KR20050060893A - 5'-구아닐산의 효율적인 제조를 위한 재조합 미생물과이를 이용한 5'-구아닐산의 제조방법 - Google Patents

5'-구아닐산의 효율적인 제조를 위한 재조합 미생물과이를 이용한 5'-구아닐산의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 5'-크산틸산 아미나제를 발현하여 5'-크산틸산을 5'-구아닐산으로 전환시키는 미생물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 5'-크산틸산 아미나제를 암호화하는 guaA 유전자, 상기 유전자 발현을 유도하는 glnAp2 프로모터 및 상기 프로모터를 조절하는 glnL 유전자를 재조합하는 방법에 의하여, 고농도의 5'-크산틸산 아미나제를 획득함으로써 고효율로 5'-구아닐산을 생산할 수 있는 형질전환 균주 에스케리키아 콜라이 GPD1114 (Escherichia coli GPD1114) KCCM-10543에 관한 것이다.
본 발명에 의한 형질전환 균주 에스케리키아 콜라이 GPD1114 (Escherichia coli GPD1114) KCCM-10543을 활용하면, 별도의 유도 발현이 필요없이 5'-크산틸산 아미나제가 배양 후반부 성장 단계에 이르러 고발현이 일어나므로 고농도의 5'-크산틸산 아미나제를 획득할 수 있으며, 획득한 5'-크산틸산 아미나제를 이용하여 5'-구아닐산을 5'-크산틸산으로부터 고농도로 생산할 수 있다.

Description

5'-구아닐산의 효율적인 제조를 위한 재조합 미생물과 이를 이용한 5'-구아닐산의 제조방법{Recombinant Escherichia coli for producing 5’-guanylic acid}
본 발명은 화학적 조미료로서 널리 사용되고 있는 5'-구아닐산의 효율적인 제조를 위해 사용할 수 있는 미생물 및 그 제조방법에 관한 것이다.
5'-구아닐산은 효모의 RNA를 미생물 효소를 이용하거나 또는 화학적으로 분해하는 방법, 당과 질소원, 인산원을 함유하는 배지에서 미생물의 변이주를 배양하고, 뉴클레오티드를 직접 생산시키는 방법, 발효법으로 뉴클레오티드합성의 중간체를 생산한 후, 화학적 또는 효소적으로 뉴클레오티드로 변환하는 방법이 있으며, 현재 경제적으로 유리한 제조법으로서 발효와 화학합성 및 효소전환의 복합 제조법이 공업적으로 널리 사용되고 있다.
이 복합 제조법은 직접 발효에 의하여 5'-크산틸산을 생산하게 되는 발효공정과, 그 발효산물들을 효소적으로 5'-구아닐산으로 전환하는 반응공정으로 이루어지며, 이러한 복합 제조 프로세서에서는 2종의 미생물이 사용되고 있다. 즉 프로세스의 제 1공정인 발효공정에서는, 5'-크산틸산의 생산균으로서 육종된 변이주가 사용되며 제 2공정인 반응공정에서는 5'-크산틸산 아미나제 활성을 가지는 단백질을 코드하는 유전자를 연속적으로 고발현시킨 미생물이 사용된다. 이런 반응 과정에 이용되는 5'-크산틸산 아미나제가 고발현화된 상태의 전환 미생물은 배양 공정 초기에 비해 배양 공정 후기 생존율이 현저히 감소하게 된다. 이는 5'-크산틸산 아미나제를 암호화 하는 guaA 유전자는 전환 미생물의 모균주에게 치사유전자로 알려져 있으며, 상기 효소의 연속적 고발현이 배양 공정 후반부의 전환 미생물의 생육을 저해하는 것으로 알려져 있다. 따라서 이와 같은 5'-크산틸산 아미나제의 고발현을 위하여 지금까지는 유도 발현 시스템을 활용해 왔다[참조: Tatsuro Fujio, Tatsunari Nishi, Biosci.Biotech.Biochem. 840-845,(1997)].
유도 발현 시스템을 사용할 경우는 반드시 배양 중에 유도제를 투입하거나 혹은 유도 조건으로의 발효 조건 변화를 수행하여야 한다. 이 과정은 반드시 비용이 수반되고 공정 조절이 복잡해진다는 단점이 있다.
선행특허 WO0107567 에서는, 생합성 효소 등 폴리펩타이드를 생산하는 균주에 프로모터 유전자 및 상기 프로모터를 조절하는 기능을 하는 반응조절 단백질 유전자를 도입함으로써 생합성 효소 등 폴리펩타이드를 간편하고 효율적으로 생산하는 방법에 관하여 개시한 바 있으며, 구체적으로는 glnAp2 프로모터를 조절하는 glnL 유전자를 제거 또는 변형한 숙주 세포 E.coli에 대해 개시한 바 있다. 또한 선행문헌인 "Production of Nucleotides and Nucleosides by Fermentation(Gordon and Breach Science Publishers)"에 따르면 5'-크산틸산 아미나제를 암호화 하는 guaA 유전자 및 트립토판 오페론의 프로모터를 함께 숙주 세포 내에 도입함으로써 5'-크산틸산에서 5'-구아닐산으로의 전환 효율을 향상시키는 기술에 대해 개시한 바 있다.
본 발명자들은 상기와 같은 종래 기술을 바탕으로, 5'-크산틸산 아미나제를 암호화하는 guaA 유전자 발현을 유도하는 프로모터 및 상기 프로모터를 조절하는 유전자를 변형하는 방법에 의하여, 고효율로 5'-크산틸산을 5'-구아닐산으로 전환시킬 수 있는 형질전환 균주를 제공하고자 하였으며, 이 때 guaA 유전자 발현을 유도하는 프로모터로서, 생육 상태 의존적 발현 프로모터로 알려진 glnAp2 프로모터를 이용하는 것이 가장 효과적임을 확인함으로써, 본 발명을 개발하게 되었다.
따라서, 본 발명의 목적은 생육 상태에 따라 발현 조절이 가능한 5'-크산틸산 아미나제 유전자로 형질전환된 균주를 제공하여, 앞에서 기술한 유도 발현 시스템을 사용하는 경우의 문제점을 해결하고, 보다 고효율로 5'-크산틸산을 5'-구아닐산으로 전환할 수 있도록 하는 것이다. 본 발명의 또 다른 목적은 상기 형질전환 균주를 이용하여 5'-구아닐산을 생산하는 방법을 제공하는 것이다.
상기한 바와 같은 본 발명의 기술적 과제는, glnAp2 프로모터와 guaA 유전자를 라이게이션하여 얻은 플라스미드를, glnAp2 프로모터를 조절하는 glnL 유전자를 불활성화시킨 균주에 유입시켜 형질전환하는 방법에 의하여, 기존 균주에 비해 고농도의 5'-구아닐산을 생성할 수 있는 신균주를 개발함으로써 달성하였다.
본 발명은 5'-크산틸산 아미나제를 발현하여 5'-크산틸산을 5'-구아닐산으로 전환시키는 미생물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 5'-크산틸산 아미나제를 암호화하는 guaA 유전자, 상기 유전자 발현을 유도하는 glnAp2 프로모터 및 상기 프로모터를 조절하는 glnL 유전자를 재조합하는 방법에 의하여, 고농도의 5'-크산틸산 아미나제를 획득함으로써 고효율로 5'-구아닐산을 생산할 수 있는 형질전환 균주 에스케리키아 콜라이 GPD1114 (Escherichia coli GPD1114) KCCM-10543에 관한 것이다.
본 발명에 의한 형질전환 균주 에스케리키아 콜라이 GPD1114 (Escherichia coli GPD1114) KCCM-10543을 활용하면, 별도의 유도 발현이 필요없이 5'-크산틸산 아미나제가 성장 후반 단계에 이르러 고발현이 일어나므로 고농도의 5'-크산틸산 아미나제를 획득할 수 있으며, 획득한 5'-크산틸산 아미나제를 이용하여 5'-구아닐산을 5'-크산틸산으로부터 고농도로 생산할 수 있다.
본 발명자들은 5'-크산틸산 아미나제를 암호화하는 guaA 유전자 발현을 유도하는 프로모터 및 상기 프로모터를 조절하는 유전자를 재조합 방법에 의해 변형함으로써 고효율로 5'-크산틸산을 5'-구아닐산으로 전환시킬 수 있는 형질전환 균주를 제공하고자 하였으며, 이 때 guaA 유전자 발현을 유도하는 프로모터로서, 생육 상태 의존적 발현 프로모터로 알려진 glnAp2 프로모터를 이용하는 것이 가장 효과적이라는 점을 확인함으로써, 본 발명을 개발하게 되었다.
본 발명에 있어서, 상기 5'-크산틸산 아미나제 유전자는 에스케리키아 종에서 유래하는 5'-크산틸산 아미나제 유전자이다. 구체적으로는, 진뱅크 허가번호 GI 1788854의 아미노산 서열을 갖는 것이다.
본 발명에 있어서 5'-크산틸산 아미나제의 발현을 조절할 수 있는 프로모터는 생육 상태 의존적 발현 프로모터로 알려진 glnAp2 프로모터이다[참조: William F, Farmer, James C. Liao, biotech. nature.,533-537(2000)].
상기 발명에 이용된 glnAp2 프로모터는 glnL 유전자가 암호화 하는 NR Ⅱ 발현량과 세포 내 ACP(Acetyl phosphate) 농도에 의해 조절 받는다. 여기에서 ACP는 과다한 탄소원 흐름을 나타내는 신호이며 이 신호에 의해 glnL은 DNA에 결합하게 됨으로서 DNA 전사 과정을 조절하는 신호 역할을 한다. 이는 세포의 질소원 결핍 상태, 즉 대수증가기 말기에서 여러가지 생육에 필요한 것을 생합성하게 되는 요구를 감소시키며 과다한 탄소원의 흐름을 나타내기 시작되면 glnL 유전자가 활성화되어 glnAp2 프로모터가 발현되지 않는다. 따라서 glnL 유전자 불활성화 상태에서 glnAp2 프로모터의 효과적인 발현이 나타나며 이 시기가 세포 생육 과정중 대수 증가기 말기가 된다. 여기에서 이용되는 glnL 유전자 불활성화 균주를 GLN0307이라 명명하기로 하였다.
본 발명은 또한, glnAp2 프로모터와 guaA 구조 유전자를 라이게이션하여 얻은 플라스미드를 glnL 유전자 불활성 미생물 GLN0307에 전기충격법으로 유입시켜 형질전환하여 모균주에 비해 고농도의 5'-구아닐산을 생성하는 신균주를 개발하였다. 이 신 균주는 GPD1114라고 명명하였다.
본 발명에 있어서, 5'-크산틸산 아미나제 유전자의 형질전환에 사용되는 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli)은 에스케리키아 속에 속하고, 5'-구아닐산 전환능을 갖는 것이면 어느 것이든 포함된다.
본 명세서에 사용된 "형질전환"이라는 용어는 유전자를 숙주세포내로 도입하여 숙주세포내에서 발현될 수 있도록 하는 것을 의미한다. 형질전환된 유전자는 숙주세포내에서 발현될 수 있는 상태이기만 하면, 숙주세포의 염색체내에 삽입된 것이든 염색체외에 위치하는 것이든 어느 것이나 포함된다. 또한, 상기 유전자는 폴리펩티드를 코딩할 수 있는 폴리뉴클레오티드로서 DNA 및 RNA를 포함한다. 상기 유전자는 숙주세포내로 도입되어 발현될 수 있는 것이면, 어떠한 형태로 도입되는 것이든 상관없다. 예를 들면, 상기 유전자는, 자체적으로 상기 유전자의 발현에 필요한 모든 요소(element)를 포함하는 폴리뉴클레오티드 구조체인 발현 카세트(expression cassette)의 형태로 숙주세포내로 도입될 수 있다. 상기 발현 카세트는 통상 상기 유전자에 작동가능하게 연결된 프로모터, 전사종결 신호, 리보좀 결합 부위 및 번역 종결 신호를 포함한다. 상기 발현 카세트는 자체 복제가 가능한 발현 벡터의 형태일 수 있다. 또한, 상기 유전자는 그 자체 또는 폴리뉴클레오티드 구조체의 형태로 숙주세포로 도입되어, 숙주세포의 발현에 필요한 서열과 작동가능하게 연결되는 것일 수도 있다.
본 발명은 또한, glnAp2 프로모터와 guaA 구조 유전자를 라이게이션하여 얻은 플라스미드를 glnL 유전자 불활성 미생물에 형질전환되고, 5'-구아닐산 전환능을 갖는 에스케리키아 glnL 유전자 불활성 미생물을 배양하는 단계, 및 상기 배양물로부터 5'-구아닐산을 분리하는 단계를 포함하는 5'-구아닐산을 생산하는 방법을 제공한다.
본 발명의 5'-구아닐산 생산 방법에 있어서, 본 발명의 상기 에스케리키아 종 균주의 배양은 적당한 배지에서 당업계에서 알려진 다양한 배양 방법으로 배양될 수 있다.
배양에 사용될 수 있는 배지는 배양 방식과 균주에 따라, 당업계에 알려진 적당한 배지가 선택될 수 있다.
배양물의 온도는 보통 25 ℃ 내지 40 ℃, 바람직하게는 30 ℃ 내지 37 ℃이다. 배양 기간은 원하는 5'-구아닐산의 생성량이 얻어질 때까지 계속할 수 있으며, 바람직하게는 7 내지 12 시간이다.
배양물로부터의 5'-구아닐산의 분리는 당업계에 알려진 통상적인 방법에 의하여 분리될 수 있다. 이러한 분리 방법에는, 원심분리, 여과, 이온교환크로마토그래피, 및 결정화 등의 방법이 이용될 수 있다. 예를 들면, 배양물을 저속 원심분리하여 바이오매스를 제거하고 얻어진 상등액을, 이온교환크로마토그래피를 통하여 분리할 수 있다.
이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1 : 에스케리키아 유래 5'-크산틸산 아미나제 유전자 클로닝
에스케리키아 유래의 5'-크산틸산 아미나제 유전자의 염기서열은 이미 명백하게 밝혀져 있으며 공개되어 있다. 미국국립생물공학 정보 센터 진뱅크(NCBH GenBank)로부터 유전자 정보 (등록번호 GI1788854)를 확보하였다. 먼저 게노믹-팁 시스템(QIAGEN Genomic-tip system)을 이용하여 에스케리키아로부터 게놈 DNA(genomic DNA)를 추출하였고, 이 게놈 DNA 주형(template)으로부터 중합효소 연쇄반응(PCR)을 이용하여 5'-크산틸산 아미나제 유전자의 ORF(Open Reading Frame)를 포함하는 DNA 절편, 약 1568bp를 증폭하였다. 사용된 프라이머들은 5'-CGCGAATTCATGACGGAAAA-3'과 5'-CTAGAAGCTTTCATTCCCACTCAATGGT-3'이며, 보고된 염기서열에 근거하여 한쌍의 프라이머를 합성하였고, 에스케리키아 균주의 염색체 DNA를 주형으로 한 PCR 법을 통하여 상기 유전자를 증폭하였다. PCR 조건은 변성 94 ℃, 30초; 어닐링 62 ℃, 30초; 중합 72 ℃, 1분 10초를 30회 반복하였다. 그 결과, 1568 bp의 5'-크산틸산 아미나제 유전자 증폭산물을 얻은 다음, 대장균 플라스미드 pUC19에 클로닝하여 pKHG 플라스미드를 얻었다.
실시예 2 : 5'-크산틸산 아미나제 유전자 발현 위한 glnL 불활성 균주 제조
게노믹-팁 시스템(QIAGEN Genomic-tip system)을 이용하여 에스케리키아로부터 게놈 DNA(genomic DNA)를 추출하였고, 이 게놈 DNA 주형(template)으로부터 중합효소 연쇄반응(PCR)을 이용하여 glnL 유전자의 ORF(Open Reading Frame)를 포함하는 DNA 절편, 약 1050bp를 증폭하였다. 사용된 프라이머들은 5'-CTGTTCAGGAGACTGCTTTAT-3'과 5'- TGCGCCGTTCTCAAACGT-3'이며, 변성(denaturation) 단계는 94℃에서 30초간, 어닐링(annealing) 단계는 62℃에서 30분간, 연장(extension) 단계는 72℃에서 1분 30초간 실시하였고, 30 주기를 수행하였다.
이 PCR 결과물을 1.0% 아가로즈 겔에서 전기영동한 후 1.0kb 크기의 밴드를 용출하여 얻었고, pUC19클로닝 벡터(Promega Co.)의 EcoR V에 16℃에서 밤새 연결시켰다. 이에 따라 형성된 재조합 플라스미드 pGLN를 대장균 DH5α에 형질전환시키고 암페실린(50 mg/L)이 든 고체 배지에 도말하여 37℃에서 밤새 배양하였다.
콜로니를 백금이에 묻혀 암페실린이 든 액체배지 3mL에 접종하여 밤새 배양한 후 미니 프렙 키트(QIAGEN mini prep kit)를 이용하여 플라스미드 DNA를 추출하였다. 플라스미드 DNA를 제한효소 EcoR I로 처리한 후 glnL 유전자의 클로닝 여부를 확인하였다. 확인된 플라스미드 pGLN을 제한 효소 EcoR I로 처리한 후, 0.8% 아가로즈 겔에서 약 1.0 kb 크기의 밴드를 용출하였다. 여기에 플라스미드 ploxpCat2 [참조: U. Guldenre et al, A new efficient gene disruption cassette for repeated use in budding yeast. Nucleic Acid Research 24 (13),1996, pp2519-2524]를 제한효소 Hinc II 로 처리하여 얻은 loxp부분을 포함하는 클로람페니콜 내성 유전자 절편(약 1.2 kb)을 평활말단 연결시켜 재조합 플라스미드 pTΔglnL::loxpCAT(약 2.2kb)를 얻었다.
이 재조합 플라스미드 pTΔglnL::loxpCAT를 DH5α에 형질전환시키고, 암페실린과 클로람페니콜(각각 50 mg/L과 50 mg/L)이 포함된 고체배지에 도말하여 32℃에서 밤새 배양하였다. 콜로니를 백금이에 묻혀 암페실린과 클로람페니콜이 든 액체배지 3mL에 접종하여 밤새 배양한 후 미니 프렙 키트(QIAGEN mini prep kit)를 이용하여 플라스미드 DNA를 추출하였다. 이 플라스미드 DNA를 주형(template)으로 사용하여 중합효소 연쇄반응(PCR)을 이용하여 glnL 유전자의 ORF(Open Reading Frame)와 loxpCAT 부위를 포함하는 DNA 절편, 약 2.2kb를 증폭하였다. 사용된 프라이머들은 5'-CTGTTCAGGAGACTGCTTTAT-3'과 5'-TGCGCCGTTCTCAAACGT-3'이며, 변성(denaturation) 단계는 94℃에서 30초간, 어닐링(annealing) 단계는 62℃에서 30초간, 연장(extension) 단계는 72℃에서 2분간 실시하였고, 30 주기를 수행하였다.(glnL 유전자 증폭과 동일함)
이 DNA 절편 ΔglnL::loxpCAT을 에스케리키아 K12에 전기충격요법 (electroporation)으로 유입하여 클로람페니콜이 포함된 고체배지에 도말한 후 선발한 콜로니에 대하여 불활성화 확인 실험을 수행하였다.
실시예 3 : 5'-크산틸산 아미나제 유전자 생육 상태 의존적 발현을 위한 벡터 제조
게노믹-팁 시스템(QIAGEN Genomic-tip system)을 이용하여 에스케리키아 로부터 게놈 DNA(genomic DNA)를 추출하였고, 이 게놈 DNA 주형(template)으로부터 중합효소 연쇄반응(PCR)을 이용하여 glnAp2 프로모터를 포함하는 DNA 절편을 증폭하였다. 사용된 프라이머들은 5'-CAGCTGCAAAGGTCATTGCACCAAC-3'과 5'- GGTACCAGTACGTGTTCAGCGGACATAC-3'이며, 변성(denaturation) 단계는 94℃에서 30초간, 어닐링(annealing) 단계는 62℃에서 30분간, 연장(extension) 단계는 72℃에서 1분 30초간 실시하였고, 30 주기를 수행하였다.
이 PCR 결과물인 glnAp2 프로모터는, 실시예 1에서 얻은 5'-크산틸산 아미나제 유전자가 포함된 벡터 pKHG를 각각 제한효소 E.coRⅠ 과 E.coR Ⅴ 으로 절단하여 얻은 벡터에 접합효소(ligation enzyme)를 이용하여 연결하여, pKHG1을 제조하였다(도 1 참조). 다음으로, 얻어진 pKHG1 을 전기펄스법을 이용하여 glnL 불활성화 에스케리키아 K12 균주로 형질전환시키고, 암피실린 50 ㎍/ml를 함유한 5'-구아닐산 역가 한천배지에 도포한 뒤 형질전환주 GPD1114를 선별, 수득하였다. 각각의 형질전환 균주로부터 pKHG1를 분리, 확인하였다.
상기 형질전환 균주 에스케리키아 콜라이 GPD1114(Escherichia coli GPD1114)는 한국종균협회 한국미생물보존센터(Korean Culture Center of Microorganisms, KCCM)에 2003년 12월 4일자로 기탁하여 기탁번호 KCCM-10543을 부여받았다.
실시예 4 : GPD1114 균주의 배양
GPD1114 균주(KCCM-10543)를 50ml의 종배양 배지(표 1)가 가입된 5개의 500ml 진탕배양용 플라스크에 한백금니 접종한다. 37도, 250rpm, 24시간 배양한다. 이의 배양액 250ml을 2.5리터 의 본배양 배지(표 2)가 가입된 5 리터 발효조에 접종한다. 가성소다로써 pH 7.0으로 조정하고 온도 30도, 1vvm, 600rpm에서 5시간 동안 배양한다.
종배양 배지
조성물 농도 (리터당)
Bacto Tryptone 16 g
NaCl 5 g
Yeast extract 10 g
pH (7.0) by NaOH
본배양 배지
조성물 농도 (리터당)
옥수수 침지액 120 g
glutamic acid 10 g
lactic acid 2 g
tryptophan 0.5 g
biotin 100 ug
pH (7.0) by NaOH
실시예 5 : 5'-크산틸산 아미나제 활성 측정
XpKHG1을 포함한 형질전환 균주인 에스케리키아 GPD1114 (pKHG1)를 앞에서와 같이 배양한 배양액을 30ml 채취하여 250ml 잰탕배양용 플라스크에서 20ml/L 의 자일렌을 가입하고 37도에서 20분간 진탕 교반한다. 이 처리액의 40배 희석액 1ml을 시험관에 넣고 미리 준비한 반응 준비액을 4ml 가입한 후 42도, 15분간 250rpm으로 교반하면서 반응한다. 여기서 반응 준비액을 첨가 후의 농도가 160ml Tris-HCl, pH 8.6, 12mM ATP, 23mM 5'-크산틸산, 16mM MgSO4·7H2O, 40mM (NH4)2 SO4 가 되도록 준비한다.
분석 결과를 표 3에 나타내었다. 문헌에 나타난 5'-크산틸산 아미나제 최대 발현 농도는 후지오 등의 연구 그룹의 발표에 따르면 36 u/ml 이다[참조: T. Fujio, et. al., Biosci. Biotech. Biochem., 61(5), 840-845, 1997]. 여기에 비해 본 발명의 glnAp2 프로모터에 의해 조절 받는 5'-크산틸산 아미나제의 경우 44 u/ml 의 수득율을 보였다. 즉 약 20 % 가량의 활성이 향상되었음을 확인하였다.
5'-구아닐산 활성측정 결과
시험균주 GLN0307 (pKHG) GPD1114 (pKHG1)
활성(u/mL) 36 44
본 발명에 의한 형질전환 균주 에스케리키아 콜라이 GPD1114 (Escherichia coli GPD1114) KCCM-10543을 활용하면, 별도의 유도 발현이 필요없이 5'-크산틸산 아미나제가 배양 후반부 성장 단계에 이르러 고발현이 일어나므로 고농도의 5'-크산틸산 아미나제를 획득할 수 있으며, 획득한 5'-크산틸산 아미나제를 이용하여 5'-구아닐산을 5'-크산틸산으로부터 고농도로 생산할 수 있다.
도 1은 에스케리키아 콜라이 유래의 5'-크산틸산 아미나제의 발현 벡터 pKHG1 을 나타내는 것이다.

Claims (1)

  1. guaA 유전자와 glnAp2 프로모터를 함유하는 재조합 벡터 pKHG1를 glnL 불활성화 에스케리키아 콜라이 K12 균주에 도입함으로써 제조된 재조합 균주 에스케리키아 콜라이 GPD1114(Escherichia coli GPD1114) KCCM-10543.
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