KR20030085771A - 미나리 추출물을 함유하는 미백조성물 - Google Patents

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KR20030085771A
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Abstract

본 발명은 미나리 추출물을 함유하는 미백조성물에 관한 것으로, 좀더 상세하게는 천연 미백소재인 미나리의 냉동건조 분말, 열수 추출물 또는 에탄올 추출물을 함유하는 미백조성물에 관한 것이다.
본 발명은 유효성분으로 미나리의 동결건조 추출물, 열수 추출물 및 에탄올 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 또는 2종 이상의 미나리 추출물을 0.01-10 중량% 함유하는 미백조성물을 제공한다.

Description

미나리 추출물을 함유하는 미백조성물{A composition for whitening containing dropwort extract}
본 발명은 미나리 추출물을 함유하는 미백조성물에 관한 것으로, 좀더 상세하게는 천연 미백소재인 미나리의 냉동건조 분말, 열수 추출물 또는 에탄올 추출물을 함유하는 미백조성물에 관한 것이다.
미나리(Oenanthe javanicaDc.)는 주로 한국, 일본, 중국, 타이완, 말에이시아, 일본 등지의 습지에서 서식하는 크기가 20∼50cm인 미나리과의 여러해살이 풀로서 그 전초에 플라보노이드(flavonods), 콜린(cholin) 정유가 포함되어 있고, 퀴놀린(quinoline)계의 알칼로이드(alkaloid)로 루타민(rutamin)과 r-파가린(r-pagarin), 쿠마린(cumarin) 등도 함유하고 있다.
인체의 피부색은 햇빛을 받으면 검게 변하게 되는데, 이러한 원인은 검은 색소의 일종인 멜라닌(melanin)이 인체에 형성되기 때문으로, 멜라닌은 동물, 식물 및 미생물에 널리 존재하는 페놀류(phenols)의 고분자 물질로서 검은 색소와 단백질로 이루어져 있다.
멜라닌은 멜라닌 형성세포 내의 타이로신(tyrosine)을 기질로 하여 타이로시나제(tyrosinase)가 작용하여 도파퀴논(dopaquinone)이 생성되고 이 도파퀴논이 산화반응 및 효소반응을 거쳐 합성된다.
따라서, 인체 피부에 멜라닌의 합성을 억제하기 위해서는 타이로시나제의 활성을 억제시키거나, 멜라닌 생성과정 중의 일부반응을 억제하는 효과가 있는 물질이 필요한데, 타이로시나제 저해제(tyrosinase inhibitor)로 아스코빈산(ascorbic acid), 코티코스테로이드(corticosteroids), 레티노이드(retinoids) 아제락산 (azelaic acid), 하이드로퀴논(hydroquinone), 하이드록시아니솔 (hydroxyanisole), 코지산(kojic acid), 아부틴(arbutin) 등이 있으나, 이러한 화학합성 물질은 안전성, 안정성 및 장기보관시 변색, 변취 등과 같은 문제점이 있다.
상기와 같은 문제점을 극복하기 위하여 천연물질인 식물의 추출물을 미백성분으로 활용하기 위한 연구가 지속적으로 이루어져 왔는데, 이와 관련한 공지기술로는 상백피의 성분을 이용한 미백화장료(한국공개특허 제92-2109호, 일본공개특허 소화 제 55-44375호, 일본공개특허 소화 제64-26507호, 일본공개특허 소화 제64-83009호, 일본공개특허 평성 제1-256587호), 감초의 성분을 이용한 미백화장료(한국공개특허 제92-2109호, 일본공개특허 소화 제60-214721호, 일본공개특허 소화 제63-23809호, 일본공개특허 평성 제1-149706호) 등이 개시되어 있다.
또한, 작약의 성분을 이용한 미백화장료(일본공개특허 소화 제61-246109호), 계피의 성분을 이용한 미백화장료(일본공개특허 소화 제63-30403호), 치자열매 추출물을 이용한 미백조성물(한국공개특허 제2002-4896호), 유근피 추출물을 함유하는 항노화 화장품 조성물(한국공개특허 제2002-4896호), 천련자 추출물을 함유하는 미백용 조성물(한국공개특허 제2001-93861호), 파고지 추출물을 함유하는 미백용 조성물(한국공개특허 제2001-93859호) 및 오수유 추출물을 함유하는 미백용 조성물(한국공개특허 제2001-93860호) 등이 개시되어 있다.
상기와 같은 다수의 식물추출물이 타이로시나제에 작용하여 멜라닌의 합성을 억제한다는 사실이 밝혀졌으나, 이와 같은 천연성분도 강한 저해활성을 유지하면서 안전성, 안정성 및 변색 가능성 등의 문제를 완전히 해결하기에는 미흡한 실정이다.
이에 본 발명자들은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위한 연구를 수행하여 천연소재인 미나리 추출물을 이용하여 안정성을 유지하면서 멜라닌세포의 증식억제및 멜라닌의 생성에 관여하는 타이로시나제의 활성을 억제하여 멜라닌의 생성량을 감소시킬 수 있는 미백조성물을 제조할 수 있음을 알아내고 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 미나리 추출물을 유효성분으로 함유하는 새로운 미백조성물을 제공함에 있다.
도 1 은 본 발명에 의한 미나리추출물의 멜라닌세포 증식억제 효과,
도 2 는 본 발명에 의한 미나리추출물의 도파 옥시다제 활성 억제효과,
도 3 은 본 발명에 의한 미나리추출물의 멜라닌생성 억제효과,
도 4 는 본 발명에 의한 미나리 에탄올추출물 1000㎍/㎖ 처리 3일 후 B16 멜라노마 세포의 형태를 나타낸 것이다.
민간에서는 미나리의 전초를 염증약으로 사용하여 왔는데, 미나리의 독특한 향내는 미나리에 함유되어 있는 정유(精油) 때문으로서, 정유의 주성분은 이소람네틴, 페르시카린, 알파피넨, 미르센 등인 것으로 알려져 있다(문관심, 약초의 성분과 이용, 일월서각, 1999).
그 외에도 비타민 E, 유제닐 베타-D-글루코피라노사이드(eugenyl beta-D-glucopyranoside), 피노레시놀 베타-D-글루코피라노사이드(pinoresinol beta-D-glucopyranoside), 오에난쏘사이드 A(oenanthoside A), 2.3-메틸렌디옥시-5-알릴페닐 베타-D-글루코피라노사이드(2,3-methylenedioxy-5-allylphenylbeta-D-glucopy ranoside) 등과 같은 항산화 성분을 함유하고 있다.
민간에서의 미나리의 기능은 열을 식혀주고 가슴이 답답하고 입이 마른 것을 치료하며 황달을 치료하고 소변을 잘 보게 하는 것으로 알려져 있는데, 미나리에 관한 연구로서는 간지질 과산화 억제 작용과 부정맥 치료에 효과가 있다는 결과들이 보고되고 있다(Park J.C. et al.,Protective effect of Oenanthe javanica on the hepatic lipid peroxidation in bromobenzene-treated rats and its bioactivecomponent.,Planta Med 1996 Dec;62(6):488-90 ; Ji G. et al., Antiarrhythmic effect of Oenanthe javanica (Bl.) DC. InjectionZhongguo Zhong Yao Za Zhi. 1990 Jul;15(7):429-31, 448).
또한, 미나리의 에센셜 오일(essential oil)은 항균효과를 가지고 있고, 플라본(flavone)은 정상쥐와 당뇨쥐의 인슐린 분비를 촉진시키는 효과를 가지고 있다는 연구결과도 보고된 바 있다(Sharma S.K. et al., In vitro antibacterial effect of the essential oil of Oenanthe javanica (Blume) DC.Indian J Med Res. 1980 Jan;71:149-51. ; Yang X.B. et al., Antidiabetic effect of Oenanthe javanica flavoneActa Pharmacol Sin. 2000 Mar;21(3):239-42.).
본 발명에 의한 미백조성물에는 미나리의 동결건조 추출물, 미나리의 열수 추출물 및 미나리의 에탄올 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 또는 2종 이상의 미나리추출물이 사용된다.
본 발명에 사용되는 미나리의 동결건조 추출물(crude extracts)은 믹서 또는 균질기(homogenizer)에 넣어 잘게 간 미나리를 냉동고(deep freezer)에서 오버나잇(overnight)시킨 후 냉동건조기(freeze dryer)로 2-3일 동안 완전히 건조시켜 제조한다.
본 발명에 사용되는 미나리의 열수추출물(water soluble extracts)은 완전히 건조된 미나리에 증류수를 첨가하고 열수중탕으로 4-6시간 추출하여 여과한 추출물을 냉동고에서 오버나잇시킨 후, 냉동건조기에서 2-3일 동안 건조시켜 제조한다.
또한, 본 발명에 사용되는 미나리의 에탄올 추출물(ethanol solubleextracts)은 완전히 건조된 미나리에 에탄올을 첨가하고 45-55℃에서 4-6시간 추출하여 여과한 추출물을 냉동고에서 오버나잇시킨 후 냉동건조기에서 2-3일 동안 완전히 건조시켜 제조한다.
본 발명에서는 세포증식 실험, 타이로시나제 활성실험, 멜라닌양 측정실험 등을 통해 상기에서 제조한 미나리추출물이 멜라닌세포에 미치는 영향을 검증하였는데, 본 발명에 사용된 미나리추출물이 멜라닌세포의 증식을 억제하고, 멜라닌의 생성에 관여하는 티로시나제의 활성을 억제시킬 뿐만 아니라 멜라닌양을 감소시킴을 관찰함으로써 미백효과가 있음을 확인할 수 있었다.
본 발명에 의한 미백조성물은 상기의 미나리추출물을 0.01-10 중량%, 바람직하게는 0.01-5 중량% 함유하는데, 미나리추출물을 0.01 중량% 이하를 함유하면 미백효과가 없고, 10 중량% 이상을 함유하면 안전성 또는 제형상의 조제에 문제가 생길 수 있기 때문이다.
본 발명에 의한 미백조성물은 화장용 크림, 화장수, 화장용 유액, 미용수 등과 같은 화장료나 액상 및 고상의 비누 또는 시럽제, 연고, 크림제제, 전제, 틴크제, 엑기스제, 한방제제, 침제, 전제 등과 같은 내복 또는 외용의 제제로 조제될 수 있는데, 미백효과를 증진시키기 위하여 피부흡수 촉진물질을 함유할 수 있다.
이하 본 발명을 실시예 및 시험예를 통하여 보다 상세히 설명한다. 그러나 본 발명의 기술적 범위가 이들 실시예 및 시험예에 국한되는 것은 아니다.
<실시예 1> (미나리 동결건조 추출물의 제조)
물에 씻어 깨끗하게 준비된 미나리 1kg을 균질기에 넣어 고르게 균질화한 후, -70℃의 냉동고에서 하룻밤 동안 오버나잇시킨 다음 감압하에서 -50℃ 조건의 냉동건조기에서 3일 동안 완전히 건조시켜 미나리 동결건조 추출물 14.072g을 제조하였다.
<실시예 2> (미나리 열수추출물의 제조)
실시예 1에서 제조한 완전히 건조된 미나리 동결건조 추출물 5g에 100ml의 증류수를 첨가하고 80℃에서 열수중탕으로 5시간 동안 추출하였다.
상기에서 얻은 추출물을 화트만(Whatman) No.2 여과지로 여과한 추출물을 -70℃의 냉동고에서 하룻밤 동안 오버나잇시킨 다음, 감압하에서 -50℃ 조건의 냉동건조기에서 3일 동안 완전히 건조시켜 미나리 열수추출물 10.3mg (2.062g/미나리1kg)을 제조하였다.
<실시예 3> (미나리 에탄올 추출물의 제조)
실시예 1에서 제조한 완전히 건조된 미나리 동결건조 추출물 5g에 100ml의 70% 에탄올을 첨가하고 50℃에서 5시간 동안 추출하였다.
상기에서 얻은 추출물을 광목으로 여과한 추출물을 -70℃의 냉동고에서 하룻밤 동안 오버나잇시킨 다음, 감압하에서 -50℃ 조건의 냉동건조기에서 3일 동안 완전히 건조시켜 미나리 에탄올추출물 15.7mg (3.146g/미나리 1kg)을 제조하였다.
<실시예 4> (미나리추출물을 함유하는 영양화장수의 제조)
실시예 2에서 제조한 미나리 열수추출물 5 중량부, 밀납 5 중량부, 폴리솔베이트 60 1 중량부, 솔비탄세스퀴올레이드 0.5 중량부, 유동파라핀 3 중량부, 스쿠알란 3 중량부, 카프릭트리글리세라이드 3 중량부, 글리세린 2.5 중량부, 부틸렌글리콜 2.5 중량부, 프로필렌글리콜 2.5 중량부, 카르복시비닐폴리머 0.1 중량부, 트리에탄올 아민 0.1 중량부와 적량의 방부제, 색소, 향료 및 정제수를 이용하여 통상의 방법으로 영양화장수를 제조하였다.
<실시예 5> (미나리추출물을 함유하는 크림의 제조)
실시예 3에서 제조한 미나리 에탄올추출물 10중량부, 스테아릴 알콜 8 중량부, 스테아린산 2 중량부, 스테아린산 콜레스테롤 2 중량부, 스쿠알란 4 중량부, 2-옥틸도데실알콜 6 중량부, 폴리옥시에틸렌알콜 에스테르 3중량부, 글리세릴 모노스테아린산 에스텔 2 중량부, 프로필렌글리콜 5 중량부 및 정제수를 이용하여 통상의 방법으로 크림을 제조하였다.
<시험예 1> (B16 멜라노마 세포배양)
본 발명에 의한 미백조성물에 사용된 미나리 추출물의 세포증식, 타이로시나제 활성 및 멜라닌양 측정에 이용되는 B16 멜라노마 세포(B16 melanoma cell)를 RPMI1640 기본배지에 10% 소태아혈청(fetal bovine serum), 1% 페니실닌-스트렙토마이신(penicillin-streptomycin)을 첨가한 배지로 37℃, 5% CO2의 조건에서 배양하였는데, 배양중의 배지는 3일에 한번씩 갈아주었다.
<시험예 2> (세포증식 억제효과 측정)
본 발명에 의한 미백조성물에 사용된 미나리추출물의 멜라닌 세포증식 억제효과를 알아보기 위하여 실시예 1 내지 실시예 3에서 제조한 미나리 동결건조 추출물(CE), 미나리 열수추출물(WE) 및 미나리 에탄올 추출물(EE)을 처리한 B16 멜라노마 세포의 증식율을 측정한 결과를 표 1 및 도 1에 나타내었다.
세포증식율은 다음과 같은 방법으로 측정하였다.
우선 60mm 배양접시(culture dish)에 2X104/접시 농도로 배양하여 세포부착을 확인한 B16 멜라노마 세포에 CE, WE 및 EE를 각각 10 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖, 1000 ㎍/㎖의 농도로 처리하고, 3일째 되는 날 0.25% 트립신-이디티에이 용액(Trypsin-EDTA solution)을 처리하여 세포를 수확하였다.
수확된 세포진탕액 중 500㎕를 떠서 이소톤용액(isotone solution) 10 ㎖과 균일하게 혼합한 후 카울터 계수기(coulter counter ; ZM, Coulter Co., England)로 세포수를 세었는데, 총세포수의 계산은 다음과 같이 하였다.
총세포수 = 카울터 계수기가 센 세포수 X 42 X (세포 진탕액양/ ㎖)
<표 1> 세포증식율
구 분 농 도
10 ㎍/㎖ 100 ㎍/㎖ 1000 ㎍/㎖
CE 91% 90% 65%
WE 97% 92% 68%
EE 93% 89% 66%
상기 표 1 및 도 1에서 보는 바와 같이, 미나리추출물 10 ㎍/㎖ 및 100 ㎍/㎖ 처리구에서는 멜라닌세포 증식억제율이 낮으나, 1000 ㎍/㎖ 처리구에서는 동결건조 추출물(CE), 미나리 열수추출물(WE) 및 미나리 에탄올 추출물(EE) 모두 멜라닌세포 증식억제율이 높음을 알 수 있다.
<시험예 3> (도파 옥시다제 활성 억제효과 측정)
본 발명에 의한 미백조성물에 사용된 미나리추출물의 미백효과를 알아보기 위하여 실시예 1 내지 실시예 3에서 제조한 미나리 동결건조 추출물(CE), 미나리 열수추출물(WE) 및 미나리 에탄올 추출물(EE) 처리에 의한 멜라닌 생성과정 중 도파에서 도파퀴논으로 전환될 때 관여하는 도파 옥시다제(dopa-oxidase)의 활성억제율을 측정한 결과를 표 2 및 도 2에 나타내었다.
도파 옥시다제의 활성억제율은 다음과 같은 방법으로 측정하였다.
우선 60mm 배양접시(culture dish)에 2X104/접시 농도로 배양하여 세포부착을 확인한 B16 멜라노마 세포에 CE, WE 및 EE를 각각 10 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖, 1000 ㎍/㎖의 농도로 처리하고, 3일째 되는 날 0.25% 트립신-이디티에이 용액(Trypsin-EDTA solution)을 처리하여 세포를 수확하여 카울터 계수기로 세포수를 세었다.
그런 다음 처리군당 2X105세포를 1.7ml 튜브에 각각 나누어 담고 여기에 1mM L-도파(Sigma Chemical Co., St, Louis, Missouri)가 함유된 세포분쇄용액 100㎕를 첨가하고 1시간 동안 37℃에서 반응시킨 후 분광광도계로 490nm에서 흡광도를 측정하였다.
<표 2> 도파 옥시다제 활성
구 분 농 도
10 ㎍/㎖ 100 ㎍/㎖ 1000 ㎍/㎖
CE 93% 73% 39%
WE 98% 76% 42%
EE 93% 68% 36%
상기 표 2 및 도 2에서 보는 바와 같이, 미나리추출물 10 ㎍/㎖ 및 100 ㎍/㎖ 처리구에서는 도파 옥시다제의 활성억제율이 낮으나, 1000 ㎍/㎖ 처리구에서는 동결건조 추출물(CE), 미나리 열수추출물(WE) 및 미나리 에탄올 추출물(EE) 모두 도파 옥시다제 활성억제율이 높음을 알 수 있다.
<시험예 4> (멜라닌 생성량 측정)
본 발명에 의한 미백조성물에 사용된 미나리추출물의 미백효과를 알아보기 위하여 실시예 1 내지 실시예 3에서 제조한 미나리 동결건조 추출물(CE), 미나리 열수추출물(WE) 및 미나리 에탄올 추출물(EE) 처리에 의한 멜라닌 생성량을 측정한결과를 표 3 및 도 3에 나타내었다.
멜라닌 생성량은 다음과 같은 방법으로 측정하였다.
우선 60mm 배양접시(culture dish)에 2X104/접시 농도로 배양하여 세포부착을 확인한 B16 멜라노마 세포에 CE, WE 및 EE를 각각 10 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖, 1000 ㎍/㎖의 농도로 처리하고, 3일째 되는 날 0.25% 트립신-이디티에이 용액(Trypsin-EDTA solution)을 처리하여 세포를 수확하여 카울터 계수기로 세포수를 세었다.
그런 다음 각 처리군별로 2X105세포수 당 100㎕의 1N NaOH 용액을 넣고 37℃에서 12시간 동안 세포를 용해시킨 후, 완전히 용해된 샘플의 흡광도를 측정하기 전에 합성멜라닌(Sigma. Chemical Co., St, Louis, Misso) 10mg을 1N NaOH 10㎖에 용해시켜 스탁용액(stock solution) 1mg/㎖을 제조한 뒤 700g/㎖, 300g/㎖, 100g/㎖, 70g/㎖, 30g/㎖, 10g/㎖, 7g/㎖, 3g/㎖, 1g/㎖, 0.1g/㎖ 및 0g/㎖ 농도로 희석하여 표준용액(standard solution)을 제조하였다.
샘플과 표준용액을 96 웰검정판(well assy plate)에 넣고 490nm에서 분광광도계로 흡광도를 측정한 다음, 측정된 흡광도값을 합성 멜라닌으로 작성된 표준직선에 적용하여 멜라닌량으로 환산하였다.
<표 3> 멜라닌 생성량
구 분 농 도
10 ㎍/㎖ 100 ㎍/㎖ 1000 ㎍/㎖
CE 97% 63% 35%
WE 95% 68% 40%
EE 93% 68% 36%
상기 표 3 및 도 3에서 보는 바와 같이, 미나리추출물 10 ㎍/㎖ 및 100 ㎍/㎖ 처리구에서는 멜라닌 생성억제율이 낮으나, 1000 ㎍/㎖ 처리구에서는 동결건조 추출물(CE), 미나리 열수추출물(WE) 및 미나리 에탄올 추출물(EE) 모두 멜라닌 생성억제율이 높음을 알 수 있다.
<시험예 5> (안정성 시험)
본 발명에 의한 미나리추출물을 함유하는 미백조성물의 안정성을 시험하기 위하여 실시예 4에서 제조한 영양화장수 및 실시예 5에서 제조한 크림을 4℃, 상온(25℃), 40℃ 및 50℃에서 3개월 동안 방치시킨 후, 각 조성물의 안정성을 관찰한 결과를 표 4에 나타내었다.
<표 4>. 안정성 시험결과
구 분 보 관 온 도 (℃)
4 25 40 50
실시예 4 안정 안정 안정 안정
실시예 5 안정 안정 안정 안정
상기 표 4에서 보는 바와 같이, 본 발명에 의한 미백조성물은 장시간 경과 후에도 안정성을 유지함을 알 수 있다.
본 발명에 의한 미백조성물은 천연소재인 미나리추출물을 함유하고 있어 멜라닌세포의 증식억제 및 멜라닌의 생성에 관여하는 타이로시나제의 활성을 억제하여 멜라닌의 생성량을 감소시킴으로써 미백효과를 갖음과 동시에 장시간 보관시에도 안정성을 유지할 수 있다.

Claims (3)

  1. 미나리 추출물을 유효성분으로 함유하는 미백조성물
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 조성물은 미나리 추출물을 0.01- 10 중량% 함유함을 특징으로 하는 미백조성물
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 미나리 추출물은 미나리의 동결건조 추출물, 미나리의 열수 추출물 및 미나리의 에탄올 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 또는 2종 이상임을 특징으로 하는 미백조성물
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