KR20040018684A - composition of skin agent containing extract of Fumariaceae - Google Patents

composition of skin agent containing extract of Fumariaceae Download PDF

Info

Publication number
KR20040018684A
KR20040018684A KR1020020050603A KR20020050603A KR20040018684A KR 20040018684 A KR20040018684 A KR 20040018684A KR 1020020050603 A KR1020020050603 A KR 1020020050603A KR 20020050603 A KR20020050603 A KR 20020050603A KR 20040018684 A KR20040018684 A KR 20040018684A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
extract
skin
composition
plant
active ingredient
Prior art date
Application number
KR1020020050603A
Other languages
Korean (ko)
Other versions
KR100494374B1 (en
Inventor
표형배
이범천
윤은정
이동환
이경은
박성민
Original Assignee
한불화장품주식회사
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 한불화장품주식회사 filed Critical 한불화장품주식회사
Priority to KR10-2002-0050603A priority Critical patent/KR100494374B1/en
Publication of KR20040018684A publication Critical patent/KR20040018684A/en
Application granted granted Critical
Publication of KR100494374B1 publication Critical patent/KR100494374B1/en

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9783Angiosperms [Magnoliophyta]
    • A61K8/9789Magnoliopsida [dicotyledons]
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61QSPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08Anti-ageing preparations
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/40Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
    • A61K2800/52Stabilizers
    • A61K2800/522Antioxidants; Radical scavengers
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/80Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
    • A61K2800/84Products or compounds obtained by lyophilisation, freeze-drying

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

PURPOSE: Provided is a dermatological composition containing an extract of Fumariaceae as a main active ingredient. Therefore, it excellent anti-aging effect on the skin. CONSTITUTION: A dermatological composition is characterized by containing an extract of Fumariaceae, particularly Dicentra spectabisis, as a main active ingredient. The extract is obtained by using an extraction solvent selected from purified water, methanol, ethanol, glycerine, ethylacetate, butyleneglycol, propyleneglycol, dichloromethane and hexane.

Description

현호색과 식물 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 피부외용제 조성물{ composition of skin agent containing extract of Fumariaceae}Composition for skin external preparation containing calendula and plant extract as main active ingredients {composition of skin agent containing extract of Fumariaceae}

본 발명은 현호색과 식물 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 피부외용제 조성물에 관한 것으로, 좀더 상세하게는 금낭화 추출물 0.001 - 30.0 중량%를 함유하는 것을 특징으로 하며 항산화효과, 기질 금속단백질 분해효소(matrix metallo- proteinase, 이하 'MMP'라 칭함), 특히 콜라게나제(collagenase, 이하"MMP-1"라 칭함)과 젤라티나제(gelatinase, 이하 "MMP-2"라 칭함)의 활성 억제에 효과적이며 자외선 조사 후 인간 섬유아세포에서 과발현되는 MMP-1과 MMP-2의 발현 억제 효과가 우수한 피부외용제 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to an external composition for skin containing the genus quince and plant extract as the main active ingredients, and more particularly, it contains 0.001-30.0% by weight of a bleeding extract, and an antioxidant effect, matrix metalloproteinase (matrix metallo) effective in inhibiting the activity of proteinase (hereinafter referred to as 'MMP'), especially collagenase (hereinafter referred to as "MMP-1") and gelatinase (hereinafter referred to as "MMP-2"). The present invention relates to a skin external composition having excellent expression inhibitory effect of MMP-1 and MMP-2 overexpressed in human fibroblasts.

사람의 피부는 노화 과정에서 다양한 물리·화학적인 변화가 일어나며 그 원인으로는 크게 내적인 노화(intrinsic aging)와 광노화(photo-aging)로 구분되며 이에 관한 연구가 활발히 이루어져 왔다. 태양으로부터 지표에 도달하는 자외선 중 UVC는 대기권의 상층부에 있는 오존층에서 흡수, 산란되어 여과되므로 자연적 광화학 반응에 많은 영향을 미치지 않는다. 피부에 직접적으로 영향을 주는 자외선 중 UVB의 에너지는 UVA의 8% 정도이며 오존층에서 완벽하게 걸러지지 않으므로 생물학적인 중요성도 크다. UVB는 썬번(sunburn)에 의해 일어나는 세포 손상(cell damage)에 많은 영향을 끼친다. 또한 UVA는 피부의 표피와 진피층에 깊숙하게 투과하며, 일차적으로는 태양으로부터 방출되나 인공 램프 등에서도 방출된다.Human skin is subject to various physical and chemical changes during the aging process, and the cause is largely divided into internal aging and photo-aging. Among the ultraviolet rays reaching the earth's surface from the sun, UVC is absorbed, scattered, and filtered in the ozone layer in the upper part of the atmosphere, so it does not affect the natural photochemical reaction much. Among the ultraviolet rays that directly affect the skin, the energy of UVB is about 8% of the UVA and biologically important because it is not completely filtered out of the ozone layer. UVB has a lot of effect on cell damage caused by sunburn. UVA also penetrates deep into the skin's epidermis and dermis, primarily from the sun, but also from artificial lamps.

생체 내에서 콜라겐과 같은 세포외기질의 합성과 분해는 적절하게 조절되나 노화가 진행되면서 그 합성이 감소하며 콜라겐을 분해하는 효소인 기질 금속단백질 분해효소(MMP)의 발현이 촉진되어 피부의 탄력이 저하되고 주름이 형성된다. 또한 자외선 조사에 의해 이러한 분해효소가 활성화되기도 한다.Synthesis and degradation of extracellular matrix such as collagen is regulated in vivo, but the synthesis decreases as aging progresses, and the expression of matrix metalloproteinase (MMP), an enzyme that breaks down collagen, is promoted, resulting in decreased skin elasticity. And wrinkles are formed. Ultraviolet irradiation also activates these degrading enzymes.

기질 금속단백질 분해효소(MMP)는 다형핵성호중구(Polymorphonuclearneutr- ophil), 대식세포(Macrophage), 치은섬유아세포(Fibroblast), 골세포(Bone cell)와 같은 세포로부터 분비되는 칼슘 및 아연 의존성 엔도펩티다제(Endopeptidase)로 중성 pH에서 작용하며 기질로써 여러 가지 세포외기질을 이용한다.MMP는 그 기질 특이성에 따라 MMP-1, MMP-2, MMP-9 로 크게 분류되는데, MMP-1은 간질의 효소인 섬유아세포 타입 콜라게나제이며 기질로는 콜라겐 타입 Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅶ, Ⅷ, Ⅹ 및 젤라틴이 있으며 원래 콜라겐 길이의 3/4이나 1/4 길이의 펩타이드로 잘라 비특이적인 효소(gelatinase)의 작용이 용이하게 한다. MMP-2는 72-kD의 젤라티네이즈(A)가 속하며 기질로는 젤라틴, 콜라겐 타입 Ⅳ, Ⅴ, Ⅶ, Ⅹ, 엘라스틴 및 파이브로넥틴을 분해한다. 또한 메탈로엘라스타아제(Metalloelastase)는 MMP-13으로 엘라스틴 분해한다. 특히 기질 금속단백질 분해효소(MMP) 중에서 타입 Ⅳ 콜라게나제인 72-kD 및 92-kD 콜라제나제는 암전이의 첫 번째 장벽인 기저막의 주요 구조적인 성분인 타입 Ⅳ 콜라겐을 분해하는 효소로 암세포의 침윤과 전이에 있어서 가장 중요한효소라 할 수 있다. 타입 Ⅳ 콜라게나제에 대한 저해제의 탐색 및 개발은 암의 침윤과 전이 그리고 콜라겐성 결합조직의 분해가 원인이 되는 류마토이드, 치주질환, 각막궤양의 치료에 유용한 약제의 탐색 및 개발이라는 기능을 가지고 있다.Matrix metalloproteinases (MMPs) are calcium and zinc-dependent endopepes secreted from cells such as polymorphonuclearneutrophils, macrophage, gingival fibroblasts, bone cells Endopeptidase acts at neutral pH and uses various extracellular substrates as substrates. MMPs are broadly classified as MMP-1, MMP-2, and MMP-9 according to their substrate specificity. Fibroblast-type collagenase, an enzyme, includes collagen types I, II, III, VIII, VIII, VIII and gelatin. ) Facilitates the action. MMP-2 belongs to 72-kD gelatinase (A) and degrades gelatin, collagen types IV, V, VIII, VIII, elastin and fibronectin as substrates. Metallolastase also degrades elastin with MMP-13. Particularly, among the matrix metalloproteinases (MMP), type IV collagenase 72-kD and 92-kD collagenase are enzymes that break down type IV collagen, a major structural component of the basement membrane, the first barrier of cancer metastasis. It is the most important enzyme in infiltration and metastasis. The search and development of inhibitors against type IV collagenase has the function of finding and developing drugs useful for the treatment of rheumatoid, periodontal disease, and corneal ulcer caused by cancer invasion and metastasis and degradation of collagen connective tissue. .

기질 금속단백질 분해효소(MMP)의 분자구조는 일반적으로 다섯 개의 지역인 신호펩타이드, 프로펩타이드, 촉매부위, 경첩부위, 펙신과 같은 부위로 특징화된다. 젤라티나제, MMP-2 및 MMP-9는 1개의 파이브로넥틴과 같은 콜라겐 부위를 가지고 있으며 MMP-9는 부가적으로 또 하나의 타입Ⅴ 콜라겐 부위를 가지고 있다. 이러한 효소는 세포에서 저장되지 않고 불활성화된 프로엔자임 및 자이모젠(Zymogen)으로 분비되며 신호펩타이드가 상실되면서 활성을 찾는다. 프로펩타이드의 기능은 효소의 불활성을 유지하는데 관련되며 여러 단계로 절단된다. 이러한 효소의 활성을 유발시키는데는 세정제, 산화제, 유기금속물질 및 트립신이나 프라스민과 같은 효소가 관여하여 효소촉매 부위의 아연을 시스테인으로부터 떨어져 나가게 하며 유리된 아연은 물과 상호작용을 하여 기질을 가수 분해시킨다. 호중구 및 다형핵성 백혈구의 기질 금속단백질 분해효소(MMP)는 산화 과정에 의하여 일차적으로 활성화되는데 그 과정은 먼저 세포 내에서 과산화수소가 발생되면 염소이온의 존재 하에서 미엘로페록시다제(Myeloperoxidase)에 의하여 차아염소산으로 전화되고 이것이 기질 금속단백질 분해효소(MMP)를 활성화시킨다. 섬유아세포의 기질 금속단백질 분해효소(MMP)는 트립신 및 플라스민과 같은 단백질 분해효소에 의하여 활성화된다. 이렇게 활성화된 효소는 불과 소량만이 정해진 생리학적 기능을 수행하는데 과량으로 분비되어 활성화되면 앞에서 언급한 각종 질환을 유발시킨다.The molecular structure of matrix metalloproteinases (MMPs) is generally characterized by five regions: signal peptides, propeptide, catalytic sites, hinge sites, and pepsin. Gelatinase, MMP-2 and MMP-9 have one fibronectin-like collagen site and MMP-9 additionally has another type V collagen site. These enzymes are secreted into the inactivated proenzymes and Zymogens, which are not stored in the cell and find activity as the signal peptide is lost. The function of the propeptide is involved in maintaining the inactivation of the enzyme and is cleaved in several steps. To induce the activity of these enzymes, detergents, oxidizing agents, organometallic substances and enzymes such as trypsin or prasmin are involved to release zinc from the enzyme catalyst site from cysteine, and the free zinc interacts with water to hydrolyze the substrate. Decompose Substrate metalloproteinases (MMPs) of neutrophils and polymorphonuclear leukocytes are primarily activated by oxidative processes. First, when hydrogen peroxide is generated in cells, it is induced by myeloperoxidase in the presence of chlorine ions. It is converted to chloric acid, which activates the substrate metalloproteinase (MMP). Matrix metalloproteinases (MMPs) in fibroblasts are activated by proteases such as trypsin and plasmin. Only a small amount of the activated enzyme performs a predetermined physiological function. When it is secreted and activated in excess, it causes various diseases mentioned above.

MMP는 성장인자 및 사이토카인에 의하여 유전자가 발현되어 효소가 분비되는 것으로 알려져 있다. 또한 혈관, 결합조직 및 림프관으로 발생되는 중배엽조직의 간엽세포와 각질세포에서는 성장인자 및 인터루킨-1β, 종양괴산인자-α, 혈소판유래성장인자, 표피성장인자와 같은 사이토카인이 기질 금속단백질 분해효소(MMP)의 유전자 발현을 촉진하는 반면, 인터페론-α와 글루티코르티코이드 및 변형성장인자- β는 기질 금속단백질 분해효소(MMP)의 유전자 발현을 억제시킨다. 그리고 골 흡수와 관련하여 부갑상선 호르몬 및 세포내독소, 프로스타클란딘은 기질 금속단백질 분해효소(MMP)의 합성을 증가시키는 것으로 알려져 있다. 이러한 유전적 조절기작을 살펴보면 원종양유전자인 c-fos와 c-jun과 같은 전사인자에 의하여 유전자에 대한 활성인자 단백질-1이 변형되고 부가적으로 PEA3과 NIP 단백질 결합부위가 상승작용으로 콜라게나제와 스트로멜리신(Stromelysin) 프로모터에서의 전사활성을 최대수준으로 유발시킨다. 호중구의 기질 금속단백질 분해효소(MMP)조절은 전사수준에서보다는 리소좀의 과립에 의하여 일차적으로 조절된다.It is known that MMPs express genes by growth factors and cytokines to secrete enzymes. In mesenchymal and keratinocytes of mesodermal tissues, which are caused by blood vessels, connective tissues, and lymphatic vessels, cytokines such as growth factor and interleukin-1β, tumor necrosis factor-α, platelet-derived growth factor, and epidermal growth factor, While it promotes gene expression of (MMP), interferon-α and gluticocorticoids and transforming growth factor-β inhibit the gene expression of matrix metalloproteinases (MMPs). In addition, parathyroid hormone, endotoxin, and prostaglandin are known to increase the synthesis of matrix metalloproteinase (MMP) in relation to bone resorption. This genetic control mechanism shows that collagenase is synergistically modified by activator protein-1 for genes by synergistic transcription factors such as c-fos and c-jun, and additionally by the synergy of PEA3 and NIP protein binding sites. And maximal transcriptional activity in the stromelysin promoter. Neutrophil matrix metalloproteinase (MMP) regulation is primarily regulated by granulation of lysosomes rather than at the transcription level.

피부 노화방지와 관련된 특허들을 살펴보면 콜라겐 합성을 촉진하거나 콜라게네이즈 억제제로 펩티드나 식물추출물 등을 함유하는 화장료 조성물 등이 있다. 이러한 종래 기술은 피부노화방지를 나타내기 위해 단순히 콜라겐 합성을 촉진하거나 콜라게나제의 활성을 억제시키는 데에 반해 금낭화추출물 연구 결과, 기질 금속 단백질 분해효소에 작용하여 항산화효과 및 피부 주름 개선의 효과와 같은 항노화 효능이 발견되었다.Looking at the patents related to the anti-aging of the skin, there is a cosmetic composition that promotes collagen synthesis or contains a peptide or plant extract as a collagenase inhibitor. In order to prevent skin aging, the conventional technique merely promotes collagen synthesis or inhibits the activity of collagenase, whereas the results of the study of bleeding heart extract have been shown to act on the substrate metalloproteinase to improve the antioxidant effect and skin wrinkle improvement. The same anti-aging efficacy has been found.

현호색과(玄胡索科 Fumariaceae) 식물 중 금낭화(dicentra spectabisis)는의 금낭화속(金囊花屬 Dicentra)에 속하는 풀로서 중국 원산이며 우리 나라의 중남부 지방에서 산지의 돌무덤이나 계곡에 자라지만 관상용으로도 심는 여러해살이풀로 높이는 40~60cm 정도이다.Dicentra spectabisis is a herbaceous plant belonging to the genus Dicentra, which is native to China. The plant is a perennial plant, 40 ~ 60cm high.

전체가 흰빛이 도는 녹색이고 줄기는 연약하며 곧게 서고 가지를 친다. 잎은 어긋나고 잎자루가 길며 3개씩 2회 깃꼴로 갈라진다. 갈라진 조각은 달걀을 거꾸로 세운 모양의 쐐기꼴로 끝이 뾰족하고 가장자리는 결각(缺刻)이 있다. 꽃은 4~6월에 담홍색으로 피는데, 총상꽃차례로 원줄기 끝에 한쪽으로 치우쳐서 주렁주렁 매달린다. 화관(花冠)은 볼록한 주머니 모양이다. 꽃잎은 4개가 모여서 편평한 심장형으로 되고 바깥 꽃잎 2개는 밑부분이 꿀주머니로 된다. 안쪽 꽃잎 2개가 합쳐져서 관 모양의 돌기가 된다. 꽃받침잎은 2개로 가늘고 작은 비늘 모양이며 일찍 떨어진다. 수술은 6개이고 양체(兩體)로 갈라지며 암술은 1개이다. 열매는 긴 타원형의 삭과(殼果)이다. 흰 꽃이 피는 품종으로 디켄트라 스펙타빌리스 알바(D. spectabilis alba)가 있으며, 이 식물의 잎은 깊게 패어져 여러 장의 조그만 조각들로 나누어지는데, 이 조각들은 널리 심고 있는 금낭화속의 다른 식물들보다 크다. 널리 심는 종류로는 북아메리카 동부의 엘러게니 산 주변에서 자라며, 4~9월에 걸쳐 조그만 분홍색 꽃이 피는 디켄드라 엑시미아(D. eximia) 등이 있다. 미국의 캘리포니아에서 브리티시컬럼비아에 걸친 태평양 연안의 숲 속에서 자라는 디켄트라 포르모사 (D. formosa)에는 원예종으로 심는 여러 품종들이 있다.The whole is whiteish green, the stem is soft, standing upright and branching. The leaves are alternate, the petiole is long, and split into two pieces of three pieces. Cracked piece is wedge shaped like an upside down egg with pointed tip and edge at the edge. Flowers bloom pink in April-June, hanging on one side at the end of the main stem as a gunshot inflorescence. Corollas are convex pouches. Four petals gather to form a flat heart, and the two outer petals form a honey bag at the bottom. The two inner petals merge to form a tubular projection. Sepals are 2, thin, scaly, and fall early. There are six stamens, divided into two bodies, and one pistil. Fruits are long oval capsules. A white-flowered cultivar, D. spectabilis alba , whose leaves are deeply dug up into several small pieces, which are widely planted in other varieties of Dicentra. Bigger than them Widely planted varieties include D. eximia , which grows around Mount Elegeni in eastern North America, and blooms in small pink flowers from April to September. Growing in the Pacific coastal forests from California to British Columbia in the United States, there are many varieties planted as horticultural species in D. formosa .

노인들에게는 며눌취나 덩굴모란이라는 이름으로 알려져 있는 이 식물은 토양에 예민한 반응을 보여서, 알칼리성 토질에서는 원래의 색으로 꽃이 피고 산성토양에서는 붉은 색이나 흰색으로 핀다. 유독성 식물이지만, 어린순은 나물로 먹고 약재로도 쓴다. 넓은 꽃잎과 꽃술은 마치 물고기의 입 모양을 하고 있어서 수중에 있는 듯한 착각을 일으킨다. 봄에 어린잎을 채취하여 삶아서 나물로 쓴다. 한방에서 전초를 채취하여 말린 것을 금낭(錦囊)이라고 하며, 피를 잘 고르고 소종(消腫)의 효능이 있어 타박상종기 등의 치료에 쓴다. 전초와 뿌리에 0.1-2%의 알카로이드가 있다. 주성분은 프로토핀과 디센트린이다. 기타 콥티신, 켈레리트린, 켈리루빈, 켈리루틴도 분리되었다. 알카로이드는 전초에 0.18%, 뿌리에 1,22% 들어있다. 프로토핀은 전초에 0.14%, 뿌리에 1.01% 있다. 디센트린은 마취작용이 있으며 많은 양에서 경련을 일으킨다. 그리고 온혈동물에게 주사하면 안티피린보다 2배가 센 열내림 작용이 있다고 알려져 있다.(참고문헌, 한국의 자원식물)Known by the elderly as stalks and vine peony, the plant reacts sensitively to soil, flowering in its original color in alkaline soil and red or white in acidic soil. Although it is a poisonous plant, young shoots are eaten as herbs and also used as herbs. The wide petals and flower sake resemble the mouth of a fish, creating an illusion of being underwater. In spring, young leaves are harvested and boiled as herbs. Herbal medicine is taken from the herbs and dried is called a golden sac (피), the blood is well selected and small (消腫) is effective for the treatment of bruises and boils. There are 0.1-2% alkaloids in the outposts and roots. The main ingredients are protopene and decentrin. Other copticins, kelerytrins, kelly rubins, and kelly rutin were also isolated. Alkaloids are 0.18% in the outpost and 1,22% in the roots. Protopene is 0.14% in the outpost and 1.01% in the roots. Dicentrin is anesthetic and causes cramps in large amounts. In addition, it is known that when injected into warm-blooded animals, fever lowering action is twice as strong as antipyrine (Ref., Korean Resource Plant).

현호색과(玄胡索科 Fumariaceae) 식물에 대한 연구로는 미국특허5116749와 미국특허4769452에 기재되어 있으나 이들 발명은 현호색과(玄胡索科 Fumariaceae) 식물로부터 유용한 효소를 분리하는데 그치며 이들 효소는 피부외용제와는 관련이 없는 구강치료 약물이나 특정 효소의 트렌스퍼나제로 작용하는 것들이다.Studies on Fuchsia Fumariaceae plants are described in U.S. Pat.No.511,6749 and U.S. Pat.No.4769452, but these inventions only separate useful enzymes from Fuchsia Fumariaceae plants. Oral medications that do not involve external preparations or those that act as transferases for specific enzymes.

본 발명은 여러 천연물들 중 현호색과 식물 추출물을 선택하여, 피부외용제의 원료로서의 효능을 확인하고, 그 사용방법을 개발하고, 이 원료를 사용함으로써 소정의 기능성을 갖는 피부외용제를 제조할 수 있는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.The present invention is a method of selecting a calendula color and a plant extract from a variety of natural products, confirming the efficacy as a raw material of the external skin preparations, developing a method of using the same, and by using this raw material to produce a skin external preparation having a predetermined functionality The purpose is to provide.

즉, 본 발명의 목적은 기질 금속단백질 분해효소 저해제 및 발현억제 기능을 증대시켜 항산화효과, 피부잔주름 방지효과 등의 우수한 항노화 효과를 나타내는 천연 추출물을 제공하는 것이다.That is, an object of the present invention is to provide a natural extract showing an excellent anti-aging effect such as antioxidant effect, skin wrinkle prevention effect by increasing the substrate metalloproteinase inhibitor and expression inhibitory function.

또한 본 발명은 현호색과 식물 추출물 제조시 특정 추출용매 선택시 목적 효능이 더욱 크게 나타난 점으로부터 피부외용제 원료로서 이 물질을 이용하여 피부외용제를 제조하는 방법 및 그 피부외용제를 제공하고자 한다.In another aspect, the present invention is to provide a method for producing a skin external preparation using the material as a skin external preparation raw material from the point that the target efficacy is more greatly selected when selecting a specific extraction solvent in the preparation of Hyunho colors and plant extracts and the skin external preparation.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 현호색과 식물을 추출용매로서 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄 및 헥산 중에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 추출한 것을 특징으로 하는 현호색과 식물 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 피부외용제 조성물을 제공하는 것이다.In order to achieve the above object, the present invention is that the extract of the color of the cortex and plants using one or more solvents selected from purified water, methanol, ethanol, glycerine, ethyl acetate, butylene glycol, propylene glycol, dichloromethane and hexane It is to provide a topical skin composition containing the main color and the plant extract as a main active ingredient.

또한, 본 발명은 현호색과 식물 추출물을 10-95% 에탄올을 추출용매로 사용하여 추출하는 것을 특징으로 피부외용제 조성물을 제공하는 것이다.In another aspect, the present invention is to provide a skin external composition, characterized in that the extract of Hyunho color and plant extract using 10-95% ethanol as the extraction solvent.

또한, 본 발명은 상기 추출물이 상온에서 냉침, 가열 여과하여 얻어진 액상물, 추가로 용매를 감압농축 또는 동결건조하여 얻은 것임을 특징으로 하는 피부외용제 조성물을 제공한다.In another aspect, the present invention provides a composition for external application for skin, characterized in that the extract is obtained by cold condensation at room temperature, heat filtration, and further obtained by concentrating the solvent under reduced pressure or lyophilization.

또한, 본 발명은 현호색과 식물 추출물의 함량이 피부외용제 조성물 전체에 대해서 동결건조중량 기준 0.001-30.0중량%인 것을 특징으로 하는 피부외용제 조성물을 제공한다. 상기 추출물의 함량이 0.001중량% 미만인 경우에는 피부개선 효과가 거의 없으며, 30.0중량% 이상인 경우에는 함유량 증가에 대한 효과 증대 정도가 미미하여 경제적이지 못하다.In addition, the present invention provides a topical skin composition, characterized in that the content of Hyunho colors and plant extracts is 0.001-30.0% by weight based on the total lyophilized weight of the external skin composition. When the content of the extract is less than 0.001% by weight, there is almost no skin improvement effect, and when the content of the extract is more than 30.0% by weight, the degree of increase in the effect of increasing the content is insignificant and thus it is not economical.

또한, 본 발명은 상기 피부외용제 조성물이 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형의 제형 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 현호색과 식물 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 피부외용제 조성물을 제공한다.In addition, the present invention, the external composition for skin dermal calendula and plant, characterized in that selected from the formulation of the lotion, gel, water-soluble liquid, cream, essence, oil-in-water (O / W) type and water-in-oil (W / O) type Provided is an external skin composition containing the extract as a main active ingredient.

이하, 실시예를 통해 본 발명을 좀더 구체적으로 설명한다. 단, 이들 실시예는 본 발명의 예시적인 기재일 뿐이며 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. However, these Examples are only illustrative description of the present invention and the scope of the present invention is not limited to these Examples.

실시예 1: 금낭화 추출물 제조Example 1: Preparation of bleeding heart extract

세절하여 음건한 금낭화를 95%(V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결건조하였다. 감압농축물 및 동결건조물이 0.001 - 30.0중량% 함유되게 정제수, 에탄올, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 중에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 금낭화 추출물을 제조하였다.After dipping, the dry bleeding heart was refluxed three times for 5 hours with an aqueous 95% (V / V) ethanol solution, and then cooled and filtered through Whatman # 5 filter paper. The filtered extract was concentrated under reduced pressure and lyophilized at 50 ° C or lower. A bleeding extract was prepared using one or more solvents selected from purified water, ethanol, butylene glycol, and propylene glycol so as to contain 0.001 to 30.0% by weight of the vacuum concentrate and the lyophilisate.

실시예 2: NBT법을 이용한 항산화 효과 측정 실험Example 2 Experiment of Measuring Antioxidant Effect Using NBT Method

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 금낭화 추출물의 항산화 효과를 확인하기 위해 실험실 조건에서 다른 항산화제 즉, 녹차추출물과 비타민 E를 비교 샘플로 하였으며, NBT법을 이용하여 항산화 활성을 측정하였다.In this example, to determine the antioxidant effect of the bleeding heart extract obtained in Example 1 as a comparative sample of other antioxidants, that is, green tea extract and vitamin E under laboratory conditions, antioxidant activity was measured using the NBT method.

항산화 효과를 측정하기 위해서 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 생성되는 활성산소를 NBT법에 의해 측정하고 피검물질이 활성산소를 제거하는 효과, 즉 활성산소 소거효과를 평가한다. 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 활성산소를 생성시킨다. 이 활성산소가 니트로블루테트라졸리움(Nitro Blue Tetrazolium;NBT)과 반응하여 이것에 의해 생성되는 청색을 파장 560nm에서 측정하는 것으로 활성산소 소거율을 측정한다.In order to measure the antioxidant effect, the active oxygen produced by xanthine and xanthine oxidase is measured by the NBT method, and the effect of the test substance removing the active oxygen, that is, the active oxygen scavenging effect, is evaluated. Free radicals are produced by xanthine and xanthine oxidase. This active oxygen reacts with Nitro Blue Tetrazolium (NBT) to measure the active oxygen scavenging rate by measuring the blue color produced by this at a wavelength of 560 nm.

측정방법으로서As a measuring method

1. 0.05M Na2CO3------------------------------------ 2.4ml0.05M Na 2 CO 3 ------------------------------------ 2.4ml

2. 3mM 크산틴 용액---------------------------------- 0.1ml2.3mM xanthine solution ---------------------------------- 0.1ml

3. 3mM EDTA 용액------------------------------------ 0.1ml3.3mM EDTA Solution ------------------------------------ 0.1ml

4. BSA 용액----------------------------------------- 0.1ml4.BSA solution ---------------------------------------- 0.1ml

5. 0.72mM NBT 용액---------------------------------- 0.1ml5.0.72 mM NBT solution ---------------------------------- 0.1ml

6. 크산틴 옥시다제 용액----------------------------- 0.1ml6.Xanthine Oxidase Solution ----------------------------- 0.1ml

7. 6mM CuCl2용액----------------------------------- 0.1ml7.6 mM CuCl 2 solution ----------------------------------- 0.1ml

① 바이엘병에 1,2,3,4,5를 가하고 여기에 시료용액 0.1ml을 첨가하고 25℃에서 10분간 방치한다.① Add 1,2,3,4,5 to Bayer's bottle and add 0.1ml of sample solution to it and leave at 25 ℃ for 10 minutes.

② 6을 가하여 빨리 교반하고 25℃에서 20분간의 배양을 개시한다.② Add 6 and stir quickly, and start incubation for 20 minutes at 25 ℃.

③ 그 후 7을 가하여 반응을 정지시키고 560nm에서의 흡광도 St를 측정한다.③ After that, add 7 to stop the reaction and measure the absorbance St at 560nm.

④ 공시험은 시료용액 대신에 증류수를 사용한 것을 상기와 똑같이 조작해 흡광도 Bt를 측정한다.④ For the blank test, measure the absorbance Bt by using distilled water instead of the sample solution as above.

⑤ 역시, 시료용액의 블랭크(Blank)는 6대신에 증류수를 사용해 똑같이 조작하여 흡광도 Bo를 측정한다.⑤ Also, the blank of the sample solution is operated in the same manner using distilled water instead of 6 to measure the absorbance Bo.

효과의 결과는 수학식 1에 의하여 산출하였으며, 결과는 표1과 같다.The result of the effect was calculated by Equation 1, the results are shown in Table 1.

억제율(%) = 〔1-(St-So)/(Bt-Bo)〕X 100% Inhibition = [1- (St-So) / (Bt-Bo)] X 100

St : 시료용액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도St: absorbance at 560 nm after enzyme reaction of sample solution

Bt : 공시험용액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도Bt: absorbance at 560 nm after enzymatic reaction of blank test solution

So : 시료용액의 효소 무첨가시 반응전의 560nm에서의 흡광도So: absorbance at 560 nm before reaction without enzyme addition of sample solution

Bo : 공시험용액의 효소 무첨가시 반응전의 560nm에서의 흡광도Bo: absorbance at 560 nm before reaction without enzyme in blank test solution

결과는 표1과 같이 시험한 모든 시료에서 우수한 항산화 효과를 나타내었고, 금낭화 추출물도 항산화제로 많이 이용되고 있는 녹차추출물과 비타민 E와 비슷한 항산화력을 갖고 있음이 확인되었다.The results showed excellent antioxidant effect in all the samples tested as shown in Table 1, and it was confirmed that bleeding heart extract also had similar antioxidant power as green tea extract and vitamin E, which are widely used as antioxidants.

시료명Sample Name 항산화효과(%)Antioxidative effect(%) 금낭화 D.W.추출물Dicentra D.W.Extract 8585 금낭화 에탄올추출물Digestive Ethanol Extract 9292 녹차추출물Green Tea Extract 9494 비타민vitamin 8787

실시예 3: 인간 섬유아세포 활성 효과 측정 실험Example 3 Experimental Measurement of Human Fibroblast Activity

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 금낭화 추출물의 인간 섬유아세포 활성(Cell proliferation) 효과를 확인하기 위해 세포주는 마우스 유래 섬유아세포인 Hs-68 사용하였으며 12-웰 플레이트에 웰당 2 X 105cell 수로 세포를 분주하고 24시간 배양한다. 각 원료는 세포독성을 일으키지 않는 농도로 처리하고 시료를 처리한 후 24시간이 지나면 배지를 제거하고 각 웰당 500ul 새 배지와 60ul MTT용액을 넣은 후 2시간 동안 37℃ CO2배양기에서 배양한다. 세포를 용해시키고 각각을 100ul씩 96-웰 플레이트에 옮긴다. ELISA 리더 565nm에서 흡광도를 측정했다.In this example, the cell line was Hs-68, which is a mouse-derived fibroblast, to confirm the effect of human fibroblast activity (Cell proliferation) of the alfalfa extract obtained in Example 1 and the number of 2 X 10 5 cells per well in a 12-well plate. Dispense the cells and incubate for 24 hours. Each raw material is treated at a concentration that does not cause cytotoxicity, and after 24 hours of treatment with the sample, the medium is removed, and 500ul fresh medium and 60ul MTT solution are added to each well, followed by incubation in a 37 ° C CO 2 incubator for 2 hours. Lysate the cells and transfer 100ul of each to a 96-well plate. Absorbance was measured at 565 nm of ELISA reader.

아래 수학식2에 의해 세포활성 정도를 계산하였다. 아무것도 처리하지 않은 세포수를 기준으로 한다. 결과는 표 2에 나타나 있으며, 금낭화 추출물이 세포활성효과가 비교적 우수함을 알 수 있다.The degree of cell activity was calculated by Equation 2 below. Based on the number of cells that did not process anything. The results are shown in Table 2, it can be seen that the bleeding heart extract is relatively excellent in the cell activity effect.

세포활성율(%) = (시료 처리시 세포수- 기준세포수)/기준세포수 X 100Cell activity rate (%) = (cell number in sample treatment-reference cell number) / reference cell number X 100

활성율Activity rate 10% 이하below 10 10 - 20%10-20% 20 - 50%20-50% 50% 이상50% or more 활성효과Active effect 없음none 보통usually 우수Great 매우우수Very good

결과는 표3과 같이 나타내었다.The results are shown in Table 3.

활성율(%)% Active 금낭화 추출물 0.1%Dicentra Extract 0.1% 137137 금낭화 추출물 0.01%Dicentra Extract 0.01% 112112 대조군Control 100100

실시예 4: in vitro MMP-1 inhibition assayExample 4: in vitro MMP-1 inhibition assay

기질 금속단백질분해효소(MMP-1) 저해 활성은 테스트관내에서 스크리닝 타입의 생화학적 모델에서 측정하였는데 이는 정제된 콜라게나제 및 이의 기질인 플루오레세인에 접한된 콜라겐과 젤라틴의 이용을 기초로한다(EnzChek(상표명) 젤라티나제/콜라게나제 키트, 몰큘라프루브). 클로스트리디움 히스토리티컴으로부터 정제된 콜라게나제를 상기 EnzChek(상표명)젤라티나제/콜라게나제 키트내에 공급하였다. 이 효소는 콜라겐 타입Ⅰ 및 Ⅳ, 젤라틴에 대한 이중 작용성을 보유하고 있다. 돼지 피부로부터 정제하고 플로오레세인에 접합된 DQ-콜라겐과 0.05M 트리스-HCl, 0.15M NaCl, 5mM CaCl2및 0.2mM 나트륨 아지드(pH 7.6)로 이루어지는 반응 완충액은 EnzChek(상표명)젤라티나제/콜라게나제 키트(몰큘라 프로브스)를 이용하였다. 금낭화 추출물은 상기 반응 완충액 내에 용해시켰다. 이는 4; 2; 0.4; 0.2;0.04%(/v)에서 테스트하였다. 테스트 추출물의 희석액은 25ug/ml의 DQ-콜라겐 및 0.1U/ml의 콜라게나제와 함께 실온에서 15분, 45분, 120분 동안 항온처리하였다.Substrate metalloproteinase (MMP-1) inhibitory activity was measured in vitro in a screening type biochemical model based on the use of purified collagenase and its substrate, collagen and gelatin in contact with fluorescein. (EnzChek ™ gelatinase / collagenase kit, molculaprobe). Collagenase purified from Clostridium histiocom was supplied in the EnzChek ™ gelatinase / collagenase kit. This enzyme has dual action on collagen types I and IV, gelatin. A reaction buffer consisting of DQ-collagen purified from porcine skin and conjugated to fluorescein with 0.05M Tris-HCl, 0.15M NaCl, 5mM CaCl 2 and 0.2mM sodium azide (pH 7.6) was EnzChek (TM) gelatinase. Collagenase kit (Molcula Probes) was used. Dicentra extract was dissolved in the reaction buffer. It is 4; 2; 0.4; Tested at 0.2; 0.04% (/ v). Dilutions of the test extracts were incubated with 25 ug / ml of DQ-collagen and 0.1 U / ml of collagenase for 15 minutes, 45 minutes, and 120 minutes at room temperature.

각각의 실험조건에서 콜라게나제와 DQ-콜라겐 혼합물에 상응하는 대조용 혼합물(control)도 동일하게 항온처리하였다. 또한 각각의 실험 조건에서 Blank, 이하 '효소 비함유 blank'이라 칭하는 샘플은 DQ-콜라겐의 존재 및 콜라게나제의 부재하에서 항온처리하였다. 각각의 실험은 3회 수행하였다.In each experimental condition, the control corresponding to the collagenase and DQ-collagen mixture was also incubated in the same manner. Also in each experimental condition a sample called Blank, hereinafter 'enzyme free blank', was incubated in the presence of DQ-collagen and in the absence of collagenase. Each experiment was performed three times.

15분, 45분, 120분 경과 후 DQ-콜라겐의 분해에 상응하는 신호는 형광측정기(여기:485nm, 방출 505nm)로 측정하였다. '효소 비함유 blank' 형광값을 기준으로 하여 각각의 샘플의 형광값을 측정하였다. 결과는 샘플당 형광 단위 및 대조군에 대한 변이율(%)로 나타냈다. 상기 결과는 프루오레세인 단위/샘플로 나타냈다.After 15, 45 and 120 minutes, the signal corresponding to the degradation of DQ-collagen was measured with a fluorometer (excitation: 485 nm, emission 505 nm). The fluorescence value of each sample was measured based on the 'enzyme free blank' fluorescence value. Results are expressed as percent variance for fluorescence units per sample and control. The results are shown in pluorescein units / sample.

모든 테스트에서 대조 저해제로서 비특이성 금속 킬레이터 억제제인 1,10-페난트롤린을 사용하였다. 콜라게나제 0.1U/ml에 저해제는 0.2mM의 농도가 적당하다.All tests used 1,10-phenanthroline, a nonspecific metal chelator inhibitor, as a control inhibitor. At 0.1 U / ml collagenase the inhibitor is suitably at a concentration of 0.2 mM.

결론적으로 선택된 실험 조건하에서 0.04 내지 4%(v/v)에서 테스트된 금낭화 추출물은 투여랑 의존성 항콜라게나제/젤라티나제 활성을 보유하였다.In conclusion, the bleeding heart extract tested at 0.04 to 4% (v / v) under selected experimental conditions retained dose dependent anticollagenase / gelatinase activity.

결과는 표4와 표5에 나타냈으며 금낭화 에탄올 추출물은 0.04% 처리시 클로스트리디움 콜라게나제의 콜라겐 분해활성의 70%를 억제하였으며 이는 2mM 1,10-페난트롤린의 저해 효과와 유사하였다. 금낭화 열수 추출물은 0.2% 처리시 콜라겐 분해활성의 75%를 억제하였으며 이는 2mM 1,10-페난트롤린의 저해 효과보다 우수하였다.The results are shown in Tables 4 and 5, and the digestive ethanol extract inhibited 70% of the collagen degrading activity of Clostridium collagenase at 0.04%, which was similar to the inhibitory effect of 2mM 1,10-phenanthroline. Digestive hydrothermal extract inhibited 75% of collagen degrading activity at 0.2% treatment, which was superior to the inhibitory effect of 2mM 1,10-phenanthroline.

0.1U콜라게나제0.1 U collagenase 2mM 1,10- 페난트롤린2 mM 1,10-phenanthroline 금낭화 에탄올 추출물Digestive Ethanol Extract 44 22 0.40.4 0.20.2 0.040.04 형광값Fluorescence 220.1220.1 62.1762.17 1313 4141 6969 8585 9898 효소활성Enzyme activity 100%100% 2828 55 1818 3131 3838 4444 저해율Inhibition rate -- 7272 9595 8282 6969 6262 5656

0.1U콜라게나제0.1 U collagenase 2mM 1,10-페난트롤린2 mM 1,10-phenanthroline 금낭화 D.W. 추출물Dicentra D.W. extract 44 22 0.40.4 0.20.2 0.040.04 형광값Fluorescence 220.1220.1 62.1762.17 25.44825.448 7878 8282 109109 112112 효소활성Enzyme activity 100%100% 2828 11.411.4 2525 3737 4949 50.850.8 저해율Inhibition rate -- 7272 88.688.6 7575 6363 5151 49.249.2

실시예 5: in vitro MMP-2 inhibition assayExample 5: in vitro MMP-2 inhibition assay

기질 금속단백질분해효소(MMP-2), 젤라티나제 저해 활성은 테스트관내에서 스크리닝 타입의 생화학적 모델에서 측정하였는데 MMP-2 또는 젤라티나제 A는 세포외 매트릭스의 특이적 성분을 분해하는 메라로프로테아제로서 젤라틴(변성된 콜라겐), 콜라겐 Ⅰ,Ⅳ, Ⅶ, 및 Ⅹ, 그리고 피브로넥틴, 라미닌 및 엘라스틴을 분해한다. 인간의 섬유종으로부터 정제된 MMP-2는 콜바이오켐에서 입수하였고 이의 기질인 플루오레세인에 접한된 젤라틴은 (EnzChek(상표명) 젤라티나제/콜라게나제 키트, 몰큘라 프로브스)를 이용하였다.Matrix metalloproteinase (MMP-2), gelatinase inhibitory activity was measured in vitro in a screening type biochemical model, where MMP-2 or gelatinase A was a merosa that degrades specific components of the extracellular matrix. As proteases it degrades gelatin (modified collagen), collagen I, IV, VIII, and VIII, and fibronectin, laminin and elastin. MMP-2 purified from human fibroids was obtained from Colbiochem and gelatin in contact with its substrate fluorescein (EnzChek ™ gelatinase / collagenase kit, Mocula Probes).

금낭화 추출물의 MMP-2 저해능은 MMP-1 실험과 동일하게 테스트하였다. 테스트 추출물의 희석액은 25ug/ml의 DQ-젤라틴 및 0.1U/ml의 젤라티나제와 함께 실온에서 15분, 45분, 120분 동안 항온처리하였다.MMP-2 inhibitory activity of bleeding heart extract was tested in the same manner as the MMP-1 experiment. Dilutions of the test extracts were incubated with 25 ug / ml DQ-gelatin and 0.1 U / ml gelatinase for 15 minutes, 45 minutes, and 120 minutes at room temperature.

결과는 표6과 표7에 나타냈으며 금낭화 에탄올 추출물은 0.04% 처리시 인간의 섬유종으로부터 정제된 젤라티나제의 젤라틴 분해활성의 82%를 억제하였으며 금낭화 열수 추출물은 0.04% 처리시 젤라틴 분해활성의 78%를 억제하였으며 이는 2mM 1,10-페난트롤린의 저해 효과와 유사한 결과를 보였다.The results are shown in Table 6 and Table 7. Digestive ethanol extract inhibited 82% of the gelatin degrading activity of gelatinase purified from human fibroids when treated with 0.04%. % Was inhibited, similar to the inhibitory effect of 2 mM 1,10-phenanthroline.

0.1U젤라티나제0.1 U gelatine 2mM 1,10-페난트롤린2 mM 1,10-phenanthroline 금낭화 에탄올 추출물Digestive Ethanol Extract 44 22 0.40.4 0.20.2 0.040.04 형광값Fluorescence 417.4417.4 74.0374.03 2424 5353 7777 102102 253253 효소활성Enzyme activity 100%100% 17.717.7 5.75.7 12.712.7 1818 2424 6060 저해율Inhibition rate -- 82.282.2 94.294.2 87.387.3 8282 7676 4040

0.1U콜라게나제0.1 U collagenase 2mM 1,10-페난트롤린2 mM 1,10-phenanthroline 금낭화 D.W. 추출물Dicentra D.W. extract 44 22 0.40.4 0.20.2 0.040.04 형광값Fluorescence 220.1220.1 62.1762.17 25.44825.448 7878 8282 109109 112112 효소활성Enzyme activity 100%100% 2828 11.411.4 2525 3737 4949 50.850.8 저해율Inhibition rate -- 7272 88.688.6 7575 6363 5151 49.249.2

실시예6: 자외선 조사 후 금낭화 추출물에 의한 MMP-1과 MMP-2 발현억제 평가Example 6: Evaluation of the inhibition of MMP-1 and MMP-2 expression by bleeding heart extract after UV irradiation

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 금낭화 추출물의 UV 조사 및 시료 첨가 후 MMP-1과 MMP-2의 농도를 측정하기 위해서 ELISA를 실시하였다.This Example was subjected to ELISA to measure the concentration of MMP-1 and MMP-2 after UV irradiation and sample addition of the bleeding heart extract obtained in Example 1.

UV 챔버를 이용하여 인간 진피 섬유아세포에 UVA를 5J/㎠의 에너지로 조사한다. 자외선 조사량과 배양시간은 예비 실험을 통하여 섬유아세포에서 MMP 발현량이 최대가 되는 조건을 확립하였다. 음성 대조군은 은박지로 싸서 UVA의 환경에 같은 시간 유지하였다. UVA 방출량은 UV 라디오미터를 이용하여 측정하였다. UVA가 조사되는 동안의 세포는 이전에 분주된 배지 그대로이고 UVA를 조사 한 후 샘플이 들어간 배지로 교환하여 24시간 배양 후 배지를 회수하여 96-웰에 코팅한다. 일차항체(MMP-1 (Ab-5) 단일클론항체와 MMP-2(Ab-3) 단일클론항체)를 처리하고 37℃에서 60분 반응시킨다. 이차항체인 안티마우스 IgG(whole mouse, alkaline phosphatase conjugated)를 다시 60분 정도 반응시킨 후, 알카린 포스파타제 기질 용액(1mg/mlρ-nitrophenyl phosphate in diethanolamine 완충용액)을 상온에서 30분간 반응시키고 마이크로플레이트 리더로 405nm에서 흡광도를 측정한다. 대조군으로는 시료를 첨가하지 않은 것을 사용한다.Human dermal fibroblasts are irradiated with UVA at an energy of 5 J / cm 2 using a UV chamber. UV irradiation dose and culture time were established through preliminary experiments to maximize the expression of MMP in fibroblasts. Negative controls were wrapped in tinfoil and maintained at the same time in the environment of UVA. UVA emission was measured using a UV radiometer. The cells during the UVA irradiation are intact in the previously dispensed medium and irradiated with UVA and then exchanged with the medium containing the sample for 24 hours of incubation, and then the medium is recovered and coated in 96-well. The primary antibody (MMP-1 (Ab-5) monoclonal antibody and MMP-2 (Ab-3) monoclonal antibody) is treated and reacted at 37 ° C. for 60 minutes. After reacting the secondary antibody anti-mouse IgG (whole mouse, alkaline phosphatase conjugated) for about 60 minutes, the alkaline phosphatase substrate solution (1mg / mlρ-nitrophenyl phosphate in diethanolamine buffer solution) was reacted at room temperature for 30 minutes and then the microplate reader was reacted. Measure the absorbance at 405 nm. As a control, the one without addition of the sample is used.

자외선 조사시에 발현이 유도되는 MMP-1과 MMP-2에 대하여 시료를 처리하지 않은 대조군에 비하여 금낭화 에탄올추출물은 90% 이상 억제율을 보였으며 이는 대조군으로 사용한 레티놀의 억제율과 유사한 결과이다.In case of UV-induced expression, the bleeding ethanol extract showed more than 90% inhibition rate compared to the control group without MMP-1 and MMP-2 expression, which is similar to the inhibition rate of retinol used as a control.

시험군Test group MMP-1 발현 억제율(%)% Inhibition of MMP-1 expression MMP-2 발현 억제율(%)% Inhibition of MMP-2 expression 대조군Control -- -- 금낭화열수 추출물 0.1%Dicentra hydrothermal extract 0.1% 5858 8383 금낭화에탄올 추출물0.1%Digestive Ethanol Extract 0.1% 9595 9191 레티놀Retinol 9696 9090

실시예 7 내지 9 및 비교예 1Examples 7 to 9 and Comparative Example 1

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 금낭화 추출물을 함유한 화장료를 제조하여 사람을 대상으로 피부 잔주름 개선 효과와 피부미용효과를 비교예 1과 비교실험을 행하여 평가하였다.In this example, the cosmetics containing the bleeding heart extract obtained in Example 1 were prepared, and the skin wrinkle improvement and skin beauty effects of humans were evaluated by comparative experiments with Comparative Example 1.

비교실험에 사용된 화장료는 크림형태이고, 그 조성은 표 9에 나타낸 바와 같다. 우선 표 9에 기록되어 있는 나)상을 가열하여 70℃에 보존한다. 이것에 가)상을 가하여 예비유화 후 호모믹서로 균일하게 유화하고 다음에 서서히 냉각하여 크림(실시예 7 내지 9, 비교예 1)을 제조한다. 실험자(20세-35세의 여성) 20명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 7 내지 9에서 제조된 크림을 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 1에서 제조된 크림을 각각 1일 2회씩 연속 3개월간 도포하였다.The cosmetics used in the comparative experiments are in the form of a cream, the composition of which is shown in Table 9. First, the phase b) recorded in Table 9 is heated and stored at 70 ° C. To this, a) phase is added, and after pre-emulsification, it is emulsified uniformly with a homomixer, and then cooled slowly to prepare a cream (Examples 7 to 9 and Comparative Example 1). For 20 experimenters (20-35 year old female), the creams prepared in Examples 7 to 9 were applied to the right side of the face and the creams prepared in Comparative Example 1 were applied twice a day for 3 consecutive months to the left side of the face. It was.

실험완료 후 피부 잔주름 완화 효과는 제품 사용 전과 3개월간 사용 후에 안면 눈꼬리 주위의 주름을 실리콘 수지 복사물(레플리카)로 채취하고, 이것을 피부 미세 주름 장치와 피부 영상 분석기로 눈가 잔주름의 상태와 색차계를 이용하여 피부색 개선 정도를 비교한다.After completion of the experiment, the skin wrinkle reduction effect is collected before and after using the product for 3 months by using a silicone resin copy (replica) around the face of the eye, and using the skin fine wrinkle device and skin image analyzer, the condition of the eye wrinkles and the color difference meter are used. Compare skin tone improvement.

원료Raw material 실시예Example 비교예Comparative example 77 88 99 end 스테아릴알콜Stearyl alcohol 88 88 88 88 스테아린산Stearic acid 22 22 22 22 스테아린콜레스테롤Stearin cholesterol 22 22 22 22 스쿠알렌Squalene 44 44 44 44 2-옥틸도데실알콜2-octyldodecyl alcohol 66 66 66 66 폴리옥시에틸렌(25몰부가)알콜에스테르Polyoxyethylene (25 mol addition) alcohol ester 33 33 33 33 글리세릴모노스테아린산아스테르Glyceryl monostearic acid ester 22 22 22 22 I 금낭화 추출물Dicentra Extract 0.10.1 1One 55 -- 프로필렌글리콜Propylene glycol 55 55 55 55 정제수Purified water 적량Quantity 적량Quantity 적량Quantity 적량Quantity

주)단위: 중량%Note) Unit: Weight%

항 목Item 감소율(%)% Reduction 비교예Comparative example 실시예 9Example 9 가장 깊은 주름 깊이(RZ, ㎜)Deepest crease depth (RZ, mm) 1.541.54 12.712.7 평균 주름 깊이(RA, ㎜)Average wrinkle depth (RA, mm) 13.613.6 21.321.3

표 10은 실시예 9에서 제조된 크림을 사용한 실험자의 눈가 평균 잔주름 깊이 및 주름 감소율을 비교예 1의 크림을 사용한 실험자와 비교한 것이다. 표 10에서 나타난 바와 같이 금낭화 추출물을 함유한 크림을 도포한 실험자의 안면 눈주위 피부에서 피부 주름 개선 효과가 우수함을 알 수 있다.Table 10 compares the average eye wrinkle depth and wrinkle reduction rate of the experimenter using the cream prepared in Example 9 with the experimenter using the cream of Comparative Example 1. As shown in Table 10, it can be seen that the skin wrinkle improvement effect is excellent in the skin around the face of the experimenter who applied the cream containing bleeding heart extract.

이하에 그 외의 실시예를 나타내었다. 즉, 실시예 1에서 수득한 금낭화 추출물을 함유한 화장수, 유액 및 미용액을 실시예 10 내지 12에서 제조하였다. 이들 금낭화 추출물을 함유한 화장수, 유액 및 미용액은 항산화 효과, 콜라겐 합성 촉진 효과, 피부 잔주름 개선 효과 등 피부개선에 우수한 효과를 나타내었다.Other examples are shown below. That is, the lotion, milky lotion and essence containing the bleeding heart extract obtained in Example 1 were prepared in Examples 10 to 12. The lotion, milky lotion and essence containing the bleeding extract showed excellent effects on skin improvement such as antioxidant effect, collagen synthesis promoting effect, and skin wrinkle improvement.

실시예 10: 실시예 1에서 수득한 금낭화 추출물을 함유한 화장수의 제조Example 10 Preparation of Lotion Containing the Digestive Extract Extracted in Example 1

95% 에탄올 8g에 폴리피로리돈 0.05g, 올레일알콜 0.1g, 폴리옥시에틸렌모노올레이트 0.2g, 향료 0.2g, 파라옥시안식향산메틸에스테르 0.1g, 소량의 산화방지제, 소량의 색소를 혼합용해 한다. 실시예 1에서 수득한 금낭화 추출물 0.05g, 글리세린 5g을 정제수 85.33g에 용해한 것에 상기 혼합액을 첨가한 후 교반하여 피부개선효과가 있는 화장수를 얻었다.To 8 g of 95% ethanol, 0.05 g of polypyrrolidone, 0.1 g of oleyl alcohol, 0.2 g of polyoxyethylene monooleate, 0.2 g of fragrance, 0.1 g of paraoxybenzoic acid methyl ester, a small amount of antioxidant, and a small amount of pigment are dissolved. . 0.05 g of the bleeding heart extract obtained in Example 1 and 5 g of glycerin were dissolved in 85.33 g of purified water, and then the mixed solution was added and stirred to obtain a lotion having a skin improvement effect.

실시예 11: 실시예 1에서 수득한 금낭화 추출물을 함유한 유액의 제조Example 11: Preparation of milky milk containing bleeding heart extract obtained in Example 1

세틸알콜 1.2g, 스쿠알란 10g, 바세린 2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.2g, 글리세린모노에스테아레이드 1g, 폴리옥시에틸렌(20몰부가)모노올레이트 1g및 향료 0.1g을 70℃에서 가열혼합용해하고, 실시예 1에서 수득한 금낭화 추출물 0.5g, 디프로필렌글리콜 5g, 폴리에틸렌글리콜-1500 2g, 트리에탄올아민 0.2g, 정제수 76.2g을 75℃로 가열해서 용해시킨다. 양자를 혼합하여 유화시킨 후 냉각하여 수중유(O/W)형의 피부개선효과가 있는 유액을 얻었다.1.2 g of cetyl alcohol, 10 g of squalane, 2 g of petrolatum, 0.2 g of paraoxybenzoic acid ethyl ester, 1 g of glycerin monoesteralide, 1 g of polyoxyethylene (20 mole added) monooleate and 0.1 g of fragrance were mixed and dissolved at 70 ° C. , 0.5 g of the bleeding heart extract obtained in Example 1, 5 g of dipropylene glycol, 2 g of polyethylene glycol-1500, 0.2 g of triethanolamine, and 76.2 g of purified water were dissolved by heating to 75 ° C. Both mixtures were emulsified and cooled to obtain an emulsion having an oil-in-water (O / W) type skin improvement effect.

실시예 12: 실시예 1에서 수득한 금낭화 추출물을 함유한 미용액의 제조Example 12 Preparation of a Cosmetic Solution Containing a Dicentra Extract Obtained in Example 1

95% 에틸알콜 5g에 폴리옥시에틸렌솔비탄모노올레이트 1.2g, 키툴로오즈 0.3g, 히야론산나트륨 0.2g, 비타민 E-아세테이트 0.2g, 감초산 나트륨 0.2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.1g, 실시예 1에서 수득한 금낭화 추출물 1g 및 적량의 색소를 혼합하여 피부개선효과가 있는 미용액을 얻었다.5 g of 95% ethyl alcohol, 1.2 g of polyoxyethylene sorbitan monooleate, 0.3 g of kitulose, 0.2 g of sodium hyaluronate, 0.2 g of vitamin E-acetate, 0.2 g of sodium licorice, 0.1 g of paraoxybenzoic acid ethyl ester, 1 g of the bleeding heart extract obtained in Example 1 and an appropriate amount of pigment were mixed to obtain a essence having a skin improvement effect.

이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명에 따른 현호색과 식물 추출물은 효소 저해제로서 기질 금속단백질 분해효소(MMP) 특히 콜라게나제(MMP-1)과 젤라티나제(MMP-2) 효소 활성을 특이적으로 저해하며, 자외선 조사에 의해 인간 피부 진피 섬유아세포에서 이러한 금낭화 추출물을 함유하는 화장수, 크림, 유액, 팩 등의 화장료 조성물은 MMP 효소 저해능과 자외선에 유도되는 MMP 발현 억제효과에 의한 항노화 효과를 가짐을 알 수 있다.As described above, the extract of the cortex and plant extract according to the present invention specifically inhibits the activity of substrate metalloproteinase (MMP), specifically collagenase (MMP-1) and gelatinase (MMP-2), as enzyme inhibitors. Cosmetic compositions such as lotion, cream, milky lotion, and packs containing such bleeding extracts in human dermal dermal fibroblasts by UV irradiation have anti-aging effects by MMP enzyme inhibitory effect and MMP expression inhibitory effect induced by UV light. It can be seen.

Claims (7)

현호색과(Fumaiaceae) 식물의 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 피부외용제 조성물.A skin external preparation composition containing an extract of an Fumaiaceae plant as a main active ingredient. 제1항에 있어서, 현호색과(Fumaiaceae) 식물은 금낭화(dicentra spectabisis)인 것을 특징으로 하는, 현호색과 식물의 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 피부외용제 조성물.The composition for external application for skin according to claim 1, wherein the Fumaiaceae plant is dicentra spectabisis. 제1항 또는 제2항에 있어서, 추출용매로서 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄 및 헥산 중에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 추출한 것을 특징으로 하는, 현호색과 식물의 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 피부외용제 조성물.The method according to claim 1 or 2, characterized in that the extraction is carried out using one or more solvents selected from purified water, methanol, ethanol, glycerin, ethyl acetate, butylene glycol, propylene glycol, dichloromethane and hexane as the extraction solvent, A composition for external application of skin, comprising an extract of the genus Cortex and a plant as its main active ingredient. 제3항에 있어서, 10-95% 에탄올을 추출용매로 사용하여 추출하는 것을 특징으로 하는, 현호색과 식물의 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 피부외용제 조성물.According to claim 3, 10-95% ethanol is used as the extraction solvent, characterized in that the skin external composition containing the extract of the genus horticulture as the main active ingredient. 제1항 또는 제2항에 있어서, 추출물은 상온에서 냉침, 가열 여과하여 얻어진 액상물, 추가로 용매를 감압농축 또는 동결건조하여 얻은 것임을 특징으로 하는,현호색과 식물의 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 피부외용제 조성물.According to claim 1 or 2, wherein the extract is a liquid obtained by cooling, heating and filtration at room temperature, further characterized in that the solvent obtained by concentrated under reduced pressure or lyophilization, containing an extract of an orange and plant as the main active ingredient Skin external preparation composition. 제1항 또는 제2항에 있어서, 현호색과 식물 추출물의 함량은 화장료 조성물 전체에 대해서 동결건조중량 기준 0.001-30.0중량%인 것을 특징으로 하는, 현호색과 식물 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 피부외용제 조성물.According to claim 1 or 2, wherein the content of Hyunho color and plant extract is 0.001-30.0% by weight based on the freeze-dried weight of the total cosmetic composition, the external skin preparation containing Hyunho color and plant extract as the main active ingredient Composition. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형의 제형 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는, 현호색과 식물 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 피부외용제 조성물.The cosmetic composition of claim 1 or 2, wherein the cosmetic composition is selected from a lotion, gel, water-soluble liquid, cream, essence, oil-in-water (O / W) type, and water-in-oil (W / O) type. To the external composition for skin containing the genus quince and plant extract as the main active ingredient.
KR10-2002-0050603A 2002-08-26 2002-08-26 A cosmetic composition containing Dicentra spectabilis extract KR100494374B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2002-0050603A KR100494374B1 (en) 2002-08-26 2002-08-26 A cosmetic composition containing Dicentra spectabilis extract

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2002-0050603A KR100494374B1 (en) 2002-08-26 2002-08-26 A cosmetic composition containing Dicentra spectabilis extract

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20040018684A true KR20040018684A (en) 2004-03-04
KR100494374B1 KR100494374B1 (en) 2005-06-10

Family

ID=37323899

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR10-2002-0050603A KR100494374B1 (en) 2002-08-26 2002-08-26 A cosmetic composition containing Dicentra spectabilis extract

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR100494374B1 (en)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100630410B1 (en) * 2005-04-18 2006-10-12 이화여자대학교 산학협력단 Topical compositions of herbal extracts for prevention and cure of acne
KR101059359B1 (en) 2008-07-14 2011-08-24 대구한의대학교산학협력단 Medicinal herb extract with enhanced efficacy, preparation method thereof and composition containing the same
WO2019190010A1 (en) * 2018-03-27 2019-10-03 동화약품주식회사 Ethanol extraction composition of citri unshius pericarpium, magnolia officinalis, corydalis remota, and acacia catechu, having effects of skin wrinkle amelioration, moisturization, antioxidation, or inflammation reduction

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100630410B1 (en) * 2005-04-18 2006-10-12 이화여자대학교 산학협력단 Topical compositions of herbal extracts for prevention and cure of acne
KR101059359B1 (en) 2008-07-14 2011-08-24 대구한의대학교산학협력단 Medicinal herb extract with enhanced efficacy, preparation method thereof and composition containing the same
WO2019190010A1 (en) * 2018-03-27 2019-10-03 동화약품주식회사 Ethanol extraction composition of citri unshius pericarpium, magnolia officinalis, corydalis remota, and acacia catechu, having effects of skin wrinkle amelioration, moisturization, antioxidation, or inflammation reduction
KR20190113169A (en) * 2018-03-27 2019-10-08 동화약품주식회사 An ethanol extract composition of Citrus Unshiu Peel, Magnolia Bark, Corydalis and Gambir with improved skin wrinkles, moisturizing, antioxidant and anti-inflammatory effects

Also Published As

Publication number Publication date
KR100494374B1 (en) 2005-06-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US7470438B1 (en) Ericacea extracts for combating skin aging
KR101081914B1 (en) Skin-care agent containing oriental-herb extracts
KR102304419B1 (en) Multifunctional cosmetic composition that contains amino acids and peptides derived from Moringa seeds, effective for skin moisturizing, skin whitening, maintaining and improving skin elasticity, and preventing skin wrinkles
KR100728813B1 (en) Cosmetic composition containing extract of cirsium setidens
JP6437342B2 (en) A skin external preparation or an internal preparation containing an extract of echinacea cultivated by irradiating light having a specific wavelength range.
JP4577868B2 (en) Matrix metalloprotease activity inhibitor
KR102063686B1 (en) Skin external composition containing extract of soybean root
KR101180258B1 (en) A skin-care agent containing Ophioglossum vulgatum extracts using microbial fermentation
JP6437297B2 (en) Skin external preparation or internal preparation containing an extract of sage grown by irradiating with light having a specific wavelength range
KR100985143B1 (en) Cosmetic composition comprising minerals complex components for improving wrinkle
KR100563548B1 (en) A cosmetic composition containing an extract of sorbus commixta
KR100561036B1 (en) Skin external preparation composition containing the extract of Seol and Kwonbaek as an active ingredient
KR100494374B1 (en) A cosmetic composition containing Dicentra spectabilis extract
KR101724526B1 (en) Cosmetic Composition Containing Fermentative Extract of Chenopodium quinoa Willd as Active Ingredient
KR100732563B1 (en) Cosmetic composition containing extract of pterocarpus santalinus
CN103610634A (en) Skin externally-applied composition
JP6586691B2 (en) Skin external preparation or internal preparation containing an extract of chervil grown by irradiating light having a specific wavelength range
JP2001354582A (en) Protease inhibitor
KR20140081137A (en) A skin-care agent containig Morchella esculenta fruit body extract or Morchella esculenta mycelium extract
JP2001181129A (en) Collagenase activity inhibitor
KR100416400B1 (en) Composition containing extracts from dried roots of Trichosantes kirilowii maxim for external application and skin-whitening and process for preparation thereof
KR100728810B1 (en) Cosmetic composition containing extract of pimpinella brachycarpa
KR20070109426A (en) A cosmetic composition containing an extract of typhae pollen
JPH0987135A (en) Dermal preparation for external use
KR101081918B1 (en) Cosemtics composition Containing the extract of the germinated Astragalus Root Seed as active ingredient

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20130530

Year of fee payment: 9

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20140521

Year of fee payment: 10

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20150529

Year of fee payment: 11

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20170504

Year of fee payment: 13