KR20050049431A

KR20050049431A - 다가의 메닝고코쿠스 외부 멤브레인 소낭의 혼합물을포함하는 백신

Info

Publication number: KR20050049431A
Application number: KR1020047019991A
Authority: KR
Inventors: 라몬 파우스티노 바르베라모랄레스; 피에레 미첼 데스몬스; 프란시스코 제수스 도민구에즈알바레즈; 잔 풀만
Original assignee: 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이.; 인스티튜토 핀라이
Priority date: 2002-06-13
Filing date: 2003-06-10
Publication date: 2005-05-25
Also published as: GB0213622D0; RU2005100509A; UY27843A1; PE20040562A1; CU23552A1; MXPA04012568A; CA2488782A1; CL2003001192A1; WO2003105890A3; WO2003105890A2; NO20050132L; NZ560766A; US20060110412A1; AR040204A1; AU2003236734A1; CN1668329A; EP1565211A2; ZA200409547B; CN100387298C; JP2005531614A

Abstract

본 발명은 나이세리아(neisseria), 바람직하게는 메닝고코쿠스 질병의 효과적인 예방 또는 치료용 백신 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 백신은 사용 국가에서 널리 퍼진 세로서브타입(serosubtype)을 갖는 메닝고코쿠스 균주로부터 유래된 동종의 살균제 활성을 갖는 적어도 하나의 소포 및 사용 국가에서 널리 퍼진 세로서브타입을 가질 필요가 없는 메닝고코쿠스 균주로부터 유래된 이종의 살균제 활성을 갖는 적어도 하나의 소포를 포함하는 다가의 메닝고코쿠스 소포를 포함한다.

Description

다가의 메닝고코쿠스 외부 멤브레인 소낭의 혼합물을 포함하는 백신{VACCINE COMPRISING MIXTURES OF MULTIVALENT MENINGOCOCCAL OUTER MEMBRANE VESCILES}

본 발명은 나이세리아(neisseria) 백신 조성물, 그 제조방법 및 그 조성물의 의약적 용도에 관한 것이다. 더욱 상세하게는, 본 발명은 신규한 다가 염색체의 메닝고코쿠스의 외부-멤브레인 소낭(또는 소포) 백신 및 이러한 백신을 보다 유효하게 하는 유리한 이점에 관한 것이다.

나이세리아 메닝자이티디스(메닝고코쿠스)는 종종 인간의 상부 호흡관으로부터 분리되는 그램-음성 박테리아이다. 이것은 때로 균혈증 및 수막염과 같은 침습성의 세균성 질병의 원인이 된다. 메닝고코쿠스 질병의 발병률은 지리학적으로, 계절적으로 그리고 해마다 다른 차이를 보여준다(Schwartz, B., Moore, P. S., Broome, C. V.; Clin. Microbiol. Rev. 2 (Supplement), S18-S24, 1989). 온대성 국가에서 대부분의 질병은 세로그룹 B(serogroup B)의 균주에 기인하고 발병률이 매년 전체 인구당 1-10/100,000 으로 변하고 때로는 최고치에 달한다(Kaczmarski, E. B. (1997), Commun. Dis. Rep. Rev. 7: R55-9,1995 ; Scholten, R. J. P. M., Bijlmer, H. A., Poolman, J. T. et al. Clin. Infect. Dis. 16: 237-246, 1993; Cruz, C., Pavez, G., Aguilar, E., et al. Epidemiol. Infect. 105: 119-126,1990). 두가지 고위험-군에서 연령 특이적 발병률은, 유아 및 십대들로서 그 발병률이 가장 높은 수준이다.

세로그룹 A 메닝고코쿠스에 의해 지배되는 유행성은 주로 중앙아프리카에서 발생하고 때로는 1000/100,000/년의 수준까지 도달한다(Schwartz, B., Moore, P. S., Broome, C. V. Clin. Microbiol. Rev. 2 (Supplement), S18-S24, 1989). 전 메닝고코쿠스 질병의 거의 모든 경우는 세로그룹 A, B, C, W-135 및 Y 메닝고코쿠스들에 기인된다. 사가 A, C, W-135, Y 캡슐의 폴리사카라이드 백신이 이용될 수 있다(Armand, J., Arminjon, F., Mynard, M. C., Lafaix, C., J. Biol. Stand. 10: 335-339, 1982).

폴리사카라이드 백신은 이들을 담체 담백질에 화학적으로 컨쥬게이트하는 방법에 의해 개선되어 지고 있다(Lieberman, J. M., Chiu, S. S., Wong, V. K., et al. JAMA 275: 1499-1503, 1996). 세로그룹 B 백신은, B 폴리사카라이드 백신이 주로 숙주 성분에 구조적으로 유사하며 이것이 비-면역성이기 때문에, 이용되어질 수 없다(Wyle, F. A., Artenstein, M. S., Brandt, M. L. et al. J. Infect. Dis. 126: 514-522, 1972; Finne, J. M., Leinonen, M., Makela, P. M. Lancet ii.: 355-357, 1983).

따라서, 수년 동안 백신에 기초한 메닝고코쿠스 외부 멤브레인 소낭(또는 소포)를 개발하는데 노력이 집중되어왔다(de Moraes, J.C., Perkins, B., Carmargo, M.C. et al. Lancet 340: 1074-1078, 1992; Bjune, G., Hoiby, E.A. Gronnesby, J.K. et al. 338: 1093-1096, 1991). 이러한 백신은 숙주에 투여되어질 때 보호적인 면역학적 반응을 유도할 수 있는 적절하게 접혀진 배좌로 몇몇 완전한 외부-멤브레인 단백질을 포함하는 이점을 갖는다. 부가하여, @ 균주(N. 메닝자이티디스 세로그룹 B-MENB를 포함)는 외부 멤브레인 소포를 충분한 양으로 분비하여 산업적 규모로 이들의 제조를 가능하게 한다. 다른 방안으로 소포는 박테리아 세포의 세정 추출을 포함하는 공지된 방법에 의해 제조될 수 있고(EP 11243), 이 방법은 백신으로부터 몇 가지 내독소(리포-폴리사카라이드 - 또는 LPS; 또는 소위 리포-올리고사카라이드- 또는 LOS)를 제거하는 이점이 있다.

야생형 menB 균주로부터 유도된 이러한 복합성분 외부-멤브레인 단백질 백신은 4세 이후 어린이와 성인에게 57%-85%의 효능을 갖는 것이 입증되었고 라틴 아메리카에 등록되었다. 이들 효능 시험의 대부분은 세정 추출 공정을 통해 제조된 menB OMVs (외부 멤브레인 소낭)으로 수행되었다.

많은 박테리아의 외부 멤브레인 조성분은 PorA, PorB, Rmp, Opc, Opa, FrpB와 같은 이들 백신에 존재하고 관찰된 보호에 대한 이들 조성분의 기여는 여전히 더 정의될 필요가 있다. 다른 박테리아 외부 멤브레인 조성분은 TbpB, NspA와 같은 보호적 면역성의 유도에 잠재적으로 관련되어지는 것(동물 또는 인간 항체를 사용하여)으로 밝혀져 왔다(Martin, D., Cadieux, N., Hamel, J., Brodeux, B.R., J. Exp. Med. 185: 1173-1183, 1997; Lissolo, L., Maitre-Wilmotte, C., Dumas, p. et al., Inf. Immun. 63: 884-890, 1995). 보호적 면역성의 메카니즘은 항체 매개 살균제의 활성과 옵소닌 식균작용을 포함할 것이다.

나이세리아 메닝자이티디스 감염의 빈도는 많은 유럽 국가에서 과거 수년 간 증가해 왔다. 이것은 사회적 활동(예를 들어, 수영장, 극장 등)의 증가에 기인하여 증가된 전염에 영향을 받은 것이다. 몇몇 표준 항체에 덜 민감하거나 또는 저항성인 나이세리아 메닝자이티디스 균주를 분리하는 것은 이제 더 이상 보기 드문 것이 아니다.

도1 및 도2는 N. 메닝자이티디스 균주에서 상대적 PorA 발현주위를 나타내는 실험예이다.

본 발명은 나이세리아, 바람직하게는 메닝고코쿠스 질병의 효과적인 예방 또는 치료용 백신 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 백신은 사용 국가에서 널리 퍼진 세로서브타입(serosubtype; PorA 면역형)을 갖는 메닝고코쿠스 균주로부터 유래된 동종의 살균제 활성을 갖는 적어도 하나의 소포 및 사용 국가에서 널리 퍼진 세로서브타입을 가질 필요가 없는 메닝고코쿠스 균주로부터 유래된 이종의 살균제 활성을 갖는 적어도 하나의 소포를 포함하는 다가염색체의 메닝고코쿠스 소포를 포함한다.

본 명세서에서 언급된 특허 또는 특허출원과 공개범위 내에서 개시된 대상 물질 및 정보는 여기에서 참고로 포함되어 진다. 여기서 사용된 용어인 "포함하는"은 모든 예에서 "구성되는"으로 대신 사용될 수 있지만, 이는 여전히 본 발명의 범주 내에 있을 것이라고 이해되어진다.

본 발명자 등은 동종 균주(소포가 유도되어진 균주에 대해)에 대해서만 만족할 만한 혈청 살균제의 활성(SBA)을 제공하지만 이종 균주에 대해서는 만족할 만한 SBAs을 제공하지 않는 현재 사용될 수 있는 메닝고코쿠스 소포 백신의 문제점에 대한 해결방법을 밝혀냈다. 통상적으로, 종래의 소포는 특정 국가 또는 지역에서 널리 퍼진 균주로부터 유도되었다. 비록 동종 보호는 이상적일 수 있지만, 빨리 유행성을 갖는 비보호된 이종형 균주의 위험이 아주 높고, 특히 어린아이들에게 높다.

본 발명자 등은 다가의 소포 백신 조성물(즉, 적어도 두개의 다른 소포를 포함하는 조성물)이 나이세리아(특히, 메닝고코쿠스)의 동종 및 이종 균주에 대해서 만족할 만한 SBAs를 갖는 숙주를 제공할 수 있다는 것을 밝혀냈다. 이러한 백신은 모든 국가의 개개인에 감염되는 모든 또는 대부분의 메닝고코쿠스 균주로부터 유래된 많은 다른 소포로 만들어진 값비싼 소포 백신을 제공하는 것보다 본 발명의 백신은 백신에서 소포의 수를 최소화하면서도 널리 퍼진 균주 및 이들 균주의 변이체 또는 널리 퍼진 균주로부터 케이스가 감소할 때 새로운 세로그룹 B의 도입에 대해 양호한 특성 및 일반적인 보호를 여전히 제공하는 우수한 절충물이라는 점에서 이점이 있다.

따라서, 일 측면에 있어서 본 발명은 사용 국가에서 널리 퍼진 세로서브타입(PorA 면역형)을 갖는 메닝고코쿠스 균주로부터 유래된 동종의 살균제 활성을 갖는 적어도 하나(예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7)의 소포 제제 및 사용 국가에서 널리 퍼진 세로서브타입을 가질 필요가 없는 메닝고코쿠스 균주로부터 유래된 이종의 살균제 활성을 갖는 적어도 하나(예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7)의 소포 제제를 포함하는 다가의 메닝고코쿠스 소포를 제공한다.

"사용 국가에서 널리 퍼진 세로서브타입(PorA 면역형)을 갖는 메닝고코쿠스 균주"는 국가(또는 지역 또는 대륙)에서 메닝고코쿠스 질병의 원인이 되는 모든 세로서브타입의 균주 - 즉, 국가, 지역, 또는 대륙에서 메닝고코쿠스 질병의 실험실-기초 활성 감시 간에 분리된 균주 중에서 백분율로 가장 널리 퍼진(또는 가능하기로는 제이 또는 제삼 또는 제사번째로 널리 퍼진 것 - 특히, 만일 동종의 살균제 활성을 갖는 2 또는 3 또는 4 소포 제제가 백신에 포함되어지는 경우) 세로서브타입을 갖는 메닝고코쿠스의 균주로부터 유래된 소포를 의미한다. 바람직하게는 이런 소포의 세로서브타입은 국가(또는 지역 또는 대륙)에서 메닝고코쿠스 질병의 원인이 되는 모든 세로서브타입의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50 또는 60% 이상으로 구성한다.

만일 동종의 살균제 활성을 갖는 일 소포 제제가 본 조성물에 포함되어지면, 국가(또는 지역 또는 대륙)에서 가장 널리 퍼진 세로서브타입을 갖는 균주로부터 유래된 것이 바람직하고, 만일 둘 또는 셋 또는 넷이 포함되어진다면 그때에는 둘 또는 셋 또는 넷(각각)의 가장 널리 퍼진 세로서브타입을 커버하는 균주를 사용하는 것이 바람직하다.

"사용 국가에서 널리 퍼진 세로서브타입을 가질 필요가 없는 메닝고코쿠스 균주"는 국가(또는 지역 또는 대륙)에서 메닝고코쿠스 질병의 원인이 되는 모든 세로서브타입의 균주 - 즉, 국가, 지역, 또는 대륙에서 메닝고코쿠스 질병이 산발적인 경우의 실험실-기초 활성 감시 간에 분리된 균주 중에서 백분율로 가장 널리 퍼진(또는 가능하게는 제이, 제삼, 제사 제오 또는 제육) 것으로부터가 아닌 메닝고코쿠스의 균주로부터 유래될 수 있는 소포를 의미한다. 이 경우에 있어, 이런 소포의 세로서브타입은 국가(또는 지역 또는 대륙)에서 메닝고코쿠스 질병의 원인이 되는 모든 세로서브타입의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50 또는 60% 이하로 구성하는 것이 바람직하다.

"메닝고코쿠스의 균주로부터 유래된"은 소포가 메닝고코쿠스의 균주로부터 무-세정 분리와 같은 공지된 방법 또는 분리에서 세정제(데옥시콜레이트와 같은 것)를 포함하는 공정을 사용하여 분리된다는 것을 의미한다.

"동종 살균제 활성" 또는 "이종 살균제 활성"을 가지는 소포 제제는 소포 제제가 숙주로 투여되어질 때 각각 동종 또는 이종 메닝고코쿠스 균주에 대해 만족할 만한 혈청 살균제 활성(SBA)을 이끌어내는 것을 의미한다.

SBA는 메닝고코쿠스 백신의 효능을 측정하기 위한 가장 보편적으로 인정된 면역학적 지표이다(Perkins et al. J Infect Dis. 1998, 177:683-691). 충분한 SBA는 공지된 방법에 의해 확인될 수 있다. 바람직하게는 혈액 샘플이 제일 백신접종 전, 제이 백신접종 후 2개월 및 제삼 백신 접종 후 1개월에 채취된다(전형적인 인간의 첫 번째 백신접종 스케쥴은 예를 들어 0, 2 및 4개월, 또는 0, 1 및 6개월에 투여되는 1년 안에 삼회의 백신접종). 이런 인간의 첫 번째 백신접종 스케쥴은 1세 이하의 영아에 대해 수행될 수 있고(예를 들어 이때 Hib 백신접종이 수행됨) 또는 2-4살 또는 청년에게는 또한 이런 첫 번째 백신접종 스케쥴로 SBA를 시험하기 위해 백신접종이 될 수 도 있다. 더욱이 혈액 샘플은 첫 번째 백신접종 후 6 내지 12 개월 및, 만일 적용할 수 있다면, 두번째 예방주사 접종 후 1개월에 취해질 수 있다.

SBA는 (첫번째 백신접종 스케쥴의) 삼차 백신 접종 후 1개월(2-4살 또는 청년에서이지만, 바람직하게는 생후 1년 내의 유아)이면 동종 살균제 활성을 갖는 소포 제제는 소포가 유래되는 메닝고코쿠스의 균주에 대해 SBA(항체 희석) 적정농도(백신접종 전의 적정농도와 비교하여)의 관점에서 네 배의 증가를 갖는 대상물의 백분율이 30%이상, 바람직하게는 40%이상, 더욱 바람직하게는 50%이상, 가장 바람직하게는 60%이상의 것이 좋다.

물론 이종 살균제 활성을 갖는 소포 제제는 또한 만일 동종 살균제 활성을 갖는 소포 제제가 또한 이것이 유래된 메닝고코쿠스 균주에 대해 만족스런 SBA를 이끌어낼 수 있다면 동종 살균제 활성을 갖는 소포 제제를 구성할 수 있다.

SBA는 (첫번째 백신접종 스케쥴의) 삼차 백신 접종 후 1개월(2-4살 또는 청년에서이지만, 바람직하게 생후 1년 내의 유아)이면 이종 살균제 활성을 갖는 소포 제제는 메닝고코쿠스의 세 이종 균주에 대해 SBA(항체 희석) 적정농도(백신접종 전의 적정농도와 비교하여)의 관점에서 네 배의 증가를 갖는 대상물의 백분율이 20%이상, 바람직하게는 30%이상, 더욱 바람직하게는 35%이상, 가장 바람직하게는 40%이상의 것이 만족스럽게 된다. 이러한 시험은 이종 살균제 활성을 갖는 소포 제제가 다양한 메닝고코쿠스 균주에 대해 횡-살균제의 항체를 유도할 수 있는지 없는지의 양호한 표지이다. 세 이종 균주는 바람직하게는 다른 전기영동적 타입(ET) - 상호에 대해 그리고 보다 바람직하게는 이종 살균제 활성을 갖는 소포 제제가 만들어지는 균주에 대해 복합 또는 멀티로커스 시퀀스 타이핑(multilocus sequence typing; MLST) 패턴(Maiden et al. PNAS USA 1998,95:3140-5 참고)을 가진다. 이 분야의 당업자라면 용이하게 메닝고코쿠스, 특히 유의성 있는 질병 부담의 원인이 되는 것으로 알려지고 및/또는 인지된 MenB 고-악성 계통(hyper-virulent lineages)(Maiden et al. supra 참고)을 나타내는 메닝고코쿠스 타입 B 균주 중에서 관찰된 유전적 다양성을 반영한 다른 ET-복합체를 갖는 세 균주를 결정할 수 있을 것이다. 예를 들어 사용될 수 있는 균주는 A-4 클러스터에 속하는 BZ10 (B:2b:P1.2); ET-37 복합체에 속하는 B16B6 (B:2a:P1.2); 및 ET-5 복합체에 속하는 H44/76 (B:15:P1.7,16), 또는 동일한 ET/클러스터에 속하는 어떤 다른 균주의 세 가지이다. 이런 균주는 예를 들어 ET-5 복합체에 속하는 메닝고코쿠스 균주 CU385 (B:4:P1.15)로부터 만들어진 이종 살균제 활성을 갖는 소포 제제를 시험하기 위해 사용될 수 있다. 사용될 수 있는(예를 들어 상기에 언급된 3 시험 균주 대신에) 또 다른 샘플 균주는 계대 3 유행성 클론(Lineage 3 epidemic clone)으로부터 유래한 것이다. B16B6와 상호 교환적으로 사용될 수 있는 또 다른 ET-37 균주는 NGP165 (B:2a:P1.2)이다.

SBA 활성을 측정하는 공정은 종래 기술로 알려져 있다. 예를 들어 사용될 수 있는 방법은 WO 99/09176호의 실시예 10C에 기술되어 있다. 일반적인 관점에서, 시험되는 균주의 배양은 성장의 로그 페이스(log phase;느린 성장기)로 성장(바람직하게는 성장 배지에 EDDA와 같은 철-킬레이트의 부가에 의해 철 결핍의 상태에서)된다. 이것은 대략 20000 CFU/ml로 조정된 워킹 셀(working cell) 부유액을 수득하기 위해 BSA를 갖는 배지(0.3% BSA를 갖는 핸크(Hanks) 배지와 같은 것)에 현탁될 수 있다. 일련의 반응 혼합물이 시험되는(바람직하게는 56℃에서 30분간 가열 비활성화시킴) 혈청의 두 배 희석[예를 들어 50㎕/웰 부피로] 및 시험되는 메닝고코쿠스 균주 현탁액 20000 CFU/ml[예를 들어 25㎕/웰 부피로]을 혼합하여 얻어질 수 있다. 반응 바이알은 배양되고(즉, 37℃에서 15분 동안) 쉐이크(즉, 210rpm에서) 된다. 최종 반응 혼합물[예를 들어 100㎕ 부피]은 부가적으로 보체원[미리 시험된 베이비 래빗 혈청의 25% 최종 부피와 같은 것]을 포함하고, 상기와 같이 배양된다[즉, 37℃에서 60분 동안]. 인체 SBA 혈청 테스트에 대해, 통상적으로 베이비 래빗 보체 보다는 인체 혈청이 보체로 사용되고, 사용되는 버퍼는 PBS MgCl₂ 0.5 mM CaCl₂ 0.9 mM 글루코오스 0. 1% pH 7.4이다. 멸균 폴리스틸렌 U-형 바닥 96-웰 마이크로타이터 플레이트(U-bottom 96-well microtiter plate)가 이 분석에 사용될 수 있다. 알리쿼트(aliquot)[즉, 10㎕]가 각 웰로부터 멀티채널 피펫을 사용하여 취해질 수 있고 뮈엘러-힌톤 아가 플레이트(Mueller-Hinton agar plates; 바람직하게는 1% 이소비타렉스(Isovitalex)와 1% 가열 비활성화 호스(Horse) 혈청을 함유함) 상에 점적 부가되어 배양(즉, 5% CO₂ 내에서 37℃에서 18시간 동안)된다. 바람직하게는, 개개의 콜로니는 알리쿼트당 80 CFU까지 카운트될 수 있다. 다음의 세 시험 샘플은 대조군으로 사용될 수 있다 : 버퍼 + 박테리아 + 보체; 버퍼 + 박테리아 + 비활성 보체; 혈청 + 박테리아 + 비활성 보체. SBA 타이터는 퇴화 계산에 의해 50%의 세포사에 상당하는 희석의 측정치를 얻기 위해 데이타를 처리하는 프로그램을 사용하여 직접적으로 계산될 수 있다.

본 발명의 추가적인 측면에 있어서 본 발명자 등은 본 발명의 이종의 살균제 활성을 갖는 소포 제제가 정상적인 야생형 소포 제제에 비하여 우수한 면역력의 외부 멤브레인 프로테인(OMPs)에서 결핍되어짐에 따라 그의 횡-살균제 특성을 성취할 수 있다는 것을 밝혀냈다.

따라서 본 발명은 또한 이종의 살균제 활성을 갖는 소포가 비교 균주(예를 들어 야생형 MC58이지만, 바람직하게는 야생형 균주 H44/76)로부터 유래된 소포에 비해 우수한 면역력의 외부 멤브레인 프로테인에서 결핍되고 그리고 동종의 살균제 활성을 갖는 소포가 동일한 비교 균주로부터 유래된 소포에 비해 상기 우수한 면역력의 외부 멤브레인 프로테인에서 같은 정도로 결핍되지 않은(또는 바람직하게는 전혀 그렇지 않은) 본 발명의 다가의 메닝고코쿠스 소포 조성물을 제공한다.

이 분야의 당업자라면 우수한 면역력의 OMP 이지만, 본 발명의 우수한 면역력의 OMP은 아주 높은 면역성이고, 표면-노출된 에피토프(epitope)(바람직하게는 표면-노출된 루프 시퀀스 내에서)이고 메닝고코쿠스의 표면상에 고도로 발현된 OMPs 중 상부 10 중의 하나(세포당 분자의 수 뿐 아니라 중량에 의해)로 용이하게 이해할 것이다. 일반적으로 이들 OMPs는 극히 면역성이지만, 스트레인에서 스트레인으로 이들의 루프 구조의 아미노산 시퀀스는 아주 다양하다. 이러한 OMPs의 예는 아래에 상세히 기술된다.

"결핍"은 본 발명의 이종의 살균제 활성을 갖는 소포 제제가 비교자 균주로부터 만들어진 소포보다 그 표면상에 본 발명의 면역력이 우수한 OMP를 덜 가진다는 것을 의미한다. 특히, 이종의 살균제 활성을 갖는 소포 제제는 비교자 균주로부터 만들어진 동일양의 소포(전체 단백질로 측정된 것으로, 통상적으로 약 10㎍의 단백질)에 비하여 면역력이 우수한 OMP의 양이 98, 95, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 또는 5% 이하로 적게 가진다. 실례로 이것은, 예를 들어 실시예 4에 기술된 바와 같이 SDS-PAGE 젤 상에서 OMP 밴드 밀도측정계(band densitometry)에 의해 평가될 수 있다. 가장 바람직하게는 본 발명의 이종의 살균제 활성을 갖는 소포 제제는 면역력이 우수한 OMP을 전혀 갖지 않는 것이다. 상기는 또한 "결핍"의 정의로 여기서 이 문헌은 소포 생산 균주의 표면상에 면역력이 우수한 OMP의 준위를 비교자 균주에 대해 비교한다. 소포 또는 균주는 임의적으로, 또한 만일 OMP이 소포/균주의 외부 멤브레인 상에 표면으로 노출되지 않도록 조작되거나, 또는 OMP이 동일한 수준으로 발현되지만 하나 또는 그 이상의 표면-노출 루프가 덜 다양하게 되거나 또는 이들의 대체, 변이 또는 결핍에 의해 면역력이 우세하도록 조작된다면, 보다 이종의 살균제 활성을 갖는 균주와 같은 것으로부터 만들어진 소포를 얻기 위해 면역력이 우수한 OMP이 결핍되도록 될 수 있다.

바람직하게는 근원인 메닝고코쿠스 균주로부터 이종의 살균제 활성을 갖는 소포 제제를 유도하기 위한 공정은 비교자로부터 소포를 유도하기 위해 사용된 것과 동일하다(바람직하게는 Frederiksen et al. NIPH Annals. 1991,14 : 67-80에 기술된 방법). 이것이 그 경우일 필요는 없지만, 그러나 특히 만일 면역력이 우수한 OMP가 결핍된 이종의 살균제 활성을 갖는 소포 제제에 대한 이유는 소포가 생산되는 방법에 기인된다. 이런 경우에 비교자 균주에 대한 소포 생산을 위한 표준 과정은 Frederiksen et al.(NIPH Annals. 1991,14 : 67-80) 또는 Bjune et al. (NIPH Annals 1991 14: 81-93)에 기술된 방법이다.

이종의 살균제 활성을 갖는 소포는 면역력이 우수한 외부 멤브레인 단백질이 자연적으로 결핍된 야생형 메닝고코쿠스 균주로부터 유래되거나 또는 면역력이 우수한 외부 멤브레인 단백질이 결핍되도록 된 메닝고코쿠스 균주로부터 유래될 수 있다.

특히, 이종의 살균제 활성을 갖는 소포는 그것으로부터 조작된 야생형 균주에 비하여 전혀 또는 덜 OMP을 생산하거나 또는 OMP이 결핍되도록 된 생산 균주를 유전적으로 조작함에 따라 면역력이 우수한 외부 멤브레인 단백질이 결핍되도록 될 수 있다.

"덜 또는 전혀"는 균주가 그것으로부터 조작된 야생형 균주에 비하여 그 표면상에 면역력이 우수한 OMP의 양이 98, 95, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 또는 5% 이하로 적게 발현하는 것을 의미한다. 가장 바람직하게는 조작된 균주는 면역력이 우수한 OMP를 전혀 발현하지 않는 것이다. 균주는 또한 만일 OMP이 균주의 외부 멤브레인 상에 표면으로 노출되지 않도록 조작되거나, 또는 임의적으로, OMP이 동일한 수준으로 발현되지만 하나 또는 그 이상의 표면-노출 루프가 덜 다양하게 되도록 조작되거나 또는 이들의 대체, 변이 또는 결핍에 의해 면역력이 우세하도록 조작된다면, 보다 이종의 살균제 활성을 갖는 균주와 같은 것으로부터 만들어진 소포를 얻기 위해 면역력이 우수한 OMP가 적거나 전혀 갖지 않을 수 있다.

본 발명의 면역력이 우수한 OMP를 코딩하는 유전자는 공지된 기술에 의해 상기 방법으로 조작될 수 있다. 특히, 메닝고코쿠스 균주는 이 균주가 상기 면역력이 우수한 외부 멤브레인 단백질을 덜 생산하거나 또는 전혀 생산하지 않도록 유전자의 코딩 영역이나 프로모터가 유전적으로 개사되어질 수 있다. 이것이 달성될 수 있는 특정한 방법은 WO 01/09350에 기술되어 있다. 예를 들어 트램스포손(또는 다른 시퀀스)이 삽입되어 유전자의 코딩 영역 또는 프로모터 영역을 결찰하거나, 또는 포인트 변이 또는 결손이 유사한 결과를 가져올 수 있다. 코딩 영역 또는 프로모터는 유전자가 면역력이 덜 우수하게 생산하도록 하기 위해(예를 들어 표면-노출 루프에 존재하는 면역성 에피토프를 재체, 변이 또는 결손함에 의해) 완전히 또는 부분적으로 결손될 수 있다. 재조합은 강한 프로모터를 보다 약한 (또는 없는) 프로모터로 대체와 같이 이들에 면역적으로 덜 우수하게하기 위해 OMP에 시퀀스를 결손, 삽입, 대체 또는 변이시키기 위해 사용될 수 있다. 플레임쉬프트 변이체(Frameshift mutations) 또한 코딩 영역에 삽입될 수 있다.

이론으로 도출될 수 있는 그대로, 이런 소포와 동종의 살균제 활성을 갖는 소포와의 조합은, 동종의 살균제 활성을 갖는 소포는 본 발명의 면역력이 우수한(그렇지만 변할 수 있는) OMP에 대해 발생된 살균제 항체의 이점에 의해 사용하는 국가에 있어서 널리 퍼진 균주에 대해 유효하지만, 본 발명의 면역력이 우수한 OMP은 소포 표면에(보다 적은 준위로 존재하는) 존재하는 보다 보호된 항원의 효능을 면역학적으로 마스크하기 때문에 동종의 살균제 활성을 갖는 소포는 상기 단점으로 만족스런 이종의 살균제 활성을 갖지 않아, 백신으로서 유효하다고 생각된다. 본 발명의 이종의 살균제 활성을 갖는 소포는 어느 정도 이것이 마스킹을 제거하여 소포에 낮은 수준으로 존재하는 보호된 OMPs가 숙주의 면역계에 보다 영향을 미치고, 따라서 숙주에서 만족스러운 이종의 살균제 활성을 갖는 횡-살균제의 항체를 유도할 수 있다. 양 타입의 소포의 조합은 특정 국가 또는 지역에서 사용하기 위한 최적의 백신으로 제형화된 제제를 제공한다.

바람직하게는 이종의 살균제 활성을 갖는 소포는 하나 또는 그 이상의 다음의 항원: PorA, PorB, OpC, OpA 또는 PilC 인 면역력이 우수한 OMP이 결핍된(또는 전혀 없거나 또는 덜 가지도록 조작된) 것이다. 바람직하게는 PorA가 결핍된(또는 전혀 없거나 또는 덜 가지도록 조작된) 것이다.

PorA가 자연적으로 결핍된 본 발명의 이종의 살균제 활성을 갖는 바람직한 소포 제제는 메닝고코쿠스 균주 CU-385 (B:4:P1.19,15)로부터 분리된 소포 제제, 바람직하게는 EP 301992-B에 기술된 방법에 의해 분리된 소포 제제이다. PorA는 비교자 균주 또는 소포(즉 H44/76)에 비해 이 균주 또는 소포에서 결핍된다. 이 균주로부터의 소포 제제(또는 CU-385 또는 CU-385 소포에 비해 PorA의 동등하거나 낮은 준위[즉, 전체 소포 단백질 중 25, 22, 20, 15, 10 또는 5 % 이하의 PorA]를 갖는 유사 균주로부터 소포)는 H44/76 소포와 비교하여 정상적인(등등하거나 또는 보다 큰 - 즉, 전체 소포 단백질 중 28, 30, 35 또는 40 % 이상의 PorA) PorA의 준위를 갖는 동종의 살균제 활성을 갖는 소포 제제와 조합되기에 아주 적절하다는 것이 밝혀졌다. 이러한 소포 조합(특히 CU-385 소포를 포함하는 것)은 따라서 본 발명의 바람직한 소포 조합이다. 바람직하게는 PorA 정량은 최종 소포 제제에서 평가된다.

더욱이, 본 발명의 이종의 살균제 활성을 갖는 소포 제제는 그의 횡-살균제(만족스러운 SBA) 특성의 관점에서 더욱 더 개선될 수 있다. 이것은 상기 소포의 표면상에 OMPs의 양을 증진함으로써 달성될 수 있다.

따라서, 이전에 기술된 것으로 본 발명의 이종의 살균제 활성을 갖는 소포는 바람직하게는 다음 유전자(균주에 유전자의 여분의 카피를 부가하거나, 또는 존재하는 유전자의 보다 강력한 프로모터 업스트림 또는 WO 01/09350에 기술된 어떤 다른 것에 의한 것)의 하나 또는 그 이상의 상향 조절된 발현을 갖는 조작된 메닝고코쿠스로부터 유래된다 : NspA (WO 96/29412), Hsf-형 또는 이들의 트런케이트(truncates)(WO 99/31132 & WO 01/55182; 또한 NhhA로 알려진 것), Hap (PCT/EP99/02766), OMP85 (WO 00/23595), PilQ (PCT/EP99/03603), PldA (PCT/EP99/06718), FrpB (WO 96/31618), TbpA (W092/03467, US5912336, W093/06861 및 EP586266), TbpB (W093/06861 및 EP586266), NadA (Comanducci et al J. Exp. Med. 2002 195; 1445-1454), FrpA 및/또는 FrpC (WO 92/01460; Thompson et al., (1993) J. Bacteriol. 175: 811-818; Thompson et AL., (1993) Infect. Immun.. 61:2906-2911), LbpA, LbpB (PCT/EP98/05117), FhaB (W098/02547, SEQ ID NO 38 [nucleotides 3083-9025]), HasR (PCT/EP99/05989), LIPO02 (PCT/EP99/08315), Tbp2 (WO 99/57280), MltA (WO 99/57280), TspA (WO 00/03003), TspB (WO 00/03003) 및 ctrA (PCT/EP00/00135).

"상향조절된 발현"은 비-수사된(즉, 자연발생적인 것) 소포 또는 균주의 것에 대하여 관심 있는 항원의 발현을 증진한다는 것을 의미한다. '상향조절'의 양은 관심 있는 특정 항원에 의존하여 다양하게 변하지만 소포의 멤브레인 본체를 파괴하는 양을 초과하지는 않는다고 이해된다. 항원의 상향조절은 비-수사된 소포 또는 균주의 것 보다 적어도 10% 높은 발현을 언급한다. 바람직하게는 이것은 적어도 50% 높은 것이고, 보다 바람직하게는 이것은 적어도 100%(2, 3, 5 또는 10 배) 높은 것이다.

본 발명의 다가의 소포 제제의 특성을 가질 수 있는 종래 기술의 다가의 소포 제제(또는 이러한 제제를 포함하는 백신)는 청구되지 않았고; 예를 들어 WO 01/09350에 개시된 어떠한 특정 다가의 소포 제제(다음의 menB 균주: H44/76, M97/252078, BZ10, NGP165 및 CU385의 전부로부터 유래된 소포로 구성된 조합, 또는 CU385으로부터 소포 및 하나 또는 그 이상의 다른 4 균주로부터 유래된 하나 또는 그 이상의 소포 제제로 구성된 조합과 같은 것)도 청구되지 않았으며, WO 02/09643에 개시된 어떠한 특정 다가의 소포 제제(다음의 메닝고코쿠스 균주: MenC RM1090, MenB BZ198, MenA Z1092의 전부로부터 유래된 소포로 구성된 조합, 또는 이들 3 균주의 쌍으로부터 유래된 한 쌍의 소포 제제로 구성된 조합과 같은 것)도 청구되지 않았으며, WO 01/91788에 개시된 어떠한 특정 다가의 소포 제제도 또한 청구되지 않았다고 이해되어 진다.

백신 제제화

본 발명의 바람직한 실시형태는 약학적으로 허용될 수 있는 부형제를 또한 포함할 수 있는 나이세리아(바람직하게는 메닝고코쿠스) 질병의 치료 또는 예방용 백신으로 본 발명의 다가의 소포 조성물의 제제화이다.

상기한 균주의 어느 하나로부터 소포 제제의 제조는 (달리 기술하지 않는 다면) 이 분야의 당업자에게 잘 알려진 방법에 의해 달성될 수 있다. 바람직하게는 EP 301992, US 5,597,572, EP 11243 또는 US 4,271,147, Frederikson et al. (NIPH Annals [1991], 14: 67-80), Zollinger et al. (J. Clin. Invest. [1979], 63:836-848), Saunders et al. (Infect. Immun. [1999], 67:113-119), Drabick et al. (백신 [2000], 18:160-172) 또는 WO 01/09350 (Example 8)에 기술된 방법이 사용된다. 일반적으로, OMVs는 세정제, 바람직하기로는 데옥시콜레이트로 추출되고, 핵산은 선택적으로 효소적으로 제거된다. 정제는 초원심분리에 의해 달성되고 임의적으로 사이즈배제크로마토그라피가 따른다. 본 발명의 2 또는 그 이상의 다른 소포가 단일 담체에 조합되어 본 발명의 다가의 제제를 형성한다(비록 만일 본 발명의 다른 소포가 동시에[의사에게 동시 방문] 숙주에 투여되는 별개의 담체에서 별개의 조성물이지만 제제가 또한 다가의 것으로 고려되어진다). OMV 제제는 통상적으로 0.2㎛ 필터를 통해 여과에 의해 멸균되고, 바람직하게는 소포 제제를 안정화시키는 것으로 알려진 슈크로스 용액(예를 들어 3%)에 저장된다.

본 발명의 다가 소포 제제를 구성하는 소포는 유전적으로 다양한 균주로부터 유래된다(즉, 본 발명의 제제를 제조하기 위해 사용된 모든 소포 생산 균주의 비교는 어떤 주어진 균주의 지놈의 오픈-리딩 프레임의 3% 이상은 사용된 다른 균주의 지놈의 각 오픈-리딩 프레임과 유전적으로 다르다는 것을 나타낸다). 그러나, 가장 바람직하게는 본 발명의 다가 소포 제제는 전체적으로 메닝고코쿠스 B 균주로부터 유래된다.

백신 제제는 일반적으로 백신 디자인(백신 Design)에 기술되어있다("The subunit and adjuvant approach"(eds Powell M. F. & Newman M. J.)(1995)Plenum Press New York).

본 발명의 다가 소포 조성물은 본 발명의 백신 제형에 부형제(adjuvant)가 부가될 수 있다. 적절한 부형제는 하이드록사이드 젤, 알럼 또는 알루미늄 포스페이트(바람직하게는 알루미늄 하이드록사이드)와 같은 알루미늄 염을 포함하지만, 또한 칼슘(바람직하게는 칼슘카보네이트), 철 또는 아연의 염이거나 또는 아실화 티로신, 또는 아실화 슈거, 양이온적으로 또는 음이온적으로 유도된 폴리사카라이드 또는 폴리포스파젠의 불용성 현탁액일 수 있다.

사용될 수 있는 적절한 Thl 부형제 시스템은 모노포스포릴 리피드 A, 특히, 3-de-O-아실화 모노포스포릴 리피드 A(또는 LPS의 다른 비독성 유도체), 및 알루미늄 염과 함께 모노포스포릴 리피드 A, 바람직하게는 3-de-O-아실화 모노포스포릴 리피드 A(3D-MPL)[또는 비독성 LPS 유도체]의 조합체를 포함한다. 증진된 시스템은 모노포스포릴 리피드 A 및 사포닌 유도체의 조합 특히 WO 94/00153에 개시된 QS21[또는 다른 사포닌] 및 3D-MPL[또는 다른 비독성 LPS 유도체]의 조합, 또는 QS21[또는 사포닌]이 W096/33739에 개시된 콜레스테롤로 불활성된 덜 반응성인 조성물을 포함한다. 수중유(oil in water) 에멀젼에 QS21, 3D-MPL 및 토코페롤을 포함하는 특히 효능있는 부형제 제형은 W095/17210에 기술된 바람직한 제형이다.

백신은 사포닌, 보다 바람직하게는 QS21을 포함할 수 있다. 이것은 또한 수중유 에멀젼 및 토코페롤을 포함할 수 있다. 올리고 뉴클레오티드를 함유하는 비메틸화 CpG(WO 96/02555) 또한 TH1 리스폰스(response)의 바람직한 유도체이고 본 발명에서 적절하게 사용될 수 있다.

본 발명의 백신 제제는 상기 백신을 조직 또는 점막 경로를 통해 투여하는 수단에 의해, 감염될 수 있는 척추동물을 예방 또는 치료하기 위해 사용될 수 있다. 이들 투여는 근육내로, 복막내로, 피부내로 또는 피하로의 경로를 통해; 또는 경구/소화관, 호흡관, 비뇨생식기관으로 점막투여를 통한 주사를 포함한다. 따라서 본 발명의 일 측면은 나이세리아(바람직하게는 메닝고코쿠스) 박테리아에 기인한 질병에 대해 인간 숙주를 면역시키는 방법으로, 이 방법은 본 발명의 다가 소포 제제의 면역보호 복용량을 숙주에 투여하는 것을 포함한다.

각 백신 복용량 내의 소포의 양은 전형적인 백신에서 유의성있는 부작용없이 면역보호 반응을 일으키는 양으로 선택된다. 이러한 양은 특정 면역원이 채용되고 그것이 어떻게 나타나는지에 의존하여 다변한다. 일반적으로 각 복용량은 1-100㎍의 각 소포(프로테인으로), 바람직하기로는 5-50㎍이고, 가장 전형적으로는 5-25㎍으로 기대된다. 따라서, 발명의 이가 소포 백신에 대해서는 각 복용량은 전형적으로는 2 x 25㎍의 소포를 포함할 것이다.

특정 백신에 있어서 각 소포의 임의적인 양은 대상물에 대한 적절한 면역 반응의 관찰을 포함하는 표준 연구에 의해 확인될 수 있다. 최초(첫번째) 예방접종(전형적으로는 3회 투여, 바람직하게는 생후 1년 안에 또는 청소년기 동안에는 단일 년 안에, 예를 들어 0, 2 및 4 개월 또는 0, 1 및 6 개월)을 한 후, 대상자는 적절한 간격을 두고 한 번 또는 몇 번의 두 번째 예방조치(제1의 첫 번째 투여를 한 1년 후)를 받을 수 있다. 본 발명의 백신은 생후 1년 내의 영아, 2-4세 또는 청소년을 면역시키기 위해 사용될 수 있다. 이것은 생후 1년 내의 영아에 있어서 만족할 만한 이종의 살균제 활성을 이끌어내는데 있어 특히 유리하다.

고스트(Ghost) 또는 킬드 홀 셀(Killed Whole cell) 백신

본 발명자 등은 다가 소포 제제 및 백신에 대한 상기 개선이 고스트 또는 킬드 홀 셀 제제 및 백신(같은 이점을 같음)으로 용이하게 신장될 수 있음을 구상하였다. 본 발명의 다가 소포 제제를 제조하기 위해 사용된 메닝고코쿠스 균주는 또한 다가의 고스트 및 전사(全死) 세포 제제를 제조하기 위해 사용될 수 있다. 그램-음성 균주로부터 고스트 제제(손상되지 않은 외피를 갖는 빈 세포)를 제조하는 방법은 이 분야에 잘 알려져 있다(예를 들어 WO 92/01791 참고). 백신에 사용하기 위해 비활성화된 세포 제제를 제조하기 위한 전사 세포에 대한 방법도 또한 잘 알려져 있다. 따라서, 이 문헌 전반을 통해 기술된 과정 뿐 아니라 '소포 제제' 및 '소포 백신'의 용어는 본 발명의 목적에 대해, 각각 용어 '고스트 제제' 및 '고스트 백신', 및 '전사 세포 제제' 및 '전사 세포 백신'에 적용될 수 있다.

발명의 바람직한 백신 조성물

뉴질랜드 또는 유럽(바람직하게는 유럽 연합)에서 백신접종 프로그램에 사용되기에 특히 적절한 상기 기술된 바와 같은 본 발명의 바람직한 백신은 동종 살균제 활성을 갖는 소포가 Pl.4의 세로서브타입을 갖는 메닝고코쿠스 균주로부터 유래되는 본 발명의 다가 소포 조성물을 포함한다.

USA에서 백신접종 프로그램에 사용되기에 특히 적절한 상기 기술된 바와 같은 본 발명의 바람직한 백신은 동종 살균제 활성을 갖는 소포가 Pl.7,16의 세로서브타입을 갖는 메닝고코쿠스 균주로부터 유래되고, 더욱이 임의적으로 동종 살균제 활성을 갖는 소포가 다음의 리스트: Pl.7,1 ; Pl.5,2 ; Pi.22a,14 ; 및 Pl.14으로부터 선택된 세로서브타입을 갖는 하나 또는 그 이상(2, 3, 또는 전부 4)의 메닝고코쿠스 균주로부터 유래되는 본 발명의 다가 소포 조성물을 포함한다. .

노르웨이에서 백신접종 프로그램에 사용되기에 특히 적절한 상기 기술된 바와 같은 본 발명의 바람직한 백신은 동종 살균제 활성을 갖는 소포가 Pl.16의 세로서브타입을 갖는 메닝고코쿠스 균주로부터 유래되는 본 발명의 다가 소포 조성물을 포함한다.

상기 모든 백신에 대해, 백신이 포함하는 이종 살균제 활성을 갖는 소포는 바람직하게는 균주 CU-385(또는 여기서 기술한 바와 같이 각각 CU-385 또는 CU-385 소포 보다 PorA가 적거나 또는 동등한 유사한 균주 또는 소포 제제)로부터 유래된다. 상술한 바와 같이, 동종의 살균제 활성을 갖는 상기 리스트된 소포 또는 이로부터 유래된 균주는 H44/76 소포 또는 균주보다 각각 PorA가 동등하거나 많은 것이 더욱 더 바람직하게 된다. 바람직하게는 PorA 정량은 최종 소포 제제에서 평가된다.

백신 조합

본 발명의 또 다른 측면은 어떤 질병 상태에 대해 이롭게 사용된 다른 항원을 갖는 본 발명의 다가 소포 제제를 포함하는 백신 조합이다. 소포는 이것이 혼합되어지는 항원 상에 대해 이들이 유리하게 부형제 효과를 가지기 때문에 특히 다른 항원과 제형화에 적절하다는 것이 밝혀졌다.

일 바람직한 조합에 있어서, 본 발명의 다가의 메닝고코쿠스 소포 제제 또는 백신은 T-세포 에피토프(바람직하게는 테타너스 톡소이드(tetanus toxoid), 디프테리아 톡소이드(diptheria toxoid), 또는 CRM197과 같은 단백질 담체)를 포함하는 담체에 컨쥬게이트되거나 평평하게 될 수 있는 다음의 메닝고코쿠스 캡슐의 폴리사카라이드의 1, 2, 3 또는 바람직하기로는 4 모두와 제제화된다: A, C, Y 또는 W. 용어 "폴리사카라이드"는 비사이즈화되거나 또는 사이즈화된 폴리사카라이드 또는 사이즈화된 올리고사카라이드를 전부 커버하는 것을 의도한다. 바람직하게는 적어도 C 및 Y 는 유럽 백신에 포함되고, 적어도 C는 US 백신에 포함되고, 그리고 적어 A 및 C는 아프리카, 남아메리카, 또는 이와 동등한 나라 백신에 포함된다. 이러한 백신은 세계적 메닝고코쿠스 백신으로 유익하게 사용될 수 있다.

더욱 더 바람직한 실시형태에 있어서, 본 발명의 다가 소포 제제 또는 백신(바람직하게는 평평한 또는 컨쥬게이트된 메닝고코쿠스 캡슐의 폴리사카라이드 A, C, Y 또는 W의 1, 2, 3 또는 4 모두와 제제화됨)은 H. 인플루엔자 b 캡슐의 폴리사카라이드 및/또는 하나 또는 그 이상의 평평한 또는 컨쥬게이트된 뉴모코커스 캡슐의 폴리사카라이드와 제제화된다. 임의적으로, 백신은 또한 스트렙토코커스 뉴모니아 감염에 대한 숙주를 보호할 수 있는 하나 또는 그 이상의 단백질 항원을 포함할 수 있다.

뉴모코커스 캡슐의 폴리사카라이드 항원은 바람직하게는 세로타입 1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F 및 33F (가장 바람직하게는 세로타입 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F)으로부터 선택된다.

바람직한 뉴모코커스 단백질 항원은 뉴모코커스의 외부 표면 상에 노출된 이들 뉴모코커스 단백질(뉴모코커스의 라잎 사이클의 적어도 일 부분 동안에 숙주의 면역 시스템에 의해 인지될 수 있는 것)이거나, 또는 뉴모코커스에 의해 분비 또는 방출된 단백질이다. 가장 바람직하게는, 이 단백질은 독성, 점성, 2-성분 단일 트랜듀서, 또는 스트렙토코커스 뉴모니아의 리포프로테인, 또는 이들의 잘려진 것이나 면역학적으로 동등한 기능의 것이다. 특히 바람직한 단백질은, 여기에 한정되는 것은 아니지만 뉴모라이신(바람직하게는 화학적 처리 또는 변이를 통해 탈독성화한 것)[Mitchell et al. Nucleic Acids Res. 1990 Jul 11; 18 (13): 4010 "Comparison of pneumolysin genes and proteins from Streptococcus pneumoniae types 1 and 2.", Mitchell et al. Biochim Biophys Acta 1989 Jan 23; 1007 (1) : 67-72 "Expression of the pneumolysin gene in Escherichia coli : rapid purification and biological properties.", WO 96/05859(A. Cyanamid), WO 90/06951(Paton et al), WO 99/03884 (NAVA)]; PspA 및 이들의 트랜스멤브레인 결손 변형체(US 5804193 - Briles et AL.); PspC 및 이들의 트랜스멤브레인 결손 변형체(WO 97/09994 - Briles et al); PsaA 및 이들의 트랜스멤브레인 결손 변형체(Berry & Paton, Infect IMMUN 1996 Dec; 64 (12): 5255-62 "Sequence heterogeneity of PsaA, a 37-kilodalton putative adhesin essential for virulence of Streptococcus pneumoniae"); 뉴모코커스 콜린 결합 단백질 및 이들의 트랜스멤브레인 결손 변형체; CbpA 및 이들의 트랜스멤브레인 결손 변형체(WO 97/41151; WO 99/51266); 글리세르알데하이드-3-포스페이트-디하이드로게나제(Infect. Immun. 1996 64:3544); HSP70(WO 96/40928); PcpA (Sanchez-Beato et al. FEMS Microbiol Lett 1998,164 : 207-14); M 형 단백질(like protein), SB 특허출원제 EP 0837130; 및 어드헤신(adhesin) 18627, SB 특허출원제 EP 0834568; 을 포함한다. 더욱 바람직한 뉴모코커스 단백질 항원은 WO 98/18931에 개시된 것이고, 특히 WO 98/18930 및 PCT/US99/30390 에서 선택된 것이다.

본 발명의 더욱 더 바람직한 스트렙토코커스 뉴모니아 단백질 항원은 폴리 히스티딘 트리어드 패밀리(Pht; 특히 PhtA, PhtB, PhtD, 또는 PhtE), Lyt 패밀리(특히 LytA, LytB, or LytC), SpsA, Spl28, Spl30, Spl25, Spl0l 및 SP133, 또는 이들의 잘려진 것이나 면역학적으로 기능이 동등한 것으로부터 선택된다

본 발명의 목적을 위해, "면역학적으로 기능이 동등한 것"은 본 발명의 단백질로부터 적어도 하나의 보호적 에피토프를 포함하는 단백질의 펩티드로 정의된다. 이러한 에피토프는 특징적으로 표면-노출되고, 고도로 보호되고, 그리고 숙주 내에서 살균제의 항체 반응을 이끌어낼 수 있거나 독성효과를 방지한다. 바람직하게는, 기능이 동등한 것은 본 발명의 단백질과 적어도 15 그리고 바람직하게는 30 또는 그 이상의 근접하는 아미노산을 갖는다. 가장 바람직하게는, 이들의 트랜스멤브레인 결손 변형체와 같은 단백질의 결손인 분획(즉, 단백질의 세포외의 영역의 사용), 퓨젼, 화학적으로 또는 유전적으로 탈독성화 유도체 등이, 이들이 네이티브 단백질로 실질적으로 동일한 면역 반응을 일으킬 수 있는 것을 조건으로 사용될 수 있다. 단백질 시퀀스에서 잠재적인 B-세포 에피토프의 위치는 두 방법: 2D-구조 예측 및 항원적 인덱스 예측의 조합을 사용하여 표면-노출되고 항원적인 에피토프를 동정함으로써 쉽게 결정되어 질 수 있다. 2D-구조 예측은 PSIPRED 프로그램(David Jones, Brunel Bioinformatics Group 제품, Dept. Biological Sciences, Brunel University, Uxbridge UB8 3PH, UK)을 사용하여 만들어질 수 있다. 항원적인 인덱스는 Jameson and Wolf(CABIOS 4: 181-186 [1988])에 의해 기술된 방법에 기초하여 계산될 수 있다.

본 발명의 스트렙토코커스 뉴모니아 단백질은 바람직하게는 폴리히스티딘 트리아드 패밀리(Pht)로부터의 단백질, Lyt 패밀리로부터의 단백질, 콜린 결합 단백질, LPXTG 영역(여기서 X는 아미노산임)을 갖는 단백질, LXXC의 타입 II 시그날 시퀀스 영역(여기서 X는 아미노산임)을 갖는 단백질 및 타입 I 시그날 시퀀스 영역을 갖는 단백질로 구성된 그룹에서부터 선택된다. 이들 카테고리(또는 영역) 내에서 바람직한 예는 다음의 단백질(또는 이들의 잘려진 것이나 면역학적으로 기능이 동등한 것)이다.

Pht(폴리히스티딘 트리아드) 패밀리는 단백질 PhtA, PhtB, PhtD, 및 PhtE를 포함한다. 이 패밀리는 프롤린-농후 영역과 몇 개의 히스티딘 트리아드로 분리된 두 영역인 지질화 시퀀스에 의해 특징지어지고, 가능하게는 금속 또는 뉴클레오사이드 결합 또는 효소적 활성, (3-5) 코일된-코일 영역, 보호된 N-말단 및 이종의 C 말단을 포함한다. 이것은 시험된 모든 뉴모코커스의 균주에 존재한다. 동종의 단백질 또한 다른 스트렙토코커스 및 나이세리아에서 발견되었다. 패밀리의 바람직한 수는 PhtA, PhtB 및 PhtD를 포함한다. 보다 바람직하게는, 이것은 PhtA 또는 PhtD를 포함한다. 그러나, 용어 Pht A, B, D, 및 E는 아래 인용문헌에 개시된 시퀀스를 갖는 단백질 뿐 아니라 참고된 단백질에 적어도 90% 동일한 시퀀스 동종성을 가지는 자연적으로 발생한 (혹은 인공) 변형체를 언급하는 것으로 이해된다. 바람직하게는 이것은 적어도 95% 동일하고 가장 바람직하게는 97% 동일하다.

Pht 단백질에 대해서, PhtA는 WO 98/18930에 개시되어 있고, 또한 Sp36로 언급된다. 위에서 언급된 바와 같이, 이것은 폴리히스티딘 트리아드 패밀리로부터의 단백질이고 LXXC의 타입 II 시그날 영역을 가진다.

PhtD WO 00/37105에 개시되어 있고, 또한 So036D로 언급된다. 위에서 언급된 바와 같이, 이것은 폴리히스티딘 트리아드 패밀리로부터의 단백질이고 타입 II LXXC 시그날 영역을 가진다.

PhtB WO 00/37105에 개시되어 있고, 또한 Sp036B로 언급된다. PhtB 패밀리의 다른 구성부는 WO 00/17370에 개시된 바와 같이 C3-디그레이딩 폴리펩티드(Degrading Polypeptide)이다. 이 단백질은 또한 폴리히스티딘 트리아드 패밀리로부터의 것이고 타입 II LXXC 시그날 영역을 가진다. 바람직한 면역학적으로 동등한 기능을 가지는 것은 WO 98/18930에 개시된 단백질 Sp42이다. PhtB 잘려진 것(대략 79KD)는 또한 PhtX 패밀리의 하나로 생각되며 W099/15675에 개시되어 있다.

PhtE WO00/30299에 개시되어 있고, BVH-3로 언급된다.

SpsA는 WO 98/39450에 개시된 콜린 결합 단백질(Cbp)이다.

Lyt 패밀리는 세포 라이시스와 연계된 메브레인 연합 단백질이다. N-말단 영역은 콜린 결합 영역을 포함하지만, 그러나 Lyt 패밀리는 아래에 기술된 콜린 결합 단백질(Cbp)에서 발견된 모든 특성을 가지지는 않으며, 따라서 본 발명에서, Lyt 패밀리는 Cbp 패밀리와 명백히 구별되는 것으로 생각되어 진다. Cbp 패밀리와 대비하여, C-말단 영역은 Lyt 단백질 패밀리의 촉매적 영역을 포함한다. 이 패밀리는 LytA, B 및 C를 포함한다.

Lyt 패밀리에 대해서, Lyt는 Ronda et AL., Eur J Biochem, 164: 621-624 (1987)에 개시되어 있다. LytB는 WO 98/18930에 개시되어 있고, 또한 Sp46로 언급된다. LytC는 또한 WO 98/18930에 개시되어 있고, 또한 Sp91로 언급된다. 이 패밀리의 바람직한 것은 LytC이다.

다른 바람직한 실시형태는 Lyt 패밀리의 잘려진 것으로 여기서 "Lyt"는 상기 정의된 바와 같고 "잘려진 것"은 50% 또는 그 이상의 콜린 결합 영역이 결핍된 단백질을 언급한다. 바람직하게는 이런 단백질은 콜린 결합 영역이 완전히 결핍된다.

Spl25는 LPXTG(여기서 X는 아미노산임)의 셀 웰 앵커드(Cell Wall Anchored) 영역을 갖는 뉴모코커스 표면 단백질의 예이다. 이 영역을 갖는 뉴모코커스 표면 단백질의 이 클래스 내의 단백질은 본 발명의 범주 내에서 유용하게 사용될 수 있다는 것이 밝혀졌고, 따라서 본 발명의 부가적인 단백질로 고려되어 진다. Spl25 그 자체는 WO 98/18930에 개시되어 있고, 또한 ZmpB-a 징크 메탈로프로테이나제(zinc metalloproteinase)로 알려져 있다.

SplOl은 WO 98/06734에 개시되어 있다(여기서 이것은 참고 # y85993을 가진다). 이것은 타입 I 시그날 시퀀스에 의해 특징되어진다.

Spl33은 WO 98/06734에 개시되어 있다(여기서 이것은 참고 # y85992을 가진다). 이것은 또한 타입 I 시그날 시퀀스에 의해 특징되어진다.

Spl28 및 Spl30은 WO 00/76540에 개시되어 있다.

본 발명에 사용된 단백질은 바람직하게는 그룹 PhtD 및 PhtA, 또는 이들 단백질 양자의 조합 또는 CbpA와 이들의 하나 또는 양자와의 조합에서 선택된다.

본 발명의 부가적인 측면

본 발명의 부가적인 측면은: 동종의 살균제 활성을 갖는 소포를 이종의 살균제 활성을 갖는 소포와 조합하는 단계를 포함하는 본 발명의 백신 또는 다가의 메닝고코쿠스 소포 조성물을 제조하는 방법; 이들의 필요에 따라 숙주(바람직하게는 2-4 살 또는 청소년기이고 유익하게는 2[바람직하게는 1] 년 이하의 유아임)에 본 발명의 백신을 면역학적으로 유효한 양을 투여(통상적으로 3 복용량의 첫 번째 예방접종 계획, 바람직하게는 각 면역접종은 1-2 개월로, 그리고 임의적으로 이차접종으로 분리됨)하는 단계를 포함하는 나이세리아, 바람직하게는 메닝고코쿠스 질병을 예방하거나 치료하는 방법; 및 나이세리아, 바람직하게는 메닝고코쿠스 질병의 예방 또는 치료를 위한 치료제의 제조에 본 발명의 백신의 면역학적으로 유효한 양의 사용(특히 여기서 치료의 예방은 3 복용량의 첫 번째 예방접종 계획[바람직하게는 여기서 각 면역접종은 1-2 개월로, 그리고 임의적으로 이차접종으로 분리됨]을 통해서이며 및/또는 질병의 치료의 예방은 인간 - 바람직하게는 2-4 살 또는 청소년기이고 유익하게는 2[바람직하게는 1] 년 이하의 유아임)을 제공한다.

다음 본 실시예는 여기에 자세히 기술된 것을 제외하고는 이 기술분야의 당업자에게 관례적이고 잘 알려진 표준 기술을 사용하여 수행된다. 이 실시예는 본 발명을 한정하기 위한 것이 아니고 단지 자세히 설명하기 위한 것이다

실시예 1: 주요 면역우세 항원 PorA가 결핍된 나이세리아 메닝자이티디스 세로그룹 B의 컨스트럭션.

이것은 WO 01/09350의 실시예 3에 기술되어 있다.

실시예 2: 본 발명의 다가의 메닝고코쿠스 소포 백신의 이점

다수의 효능 시험을 세로그룹 B OMV 백신으로 수행하였다. 두 특정 OMV 백신이 주로 단일 세로서브타입, 즉 각각 4:P1.15 및 15:P1.16에 기하여 쿠바와 노르웨이에서 유행성 상황을 제거하기 위해 전개하였다. 양 효능 시험은 플라시보-조절된 더블-블라인드 양식으로 십대에게 수행되었다. 쿠바에서는 16개월간 추적함으로 83%(신뢰 한계: 42%-95%)의 효능이 밝혀졌고(Sierra NIPH Annals 1991, 14: 195-207) 반면 노르웨이에서는 29개월간 추적함으로 57%(최저 신뢰 한계: 27%)의 효능이 밝혀졌다(Bjune et al. NIPH Annals 1991 14: 81-93). 노르웨이에서는 10개월간 추적한 효능이 86%이고 최후에 투여된 3차 복용분은 면역성을 증진했고 항체의 내생존성을 개선했다(Rosenquist, Infect. Immun. 1995 63: 4642-4652). 양 시험이 주로 형태-동종으로 설정하여 수행되었으므로 횡-보호에 대해서 얻어질 수 있는 결론은 없다

두 헤드-대-헤드 시험에서 그리고 각 균주에 대한 횡-살균제의 활성을 사용한 노르웨이의 백신에 비교할 때, 쿠바의 백신은 높은 수준의 횡-살균제의 활성을 유도하는 것으로 나타났다(표 1참고).

SBA 반응자는 전-예방접종 적정과 비교하여 SBA 적정에서 4배 이상으로 일어나는 사람으로 정의됨. 유아 및 어린이는 2개월 이상 떨어져 Finlay 또는 대조군(Hib) 백신의 세 복용분으로 투여됨. 성인에 있어서는, 두번째 제일 복용분은 2개월 떨어져 주어진다. 3 복용분은 칠레의 연구에서는 2차 복용 후 2개월 주어지고 아이슬랜드의 시험에서는 2차 복용 후 1년에 주어짐. 혈액 샘플은 예방접종 전에 그리고 2차 그리고 3차 예방접종 후 4-6주에 취해짐.

본 발명자 등은 살균제 활성을 비교하여, 노르웨이의 백신이 보다 균주 특이적 반응을 이끄는 반면, 쿠바의 백신은 보다 횡-살균제 활성을 유도한다는 것을 결정하였다. 더욱이, 본 발명자 등은 쿠바의 백신이 이러한 활성을 갖는 것은 이것이 면역 우세 OMP, 특히 PorA가 결핍되기 때문인 것으로 믿고 있다. 비록 PorA가 결핍되지만, 쿠바의 백신으로 입증되어지는 동종의 살균제 활성이 충분하게 존재된다.

본 발명자 등은 동종의 살균제 활성을 갖는 소포(사용 국가에서 널리 유행하는 세로서브타입을 가짐)와 이종의 살균제 활성을 갖는 소포를 포함하는 다가의 백신은 지역적으로 널리 퍼진 유행성 균주에 대해 보호하고 또한 유행성 균주의 우세가 감소할 때 국가적 예방접종 캠페인의 시행 후 발생될 수 있는 신규한 세로그룹 B 균주의 발현기회를 낮추는 이종보호를 여전히 제공하는 최적의 백신을 제공한다는 것을 밝혀냈다.

유럽 및/또는 뉴질랜드에 대한 최적의 백신은 두 별개의 소포: Pl.4 (유행성 균주) 및 Pl.15 (이종의 살균제 활성을 갖는 것, 예를 들어 상업화된 쿠바의 VA-MENGOC-BCⓡ 백신을 제조하기 위해 사용된 CU-385 균주로부터 유래된 OMV)의 조합을 합체한다. 이 조합은 동종의 Pl.4 보호를 제공할 뿐 아니라 쿠바의 P1.15 균주의 이종의 보호를 유지하기 위한 것이다.

실시예 3: 메닝고코쿠스 CU-385(B:4:P1.19,15), 및 뉴질랜드 유행성 메닝고코쿠스 균주(B:4:P1.7b,4)로부터 유래된 소포를 포함하는 다가 소포 백신

상기 다가 백신이 제조된다(각 인간 복용량 내에, 알루미늄 하이드록사이드로 보조된 25㎍의 각 소포).

단일가 또는 이가의 소포 제제가 어떠한 면역 상관관계가 소포와 함께 조합된 때 나타나는지를 시험하기 위해 테스트되었다.

유도된 기능성 항체의 준위는 모아진 혈청 샘플로 마우스에서 수행된 살균제의 시험에 의해 평가되었다.

간략하게는, 10 BALB/c 마우스(6-8 주령)의 그룹에 0 및 21일에 흡수된 단일가 또는 이가의 벌크의 10㎍의 단백질 역가로 2회 주사된다. 혈액 샘플은 35일에 취해진다. 혈청에서의 살균제 활성의 결정은 보체 활성화에 의하여 살균제의 라이시스를 유발하는 항체의 특성에 기하여 된다. 이 혈청을 생존력있는 메닝고코쿠스 B(CU-385 및 시험된 P1.4 뉴질랜드 균주 양자)로, 래빗 보체의 존재하에 배양 후, 혈청 샘플 내에 콜로니 형성 단위(CFU)의 수가 결정된다. 살균제 적정은 50% 이상을 죽이는 최종 혈청 희석이다.

이 결과에 따라, 이가 백신은 면역성이고 기능적인 항체를 유도한다. 두개의 단일벌크가 혼합될 때 면역 상관관여의 징후는 없다.

실시예 4: N. 메닝자이티디스 균주에서 상대적 PorA 발현 준위

CU385, H44/76 및 N150/88으로부터의 외부-멤브레인 소낭 샘플(NIPH Annals 1991 14: 67-80에 기술된 것으로 필히 제조됨)은 PorA 발현 준위에 대해 SDS-PAGE에 의해 비교된다. 샘플은 Novex 4-20% 겔에 걸려진다. 도 1에서, 10 및 20㎍(라우리 결정)의 물질이 웰 당 적하되고, 반면 도 2에서는 10㎍의 물질이 각 균주에 대해 똑같이 적하된다. 쿠매지 블루(Coomassie Blue) 염색 후, 3 주요 밴드가 3 균주: PorA(약 38KDa) PorB(약 36 Kda) 및 RMP(약 33 Kda)에서 검지되었다. 10㎍의 물질로 적하된 레인 상에 검지된 밴드는 두개의 다른 덴시토미터: 1D-ELITE 소프트웨어를 사용하는 파마시아 이매지스캐너 덴시토미터(Pharmacia Imagescanner densitometer), 및 멀티아날리스트(MultiAnalist) 소프트웨어를 사용하는 바이오래드 덴시토미터(Biorad desitometer)로 스캔된다. DO 값은 각 균주에 대해 PorA의 상대적 발현 준위를 결정하기 위해 계산된다. 각 레인에 대해, PorA 준위는 검지된 전체 단백질의 %로 표현된다.

이 결과(아래 표 1)는 PorA의 상대적 발현 준위는 두개의 다른 균주에 비해 CU385에서 낮았다는 결과를 보여준다: PorA는 CU385 소포에서 전체 검지된 단백질의 단지 약 20%에 대해서만 계산되고, 반면 균주 N150/88 및 H44/76로부터의 소포에서는 각각 약 40 및 30%의 단백질이 측정되었다.

표 1

본 발명은 나이세리아, 바람직하게는 메닝고코쿠스 질병의 효과적인 예방 또는 치료용 백신 조성물에 관한 것으로서, 본 발명에 따른 백신은 사용 국가에서 널리 퍼진 세로서브타입(serosubtype; PorA 면역형)을 갖는 메닝고코쿠스 균주로부터 유래된 동종의 살균제 활성을 갖는 적어도 하나의 소포 및 사용 국가에서 널리 퍼진 세로서브타입을 가질 필요가 없는 메닝고코쿠스 균주로부터 유래된 이종의 살균제 활성을 갖는 적어도 하나의 소포를 포함하는 다가염색체의 메닝고코쿠스 소포를 포함한다.

Claims

사용 국가에서 널리 퍼진 세로서브타입(serosubtype)을 갖는 메닝고코쿠스 균주로부터 유래된 동종의 살균제 활성을 갖는 적어도 하나의 소포 및 사용 국가에서 널리 퍼진 세로서브타입을 가질 필요가 없는 메닝고코쿠스 균주로부터 유래된 이종의 살균제 활성을 갖는 적어도 하나의 소포를 포함하는 다가의 메닝고코쿠스 소포 조성물.
제 1항에 있어서, 이종의 살균제 활성을 갖는 소포는 야생형 균주 H44/76으로부터 유래된 소포에 비하여 면역성이 우수한 외부 멤브레인 단백질이 결핍되고, 동종의 살균제 활성을 갖는 소포는 야생형 균주 H44/76으로부터 유래된 소포에 비하여 상기 면역성이 우수한 외부 멤브레인 단백질이 결핍되지 않은 것을 특징으로 하는 다가의 메닝고코쿠스 소포 조성물.
제 2항에 있어서, 이종의 살균제 활성을 갖는 소포는 상기 면역성이 우수한 외부 멤브레인 단백질이 자연적으로 결핍된 야생형 메닝고코쿠스 균주로부터 유래된 것을 특징으로 하는 다가의 메닝고코쿠스 소포 조성물.
제 2항에 있어서, 이종의 살균제 활성을 갖는 소포는 야생형 균주에 비하여 상기 면역성이 우수한 외부 멤브레인 단백질을 거의 생산하지 않거나 덜 생산하는 유전적으로-조작된 메닝고코쿠스 균주로부터 유래된 것을 특징으로 하는 다가의 메닝고코쿠스 소포 조성물.
제 4항에 있어서, 상기 유전적으로-조작된 메닝고코쿠스 균주는 면역성이 우수한 외부 멤브레인 단백질을 코드하는 유전자의 코딩 영역이나 프로모터의 하나를 개사하여 상기 면역성이 우수한 외부 멤브레인 단백질을 거의 생산하지 않거나 덜 생산하도록 한 것을 특징으로 하는 다가의 메닝고코쿠스 소포 조성물.
제 2항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 있어서, 면역성이 우수한 외부 멤브레인 단백질은 PorA인 것을 특징으로 하는 다가의 메닝고코쿠스 소포 조성물.
제 2항 또는 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, 면역성이 우수한 외부 멤브레인 단백질은 PorA이고, 이종의 살균제 활성을 갖는 소포는 메닝고코쿠스 균주 CU-385(B:4:P1.19,15)로부터 유래된 것을 특징으로 하는 다가의 메닝고코쿠스 소포 조성물.
균주 H44/76으로부터 제조된 소포에 비하여 PorA가 결핍된 소포 제제 및 균주 H44/76으로부터 제조된 소포에 비하여 PorA가 결핍되지 않은 소포 제제를 포함하는 것을 특징으로 하는 다가의 메닝고코쿠스 소포 조성물.
제 8항에 있어서, PorA가 결핍된 소포 제제는 전체 소포 단백질중 PorA가 22%보다 적은 것을 특징으로 하는 다가의 메닝고코쿠스 소포 조성물.
제 8항 또는 제 9항 중 어느 한 항에 있어서, PorA가 결핍되지 않은 소포 제제는 전체 소포 단백질중 PorA가 28%보다 많은 것을 특징으로 하는 다가의 메닝고코쿠스 소포 조성물.
제 8항 내지 제 10항 중 어느 한 항에 있어서, PorA가 결핍된 소포 제제는 메닝고코쿠스 CU-385 균주로부터 유래된 것을 특징으로 하는 다가의 메닝고코쿠스 소포 조성물.
청구항 1 내지 11의 다가의 메닝고코쿠스 소포 조성물 및 약학적으로 허용되는 첨가제를 포함하는 나이세리아(neisseria), 바람직하게는 메닝고코쿠스 질병의 치료용 백신.
제 12항에 있어서, 다음 리스트의 세로타입: A, C, Y 및 W로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 평평한 또는 컨쥬게이트된 메닝고코쿠스 캡슐 폴리사카라이드를 부가적으로 포함하는 백신.
제 12항 내지 제 13항 중 어느 한 항에 있어서, PorA가 결핍되지 않은 소포 제제 또는 동종의 살균제 활성을 갖는 소포는 세로서브타입 P1.4를 갖는 메닝고코쿠스 균주로부터 유래된 것인 뉴질랜드 또는 유럽에서 사용되기에 적절한 백신.
제 12항 내지 제 13항 중 어느 한 항에 있어서, PorA가 결핍되지 않은 소포 제제 또는 동종의 살균제 활성을 갖는 소포는 세로서브타입 P1.7,16을 갖는 메닝고코쿠스 균주로부터 유래되고, 임의적으로 다음 리스트: P1.7,1 ; P1.5,2 ; P1.22A,14 ; 및 Pl.14로부터 선택된 세로서브타입을 갖는 하나 또는 그 이상의 메닝고코쿠스 균주로부터 유래된 동종의 살균제 활성을 갖는 소포를 더 포함하는 것인 USA에서 사용되기에 적절한 백신.
제 12항 내지 제 13항 중 어느 한 항에 있어서, PorA가 결핍되지 않은 소포 제제 또는 동종의 살균제 활성을 갖는 소포는 세로서브타입 P1.16을 갖는 메닝고코쿠스 균주로부터 유래된 것인 노르웨이에서 사용되기에 적절한 백신.
동종의 살균제 활성을 갖는 소포를 이종의 살균제 활성을 갖는 소포와 혼합하는 단계, 또는 PorA가 결핍되지 않은 소포 제제를 PorA가 결핍된 소포 제제와 혼합하는 단계를 포함하는 청구항1 내지 11의 다가의 메닝고코쿠스 소포 조성물 또는 청구항 12 내지 16의 백신을 제조하는 방법.
숙주의 필요에 따라 숙주에 청구항 12 내지 16의 백신을 면역학적으로 유효한 양을 투여하는 단계를 포함하는 나이세리아, 바람직하게는 메닝고코쿠스 질병의 예방 또는 치료 방법.
청구항 12 내지 16의 백신의 면역학적으로 유효한 양을 나이세리아, 바람직하게는 메닝고코쿠스 질병의 예방 또는 치료를 위한 치료제의 조제에 사용.