KR20030015654A - Skin external compositions containing raspberry leaf or fruit extract for reducing irritation and inflammation in skin - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 피부자극 및 염증을 완화시키는 효능을 갖는 피부 외용제 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는, 라스베리의 일종인 복분자(Rubus coreanum), 멍덕딸기(Rubus idaeus) 및 멍석딸기(Rubus parvifolius)로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 식물의 잎 또는 열매 추출물을 함유함으로써, 피부 세포에서 물질 P(substance P) 또는 브라디키닌(bradykinin)에 의한 IL-6 및 IL-8의 생합성 및 자외선에 의한 프로스타글란딘-E2(PGE2)의 생합성을 억제하는 것을 통해, 항염증 효능 및 피부자극 완화 효능을 나타내는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to an external composition for skin having an effect of alleviating skin irritation and inflammation, and more particularly, consisting of raspberry (Rubus coreanum), Rubberry (Rubus idaeus), and Rubberberry (Rubus parvifolius) Prostaglandin-E2 by UV and Biosynthesis of IL-6 and IL-8 by Substance P or Bradykinin in Skin Cells by Containing Leaf or Fruit Extracts of One or More Plants Selected from the Group The present invention relates to an external preparation composition for skin that exhibits anti-inflammatory effect and skin irritation-reducing effect through inhibiting biosynthesis of (PGE2).
피부는 외부 환경에 직접적으로 노출되는 신체 부위로서, 과도한 자외선이나 오염물질 등에 노출되면 홍반, 부종, 가려움 등의 피부 자극 및 염증 반응이 유발된다. 이러한 스트레스원에 의한 피부 트러블은 미관상 문제가 될 뿐만 아니라, 염증 반응 과정에서 생성되는 물질들이 부수적으로 피부의 색소 침착을 일으키고, 피부 탄력 섬유의 붕괴를 촉진시켜 피부 주름의 증가에까지 영향을 미치는 것으로 알려져 있다.Skin is a part of the body that is directly exposed to the external environment, and when exposed to excessive ultraviolet rays or contaminants, skin irritation and inflammatory reactions such as erythema, edema, and itching are induced. Skin troubles caused by such stress sources are not only aesthetic problems, but the substances produced in the inflammatory process are known to cause pigmentation of the skin and promote the collapse of skin elastic fibers, thereby affecting the increase of skin wrinkles. have.
한편, 현대 사회에서는 남녀 노소를 불문하고 많은 사람들이 화장품을 사용하고 있는데, 일부 민감성 피부의 경우, 화장품의 사용으로 인해 피부 자극 및 염증이 유발되기도 한다. 특히, 화장료 성분 중 각질제거, 피부주름 개선 및 예방 등을 목적으로 하는 기능성 제품의 원료로 사용되는 레티노이드류나 과일산, 및 제형화를 위해 첨가되는 계면활성제들이 피부에 트러블을 일으키는 주된 물질들로써, 이들 물질을 최대한의 효능을 나타낼 수 있는 농도로 사용하는 데에는 많은 제한이 있었다.On the other hand, in modern society, many people, both young and old, use cosmetics. In some sensitive skin, the use of cosmetics may cause skin irritation and inflammation. In particular, retinoids or fruit acids used as raw materials for functional products for the purpose of exfoliation, skin wrinkle improvement and prevention, and surfactants added for formulation are the main substances causing troubles on the skin. There have been many limitations to the use of substances in concentrations that produce the maximum efficacy.
따라서, 각종 스트레스원에 의한 피부 자극 및 염증을 감소시키고, 화장품 사용으로 인한 부작용을 줄이기 위해서는, 항염증 및 피부자극 완화 효능이 있는 물질을 개발하는 것이 절실히 요구된다.Therefore, in order to reduce skin irritation and inflammation caused by various stress sources, and to reduce side effects due to the use of cosmetics, it is urgently required to develop substances having anti-inflammatory and skin irritation efficacy.
이에, 피부 자극 및 염증의 생성을 줄일 수 있는 방법에 관한 연구가 활발히 진행되고 있다. 지금까지의 연구 결과로는, 신경세포에서 분비되는 물질 P 등의 신경 펩티드 또는 조직이나 혈장에서 스트레스에 의해서 활성화되는 브라디키닌과 같은 키닌류(kinins) 등에 의해, 피부세포와 면역세포에서 다양한 시토키닌(cytokine; 특히, IL-6 및 IL-8) 및 PGE2 등이 분비됨으로써, 염증이 형성된다는 것이 알려져 있고, 이에 따라, 물질 P를 비롯한 신경펩티드 길항제, 브라디키닌 길항제 등이 제시되어 왔으나, 뚜렷한 효과를 나타내지는 못하였다.Therefore, researches on how to reduce the skin irritation and the generation of inflammation are actively progressed. Previous studies have shown that various cytokinins in skin cells and immune cells, such as neuropeptides such as substance P secreted from nerve cells or kinins such as bradykinin activated by stress in tissues or plasma, can be produced. It is known that inflammation is formed by the secretion of (cytokine; in particular, IL-6 and IL-8) and PGE2, and accordingly, neuropeptide antagonists such as substance P, bradykinin antagonists, etc. have been proposed, There was no effect.
이러한 시점에서 본 발명자들 또한 피부 자극 및 염증 생성에 막대한 영향을주는 자외선 및 기타 환경적 스트레스에 의한 피부 자극을 효과적으로 통제하여, 피부 자극을 완화하고, 염증이 생성되는 것을 방지 또는 완화시키기 위해, 피부에서 다양한 자극 매개 인자들에 의해 증가되는 IL-6, IL-8 및 PGE2(COX-2에 의해 생성되는 프로스타글란딘)를 조절하는 원료를 찾고자 연구하였다. 이에, 활성성분으로 사용하기 위한 300여 종의 원료를 검색하였고, 그 결과, 라스베리 종의 열매와 잎 추출물이 피부 자극 및 염증의 생성에 관여하는 IL-6, IL-8 및 PGE2를 모두 억제하는 효능이 있으며, 화장료에 포함된 레티놀, 락트산 및 SLS 등에 의한 피부 자극을 완화시키는 효능도 있음을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.At this point we also effectively control skin irritation caused by UV and other environmental stresses that have a huge impact on skin irritation and inflammation production, to relieve skin irritation and to prevent or mitigate the formation of inflammation. We studied to find a raw material that modulates IL-6, IL-8 and PGE2 (prostaglandins produced by COX-2), which are increased by various stimulation mediators. As a result, 300 kinds of raw materials were searched for use as active ingredients. As a result, raspberry fruit and leaf extracts inhibit all of IL-6, IL-8 and PGE2 involved in skin irritation and inflammation. The present invention has been found to be effective in relieving skin irritation caused by retinol, lactic acid, SLS, and the like contained in cosmetics.
따라서, 본 발명의 목적은 피부 자극을 개선하거나 피부 염증을 예방 또는 완화시키는 효과가 우수한 피부 외용제 조성물을 제공하는 것이다.Accordingly, it is an object of the present invention to provide an external composition for skin having an excellent effect of improving skin irritation or preventing or alleviating skin inflammation.
상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은 외용제에 배합되는 다른 조성물과 함께, 라스베리의 일종인 복분자(Rubus coreanum), 멍덕딸기(Rubus idaeus) 및 멍석딸기(Rubus parvifolius)로부터 선택된 1종 이상의 식물의 잎 또는 열매 추출물을 0.00001~30중량%의 양으로 함유하는 것을 특징으로 한다.In order to achieve the above object, the composition for external application for skin according to the present invention is selected from raspberry (Rubus coreanum), Rubberry (Rubus idaeus) and Rubber parsley (Rubus parvifolius), which is a kind of raspberry, together with other compositions formulated in the external preparation. It is characterized by containing the leaf or fruit extract of at least one plant in an amount of 0.00001 to 30% by weight.
이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail.
라스베리는 장미과 식물로서, 이에 속하는 식물 중, 본 발명에서는 복분자, 멍덕딸기 및 멍석딸기를 사용하였다.Raspberry is a rosaceae, and among the plants belonging to it, in the present invention, bokbunja, bruises and daisies were used.
본 발명은 이 식물들의 잎 또는 열매추출물이 동통, 홍반, 가려움 등의 피부염증 유발에 관련되는 브라디키닌과 물질 P의 작용을 길항하는 효능을 갖는다는 것을 발견한 것으로, 구체적으로 설명하면, 피부세포 및 신경교세포주에서 브라디키닌과 물질 P에 의해 분비되는 염증 매개 사이토킨인 IL-6와 IL-8의 분비를 억제하고, 자외선에 의해 증가되는 염증 매개 인자인 PGE2의 생합성을 억제하는 것을 발견하였다.The present invention has found that the leaves or fruit extracts of these plants have the effect of antagonizing the action of bradykinin and substance P related to the induction of skin inflammation such as pain, erythema and itching. It has been found to inhibit the secretion of inflammatory mediators IL-6 and IL-8 secreted by bradykinin and substance P in cells and glial cell lines, and to inhibit the biosynthesis of PGE2, an inflammatory mediator increased by UV light. .
또한, 기능성 화장품 원료로 사용되는 레티놀이 피부에 홍반, 수포 형성, 부종, 가려움 등의 부작용을 나타내는 것에 대하여, 상기한 추출물들은 피부 세포에서 레티놀에 의한 염증매개인자인 MCP-1의 생합성을 효과적으로 억제하는 것을 확인하였으며, 동물 실험모델과 인체대상 시험에서 레티놀에 의해 생기는 피부 홍반을 억제하는 것을 확인하였다. 더욱이, 라스베리 추출물은 계면활성제로서 화장품에 첨가되는 SLS(sodium lauryl sulfate)와 기능성 원료인 락트산에 의한 피부 자극을 완화시켜 주는 효과가 있었으며, 자원자를 대상으로 시행한 임상 시험에서 자외선 조사로 유발되는 피부 홍반을 억제하는 효과를 보였다.Retinol, which is used as a functional cosmetic raw material, also has side effects such as erythema, blister formation, edema, and itching on the skin, and the extracts effectively inhibit the biosynthesis of MCP-1, an inflammation mediator of retinol in skin cells. In animal models and human subjects, it was confirmed that retinol inhibits skin erythema. Moreover, raspberry extracts have the effect of relieving skin irritation caused by sodium lauryl sulfate (SLS) added to cosmetics as a surfactant and lactic acid, a functional ingredient, and skin induced by UV irradiation in clinical trials conducted on volunteers. It has been shown to inhibit erythema.
따라서, 상기한 복분자, 멍덕딸기 및 멍석딸기의 추출물들은 피부 자극 및 염증 유발에 관여하는 인자들의 생성을 차단함으로써 효과를 나타내는 것임을 알 수 있었다.Therefore, it can be seen that the above extracts of Bokbunja, Blackberry and Blackberry have an effect by blocking the production of factors involved in skin irritation and inflammation.
본 발명에 사용된 천연물 추출물은 이들의 용어 그 식물 자체를 한정한 것이 아니고, 그 생약으로부터 침출 또는 전출하여 얻은 침출액, 또는 침출액을 다시 일부 또는 전부 농축하여 얻은 농축물, 또는 다시 그 농축물을 건조시켜 제조한 침제, 전제, 정기, 유동엑기스(이하 추출 엑기스라 함) 및 천연물 중에 함유되어 주효과를 발휘하는 화학물질 그 자체를 포함하는 것이다.The natural product extract used in the present invention is not limited to the terminology of the plant itself, and the leaching liquid obtained by leaching or leaching from the herbal medicine, or the concentrate obtained by partially or completely concentrating the leaching liquid, or drying the concentrate again. It contains the chemicals that have the main effect by being contained in the prepared by distillation, premises, regular, flow extract (hereinafter referred to as extract extract) and natural products.
본 발명의 피부 외용제 조성물은 상기 복분자, 멍덕딸기 및 멍석딸기로부터 선택된 1종 이상의 식물의 잎 또는 열매 추출물을 0.00001~30중량%, 바람직하게는 0.001~10중량%의 양으로 함유한다. 함유량이 0.00001중량% 미만인 경우에는 본 발명에서 목적하는 효과를 얻기가 힘들며, 30중량%를 초과하는 경우에는 제형 안정성에 문제가 생기기 때문이다.The external preparation composition for skin of the present invention contains leaf or fruit extracts of at least one plant selected from the above bokbunja, blackberry and blackberry in an amount of 0.00001-30% by weight, preferably 0.001-10% by weight. If the content is less than 0.00001% by weight, it is difficult to obtain the desired effect in the present invention, and if it exceeds 30% by weight, there is a problem in formulation stability.
본 발명의 외용제 조성물은 피부 자극 및 염증 생성을 방지 또는 완화시킬 목적으로 사용되며, 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없이, 예를 들면, 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 팩, 젤 또는 피부 점착타입 화장료의 제형을 갖는 화장료 조성물일 수 있으며, 또한, 로션, 연고, 겔, 크림, 패취 또는 분무제와 같은 경피 투여형 제형일 수 있다.The external preparation composition of the present invention is used for the purpose of preventing or alleviating skin irritation and inflammation, and is not particularly limited in the formulation, for example, softening longevity, nourishing longevity, massage cream, nutrition cream, pack, gel Or a cosmetic composition having a formulation of a skin-adhesive cosmetic, and may also be a transdermal dosage form such as a lotion, ointment, gel, cream, patch or spray.
또한, 각각의 제형에 있어서, 상기한 필수 성분 이외의 다른 성분들은 기타 외용제의 종류 또는 사용목적 등에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있다.In addition, in each dosage form, components other than the essential components mentioned above can be suitably selected and blended by those skilled in the art without difficulty according to the kind or purpose of use of other external preparations.
이하, 실시예 및 시험예를 들어 본 발명의 구성 및 작용효과를 보다 구체적으로 설명하였으나, 본 발명이 이들 예로만 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the configuration and effect of the present invention will be described in more detail with reference to Examples and Test Examples, but the present invention is not limited only to these examples.
[참고예 1] 복분자 추출물의 제조Reference Example 1 Preparation of Bokbunja Extract
복분자 잎과 열매 1㎏을 정제수로 세척하여 건조시킨 다음, 분말화한 복분자 가루를 프로필렌 글리콜 5ℓ에 넣고 냉각 콘덴서가 장치되어 있는 추출기에서 3일간 추출한 후, 와트만 필터페이퍼를 사용하여 2회 여과하였다. 이후 냉각 콘덴서가달려있는 증류 장치를 사용하여 용매를 완전히 증발시킨 후에 농축하였다.1 kg of bokbunja leaves and berries were washed with purified water and dried. The powdered bokbunja powder was placed in 5 l of propylene glycol, extracted in an extractor equipped with a cooling condenser for 3 days, and filtered twice using Whatman filter paper. . The solvent was then completely concentrated after evaporation using a distillation apparatus equipped with a cooling condenser.
[참고예 2] 멍덕딸기 추출물의 제조REFERENCE EXAMPLE 2 Preparation of Waxberry Extract
멍덕딸기 잎과 열매 1㎏을 사용하여, 상기 참고예 1과 동일한 방법으로 추출하였다.Extracted by the same method as in Reference Example 1, using the leaves and fruit 1kg brussels.
[참고예 3] 멍석딸기 추출물의 제조REFERENCE EXAMPLE 3 Preparation of Dabberberry Extract
멍석딸기 잎과 열매 1㎏을 사용하여 상기 참고예 1과 동일한 방법으로 추출하였다.It was extracted in the same manner as in Reference Example 1 using 1kg of bilberry leaves and fruit.
[시험예 1] 라스베리 추출물의 신경교세포주, U373 MG에서 물질 P 자극에 의한 IL-6 생합성 억제 효능 평가[Test Example 1] Evaluation of the inhibitory effect of IL-6 biosynthesis by substance P stimulation in glial cell line, U373 MG of raspberry extract
사람의 신경교세포주 U373 MG를 10%의 우태아 혈청(fetal bovine serum, FBS)이 함유된 MEM(Minimum Essential Media, GIBCO BRL, Life Technologues社) 배지로 96-웰 시험 플레이트의 각 웰에 2×104개씩 세포를 부착시켜 24시간 동안 배양하였다. 배지를 제거한 후, 인산염완충용액(phosphate buffered saline, PBS) 200㎕로 1회 세척하고, FBS가 함유되지 않은 MEM 배지 200㎕에 평가하고자 하는 참고예 1~3의 추출물을 하기 표 1에 나타낸 농도 만큼씩 처리하여 5시간 동안 배양시켰다. 배양액 25㎕를 취하여 IL-6 ELISA(Pharmingen社, OptEIA Human IL-6 set 사용)를 통해 물질 P에 의한 IL-6 유리 억제 효과를 측정하였다. 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.Human glial cell line U373 MG was added to each well of a 96-well test plate with MEM (Minimum Essential Media, GIBCO BRL, Life Technologues) medium containing 10% fetal bovine serum (FBS). Four cells were attached and incubated for 24 hours. After removing the medium, washed once with 200 μl of phosphate buffered solution (phosphate buffered saline (PBS), and the extracts of Reference Examples 1 to 3 to be evaluated in 200 μl of MEM medium without FBS concentration shown in Table 1 below. As many treatments as incubated for 5 hours. 25 μl of the culture was taken to measure the effect of inhibiting IL-6 release by substance P through IL-6 ELISA (Pharmingen, OptEIA Human IL-6 set). The results are shown in Table 1 below.
상기 표 1로부터, 복분자 추출물, 멍덕딸기 추출물 및 멍석딸기 추출물은 사람의 신경교세포 U373에서 물질 P 자극에 의한 염증 매개 물질인 IL-6의 생합성을 억제하는 효과가 있음을 알 수 있다.From Table 1, it can be seen that the bokbunja extract, Brussels berry extract and Burberry strawberry extract has the effect of inhibiting the biosynthesis of IL-6, an inflammation mediator by substance P stimulation in human glial cells U373.
[시험예 2] 라스베리 추출물의 피부섬유아세포에서 브라디키닌 자극에 의한 IL-6 및 IL-8 생합성 억제 효능 평가[Test Example 2] Evaluation of IL-6 and IL-8 Biosynthesis Inhibitory Effect of Raspberry Extract by Bradykinin Stimulation in Dermal Fibroblasts
사람의 표피조직으로부터 분리, 배양한 피부섬유아세포(fibroblast)를 10%의 FBS가 함유된 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Media, GIBCO BRL, Life Technologues社) 배지로 96-웰 시험 플레이트에 2×104개씩 각 웰에 부착시켜 24시간 동안 배양하였다. FBS를 넣지 않은 DMEM으로 24시간 정도 세포를 배양한 후에, 1% 우태아 혈청이 함유된 DMEM으로 평가하고자 하는 참고예 1~3의 추출물을 하기 표 2에 나타낸 농도 만큼씩 처리한 다음, 5시간 배양한 후에 배양액을 취하고, 각 배양액 25㎕에 대해 IL-6와 IL-8에 대한 ELISA(Pharmingen社, OptEIA Human IL-6/IL-8 set 사용)를 수행함으로써, 브라디키닌에 의한 IL-6 및 IL-8의 생합성 저해능을 평가하였다. 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.Cultured fibroblasts were isolated from human epidermal tissue and 2 × 10 4 cells were placed on 96-well test plates with DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Media, GIBCO BRL, Life Technologues) medium containing 10% FBS. Attached to each well and incubated for 24 hours. After culturing the cells for 24 hours with DMEM without FBS, the extracts of Reference Examples 1 to 3 to be evaluated by DMEM containing 1% fetal bovine serum were treated by the concentrations shown in Table 2 below, followed by 5 hours. After incubation, the culture medium was taken, and 25 μl of each culture solution was subjected to ELISA (using Pharmingen, OptEIA Human IL-6 / IL-8 set) for IL-6 and IL-8. 6 and IL-8 was evaluated for the biosynthesis inhibitory ability. The results are shown in Table 2 below.
상기 표 2로부터, 복분자 추출물, 멍덕딸기 추출물 및 멍석딸기 추출물은 피부섬유아세포에서 브라디키닌 자극에 의한 염증 매개 인자인 IL-6와 IL-8의 생합성 저해 효과가 있음을 알 수 있다.From Table 2, it can be seen that the bokbunja extract, Brussels berry extract and Burberry strawberry extract has the inhibitory effect of biosynthesis of IL-6 and IL-8, which are inflammation mediators by bradykinin stimulation in skin fibroblasts.
[시험예 3] 라스베리 추출물의 각질형성세포에서 자외선 자극에 의한 프로스타글란딘 생합성 억제 효과 평가[Test Example 3] Evaluation of the inhibitory effect of prostaglandin biosynthesis by UV stimulation on keratinocytes of raspberry extract
사람의 표피 조직에서 분리한 각질형성세포(keratinocyte)를 24-웰 시험 플레이트에 5×104개씩 넣고 24시간 동안 부착시켰다. FBS가 포함되지 않은 배지로 교체하고, 18시간 동안 배양한 다음, 상기의 각질형성세포에 최종 농도가 500μM이 되도록 아스피린(aspirin)을 처리하여, 각질형성세포에 존재하는 프로스타글란딘 생합성 효소(prostaglandin H2 synthetase, 또는 cyclooxygenase, 이하 COX)의 활성을 제거하였다. 아스피린 처리 2시간 후에 각질형성세포가 들어있는 각 웰을 PBS로 2회 세척하고, 각 웰에 100㎕의 PBS를 넣었다. 이 각질형성세포에 자외선 B(UV B) 램프(Model: F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki社, Japan)를 이용하여 자외선 30mJ/㎠를 조사한 후, PBS를 덜어내고 각 웰에 각질형성세포 배양액(keratinocyte growth media, Clonetics, BioWhittacker社, MD, USA) 250㎕를 첨가하였다. 여기에평가하고자 하는 참고예 1~3의 추출물을 하기 표 3에 나타낸 농도만큼씩 처리한 후, 16시간 동안 배양하였다. 배양 상층액을 적당량 취하여 16시간 동안 생합성된 PGE2를 정량함으로써, 라스베리 추출물의 프로스타글란딘 억제 효과를 판단하였다. PGE2의 양은 효소면역분석법(enzyme immunoassay)을 이용하여 정량화하였으며, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.Keratinocytes isolated from human epidermal tissue (5 × 10 4 ) were placed in 24-well test plates and attached for 24 hours. A FBS is replaced with a non-containing medium, and incubated for 18 hours and then was treated with aspirin (aspirin) in the keratinocytes of a final concentration of 500 μ M, prostaglandin biosynthetic enzymes present in keratinocytes (prostaglandin H2 synthetase, or cyclooxygenase, COX) was removed. After 2 hours of aspirin treatment, each well containing keratinocytes was washed twice with PBS, and 100 μl of PBS was added to each well. The keratinocytes were irradiated with UV 30mJ / cm 2 using an ultraviolet B lamp (Model: F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki, Japan), and then PBS was removed and each cell was cultured with keratinocyte culture ( keratinocyte growth media, Clonetics, BioWhittacker, MD, USA) 250 μl was added. The extracts of Reference Examples 1 to 3 to be evaluated here were treated by the concentrations shown in Table 3 below, followed by incubation for 16 hours. By taking an appropriate amount of the culture supernatant and quantifying biosynthesized PGE2 for 16 hours, the prostaglandin inhibitory effect of the raspberry extract was determined. The amount of PGE2 was quantified using an enzyme immunoassay, and the results are shown in Table 3 below.
상기 표 3으로부터, 복분자 추출물, 멍덕딸기 추출물 및 멍석딸기 추출물은 10 ppm의 농도에서 자외선에 의한 프로스타글란딘의 생성을 효과적으로 억제함을 알 수 있다. 특히, 생성되는 PGE2는 주로 COX-2 효소에 의해 만들어지는 것으로 알려져 있으므로, 상기 시험을 통해, 각각의 추출물들이 COX-2 효소의 유도작용 또는 활성을 억제함을 알 수 있다.From Table 3, it can be seen that the Bokbunja extract, Brussels berry extract, and Brussels berry extract effectively inhibit the production of prostaglandins by UV at a concentration of 10 ppm. In particular, since the produced PGE2 is known to be mainly produced by the COX-2 enzyme, the test shows that each extract inhibits the induction or activity of the COX-2 enzyme.
[시험예 4] 라스베리 추출물의 피부섬유아세포에서 레티놀 자극에 의한 MCP-1 생합성 억제 효능 평가Test Example 4 Evaluation of MCP-1 Biosynthesis Inhibitory Effect of Raspberry Extract by Retinol Stimulation in Dermal Fibroblasts
사람의 표피조직으로부터 분리, 배양한 피부섬유아세포(fibroblast)를 10%의 FBS가 함유된 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Media, GIBCO BRL, LifeTechnologues社) 배지로 96-웰 시험 플레이트에 2×104개씩 각 웰에 부착시켜 24시간 동안 배양하였다. FBS를 넣지 않은 DMEM으로 24시간 정도 세포를 배양한 후에, 1% 우태아 혈청이 함유된 DMEM으로 평가하고자 하는 참고예 1~3의 추출물을 하기 표 4에 나타낸 농도만큼씩 처리한 다음, 5시간 배양한 후에 배양액을 취하고, 각 배양액 25㎕에 대해 MCP-1에 대한 ELISA(Pharmingen社, OptEIA Human MCP-1 set 사용)를 수행함으로써, 레티놀에 의한 MCP-1의 생합성 저해능을 평가하였다. 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다.Cultured fibroblasts isolated from human epidermal tissue were cultured in D 96 (Dulbecco's Modified Eagle's Media, GIBCO BRL, LifeTechnologues, Inc.) containing 10% FBS, 2 × 10 4 each in 96-well test plates. Attach to wells and incubate for 24 hours. After culturing the cells for 24 hours with DMEM without FBS, the extracts of Reference Examples 1 to 3 to be evaluated by DMEM containing 1% fetal bovine serum were treated by the concentrations shown in Table 4 below, followed by 5 hours. After incubation, the culture medium was taken, and ELISA (Pharmingen, OptEIA Human MCP-1 set) on MCP-1 was performed on 25 μl of each culture, to evaluate the biosynthesis inhibition of MCP-1 by retinol. The results are shown in Table 4 below.
[시험예 5] 동물시험을 통한 라스베리 추출물의 레티놀 홍반 자극 완화 효능 평가Test Example 5 Evaluation of Retinol Erythema Stimulation Efficacy Efficacy of Raspberry Extract by Animal Test
뉴질랜드 흰토끼의 등 피부에 하기 표 6에 나타낸 조성물을 1일 2회 간격으로 4일간 총 8회 도포하였다. 물질 도포 후, 홍반 및 가피형성 평점과 부종형성 평점 값을 누적시켜 피부누적자극 지수를 구하였다. 피부누적자극 지수는 표 5에 나타낸 판정 기준에 따라 평가하였고, 그 결과를 하기 표 6에 나타내었다. 결과에 나타낸 자극 지수는 일반적으로 많이 이용되는 Draize의 1차 자극 지수(PrimaryIrritation Index)의 산출 방법에 따른 것이다(Draize, J.H., Appraisal of the safety of chemical in foods, drugs and cosmetics).The composition shown in Table 6 was applied to the back skin of the New Zealand white rabbit eight times a day for two days at intervals. After application of the substance, the cumulative erythema and the skin formation score and the edema formation score were accumulated to determine the cumulative skin irritation index. The cumulative skin irritation index was evaluated according to the criteria shown in Table 5, and the results are shown in Table 6 below. The stimulus index shown in the results is based on the calculation method of commonly used Primary Irritation Index (Draize, J.H., Appraisal of the safety of chemical in foods, drugs and cosmetics).
상기 표 6으로부터, 복분자, 멍덕딸기 및 멍석딸기 추출물이 레티놀에 의한 피부 자극을 완화시키는 효능이 있는 것을 알 수 있다.From Table 6, it can be seen that the bokbunja, brussels and locust berries extracts are effective in relieving skin irritation caused by retinol.
[시험예 6] 동물시험을 통한 라스베리 추출물 함유 제형의 락트산 및 SLS에 의한 피부 자극 완화 효능 평가Test Example 6 Evaluation of Efficacy of Skin Irritant by Lactic Acid and SLS of Raspberry Extract-Containing Formulation through Animal Test
뉴질랜드 흰토끼의 등 피부에 하기 표 7과 같이 유화액(emulsion)으로 제형화한 조성물을 1일 2회 간격으로 4일간 총 8회 도포하였다. 물질 도포 후, 상기 표 5의 판정 기준에 근거하여 홍반 및 가피형성 평점과 부종형성 평점 값을 누적시켜피부누적자극 지수를 구하고, 하기 수학식 1을 사용하여 자극완화율을 구하였으며, 그 결과를 하기 표 8에 나타내었다.The New Zealand white rabbit's back skin was applied to the composition formulated as an emulsion (emulsion), as shown in Table 7 below, for a total of eight times for four days at twice daily intervals. After application of the material, the cumulative stimulation index and edema formation score values were accumulated based on the criteria of Table 5, and the cumulative irritation index was calculated. It is shown in Table 8 below.
상기 표 8로부터, 본 발명의 복분자, 멍덕딸기 및 멍석딸기 추출물을 1종 이상 함유하는 화장료는 락트산과 SLS에 의한 피부 자극을 완화시키는 효능이 있는것을 확인하였다.From Table 8, it was confirmed that the cosmetic containing at least one extract of Bokbunja, Blackberry and Blackberry extract of the present invention has an effect of alleviating skin irritation caused by lactic acid and SLS.
[시험예 7] 인체시험을 통한 라스베리 추출물 함유 제형에서의 레티놀에 의한 피부 홍반 완화 효능 평가Test Example 7 Evaluation of Efficacy of Skin Erythema by Retinol in Raspberry Extract-Containing Formulations by Human Test
시험에 들어가기 전 한달 동안에 비스테로이드성 항염증제 및 기타 스테로이드 제제를 복용한 경력이 없는 건강한 자원자를 대상으로 라스베리 추출물의 레티놀에 의한 피부 홍반 유발 억제 효과를 CTFA(The Cosmetic Toiletry and Fragrance Association)의 안전성 평가 지침(Safety Testing Guideline, 1981, p3)에 따라 평가하였다. 즉, 10명의 피검자의 전박 안쪽에 하기 표 10의 처방과 같이 유화액으로 제형화한 조성물을 24시간 동안 연속 폐쇄 첩포하였다. 첩포 횟수는 피검자의 반응 정도와 피부 상태를 고려하여 2~4회까지 실시하였으며, 검사는 매회 첩포 제거 1시간 후에 시행하였고, 마지막 검사는 첩포 시행일로부터 8일까지 실시하였다. 자극의 회복 정도를 반영하기 위해 첩포 종료 후에도 계속 평가하였고, 홍반이 완전히 사라지고 색소 침착만 남은 경우에는 점수를 부여하지 않았다. 각 검사 시점에서 하기 표 9의 판정 방법에 따라 자극정도를 평가하였고, 그 합으로부터 상기 수학식 1에 의해 자극완화율을 계산하여 그 결과를 하기 표 11에 나타내었다.A guideline for evaluating the safety of the Cosmetic Toiletry and Fragrance Association (CTFA) was to evaluate the effect of retinol-induced skin erythema-induced effects of raspberry extracts on healthy volunteers who had not taken nonsteroidal anti-inflammatory drugs and other steroid preparations for a month before entering the trial. (Safety Testing Guideline, 1981, p3). That is, the composition formulated with the emulsion as prescribed in Table 10 below in the forearm of 10 subjects was continuously closed patch for 24 hours. The number of patches was performed two to four times in consideration of the response level and skin condition of the subject, and the test was performed one hour after the removal of the patch each time, and the last test was performed up to eight days from the date of patch application. Evaluation was continued even after the end of the patch to reflect the degree of recovery of stimulation, and no score was given when erythema completely disappeared and only pigmentation remained. At each test point, the degree of stimulation was evaluated according to the determination method shown in Table 9 below, and the stimulation relaxation rate was calculated from Equation 1 from the sum and the results are shown in Table 11 below.
상기 표 11로부터, 본 발명의 복분자, 멍덕딸기 및 멍석딸기 추출물을 1종 이상 함유한 제형은 사람의 피부에서 레티놀에 의한 홍반 유발을 억제하는 효능이 있는 것을 확인하였다.From Table 11, it was confirmed that the formulation containing at least one extract of Bokbunja, Blackberry and Blackberry extract of the present invention has the effect of inhibiting erythema induced by retinol in human skin.
[시험예 8] 인체시험을 통한 라스베리 추출물 함유 제형에서의 자외선에 의한 피부 홍반 완화 효능 평가Test Example 8 Evaluation of Efficacy of Skin Erythema by UV Rays in a Raspberry Extract-Containing Formulation by Human Test
시험에 들어가기 전 한달 동안에 비스테로이드성 항염증제 및 기타 스테로이드 제제를 복용한 경력이 없는 건강한 자원자를 대상으로 라스베리 추출물의 자외선(UVB)에 의한 피부 홍반 유발 억제 효과를 Kaidbey와 Kurban의 방법에 따라 평가하였다(Kaidbey & Kurban, 1976, J. Invest. Dermatol., Vol 66 pp153-156). 즉, 건강한 12명의 남자를 대상으로 피검자의 윗팔뚝 부위에 직경 1.5cm의 구멍 6개가 뚫린 불투명 테이프를 부착한 뒤, 각 피검자의 최소 홍반량(Minimun Erythema Dose, MED)의 2배 정도의 자외선(UVB)을 SE lamp(파장 290~320nm, Toshiba)로 조사하여 홍반을 유도하였다. 하기 표 12의 처방에 따라 제조한 각각의 유화액 제형을 자외선을 조사하기 1시간 전과 자외선 조사 직후 도포하였다. 자외선 조사 후 6시간 및 24시간 후의 홍반지수를 평가하여, 그 결과를 하기 표 13에 나타내었다.Healthy volunteers who had not taken nonsteroidal anti-inflammatory and other steroidal agents for a month prior to the trial were evaluated according to Kaidbey and Kurban's method for inhibiting the skin erythema induced by UVB of raspberry extract (UVB). Kaidbey & Kurban, 1976, J. Invest.Dermatol., Vol 66 pp 153-156). In other words, an opaque tape with six holes of 1.5 cm in diameter was attached to the upper forearm of 12 healthy males, and twice the amount of ultraviolet light (Minimun Erythema Dose, MED) of each subject was measured. UVB) was irradiated with SE lamp (wavelength 290 ~ 320nm, Toshiba) to induce erythema. Each emulsion formulation prepared according to the formulation of Table 12 was applied 1 hour before and immediately after UV irradiation. The erythema index after 6 hours and 24 hours after ultraviolet irradiation was evaluated, and the results are shown in Table 13 below.
상기 표 13으로부터, 복분자 추출물, 멍덕딸기 추출물 및 멍석딸기 추출물로부터 선택된 1종 이상의 추출물을 함유한 제형은 사람의 피부에서 자외선에 의한 홍반 유발을 억제하는 효과가 있음을 알 수 있다.From Table 13, it can be seen that the formulation containing one or more extracts selected from Bokbunja extract, Brussels berry extract, and Brussels berry extract have the effect of inhibiting erythema induced by ultraviolet light in human skin.
이러한 시험 결과들로부터, 본 발명의 복분자 추출물, 멍덕딸기 추출물 및 멍석딸기 추출물로부터 선택된 1종 이상을 피부 외용제 조성물에 함유함으로써, 피부 자극 및 염증을 유발하는 인자들을 억제할 수 있고, 이를 통해 다양한 피부 스트레스원 및 화장품 사용으로 인한 피부 세포의 자극 및 염증을 완화 또는 개선시키게 됨을 알 수 있다.From these test results, by containing at least one selected from the Bokbunja extract, Brussels berry extract, and Brussels berry extract of the present invention in the composition for external application of the skin, it is possible to suppress factors causing skin irritation and inflammation, through which various skin It can be seen that to reduce or improve the irritation and inflammation of skin cells due to the use of stress sources and cosmetics.
이상에서 설명한 바와 같이 복분자, 멍덕딸기 또는 멍석딸기 추출물과 같은 라스베리 추출물을 함유한 조성물은 내인성 염증매개인자의 생성을 억제하고, 자외선 등의 자극 또는 화장품 사용에 따른 피부 자극을 예방할 수 있는 효능을 지닌 화장료 조성물로서 사용할 수 있다.As described above, the composition containing raspberry extract, such as bokbunja, raspberry, or rapeberry extract, has the effect of inhibiting the production of endogenous inflammatory mediators and preventing skin irritation caused by ultraviolet rays or cosmetic use. It can be used as a cosmetic composition.
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