KR20030019623A

KR20030019623A - 암질환 치료제

Info

Publication number: KR20030019623A
Application number: KR10-2003-7001194A
Authority: KR
Inventors: 도시히로 노구찌; 아께미 바바; 미쯔하루 하나다
Original assignee: 스미또모 세이야꾸 가부시키가이샤
Priority date: 2000-07-28
Filing date: 2001-07-26
Publication date: 2003-03-06
Also published as: CN101732333B; CN101732333A; TWI317285B; EP1308168A4; EP1308168B1; WO2002009754A1; AU2001276689A1; ES2307633T3; US20030157097A1; CA2417255A1; US7449181B2; DE60134324D1; JP5117660B2; US7879327B2; CN100581585C; CA2417255C; DK1308168T3; US20110104160A1; ATE397458T1; CN1466464A

Abstract

본 발명은 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 유효 성분으로 하는 항HER2 항체와의 병용 요법용 암질환 치료제에 관한 것이다.

Description

암질환 치료제 {Novel Remedies for Cancer}

안트라시클린(Anthracycline)계 화합물인 암루비신((+)-(7S, 9S)-9-아세틸 -9-아미노-7-[(2-데옥시-β-D-에리트로-펜토피라노실)옥시]-7,8,9,10-테트라히드로-6,11-디히드록시-5,12-나프타센디온)은 기존의 안트라시클린계 화합물인 독소루비신(doxorubicin)이나 다우노루비신(daunorubicin)과 비교하여 부작용이 적은 항암제로서 알려져 있다 (일본 특허 공개 (평)3-5397호).

암루비신의 특징은 생체 내에서 쉽게 환원되어 얻어지는 대사체(암루비시놀: 안트라시클린 골격의 13위치의 수산화체)가 암루비신보다 항암활성이 강하다는 점이다. 한편, 독소루비신이나 다우노루비신에서는 그러한 특징은 없다 (Cancer Chemother, Pharmacol., 30, 51-57(1992)). 또한, 암루비신의 심독성은 토끼 만성 실험 모델에 있어서 독소루비신보다 훨씬 약한 것이었다 (Invest. New Drug, 15, 219-225(1997)).

안트라시클린계 항암제는 구조는 유사하지만, 이하와 같이 그 적응증이나 작용 메카니즘 등이 상이하다는 것이 알려져 있다.

다우노루비신 및 이다루비신(idarubicin)은 백혈병에 대한 효능은 있지만, 고형암에 대한 효능은 없다. 독소루비신, 에피루비신(epirubicin), 피라루비신 (pirarubicine) 및 아클라루비신(aclarubicin)은 고형암에 대한 효능을 갖고 있다 (일본 의약품집 제23판 2000, 약업시보사). 다우노루비신이나 독소루비신은 DNA 합성과 RNA 합성을 동일한 정도로 저해하지만, 아클라루비신이나 마루셀로마이신에서는 DNA 합성보다 RNA 합성을 강하게 저해하여 항종양 효과의 발현 메카니즘이 전혀 상이하다 (JJSHP 27, 1087-1110,(1991)). 다우노루비신, 독소루비신은 13위치 케톤이 환원되면 세포 증식 억제 작용이 감소되지만, 이다루비신에서는 환원체도 동일한 정도의 작용을 나타낸다 (Cancer Chemother. Pharmcol. 30, 51-57, (1992)). 한편, 암루비신에서는 환원체가 강한 작용을 나타낸다 (Jpn, J. cancer Res. 89, 1067-1073, (1998)). 독소루비신의 정맥내 투여에서는 종양 선택성을 얻을 수 없지만, 암루비신의 정맥내 투여에서는 종양 선택성을 얻을 수 있는 것이 마우스 실험계에서 발견되었다 (Jpn, J. Cancer Res, 89, 1061-1066, (1998)). 독소루비신의 삽입 활성은 암루비신 및 암루비시놀의 약 10배 강한 활성이다 (Jpn. J. Cancer Res. 89, 1229-1238, (1998)). 독소루비신이나 다우노루비신은 세포핵에 많이 분포하지만, 암루비신이나 이다루비신은 세포질에 많이 분포한다 (Ann. Haematol. 69, S13-S17, (1994), Jpn, J. Cancer Res. 89. 1229-1238, (1998), Urol. Res. 25, 125-130, (1997)). 암루비신이나 암루비시놀에서는 세포의 증식을 5O % 억제하는 농도로 토포이소메라제II(Topoisomerase II)를 개재한 분해성 복합물(Cleavable Complex)을 충분히 안정화시키지만, 독소루비신에서는 세포 증식을50 % 억제하는 농도에서는 분해성 복합물을 안정화시키지 못한다 (Jpn. J. Cancer Res. 89, 1229-1238, (1998)).

이와 같이 동일한 안트라시클린계 화합물이라도 그 작용 메카니즘은 크게 상이하며 적응증도 상이하다. 그 중에서도 독소루비신과 암루비신, 암루비시놀은 화학 구조적으로는 매우 가까운 것이기는 하지만, 항암 작용의 작용 메카니즘은 크게 상이하다.

최근들어 안트라시클린계 화합물인 독소루비신과 허셉틴^TM의 병용에 따른 항암 작용이 보고되었으며, 시험관내 실험에서 독소루비신과 허셉틴^TM의 병용에 의해 상보적인 효과를 나타내는 것이 확인되었다 (M. Pegram et al., Oncogene, 18, 2241-2251(1999)). 그러나, 독소루비신과 허셉틴^TM을 병용하면, 임상에서는 심독성이 높은 빈도로 발현되는 것도 보고되어 있기 때문에 (제넨테크(Genentech)사 인터넷 홈 페이지), 병용 치료가 반드시 유효한 것이라고는 볼 수 없다. 허셉틴^TM이란 인간 상피 세포 성장 인자 수용체 2 단백질 (human epidermal growth factor receptor 2 protein, 이하 HER2)의 항체 중 하나이며, 유방암의 치료제로서 사용되고 있다.

본 발명은 암루비신(amrubicin) 또는 그의 약학상 허용되는 염을 유효 성분으로 하는 항HER2 항체와의 병용 요법용 암질환 치료제에 관한 것이다.

본 발명의 목적은 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염 및 항HER2 항체 (예를 들면, 허셉틴^TM)를 병용함으로써 암질환 치료제를 제공하는 것이다.

본 발명자는 암루비신의 항암 작용의 향상을 목표로서 여러가지 약제와의 병용 효과에 대하여 검토해 왔는데, 허셉틴^TM과 병용함으로써 소기의 목적을 달성할 수 있었다. 즉, 암루비신과 허셉틴^TM을 병용함으로써 암세포주에 대한 상승적인 효과와 함께 심독성에 대한 영향이 적은 것을 발견하고, 본 발명을 완성하였다. 본 발명 및 독소루비신과 허셉틴^TM의 병용 요법을 비교하면 상술한 바와 같이 독소루비신에 대해서는 상보적인 효과밖에 확인되지 않았지만, 본 발명에 있어서는 상승적인 효과가 확인되었다. 또한, 독소루비신은 허셉틴^TM과의 병용에 의해 높은 빈도로 심독성이 확인되어 임상으로의 적용은 곤란하였지만, 본 발명에 있어서는 심독성에 대한 영향이 적어 새로운 암질환 치료제로서 기대되었다. 본 발명과 독소루비신의 이들 효과의 차이는 암루비신과 독소루비신의 작용 메카니즘의 차이가 반영되었기 때문이라고 생각된다.

본 발명의 요지는 이하와 같다.

(1) 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 유효 성분으로 하는 항HER2항체와의 병용 요법용 암질환 치료제.

(2) 상기 (1)에 있어서, 암질환이 유방암, 위암, 신장암, 타액선암, 난소암, 자궁체암 또는 폐암인 치료제.

(3) 상기 (1) 또는 (2)에 있어서, 암질환이 HER2 고발현의 암질환인 치료제.

(4) 상기 (1) 내지 (3) 중 어느 한 항에 있어서, 항HER2 항체를 0.1 내지4.5 mg/kg/일 투여하는 경우, 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 0.5 내지 3.0 mg/kg/일 투여하기 위한 치료제.

(5) 상기 (4)에 있어서, 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 3주일마다 3일간 연일 투여하고, 항HER2 항체를 1주일마다 투여하기 위한 치료제.

(6) 상기 (1) 내지 (3) 중 어느 한 항에 있어서, 항HER2 항체를 0.1 내지 4.5 mg/kg/일 투여하는 경우, 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 1.5 내지 9.0 mg/kg/일 투여하기 위한 치료제.

(7) 상기 (6)에 있어서, 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 3주일마다 투여하고, 항HER2 항체를 1주일마다 투여하기 위한 치료제.

(8) 상기 (1) 내지 (7) 중 어느 한 항에 있어서, 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염과 항HER2 항체의 용량비가 양자의 투여 개시 1주일만에 2:1 내지 8:1인 것을 특징으로 하는 치료제.

(9) 항HER2 항체와 병용 투여되는 암질환 치료제의 제조를 위한 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염의 용도.

(10) 상기 (9)에 있어서, 암질환이 유방암, 위암, 신장암, 타액선암, 난소암, 자궁체암 또는 폐암인 용도.

(11) 상기 (9) 또는 (10)에 있어서, 암질환이 HER2 고발현의 암질환인 용도.

(12) 상기 (9) 내지 (11) 중 어느 한 항에 있어서, 항HER2 항체를 0.1 내지 4.5 mg/kg/일 투여하는 경우, 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 0.5 내지 3.0 mg/kg/일 투여하기 위한 용도.

(13) 상기 (12)에 있어서, 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 3주일마다 3일간 연일 투여하고, 항HER2 항체를 1주일마다 투여하기 위한 용도.

(14) 상기 (9) 내지 (11) 중 어느 한 항에 있어서, 항HER2 항체를 0.1 내지 4.5 mg/kg/일 투여하는 경우, 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 1.5 내지 9.0 mg/kg/일 투여하기 위한 용도.

(15) 상기 (14)에 있어서, 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 3주일마다 투여하고, 항HER2 항체를 1주일마다 투여하기 위한 용도.

(16) 상기 (9) 내지 (15) 중 어느 한 항에 있어서, 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염과 항HER2 항체의 용량비가 양자의 투여 개시 1주일만에 2:1 내지 8:1인 것을 특징으로 하는 용도.

(17) 유효량의 항HER2 항체와 유효량의 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 병용하는 것을 특징으로 하는 암질환의 치료 방법.

(18) 상기 (17)에 있어서, 암질환이 유방암, 위암, 신장암, 타액선암, 난소암, 자궁체암 또는 폐암인 치료 방법.

(19) 상기 (17) 또는 (18)에 있어서, 암질환이 HER2 고발현의 암질환인 치료 방법.

(20) 상기 (17) 내지 (19) 중 어느 한 항에 있어서, 항HER2 항체를 0.1 내지 4.5 mg/kg/일 투여하고, 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 0.5 내지 3.0 mg/kg/일 투여하는 것을 특징으로 하는 치료 방법.

(21) 상기 (20)에 있어서, 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 3주일마다 3일간 연일 투여하고, 항HER2 항체를 1주일마다 투여하는 것을 포함하는 치료 방법

(22) 상기 (17) 내지 (19) 중 어느 한 항에 있어서, 항HER2 항체를 0.1 내지 4.5 mg/kg/일 투여하고, 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 1.5 내지 9.0 mg/kg/일 투여하는 것을 특징으로 하는 치료 방법.

(23) 상기 (22)에 있어서, 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 3주일마다 투여하고, 항HER2 항체를 1주일마다 투여하는 것을 포함하는 치료 방법.

(24) 상기 (17) 내지 (23) 중 어느 한 항에 있어서, 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염과 항HER2 항체의 용량비가 양자의 투여 개시 1주일만에 2:1 내지 8:1인 것을 특징으로 하는 치료 방법.

(25) 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는 제1 조성물 및 항HER2 항체를 포함하는 제2 조성물을 함유하는 암질환 치료용 키트.

(26) 상기 (1) 내지 (25) 중 어느 한 항에 있어서, 항HER2 항체로서 허셉틴을 사용하는 치료제, 용도, 방법, 키트 등.

본 발명의 암질환 치료제는, 유효량의 암루비신, 암루비시놀 또는 그의 약학상 허용되는 염을 유효 성분으로 하며, 유효량의 항HER2 항체와 병용되는 것이다.

암루비신, 암루비시놀 또는 그의 약학상 허용되는 염을 유효 성분으로 하는 본 발명의 암질환 치료제는, 항HER2 항체와 병용함으로써 항HER2 항체의 암의 치료 효과를 증강시킬 수 있다.

암루비신, 암루비시놀의 약학상 허용되는 염으로서는, 산 부가염 및 염기 부가염을 들 수 있다. 산 부가염으로서는, 예를 들면 염산염, 브롬화수소산염, 황산염, 요오드화수소산염, 질산염, 인산염 등의 무기산염, 시트르산염, 옥살산염, 아세트산염, 포름산염, 프로피온산염, 벤조산염, 트리플루오로아세트산염, 푸마르산염, 말레산염, 타르타르산염, 아스파라긴산염, 글루타민산염, 메탄술폰산염, 벤젠술폰산염, 캄파-술폰산염 등의 유기산염을 들 수 있다. 염기 부가염으로서는 나트륨염, 칼륨염, 칼슘염, 마그네슘염, 암모늄염 등의 무기 염기염, 트리에틸암모늄염, 트리에탄올암모늄염, 피리디늄염, 디이소프로필암모늄염 등의 유기 염기염 등을 들 수 있다.

항HER2 항체란, HER2 (인간 상피 세포 성장 인자 수용체 2 단백질 (human epidermal growth factor receptor 2 protein))에 대한 항체를 의미하며, HER2를 고발현하는 암세포의 증식을 억제하는 기능을 갖는다. 본 항체에는 폴리크로날 항체, 모노크로날 항체, 키메라 항체, 의인화 항체 등이 포함되며, 공지된 방법에 따라 제조할 수 있다. 예를 들면, 항HER2 모노크로날 항체는 WO89/06692에 기재된 방법에 따라 제조할 수 있다. 또한, 의인화 항HER2 항체는 WO94/04679에 기재된 방법에 따라 제조할 수 있다. 항HER2 항체의 바람직한 예로서는 의인화 항체를 들 수 있으며, 구체적으로는 트라츠즈맵 (Trastuzumab, 허셉틴^TM, 제넨테크사)을 들 수 있다.

본 발명의 암질환 치료제의 치료 대상이 되는 암은 특별히 제한되지 않지만, HER2를 고발현하는 암이 바람직하다. 예를 들면, 유방암, 위암, 신장암, 타액선암, 난소암, 자궁체암 및 폐암 등을 들 수 있으며, 특히 유방암이 바람직한 치료 대상이다.

암환자에 대하여 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 먼저 투여하거나, 또는 항HER2 항체를 먼저 투여하거나, 또는 두가지를 동시에 투여할 수 있다. 두가지를 동시에 투여하지 않는 경우의 두 물질의 투여 간격은 적절하게 정할 수 있다.

본 발명에 따르면, 암루비신과 항HER2 항체의 병용에 의해 상승 효과가 확인되기 때문에 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염과 항HER2 항체의 통상의 용량보다 저용량으로 암의 치료 효과를 얻을 수 있다. 따라서, 본 발명에 의해 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염과 항HER2 항체의 용량을 높이는 데 따른 부작용을 최소한으로 할 수 있다.

본 발명에서의 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염은, 통상 비경구적(예를 들면, 정맥내, 피하, 또는 근육내 주사, 방광내, 국소적, 경직장적, 경피적, 또는 경비적)으로 투여할 수 있다. 바람직하게는 정맥내 투여를 들 수 있다. 또한, 경구 투여에 사용할 수도 있으며, 경구 투여를 위한 형체로서는 예를 들면 정제, 캡슐제, 환제, 과립제, 산제, 액제, 시럽제 또는 현탁제 등을 들 수 있다.

본 발명에서의 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염의 투여량, 투여 횟수는 환자의 증상, 연령, 체중, 투여 형태, 병용되는 항HER2 항체의 투여량, 투여 횟수 등에 따라 상이하다. 주사제로서 투여되는 경우에는, 통상 성인에 대하여 1일 약 10 mg 내지 약 1000 mg의 범위, 바람직하게는 약 30 mg 내지 약 500 mg의 범위를 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 경구 투여의 경우에는, 통상 성인에 대하여 1일 약 100 mg 내지 약 3000 mg의 범위, 바람직하게는 약 300 mg 내지 약 1500 mg의 범위를 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 또한, 약 1일 내지 약 30일의 간격을 두고 투여를 반복할 수 있다.

본 발명에서의 항HER2 항체는 통상 가능하다면 표적 암세포 부위에, 또는 정맥내 투여에 의해 비경구적으로 투여된다. 정맥내 투여의 경우, 바람직하게는 약 30분 내지 약 90분에 걸쳐 정맥내 유입된다. 비경구 투여를 위해 항HER2 항체를 약학상 허용되는 비경구용 부형제와 함께 주사용 투여 제형(용액, 현탁액, 에멀젼)으로 제제화한다. 이러한 부형제는 본질적으로 무독성으로서 비치료적인 것이다. 그러한 부형제로서는 물, 생리 식염수, 링겔액, 덱스트로스 용액 및 5 % 인간 혈청 알부민을 들 수 있다. 비휘발성 오일 및 올레산에틸 등의 비수성 부형제도 사용할 수 있다. 부형제는 등장성 및 화학적 안정성을 증가시키기 위한 물질, 예를 들면 완충제, 안정제를 함유할 수 있다.

본 발명에서의 항HER2 항체의 투여량, 투여 횟수는 환자의 증상, 연령, 체중, 투여 형태, 병용되는 암루비신의 투여량, 투여 횟수 등에 따라 상이하지만, 통상은 성인에 대하여 1일 약 5 mg 내지 약 1000 mg의 범위, 바람직하게는 약 10 mg 내지 약 300 mg의 범위를 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 또한, 약 5일 내지 약 10일의 간격을 두고 투여를 반복할 수 있다.

본 발명의 암억제 효과를 나타내기 위한 바람직한 태양을 설명한다. 예를들면, 염산암루비신과 허셉틴^TM의 병용에 따른 용량비는 2:1 내지 8:1의 범위가 바람직하다. 이것은, 실시예 1에 나타낸 바와 같이 암루비신은 생체내에서 쉽게 활성 대사체인 암루비시놀로 변환되기 때문에, 암루비시놀과 허셉틴^TM의 시험관내 병용으로 상승 효과를 나타낸 농도비 2:1 내지 8:1이 염산암루비신과 허셉틴^TM의 용량비를 반영하기 때문이라고 생각된다.

암환자를 치료하는 경우에도, 마찬가지로 염산암루비신과 허셉틴^TM의 투여 개시 1주일당 용량비로서 2:1 내지 8:1의 범위가 바람직하다.

염산암루비신은 약 1.5 내지 약 9.0 mg/kg의 용량으로 1회 투여, 또는 약 0.5 내지 약 3.0 mg/kg의 용량으로 3일간 연일 투여되며, 3주일 간격으로 투여를 반복한다. 투여 경로는 정맥내 투여가 바람직하다. 허셉틴^TM은 약 0.1 내지 약 4.5 mg/kg의 용량 범위에서 정맥내 투여되며, 1주일마다 투여된다.

염산암루비신과 허셉틴^TM의 투여는 3주일을 1 사이클로 한다. 각 사이클에서의 투여 개시는 동일자가 바람직하다. 즉, 염산암루비신을 3일간 연일 투여하는 경우에는, 각 사이클의 제 1, 2, 3일째에 염산암루비신을, 제 1, 8, 15일째에 허셉틴^TM을 투여하는 것이 바람직하다.

본 발명에는 (a) 활성 성분으로서 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는 제1 조성물 및 (b) 활성 성분으로서 항HER2 항체를 포함하는 제2 조성물을 함유하는 암질환의 병용 치료용 키트도 포함된다.

염산암루비신과 허셉틴^TM의 병용에 있어서 심독성에 대한 영향이 적다는 것은, 허셉틴^TM이 반응하는 원숭이를 이용한 시험으로 확인할 수 있다. 즉, 염산독소루비신과 허셉틴^TM을 정맥내 투여하면 심독성이 강하게 발현되는데, 동일 조건에 있어서 2배량의 염산암루비신을 투여해도 붉은털 원숭이가 심독성을 나타내지 않는 점으로부터 확인할 수 있다. 염산독소루비신의 2배량의 염산암루비신을 투여하는 것은 양자의 치료 용량에 기초한다.

이하, 실시예를 들어 본 발명을 더욱 상세하게 설명하지만, 본 발명은 이것으로 한정되지 않는다.

[실험 방법]

시험관내 병용 효과 평가 방법

인간 유방암 세포를 이용하여 염산암루비신, 염산암루비시놀 및 염산독소루비신과 허셉틴^TM의 시험관내에서의 병용 효과를 조사하였다. 병용 효과는 페그람 등의 방법에 의해 조합 지수 (Combination index(CI))를 산출함으로써 평가하였다 (M. Pegram et al., 0ncogene, 18, 2241-2251(1999)).

암루비시놀은 암루비신의 활성 대사체이기 때문에 피검 물질에 첨가하였다. 아무르비시놀은 문헌에 기재된 방법(Ishizumi et al., J. Org. Chem., 52, 4477-4485(1987))에 따라 제조할 수 있다.

인간 유방암 세포주 BT-474(HER2를 고발현하는 세포주)를 ATCC(American Type Culture Collection)로부터 입수하였다. D-MEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium) 배지와 F-12(Nutrient Mixture F-12) 배지를 동일량 포함하는 배지로서, 2.5 mM L-글루타민, 10 % 소태아 혈청(FCS) 및 25 ㎍/㎖ 암포테리신 B를 함유하는 배지에서 인간 유방암 세포주 BT-474를 계대 배양하였다. 배양은 37 ℃, 5 % CO₂에서 배양기 중에 실시하였다. 이후의 실험에도 본 배지를 이용하였다.

피검 물질은 이하와 같이 제조하였다.

허셉틴^TM을 첨부되어 있던 용해액으로 용해하여 21 mg/㎖의 보존액을 제조하였다. 그 후, 배지에서 2배 단계로 희석하여 사용하였다.

염산암루비신 및 염산암루비시놀은 사용시 1 mg/㎖가 되도록 증류수로 용해하고, 여과 살균한 후, 배지에서 2배 단계로 희석하여 사용하였다.

염산독소루비신은 교와 하꼬우로부터 입수하였다. 10 mg 바이알에 멸균수 5 ㎖를 첨가하여 2 mg/㎖의 액체를 제조하고 사용하였다.

계대 중의 인간 유방암 세포 BT-474를 트립신 처리하여 배지에 현탁한 후, 96웰 플레이트에 파종하였다. 파종 농도는 1×10⁴세포/0.1 ㎖/웰로 하였다. 파종 후, 37 ℃, 5 % CO₂에서 배양기 중에 하룻밤 배양하였다 (O일째).

단일제 평가군에는 피검 물질 희석액 0.05 ㎖/wel1과 배지 0.05 ㎖/웰을 첨가하고, 병용 평가군에는 피검 물질 희석액 0.05 ㎖/wel1과 허셉틴^TM희석액 0.05 ㎖/웰을 첨가하였다 (1일째). 각 약제의 최종 농도는 염산암루비신에서는 0.0625 내지 16 ㎍/㎖, 염산암루비시놀에서는 0.00625 내지 1.6 ㎍/㎖, 염산독소루비신에서는 0.00625 내지 1.6 ㎍/㎖, 허셉틴^TM에서는 0.000781 내지 0.4 ㎍/㎖로 하였다. 약제 처리군은 n=3, 비처리(대조)군은 n=6으로 행하였다.

4일째까지 37 ℃, 5 % CO₂에서 배양기 중에 배양하였다.

4일째 각 웰에 0.02 ㎖의 WST 용액 (인산 완충액(PBS)에 1.3 mg/㎖ WST-1 (2-(4-요오도페닐)-3-(4-니트로페닐)-5-(2,4-디술포페닐)-2H-테트라졸륨, 소듐염) 및 0.14 mg/㎖ 1-메톡시 PMS (1-메톡시-5-메틸페나지늄 메틸술페이트)를 함유하는 용액)을 첨가하였다. 그 후, 2 내지 4시간, 37 ℃, 5 % CO₂에서 배양기 중에 배양하여 마이크로플레이트 리더 모델(MICROPLATE READER Model) 3550-UV(Biorad사)로 흡광도를 측정하고, 생세포수를 측정하였다.

일정 증식 억제율(fa)을 얻기 위해 필요한 염산암루비신, 염산암루비시놀, 염산독소루비신 및 허셉틴^TM의 농도 D를 수학식 2로부터 구하였다. 단일제에서의 농도를 Df₁, Df₂및 병용시의 농도를 D₁, D₂로 하여 수학식 3으로부터 조합 지수(CI)를 산출하였다 (M. Pegram et al., Oncogene, 18, 2241-2251 (1999)).

fa=1-f

D=D_m×{fa/(1-fa)}^1/m

CI=D₁/Df₁+D₂/Df₂+(D₁×D₂)/(Df₁×Df₂)

또한, f, D_m, m에 대해서는 이하와 같이 하여 산출하였다.

f=(각 약제 농도에서의 흡광도의 평균치)/(약제 농도 0 mg/㎖의 흡광도 평균치)

흡광도: A₄₂₀-A₆₃₀

약제 농도의 상용 대수에 대하여 (1/f)-1의 상용 대수를 플롯하여 최소 2승법으로 회귀 직선을 긋고, 그 기울기 m과 X 절편을 구하였다. X 절편의 값이 IC₅₀값(50 %의 세포 증식 억제에 필요한 약제 농도)의 상용 대수를 나타낸다 (상기와 같이 IC₅₀값을 D_m으로 표기하고, 염산암루비신, 염산암루비시놀, 염산독소루비신에 대해서는 첨자 1, 허셉틴^TM에 대해서는 첨자 2로 나타냄).

상기한 바와 같이 하여 CI와 증식 억제율 fa를 산출하였다. fa의 값이 0.9인 경우의 CI값을 구하였다. CI=1인 경우에 상보 효과, CI<1인 경우에 상승 효과, CI>1인 경우에 길항 효과라고 판단되었다.

<실시예 1>

염산암루비시놀과 염산독소루비신에서의 허셉틴 ^TM 의 병용 효과

상술한 병용 효과 평가 방법을 이용하여 염산암루비시놀과 허셉틴^TM의 용량비가 2:1이고, 마찬가지로 염산독소루비신과 허셉틴^TM의 용량비가 2:1인 경우의 병용 효과를 측정하였다. fa의 값이 0.9인 경우의 CI 값을 구하여 이하의 표 1에 나타내었다.

	CI 값	D₁	D₂	Df₁	Df₂
본 발명(염산암루비시놀)	0.38	0.239	0.119	0.671	6.312
대조 화합물(염산독소루비신)	0.92	0.373	0.187	0.434	6.312
D₁, D₂, Df₁, Df₂의 단위는 (㎍/㎖)임.

이상의 결과로부터 본 발명의 염산암루비시놀의 경우, 허셉틴^TM과의 병용 효과는 CI 값이 1.0보다 꽤 낮은 값을 나타내는 것으로부터 상승 효과인 것이 밝혀졌다. 그러나, 염산독소루비신의 경우에는 CI 값이 거의 1.0을 나타내는 것으로부터 상보 효과로서, 상승 효과라고는 할 수 없었다. 이와 같이 염산암루비시놀과 염산독소루비신에서는 허셉틴^TM의 병용 효과가 크게 차이나는 것을 보여주었다.

<실시예 2>

염산암루비시놀과 허셉틴 ^TM 의 용량비와 병용 효과

상기 병용 효과 평가 방법을 이용하여 염산암루비시놀과 허셉틴^TM의 용량비를 변화시켜 2:1 내지 8:1까지의 범위에서 병용 효과의 평가 시험을 행하였다. fa의값이 0.9인 경우의 CI 값을 구하여 결과를 이하의 표 2에 나타내었다.

염산암루비시놀과허셉틴의 용량비	CI 값	D₁	D₂	Df₁	Df₂
2:1	0.38	0.239	0.119	0.671	6.312
4:1	0.33	0.212	0.053	0.671	6.312
8:1	0.42	0.279	0.035	0.671	6.312
D₁, D₂, Df₁, Df₂의 단위는 (㎍/㎖)임.

이상의 표 2에 나타낸 바와 같이, 염산암루비시놀과 허셉틴^TM의 병용 효과는 용량비가 2:1 내지 8:1의 범위에서 CI 값이 모두 1.0보다 낮은 값을 나타내어 상승적인 병용 효과를 나타내는 것이 밝혀졌다.

<실시예 3>

염산암루비신과 허셉틴 ^TM 의 병용 효과

상기 병용 효과 평가 방법을 이용하여 염산암루비신과 허셉틴^TM의 병용 효과를 평가하였다. 염산암루비신과 허셉틴^TM의 용량비 40:1로 병용 효과 시험을 행하였다. fa의 값이 0.9인 경우의 CI 값을 구하고, 결과를 이하의 표 3에 나타내었다.

	CI 값	D₁	D₂	Df₁	Df₂
본 발명(염산암루비신)	0.17	1.267	0.032	7.542	6.312
D₁, D₂, Df₁, Df₂의 단위는 (㎍/㎖)임.

이상의 표 3에 나타낸 바와 같이, 염산암루비신과 허셉틴^TM을 병용한 경우에는, CI 값이 1.0보다 낮은 값을 나타내는 것으로부터 상승적인 병용 효과를 나타내는 것이 밝혀졌다.

이상과 같이 페그람법에 의한 병용 효과 평가 방법에 의해 조합 지수(CI)에 의한 병용 효과를 판정하여 염산암루비신과 허셉틴^TM의 병용, 염산암루비시놀과 허셉틴^TM의 병용에 있어서 현저한 상승 효과가 확인되었다.

<실시예 4>

원숭이를 이용한 심독성 시험

염산암루비신과 허셉틴^TM을 병용한 경우의 심독성에 대한 영향 유무를 붉은털 원숭이를 이용한 시험으로 평가하였다. 즉, 염산독소루비신과 허셉틴^TM을 정맥내 투여하고, 심독성이 강하게 발현되는 이하의 조건에서 염산독소루비신 대신에 2배량의 염산암루비신을 투여한 붉은털 원숭이의 심독성 유무를 확인하였다.

붉은털 원숭이의 정맥내에 독소루비신을 2.92 mg/kg(35 mg/m²)의 투여량으로 3주일 간격으로 7 내지 8회 투여하고, 투여 개시 후 140 내지 150일째에 심장의 병리 조직 관찰로 심근 세포의 공세포화를 확인하였다. (Toxicology, 13, 263-273, 1979, E. J. Gralla, et.al.). 또한, 허셉틴^TM의 인간으로의 투여는 4 mg/kg 투여 후, 매주 2 mg/kg의 일정이 이용되었다.

이상의 사항으로부터 약제 투여군을 다음과 같이 설정하였다.

① 약제 비투여군

② 염산독소루비신 2 내지 4 mg/kg, iv, 8q3W

③ 염산독소루비신 2 내지 4 mg/kg, iv, 8q3W

허셉틴^TM4 mg/kg, 그 후 매주 2 mg/kg, iv, 24회 투여

④ 염산암루비신 4 내지 8 mg/kg, iv, 8q3W

⑤ 염산암루비신 4 내지 8 mg/kg, iv, 8q3W

허셉틴^TM4 mg/kg, 그 후 매주 2 mg/kg, iv, 24회 투여

투여 개시 후 140 내지 150일째에 해부하여 심장의 병리 조직을 진단하였다. 심근 세포의 장해성 비교로부터 심독성을 평가하였다.

본 발명에 의해 암환자를 치료하기 위해 유용한 암의 병용 치료제가 제공된다. 보다 구체적으로는, 염산암루비신과 허셉틴^TM의 병용에 의해 상승적인 항암 작용을 실현할 수 있었던 것으로부터, 허셉틴^TM과의 병용에 의해 염산암루비신의 항종양 치료 효과를 향상시킬 수 있다. 또한, 염산암루비신의 효과를 발휘시키기 어려운 종류의 암세포에도 허셉틴^TM과의 병용에 의해 효과를 발휘할 수 있게 되었다. 또한, 반대로 상승적인 병용 효과로부터 염산암루비신의 투약량을 억제할 수 있게 되고, 보다 부작용을 경감시킨 항암 치료가 가능해졌다.

Claims

암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 유효 성분으로 하는 항HER2 항체와의 병용 요법용 암질환 치료제.
제1항에 있어서, 암질환이 유방암, 위암, 신장암, 타액선암, 난소암, 자궁체암 또는 폐암인 치료제.
제1항 또는 제2항에 있어서, 암질환이 HER2 고발현의 암질환인 치료제.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 항HER2 항체를 0.1 내지 4.5 mg/kg/일 투여하는 경우, 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 0.5 내지 3.0 mg/kg/일 투여하기 위한 치료제.
제4항에 있어서, 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 3주일마다 3일간 연일 투여하고, 항HER2 항체를 1주일마다 투여하기 위한 치료제.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 항HER2 항체를 0.1 내지 4.5 mg/kg/일 투여하는 경우, 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 1.5 내지 9.0 mg/kg/일 투여하기 위한 치료제.
제6항에 있어서, 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 3주일마다 투여하고, 항HER2 항체를 1주일마다 투여하기 위한 치료제.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염과 항HER2 항체의 용량비가 양자의 투여 개시 1주일만에 2:1 내지 8:1인 것을 특징으로 하는 치료제.
항HER2 항체와 병용 투여되는 암질환 치료제의 제조를 위한 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염의 용도.
제9항에 있어서, 암질환이 유방암, 위암, 신장암, 타액선암, 난소암, 자궁체암 또는 폐암인 용도.
제9항 또는 제10항에 있어서, 암질환이 HER2 고발현의 암질환인 용도.
제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 항HER2 항체를 0.1 내지 4.5 mg/kg/일 투여하는 경우, 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 0.5 내지 3.0 mg/kg/일 투여하기 위한 용도.
제12항에 있어서, 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 3주일마다 3일간 연일 투여하고, 항HER2 항체를 1주일마다 투여하기 위한 용도.
제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 항HER2 항체를 0.1 내지 4.5 mg/kg/일 투여하는 경우, 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 1.5 내지 9.0 mg/kg/일 투여하기 위한 용도.
제14항에 있어서, 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 3주일마다 투여하고, 항HER2 항체를 1주일마다 투여하기 위한 용도.
제9항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염과 항HER2 항체의 용량비가 양자의 투여 개시 1주일만에 2:1 내지 8:1인 것을 특징으로 하는 용도.
유효량의 항HER2 항체와 유효량의 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 병용하는 것을 특징으로 하는 암질환의 치료 방법.
제17항에 있어서, 암질환이 유방암, 위암, 신장암, 타액선암, 난소암, 자궁체암 또는 폐암인 치료 방법.
제17항 또는 제18항에 있어서, 암질환이 HER2 고발현의 암질환인 치료 방법.
제17항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 항HER2 항체를 0.1 내지 4.5 mg/kg/일 투여하고, 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 0.5 내지 3.0 mg/kg/일 투여하는 것을 특징으로 하는 치료 방법.
제20항에 있어서, 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 3주일마다 3일간 연일 투여하고, 항HER2 항체를 1주일마다 투여하는 것을 포함하는 치료 방법.
제17항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 항HER2 항체를 0.1 내지 4.5 mg/kg/일 투여하고, 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 1.5 내지 9.0 mg/kg/일 투여하는 것을 특징으로 하는 치료 방법.
제22항에 있어서, 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 3주일마다 투여하고, 항HER2 항체를 1주일마다 투여하는 것을 포함하는 치료 방법.
제17항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염과 항HER2 항체의 용량비가 양자의 투여 개시 1주일만에 2:1 내지 8:1인 것을 특징으로 하는 치료 방법.
암루비신 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는 제1 조성물 및 항HER2 항체를 포함하는 제2 조성물을 함유하는 암질환 치료용 키트.