGUYRKSA-N Gly-Cys-Phe Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O SABZDFAAOJATBR-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 4
- DHDOADIPGZTAHT-YUMQZZPRSA-N Gly-Glu-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N DHDOADIPGZTAHT-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- XTQFHTHIAKKCTM-YFKPBYRVSA-N Gly-Glu-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O XTQFHTHIAKKCTM-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- PDAWDNVHMUKWJR-ZETCQYMHSA-N Gly-Gly-His Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 PDAWDNVHMUKWJR-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 4
- MVORZMQFXBLMHM-QWRGUYRKSA-N Gly-His-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CN=CN1 MVORZMQFXBLMHM-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 4
- UUYBFNKHOCJCHT-VHSXEESVSA-N Gly-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)CN UUYBFNKHOCJCHT-VHSXEESVSA-N 0.000 description 4
- FHQRLHFYVZAQHU-IUCAKERBSA-N Gly-Lys-Gln Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O FHQRLHFYVZAQHU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 4
- PDUHNKAFQXQNLH-ZETCQYMHSA-N Gly-Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)NCC(O)=O PDUHNKAFQXQNLH-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 4
- YLEIWGJJBFBFHC-KBPBESRZSA-N Gly-Phe-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=CC=C1 YLEIWGJJBFBFHC-KBPBESRZSA-N 0.000 description 4
- HFPVRZWORNJRRC-UWVGGRQHSA-N Gly-Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CN HFPVRZWORNJRRC-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 4
- BMWFDYIYBAFROD-WPRPVWTQSA-N Gly-Pro-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CN BMWFDYIYBAFROD-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 4
- POJJAZJHBGXEGM-YUMQZZPRSA-N Gly-Ser-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN POJJAZJHBGXEGM-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- CUVBTVWFVIIDOC-YEPSODPASA-N Gly-Thr-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)CN CUVBTVWFVIIDOC-YEPSODPASA-N 0.000 description 4
- YDIDLLVFCYSXNY-RCOVLWMOSA-N Gly-Val-Asn Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)CN YDIDLLVFCYSXNY-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 4
- KSOBNUBCYHGUKH-UWVGGRQHSA-N Gly-Val-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CN KSOBNUBCYHGUKH-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 4
- RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N H-Lys-Trp-OH Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- AFPFGFUGETYOSY-HGNGGELXSA-N His-Ala-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AFPFGFUGETYOSY-HGNGGELXSA-N 0.000 description 4
- JBJNKUOMNZGQIM-PYJNHQTQSA-N His-Arg-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O JBJNKUOMNZGQIM-PYJNHQTQSA-N 0.000 description 4
- PMWSGVRIMIFXQH-KKUMJFAQSA-N His-His-Leu Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)C1=CN=CN1 PMWSGVRIMIFXQH-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 4
- FRDFAWHTPDKRHG-ULQDDVLXSA-N His-Tyr-Arg Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)C1=CN=CN1 FRDFAWHTPDKRHG-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 4
- WTOAPTKSZJJWKK-HTFCKZLJSA-N Ile-Cys-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)O)N WTOAPTKSZJJWKK-HTFCKZLJSA-N 0.000 description 4
- VOBYAKCXGQQFLR-LSJOCFKGSA-N Ile-Gly-Val Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VOBYAKCXGQQFLR-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 4
- YBGTWSFIGHUWQE-MXAVVETBSA-N Ile-His-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)CC)CC1=CN=CN1 YBGTWSFIGHUWQE-MXAVVETBSA-N 0.000 description 4
- YSGBJIQXTIVBHZ-AJNGGQMLSA-N Ile-Lys-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O YSGBJIQXTIVBHZ-AJNGGQMLSA-N 0.000 description 4
- GLYJPWIRLBAIJH-FQUUOJAGSA-N Ile-Lys-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N GLYJPWIRLBAIJH-FQUUOJAGSA-N 0.000 description 4
- GLYJPWIRLBAIJH-UHFFFAOYSA-N Ile-Lys-Pro Natural products CCC(C)C(N)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)N1CCCC1C(O)=O GLYJPWIRLBAIJH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ZUWSVOYKBCHLRR-MGHWNKPDSA-N Ile-Tyr-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N ZUWSVOYKBCHLRR-MGHWNKPDSA-N 0.000 description 4
- HODVZHLJUUWPKY-STECZYCISA-N Ile-Tyr-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)CC)CC1=CC=C(O)C=C1 HODVZHLJUUWPKY-STECZYCISA-N 0.000 description 4
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- KTFHTMHHKXUYPW-ZPFDUUQYSA-N Leu-Asp-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O KTFHTMHHKXUYPW-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 4
- ZYLJULGXQDNXDK-GUBZILKMSA-N Leu-Gln-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O ZYLJULGXQDNXDK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 4
- QNBVTHNJGCOVFA-AVGNSLFASA-N Leu-Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O QNBVTHNJGCOVFA-AVGNSLFASA-N 0.000 description 4
- ZRHDPZAAWLXXIR-SRVKXCTJSA-N Leu-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZRHDPZAAWLXXIR-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- RZXLZBIUTDQHJQ-SRVKXCTJSA-N Leu-Lys-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O RZXLZBIUTDQHJQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- LVTJJOJKDCVZGP-QWRGUYRKSA-N Leu-Lys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O LVTJJOJKDCVZGP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 4
- UCBPDSYUVAAHCD-UWVGGRQHSA-N Leu-Pro-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O UCBPDSYUVAAHCD-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 4
- SBANPBVRHYIMRR-GARJFASQSA-N Leu-Ser-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N SBANPBVRHYIMRR-GARJFASQSA-N 0.000 description 4
- SBANPBVRHYIMRR-UHFFFAOYSA-N Leu-Ser-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CO)C(=O)N1CCCC1C(O)=O SBANPBVRHYIMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N Leu-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 4
- VJGQRELPQWNURN-JYJNAYRXSA-N Leu-Tyr-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O VJGQRELPQWNURN-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 4
- NTBFKPBULZGXQL-KKUMJFAQSA-N Lys-Asp-Tyr Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 NTBFKPBULZGXQL-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 4
- GNLJXWBNLAIPEP-MELADBBJSA-N Lys-His-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)C(=O)O GNLJXWBNLAIPEP-MELADBBJSA-N 0.000 description 4
- RBEATVHTWHTHTJ-KKUMJFAQSA-N Lys-Leu-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O RBEATVHTWHTHTJ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 4
- WRODMZBHNNPRLN-SRVKXCTJSA-N Lys-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WRODMZBHNNPRLN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- PLDJDCJLRCYPJB-VOAKCMCISA-N Lys-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O PLDJDCJLRCYPJB-VOAKCMCISA-N 0.000 description 4
- QQPSCXKFDSORFT-IHRRRGAJSA-N Lys-Lys-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN QQPSCXKFDSORFT-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 4
- MTBBHUKKPWKXBT-ULQDDVLXSA-N Lys-Met-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O MTBBHUKKPWKXBT-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 4
- RPWTZTBIFGENIA-VOAKCMCISA-N Lys-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O RPWTZTBIFGENIA-VOAKCMCISA-N 0.000 description 4
- CAVRAQIDHUPECU-UVOCVTCTSA-N Lys-Thr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CAVRAQIDHUPECU-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 4
- XGZDDOKIHSYHTO-SZMVWBNQSA-N Lys-Trp-Glu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 XGZDDOKIHSYHTO-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 4
- NYTDJEZBAAFLLG-IHRRRGAJSA-N Lys-Val-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O NYTDJEZBAAFLLG-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 4
- UAPZLLPGGOOCRO-IHRRRGAJSA-N Met-Asn-Phe Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)N UAPZLLPGGOOCRO-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 4
- OXHSZBRPUGNMKW-DCAQKATOSA-N Met-Gln-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O OXHSZBRPUGNMKW-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- MHQXIBRPDKXDGZ-ZFWWWQNUSA-N Met-Gly-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(O)=O)=CNC2=C1 MHQXIBRPDKXDGZ-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 4
- CRVSHEPROQHVQT-AVGNSLFASA-N Met-Met-Lys Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N CRVSHEPROQHVQT-AVGNSLFASA-N 0.000 description 4
- WRXOPYNEKGZWAZ-FXQIFTODSA-N Met-Ser-Cys Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O WRXOPYNEKGZWAZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 4
- GGXZOTSDJJTDGB-GUBZILKMSA-N Met-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O GGXZOTSDJJTDGB-GUBZILKMSA-N 0.000 description 4
- NSMXRFMGZYTFEX-KJEVXHAQSA-N Met-Thr-Tyr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)N)O NSMXRFMGZYTFEX-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 4
- WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N N-L-alanyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 4
- 108010087066 N2-tryptophyllysine Proteins 0.000 description 4
- ULECEJGNDHWSKD-QEJZJMRPSA-N Phe-Ala-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ULECEJGNDHWSKD-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 4
- NOFBJKKOPKJDCO-KKXDTOCCSA-N Phe-Ala-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O NOFBJKKOPKJDCO-KKXDTOCCSA-N 0.000 description 4
- CUMXHKAOHNWRFQ-BZSNNMDCSA-N Phe-Asp-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 CUMXHKAOHNWRFQ-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 4
- ABQFNJAFONNUTH-FHWLQOOXSA-N Phe-Gln-Tyr Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)O)N ABQFNJAFONNUTH-FHWLQOOXSA-N 0.000 description 4
- XZQYIJALMGEUJD-OEAJRASXSA-N Phe-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O XZQYIJALMGEUJD-OEAJRASXSA-N 0.000 description 4
- QARPMYDMYVLFMW-KKUMJFAQSA-N Phe-Pro-Glu Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 QARPMYDMYVLFMW-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 4
- NJJBATPLUQHRBM-IHRRRGAJSA-N Phe-Pro-Ser Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O NJJBATPLUQHRBM-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 4
- JSGWNFKWZNPDAV-YDHLFZDLSA-N Phe-Val-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 JSGWNFKWZNPDAV-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 4
- BQMFWUKNOCJDNV-HJWJTTGWSA-N Phe-Val-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O BQMFWUKNOCJDNV-HJWJTTGWSA-N 0.000 description 4
- DBALDZKOTNSBFM-FXQIFTODSA-N Pro-Ala-Asn Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O DBALDZKOTNSBFM-FXQIFTODSA-N 0.000 description 4
- DEDANIDYQAPTFI-IHRRRGAJSA-N Pro-Asp-Tyr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O DEDANIDYQAPTFI-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 4
- NMELOOXSGDRBRU-YUMQZZPRSA-N Pro-Glu-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 NMELOOXSGDRBRU-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- MCWHYUWXVNRXFV-RWMBFGLXSA-N Pro-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2 MCWHYUWXVNRXFV-RWMBFGLXSA-N 0.000 description 4
- ZUZINZIJHJFJRN-UBHSHLNASA-N Pro-Phe-Ala Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CC=CC=C1 ZUZINZIJHJFJRN-UBHSHLNASA-N 0.000 description 4
- JIWJRKNYLSHONY-KKUMJFAQSA-N Pro-Phe-Glu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O JIWJRKNYLSHONY-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 4
- JXVXYRZQIUPYSA-NHCYSSNCSA-N Pro-Val-Gln Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O JXVXYRZQIUPYSA-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 4
- 108010025216 RVF peptide Proteins 0.000 description 4
- XERQKTRGJIKTRB-CIUDSAMLSA-N Ser-His-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)N)CC1=CN=CN1 XERQKTRGJIKTRB-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 4
- HDBOEVPDIDDEPC-CIUDSAMLSA-N Ser-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O HDBOEVPDIDDEPC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 4
- KKKVOZNCLALMPV-XKBZYTNZSA-N Ser-Thr-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KKKVOZNCLALMPV-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 4
- XYFISNXATOERFZ-OSUNSFLBSA-N Thr-Ile-Val Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)N XYFISNXATOERFZ-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 4
- JLNMFGCJODTXDH-WEDXCCLWSA-N Thr-Lys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O JLNMFGCJODTXDH-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 4
- YJVJPJPHHFOVMG-VEVYYDQMSA-N Thr-Met-Asp Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N)O YJVJPJPHHFOVMG-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 4
- BCYUHPXBHCUYBA-CUJWVEQBSA-N Thr-Ser-His Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(O)=O BCYUHPXBHCUYBA-CUJWVEQBSA-N 0.000 description 4
- LECUEEHKUFYOOV-ZJDVBMNYSA-N Thr-Thr-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O LECUEEHKUFYOOV-ZJDVBMNYSA-N 0.000 description 4
- KZTLZZQTJMCGIP-ZJDVBMNYSA-N Thr-Val-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KZTLZZQTJMCGIP-ZJDVBMNYSA-N 0.000 description 4
- DVAAUUVLDFKTAQ-VHWLVUOQSA-N Trp-Asp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N DVAAUUVLDFKTAQ-VHWLVUOQSA-N 0.000 description 4
- PKUJMYZNJMRHEZ-XIRDDKMYSA-N Trp-Glu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O PKUJMYZNJMRHEZ-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 4
- CDKZJGMPZHPAJC-ULQDDVLXSA-N Tyr-Leu-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 CDKZJGMPZHPAJC-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 4
- JAGGEZACYAAMIL-CQDKDKBSSA-N Tyr-Lys-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N JAGGEZACYAAMIL-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 4
- GYKDRHDMGQUZPU-MGHWNKPDSA-N Tyr-Lys-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N GYKDRHDMGQUZPU-MGHWNKPDSA-N 0.000 description 4
- AUZADXNWQMBZOO-JYJNAYRXSA-N Tyr-Pro-Arg Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 AUZADXNWQMBZOO-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 4
- MNWINJDPGBNOED-ULQDDVLXSA-N Tyr-Pro-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 MNWINJDPGBNOED-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 4
- PLVVHGFEMSDRET-IHPCNDPISA-N Tyr-Ser-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC3=CC=C(C=C3)O)N PLVVHGFEMSDRET-IHPCNDPISA-N 0.000 description 4
- UUJHRSTVQCFDPA-UFYCRDLUSA-N Tyr-Tyr-Val Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 UUJHRSTVQCFDPA-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 4
- HZYOWMGWKKRMBZ-BYULHYEWSA-N Val-Asp-Asp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N HZYOWMGWKKRMBZ-BYULHYEWSA-N 0.000 description 4
- VFOHXOLPLACADK-GVXVVHGQSA-N Val-Gln-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](C(C)C)N VFOHXOLPLACADK-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 4
- SDUBQHUJJWQTEU-XUXIUFHCSA-N Val-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N SDUBQHUJJWQTEU-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 4
- AEMPCGRFEZTWIF-IHRRRGAJSA-N Val-Leu-Lys Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O AEMPCGRFEZTWIF-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 4
- HPANGHISDXDUQY-ULQDDVLXSA-N Val-Lys-Phe Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)N HPANGHISDXDUQY-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 4
- OFQGGTGZTOTLGH-NHCYSSNCSA-N Val-Met-Gln Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N OFQGGTGZTOTLGH-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 4
- ZNGPROMGGGFOAA-JYJNAYRXSA-N Val-Tyr-Val Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 ZNGPROMGGGFOAA-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 4
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 4
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 4
- 108010092854 aspartyllysine Proteins 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010006664 gamma-glutamyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 4
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 4
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010072405 glycyl-aspartyl-glycine Proteins 0.000 description 4
- 108010038983 glycyl-histidyl-lysine Proteins 0.000 description 4
- 108010020688 glycylhistidine Proteins 0.000 description 4
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 4
- 108010003700 lysyl aspartic acid Proteins 0.000 description 4
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 description 4
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 4
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 4
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 4
- 108010012581 phenylalanylglutamate Proteins 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 108010004914 prolylarginine Proteins 0.000 description 4
- 108010053725 prolylvaline Proteins 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 108010048397 seryl-lysyl-leucine Proteins 0.000 description 4
- 108010071207 serylmethionine Proteins 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 108700004896 tripeptide FEG Proteins 0.000 description 4
- 108010071635 tyrosyl-prolyl-arginine Proteins 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 3
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 3
- 238000000295 emission spectrum Methods 0.000 description 3
- 238000000695 excitation spectrum Methods 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 3
- 241000243321 Cnidaria Species 0.000 description 2
- IIGHQOPGMGKDMT-SRVKXCTJSA-N Cys-Asp-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N IIGHQOPGMGKDMT-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- YZFCGHIBLBDZDA-ZLUOBGJFSA-N Cys-Asp-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YZFCGHIBLBDZDA-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- 241001050985 Disco Species 0.000 description 2
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000204352 Fungiidae Species 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 2
- TYYBJUYSTWJHGO-ZKWXMUAHSA-N Ser-Asn-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O TYYBJUYSTWJHGO-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- SWSRFJZZMNLMLY-ZKWXMUAHSA-N Ser-Asp-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O SWSRFJZZMNLMLY-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000003444 anaesthetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000012742 biochemical analysis Methods 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 2
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 230000010856 establishment of protein localization Effects 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013492 plasmid preparation Methods 0.000 description 2
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 2
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 3,7-bis(dimethylamino)phenothiazin-5-ium Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000242764 Aequorea victoria Species 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 1
- 241000242757 Anthozoa Species 0.000 description 1
- 241000726103 Atta Species 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014653 Carica parviflora Nutrition 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 241001137251 Corvidae Species 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 241001512730 Discosoma striata Species 0.000 description 1
- 241000255601 Drosophila melanogaster Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N L-Aspartic acid Natural products OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 235000013878 L-cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 description 1
- 229930182821 L-proline Natural products 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000713869 Moloney murine leukemia virus Species 0.000 description 1
- 241000230216 Montastraea Species 0.000 description 1
- 206010068052 Mosaicism Diseases 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 1
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 102000009609 Pyrophosphatases Human genes 0.000 description 1
- 108010009413 Pyrophosphatases Proteins 0.000 description 1
- 101710086015 RNA ligase Proteins 0.000 description 1
- 230000006819 RNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000242743 Renilla reniformis Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000242583 Scyphozoa Species 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 1
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700029229 Transcriptional Regulatory Elements Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000011449 brick Substances 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 210000005056 cell body Anatomy 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000008406 cosmetic ingredient Substances 0.000 description 1
- KAATUXNTWXVJKI-UHFFFAOYSA-N cypermethrin Chemical compound CC1(C)C(C=C(Cl)Cl)C1C(=O)OC(C#N)C1=CC=CC(OC=2C=CC=CC=2)=C1 KAATUXNTWXVJKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229960002086 dextran Drugs 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000005183 environmental health Effects 0.000 description 1
- 230000005281 excited state Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- PGBHMTALBVVCIT-VCIWKGPPSA-N framycetin Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O2)N)O[C@@H]1CO PGBHMTALBVVCIT-VCIWKGPPSA-N 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 1
- 239000011491 glass wool Substances 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- BRHPBVXVOVMTIQ-ZLELNMGESA-N l-leucine l-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O.CC(C)C[C@H](N)C(O)=O BRHPBVXVOVMTIQ-ZLELNMGESA-N 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 1
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000004001 molecular interaction Effects 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 229940053050 neomycin sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 150000004713 phosphodiesters Chemical group 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 1
- 230000006916 protein interaction Effects 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 230000010837 receptor-mediated endocytosis Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000013535 sea water Substances 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035938 sexual maturation Effects 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000003153 stable transfection Methods 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- FQZJYWMRQDKBQN-UHFFFAOYSA-N tricaine methanesulfonate Chemical compound CS([O-])(=O)=O.CCOC(=O)C1=CC=CC([NH3+])=C1 FQZJYWMRQDKBQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940013180 tricaine methanesulfonate Drugs 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 1
- 239000010981 turquoise Substances 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
- 108091005957 yellow fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
- A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/43504—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates
- C07K14/43595—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from coelenteratae, e.g. medusae
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N13/00—Treatment of microorganisms or enzymes with electrical or wave energy, e.g. magnetism, sonic waves
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
- C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
- C12N5/16—Animal cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/40—Fish
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
본 발명은 네가지 신규 형광 단백질을 개시한다. 이 단백질들은 두가지 야생형 형광 단백질, 즉 악티노디스쿠스(Actinodiscus) 또는 디스코소마(Discosoma) 종(sp.) 1로부터 단리된 적색 형광 단백질(RFP) 및 몬타스트래아 카베르노사(Montastraea cavernosa)로부터 단리된 녹색 형광 단백질(GFP)로부터 유래하였다. 각 야생형 단백질로부터 두가지 돌연변이체 형태를 생성시켰다. 돌연변이된 각각의 형태는 각 야생형 형태보다 더 높은 형광 강도를 갖는다. 형광 단백질의 돌연변이체 형태는 단백질에 의해 방출된 형광이 더 민감하게 검출될 수 있도록 한다. 추가로, 돌연변이체 단백질들 중 하나는 광표백(photobleaching)에 대하여 그의 야생형 단백질보다 더 내성이 있다. 또한, 본 발명은 야생형 RFP 및 GFP의 돌연변이체 형태를 코딩하는 단리된 핵산을 포함한다.
Description
본 발명은 생화학 분석 및 시약 분야에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 형광 단백질 및 그의 사용 방법에 관한 것이다.
관련 기술의 설명
연구자들이 점점 늘어나는 다양한 생물로부터 형광 단백질 코딩 유전자를 단리하여 이 유전자를 클로닝 카세트에 포함시킴에 따라, 이용가능한 형광 리포터 유전자의 수가 증가해 왔다. 예를 들어, 클로닝 카세트를 통해 DNA에 통합될 수 있는 리포터 유전자로서 해양 생물 유래의 형광 단백질을 사용해 왔다. 이들 유전자의 생성물은 특정 광 파장 하에 형광을 발생시킴으로써, 예를 들어 개 및 원숭이 세포와 같은 이종 세포에서 단백질의 추적이 가능해진다. 이러한 특성을 갖는 가장 일반적으로 사용되는 단백질은 녹색 형광을 발생시키며, 해파리인 애쿠오레아 빅토리아(Aequorea victoria) 및 바다 팬지(sea pansy)인 레닐라 레니포르미스(Renilla reniformis)로부터 얻었다. 또한, drFP583으로서 공지된 적색 형광 단백질(RFP) 및 dsFP483으로서 공지된 청록색 형광 단백질은 인도태평양 해역(IndoPacific)의 버섯 산호들(각각, 디스코소마 종(Discosoma sp .) "레드(red)" 및 디스코소마 스트리아타(Discosoma striata))로부터 단리하였다. 디스코소마 및 악티노디스쿠스(Actinodiscus)는 둘 다 외부 골격을 생성시키지 않는 연체 화충류(anthozoan)인 버섯 산호이다. 디스코소마 속(genus)과 악티노디스쿠스 속 사이의 관계는 충분히 이해되지 않았음을 유의해야 한다. 악티노디스쿠스와 디스코소마는 둘 다 코랄림포르파리아(Corallimporpharia)(버섯) 목(order)의 구성원인 악티노디스시대(Actinodiscidae) 과(family)의 구성원들이다. 코랄림포르파리아의 분류는 불완전하게 정의되어 있으며, 따라서 악티노디스쿠스와 디스코소마의 관계의 특성은 확실하지 않다. 디스코소마와 악티노디스쿠스는 동일한 과의 상이한 속인 것으로 생각되지만, 이들은 보다 밀접한 관계에 있을 수도 있고 보다 먼 관계에 있을 수도 있다.
다양한 형광 단백질 및 시약을 이용할 수 있게 됨으로써 연구자들이 그들의 연구에서 리포터 단백질을 사용할 수 있는 기회가 증가되었다. 형광 단백질을 코딩하는 단리된 DNA를 돌연변이시켜 그의 광학 특성을 변경시켜 왔다. 예를 들어, 애쿠오레아 녹색 형광 단백질(GFP)의 아미노산 조성에서 아미노산 66의 티로신을 히스티딘으로 돌연변이시키면 이 단백질은 청색 형광을 발생시키는 단백질로 변경된다. 아미노산 64의 페닐알라닌을 류신으로 변경하는 것, 아미노산 65의 세린을 트레오닌으로 변경하는 것, 및 아미노산 145의 티로신을 페닐알라닌으로 변경하는 것은, 모 분자보다 더 밝은 강도의 형광을 발생시키고 변화된 최적 여기 조건을 갖는 GFP를 생성시킨다. 또한, 연구자들은 GFP의 아미노산 조성을 유전적으로 변경함으로써 GFP의 광 흡수/방출 특징을 변화시켜 황색 형광 단백질을 생성시킬 수 있었다.
형광 단백질은 다수의 분석법에서 사용될 수 있다. 한 예로서, 형광 공명 에너지 전달(FRET) 분석에서 형광 단백질을 사용할 수 있다. 하나의 방출 스펙트럼이 다른 것의 여기 스펙트럼과 중복되는 형광단을 사용하는 경우에 FRET가 일어난다. 형광단을 가까이 근접하여 위치시키는 경우, "공여자"가 여기되면 "수용자"로부터 방출된다. 따라서, 이러한 형광단의 쌍은 분자 상호작용을 모니터링하는데 유용하다. 형광 단백질, 예를 들어 GFP는, 그의 형광 방출 및 여기 스펙트럼이 중복되어 FRET를 허용한다면, 생체내 또는 시험관내에서 단백질:단백질 상호작용을 분석하는데 유용하다. 공여자 및 수용자 형광 단백질을 융합 단백질로서 제조할 수 있으며, 이 단백질의 상호작용을 분석한다. 이러한 유형의 GFP 사용은 고 처리량 분석에서 특히 관심의 대상이 되는데, 그 이유는 판독 결과가 직접적이고 세포내 위치결정과 독립적이기 때문이다.
애쿠오레아 유래의 GFP는 쉽게 검출가능한 녹색 형광으로 인해 유전자 발현 및 단백질 위치결정의 연구에서 널리 사용되어 왔다. 또한, 다른 형광 단백질과 유사하게 GFP는 형광을 발생시키는데 기질 또는 보조인자를 필요로 하지 않으며, 따라서 다수의 종 및 매우 다양한 세포에서 GFP를 직접 발현시키고 리포터로서 사용할 수 있다. 그러나, 연구에서는 형광색 및 강도 이외의 인자가 단백질의 유용성에 영향을 준다. 다수의 형광 단백질은 안정하기 때문에 단기간 또는 반복 반응을 측정하고자 한다면 리포터로 사용하기에 바람직하지 않다. 게다가, 축적된 단백질은 일부 포유동물 세포에 독성을 나타낼 수 있다. 예를 들어, 애쿠오레아 유래의 GFP의 어떤 형태는 아폽토시스를 유도하는 것으로 입증되었다 (Liu, et al. ). 본 발명자들이 애쿠오레아 유래의 GFP의 독성 하나만을 설명하는 것으로 한정하려는 아니지만, 이는 GFP 생성과 함께 1:1 화학량론으로 일어나는 자유 라디칼(H2O2) 형성으로 인한 것일 수 있으며, GFP가 더 높은 수준으로 발현되어 특히 독성을 나타내는 것으로 생각된다. 이러한 현상은 발색단 성숙의 직접적인 결과인 것으로 생각되며, 공지된 모든 GFP에서 일어나는 것으로 생각된다.
광표백(photobleaching)은 전술한 형광 단백질의 다른 관심사이다. 광표백은 광 유도에 의한 형광단에서의 변화이며, 형광단에 의한 특정 파장의 광 흡수를 감소시킨다. 광표백은 형광단의 형광을 감소시킨다. 다수의 형광 단백질은 여기 상태에서 급속하게 광표백을 수행한다. 이 과정은 일반적으로 가역적이지만, 예를 들어 검체 사진촬영에 이용할 수 있는 시간을 감소시킴으로써 GFP 발현의 유용성을 제한할 수 있다. 그러나, 광표백이 급속하게 가역적인 경우, 이러한 특성에 의해 특정 용도에 유용한 형광 단백질을 제조한다.
따라서, 연구 능력을 최대화하기 위해서는 일정 범위의 스펙트럼 결과 및 낮은 독성을 가지며 쉽게 발현시킬 수 있는 형광 단백질이 필요한 실정이다. 이러한 연구 분야로는 일시적 활성을 모니터링할 수 있는 유전자 리포터와 같은 일시적 형광 단백질을 들 수 있지만, 이에 한정되지 않는다. 추가로, 상기 연구 분야로는 세포 또는 생물의 장기간 모니터링 또는 안정한 형질감염을 허용하는 낮은 독성의 형광 단백질을 들 수 있지만, 이에 한정되지 않는다.
또한, 신규 방출 스펙트럼을 갖는 형광 단백질이 요구되고 있다. 이러한 단백질에 의해 여러 과정을 동시에 모니터링할 수 있으며 배경 형광을 최소화할 수 있다. 또한, 상기 단백질은 FRET 분석 시스템에 대해 이용가능한 선택성을 증가시킨다. 게다가, 낮은 수준으로 발현되는 형광 단백질을 검출하기 위해서는 더 밝은 상대적 형광을 갖는 형광 단백질이 필요하다.
<발명의 개요>
본원의 종결부에 기재된 특허 청구의 범위에 의해 정의되는 본 발명은 상기 언급된 문제들 중 적어도 몇몇 문제들을 해결하기 위한 것이다. 본 발명은 증강된 특성, 예를 들어 실질적으로 증강된 형광 및 감소된 독성을 갖는 개선된 형광 단백질을 제공한다. 개선된 형광 단백질은 연구에서 유용하며, 예를 들어 유전자 발현의 측정 또는 검출, 예컨대 상향조절 또는 하향조절, 프로모터 활성의 모니터링, 장기간 모니터링 및 단백질 위치결정을 위해 사용될 수 있다.
악티노디스쿠스 또는 디스코소마 종인 것으로 생각되는 수생 종으로부터 신규 야생형 적색 형광 단백질(RFP)을 단리하였다. 이 단백질을 본원에서 Ac/DsRFP라 언급한다. 본 발명은 Ac/DsRFP로부터 유도된 두가지 단백질 돌연변이체를 제공한다. 본원에서는 본 발명의 돌연변이체 RFP를 레드 I 및 레드 II라 언급한다. 또한, 이들 아미노산 서열 및 이들의 관련 아미노산 서열의 각각을 코딩하는 단리된 핵산이 포함된다.
또한, 몬타스트래아 카베르노사(Montastraea cavernosa)로부터 신규 녹색 형광 단백질(GFP)을 단리하였다. 이 단백질을 본원에서 McGFP라 언급한다. 본 발명은 McGFP로부터 유도된 두가지 신규 단백질을 제공한다. 본원에서는 바람직한 신규 단백질을 그린 I 및 그린 II라 언급한다. 또한, McGFP의 여러 돌연변이체가 매우 빠르게 광표백을 수행하는 것으로 밝혀졌다.
또한, 본 발명은 선택된 폴리펩티드를 코딩하는 제1 코딩 서열 및 본 발명의 형광 단백질을 코딩하는 제2 코딩 서열을 포함하는 핵산 구조물을 제공한다. 제1 코딩 서열과 제2 코딩 서열이 융합되어, 융합된 서열이 발현됨으로써 제1 코딩 서열에 의해 코딩된 폴리펩티드와 제2 코딩 서열에 의해 코딩된 폴리펩티드가 융합된 형광 하이브리드 단백질이 생성되도록 제1 코딩 서열과 제2 코딩 서열을 융합한다.
본 발명의 각종 단리된 핵산을 포함하는 벡터가 또한 제공된다. 다양한 능력의 벡터가 분자 생물학자에게 잘 알려져 있으며, 상기 벡터를 사용하여 진핵 또는 원핵 세포를 형질전환시킬 수 있다. 이러한 벡터를 생체내 및 시험관내 발현 시스템과 함께 사용할 수도 있다.
또한, 형광 단백질을 코딩하는 핵산의 발현을 검출하는 방법이 제공된다. 이 방법은 본 발명의 핵산을 세포 또는 생물에 도입하는 것을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 프로모터는 핵산 발현을 조절한다. 핵산 발현을 형광 방출에 의해 검출하여 핵산 발현을 검출할 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 세포는 진핵 세포이다. 다른 바람직한 실시양태에서, 세포는 원핵 세포이다. 핵산 발현은 생체내에서 검출할 수 있다. 핵산 발현은 시험관내에서 검출할 수 있고, 고정 세포, 예를 들어 포르말린 고정 세포에서 검출할 수도 있다.
핵산 발현을 검출하는 본 발명의 방법의 바람직한 실시양태에서, 형광 단백질을 코딩하는 핵산에 대상 유전자를 융합시킨다. 융합 단백질은 세포내 특정 로케이터(locator) 신호를 포함할 수 있으며, 프로모터로부터의 발현 및(또는) 세포내 위치결정을 측정할 수 있다. 형광 방출에 의해 대상 유전자의 발현을 검출한다.
본 발명의 핵산을 포함하는 세포가 또한 제공된다. 바람직한 실시양태에서, 세포의 게놈에 핵산을 통합시킨다. 다른 바람직한 실시양태에서, 세포의 게놈에 핵산을 통합시키지 않는다. 예를 들어, 핵산은 염색체 외부에 존재할 수 있다.
추가로, 본 발명의 단리된 핵산을 갖는 동물이 제공된다. 바람직한 실시양태에서, 동물은 제브라피쉬(zebrafish)이다.
이하 첨부된 도면의 설명에서는 본 발명의 바람직한 전형적인 실시양태를 예시한다:
도 1A 및 1B는 본래 악티노디스쿠스/디스코소마 종으로부터 단리된 단백질로부터 각각 생성된 두가지 돌연변이체 적색 형광 단백질인 레드 I(서열 1) 및 레드 II(서열 3)를 코딩하는 DNA의 서열 정렬을 나타낸다. 이러한 정렬 및 다른 모든 정렬에서, 정렬된 서열 사이의 차이는 "컨센서스(consensus)" 라인에서 결여된 모노머에 의해 표시한다.
도 2는 레드 I(서열 2) 및 레드 II(서열 4)의 DNA 서열에 의해 코딩된 아미노산의 정렬을 나타낸다.
도 3은 레드 I의 스펙트럼 분석에 대한 그래프이다.
도 4는 레드 II의 스펙트럼 분석에 대한 그래프이다.
도 5는 레드 I 및 레드 II의 스펙트럼 분석에 대한 그래프이다.
도 6A 및 6B는 본래 엠. 카베르노사(M. cavernosa)로부터 단리된 단백질로부터 각각 생성된 두가지 돌연변이체 녹색 형광 단백질인 그린 I(서열 5) 및 그린 II(서열 7)를 코딩하는 DNA의 서열 정렬을 나타낸다.
도 7은 그린 I(서열 6) 및 그린 II(서열 8)의 DNA 서열에 의해 코딩된 아미노산의 아미노산 정렬을 나타낸다.
도 8은 그린 I의 스펙트럼 분석에 대한 그래프이다.
도 9는 그린 II의 스펙트럼 분석에 대한 그래프이다.
도 10은 그린 I 및 그린 II의 스펙트럼 분석에 대한 그래프이다.
본 발명의 실시양태를 상세히 설명하기에 앞서, 본 발명의 적용이 이하의 설명에 기재되거나 도면에 예시된 성분들의 구성 및 정렬에 대한 세부사항으로 한정되지 않음을 이해해야 한다. 본 발명은 다른 실시양태들이 가능하며 다양한 방식으로 실시되거나 수행될 수 있다. 또한, 본원에 사용된 어구 및 용어는 설명을 위한 것이며 한정을 위한 것으로 고려해서는 안된다는 것을 이해해야 한다.
정의:
본 발명에서, 다음과 같은 정의들이 사용된다:
본원에서 표준 1-문자 코드인 "A," "C," "G," "T" 및 "U"는 각각 뉴클레오티드인 아데닌, 시토신, 구아닌, 티미딘 및 우라실에 대하여 사용된다. "N"은 임의의 뉴클레오티드를 나타낸다. 올리고뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드 서열은 5'-말단에서 3'-말단 방향으로 기재한다.
본원에 사용된 바와 같이, "아미노산"은 표준 폴리펩티드 명명법에 따라 기술된다 [J. Biol. Chem., 243:3557-59, (1969)]. 본원에서 확인된 모든 아미노산 잔기는 천연 L-형태이다. 표준 폴리펩티드 명명법에 따라, 아미노산 잔기에 대한 약어를 하기 대응표에 나타낸다.
| 대응표 | ||
| 1-문자 | 3-문자 | 아미노산 |
| Y | Tyr | L-티로신 |
| G | Gly | 글리신 |
| F | Phe | L-페닐알라닌 |
| M | Met | L-메티오닌 |
| A | Ala | L-알라닌 |
| S | Ser | L-세린 |
| I | Ile | L-이소류신 |
| L | Leu | L-류신 |
| T | Thr | L-트레오닌 |
| V | Val | L-발린 |
| R | Pro | L-프롤린 |
| K | Lys | L-리신 |
| H | His | L-히스티딘 |
| Q | Gln | L-글루타민 |
| E | Glu | L-글루탐산 |
| W | Trp | L-트립토판 |
| R | Arg | L-아르기닌 |
| D | Asp | L-아스파르트산 |
| N | Asn | L-아스파라긴 |
| C | Cys | L-시스테인 |
"단백질" 및 "폴리펩티드"는 길이 또는 번역 후 변형, 예를 들어 글리코실화 또는 인산화에 상관없이 임의의 아미노산 쇄를 의미한다. 본 발명의 합성 유전자는 자연 발생적인 단백질 또는 그의 폴리펩티드 단편의 변이체를 코딩할 수도 있다. 바람직하게는, 이러한 단백질 폴리펩티드는 그가 유도되는 자연 발생적인 (천연) 단백질의 아미노산 서열과 85％ 이상, 바람직하게는 90％, 가장 바람직하게는 95％ 또는 99％의 동일성을 갖는다.
"단리된 핵산" 또는 "단리된 폴리뉴클레오티드"에서와 같이 핵산과 관련하여 사용되는 경우 용어 "단리된"은 핵산 서열이 그의 공급원에서 통상적으로 결합하는 하나 이상의 오염물로부터 동정 및 분리된 핵산 서열을 의미한다. 따라서, 단리된 핵산은 그가 본래 발견되는 형태 또는 환경과 상이한 형태 또는 환경에서 존재한다. 대조적으로, 단리되지 않은 핵산, 예를 들어 DNA 및 RNA는 이들이 본래 존재하는 상태로 발견된다. 예를 들어, 주어진 DNA 서열, 예를 들어 유전자는 숙주 세포 염색체 상에서 인접하는 유전자 가까이에 존재하며, RNA 서열, 예를 들어 특정 단백질을 코딩하는 특정 mRNA 서열은 세포내에서 다수의 단백질을 코딩하는 다른 수많은 mRNA와의 혼합물로서 발견된다. 그러나, 단리된 핵산은 예를 들어 천연 세포의 염색체 위치와 상이한 염색체 위치에 있거나 또는 본래 발견되는 핵산 서열과 상이한 핵산 서열에 의해 플랭킹된(flanked) 핵산을 통상적으로 발현하는 세포내의 그러한 핵산을 포함한다. 단리된 핵산은 단일 가닥 또는 이중 가닥 형태로 존재할 수 있다. 단리된 핵산을 사용해서 단백질을 발현시키는 경우, 올리고뉴클레오티드는 최소의 센스 또는 코딩 가닥을 함유할 수 있고(즉, 올리고뉴클레오티드는 단일 가닥일 수 있음), 센스 및 안티센스 가닥을 모두 함유할 수도 있다(즉, 올리고뉴클레오티드는 이중 가닥일 수 있음).
"단리된 단백질" 또는 "단리된 폴리펩티드"에서와 같이 폴리펩티드와 관련하여 사용되는 경우 용어 "단리된"은 폴리펩티드가 그의 공급원에서 통상적으로 결합하는 하나 이상의 오염물로부터 동정 및 분리된 폴리펩티드를 의미한다. 따라서, 단리된 폴리펩티드는 그가 본래 발견되는 형태 또는 환경과 상이한 형태 또는 환경에서 존재한다. 대조적으로, 단리되지 않은 폴리펩티드, 예를 들어 단백질 및 효소는 이들이 본래 존재하는 상태로 발견된다.
용어 "정제된" 또는 "정제하다"는 대상 성분, 예를 들어 단백질 또는 핵산으로부터 어떤 오염물을 제거하는 임의의 과정에 대한 결과를 의미한다. 그에 따라, 샘플에서 정제된 성분의 비율(％)이 증가한다.
본 발명의 핵산에 관하여, 용어 "핵산"은 DNA, 게놈 DNA, cDNA, RNA, mRNA, 및 상기 다양한 핵산의 하이브리드를 의미한다. 핵산은 합성 기원 또는 천연 기원의 것일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 핵산은 하나의 뉴클레오티드의 펜토스의 3' 위치가 포스포디에스테르기에 의해 다음 뉴클레오티드의 펜토스의 5' 위치로 연결되며 뉴클레오티드 잔기(염기)가 특정 순서, 즉 뉴클레오티드의 선형 순서로 연결된 뉴클레오티드의 공유 결합 서열이다.
본원에 사용된 바와 같이 용어 "야생형"은 자연 발생적인 공급원으로부터 단리된 유전자 또는 유전자 생성물의 특징을 갖는 유전자 또는 유전자 생성물을 의미한다. 야생형 유전자는 집단내에서 가장 빈번하게 관찰되며, 따라서 임의적으로 유전자의 "야생형" 형태로 명명된 유전자이다. 대조적으로, 용어 "돌연변이체"는 서열 및(또는) 기능적 특성에서의 변형, 즉 야생형 유전자 또는 유전자 생성물에 비해 변화된 특징을 나타내는 유전자 또는 유전자 생성물을 의미한다. 자연 발생적인 돌연변이체는 단리할 수 있으며 야생형 유전자 또는 유전자 생성물에 비해 변화된 특징을 갖는다는 사실에 의해 상기 돌연변이체가 확인된다는 것을 유의한다.
본원에 사용된 바와 같이, "더 높은 상대적 형광 강도" 또는 "증가된 밝기"는 주어진 일련의 조건하에 야생형 형광 단백질에 의해 나타난 것보다 더 큰 형광 강도 또는 밝기를 의미한다. 일반적으로, 형광 강도 또는 밝기의 증가는 변이체의 형광이 주어진 일련의 조건하에 야생형 형광 단백질보다 적어도 25％ 이상, 바람직하게는 50％ 이상, 보다 바람직하게는 100％ 이상 강하거나 밝은 것을 의미한다.
용어 "핵산 구조물"은 상이한 공급원으로부터 유래하며 당업계에 공지된 방법을 사용하여 함께 라이게이션한 둘 이상의 핵산 서열로 이루어진 핵산을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같이 용어 "숙주 세포"는 임의의 생물 유래의 세포를 의미한다. 바람직한 숙주 세포는 식물, 박테리아, 효모, 진균, 곤충 또는 다른 동물로부터 유래한다. 폴리뉴클레오티드 서열을 다양한 유형의 숙주 세포로 도입하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 숙주 세포는 상기 기재된 것들의 자손 또는 잠재적인 자손을 포함한다.
용어 "벡터"는 DNA의 단편들이 삽입 또는 클로닝될 수 있으며 상기 DNA 단편들을 사용하여 DNA 절편을 세포로 전달하고 세포에서 복제될 수 있는 핵산 분자와 관련하여 사용된다. 벡터는 플라스미드, 박테리오파지, 바이러스 및 코스미드 등으로부터 유래할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이 용어 "발현 벡터"는 특정 숙주 생물에서 목적하는 코딩 서열 및 작동가능하게 연결된 코딩 서열의 발현에 필요한 적절한 DNA 또는 RNA 서열을 함유하는 DNA 또는 RNA 서열을 의미한다. 원핵생물 발현 벡터는 전형적으로 프로모터, 리보좀 결합 부위, 숙주 세포에서의 자율 복제를 위한 복제 기점, 및 가능하게는 기타의 서열, 예를 들어 임의의 오퍼레이터 서열, 임의의 제한 효소 부위를 포함한다. 프로모터는 RNA 폴리머라제가 DNA와 결합하여 RNA 합성을 개시하도록 지시하는 DNA 서열로서 정의된다. 진핵생물 발현 벡터는 전형적으로 프로모터, 임의로는 폴리아데닐화 신호 및 임의로는 인핸서 서열을 포함한다.
용어 "작동가능하게 연결된"은 코딩 서열의 발현에 필요한 조절 서열이 DNA 분자에서 코딩 서열에 대해 적절한 위치에 위치하여 코딩 서열의 발현을 수행하도록 하는 것을 의미한다. 때때로, 이와 동일한 정의가 발현 벡터에서 코딩 서열 및 전사 조절 요소, 예를 들어 프로모터, 인핸서 및 종결 요소의 정렬에 적용된다.
본 발명에서, 당업계의 기술 범위내에서 통상의 분자 생물학 및 미생물학이 이용될 수 있다. 이러한 기술들은 문헌에 충분히 설명되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Sambrook, Fritsch & Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Third Edition (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y.]을 참조한다.
본 발명에 따라, 신규 야생형 형광 단백질을 단리하였다. 이 야생형 형광 단백질을 돌연변이시켜, 예를 들어 각 야생형 형광 단백질보다 더 높은 상대적 형광 강도 또는 더 큰 광표백 내성을 갖는 형광 단백질의 돌연변이체 형태를 생성시켰다.
I. 야생형 형광 단백질의 단리
요컨대, 대상 생물 유래의 조직을 수획하고, 하기 상세히 설명된 방법에 의해 균질화하였다. RNA를 단리하고, RT-PCR을 수행하였다. 아가로스 겔로부터 크기별로 선별된 DNA를 회수한 다음, 박테리아 선별에 적합한 벡터에 라이게이션하였다. 벡터는 유도가능하거나 또는 구성적인 프로모터를 포함할 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 플라스미드를 벡터로 사용하였다. 수용능력이 있는(competent) 박테리아를 전기천공하여 플라스미드를 도입하였다. LB-앰피실린 플레이트(100 ㎍/ml)상에서 박테리아를 인큐베이션하였다. 형광 강도 및(또는) 색상 품질의 정량적 측정치를 기준으로 대상 클론을 단리하였다.
하기 실시예에 상세히 설명된 이러한 방법을 이용하여, 악티노디스쿠스 또는 디스코소마인 것으로 생각되는 수생 종으로부터 야생형 적색 형광 단백질 코딩 cDNA를 단리하였다. 앞서 관련 기술의 설명 부분에 논의된 악티노디스쿠스 또는 디스코소마 속의 관계에 있어서의 불확실성으로 인해, 상기 단백질을 이하에서 Ac/DsRFP라 언급한다. Ac/DsRFP를 코딩하는 단리된 cDNA를 추가로 돌연변이시키고, 하기 상술한 바와 같은 대상 특성을 기준으로 단리물을 선별하였다. 추가로, 본원에 기술된 방법을 이용하여, 야생형 녹색 형광 단백질(GFP) 코딩 cDNA를 몬타스트래아 카베르노사(Montastraea cavernosa)로부터 단리하였으며, 본원에서 McGFP로 언급한다. 하기 기술한 바와 같이, McGFP를 코딩하는 단리된 cDNA를 추가로 돌연변이시키고, 대상 특성을 기준으로 선별하였다.
II.
돌연변이된
형광 단백질의 생성
단리된 각 야생형 유전자에 대해, 중합 동안 돌연변이를 유발하는 저 엄격 조건(하기 기술된 바와 같은 낮은 어닐링 온도, 과도하게 긴 연장 시간, 초과 사이클)하에 수행된 PCR을 통해 코딩 서열내 랜덤 돌연변이를 유도하였다. 생성된 PCR 생성물을 박테리아 발현 벡터에 클로닝하였다. 상응하는 야생형 형광 단백질과 비교했을 때의 상대적 형광 증가, 대상 색상 및 광표백 감소에 대하여 클론을 스크리닝하였다. 이어서, 선택된 클론으로부터 벡터 DNA를 정제하고 서열화하여 관련 PCR-유도된 돌연변이 변화를 결정하였다. 이후, 상기 과정을 수회 반복하였다.
a.
레드
I 및
레드
II
상기 나타낸 바와 같이 저 엄격 PCR을 수회 수행하여 디스코소마 유래의 야생형 RFP인 Ac/DsRFP를 코딩하는 DNA를 돌연변이시켰다. 벡터에 클로닝하고 형질전환된 박테리아를 형광 특성에 대하여 시각적으로 스크리닝한 다음, 모체 Ac/DsRFP 야생형과 비교했을 때의 더 높은 상대적 형광 강도를 기준으로 레드 I 및 레드 II에 의해 코딩된 단백질을 선별하였다. 정량적으로 결정된 바로는, 레드 II는 레드 I의 강도보다 적어도 50％ 초과의 형광 강도를 갖는다.
레드 I(서열 1) 및 레드 II(서열 2)의 DNA 서열을 도 1A 및 1B에 나타낸다. 레드 I을 코딩하는 DNA에 비해 레드 II를 코딩하는 DNA는 하나의 뉴클레오티드 차이를 나타내는데, 위치 694에서 레드 I은 G이지만 레드 II는 A이다. 레드 I(서열 2) 및 레드 II(서열 4)의 아미노산 서열을 도 2에 나타낸다. 이 도면은 위치 232에서 레드 I은 D이지만 레드 II는 N임을 나타낸다.
도 3 내지 5는 레드 I 및 레드 II, 및 레드 I 및 레드 II의 둘 다에 대한 스펙트럼 분석을 나타낸다.
b. 그린 I 및 그린 II
본원에 기술된 바와 같이 저 엄격 조건하의 PCR을 이용하여 엠. 카베르노사 유래의 야생형 GFP인 McGFP를 코딩하는 DNA 서열을 돌연변이시켰다. 더 밝은 형광을 나타내는 돌연변이체 GFP를 단리하였으며, 그린 I로 나타낸다. 그린 I에 대하여 저 엄격 PCR의 제2 라운드를 수행하여 높은 광표백 내성을 갖는 제2 돌연변이체 GFP를 얻고, 이를 그린 II로 나타낸다. 그린 I을 코딩하는 DNA 서열과 비교했을 때, 그린 II를 코딩하는 DNA는 하나의 뉴클레오티드 변화를 함유하는데, 서열 5 및 서열 7로서 도 6A 및 6B에 나타낸 바와 같이, 뉴클레오티드 527의 시토신이 티민으로 돌연변이되었다. 아미노산 서열을 서열 6 및 서열 8로서 도 7에 나타낸다. 이 도면은 그린 I의 위치 176을 S로 나타내고, 그린 II에서는 동일한 위치를 F로 나타낸다.
그린 I은 McGFP와 비교했을 때 더 높은 상대적 형광 강도를 나타냈다. 또한, 그린 II는 더 높은 상대적 형광을 나타낼 뿐만 아니라 높은 광표백 내성을 갖는데, 이는 그린 I 단백질에서는 분명하지 않은 특성이다. 애토아크(Attoarc; 등록상표) HBO 100W 가변 전원에 의해 조작되는 형광 현미경에 통상적으로 사용되는 수은 아크 레이저를 사용한 경우, 그린 I은 적절한 조건하에 광표백을 수행하는 것으로 나타났다. 이 장치에서, 낮은 레이저 강도는 25％ 미만의 강도인 것으로 고려되며 높은 레이저 강도는 75％ 초과의 강도인 것으로 고려된다. 제이스 액시오버트(Zeiss Axiovert) S100 현미경을 사용하여 세포를 시각화하였다. 낮은 레이저 강도, 예를 들어 10％ 강도하에, 두 유도체 단백질은 동일한 것으로 나타났다. 그러나, 높은 레이저 강도, 예를 들어 80％ 강도하의 수초 후, 그린 I 광은 보이지 않았다. 암조건하의 몇분에 이어서 재조명한 후, 그린 I의 형광이 다시 분명해졌다. 또한, 420 nm 광을 사용하는 여기는 광표백을 급속하게 반전시킨다는 점에서 그린 I은 특이적이었다. 그린 II는 이러한 광표백 반응을 수행하지 않는다.
도 8 내지 10은 그린 I(도 8) 및 그린 II(도 9), 및 그린 I 및 그린 II의 둘 다(도 10)에 대한 스펙트럼 분석을 나타낸다.
IV. 형광 단백질의
사용예
본원에 기재된 모든 형광 단백질은, 예를 들어 대상 유전자 및 형광 단백질을 코딩하는 DNA를 벡터에 삽입함으로써 대상 유전자의 발현을 검출하는 마커로서 사용할 수 있다. 벡터는 진핵 또는 원핵 숙주 세포, 예를 들어 박테리아 세포, 곤충 세포, 효모 세포 및 포유동물 세포를 형질전환시킬 수 있다. 당업계에 공지된 바와 같이, 숙주 세포는 수용능력이 있거나, 또는 칼슘 인산 침전법, 수용자 세포와 DNA 함유 박테리아 원형질체(protoplast)를 융합하는 방법, DNA 함유 리포좀으로 수용자 세포를 처리하는 방법, DEAE 덱스트란, 수용체-매개 세포내이입법, 전기천공법, 및 DNA를 세포에 직접 미세주입하는 방법을 포함하지만 이에 한정되지 않는 다양한 기술에 의해 수용능력을 갖게끔 만들 수 있다. DNA는 숙주 세포의 염색체 DNA내로 통합될 수 있거나 또는 예를 들어 플라스미드를 통해 염색체 외부에 존재할 수 있다.
본 발명의 형광 단백질은 생화학 분석에서 시약으로 사용될 수도 있다. 예를 들어, 형광 단백질을 리포터로 사용하여 발효 과정을 모니터링하고 유전자 발현을 정량할 수 있다.
또한, 본 발명의 형광 단백질은 다중 표지 시스템에서 사용될 수 있는 추가의 형광 단백질을 제공한다. 예를 들어, 본 발명의 GFP의 하나를 사용하여 제1 세포 집단을 표지할 수 있고 본 발명의 RFP의 하나를 사용하여 제2 세포 집단을 표지할 수 있으며, 예를 들어 형광 활성화 세포 분류 동안 두가지 상이한 세포 집단을 추적할 수 있다. 유사하게, 레드 I 및 II는 상이한 파장에서 형광을 방출시키기 때문에, 레드 I 및 레드 II을 사용하여, 예를 들어 상이한 세포 집단을 표지하여 추적할 수 있다.
추가로, 본 발명의 형광 단백질은 원핵 및 진핵 발현 시스템에서 사용될 수도 있다. 예를 들어, 형광 단백질에 대한 코딩 서열 및 다른 유전자를 함유하는 융합 단백질을 생성시킬 수 있다. 본 발명의 전형적인 융합 단백질은 선택된 폴리펩티드를 코딩하는 제1 코딩 서열 및 본 발명의 형광 단백질을 코딩하는 제2 코딩 서열을 포함한다. 제1 코딩 서열과 제2 코딩 서열이 융합되어, 융합된 서열이 발현됨으로써 제1 코딩 서열에 의해 코딩된 폴리펩티드와 제2 코딩 서열에 의해 코딩된 폴리펩티드가 융합된 형광 하이브리드 단백질이 생성되도록 제1 코딩 서열과 제2 코딩 서열을 융합한다. 본 발명의 형광 단백질은 코딩 서열의 3' 또는 5' 말단에서 융합될 수 있는 것으로 생각된다. 또한, β-갈락토시다제와 같은 단백질에 대한 코딩 서열을 갖는 융합 단백질과 달리, 형광 단백질에 대한 코딩 서열을 함유하는 융합 단백질은 외부 첨가된 기질 또는 보조인자를 필요로 하지 않는다. 이에 따라, 형광 단백질을 살아있는 세포에서 유용하게 사용할 수 있다.
본원에 제공된 형광 단백질을, 예를 들어 mRNA 미세주입 분석에서 생체내 마커로서 사용할 수도 있다. 형광 단백질은 다른 예로서 트랜스제닉 마우스, 캐노르뱁디티스 엘레간스(Caenhorbabditis elegans), 드로소필라 멜라노가스터(Drosophila melanogaster) 및 제브라피쉬에서 생체내 마커로 사용된다.
또한, 본 발명의 형광 단백질을 크니다리언(cnidarian) 유전학의 연구를 위한 분류 마커, 진단 키트에서 색 표시자, 착색용 식품 첨가제 및 화장품 성분으로 사용할 수 있다.
하기 실시예는 단지 예시를 위해 제공된다. 이 실시예는 오로지 본원에 기술된 발명을 보다 완전하게 이해하는데 도움을 주고자 본원에 포함된다. 이러한 실시예는 본원에 개시 또는 청구된 본 발명의 범위를 어떠한 식으로든지 제한하지 않는다.
실시예
1. 종 선택 및 동물 관리:
산호 콜로니를 두가지 공급원으로부터 얻었다. 첫째, 여러 악티노디스쿠스/디스코소마 종 폴립(polyp)으로 이루어진 고상의 붉은-벽돌색의 콜로니를 지역 수족관 상점으로부터 얻었다. 둘째, 몬타스트래아 카베르노사 콜로니를 플로리다 남부 지역의 암초지대로부터 수집하였다. 관통하여 흐르는 여과된 해수가 채워진 작은 수족관에서 상기 두 종을 유지하였다.
실시예
2. 전체 RNA의 단리,
역전사
, cDNA의 증폭 및 회수:
토털리(Totally) RNA 키트(카탈로그 번호 1902, 텍사스주 오스틴 소재의 앰비온, 인크.(Ambion, Inc.))를 사용하여 단일 폴립(악티노디스쿠스/디스코소마 종) 또는 기초 골격을 에어브러시(airbrush)로 가볍게 처리하여 얻은 세포 덩어리(엠. 카베르노사)로부터 RNA를 단리하였다. 요약하면, 조직을 균질화하고, 튜브를 뒤집어 약 10배 부피의 변성 용액과 함께 혼합하고, 1배 부피의 페놀/클로로포름으로 추출하였다. 수성 상등액을 깨끗한 용기로 전달하였다. 1/10 부피의 3 M 아세트산나트륨을 상등액에 가한 다음, 이를 1배 부피의 산-페놀/클로로포름으로 한번 더 추출하였다. 다시, 수성 상등액을 깨끗한 용기로 전달하였다. 1배 부피의 이소프로판올을 상등액에 가하고, 원심분리하여 전체 RNA를 침전시켰다. 펠릿을 75％ 에탄올로 세척하고, RNAse-무함유 물 50 ㎕에 재현탁시켰다. 분광광도계로 수율을 측정하고, 겔 전기영동에 의해 품질을 평가하였다.
이와 같이 단리된 RNA를 퍼스트 초이스(First Choice; 등록상표) RLM-RACE 키트(카탈로그 번호 1700, 앰비온, 인크.)에서 사용하여 cDNA를 생성 및 증폭시켰다. 이후, RLM-RACE 프로토콜 버전 0010에 따른 "소 반응(small reaction)" 프로토콜을 행하였다. 요약하면, 전체 RNA를 송아지 장관 포스파타제(CIP)로 처리하여 분해 및 비-캡핑된(non-capped) RNA로부터 5' 포스페이트를 제거한 다음, 페놀:클로로포름으로 추출하였다. 이어서, 담배 산 피로포스파타제(TAP)를 사용하여 전장 mRNA로부터 캡을 제거하였다. T4 RNA 리가제를 사용해서 포함된 5' RACE 어댑터(adaptor)(5'-GCUGAUGGCGAUGAAUGAACACUGCGUUUGCUGGCUUUGAUGAAA-3')(서열 9)를 전체 디캡핑된(decapped) mRNA에 라이게이션하였다. MMLV 역전사효소 및 폴리T 프라이머(5'-CTCGAGAAGCTTGAATTCGGATCCTTTTTTTTTTTTTTTTT-3')(서열 10)를 사용해서 역전사를 달성하였다.
생성된 cDNA의 증폭은 동일한 폴리T 프라이머, 5' RACE 아우터(Outer) 프라이머(5'-GCTGATGGCGATGAATGAACACTG-3')(서열 11) 및 슈퍼태크(SuperTaq) 폴리머라제(앰비온, 인크., 카탈로그 2050)를 사용해서 수행하였다.
PCR을 다음과 같이 수행하였다: 94 ℃/5분, 80℃ 유지, 폴리머라제 첨가, 94℃/30초, 60℃/1분, 72℃/1분 및 마지막으로 72℃/10분의 34 사이클. 증폭된 cDNA를 겔 정제하였다. 약 500개 내지 1200개 염기쌍(bp)으로부터 일부를 수획하고, 실리콘처리된 유리솜을 통한 저속 원심분리에 이어서 이소프로판올 침전에 의해 회수하였다.
실시예
3. 박테리아 클론의 형질전환 및 선별, 플라스미드 제조, 및 야생형 형광 단백질의 DNA 서열분석:
겔 정제된 cDNA 일부를 pCR II 클로닝 벡터(Invitrogen, Carlsbad, CA)에 라이게이션하고, 생성된 플라스미드로 탑(Top) 10 이. 콜라이(E. coli)(Invitrogen)를 전기형질전환(electrotransformation)시켰다. 형질전환된 박테이라를 LB-앰피실린(100 ㎍/ml) 플레이트 상에 배양하고, 레이카(Leica) MZFLIII 형광 입체 해부 현미경을 사용해서 형광에 대해 콜로니를 스크리닝하였다. 단일 형광 콜로니를 채집하고, 수회 리스트리킹(restreaking)하여 모자이크교잡(mosaicism)을 해소하고, 액체 배양으로 배양하였다. 퀴아젠 미디 키트(Qiagen Midi kit)(Qiagen, Valencia, CA)를 사용해서 플라스미드 DNA를 제조하였다.
야생형 적색 형광 단백질(RFP)을 발현시키는 콜로니를 악티노디스쿠스/디스코소마 종 1 RNA로부터 생성된 박테리아 콜로니로부터 단리하였다. 이를 본원에서 Ac/DsRFP로서 언급한다.
또한, 야생형 녹색 형광 단백질(GFP)을 발현시키는 콜로니를 엠. 카베르노사 RNA로부터 생성된 박테리아 콜로니로부터 단리하고, McGFP로 명명하였다.
실시예
4. 형광 단백질의 돌연변이 생성:
야생형 단백질을 코딩하는 각 유전자를 오류-빈발성(error-prone) PCR 처리하였다. PCR 생성물을 클로닝하고, PCR 생성물에 의해 코딩된 단백질의 발현을 기준으로 정량적으로 선별하였다.
구체적으로, Kpn I 제한 부위, 샤인-달가노(Shine-Dalgarno) 및 코작(Kozak) 컨센서스 상위번역(uptranslation) 서열, 코딩 영역의 출발 ATG, 및 약 10 bp의 하류 상동성을 함유하는 5' "상부(upper)" 프라이머를 Ac/DsRFP 및 McGFP 둘 다에 대하여 설계하였다. Ac/DsRFP에 대한 상부 프라이머는 5'-CCGGTACCTAAGGAGGCCACCATGAGTTGTTCC-3'(서열 12)이었으며, McGFP에 대한 상부 프라이머는 5'-CCGGTACCTAAGGAGGCCACCATGAGTGTGATAAAAC-3'(서열 13)이었다.
또한, Xba I 제한 부위, 코딩 영역의 종결 코돈, 및 약 10 bp의 상류 상동성을 함유하는 "하부(lower)" 프라이머를 형광 단백질 단리물 각각에 대하여 설계하였다. Ac/DsRFP에 대한 하부 프라이머는 5'-CCACTAGTCTAGATCATTACCGCTC-3'(서열 14)이었으며, McGFP에 대한 하부 프라이머는 5'-GGTCTAGATTACTTGGCCTGCCTC-3'(서열 15)이었다.
상기 프라이머를 사용하여 형광 단백질 플라스미드 DNA에 대해 저 엄격 PCR 프로토콜을 수행하였다. 조건은 다음과 같았다: 94℃/5분, 80℃/유지, 폴리머라제 첨가, 94℃/1분, 42℃/2분, 72℃/3분의 10 사이클, 94℃/30초, 55℃/1분, 72℃/1분의 30 사이클 및 마지막으로 72℃/10분. PCR 생성물을 페놀/클로로포름 추출 및 이소프로판올 침전으로 정제하고, Kpn I/Xba I로 절단하고, 겔 정제하고, Kpn I/Xba I 절단된 pBS II KS+ 플라스미드(Stratagene, La Jolla, CA)에 라이게이션하였다. 라이게이션 혼합물로 탑 10 세포(Invitrogen)를 전기형질전환시켰으며, 콜로니를 1) 모체보다 더 밝은지의 여부, 2) 색상 발현 속도, 3) 크기 및 4) 색상에 대하여 스크리닝하였다.
상기 기재된 바와 같이 수회의 저 엄격 PCR에 의해 야생형 적색 형광 단백질인 Ac/DsRFP로부터 두가지 돌연변이체를 생성시켰다. 벡터에 클로닝하고 형광 특성에 대하여 형질전환된 박테리아를 시각적으로 스크리닝한 다음, 레드 I 및 레드 II에 의해 코딩된 단백질을 모체 Ac/DsRFP 야생형과 비교했을 때의 더 높은 상대적 형광 강도를 기준으로 선별하였다. 생성된 돌연변이체 클론을 레드 I 및 레드 II라 명명하였다.
또한, 야생형 녹색 형광 단백질인 McGFP로부터 그린 I 돌연변이체를 생성시켰다. 그린 I을 코딩하는 DNA에 대하여 제2의 저 엄격 PCR을 수행하고, 상기 네가지 기준을 충족시키는 콜로니를 단리하였다. 그린 I로부터 생성된 돌연변이 클론을 그린 II로 명명하였다. 정제된 플라스미드 제제를 사용해서 유니버시티 오브 아이오와(University of Iowa) DNA 퍼셜리티(Facility)(Iowa City, IA)에 의해 서열분석을 수행하였다. 레드 I 및 레드 II의 DNA 서열을 도 1A 및 1B에 나타내고, 그의 아미노산 서열을 도 2에 나타낸다. 그린 I 및 그린 II의 DNA 서열을 도 6A 및 6B에 나타내고, 그의 아미노산 서열을 도 7에 나타낸다.
실시예
5. 다른 발현 벡터에
클로닝된
형광 단백질 및 그의 스펙트럼 분석:
포유동물 발현에서, 네가지 돌연변이체 형광 단백질(레드 I, 레드 II, 그린 I 및 그린 II)의 각각을 Kpn I/Xba I로 제한 절단한 다음, T4 DNA 폴리머라제로 처리하여 블런트 말단을 생성시키고, 블런트 말단 Sma I 제한 부위를 사용해서 pCI-네오(neo) 포유동물 발현 벡터(Promega, Madison, WI)에 클로닝하여 pCI-네오-레드 I, pCI-네오-레드 II, pCI-네오-그린 I 및 pCI-네오-그린 II를 생성시켰다.
포유동물 및 박테리아 세포 둘 다에서 발현된 형광 단백질에 대하여 스펙트럼 분석을 측정하였다. 트랜스-패스트 트렌스펙션 프로덕트(Trans-Fast Transfection Product)(Promega)를 사용하여 pCI-네오-레드 I, pCI-네오-레드 II, pCI-네오-그린 I 또는 pCI-네오-그린 II 플라스미드로 포유동물 CHO 세포를 형질감염시켰다. 스펙스 플루오로로그(Spex Fluorolog) 1680 0.22m 더블(double) 분광계를 사용해서, 형질감염된 CHO 세포의 세포 용해에 대한 스펙트럼 분석을 측정하였다. 또한, 원핵 세포에서 레드 II 및 그린 II 플라스미드를 발현시켰다. NcoI-NotI 제한 부위를 생성시키는 올리고뉴클레오티드를 사용해서 적절한 플라스미드의 단편을 PCR 증폭시켰다. PCR 앰플리콘을 NcoI 및 NotI으로 절단하고, 원핵생물 발현 벡터내 동일한 부위에 클로닝하고, 이를 사용해서 이. 콜라이 JM109 박테리아를 형질전환시켰다. 형광 단백질의 정제 후, 일부 단백질에 대한 여기 및 방출 스펙트럼을 수집하고, 제이스 현미경을 사용해서 다른 단백질을 시각적으로 평가하였다. 스펙트럼은 24 시간에 기록되었으나 레드 II에 대한 성숙 형광은 24 시간을 넘어 48 시간까지 나타났으며 방출 피크는 583 nm에서 나타났음을 유의한다.
실시예
6. 형광 단백질을 발현시키는
트랜스제닉
동물:
제브라피쉬 배아로의 미세주입을 위한 DNA를 문헌 [Gibbs et al., 1994]에 기재된 바와 같이 약 2 ㎍/ml 선형 DNA 및 0.05％ 페놀 레드의 최종 농도로 제조하였다. 해부 현미경하에, 배아 배양 용액 (25 mg/L 네오마이신 술페이트, 0.5 mg/L 메틸렌 블루, 17.5 mg/L 소듐 티오술페이트, 및 125 ㎕/L 앰쿠엘(Amquel)[코르돈; Kordon]를 함유하는 ERS-수도물) 중의 새로 수정된 수백개의 난자를 1 내지 2 mm의 오목한 부위를 하나 함유하는 1％ 아가의 35 mm 페트리 디쉬(petri dish)에 넣었다. 왼손으로, 5번 겸자(forcep)를 사용해서 원형 난막을 갖는 하나의 난자를 굴려서 상기 오목한 부위에 넣고, 동물극(animal pole)과 수직한 위치에 유지하였다. 오른손으로, 배출 주사기(5 내지 10 미크론의 바늘 팁을 갖는 질몬트(Gilmont) S-1100)를 사용해서 난자를 난황 세포질 경계 근처의 제1 세포의 중심 하부 영역에 미세주입하였다. 이러한 경계의 파괴 및 DNA 용액의 기저 난황으로의 누출은 대부분의 난자에서 일어나며, 생성된 배아에 해롭지 않았다. 미세주입 후, 왼손 겸자를 사용해서 난자를 ERS 함유 100 mm 페트리 디쉬로 이동시키고, 다음 난자를 굴려서 오목한 부위로 위치시켰다. 이러한 기술을 사용해서, 하루에 500개 이상의 난자에 미세주입을 행할 수 있었다. 서던 블롯 분석에 의해 확립된 바와 같이 배아 당 평균 투여량은 DNA 50 pg이었다. 이 투여량은 높은 비율의 유전자 전달을 나타냈기 때문에 실험적으로 선택되었다. 이 조건하에, 배아의 대략 절반이 처음 24 시간에 사망하였으며, 성적으로 성숙할 때까지의 생존율은 주입된 난자의 10％ 내지 20％로 예상되었다. 그러나, 모의(mock) 주입된 (DNA를 수용하지 않음) 배아의 생존율은 치료를 받지 않은 대조군 생존율의 대략 90％였다.
카메라를 장착한 레이카(Leica) MZFL III 입체 형광 해부 현미경으로 생존 배아 및 어류로부터의 전체 표본 조직을 관찰하고 사진을 촬영했다. 사용된 필터 세트는 FITC 필터 세트(여기 470 nm; 방출 515 nm), 변형 FITC 필터 세트(Leica-GFP)(여기 425 nm; 방출 480 nm) 또는 로다민 필터 세트(여기 546 nm; 방출 590 nm)이었다. 배아들을 피펫에 의해 약 50 ㎕의 ERS 액적으로 뒤집어진 100 mm 페트리 디쉬 뚜껑에 개별적으로 전달하고, 약 50 개의 배아로 이루어진 군에서 관찰하였다. 사진촬영 또는 상세한 관찰 목적으로 배아를 고정하기 위해, 20x 원액 마취제 1 ml를 100 mm 페트리 디쉬 중 ERS 약 20 ml에 첨가하였다. 20x 원액 마취제는 ERS 중 3 g/L의 트리카인 메탄술포네이트(MS-222), 20 mM Tris (pH 8)이었다. 원형 난막이 있거나 없는 마취된 배아는 약 2분 후 고정되었으며, 이 용액에서 30분 이상 동안 생존 상태로 남아있었다. 관찰 후, 배아를 ERS의 신선한 디쉬로 이동시켰으며, 수분후에 배아의 움직임이 회복되었다.
레드 II 또는 그린 II를 함유하는 하나의 세포 단계에서 어류의 선형화된 발현 DNA 벡터를 미세주입한 배아는 24 시간 이내에 형광 단백질의 발현에 대하여 양성인 것으로 기록될 수 있었다. 전형적으로, 50％ 초과의 배아가 성숙시 약 10％의 개체에서 보유된 형광 세포 또는 패치를 함유하였다. 레드 II 발현의 형광 패치를 함유하는 성체 어류의 하나로부터, 레드 II가 성체를 통해 배아로부터 보편적으로 발현되는 어류 라인이 유도되었다.
참고문헌
인용된 모든 간행물, 특허문헌 및 특허 출원서는 본원에 참고로 포함된다. 상기 상세한 설명에서, 특정의 바람직한 실시양태와 관련하여 본 발명을 기술하였으며 설명을 목적으로 많은 세부사항을 기재하였지만, 본 발명에 대한 추가의 실시양태가 가능하며 본 발명의 기본 원리를 벗어나지 않으면서 본원의 특정의 세부사항들을 상당히 변화시킬 수 있다는 것은 당업자에게 자명하다.
참고문헌
제1 저자의 성(last name)을 괄호안에 표기하여 본원에 언급한 참고문헌의 완전한 문헌 기록은 본원의 특허 청구의 범위 바로 앞쪽에 있는 참고문헌 부분에서 찾을 수 있다.
정부 지원에 대한 언급
본 발명은 미국 국립 환경 건강 과학 연구소(National Institute of Environmental Health Sciences)-MFBSC의 계약 번호 제ES05705호, NIH-미국 국립 신경 장애 및 뇌졸중 연구소(NIH-National Institute of Neurological Disorders and Stroke)의 계약 번호 제NS36998호 및 미국 국립 일반 의학 연구소(National Institute of General Medicine)의 계약 번호 제GM 57505호로 후원된 미국 정부 지원을 받아 이루어졌다. 미국 정부는 본 발명에 대한 일정한 권리를 갖는다.
SEQUENCE LISTING
<110> Gibbs, Patrick D.L.
Carter, Robert W.
Schmale, Michael C.
<120> FLUORESCENT PROTEINS FROM AQUATIC SPECIES
<130> 638.008
<150> US 10/314,936
<151> 2002-12-09
<160> 15
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 711
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> mutant red fluorescent protein
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(711)
<400> 1
atg agt tgt tcc aag aat gtt atc aag gag ttc atg agg ttt aag gtt 48
Met Ser Cys Ser Lys Asn Val Ile Lys Glu Phe Met Arg Phe Lys Val
1 5 10 15
cgt atg gaa gga acg gtc aat ggg cac gag ttt gaa ata gaa ggc gaa 96
Arg Met Glu Gly Thr Val Asn Gly His Glu Phe Glu Ile Glu Gly Glu
20 25 30
gga gaa ggg agg cca tac gaa ggc cac aat acc gta aag ctt aag gta 144
Gly Glu Gly Arg Pro Tyr Glu Gly His Asn Thr Val Lys Leu Lys Val
35 40 45
acc aag ggg gga cct ttg cca ttt gct tgg gat att ttg tca cca caa 192
Thr Lys Gly Gly Pro Leu Pro Phe Ala Trp Asp Ile Leu Ser Pro Gln
50 55 60
ttt cag tat gga agc aag gta tat gtc aag cat cct gcc gac ata cca 240
Phe Gln Tyr Gly Ser Lys Val Tyr Val Lys His Pro Ala Asp Ile Pro
65 70 75 80
gac tat aaa aag ctg tca ttt cct gaa gga ttt aaa tgg gaa agg gtc 288
Asp Tyr Lys Lys Leu Ser Phe Pro Glu Gly Phe Lys Trp Glu Arg Val
85 90 95
atg aac ttt gaa gac ggt ggc gtc gtt act gta acc cag gat tcc agt 336
Met Asn Phe Glu Asp Gly Gly Val Val Thr Val Thr Gln Asp Ser Ser
100 105 110
ttg cag gat ggc tgt ttc atc tac aag gtc aag ttc att ggc gtg aac 384
Leu Gln Asp Gly Cys Phe Ile Tyr Lys Val Lys Phe Ile Gly Val Asn
115 120 125
ttt cct tct gat gga cct gtt atg caa aag aag aca atg ggc tgg gaa 432
Phe Pro Ser Asp Gly Pro Val Met Gln Lys Lys Thr Met Gly Trp Glu
130 135 140
gcc agc act gag cgt ttg tat cct cgt gat ggc gtg ttg aaa gga gag 480
Ala Ser Thr Glu Arg Leu Tyr Pro Arg Asp Gly Val Leu Lys Gly Glu
145 150 155 160
att cat aag gct ctg aag ttg aaa gac ggt ggt cat tac cta gtt gaa 528
Ile His Lys Ala Leu Lys Leu Lys Asp Gly Gly His Tyr Leu Val Glu
165 170 175
ttc aaa act att tac atg gca aag aag cct gtg cag cta cca ggg tac 576
Phe Lys Thr Ile Tyr Met Ala Lys Lys Pro Val Gln Leu Pro Gly Tyr
180 185 190
tac tat gtt gac tcc aaa ctg gat ata aca agc cac aac aaa gac tat 624
Tyr Tyr Val Asp Ser Lys Leu Asp Ile Thr Ser His Asn Lys Asp Tyr
195 200 205
aca atc gtt gag cag tat gaa aga acc gag gga cgc cac cat ctg ttc 672
Thr Ile Val Glu Gln Tyr Glu Arg Thr Glu Gly Arg His His Leu Phe
210 215 220
ctt aag gct gaa ctt ggc tca gac gtg ggt gag cgg taa 711
Leu Lys Ala Glu Leu Gly Ser Asp Val Gly Glu Arg
225 230 235
<210> 2
<211> 236
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 2
Met Ser Cys Ser Lys Asn Val Ile Lys Glu Phe Met Arg Phe Lys Val
1 5 10 15
Arg Met Glu Gly Thr Val Asn Gly His Glu Phe Glu Ile Glu Gly Glu
20 25 30
Gly Glu Gly Arg Pro Tyr Glu Gly His Asn Thr Val Lys Leu Lys Val
35 40 45
Thr Lys Gly Gly Pro Leu Pro Phe Ala Trp Asp Ile Leu Ser Pro Gln
50 55 60
Phe Gln Tyr Gly Ser Lys Val Tyr Val Lys His Pro Ala Asp Ile Pro
65 70 75 80
Asp Tyr Lys Lys Leu Ser Phe Pro Glu Gly Phe Lys Trp Glu Arg Val
85 90 95
Met Asn Phe Glu Asp Gly Gly Val Val Thr Val Thr Gln Asp Ser Ser
100 105 110
Leu Gln Asp Gly Cys Phe Ile Tyr Lys Val Lys Phe Ile Gly Val Asn
115 120 125
Phe Pro Ser Asp Gly Pro Val Met Gln Lys Lys Thr Met Gly Trp Glu
130 135 140
Ala Ser Thr Glu Arg Leu Tyr Pro Arg Asp Gly Val Leu Lys Gly Glu
145 150 155 160
Ile His Lys Ala Leu Lys Leu Lys Asp Gly Gly His Tyr Leu Val Glu
165 170 175
Phe Lys Thr Ile Tyr Met Ala Lys Lys Pro Val Gln Leu Pro Gly Tyr
180 185 190
Tyr Tyr Val Asp Ser Lys Leu Asp Ile Thr Ser His Asn Lys Asp Tyr
195 200 205
Thr Ile Val Glu Gln Tyr Glu Arg Thr Glu Gly Arg His His Leu Phe
210 215 220
Leu Lys Ala Glu Leu Gly Ser Asp Val Gly Glu Arg
225 230 235
<210> 3
<211> 711
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> mutant red fluorescent protein
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(711)
<400> 3
atg agt tgt tcc aag aat gtt atc aag gag ttc atg agg ttt aag gtt 48
Met Ser Cys Ser Lys Asn Val Ile Lys Glu Phe Met Arg Phe Lys Val
1 5 10 15
cgt atg gaa gga acg gtc aat ggg cac gag ttt gaa ata gaa ggc gaa 96
Arg Met Glu Gly Thr Val Asn Gly His Glu Phe Glu Ile Glu Gly Glu
20 25 30
gga gaa ggg agg cca tac gaa ggc cac aat acc gta aag ctt aag gta 144
Gly Glu Gly Arg Pro Tyr Glu Gly His Asn Thr Val Lys Leu Lys Val
35 40 45
acc aag ggg gga cct ttg cca ttt gct tgg gat att ttg tca cca caa 192
Thr Lys Gly Gly Pro Leu Pro Phe Ala Trp Asp Ile Leu Ser Pro Gln
50 55 60
ttt cag tat gga agc aag gta tat gtc aag cat cct gcc gac ata cca 240
Phe Gln Tyr Gly Ser Lys Val Tyr Val Lys His Pro Ala Asp Ile Pro
65 70 75 80
gac tat aaa aag ctg tca ttt cct gaa gga ttt aaa tgg gaa agg gtc 288
Asp Tyr Lys Lys Leu Ser Phe Pro Glu Gly Phe Lys Trp Glu Arg Val
85 90 95
atg aac ttt gaa gac ggt ggc gtc gtt act gta acc cag gat tcc agt 336
Met Asn Phe Glu Asp Gly Gly Val Val Thr Val Thr Gln Asp Ser Ser
100 105 110
ttg cag gat ggc tgt ttc atc tac aag gtc aag ttc att ggc gtg aac 384
Leu Gln Asp Gly Cys Phe Ile Tyr Lys Val Lys Phe Ile Gly Val Asn
115 120 125
ttt cct tct gat gga cct gtt atg caa aag aag aca atg ggc tgg gaa 432
Phe Pro Ser Asp Gly Pro Val Met Gln Lys Lys Thr Met Gly Trp Glu
130 135 140
gcc agc act gag cgt ttg tat cct cgt gat ggc gtg ttg aaa gga gag 480
Ala Ser Thr Glu Arg Leu Tyr Pro Arg Asp Gly Val Leu Lys Gly Glu
145 150 155 160
att cat aag gct ctg aag ttg aaa gac ggt ggt cat tac cta gtt gaa 528
Ile His Lys Ala Leu Lys Leu Lys Asp Gly Gly His Tyr Leu Val Glu
165 170 175
ttc aaa act att tac atg gca aag aag cct gtg cag cta cca ggg tac 576
Phe Lys Thr Ile Tyr Met Ala Lys Lys Pro Val Gln Leu Pro Gly Tyr
180 185 190
tac tat gtt gac tcc aaa ctg gat ata aca agc cac aac aaa gac tat 624
Tyr Tyr Val Asp Ser Lys Leu Asp Ile Thr Ser His Asn Lys Asp Tyr
195 200 205
aca atc gtt gag cag tat gaa aga acc gag gga cgc cac cat ctg ttc 672
Thr Ile Val Glu Gln Tyr Glu Arg Thr Glu Gly Arg His His Leu Phe
210 215 220
ctt aag gct gaa ctt ggc tca aac gtg ggt gag cgg taa 711
Leu Lys Ala Glu Leu Gly Ser Asn Val Gly Glu Arg
225 230 235
<210> 4
<211> 236
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 4
Met Ser Cys Ser Lys Asn Val Ile Lys Glu Phe Met Arg Phe Lys Val
1 5 10 15
Arg Met Glu Gly Thr Val Asn Gly His Glu Phe Glu Ile Glu Gly Glu
20 25 30
Gly Glu Gly Arg Pro Tyr Glu Gly His Asn Thr Val Lys Leu Lys Val
35 40 45
Thr Lys Gly Gly Pro Leu Pro Phe Ala Trp Asp Ile Leu Ser Pro Gln
50 55 60
Phe Gln Tyr Gly Ser Lys Val Tyr Val Lys His Pro Ala Asp Ile Pro
65 70 75 80
Asp Tyr Lys Lys Leu Ser Phe Pro Glu Gly Phe Lys Trp Glu Arg Val
85 90 95
Met Asn Phe Glu Asp Gly Gly Val Val Thr Val Thr Gln Asp Ser Ser
100 105 110
Leu Gln Asp Gly Cys Phe Ile Tyr Lys Val Lys Phe Ile Gly Val Asn
115 120 125
Phe Pro Ser Asp Gly Pro Val Met Gln Lys Lys Thr Met Gly Trp Glu
130 135 140
Ala Ser Thr Glu Arg Leu Tyr Pro Arg Asp Gly Val Leu Lys Gly Glu
145 150 155 160
Ile His Lys Ala Leu Lys Leu Lys Asp Gly Gly His Tyr Leu Val Glu
165 170 175
Phe Lys Thr Ile Tyr Met Ala Lys Lys Pro Val Gln Leu Pro Gly Tyr
180 185 190
Tyr Tyr Val Asp Ser Lys Leu Asp Ile Thr Ser His Asn Lys Asp Tyr
195 200 205
Thr Ile Val Glu Gln Tyr Glu Arg Thr Glu Gly Arg His His Leu Phe
210 215 220
Leu Lys Ala Glu Leu Gly Ser Asn Val Gly Glu Arg
225 230 235
<210> 5
<211> 684
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> mutant green fluorescent protein
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(684)
<400> 5
atg agt gtg ata aaa cca gac atg aag atc aag ctg cgt atg gaa ggt 48
Met Ser Val Ile Lys Pro Asp Met Lys Ile Lys Leu Arg Met Glu Gly
1 5 10 15
gct gta aac ggg cac aag ttc gtg att gaa gga gac gga aaa ggc aag 96
Ala Val Asn Gly His Lys Phe Val Ile Glu Gly Asp Gly Lys Gly Lys
20 25 30
cct ttc gag gga aaa cag act atg gac ctt aca gtc ata gaa ggc gca 144
Pro Phe Glu Gly Lys Gln Thr Met Asp Leu Thr Val Ile Glu Gly Ala
35 40 45
cct ttg cct ttc gct tac gat atc ttg aca aca gta ttc gat tac ggc 192
Pro Leu Pro Phe Ala Tyr Asp Ile Leu Thr Thr Val Phe Asp Tyr Gly
50 55 60
aac agg gta ttc gcc aaa tac cca aaa gac ata cca gac tat ttc aag 240
Asn Arg Val Phe Ala Lys Tyr Pro Lys Asp Ile Pro Asp Tyr Phe Lys
65 70 75 80
cag acg ttt ccg gag ggg tac tcc tgg gaa cga agc atg aca tac gaa 288
Gln Thr Phe Pro Glu Gly Tyr Ser Trp Glu Arg Ser Met Thr Tyr Glu
85 90 95
gac cag ggc att tgc atc gcc aca aac gac ata aca atg atg aaa ggc 336
Asp Gln Gly Ile Cys Ile Ala Thr Asn Asp Ile Thr Met Met Lys Gly
100 105 110
gtc gac gac tgt ttt gtc tat aaa att cga ttt gat ggt gtg aac ttt 384
Val Asp Asp Cys Phe Val Tyr Lys Ile Arg Phe Asp Gly Val Asn Phe
115 120 125
cct gcc aat ggt cca gtt atg cag agg aag acg cta aaa tgg gag cca 432
Pro Ala Asn Gly Pro Val Met Gln Arg Lys Thr Leu Lys Trp Glu Pro
130 135 140
tcc act gaa aaa atg tat gtg cgt gat ggg gta ctg aag ggt gat gtt 480
Ser Thr Glu Lys Met Tyr Val Arg Asp Gly Val Leu Lys Gly Asp Val
145 150 155 160
aac atg gct ctg ttg ctt gaa gga ggt ggc cat tac cga tgt gac tcc 528
Asn Met Ala Leu Leu Leu Glu Gly Gly Gly His Tyr Arg Cys Asp Ser
165 170 175
aaa act act tac aaa gct aag aag gtt gtc cag ttg cca gac tat cat 576
Lys Thr Thr Tyr Lys Ala Lys Lys Val Val Gln Leu Pro Asp Tyr His
180 185 190
ttt gtt gac cat cgc att gag att gtg agc cac gac aaa gat tac aac 624
Phe Val Asp His Arg Ile Glu Ile Val Ser His Asp Lys Asp Tyr Asn
195 200 205
aag gtt aag ctg tat gag cat gcc gaa gct cat tct ggg ctg ccg agg 672
Lys Val Lys Leu Tyr Glu His Ala Glu Ala His Ser Gly Leu Pro Arg
210 215 220
cag gcc aag taa 684
Gln Ala Lys
225
<210> 6
<211> 227
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 6
Met Ser Val Ile Lys Pro Asp Met Lys Ile Lys Leu Arg Met Glu Gly
1 5 10 15
Ala Val Asn Gly His Lys Phe Val Ile Glu Gly Asp Gly Lys Gly Lys
20 25 30
Pro Phe Glu Gly Lys Gln Thr Met Asp Leu Thr Val Ile Glu Gly Ala
35 40 45
Pro Leu Pro Phe Ala Tyr Asp Ile Leu Thr Thr Val Phe Asp Tyr Gly
50 55 60
Asn Arg Val Phe Ala Lys Tyr Pro Lys Asp Ile Pro Asp Tyr Phe Lys
65 70 75 80
Gln Thr Phe Pro Glu Gly Tyr Ser Trp Glu Arg Ser Met Thr Tyr Glu
85 90 95
Asp Gln Gly Ile Cys Ile Ala Thr Asn Asp Ile Thr Met Met Lys Gly
100 105 110
Val Asp Asp Cys Phe Val Tyr Lys Ile Arg Phe Asp Gly Val Asn Phe
115 120 125
Pro Ala Asn Gly Pro Val Met Gln Arg Lys Thr Leu Lys Trp Glu Pro
130 135 140
Ser Thr Glu Lys Met Tyr Val Arg Asp Gly Val Leu Lys Gly Asp Val
145 150 155 160
Asn Met Ala Leu Leu Leu Glu Gly Gly Gly His Tyr Arg Cys Asp Ser
165 170 175
Lys Thr Thr Tyr Lys Ala Lys Lys Val Val Gln Leu Pro Asp Tyr His
180 185 190
Phe Val Asp His Arg Ile Glu Ile Val Ser His Asp Lys Asp Tyr Asn
195 200 205
Lys Val Lys Leu Tyr Glu His Ala Glu Ala His Ser Gly Leu Pro Arg
210 215 220
Gln Ala Lys
225
<210> 7
<211> 684
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> mutant green fluorescent protein
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(684)
<400> 7
atg agt gtg ata aaa cca gac atg aag atc aag ctg cgt atg gaa ggt 48
Met Ser Val Ile Lys Pro Asp Met Lys Ile Lys Leu Arg Met Glu Gly
1 5 10 15
gct gta aac ggg cac aag ttc gtg att gaa gga gac gga aaa ggc aag 96
Ala Val Asn Gly His Lys Phe Val Ile Glu Gly Asp Gly Lys Gly Lys
20 25 30
cct ttc gag gga aaa cag act atg gac ctt aca gtc ata gaa ggc gca 144
Pro Phe Glu Gly Lys Gln Thr Met Asp Leu Thr Val Ile Glu Gly Ala
35 40 45
cct ttg cct ttc gct tac gat atc ttg aca aca gta ttc gat tac ggc 192
Pro Leu Pro Phe Ala Tyr Asp Ile Leu Thr Thr Val Phe Asp Tyr Gly
50 55 60
aac agg gta ttc gcc aaa tac cca aaa gac ata cca gac tat ttc aag 240
Asn Arg Val Phe Ala Lys Tyr Pro Lys Asp Ile Pro Asp Tyr Phe Lys
65 70 75 80
cag acg ttt ccg gag ggg tac tcc tgg gaa cga agc atg aca tac gaa 288
Gln Thr Phe Pro Glu Gly Tyr Ser Trp Glu Arg Ser Met Thr Tyr Glu
85 90 95
gac cag ggc att tgc atc gcc aca aac gac ata aca atg atg aaa ggc 336
Asp Gln Gly Ile Cys Ile Ala Thr Asn Asp Ile Thr Met Met Lys Gly
100 105 110
gtc gac gac tgt ttt gtc tat aaa att cga ttt gat ggt gtg aac ttt 384
Val Asp Asp Cys Phe Val Tyr Lys Ile Arg Phe Asp Gly Val Asn Phe
115 120 125
cct gcc aat ggt cca gtt atg cag agg aag acg cta aaa tgg gag cca 432
Pro Ala Asn Gly Pro Val Met Gln Arg Lys Thr Leu Lys Trp Glu Pro
130 135 140
tcc act gaa aaa atg tat gtg cgt gat ggg gta ctg aag ggt gat gtt 480
Ser Thr Glu Lys Met Tyr Val Arg Asp Gly Val Leu Lys Gly Asp Val
145 150 155 160
aac atg gct ctg ttg ctt gaa gga ggt ggc cat tac cga tgt gac ttc 528
Asn Met Ala Leu Leu Leu Glu Gly Gly Gly His Tyr Arg Cys Asp Phe
165 170 175
aaa act act tac aaa gct aag aag gtt gtc cag ttg cca gac tat cat 576
Lys Thr Thr Tyr Lys Ala Lys Lys Val Val Gln Leu Pro Asp Tyr His
180 185 190
ttt gtt gac cat cgc att gag att gtg agc cac gac aaa gat tac aac 624
Phe Val Asp His Arg Ile Glu Ile Val Ser His Asp Lys Asp Tyr Asn
195 200 205
aag gtt aag ctg tat gag cat gcc gaa gct cat tct ggg ctg ccg agg 672
Lys Val Lys Leu Tyr Glu His Ala Glu Ala His Ser Gly Leu Pro Arg
210 215 220
cag gcc aag taa 684
Gln Ala Lys
225
<210> 8
<211> 227
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 8
Met Ser Val Ile Lys Pro Asp Met Lys Ile Lys Leu Arg Met Glu Gly
1 5 10 15
Ala Val Asn Gly His Lys Phe Val Ile Glu Gly Asp Gly Lys Gly Lys
20 25 30
Pro Phe Glu Gly Lys Gln Thr Met Asp Leu Thr Val Ile Glu Gly Ala
35 40 45
Pro Leu Pro Phe Ala Tyr Asp Ile Leu Thr Thr Val Phe Asp Tyr Gly
50 55 60
Asn Arg Val Phe Ala Lys Tyr Pro Lys Asp Ile Pro Asp Tyr Phe Lys
65 70 75 80
Gln Thr Phe Pro Glu Gly Tyr Ser Trp Glu Arg Ser Met Thr Tyr Glu
85 90 95
Asp Gln Gly Ile Cys Ile Ala Thr Asn Asp Ile Thr Met Met Lys Gly
100 105 110
Val Asp Asp Cys Phe Val Tyr Lys Ile Arg Phe Asp Gly Val Asn Phe
115 120 125
Pro Ala Asn Gly Pro Val Met Gln Arg Lys Thr Leu Lys Trp Glu Pro
130 135 140
Ser Thr Glu Lys Met Tyr Val Arg Asp Gly Val Leu Lys Gly Asp Val
145 150 155 160
Asn Met Ala Leu Leu Leu Glu Gly Gly Gly His Tyr Arg Cys Asp Phe
165 170 175
Lys Thr Thr Tyr Lys Ala Lys Lys Val Val Gln Leu Pro Asp Tyr His
180 185 190
Phe Val Asp His Arg Ile Glu Ile Val Ser His Asp Lys Asp Tyr Asn
195 200 205
Lys Val Lys Leu Tyr Glu His Ala Glu Ala His Ser Gly Leu Pro Arg
210 215 220
Gln Ala Lys
225
<210> 9
<211> 45
<212> RNA
<213> Artificial
<220>
<223> adaptor
<400> 9
gcugauggcg augaaugaac acugcguuug cuggcuuuga ugaaa 45
<210> 10
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> primer
<400> 10
ctcgagaagc ttgaattcgg atcctttttt tttttttttt t 41
<210> 11
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> primer
<400> 11
gctgatggcg atgaatgaac actg 24
<210> 12
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> primer
<400> 12
ccggtaccta aggaggccac catgagttgt tcc 33
<210> 13
<211> 37
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> primer
<400> 13
ccggtaccta aggaggccac catgagtgtg ataaaac 37
<210> 14
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> primer
<400> 14
ccactagtct agatcattac cgctc 25
<210> 15
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> primer
<400> 15
ggtctagatt acttggcctg cctc 24
Claims (46)
- 하나 이상의 아미노산 치환에 의해 상응하는 야생형 적색 형광 단백질의 아미노산 서열과 상이한 아미노산 서열을 포함하며, 상기 야생형 적색 형광 단백질에 의해 생성된 상응하는 광학 특성에 비해 상이한 광학 특성을 갖는 제1 돌연변이체 형광 단백질.
- 제1항에 있어서, 상이한 광학 특성이 더 높은 상대적 형광 강도를 포함하는 것인 제1 돌연변이체 형광 단백질.
- 제2항에 있어서, 서열 1(레드 I)을 포함하는 DNA 서열에 의해 코딩되는 제1 돌연변이체 형광 단백질.
- 하나 이상의 아미노산 치환에 의해 제1항의 제1 돌연변이체 형광 단백질의 아미노산 서열과 상이한 아미노산 서열을 포함하며, 상기 제1 돌연변이체 형광 단백질에 의해 생성된 상응하는 광학 특성에 비해 상이한 광학 특성을 갖는 제2 돌연변이체 형광 단백질.
- 제4항에 있어서, 상이한 광학 특성이 더 높은 상대적 형광 강도를 포함하는 것인 제2 돌연변이체 형광 단백질.
- 제5항에 있어서, 서열 2의 레드 I의 위치 232에 상응하는 위치의 아미노산이 치환된 제2 돌연변이체 형광 단백질.
- 제5항에 있어서, 서열 4(레드 II)의 아미노산 서열을 포함하는 제2 돌연변이체 형광 단백질.
- 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하며 돌연변이체 형광 단백질을 코딩하는 단리된 핵산 또는 그의 상보체.
- 제8항에 있어서, 서열 1(레드 I)을 포함하는 단리된 핵산.
- 제8항에 있어서, 서열 3(레드 II)을 포함하는 단리된 핵산.
- 제8항에 따른 단리된 핵산을 포함하는 벡터.
- 제11항에 있어서, 핵산에 작동가능하게 연결된 프로모터를 추가로 포함하는 벡터.
- (A) 선택된 폴리펩티드를 코딩하는 제1 코딩 서열 및 (B) 제8항의 핵산으로 이루어진 군으로부터 선택된 제2 코딩 서열을 포함하며, 여기서 제1 코딩 서열과 제2 코딩 서열이 융합되어, 융합된 서열이 발현됨으로써 제1 코딩 서열에 의해 코딩된 폴리펩티드와 제2 코딩 서열에 의해 코딩된 폴리펩티드가 융합된 형광 하이브리드 단백질이 생성되는 것인 핵산 구조물.
- 제8항의 핵산을 세포 또는 생물에 도입하는 단계, 세포의 복제를 허용하는 단계 및 형광 방출에 의해 핵산 발현을 검출하는 단계를 포함하는, 유전자 발현 검출 방법.
- 제14항에 있어서, 진핵 세포에 핵산을 도입하는 방법.
- 제14항에 있어서, 원핵 세포에 핵산을 도입하는 방법.
- 제14항에 있어서, 생체내에서 핵산 발현을 검출하는 방법.
- 제14항에 있어서, 시험관내에서 핵산 발현을 검출하는 방법.
- 제8항의 핵산을 포함하는 세포.
- 제19항에 있어서, 세포의 게놈에 핵산이 통합된 세포.
- 제19항에 있어서, 세포의 게놈에 핵산이 통합되지 않은 세포.
- 제8항의 단리된 핵산을 포함하는 동물.
- 제22항에 있어서, 제브라피쉬(zebrafish)인 동물.
- 하나 이상의 아미노산 치환에 의해 상응하는 야생형 녹색 형광 단백질의 아미노산 서열과 상이한 아미노산 서열을 포함하며, 상기 야생형 녹색 형광 단백질에 의해 생성된 상응하는 광학 특성에 비해 상이한 광학 특성을 갖는 제1 돌연변이체 형광 단백질.
- 제24항에 있어서, 상이한 광학 특성이 더 높은 상대적 형광 강도를 포함하는 것인 제1 돌연변이체 형광 단백질.
- 제25항에 있어서, 서열 5(그린 I)를 포함하는 DNA 서열에 의해 코딩되는 제1 돌연변이체 형광 단백질.
- 하나 이상의 아미노산 치환에 의해 제24항의 제1 돌연변이체 형광 단백질의 아미노산 서열과 상이한 아미노산 서열을 포함하며, 상기 제1 돌연변이체 형광 단백질에 의해 생성된 상응하는 광학 특성에 비해 상이한 광학 특성을 갖는 제2 돌연변이체 형광 단백질.
- 제27항에 있어서, 상이한 광학 특성이 더 높은 상대적 형광 강도를 포함하는 것인 제2 돌연변이체 형광 단백질.
- 제28항에 있어서, 서열 6의 그린 I의 위치 176에 상응하는 위치의 아미노산이 치환된 제2 돌연변이체 형광 단백질.
- 제28항에 있어서, 서열 8(그린 II)의 아미노산 서열을 포함하는 제2 돌연변이체 형광 단백질.
- 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하며 돌연변이체 녹색 형광 단백질을 코딩하는 단리된 핵산 또는 그의 상보체.
- 제31항에 있어서, 서열 5(그린 I)를 포함하는 단리된 핵산.
- 서열 6(그린 II)을 포함하는 제31항의 핵산의 돌연변이체 형태.
- 제31항에 따른 단리된 핵산을 포함하는 벡터.
- 제34항에 있어서, 핵산에 작동가능하게 연결된 프로모터를 추가로 포함하는 벡터.
- (A) 선택된 폴리펩티드를 코딩하는 제1 코딩 서열 및 (B) 제31항의 핵산으로 이루어진 군으로부터 선택된 제2 코딩 서열을 포함하며, 여기서 제1 코딩 서열과 제2 코딩 서열이 융합되어, 융합된 서열이 발현됨으로써 제1 코딩 서열에 의해 코딩된 폴리펩티드와 제2 코딩 서열에 의해 코딩된 폴리펩티드가 융합된 형광 하이브리드 단백질이 생성되는 것인 핵산 구조물.
- 제31항의 핵산을 세포 또는 생물에 도입하는 단계, 세포의 복제를 허용하는 단계 및 형광 방출에 의해 핵산 발현을 검출하는 단계를 포함하는, 핵산 발현 검출 방법.
- 제37항에 있어서, 진핵 세포에 핵산을 도입하는 방법.
- 제37항에 있어서, 원핵 세포에 핵산을 도입하는 방법.
- 제37항에 있어서, 생체내에서 핵산 발현을 검출하는 방법.
- 제37항에 있어서, 시험관내에서 핵산 발현을 검출하는 방법.
- 제31항의 핵산을 포함하는 세포.
- 제42항에 있어서, 세포의 게놈에 핵산이 통합된 세포.
- 제42항에 있어서, 세포의 게놈에 핵산이 통합되지 않은 세포.
- 제31항의 핵산을 포함하는 동물.
- 제45항에 있어서, 제브라피쉬인 동물.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US10/314,936 US7413874B2 (en) | 2002-12-09 | 2002-12-09 | Nucleic acid encoding fluorescent proteins from aquatic species |
| US10/314,936 | 2002-12-09 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20050084210A true KR20050084210A (ko) | 2005-08-26 |
Family
ID=32468600
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020057010402A KR20050084210A (ko) | 2002-12-09 | 2003-10-02 | 수생 종 유래의 형광 단백질 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US7413874B2 (ko) |
| EP (1) | EP1578967A4 (ko) |
| JP (1) | JP2006508678A (ko) |
| KR (1) | KR20050084210A (ko) |
| AU (1) | AU2003277222B2 (ko) |
| CA (1) | CA2509373A1 (ko) |
| WO (1) | WO2004053119A1 (ko) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20160013308A (ko) * | 2014-07-24 | 2016-02-04 | 전남대학교산학협력단 | 신규한 적색형광단백질 및 이의 형질전환 마커로서의 용도 |
| KR20170115474A (ko) * | 2017-09-25 | 2017-10-17 | 전남대학교산학협력단 | 비-형광성 형광 단백질을 이용한 유전독성 분석방법 |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE602004023199D1 (de) * | 2003-06-16 | 2009-10-29 | Riken Wako | Fluoreszenzprotein und pigmentprotein |
| KR20080009908A (ko) * | 2006-07-25 | 2008-01-30 | 최두식 | 형광 진주 생산용 패류 형질전환체 |
| US8680235B2 (en) * | 2006-09-22 | 2014-03-25 | Stowers Institute For Medical Research | Branchiostoma derived fluorescent proteins |
| PL2288715T3 (pl) | 2008-04-11 | 2015-03-31 | Merrimack Pharmaceuticals Inc | Łączniki będące albuminą surowicy ludzkiej i ich koniugaty |
| GB0919014D0 (en) * | 2009-10-30 | 2009-12-16 | 3M Innovative Properties Co | Soll and stain resistant coating composition for finished leather substrates |
| CN105820227B (zh) * | 2015-01-06 | 2019-10-22 | 北京义翘神州科技有限公司 | 多种改进型橙/红色荧光蛋白 |
| WO2016187068A1 (en) | 2015-05-15 | 2016-11-24 | The General Hospital Corporation | Antagonistic anti-tumor necrosis factor receptor superfamily antibodies |
| WO2022197586A1 (en) * | 2021-03-15 | 2022-09-22 | Cargill, Incorporated | Protein pigments from cnidaria for meat substitute compositions |
Family Cites Families (41)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US106078A (en) * | 1870-08-02 | Improvement in motive-power engines | ||
| US5096825A (en) | 1983-01-12 | 1992-03-17 | Chiron Corporation | Gene for human epidermal growth factor and synthesis and expression thereof |
| US5583024A (en) | 1985-12-02 | 1996-12-10 | The Regents Of The University Of California | Recombinant expression of Coleoptera luciferase |
| US4968613A (en) | 1987-07-29 | 1990-11-06 | Kikkoman Corporation | Luciferase gene and novel recombinant DNA as well as a method of producing luciferase |
| US5182202A (en) | 1987-11-30 | 1993-01-26 | Kikkoman Corporation | Purified luciferase from luciola cruciata |
| JPH088864B2 (ja) | 1988-04-12 | 1996-01-31 | キッコーマン株式会社 | ルシフェラーゼ |
| US5604123A (en) | 1988-08-09 | 1997-02-18 | Toray Industries, Inc. | Luciferase, gene encoding the same and production process of the same |
| US5292658A (en) | 1989-12-29 | 1994-03-08 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. Boyd Graduate Studies Research Center | Cloning and expressions of Renilla luciferase |
| US5219737A (en) | 1990-03-27 | 1993-06-15 | Kikkoman Corporation | Mutant luciferase of a firefly, mutant luciferase genes, recombinant dnas containing the genes and a method of producing mutant luciferase |
| US5283179A (en) | 1990-09-10 | 1994-02-01 | Promega Corporation | Luciferase assay method |
| US5229285A (en) | 1991-06-27 | 1993-07-20 | Kikkoman Corporation | Thermostable luciferase of firefly, thermostable luciferase gene of firefly, novel recombinant dna, and process for the preparation of thermostable luciferase of firefly |
| JPH07500966A (ja) | 1991-10-30 | 1995-02-02 | プラント・ジエネテイツク・システムズ・エヌ・ベー | 修飾遺伝子及びそれらの植物細胞における発現 |
| US6118047A (en) | 1993-08-25 | 2000-09-12 | Dekalb Genetic Corporation | Anthranilate synthase gene and method of use thereof for conferring tryptophan overproduction |
| GB9501170D0 (en) | 1994-03-23 | 1995-03-08 | Secr Defence | Luciferases |
| US5786464C1 (en) | 1994-09-19 | 2012-04-24 | Gen Hospital Corp | Overexpression of mammalian and viral proteins |
| US5795737A (en) | 1994-09-19 | 1998-08-18 | The General Hospital Corporation | High level expression of proteins |
| US5670356A (en) | 1994-12-12 | 1997-09-23 | Promega Corporation | Modified luciferase |
| WO1996022376A1 (en) | 1995-01-20 | 1996-07-25 | The Secretary Of State For Defence | Mutant luciferases |
| US6342379B1 (en) | 1995-06-07 | 2002-01-29 | The Regents Of The University Of California | Detection of transmembrane potentials by optical methods |
| US5744320A (en) | 1995-06-07 | 1998-04-28 | Promega Corporation | Quenching reagents and assays for enzyme-mediated luminescence |
| ATE184613T1 (de) | 1995-09-22 | 1999-10-15 | Novo Nordisk As | Varianten des grünen fluoreszenzproteins, gfp |
| US5874304A (en) | 1996-01-18 | 1999-02-23 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Humanized green fluorescent protein genes and methods |
| US6020192A (en) | 1996-01-18 | 2000-02-01 | University Of Florida | Humanized green fluorescent protein genes and methods |
| US6900304B2 (en) * | 1996-01-31 | 2005-05-31 | The Regents Of The University Of California | Emission ratiometric indicators of phosphorylation |
| US6803188B1 (en) * | 1996-01-31 | 2004-10-12 | The Regents Of The University Of California | Tandem fluorescent protein constructs |
| AU717542B2 (en) | 1996-06-11 | 2000-03-30 | Merck & Co., Inc. | Synthetic hepatitis C genes |
| US5976796A (en) | 1996-10-04 | 1999-11-02 | Loma Linda University | Construction and expression of renilla luciferase and green fluorescent protein fusion genes |
| US6074859A (en) | 1997-07-08 | 2000-06-13 | Kikkoman Corporation | Mutant-type bioluminescent protein, and process for producing the mutant-type bioluminescent protein |
| AU8148398A (en) | 1997-07-15 | 1999-02-10 | Dow Agrosciences Llc | Nucleotide sequences of genes encoding sink proteins and uses thereof for improving the nutritional quality of feeds |
| JP4537573B2 (ja) | 1997-09-19 | 2010-09-01 | プロメガ・コーポレイシヨン | 熱安定ルシフェラーゼと生産方法 |
| US6414119B1 (en) | 1998-10-16 | 2002-07-02 | Rutgers, The State University | Rapidly greening, low oxygen mutant of the aequoria victoria green fluorescent protein |
| ATE502116T1 (de) | 1998-12-11 | 2011-04-15 | Clontech Lab Inc | Fluoreszierende proteine aus nicht- biolumineszenten arten der klasse anthozoa, gene die diese proteine kodieren und deren verwendungen |
| WO2001027150A2 (en) | 1999-10-14 | 2001-04-19 | Clontech Laboratories Inc. | Anthozoa derived chromo/fluoroproteins and methods for using the same |
| WO2001062919A1 (en) | 2000-02-23 | 2001-08-30 | Aurora Biosciences Corporation | Modified fluorescent proteins |
| US20020064842A1 (en) | 2000-06-09 | 2002-05-30 | Sorge Joseph A. | Renilla reniformis green fluorescent protein and mutants thereof |
| US20030157643A1 (en) | 2000-08-24 | 2003-08-21 | Almond Brian D | Synthetic nucleic acids from aquatic species |
| US7879540B1 (en) | 2000-08-24 | 2011-02-01 | Promega Corporation | Synthetic nucleic acid molecule compositions and methods of preparation |
| US6689391B2 (en) | 2001-03-30 | 2004-02-10 | Council Of Scientific & Industrial Research | Natural non-polar fluorescent dye from a non-bioluminescent marine invertebrate, compositions containing the said dye and its uses |
| WO2002094992A2 (en) | 2001-05-18 | 2002-11-28 | Rigel Pharmaceuticals, Incorporated | Directed evolution of protein in mammalian cells |
| WO2003025134A2 (en) | 2001-09-14 | 2003-03-27 | Rutgers, The State University Of New Jersey | mcFP ENCODING NUCLEIC ACIDS, POLYPEPTIDES, ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF |
| WO2003042401A2 (en) | 2001-11-13 | 2003-05-22 | Clontech Laboratories, Inc. | Novel chromophores/fluorophores and methods for using the same |
-
2002
- 2002-12-09 US US10/314,936 patent/US7413874B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2003
- 2003-10-02 EP EP03812772A patent/EP1578967A4/en not_active Withdrawn
- 2003-10-02 AU AU2003277222A patent/AU2003277222B2/en not_active Ceased
- 2003-10-02 JP JP2004559066A patent/JP2006508678A/ja not_active Ceased
- 2003-10-02 CA CA002509373A patent/CA2509373A1/en not_active Abandoned
- 2003-10-02 KR KR1020057010402A patent/KR20050084210A/ko not_active Application Discontinuation
- 2003-10-02 WO PCT/US2003/031203 patent/WO2004053119A1/en active Application Filing
-
2004
- 2004-12-23 US US11/021,014 patent/US7291711B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2007
- 2007-07-06 US US11/774,386 patent/US20090113565A1/en not_active Abandoned
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20160013308A (ko) * | 2014-07-24 | 2016-02-04 | 전남대학교산학협력단 | 신규한 적색형광단백질 및 이의 형질전환 마커로서의 용도 |
| KR20170115474A (ko) * | 2017-09-25 | 2017-10-17 | 전남대학교산학협력단 | 비-형광성 형광 단백질을 이용한 유전독성 분석방법 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1578967A4 (en) | 2006-10-25 |
| JP2006508678A (ja) | 2006-03-16 |
| US7413874B2 (en) | 2008-08-19 |
| US20050100954A1 (en) | 2005-05-12 |
| US20040110225A1 (en) | 2004-06-10 |
| WO2004053119A1 (en) | 2004-06-24 |
| US7291711B2 (en) | 2007-11-06 |
| CA2509373A1 (en) | 2004-06-24 |
| AU2003277222A1 (en) | 2004-06-30 |
| AU2003277222B2 (en) | 2008-06-19 |
| EP1578967A1 (en) | 2005-09-28 |
| US20090113565A1 (en) | 2009-04-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20090113565A1 (en) | Methods for Detecting Fluorescent Proteins and Animals Having Fluorescent Proteins | |
| JP2003527833A (ja) | 花虫類に由来する発色団／蛍光体、およびそれらの使用法 | |
| JP5221308B2 (ja) | 非凝集性蛍光性タンパク質およびその使用方法 | |
| JP6074162B2 (ja) | 花虫類に由来する発色団／蛍光体、およびそれらの使用法 | |
| RU2303600C2 (ru) | Новые хромофоры/флуорофоры и способы их применения | |
| JP2011087581A (ja) | Ａｅｑｕｏｒｅａｃｏｅｒｕｌｅｓｃｅｎｓ由来の新規な蛍光タンパク質およびその使用方法 | |
| JP4330338B2 (ja) | 大きく赤側にシフトした蛍光タンパク質 | |
| Melnick et al. | The Drosophila stubarista phenotype is associated with a dosage effect of the putative ribosome-associated protein D-p40 on spineless. | |
| Zheng et al. | The novel helicase helG (DHX30) is expressed during gastrulation in mice and has a structure similar to a human DExH box helicase | |
| US9102750B2 (en) | Branchiostoma derived fluorescent proteins | |
| US20230413790A1 (en) | Genetically edited albino-red germlines of tilapia fish | |
| JP2011092198A (ja) | 急速に成熟する蛍光タンパク質およびその使用法 | |
| JP2010017186A (ja) | 連結された色素／蛍光性ドメインをコードする核酸ならびにその使用法 | |
| Dobiášovská | Visual system development in Platynereis dumerilii: insight from genetic engineering approach | |
| US20030135871A1 (en) | Modified railroad worm red luciferase coding sequences | |
| JP2005514032A (ja) | 変異体発色団／蛍光団ならびにそれらの製造法および使用法 | |
| US7067645B2 (en) | mmFP encoding nucleic acids, polypeptides, antibodies and methods of use thereof | |
| Yasso | Mapping the tnIs5 and tnIs6 transgenes in Caenorhabditis elegans |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| WITN | Application deemed withdrawn, e.g. because no request for examination was filed or no examination fee was paid |