KR20040019360A

KR20040019360A - 스테레오스퍼뭄 퍼소나툼으로부터 얻어진 항산화제로서의(+)-시클로올리빌

Info

Publication number: KR20040019360A
Application number: KR10-2004-7001038A
Authority: KR
Inventors: 라오자나스와미마두수다나; 티와리아쇼크쿠마르; 쿠마르웁파라팔리샘파트; 야다브질루싱; 라가반콘다푸람비자야
Original assignee: 카운슬 오브 사이언티픽 앤드 인더스트리얼 리서치
Priority date: 2001-07-27
Filing date: 2001-08-20
Publication date: 2004-03-05
Also published as: JP2005500343A; EP1411910B1; CN1536991A; DE60142857D1; EP1411910A1; US20030026862A1; US6562381B2; KR100750372B1; CN100438860C; CA2455566C; CA2455566A1; ATE477796T1; WO2003011268A1

Abstract

본 발명은 항산화제로서 사용되는, (+)-시클로올리빌 및 첨가제를 포함하는 신규의 약제학적 조성물에 관한 것이며, 새로운 원료 즉 스테레오스퍼뭄 퍼소나툼(Stereospermum Personatum)으로부터 얻어진다; 본 발명은 또한 식물 원료 스테레오스퍼뭄 퍼소나툼(Stereospermum Personatum)으로부터 활성 화합물 (+)-시클로올리빌의 분리 방법 및 항산화제로서의 화합물 (+)-시클로올리빌의 용도를 제공한다.

Description

스테레오스퍼뭄 퍼소나툼으로부터 얻어진 항산화제로서의 (+)-시클로올리빌 {(+)-Cycloolivil as antioxidant obtained from Stereospermum Personatum}

과일 및 채소가 풍부한 음식과 심혈관계 질환 및 특정 형태의 암의 위험 감소 사이의 연관성을 나타내는 수많은 역학적 증거가 있다. 일반적으로 이러한 보호 효과에 기여하는 활성 물질(active principles)은 주로 항산화제 식물성 화합물(phytochemicals)인 것으로 여겨지고 있다.

지난 수십년 동안의 연구에 의해, 항돌연변이제, 항-염증제, 항-단세포경화제(antiamerosclerotic), 항-당뇨병제, 항-간독성제, 항-노화제로서 또한 다양한 신경계 질환에서 자유-라디칼 소거제(scavengers)/항산화제의 유익한 효과를 나타내는 충분한 증거가 축적되어 왔다. 그러므로, 새로운 항산화제의 탐색은 백내장, 류마티스 질환, 죽상경화증(atherosclerosis), 알츠하이머 질환 및 기타 신경퇴행성 증상과 같은 병리적 증상의 약리학적 치료를 향상시키는데 있어서 필수적으로 되고 있다.

그러므로, 약리학적 접근은 항산화제가 풍부한 잠재적 원료의 탐색에 집중되어 왔다. 따라서, 항산화제 함량이 풍부한 식물의 의약적 중요성은 뜨거운 주제(item)가 되고 있다.

스테레오스퍼뭄 퍼소나툼(Stereospermum Personatum)은 전통적인 인도 의약계에서 사용되는 의약적 식물이며, 이뇨제, 돌용해제(lithontriptic), 거담제, 강심제, 성욕촉진제, 식욕증진제, 항-염증제, 항-박테리아제, 소화불량, 설사, 신장 및 방광 결석, 기침, 천식, 과대갈증(hyperdipsia), 치질 및 과산증 질환 증상의 조제약으로 널리 추천된다(Indian Medicinal Plants, Vol. 5 p 192). 또한, 이것은 항-박테리아성, 항진균성, 저혈당 활성을 가지고 있으며 p388 림프구 백혈병 세포에 대항하는 것으로 보고되어 있다(Ind. Jour. of Exp. Biol., 1971, 9, 100). 이리하여, 상기 중요한 생물학적 성질을 갖는 분자를 찾는 것이 요구되고 있다. 이와 관련하여, 스테레오스퍼뭄 퍼소나툼(Stereospermum Personatum)의 식물화학적 연구를 수행하였으며, 본 발명자의 노력은 높은 수율의 (+)-시클로올리빌 분리로 이어졌다. (+)-시클로올리빌은 표1에 나타낸 바와 같이, 몇가지 활성을 갖는 것으로 알려져 있다.

화합물	활성	참고문헌
(+)-시클로올리빌	1. 시클릭 AMP포스포디에스라제 억제2. 항고혈압 및 Ca⁺길항제활성3. 인간 성 호르몬에 결합	Chem. Pharm. Bull, 1981, 29, 3586-92Chem. Pharm. Bull, 1986, 34, 3514-17Plant. Med. 1997, 63, 529-532.

본 발명은 새로운 식물 원료인 스테레오스퍼뭄 퍼소나툼(Stereospermum Personatum)으로부터 높은 수율로 화합물 즉 (+)-시클로올리빌(Cycloolivil)의 분리에 관한 것이다. 상기 화합물은 현재 사용되고 있는 의약적으로 중요한 친유성 항산화제 즉 프로부콜(Probucol) 및 α-토코페롤 보다 유용하고 더 좋은 항산화제 분자임이 입증되었다. 상기 화합물은 염증 질환 증상, 죽상경화증(atherosclerosis), 당뇨병 합병증, 암, 간독성 및 자유 라디칼의 과잉 생성 또는 저하된 소거(under scavenging)로 인한 산화적 스트레스 및/또는 명백한 산화적 부담에 의해 매개되거나 촉진되는 다양한 질환 증상에 있어서 더 좋은 치료학적 능력을 가질 수 있다.

도1은 스테레오스퍼뭄 퍼소나툼(Stereospermum Personatum) 유래의 (+)-시클로올리빌 및 대조 화합물의 항산화 (항-자유 라디칼, DPPH) 활성을 나타낸다.

도2는 화합물 (+)-시클로올리빌의 분자구조를 나타낸다.

본 발명의 주요 목적은 항산화제로서 사용되는, (+)-시클로올리빌 및 첨가제를 포함하는 신규의 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 (+)-시클로올리빌을 유의성 있는 수율로 얻기 위한 새로운 원료(source)를 제공하는 것이다.

본 발명의 또다른 목적은 식물 원료 즉 스테레오스퍼뭄 퍼소나툼(Stereospermum Personatum)으로부터 (+)-시클로올리빌을 제조하는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또다른 목적은 항산화제로서의 (+)-시클로올리빌의 용도에 관한 것이다.

따라서, 본 발명은 (+)-시클로올리빌을 포함하고 항산화제로서 유용한 신규의 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 새로운 원료 즉 스테레오스퍼뭄 퍼소나툼(Stereospermum Personatum)으로부터 (+)-시클로올리빌을 분리하는 방법을 제공한다.

본 발명에 따라, (+)-시클로올리빌이 새로운 원료, 스테레오스퍼뭄퍼소나툼(Stereospermum Personatum)으로부터 유의성있는 수율로 분리된다는 것이 발견되었다. 또한, (+)-시클로올리빌은 항산화제 성질을 나타내는 것이 발견되었다.

최근, 자유 라디칼이 중요한 역할을 하는 다중 유래의 질환 즉, 심장질환(coronary heart disease), 암, 당뇨병, 류마티스 질환 및 염증 증상에서 항산화제 화합물들의 광범위한 활성으로 인해, 항산화제 화합물들이 주목을 받고 있다. 현재, 천연으로부터 항산화제를 이용하고 수확하는 것이 많은 주목을 받고 있다.

화합물 (+)-시클로올리빌은 순수한 형태로 사용된다. 따라서, 그 사용은 현재 사용되고 있는, 유사한 성질을 갖는 화합물들의 혼합물 보다 더 유리할 수 있다. 또한, (+)-시클로올리빌의 분리방법이 매우 경제적이라는 것을 주목하는 것은 중요하다.

따라서, 본 발명은 항산화제를 포함하는 유용한 원료, 스테레오스퍼뭄 퍼소나툼(Stereospermum Personatum)을 제공하며, 이로부터 (+)-시클로올리빌은 순수하고 강력한 항산화제 분자로서 분리된다. (+)-시클로올리빌을 기존의 약리학적으로 / 치료학적으로 허용되는 항산화제인 프로부콜(Probucol) 및 α-토코페롤과 비교하였다. (+)-시클로올리빌이 상기 대조 약물보다 더 좋고 또한 약리학적으로 / 치료학적으로 허용가능한 첨가제와 함께 사용될 수 있다는 것을 발견하였다.

본 발명의 구현예에서, (+)-시클로올리빌은 상기 대조 약물 보다 더 낮은 양에서 효과를 나타낼 수 있다.

본 발명의 일 구현예는 항산화제로서 유용한 약제학적 조성물로서, 약제학적으로 허용가능한 첨가제와 함께 또는 연합된 유효량의 (+)-시클로올리빌을 포함하는 조성물에 관련된다.

본 발명의 다른 구현예에서, 약제학적으로 허용가능한 첨가제는 (+)-시클로올리빌의 효능에 영향을 주거나 방해하지 않는 방법으로 선택된다.

본 발명의 또다른 구현예에서, 상기 첨가제는 탄수화물, 당, 단백질, 지방 및 약제학적으로 허용가능한 담체와 같은 영양제(nutrients)로부터 선택된다.

본 발명의 구현예에서, (+)-시클로올리빌과 상기 첨가제의 비율은 0.1:10 내지 3:10, 바람직하게는 0.4:10 내지 2:10의 범위이다.

본 발명의 또다른 구현예에서, (+)-시클로올리빌의 투여량은 1일 2회 이상, 300 mg//dose 내지 380 mg/dose의 범위이다.

본 발명의 또다른 구현예에서, 상기 조성물은 정제, 캅셀제, 시럽 또는 분말의 형태로 경구로 투여된다.

본 발명의 하나 이상의 구현예는 식물 스테레오스퍼뭄 퍼소나툼(Stereospermum Personatum)으로부터 (+)-시클로올리빌의 분리방법에 관한 것이며, 상기 방법은

a) 헥산으로 스테레오스퍼뭄 퍼소나툼(Stereospermum Personatum)의 건조 목질 분말(wood powder)를 추출하는 단계;

b) 클로로포름으로 단계(a)로부터 얻은 잔사를 더 추출하는 단계;

c) 진공하에서 단계(b)로부터 얻은 클로로포름 용액을 농축하는 단계;

d) 암갈색 추출물을 실리카겔(60-120 메쉬) 컬럼 (4 cm 직경에서 100 cm의 높이)에 로딩(loading)하여 실리카겔(60-120 메쉬) 상에 흡착시키는 단계;

e) 상기 컬럼을 클로로포름 메탄올 구배로 용리(eluting)시키는 단계; 및

f) 클로로포름 중의 메탄올(5%)로 용리된 분획을 모으고, 상기 분획을 농축하여 순수한 (+)-시클로올리빌을 얻는 단계를 포함한다.

본 발명의 또다른 구현예에서, 상기 사용 용매는 헥산, 클로로포름 및 메탄올로부터 선택된다.

본 발명의 또다른 구현예에서, 얻어진 (+)-시클로올리빌의 수율은 식물 건조 물질의 약 0.061 %이다.

하나 이상의 구현예는 (+)-시클로올리빌을 동물 또는 인간에서 항산화제 또는 자유 라디칼 소거제로서의 용도에 관련된다.

본 발명의 또다른 구현예는 항산화제로서 유용한 조성물의 제조를 위한 (+)-시클로올리빌의 용도에 관련된다.

본 발명의 또다른 구현예에서, (+)-시클로올리빌은 경구로 투여된다.

본 발명의 또다른 구현예는 자유 라디칼 소거의 치료방법에 관한 것이며, 상기 치료방법은 유효량의 (+)-시클로올리빌을 자유 라디칼 소거의 필요가 있는 환자에게 투여하는 단계, 바람직하게는 (+)-시클로올리빌을 1일 2회, 300 mg/dose - 380 mg/dose의 범위로 투여하는 단계를 포함한다.

따라서, 스테레오스퍼뭄 퍼소나툼(Stereospermum Personatum)은 (+)-시클로올리빌의 새로운 원료이고, 이 식물 내에 높은 수율로 (+)-시클로올리빌이 존재하는 것은 본 발명을 더욱 중요하게 만든다. 다른 식물로부터의 (+)-시클로올리빌의 수율을 비교하면 표2와 같다.

식물 명칭	(+)-시클로올리빌의 수율(%)	참고문헌
올리아 유로파에아(Olea europaea)	0.00085	Chem. Pharm. Bull. 1984, 32, 2730
유콤미아 울모이데스(Eucommia ulmoides)	0.001	Chem. Pharm. Bull. 1986, 34, 523
스테레오스퍼뭄 쿤티아눔(Stereospermum kunthianum)	0.001	Plant. Med. 1986
스테레오스퍼뭄 퍼소나툼(Stereospernium peronatum)	0.061	본 발명

본 발명은 새로운 식물 원료로부터의 항산화제로서, (+)-시클로올리빌의 분리를 구체화하며, 의약적으로 중요한 항산화제 약물 분자와 비교된 자유 라디칼 소거 성질을 확인한다.

본 발명을 하기 실시예에 더욱 설명하며, 하기 실시예는 설명을 위하여 기재된다. 따라서, 본 발명을 어떠한 방식으로든 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.

실시예 1.

시험 프로토콜: 상기 리그난들의 분리방법

스테레오스퍼뭄 퍼소나툼(Stereospermum Personatum)의 건조 목질 분말 (3 Kg)을 속쓰렛(Soxhlet) 장치에 넣었다. 먼저 분말을 헥산으로 추출하였다. 헥산 추출로부터 얻어진 잔사를 클로로포름으로 더 추출하였다. 클로로포름 용액을 진공하에서 농축하였다. 암갈색 추출물(22g)을 실리카겔(60-120 메쉬) 컬럼(4 cm 직경에서 100 cm의 높이)에 로딩하여 실리카겔(60-120 메쉬) 상에 흡착시켰다.

컬럼을 클로로포름 메탄올 구배로 용리시킨다. 클로로포름-메탄올 구배는 특정 분획, 따라서 원하는 화합물을 얻도록 선택된다. 본 발명에서는 클로로포름 중의 메탄올(5%)에서 용리된 분획을 별도로 모으고 농축한다.

상기 분획은 실리카겔 컬럼(>200 메쉬, 2.5 cm 직경 및 50 cm의 길이)을 사용하고, 클로로포름-메탄올 구배를 사용하여 더욱 정제한다. 클로로포름 중의 메탄올(5%)에서의 용리에 의해 순수한 (+)-시클로올리빌(2.2 g)을 얻었다. (+)-시클로올리빌의 분광화학적 데이터는 다음과 같다.

(+)-시클로올리빌:

1. 분자 식: C_2OH₂₄O₇

2.¹HNMR : δ 1.9(IH, d), 2.45(IH, d), 3.15(IH, d), 3.38 및 3.4 (2H, d), 3.65(1H, d), 3.75(6H, s), 3,78(lH, ), 3,90(1H, d), 6.05(1H, s), 6.55-6.70(4H, m), 8.49 및 8.75 (2x Ar-OH)

3.¹³CNMR : 38.89(C-7'), 43.16(C-7'), 45.73(C-8), 55.64(OCH₃),55.78(OCH₃), 59.09(C-9'), 68.06(C-9), 73.03(C-8'), 112.46(C-2'), 113.57(C-2), 115.47(C-5'), 116.22(C-5), 121.88(C-6), 125.22(C-6'), 132.16(C-1), 136.98(C-1'), 143.96(C-4'), 144.78(C-4), 145.77(C-3'), 147.43(C-3).

4. IR: 3393 cm^-1

5. MS: 376 (M⁺)

실시예 2

자유 라디칼 소거 항산화능의 시험관 내(in vitro) 평가:

화합물의 항산화 활성을, 가장 널리 사용되는 자유 라디칼, 1,1-디페닐-2-피크릴 히라질 라디칼(1,1-diphenyl-2-picryl hyrazyl radical, DPPH)을 소거하는 능력/능(capacity/potency)에 대해서 시험하였다. 잘-허용되고 시험되는 항산화제 즉 프로부콜 및 α-토코페롤을 대조 화합물로 사용하였다. l mg/ml DMSO 농도의 화합물을 준비하고 나서, DMSO로 더 낮은 농도로 희석하였다. 200 ㎕의 시험화합물을 트리스-염산 완충액(pH 7.4)에 1ml로 재구성(reconstitute)하였다. 에탄올에 용해시킨 500 μM의 DPPH 라디칼의 동등한 부피를 이와 반응시켰다. 암소에서 45분 동안 배양한 후, 517 nm에서 흡광도를 기록하였다. 라디칼 소거 활성 퍼센트를 계산하였다. 모든 측정은 3회 실시하였다. 결과(도1 / 표3)는 고려되는 화합물이 강력한 항산화/자유-라디칼 소거능을 갖는 것을 보여준다.

화합물의 50% 라디칼 소거 농도

항산화제	농도(㎍/ml)
CHC1₃추출물	40.09
(+)-시클로올리빌	21,74
프로부콜	28.71
α-토코페롤	47.80

Claims

유효량의 (+)-시클로올리빌 및 약제학적으로 허용가능한 첨가제를 포함하는 항산화제로서 사용되는 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 첨가제가 (+)-시클로올리빌의 효능에 영향을 주거나 방해하지 않는 방법으로 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항에 있어서, 상기 첨가제가 영양제(nutrient)인 것을 특징으로 하는 조성물.
제3항에 있어서, 상기 영양제가 탄수화물일 수 있는 것을 특징으로 하는 조성물.
제3항에 있어서, 상기 영양제가 당일 수 있는 것을 특징으로 하는 조성물.
제3항에 있어서, 상기 영양제가 단백질일 수 있는 것을 특징으로 하는 조성물.
제3항에 있어서, 상기 영양제가 지방일 수 있는 것을 특징으로 하는 조성물.
제3항에 있어서, 상기 영양제가 적절한 약제학적으로 허용가능한 담체일 수 있는 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항에 있어서, (+)-시클로올리빌이 공지된 항산화제에 비하여 더 낮은 용량에서 항산화제/자유-라디칼 소거제로서 유효한 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항에 있어서, (+)-시클로올리빌의 투여량이 1일 2회 이상, 약 300 mg/dose 내지 380 mg/dose의 범위인 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물이 정제, 캅셀제, 시럽 또는 분말의 형태로 투여될 수 있는 것을 특징으로 하는 조성물.
식물 스테레오스퍼뭄 퍼소나툼(Stereospermum Personatum)으로부터 제1항의 조성물에 사용되는 활성물질인 (+)-시클로올리빌의 분리 방법으로서,

a) 헥산으로 스테레오스퍼뭄 퍼소나툼(Stereospermum Personatum)의 건조 목질 분말(wood powder)을 추출하는 단계;

b) 클로로포름으로 단계(a)로부터 얻은 잔사를 더 추출하는 단계;

c) 진공하에서 단계(b)로부터 얻은 클로로포름 용액을 농축하여 암갈색 추출물을 얻는 단계;

d) 단계(c)의 암갈색 추출물을 실리카겔(60-120 메쉬) 컬럼에 로딩(loading)하여 실리카겔(60-120 메쉬) 상에 흡착시키는 단계;

e) 클로로포름-메탄올 구배로 단계(d)의 산물을 용리(eluting)시키는 단계; 및

f) 클로로포름 중의 메탄올(5%)로 용리된 분획을 모으고, 모아진 분획을 농축하여 순수한 (+)-시클로올리빌을 얻는 단계

를 포함하는 분리 방법.
제12항에 있어서, 상기 사용 용매가 헥산, 클로로포름 및/또는 메탄올인 것을 특징으로 하는 방법.
제12항에 있어서, 상기 (+)-시클로올리빌의 수율이 상기 건조 식물 물질의 약 0.061 %인 것을 특징으로 하는 방법.
제12항에 있어서, (-)-올리빌이 새로운 원료 스테레오스퍼뭄 퍼소나툼(Stereospermum Personatum)으로부터 얻어지는 것을 특징으로 하는 방법.
동물 또는 인간에서 항산화제 또는 자유 라디칼 소거제로서의 (+)-시클로올리빌의 용도.
항산화제로서 유용한 조성물의 제조를 위한 (+)-시클로올리빌의 용도.
제17항에 있어서, 상기 (+)-시클로올리빌을 포함하는 조성물이 경구로 투여되는 것을 특징으로 하는 용도.
제18항에 있어서, 상기 조성물이 영양제인 첨가제를 포함하는 것을 특징으로 하는 용도.
제19항에 있어서, 상기 영양제가 탄수화물일 수 있는 것을 특징으로 하는 용도.
제19항에 있어서, 상기 영양제가 당일 수 있는 것을 특징으로 하는 용도.
제19항에 있어서, 상기 영양제가 단백질일 수 있는 것을 특징으로 하는 용도.
제19항에 있어서, 상기 영양제가 지방일 수 있는 것을 특징으로 하는 용도.
제19항에 있어서, 상기 영양제가 약제학적으로 허용가능한 담체일 수 있는 것을 특징으로 하는 용도.
제17항에 있어서, 상기 (+)-시클로올리빌을 포함하는 조성물이 1일 2회 이상, 약 300 mg/dose 내지 380 mg/dose의 범위로 투여되는 것을 특징으로 하는 조성물.