KR100702327B1 - Cosmetic material including extract of camellia flower for skin abirritation - Google Patents

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Abstract

본 발명은 동백꽃(Camellia Japonica L.)추출물을 함유하는 화장료용 피부 자극 완화제에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic skin irritation agent containing Camellia Japonica L. extract.

본 발명에 따른 동백꽃추출물은 항염증 작용 및 항알레르기 작용에 의한 피부 진정효과를 갖으며, 부작용이 매우 적어 성인뿐만 아니라 유소아에게도 적용가능하고, 피부에 도포시 염증, 알레르기, 부종, 홍반 등과 같은 자극의 완화와 예방 효과가 우수하므로 안전한 화장료로 사용된다.Camellia extract according to the present invention has a skin soothing effect by anti-inflammatory action and anti-allergic action, very little side effects can be applied to infants as well as adults, irritation such as inflammation, allergy, edema, erythema, etc. when applied to the skin It is used as a safe cosmetic because it has excellent relief and prevention.

동백꽃추출물, 피부자극완화, 항염증, 항알레르기, 화장료 Camellia extract, skin irritation relief, anti-inflammatory, anti-allergy, cosmetics

Description

자극완화 효과를 갖는 동백꽃 추출물을 함유하는 화장료 조성물{cosmetic material including extract of camellia flower for skin abirritation}Cosmetic material including extract of camellia flower for skin abirritation}

본 발명은 동백꽃(Camellia Japonica L.)추출물을 함유하는 화장료용 피부 자극 완화제에 관한 것이다. 보다 상세하게는 항염증작용, 항알레르기작용을 하며 피부에 도포시에 발생될 수 있는 염증, 알레르기, 부종, 홍반 등과 같은 피부자극의 예방 및 완화 효과가 우수하고, 부작용이 매우 적은 동백꽃추출물을 함유하는 화장료에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic skin irritation agent containing Camellia Japonica L. extract. More specifically, it has anti-inflammatory, anti-allergic effect, and has excellent effect of preventing and alleviating skin irritation such as inflammation, allergy, edema, erythema, etc., which may occur when applied to the skin, and contains camellia flower extract with very few side effects. It is about cosmetics.

사람의 피부표면은 피지선에서 분비되는 피지와 땀샘에서 나오는 수분이 자연적으로 잘 혼합된 피지막이 각질층을 덮고 있어서, 매끄럽고 윤기 있으며 촉촉한 상태로 유지된다. 이러한 피부 각질층의 수분 함량이 약 20% 일 때 피부는 가장 이상적이고 아름다운 상태가 되며, 피부 각질층의 수분 함량이 10% 이하로 떨어지게 되면 피부에서 각질이 떨어져 나가게 되고 이물질의 침투가 용이하게 되어 각종 염증 및 알레르기가 유발되기 쉬워진다. 특히, 나이가 들어감에 따라 피부의 신진대사가 원활하지 못하므로 각종 염증 및 알레르기는 가중되게 된다.The skin surface of the human skin is sebaceous, which is naturally mixed with sebum secreted from sebaceous glands and moisture from the glands, covering the stratum corneum, so that it remains smooth, shiny and moist. When the water content of the stratum corneum is about 20%, the skin becomes the most ideal and beautiful state.When the water content of the stratum corneum falls below 10%, the keratin is released from the skin and foreign matters are easily penetrated. And allergy is easy to induce. In particular, as the age of the skin metabolism is not smooth, various inflammation and allergies are aggravated.

또한, 건조한 실내환경, 공해, 자외선, 바람, 오용된 화장품이나 세제류 등 외부자극에 의해 피부가 민감해져가는 사람들이 증가하고 있다. 외부 자극에 의해 민감해진 피부는 홍반과 같이 단순히 가시적인 경우도 있으며, 또한, 가려움, 따가움 등과 같이 몹시 심하고 불쾌한 염증반응을 나타내는 경우가 있으므로 대중적인 피부 화장료 조성물을 사용하기에는 약간 부담스럽고 지속적으로 사용하는 것을 자제하게 된다.In addition, people are becoming more sensitive to skin by external stimuli such as dry indoor environment, pollution, ultraviolet rays, wind, misused cosmetics and detergents. The skin, which is sensitive by external stimuli, may be simply visible, such as erythema, and may have severe and unpleasant inflammatory reactions, such as itching and itching, so it may be a little burdensome and persistent to use popular skin cosmetic compositions. To refrain.

화장품은 피부를 보호하고 미화 청결을 위해 사용하는 제품이지만 화장품 조성물을 구체적으로 살펴보면, 본래의 피부 보호 목적과는 상이한 성분들이 제품형성에 필수 불가결한 존재로써 사용되고 있다. 예를 들면 가용화제, 유화제, 방부제, 향료, 자외선 차단제 및 기타 효능, 효과를 부여하기 위해 사용되는 여러 가지 부가물들을 들 수 있는데, 일반적으로 이러한 성분들이 피부에 염증, 알레르기, 뾰루지 또는 부종 등을 유발하는 주원인 물질로 알려져 있다.Cosmetics are products used to protect the skin and cleanse the beauty, but when looking at the cosmetic composition in detail, components different from the original skin protection purpose is used as essential to the product formation. For example, solubilizers, emulsifiers, preservatives, fragrances, sunscreens and other additives used to impart efficacy and effects, generally these ingredients may cause inflammation, allergies, rashes or edema to the skin. It is known to cause the main cause of the substance.

염증은 세포나 조직이 어떠한 원인에 의해 손상을 받으면 그 반응을 최소화하고 손상된 부위를 원상으로 회복시키려는 일련의 방어목적으로 나타나는 것이며 염증을 유발하는 원인으로 외상, 화상, 동상, 방사능 등에 의한 물리적 요인과 산이나 염기와 같은 화학물질에 의한 화학적 요인, 항체반응에 의한 면역학적 요인들이 있으며 그 외에 혈관이나 호르몬 불균형에 의해서도 일어난다.Inflammation is a series of defenses aimed at minimizing the response and restoring damaged areas when cells or tissues are damaged by any cause. Inflammation is the cause of inflammation, including physical factors such as trauma, burns, frostbite, and radiation. There are chemical factors caused by chemicals such as acids and bases, and immunological factors caused by antibody reactions. They can also be caused by vascular or hormonal imbalances.

히스타민은 가려움과 통증을 매개하는 물질로서 가장 잘 알려진 물질이다. 지금까지 밝혀진 바에 의하면 가려움증을 감지하는 특정한 수용기는 없으며, 국부적인 통증과 같이 상피세포나 진피와 표피사이의 간극에 존재하는 불특정한 자율신 경 말단에 의한 것으로 추측되고 있다. 가려움증과 통증을 매개하는 물질들은 주로 비만세포로부터 유리되며 Fcε RIα 수용체의 교차결합에 의해 유리된다. 또한, 히스타민은 Fcε RIα 수용체와는 별도로 기질 P, 간세포인자, 혈관작용성 장 펩티드 등의 염증 매개체에 의해서도 피부 비만 세포로부터 유리될 수 있다.Histamine is the most well known substance that mediates itching and pain. So far it has been found that there is no specific receptor for detecting itching, and it is presumed to be due to an unspecified autonomic nerve ending in the gap between epithelial cells or the dermis and epidermis, such as local pain. The substances that mediate itching and pain are mainly released from mast cells and released by cross-linking of the Fcε RIα receptor. In addition, histamine may be released from skin mast cells by inflammatory mediators such as substrate P, hepatocyte factor, vasoactive intestinal peptide and the like apart from the Fcε RIα receptor.

이에 대하여 현재까지 홍반이나 부종 같은 자극 및 염증을 완화시키는 목적으로 사용될 수 있는 화학물질로는 비스테로이드계 물질로서 프루페나믹산(flufenamic acid), 이부프로펜(ibuprofen), 벤지다민(benzydamine), 인도메타신(indomethacin)등이 있으며 스테로이드계 물질로서는 프레드니솔론(prednisolone), 덱사메타손(dexamethasone)등이 있고(김창종, 병태생리학, 한림상사, p61-69, 1988), 그 외에 알란토인, 아즈렌, ε-아미노키프론산, 하이드로코티존(ⅴ), 감초산 및 그 유도체(β-글리칠레친산, 글리칠레친산유도체)등도 항염증에 효과가 있는 것으로 알려져 있다.(광정무부, 신화장품학, 남산당, p162, 1993)To this end, chemicals that can be used to alleviate irritation and inflammation such as erythema and edema are nonsteroidal substances such as flufenamic acid, ibuprofen, benzydamine, and indomethacin. Indomethacin, and steroidal substances include prednisolone and dexamethasone. Lonic acid, hydrocortisone, licorice acid and its derivatives (β-glycileic acid, glycylinic acid derivatives) are also known to have anti-inflammatory effects (Gwang Jeong-dong, Shin Cosmetics, Namsan Sugar, p162, 1993).

그러나, 화장품에 있어서 피부 부작용 유발요인은 항상 잠재되어 있는 것이므로 이를 해결하기 위해 여러가지 연구가 진행되어 왔는데, 그 결과 항염증제로 사용되고 있는 인도메타신은 화장료에는 사용할 수 없는 물질이고 하이드로코티존은 사용량이 제한되어 있고 감초산 및 그 유도체는 안정화시키기 어렵거나 용해도가 좋지 않아 실제 제품화를 하는 경우 농도의 제한으로 인하여 실질적인 효과를 거두기가 어려운 점이 있는 등 지금까지 알려진 항염증제들은 피부안전성 면이나 화장료 배합시의 안정성면에서 대부분 문제점을 가지고 있어서 그 사용이 제한되고 있다.However, the cause of skin side effects in cosmetics is always latent, and various studies have been conducted to solve this problem. As a result, indomethacin, which is used as an anti-inflammatory agent, cannot be used in cosmetics, and hydrocortisone has a limited amount. Licorice acid and its derivatives are difficult to stabilize or have poor solubility, and thus, in actual production, anti-inflammatory agents are known to have a practical effect due to concentration limitation. It has a problem and its use is limited.

최근에는 소비자들의 욕구에 부응하기 위하여 자극 및 염증을 완화시키는 목적으로 사용될 수 있는 천연 원료를 이용한 화장료에 대한 연구개발이 활발히 진행되고 있다.Recently, research and development on cosmetics using natural raw materials that can be used for the purpose of alleviating irritation and inflammation in order to meet the needs of consumers has been actively conducted.

한편, 동백꽃은 차나무과에 속하며 높이가 7M에 달하는 상록소교목인 동백나무(Camellia Japonica L.)의 꽃으로서 말린 것은 한약명으로 산다화, 또는 홍다화라고도 한다. 동백나무는 우리나라의 울릉도, 제주도 및 남부 지방의 바닷가나 섬에서 자라며 개화기는 12월~5월이고 결실기는 9월~10월이다. 약재로 쓰이는 말린 동백꽃은 유연하고 좋은 향기가 나는데, 색이 붉고 곰팡이가 피지 않았으며 꽃봉오리가 크고 아직 피지 않은 것이 제일 높은 등급을 갖는다. 산다화의 맛과 성질은 달고 약간 매우며 서늘하다.On the other hand, camellia is a flower of Camellia Japonica L. , an evergreen sub-tree, which belongs to the tea tree family, and has a height of 7M. Camellia grows on the shores or islands of Korea's Ulleungdo, Jeju, and southern regions. The flowering period is from December to May and the fruiting season is from September to October. Dried camellia, used as a medicinal herb, has a supple and good fragrance. The reddish color is not moldy, the buds are large, and the highest grade is not yet blooming. The taste and nature of sandaflower is sweet, a bit very and cool.

동백꽃의 효능으로는 간경, 폐경에 들어가며 양혈, 지혈, 산어혈에 효과가 있다. 임상응용 및 용법으로는 토혈, 육혈, 붕루, 적리, 장풍하혈 등에 달여 복용하고 화상에는 갈아 들기름에 개어 바른다. <본초강목습유>에서는 치창출혈 치료에 보주산다를 갈아서 가루로 만들어 따뜻한 물을 부어서 복용한다고 하였다.The effect of camellia is liver and menopause, and it is effective for sheep blood, hemostasis, and acid fish. For clinical application and usage, it is taken on earth, blood, abolism, erythema, intestinal bleeding, etc., and burns with burned oil. In the Herbal Wood Milk Milk, it is said that the treatment of dental bleeding is made by grinding Boju Sanda into powder and pouring warm water.

동백꽃의 성분으로는 대표적으로 류코안토시아닌(leucoanthocyanin)과 안토시아닌(anthocyanin)을 들 수 있다(동양의학대백과, 경희대학교 출판국, 동양의학대사전편찬위원회, p540-541). 또한, 카멜린(camellin) B, 플라바놀(flavanol)로서 쿼세틴(quercetin), 캠페롤(kaemferol), 섹스안굴라레틴(sexangularetin) 및 페놀 화합물로서 ρ-하이드록시벤조산(ρ-hydroxybenzoic acid), 프로토카테큐산(protocatechuic acid), 갈산(gallic acid) 등과 그 밖에 스테롤(sterols), 28-노 르-올레이넨 트리테르펜(28-nor-oleanene triterpenes) 등이 함유되어 있다(Chem. Pham. Bull. 37(11) 3174-3176(1989), Chem. Pham. Bull. 44(10) 1899-1907(1996), YAKUGAKU ZASSHI, 104(2) 157-161(1984)).The components of the camellia are leucoanthocyanin and anthocyanin (Tongyang Medical University Encyclopedia, Kyung Hee University Publishing, Oriental Medical Dictionary Dictionary Committee, p540-541). In addition, camellin B, quercetin as flavanol, kaemferol, sexangularetin and phenol as phenolic compounds, ρ-hydroxybenzoic acid, proto Protocatechuic acid, gallic acid and other sterols and 28-nor-oleanene triterpenes are contained ( Chem. Pham. Bull. 37). (11) 3174-3176 (1989), Chem. Pham. Bull. 44 (10) 1899-1907 (1996), YAKUGAKU ZASSHI, 104 (2) 157-161 (1984)).

동백나무와 관련된 선행기술로는, 한국 내 자생 동백나무(Camellia Japonica L.)추출물의 항산화 및 항미생물 활성에 대한 논문(Korean J. Plant. Res. 17(3) 314-322(2004))이 있고, 대한민국 공개특허 제2004-101709호에는 동백나무 추출물을 안정화시킨 나노리포좀을 함유하는 화장료 조성물이 미백, 보습, 탄력 등의 노화방지에 효과가 있다고 기재되어 있으며, 일본국 공개특허 제2002-371092호에는 동백꽃추출물의 위장점막 보호제로의 용도가 개시되어 있으며, 일본국 공개특허공보 소55-099180호에는 동백꽃의 발효에 의한 차의 제조방법이 기재되어 있으며, 일본국 공개특허공보 소55-111758호에는 동백꽃으로부터의 유사 쵸콜렛을 제조하는 방법이 기재되어 있으나, 상기 선행기술들은 모두 본 발명에서 달성하고자 하는 피부자극 완화효과를 갖는 화장료와는 무관하다.Prior arts related to camellia have been described in Korean J. Plant. Res. 17 (3) 314-322 (2004) for the antioxidant and antimicrobial activities of Camellia Japonica L. extracts in Korea. In addition, Korean Patent Laid-Open Publication No. 2004-101709 discloses that a cosmetic composition containing a nanoliposomal stabilized Camellia extract is effective in preventing aging such as whitening, moisturizing, and elasticity, and Japanese Patent Laid-Open No. 2002-371092. Japanese Patent Laid-Open Publication No. 55-099180 discloses a method of making tea by fermentation of camellia, and Japanese Laid-Open Patent Publication No. 55-111758 No. describes a method for producing a similar chocolate from camellia flowers, but all of the prior art are irrelevant to cosmetics having a skin irritation relief effect to be achieved in the present invention.

이에 본 발명자들은 동백꽃 추출물의 용도에 대하여 계속 연구한 결과 피부에 안전성이 우수하며 화장료 배합시 보존안정화가 쉽고 실질적으로 우수한 피부자극완화 효과가 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.Accordingly, the present inventors continued to study the use of the camellia extract resulted in the excellent safety on the skin and easy to stabilize the preservation when formulating cosmetics and has a substantially superior skin irritation relief effect and completed the present invention.

본 발명의 목적은 동백꽃(Camellia Japonica L.)추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료용 피부자극 완화제를 제공하는 것이다. 보다 상세하게는 동백꽃추출물 을 함유함으로써 항염증작용, 항알레르기작용을 하여 피부 진정효과를 갖는 피부자극의 예방 및 완화 효과가 우수하며, 부작용이 매우 적은 안전한 화장료를 제공하는 것이다.An object of the present invention is to provide a cosmetic skin irritation relaxing agent containing Camellia Japonica L. extract as an active ingredient. More specifically, by containing a camellia extract, the anti-inflammatory action, anti-allergic action is excellent in the prevention and relief of skin irritation with skin soothing effect, and to provide a safe cosmetic with very few side effects.

본 발명은 동백꽃(Camellia Japonica L.)추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료용 피부 자극 완화제에 관한 것이다. 보다 상세하게는 항염증작용, 항알레르기작용을 하며 피부 진정효과를 갖는 동백꽃추출물을 함유함으로써 피부에 도포를 하게 되면 염증, 알레르기, 부종, 홍반 등과 같은 피부자극의 예방 및 완화 효과가 우수하며, 부작용이 매우 적어 성인뿐만 아니라 유소아에게도 적용가능한 안전한 화장료에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic skin irritation agent containing Camellia Japonica L. extract as an active ingredient. More specifically, it contains anti-inflammatory, anti-allergic, and camellia extracts that have a soothing effect on the skin. This very small topic relates to safe cosmetics that can be applied to infants as well as adults.

본 발명의 동백꽃 추출물은 다음과 같은 방법으로 제조한다.Camellia extract of the present invention is prepared by the following method.

1) 건조된 동백꽃을 중량에 대하여, 추출 용매로서 물이나 무수 또는 함수 에탄올, 메탄올, 프로판올, 부탄올, 아세톤, 에틸아세테이트, 헥산, 벤젠, 클로로포름, 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나이상의 용매를 5~20배 부피량을 가한다. 추출 방법으로는 냉각 콘덴서가 장치되어 용매가 증발되는 것을 방지한 상태에서 50~100℃, 3~20시간 가열하여 추출하거나 5~37℃에서 1~15일간 침적시켜 유효성분을 추출하는 방법을 사용할 수 있으며 두 추출방법을 모두 활용할 수도 있다. 이렇게 추출한 동백꽃 추출물을 냉각 콘덴 서가 달린 증류장치에서 증발되어 나오는 용매를 회수하면서 완전히 감압 농축한 후 동결건조나 분무 건조하여 건조 추출물을 얻는다.1) The dried camellia is selected by weight from the group consisting of water, anhydrous or hydrous ethanol, methanol, propanol, butanol, acetone, ethyl acetate, hexane, benzene, chloroform, glycerin, butylene glycol, and propylene glycol as extraction solvent. Add 5-20 times the volume of one or more solvents. Extraction method is a method of extracting by heating at 50 ~ 100 ℃, 3 to 20 hours in the state of preventing the evaporation of the solvent is equipped with a cooling condenser, or by extracting the active ingredient by deposition for 1 to 15 days at 5 ~ 37 ℃ You can also use both extraction methods. The Camellia extract thus extracted is concentrated under reduced pressure while recovering the solvent evaporated from the distillation apparatus equipped with a cooling capacitor, and then lyophilized or spray dried to obtain a dry extract.

2) 얻어진 추출물을 증류수에 현탁을 시킨 다음 헥산과 메틸렌클로라이드, n-부탄올을 이용하여 순차적으로 분획하였으며 n-부탄올 분획의 용매를 감압 농축한 후 동결건조 또는 분무 건조하여 건조 추출물을 얻는다.2) The obtained extract was suspended in distilled water, and then fractionated sequentially using hexane, methylene chloride and n-butanol. The solvent of the n-butanol fraction was concentrated under reduced pressure, and then lyophilized or spray dried to obtain a dry extract.

동백꽃 추출물은 고형분 환산으로 0.01 내지 10.0 중량%의 넓은 범위에서 적절히 선택하여 사용할 수 있으며 바람직하게는 3.0 내지 10.0 중량%를 사용한다.Camellia extract can be used as appropriate in a wide range of 0.01 to 10.0% by weight in terms of solid content, preferably 3.0 to 10.0% by weight.

본 발명의 화장료에는 이외에도 제제학적으로 알려져 있는 통상의 여러 가지 첨가제를 함유할 수 있으며 착색제, 착향제, 현탁화제, 유화제, 용해보조제, 안정제, 등장제, pH조절제, 점도조절제, 용제 등을 포함한다.The cosmetics of the present invention may contain various conventionally known additives and include coloring agents, flavoring agents, suspending agents, emulsifiers, dissolving aids, stabilizers, isotonic agents, pH adjusting agents, viscosity adjusting agents, solvents, and the like. .

또한, 본 발명의 화장료는 사용 용도와 사용방법에 따라 적절한 첨가제를 함유하여 여러 가지 종류의 화장료 조성물로 제조될 수 있다. 사용할 수 있는 제형으로는 목적에 따라 화장수(스킨로션), 영양로션, 영양크림, 맛사지 크림, 영양에센스, 유화형 화운데이션 등으로 제조하여 사용할 수 있으며, 유아전용 화장수(스킨로션), 로션, 크림, 자외선차단 로션, 자외선차단 크림 등으로 제조하여 사용할 수 있고, 또한, 유아전용 목욕 세정제, 샴푸, 비누 등으로 제조하여 사용할 수 있다.In addition, the cosmetic of the present invention may be prepared into various kinds of cosmetic compositions by containing an appropriate additive depending on the use and method of use. Formulations that can be used include lotion (skin lotion), nourishing lotion, nourishing cream, massage cream, nourishing essence, emulsified foundation, etc., for infants, lotion (skin lotion), lotion, cream, It can be manufactured and used as a sunscreen lotion, a sunscreen cream, etc., and can also be manufactured and used for bath cleaners, shampoos, soaps etc. for infants.

아래의 실시 예는 본 발명의 내용을 설명하나, 본 발명의 내용이 여기에 한정되지는 않는다.The following examples illustrate the content of the invention, but the content of the invention is not limited thereto.

참고실험예 1. 동백나무 각 부위에 대한 진피에서의 항염증 실험(IL-1α 방출량 측정)Reference Experimental Example 1. Anti-inflammatory test in dermis for each part of camellia (measured IL-1α release)

동백나무 각 부위에 대한 항염증 효과를 알아보기 위해 각 부위를 95% 에탄올로 추출하여 여과한 후 감압 농축 후 시료로 사용하였다. 각 부위별 추출물의 추출 조건은 같다. 진피를 배양하여 자극을 유발시킨 후 각 부위별 추출물의 IL-1α의 방출량을 알아보았다. In order to examine the anti-inflammatory effect on each part of the camellia, each part was extracted with 95% ethanol, filtered, concentrated under reduced pressure, and used as a sample. Extraction conditions of the extract for each site are the same. After culturing the dermis, the irritation was induced, and the release amount of IL-1α of each extract was examined.

IL-1α(interleukin-1α)는 전-염증 작용인자(pre-inflammatory mediator)로 작용하는 세포간 신호물질(cytokine)로 염증, 감염 등에 의한 자극에 골형성세포, 단핵세포, 대식세포, 각질형성세포, 간세포, 섬유아세포 등이 일시적으로 증가 생산한다. 또한 IL-1α는 상처의 재-상피화(re-epithelialization)의 잠재적인 유도체로서 작용할 뿐만 아니라 알레르기 반응과 염증성 반응 조절인자로서 백혈구 운동을 촉진시키는 류코트리엔 B4, 5-, 12-, 15 HETE와 같은 아라키돈산 리폭시게나제 대사산물의 생산을 증진시키는 것으로 알려져 있다. IL-1α (interleukin-1α) is an inter-inflammatory cytokine that acts as a pre-inflammatory mediator. Osteoblasts, monocytes, macrophages, keratinocytes are stimulated by inflammation and infection. Cells, hepatocytes, fibroblasts, etc. temporarily increase production. IL-1α also acts as a potential derivative of wound re-epithelialization, as well as leukotriene B 4 , 5-, 12-, 15 HETE, which promotes leukocyte movement as a regulator of allergic and inflammatory responses. It is known to enhance the production of arachidonic acid lipoxygenase metabolites.

TypeⅠ 콜라겐 매트릭스(Bioland, Korea)와 5배로 농축된 DMEM(Dubelcco's Modified Eagle Medium, GIBCO BRL, USA), 그리고 2.2% 탄산수소나트륨과 200mM HEPES, 0.05N 수산화나트륨으로 제조된 완충용액을 7:2:1로 섞어 만든 인간 섬유아세포 cell line(ATCC, Cat. No. CRL-2076) 을 밀도 1×105 cells/㎖로 혼합하여 직경 10mm의 인써트에 각각 200㎕의 섬유아세포가 혼합된 콜라겐용액을 넣어 진피를 제조한다. 진피 제조 후 10% FBS를 함유하는 DMEM를 2일마다 교체하여 7일간 배양한다. 배양된 진피위에 10 ㎕의 피부자극물질인 SLS(sodium lauryl sulfate)를 투여하고 4 시간 뒤 각각의 추출물을 10 ㎕ 적용한 후 37 ℃, 5% CO2에서 24 시간 동안 배양한다. SLS 와 추출물의 용매는 DMSO를 사용했으며 농도는 용액에 대한 독성 물질의 중량 퍼센트로 하였다. IL-1α는 배지 표본을 취하여 Human IL-1α assay kit (Endogen Inc. Boston, MA, USA)을 이용하였으며 ELISA-reader (enzyme-linked immunosorbent assay)로 450 nm에서 측정하였다. 그 결과는 표1에 나타내었다. A buffer solution prepared with Type I collagen matrix (Bioland, Korea) and 5-fold concentrated DMEM (Dubelcco's Modified Eagle Medium, GIBCO BRL, USA), 2.2% sodium bicarbonate, 200 mM HEPES, 0.05 N sodium hydroxide, Human fibroblast cell line (ATCC, Cat.No. CRL-2076) made of 1 was mixed at a density of 1 × 10 5 cells / ml, and the collagen solution containing 200 μl of fibroblasts was mixed in a 10 mm diameter insert. Prepare the dermis. After dermal preparation, the DMEM containing 10% FBS is replaced every 2 days and incubated for 7 days. 10 μl of skin stimulant SLS (sodium lauryl sulfate) was administered to the cultured dermis, and after 4 hours, 10 μl of each extract was incubated at 37 ° C. and 5% CO 2 for 24 hours. The solvent of SLS and extract was DMSO and the concentration was the weight percentage of the toxic substance in the solution. IL-1α was sampled using a human IL-1α assay kit (Endogen Inc. Boston, MA, USA) and measured at 450 nm by ELISA-reader (enzyme-linked immunosorbent assay). The results are shown in Table 1.

<표 1> 진피에서의 항염증 효과TABLE 1 Anti-inflammatory Effects in the Dermis

시 료sample 반응액중에 함유시킨 추출물의 최종농도(㎍/ml)Final concentration of the extract contained in the reaction solution (㎍ / ml) IL-1α 방출량(pg/ml)IL-1α release amount (pg / ml) SLS SLS 0.07%0.07% 8282 동백잎Camellia leaves 100100 7373 동백나무가지Camellia Branch 100100 7979 동백나무껍질Camellia bark 100100 7171 동백나무 뿌리Camellia root 100100 6969 동백나무 꽃Camellia Flower 100100 6565 동백나무 종자Camellia Seeds 100100 7575

표 1에서와 같이 동백나무꽃(이하 동백꽃이라 한다)에서 IL-1α 방출량이 가장 많이 감소하여 항 염증효과가 가장 좋은 것으로 나타났다.As shown in Table 1, IL-1α emission was decreased the most in camellia flower (hereinafter called camellia flower), which showed the best anti-inflammatory effect.

실시예 1.Example 1.

완전 건조시킨 동백꽃 500g 을 95% 에탄올 10kg에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 5시간 동안 끓여서 추출한 후 400 메쉬 여과포로 여과하고 상온으로 냉각하였다. 냉각한 후 15℃에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 와트만 2번 여과지로 여과 하였다. 이 추출물을 0.45㎛ 의 필터로 다시 여과한 후 냉각 콘덴서가 달린 증류장치에서 60℃로 감압 농축하여 동백꽃추출물 20.2g(건조중량)을 얻었다.500 g of completely dried camellia flower was placed in 10 kg of 95% ethanol, extracted by boiling in an extractor equipped with a cooling condenser for 5 hours, filtered through a 400 mesh filter cloth, and cooled to room temperature. After cooling, the mixture was left to stand at 15 ° C. for 7 days to ripen, and then filtered through Whatman No. 2 filter paper. The extract was filtered again with a 0.45 μm filter and concentrated under reduced pressure at 60 ° C. in a distillation apparatus equipped with a cooling condenser to obtain 20.2 g (dry weight) of camellia extract.

실시예 2.Example 2.

실시예 1의 감압농축물을 증류수에 현탁을 시켜 헥산 1kg을 사용하여 헥산 분획물을 제거한 다음 수층을 메틸렌클로라이드 1kg으로 현탁시켜 메틸렌클로라이드 층을 제거하고 수층을 수득하였다. 상기 수득된 수층에 n-부탄올 1kg을 현탁시켜 수층을 제거하고 n-부탄올 층을 취하여 이를 감압 농축하여 동백꽃 추출물 8.6g(건조중량)을 얻었다.The vacuum concentrate of Example 1 was suspended in distilled water to remove the hexane fraction using 1 kg of hexane, and then the aqueous layer was suspended with 1 kg of methylene chloride to remove the methylene chloride layer to obtain an aqueous layer. 1 kg of n-butanol was suspended in the obtained water layer to remove the water layer, and an n-butanol layer was taken and concentrated under reduced pressure to obtain 8.6 g (dry weight) of a camellia extract.

실시예 3~9Examples 3-9

하기 표 2의 용매를 사용하고 실시예 1과 동일한 방법으로 추출하여 그 결과를 하기 표 2에 기재하였다.Using the solvent of Table 2 below and extracted in the same manner as in Example 1 and the results are shown in Table 2 below.

<표 2> 실시예 3~9의 실험조건 <Table 2> Experimental conditions of Examples 3-9

용매menstruum 건조중량 [g]Dry weight [g] 실시예 3Example 3 정제수Purified water 13.213.2 실시예 4Example 4 30% 에탄올30% ethanol 21.621.6 실시예 5Example 5 30% 글리세린30% glycerin 19.319.3 실시예 6Example 6 30% 부틸렌글리콜30% Butylene Glycol 18.718.7 실시예 7Example 7 80% 메탄올80% methanol 19.819.8 실시예 8Example 8 80% 아세톤80% acetone 20.420.4 실시예 9Example 9 에틸아세테이트Ethyl acetate 13.713.7

상기 동백꽃추출물에 대하여 알레르기 및 염증으로 인한 손상으로부터의 피부보호 효과 측정을 위하여 다음과 같이 실험을 하였다.In order to measure the skin protection effect from the damage caused by allergy and inflammation for the camellia extract was tested as follows.

실험 1. 알레르기 유발 여부 평가(LLNA assay)Experiment 1. Assessment of allergen (LLNA assay)

동백꽃 추출물에 대한 알레르기 유발여부를 확인하기 위하여 국부임파절평가 (LLNA:local lymph node assay)를 실시하였다. 일주일간의 순화기간을 거친 마우스를 사용하여 3일 동안 하루 한번씩 시료(동백꽃추출물)를 마우스 귀에 25㎕씩 도포하였으며, 4일째에 임파절을 떼어내어 임파구를 분리한 후 5% 이산화탄소 배양기에서 24~48시간 배양을 하고 그 후에 증폭정도를 방사선 동위원소 [3H]-메칠티미딘 의 삽입량으로 측정하고 그 결과를 표 3에 나타내었다. 국부임파절평가(LLNA)결과는 대조군에 대한 시료군의 임파구 증폭정도로 나타내며 시료의 자극지수(S.I : stimulation index)가 3 이상일 경우 항원으로 간주한다.A local lymph node assay (LLNA) was performed to confirm allergy-induced camellia extract. 25 μl of a sample (camellia extract) was applied to the mouse ears once a day for three days using a mouse that had undergone a one-week period of purifying. After 4 days, the lymph nodes were removed and the lymphocytes were separated. After incubation, the degree of amplification was measured by the insertion amount of radioisotope [ 3 H] -methylthymidine, and the results are shown in Table 3. The local lymph node evaluation (LLNA) results indicate the lymphocyte amplification of the sample group relative to the control group and are considered to be antigens when the stimulation index (SI) of the sample is 3 or more.

<표 3> 동백꽃 추출물의 알레르기 유발 여부 평가 결과<Table 3> Evaluation Results of Allergy-induced Camellia Extract

시 료sample 동백꽃 추출물의 최종농도 (㎍/ml)Final concentration of camellia extract (㎍ / ml) 평균 cpmAverage cpm 자극지수(S.I)Stimulus Index (S.I) 에탄올(60%)Ethanol (60%) 100100 2261 ± 1212261 ± 121 -- 실시예 1 Example 1 100100 3215 ± 1253215 ± 125 1.421.42 실시예 2 Example 2 100100 2993 ± 2312993 ± 231 1.321.32 실시예 3 Example 3 100100 4238 ± 2414238 ± 241 1.871.87 실시예 4 Example 4 100100 4548 ± 3314548 ± 331 2.012.01 실시예 5 Example 5 100100 4522 ± 1354522 ± 135 2.002.00 실시예 6 Example 6 100100 4002 ± 1954002 ± 195 1.771.77 실시예 7 Example 7 100100 3566 ± 3013566 ± 301 1.581.58 실시예 8 Example 8 100100 4577 ± 3024577 ± 302 2.022.02 실시예 9 Example 9 100100 4321 ± 1254321 ± 125 1.911.91

※ cpm(counter per minute) : [3H]-메칠티미딘 이 세포 내로 삽입되는 양Cpm (counter per minute): The amount of [ 3 H] -methylthymidine inserted into the cell

※ S.I : 시료의 평균 cpm을 대조군의 평균 cpm으로 나눈 값※ S.I: Average cpm of sample divided by average cpm of control

표 3에서 보는 바와 같이 모든 동백꽃추출물의 자극지수(S.I)가 3 이하로서 알레르기 유발 가능성이 거의 없는 것으로 나타났다.As shown in Table 3, the stimulation index (S.I) of all camellia flower extracts was 3 or less, indicating that there is little possibility of causing allergy.

실험 2. 항알레르기 실험 (β-hexosaminidase 방출량 측정)Experiment 2. Antiallergic experiment (β-hexosaminidase release measurement)

β-헥소사미니다제(β-hexosaminidase)는 비만세포(mast cell)에 함유되어 있는 효소로서 비만세포가 면역반응에 의해 활성화되면 히스타민과 함께 방출된다. 그러므로, β-헥소사미니다제를 비만세포의 탈과립 지표로 사용할 수 있다. (Planta Med. 64, 577-578 (1998))β-hexosaminidase is an enzyme contained in mast cells and released together with histamine when mast cells are activated by an immune response. Therefore, β-hexosaminidase can be used as an indicator of degranulation of mast cells. (Planta Med. 64, 577-578 (1998))

RBL-2H3 cell을 10% FBS과 글루타민을 함유하고 있는 EMEM(Eagle's Minimum Essential Medium)배지로 배양한다. 24well plate에 세포를 well당 5x105 개로 분주하며 이 때 사용되는 배지는 EMEM배지에 0.5㎍/㎖의 마우스 단일클론 면역글로불린 E(mouse monoclonal IgE)가 함유된 것을 사용하고, 24시간 동안 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 배양한다. 세포를 well 당 시라가니안버퍼 I(siraganian buffer I)(pH 7.2, 염화나트륨 119 mM, 염화칼륨 5 mM, 염화마그네슘 0.4 mM, PIPES 25mM 및 수산화나트륨 40 mM 함유) 500㎕를 사용하여 헹구어 내고, 시라가니안 버퍼 II(글루코오스 5.6 mM, 염화칼륨 1 mM 및 0.1% BSA가 추가됨) 160㎕를 첨가한 후 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 10분 동안 배양한다. 동백꽃 추출물을 처리한 후 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 20분 동안 배양하고 10분간 항원(1㎍/㎖, DNP-BSA)을 처리한다. 10분간 빙욕(ice bath)을 시켜 반응을 정지시키고 원심분리를 한다. 상층액에 기질(1mM ρ-니트로페닐-N-아세틸-β-D-글루코사미니드) 20㎕를 처리한 후 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 1시간 배양하고 0.1M Na2CO3/NaHCO3를 넣어 반응을 정지시킨다. ELISA reader를 사용하여 405nm에서 흡광도를 측정하고 그 억제율을 다음과 같이 계산하였으며 그 결과는 표 4와 같다.Incubate the RBL-2H3 cells with EMEM (Eagle's Minimum Essential Medium) medium containing 10% FBS and glutamine. Dispense 5 x 10 5 cells per well into a 24 well plate and use the medium containing 0.5 µg / ml of mouse monoclonal immunoglobulin E in mouse EMEM medium. Incubate in a 5% CO 2 incubator. Cells are rinsed using 500 μl of siraganian buffer I (pH 7.2, 119 mM sodium chloride, 5 mM potassium chloride, 0.4 mM magnesium chloride, 25 mM PIPES and 40 mM sodium hydroxide) per well, and Shiraga 160 μl of Nian buffer II (added with 5.6 mM glucose, 1 mM potassium chloride and 0.1% BSA) is added and incubated for 10 minutes in a 37 ° C., 5% CO 2 incubator. After treating the camellia extract, it is incubated for 20 minutes in a 37%, 5% CO 2 incubator and treated with the antigen (1 μg / ml, DNP-BSA) for 10 minutes. The reaction is stopped and centrifuged by an ice bath for 10 minutes. The supernatant was treated with 20 μl of substrate (1 mM ρ-nitrophenyl-N-acetyl-β-D-glucosaminid), then incubated for 1 hour in a 5% CO 2 incubator at 37 ° C. and 0.1M Na 2 CO 3 / NaHCO Add 3 to stop the reaction. The absorbance was measured at 405 nm using an ELISA reader, and the inhibition rate was calculated as follows. The results are shown in Table 4.

※ 억제율(%) = {1-(B-C-D)/(A-C-D)}×100※ Inhibition Rate (%) = {1- (B-C-D) / (A-C-D)} × 100

A(대조군) : 동백꽃 추출물을 첨가하지 않은 것 (항원 IgE 반응 측정)A (control): without adding camellia extract (antigen IgE reaction measurement)

B(처치군) : 동백꽃 추출물을 첨가한 것 (항원 IgE 반응 측정)B (Treatment group): Added camellia extract (antigen IgE reaction measurement)

C(blank) : 동백꽃 추출물과 기질만 ELISA plate에 첨가한 것C (blank): Only camellia extract and substrate added to ELISA plate

D(무처치군) : 항원, IgE 및 동백꽃 추출물을 첨가하지 않은 것 D (untreated group): without adding antigen, IgE and camellia extract

<표 4> 동백꽃 추출물의 항알레르기 평가 결과<Table 4> Antiallergic Evaluation Results of Camellia Flower Extract

시 료sample 반응액중에 함유시킨 동백꽃추출물의 최종농도(㎍/ml)Final concentration of camellia flower extract in the reaction solution (㎍ / ml) 억제율(%) % Inhibition 실시예 1Example 1 200200 21.321.3 실시예 2Example 2 200200 45.745.7 실시예 3Example 3 200200 27.127.1 실시예 4Example 4 200200 34.834.8 실시예 5Example 5 200200 20.120.1 실시예 6Example 6 200200 15.315.3 실시예 7Example 7 200200 37.237.2 실시예 8Example 8 200200 39.539.5 실시예 9Example 9 200200 28,328,3

표 4와 같이 동백꽃추출물은 모두 β-헥소사미니다제의 방출을 억제하여 항알레르기 효과가 있는 것으로 나타났으며 특히 실시예 2는 45.7%로서 매우 높은 억제율을 보여주고 있다. As shown in Table 4, all camellia flower extracts have been shown to have an antiallergic effect by inhibiting the release of β-hexosaminidase, and in particular, Example 2 shows a very high inhibition rate as 45.7%.

실험3. 마우스 귀부종에 대한 항염증 실험Experiment 3. Anti-inflammatory test for mouse ear edema

동백꽃 추출물에 대한 항염증 효과를 알아보기 위하여 마우스 귀부종법을 실시하였다.Mouse ear edema was performed to investigate the anti-inflammatory effect of Camellia extract.

일주일간의 순화기간을 거친 마우스를 대상으로 하여 한 개의 시료당 3마리의 마우스를 사용하였다. 마우스 좌측귀를 대조부위, 우측귀를 시험부위로 하였으며 먼저 양쪽 귀의 두께를 측정하였다. 시료를 적용하기 전에 에탄올로 귀를 깨끗하게 세척하였으며 시료 20㎕/ear를 1일 1회 4일간 지속적으로 도포하였다. 마지막 도포 1시간 후에는, 좌측귀에는 에탄올을 우측귀에는 아라키돈산(Arachidonic acid)을 2㎎/ear을 도포하였으며 1시간 후에 귀의 부종(ear edema)정도를 마이크로미터로 양쪽 귀를 3회씩 반복하여 측정하였다. Three mice per sample were used for mice that had undergone one week of acclimation. The left ear of the mouse was the control site and the right ear was the test site, and the thickness of both ears was measured first. Ears were washed thoroughly with ethanol prior to application of the sample and 20 μl / ear of sample was continuously applied once daily for 4 days. One hour after the last application, ethanol was applied to the left ear and arachidonic acid to 2 mg / ear on the right ear. Measured.

항염효과는 아라키돈산 처리군을 기준으로 부종억제 정도로 판정하였으며 그 결과를 표 5에 나타내었다.Anti-inflammatory effect was determined as the degree of edema inhibition based on the arachidonic acid treatment group and the results are shown in Table 5.

<표 5> 국소적용에 의한 귀두께 및 염증 억제율TABLE 5 Ear thickness and inflammation inhibition rate by topical application

시 료sample 반응액중에 함유시킨 최종농도(㎍/ml)Final concentration in the reaction solution (㎍ / ml) 용매menstruum 귀두께 평균(㎛)Ear thickness average (㎛) 억제율(%)% Inhibition 동백꽃 추출물Camellia Extract 시료처리전Before sample processing 시료처리후After sample processing 인도메타신Indomethacin 1.01.0 에탄올ethanol 284284 421421 45.645.6 아라키돈산Arachidonic acid 2㎎/ear2mg / ear 에탄올ethanol 299299 551551 -- 실시예 1Example 1 1010 에탄올ethanol 279279 477477 21.421.4 실시예 2Example 2 1010 에탄올ethanol 283283 472472 25.025.0 실시예 3Example 3 1010 에탄올ethanol 279279 495495 14.314.3 실시예 4Example 4 1010 에탄올ethanol 288288 499499 16.416.4 실시예 5Example 5 1010 에탄올ethanol 284284 505505 12.412.4 실시예 6Example 6 1010 에탄올ethanol 294294 511511 13.813.8 실시예 7Example 7 1010 에탄올ethanol 295295 498498 19.619.6 실시예 8Example 8 1010 에탄올ethanol 293293 506506 15.315.3 실시예 9Example 9 1010 에탄올ethanol 295295 503503 17.417.4

※ 억제율(%) = (A―B) / A × 100※ Inhibition Rate (%) = (A―B) / A × 100

A : 대조군귀의 평균두께(아라키돈산 처리귀의 두께-비처리 귀의 두께)A: Average thickness of control ears (thickness of arachidonic acid treated ears-thickness of untreated ears)

B : 시료도포군 귀의 두께(에탄올 처리귀의 두께-비처리귀의 두께)B: thickness of sample-coated group ears (thickness of ethanol-treated ears-thickness of untreated ears)

표 5에 의하면 인도메타신보다는 낮지만 모든 시료에 있어서 12.4~25%의 항염증 억제효과가 있어 동백꽃추출물이 항염증에 대한 예방 및 치료 효과가 있음을 알 수 있으며 특히 실시예 2에서 25%의 높은 억제효과가 있음을 알 수 있다.According to Table 5, although it is lower than indomethacin, 12.4-25% of the anti-inflammatory effect is suppressed in all samples, and thus the camellia extract has a prophylactic and therapeutic effect on anti-inflammatory, and in particular, in Example 2, It can be seen that there is a high inhibitory effect.

실험4. 3차원 생인공피부에서의 항염증 효과(IL-1α 방출량 측정)Experiment 4. Anti-inflammatory effect on 3D bioartificial skin (measured IL-1α release)

IL-1α(interleukin-1α)는 전-염증 작용인자 (pre-inflammatory mediator)로 작용하는 세포간 신호물질(cytokine)로서 염증, 감염 등에 의한 자극에 의해 골형성세포, 단핵세포, 대식세포, 각질형성세포, 간세포, 섬유아세포 등이 일시적으로 증가함으로써 생산되는 물질이다. 또한 IL-1α는 상처의 재-상피화(re-epithelialization)의 잠재적인 유도체로서 작용할 뿐만 아니라 알레르기 반응과 염증성 반응 조절인자로서 백혈구 운동을 촉진시키는 류코트리엔 B4(leukotriene B4), 5-, 12-, 15 HETE와 같은 아라키돈산 리폭시게나제 대사산물의 생산을 증진시키는 것으로 알려져 있다. 3차원 인공피부를 배양하여 자극을 유발시킨 후 동백꽃 추출물에 의한 IL-1α방출량의 변화를 알아보았다. IL-1α (interleukin-1α) is an inter-inflammatory cytokine that acts as a pre-inflammatory mediator, and is a osteoblast, monocyte, macrophage, or keratinocyte caused by stimulation by inflammation or infection. It is a substance produced by temporarily increasing formation cells, hepatocytes, fibroblasts and the like. In addition, IL-1α is a member having a wound-leukotriene B 4 (leukotriene B 4), 5-, 12- , as well as to act as potential derivatives of epithelialization (re-epithelialization) promote leukocyte movement as allergic reactions and inflammatory response regulator And 15 are known to enhance the production of arachidonic acid lipoxygenase metabolites such as HETE. After stimulating the three-dimensional artificial skin, the changes of IL-1α release by camellia flower extracts were examined.

TypeⅠ 콜라겐 매트릭스(Bioland, Korea)와 5배로 농축된 DMEM(Dubelcco's Modified Eagle Medium, GIBCO BRL, USA), 그리고 2.2% 탄산수소나트륨과 200mM HEPES, 0.05N 수산화나트륨으로 제조된 완충용액을 7:2:1로 섞어 만든 인간 섬유아세포 cell line(ATCC, Cat. No. CRL-2076)을 밀도 1×105 cells/ml로 혼합하여 직경 10mm의 인써트(insert)에 각각 200㎕의 섬유아세포가 혼합된 콜라겐 용액을 넣어 진피를 제조한다. 진피 제조 후 10% FBS를 함유하는 DMEM배지를 2일마다 교체하여 7일간 배양한다. 배양된 진피위에 정상 각질세포를 3×105 세포/인써트로 접종한다. DMEM (10% FBS)와 K-SFM(Keratinocyte Serum Free Medium, GIBCO, USA) (이것은 EGF(epidermal growth factor) 및 BPE(bovine pituitary extract)와 함께 제공됨)를 1:1로 섞은 배지를 넣고 7일간의 잠수배양(submerge culture)을 한 후에 기체-액체 계면배양(air-liquid interface culture)을 하기 위하여 인써트 안의 배지는 제거하고 인써트 밖에만 잠수배양시 사용한 배지를 사용하여 14일 동안 기체-액체 계면배양을 하였다. 배양된 인공피부의 배양배지를 모두 제거한 다음 새 배지를 조직 배양 용기밖에 1.5 ㎖을 넣는다. 인써트 내에 피부자극물질로서 10 ㎕의 라우 릴황산나트륨(SLS : Sodium Lauryl Sulfate)을 투여하고 4 시간 뒤 동백꽃 추출물을 10 ㎕ 적용한 후 37 ℃, 5% CO2에서 24 시간 동안 배양한다. SLS 와 동백꽃 추출물의 용매는 DMSO를 사용했으며 농도는 용액에 대한 물질의 무게 퍼센트로 하였다. IL-1α방출량 측정을 위해 배지 표본을 취하여 Human IL-1α assay kit(Endogen Inc. Boston, MA, USA)을 이용하였으며 ELISA-reader(enzyme-linked immunosorbent assay)로 450 nm에서 측정하였고 그 결과는 표 6에 나타내었다. A buffer solution prepared with Type I collagen matrix (Bioland, Korea) and 5-fold concentrated DMEM (Dubelcco's Modified Eagle Medium, GIBCO BRL, USA), 2.2% sodium bicarbonate, 200 mM HEPES, 0.05 N sodium hydroxide, Human fibroblast cell line (ATCC, Cat.No. CRL-2076) mixed with 1 was mixed at a density of 1 × 10 5 cells / ml, and collagen with 200 μl of fibroblasts mixed in a 10 mm diameter insert. Prepare the dermis by adding the solution. After the dermal preparation, the DMEM medium containing 10% FBS was replaced every 2 days and cultured for 7 days. Normal keratinocytes are inoculated onto the cultured dermis with 3 × 10 5 cells / insert. 7 days in a medium containing DMEM (10% FBS) and K-SFM (Keratinocyte Serum Free Medium, GIBCO, USA) (provided with EGF (epidermal growth factor) and BPE (bovine pituitary extract)) in a 1: 1 mixture After the submerge culture of the medium, the medium in the insert was removed for air-liquid interface culture, and the gas-liquid interface culture was carried out for 14 days using the medium used for subculture only outside the insert. Was done. Remove all culture media from the cultured artificial skin, and then add 1.5 ml of fresh medium outside the tissue culture vessel. After inserting 10 μl of sodium lauryl sulfate (SLS: Sodium Lauryl Sulfate) as a skin irritant in the insert and applying 10 μl of camellia extract 4 hours later, the incubator is incubated at 37 ° C. and 5% CO 2 for 24 hours. The solvent of SLS and Camellia extract was DMSO and the concentration was the weight percentage of the substance to the solution. Media samples were taken for measurement of IL-1α release, and human IL-1α assay kit (Endogen Inc. Boston, MA, USA) was used and measured at 450 nm by ELISA-reader (enzyme-linked immunosorbent assay). 6 is shown.

<표 6> 3차원 생인공 피부에서의 항염증 효과Table 6 Anti-inflammatory Effects on Three-Dimensional Artificial Skin

시 료 sample 반응액중에 함유시킨 동백꽃 추출물의 최종농도(㎍/ml)Final concentration of camellia extract contained in the reaction solution (㎍ / ml) IL-1α 방출량(pg/ml)IL-1α release amount (pg / ml) SLS SLS 0.05%0.05% 6767 실시예 1Example 1 5050 6161 실시예 2Example 2 5050 5353 실시예 3Example 3 5050 6666 실시예 4Example 4 5050 6262 실시예 5Example 5 5050 5858 실시예 6Example 6 5050 5555 실시예 7Example 7 5050 5656 실시예 8Example 8 5050 5959 실시예 9Example 9 5050 6060

표 6에 의하면 실시예 2에서는 IL-1α의 방출량이 20% 이상 감소한 것으로 나타나는 등 모든 실시예에서 IL-1α의 방출량이 감소하였음을 알 수 있어 동백꽃추출물이 염증에 대한 자극을 억제하고 있음을 알 수 있다. According to Table 6, in Example 2, the release amount of IL-1α was found to be reduced by more than 20%, indicating that the release amount of IL-1α was decreased in all examples, indicating that the camellia extract inhibited inflammation. Can be.

실험5. 세포독성시험Experiment 5. Cytotoxicity Test

동백꽃 추출물에 대하여 단층 세포 배양에서의 세포독성을 측정 하였다.(MTT assay, J. Immunological Methods 65 , 55(1983) )Cytotoxicity in monolayer cell cultures was measured for the Camellia flower extract (MTT assay, J. Immunological Methods 65 , 55 (1983)).

MTT 검사법은 살아있는 세포의 수를 측정함으로서 세포 증식이나 독성에 많이 사용되는 실험법으로서 살아있는 세포는 미토콘드리아내에서 수용성이고 노란색의 염인 MTT(3-[4,5-dimethylthiazole-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide)가 숙신산탈수소효소에 의해 수불용성인 파란색의 포르마잔(formazan)유도체로 환원되는 원리를 이용하는 것이며 생성된 포르마잔 유도체가 생성되면 용해제를 넣고 용해시킨 후 흡광도를 측정하게 되는데 이 수치는 살아있고 대사가 왕성한 세포의 농도를 반영한다. The MTT test is a method widely used for cell proliferation and toxicity by measuring the number of living cells. The living cells are water-soluble and yellow salts of MTT (3- [4,5-dimethylthiazole-2-yl] -2,5 in the mitochondria. It is based on the principle that -diphenyltetrazolium bromide is reduced to water-insoluble blue formazan derivative by succinate dehydrogenase. It reflects the concentration of living and vigorous cells.

실험을 위하여, 인간 섬유아세포 cell line (ATCC, CRL-2076)을 1x105 cells/ml의 농도로 하여 24well plate에 접종하였다. 배지는 소혈청 10%를 함유한 DMEM (Dubelcco'S Modified Eagle Medium, BRL, USA)를 사용하였다. 접종 후 24시간이 경과되면 소혈청 2%를 함유한 DMEM로 교체하고, 동백꽃 추출물을 10㎕ 첨가 한 후 3일 동안 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 배양하였다. 배양이 끝난 후 상등액을 제거 하고 MTT 용액을 well당 1.0㎖씩 가하고 난 후 4시간이 경과되면 MTT를 제거하고 DMSO를 well당 1.0㎖씩 가한 후 하룻밤 37℃에서 인큐베이션시키고 570nm에서 흡광도를 측정하였다. For experiments, human fibroblast cell lines (ATCC, CRL-2076) were inoculated in 24well plates at a concentration of 1 × 10 5 cells / ml. Medium was used DMEM (Dubelcco'S Modified Eagle Medium, BRL, USA) containing 10% bovine serum. After 24 hours of inoculation, the cells were replaced with DMEM containing 2% of bovine serum, and 10 µl of Camellia flower extract was added, followed by incubation in 37 ° C. and 5% CO 2 incubator for 3 days. After incubation, the supernatant was removed, and MTT solution was added 1.0 ml per well. After 4 hours, MTT was removed, DMSO was added 1.0 ml per well, incubated at 37 ° C. overnight, and absorbance was measured at 570 nm.

이때 동백꽃 추출물의 용해 용매를 음성 대조군, 피부자극물질로 음이온 계면활성제인 소디움라우릴설페이트를 양성 대조군으로 하여, 같은 방법으로 실험을 진행하여 상대적인 흡광도의 차이로부터 세포증식 효과를 비교하였다. 각각의 물질에 대한 세포 생존율에 대한 결과를 표 7에 나타내었다. At this time, the dissolution solvent of the camellia flower extract was used as a negative control and sodium lauryl sulfate as an anionic surfactant as a skin irritant as a positive control. The results for cell viability for each material are shown in Table 7.

<표 7> 동백꽃 추출물의 단층 세포배양에서의 세포독성 측정Table 7 Measurement of Cytotoxicity in Monolayer Cell Culture of Camellia Extract

시 료sample 반응액중에 함유시킨 동백꽃 추출물의 최종농도(㎍/ml)Final concentration of camellia extract contained in the reaction solution (㎍ / ml) 세포생존율(%)Cell survival rate (%) SLS SLS 0.0025%0.0025% 5050 실시예 1Example 1 100100 9898 실시예 2Example 2 100100 103103 실시예 3Example 3 100100 9999 실시예 4Example 4 100100 101101 실시예 5Example 5 100100 101101 실시예 6Example 6 100100 9696 실시예 7Example 7 100100 102102 실시예 8Example 8 100100 6464 실시예 9Example 9 100100 8585

그 결과 실시예 2에서 100%이상의 세포생존율을 보여 주는 등 모든 실시예에서 향상된 세포생존율을 보여주고 있어 동백꽃추출물은 세포독성이 매우 적은 안전한 물질임을 나타내고 있다. As a result, in Example 2, the cell viability of 100% or more was shown, and the cell viability was improved in all the examples, indicating that the camellia flower extract was a very safe cytotoxic substance.

상기와 같이 동백꽃추출물은 안전하고 알레르기 유발을 하지 않으면서도 알레르기 및 염증으로 손상된 피부로부터 피부보호 효과가 있음을 확인하게 되었다. 따라서, 동백꽃추출물을 함유하는 처방을 다음과 같이 하고 그 처방에 의한 효과 실험을 하였다.As described above, camellia flower extract was found to have a safe and protective effect from skin damaged by allergy and inflammation without causing allergy. Therefore, the prescription containing camellia extract was performed as follows and the effect experiment by the prescription was done.

처방예 1.Prescription Example 1.

실시예 2의 동백꽃추출물을 함유한 화장료 중 화장수(스킨로션)의 처방예는 다음과 같다.Prescription example of a lotion (skin lotion) in the cosmetic containing the camellia extract of Example 2 is as follows.

번호number 원 료Raw material 함량(중량%)Content (% by weight) 1One 동백꽃추출물 (실시예 2) Camellia Flower Extract (Example 2) 3.03.0 22 글리세린 glycerin 3.03.0 33 부틸렌 글리콜 Butylene Glycol 2.02.0 44 프로필렌 글리콜 Propylene glycol 2.02.0 55 폴리옥시에칠렌 경화피마자유 Polyoxyethylene Cured Castor Oil 1.01.0 66 에탄올 ethanol 10.010.0 77 트리에탄올아민 Triethanolamine 0.10.1 88 방부제 antiseptic 미량a very small amount 99 색소 Pigment 미량a very small amount 1010 향료 Spices 미량a very small amount 1111 정제수 Purified water 잔량Remaining amount 합 계Sum 100.0100.0

<처방예 1의 제조방법><Production Method of Prescription Example 1>

상기 처방예 1의 11번에 2, 3, 4 및 8번을 순서대로 투입하고 교반하여 용해시킨다. 5번을 60℃ 정도 가열하여 용해시킨 후에 10번을 투입하고 이를 11번에 투입한다. 마지막으로 11번에 1, 6, 7 및 9번을 투입하고 충분히 교반한 뒤 숙성시킨다.2, 3, 4, and 8 are sequentially added to 11 of Formulation Example 1, followed by stirring to dissolve. After dissolving 5 times by heating about 60 ℃, add 10 times and add it to 11 times. Finally, 1, 6, 7, and 9 are added to No. 11, sufficiently stirred, and aged.

처방예 2.Prescription Example 2.

실시예 2의 동백꽃추출물을 함유한 화장료 중 영양로션의 처방예는 다음과 같다.Prescription example of nutrition lotion in cosmetics containing the camellia extract of Example 2 is as follows.

번호number 원 료Raw material 함량(중량%)Content (% by weight) 1One 동백꽃추출물 (실시예 2)Camellia Flower Extract (Example 2) 3.03.0 22 밀납Beeswax 1.01.0 33 폴리솔베이트 60Polysorbate 60 1.51.5 44 솔비탄 세스퀴올레이트Solbitan Sesquioleate 0.50.5 55 유동 파라핀Floating paraffin 10.010.0 66 소르비탄 스테아레이트Sorbitan stearate 1.01.0 77 친유형 모노스테아린산 글리세린Lipophilic Monostearic Acid Glycerin 0.50.5 88 스테아린산Stearic acid 1.51.5 99 글리세릴스테아레이트/피이지-400 스테아레이트Glyceryl Stearate / Pig-400 Stearate 1.01.0 1010 프로필렌글리콜Propylene glycol 3.03.0 1111 카르복시폴리머Carboxy Polymer 0.10.1 1212 트리에탄올아민Triethanolamine 0.20.2 1313 방부제antiseptic 미량a very small amount 1414 색소Pigment 미량a very small amount 1515 향료Spices 미량a very small amount 1616 정제수Purified water 잔량Remaining amount 합 계Sum 100.0100.0

<차방예 2의 제조방법><Method of Preparation Example 2>

상기 처방예 2의 10, 11, 13 및 16번을 혼합교반하면서 80~85℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후, 유화기를 작용시키고 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 12번을 역시 80~85℃사이로 가열하여 투입한 뒤 유화시킨다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 50℃ 까지 냉각한 뒤 15번을 투입하고 45℃까지 냉각한 뒤 14번을 투입하고 35℃가 되면 1번을 투입하며 계속하여 25℃까지 냉각한 뒤 숙성시킨다.10, 11, 13, and 16 of Formulation Example 2 were mixed and stirred and heated to 80-85 ° C., and then put into the manufacturing unit, and then the emulsifier was activated and 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 And No. 12 is also heated to 80 ~ 85 ℃ and then emulsified. After emulsification, cool down to 50 ℃ while stirring using a stirrer, add 15 times, cool down to 45 ℃, add 14 times, and when it reaches 35 ℃, add 1 and continue to cool down to 25 ℃ and mature. .

처방예 3Prescription Example 3

실시예 2의 동백꽃추출물을 함유한 화장료 중 영양크림의 처방예는 다음과 같다.Prescription example of nutrition cream in the cosmetic containing the camellia extract of Example 2 is as follows.

번호number 원 료Raw material 처방예3Prescription Example 3 처방예 3-1Prescription Example 3-1 비교처방예 1Comparative Prescription 1 1One 동백꽃추출물 (실시예 2)Camellia Flower Extract (Example 2) 5.05.0 10.010.0 -- 22 스테아린산Stearic acid 2.02.0 2.02.0 2.02.0 33 세틸알콜Cetyl alcohol 2.02.0 2.02.0 2.02.0 44 글리세릴모노스테아레이트Glyceryl Monostearate 2.02.0 2.02.0 2.02.0 55 폴리옥시에틸렌소르비탄모노스테아레이트Polyoxyethylene sorbitan monostearate 0.50.5 0.50.5 0.50.5 66 솔비탄세스퀴올레이트Sorbitan sesquioleate 0.50.5 0.50.5 0.50.5 77 글리세릴모노스테아레이트/글리세릴스테아레이트 /폴리옥시에틸렌스테아레이트Glyceryl Monostearate / Glyceryl Stearate / Polyoxyethylene Stearate 1.01.0 1.01.0 1.01.0 88 왁스Wax 1.01.0 1.01.0 1.01.0 99 유동파라핀Liquid paraffin 4.04.0 4.04.0 4.04.0 1010 스쿠알란Squalane 4.04.0 4.04.0 4.04.0 1111 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드Caprylic / Capric Triglycerides 4.04.0 4.04.0 4.04.0 1212 카르복시비닐폴리머Carboxy Vinyl Polymer 0.30.3 0.30.3 0.30.3 1313 부틸렌글리콜Butylene glycol 5.05.0 5.05.0 5.05.0 1414 글리세린glycerin 3.03.0 3.03.0 3.03.0 1515 트리에탄올아민Triethanolamine 0.50.5 0.50.5 0.50.5 1616 정제수Purified water 잔량Remaining amount 잔량Remaining amount 잔량Remaining amount 1717 water -- -- 10.010.0 합 계Sum 100.0100.0 100.0100.0 100.0100.0

<처방예 3, 3-1 및 비교처방예 1의 제조방법><Preparation Example 3, 3-1 and Comparative Method 1 Preparation Method>

1. 처방예 3 및 3-1 : 12, 13, 14 및 16번을 혼합교반하면서 80~85℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입을 한 후에 유화기를 작용시키고, 추가로 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 및 11번을 80~85℃사이로 가열하여 투입한 뒤 계속하여 15번을 투입하여 유화한다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 35℃까지 냉각하고 1번을 투입하여 25℃까지 냉각한 뒤 숙성시킨다. 1. Prescription Examples 3 and 3-1 : 12, 13, 14 and 16 while stirring and heating to 80 ~ 85 ℃ while mixing and stirring the emulsifier, and further 2, 3, 4, 5 , 6, 7, 8, 9, 10 and 11 is heated to 80 ~ 85 ℃ and then added 15 times to emulsify. After emulsification, the mixture is cooled to 35 ° C while stirring using a stirrer and 1 time is added to it, cooled to 25 ° C, and aged.

2. 비교처방예 1 : 12, 13, 14 및 16번을 혼합교반하면서 80~85℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입을 한 후에 유화기를 작용시키고, 추가로 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 및 11번을 80~85℃ 사이로 가열하여 투입한 뒤 계속하여 15번을 투입하여 유화한다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 35℃까지 냉각하고 17번을 투입하여 25℃까지 냉각한 뒤 숙성시킨다. 2. Comparative Example 1 : After mixing 12, 13, 14 and 16, and heated to 80 ~ 85 ℃ while stirring the emulsifier after the addition to the manufacturing unit, and 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 and 11 is heated to 80 ~ 85 ℃ and then added 15 times to emulsify. After emulsification, the mixture is cooled to 35 ° C while stirring using a stirrer, 17 times, cooled to 25 ° C, and aged.

처방예 4.Prescription Example 4.

실시예 2의 동백꽃추출물을 함유한 화장료 중 에센스의 처방예는 다음과 같다.Prescription example of the essence of the cosmetic composition containing the camellia extract of Example 2 is as follows.

번호number 원 료       Raw material 함량(중량%)Content (% by weight) 1One 동백꽃추출물 (실시예 2) Camellia Flower Extract (Example 2) 5.05.0 22 시토 스테롤Cytostolol 1.71.7 33 폴리글리세릴 2-올레이트 Polyglyceryl 2-oleate 1.51.5 44 세라마이드 Ceramide 0.70.7 55 스테아레스-4Steares-4 1.21.2 66 콜레스테롤cholesterol 1.51.5 77 디세틸포스페이트Dicetylphosphate 0.40.4 88 농글리세린Concentrated glycerin 5.05.0 99 마카다미아 오일Macadamia oil 15.015.0 1010 카르복시비닐폴리머Carboxy Vinyl Polymer 0.20.2 1111 산탄검 Xanthan Gum 0.20.2 1212 방부제 antiseptic 미량a very small amount 1313 향료  Spices 미량a very small amount 1414 정제수 Purified water 잔량Remaining amount 합 계Sum 100.0100.0

<처방예 4의 제조방법><Production Method of Prescription Example 4>

상기 처방예 4의 2, 3, 4, 5 및 6번을 일정한 온도에서 균질화하여 비이온계 양친매성 지질이라 칭한다. 상기 비이온계 양친매성 지질과 1, 7, 8 및 14번을 혼합하고 일정한 온도에서 균질화하여 마이크로플루다이저(microfluidizer)를 통과하고 이어 9번을 일정한 온도에서 서서히 첨가하여 균질화한 후 다시 마이크로플루다이저에 재차 통과 시킨다. 그리고 10, 11, 12 및 13번을 투입하여 분산시켜 안정화하고 숙성시킨다.2, 3, 4, 5 and 6 of Formulation Example 4 are homogenized at a constant temperature and are referred to as nonionic amphiphilic lipids. The nonionic amphiphilic lipids were mixed with Nos. 1, 7, 8, and 14, and homogenized at a constant temperature, passed through a microfluidizer, and then, No. 9 was gradually added at a constant temperature to homogenize, and then again the microflu. Pass it back through the die. 10, 11, 12 and 13 are added and dispersed to stabilize and mature.

실험예 1. 피부1차 자극 후 홍반 완화 효과 (폐쇄첩포실험)Experimental Example 1.Efficacy of erythema after primary skin stimulation (closed clam experiment)

처방예 3, 처방예 3-1 과 비교처방예 1의 영양크림에 피부자극제인 소디움라우릴설페이트(Sodium Laurly Sulfate)가 0.5%가 되도록 넣고 피부 도포시 피부자극 완화효과를 확인하기 위해서 다음과 같은 임상 확인 실험을 하였다. 아토피 피부염과 다른 습진의 현재병력 및 과거병력이 없는 현재 피부질환이 없다고 판단된 3세 이상의 건강한 남, 여 소아 및 어린이 20명(연령분포: 3~8세, 평균연령:5세, 남자 15명, 여자 5명)을 대상으로 하였다. Formulation Example 3, Comparative Example 3-1 and Comparative Example 1 in the nutritional cream Sodium Laurly Sulfate (sodium lauryl sulfate) to be 0.5% to confirm the skin irritation relief effect when applying the skin Clinical confirmation experiments were conducted. 20 healthy boys, girls, and children aged 3 or older (age: 3 to 8 years, average age: 5 years, 15 men) who were judged to have no current skin disease and no history of atopic dermatitis and other eczema. , 5 women).

피검자의 양측 아래팔 내측 부위에 시료를 도포하기 전에 홍반지수(erythema index: E-index)를 측정하고 큰 핀-챔버(large finn chamber; Epitest, Hyryla Finland)와 여과지를 이용하여 각 시료의 일정량(0.2g)을 24시간 동안 첩포를 부착하였다. 첩포를 제거하고 홍반지수측정은 공기의 이동이 없고 직사광선이 없는 공간에서 피검자가 검사 부위를 노출시킨 다음 30분 동안 안정을 취한 후 시행하였으며 첩포 제거 후 1일, 2일 및 1주일 경과후의 결과도 측정하였다. 피부분광계(Dermaspectrometer; Cortex Technology, Hadsund, Denmark)를 이용하여 측정을 한 후 그 결과를 다음 표 8과 같이 나타내었다. 실내온도는 22℃, 습도는 43% 이었다. The erythema index (E-index) is measured before application of the sample to the inner region of the lower forearm of the subject, and a large amount of each sample is measured using a large finn chamber (Epitest, Hyryla Finland) and filter paper. 0.2 g) was attached to the patch for 24 hours. The patch was removed and the erythema index measurement was performed after the subject exposed the test site in a space where there was no air movement and no direct sunlight, and then stabilized for 30 minutes.The results after 1, 2 and 1 week after removing the patch Measured. Measurements were made using a skin spectrometer (Dermaspectrometer; Cortex Technology, Hadsund, Denmark) and the results are shown in Table 8 below. The room temperature was 22 ° C and the humidity was 43%.

표 8. 피부1차 자극성 완화 시험결과Table 8. Result of skin primary irritation relief test

시 료 sample BLBL D0D0 D1D1 D2D2 W1W1 비교처방예 1   Comparative Prescription 1 9.79.7 11.811.8 12.612.6 12.312.3 10.510.5 처방예 3  Prescription Example 3 9.99.9 12.112.1 11.411.4 11.111.1 10.210.2 처방예 3-1  Prescription Example 3-1 9.59.5 11.611.6 10.210.2 10.110.1 1010

BL : 기준(baseline)BL: baseline

D0 : 패치 제거 후 30분 경과의 경우D0: 30 minutes after patch removal

D1 : 패치 제거 후 1일 경과의 경우 D1: 1 day after patch removal

D2 : 패치 제거 후 2일 경과의 경우D2: 2 days after patch removal

W1 : 패치 제거 후 1주일 경과의 경우W1: 1 week after patch removal

상기 표 8의 조사결과로부터 동백꽃 추출물이 첨가되지 않은 비교처방예 1의 화장료보다, 첨가된 처방예 3의 화장료 특히 처방예 3-1의 화장료가, 피부에 많은 손상을 입히는 염증생성 유발 피부자극 물질로부터의 피부 자극 완화 효과가 우수하다는 것을 알 수 있다.Inflammation-producing skin irritation substance that the cosmetics of Formulation Example 3, in particular, the cosmetics of Formulation Example 3-1, do more damage to the skin than the cosmetics of Comparative Formula 1, from which the camellia extract was not added It can be seen that the skin irritation relieving effect from the is excellent.

실험예 2. 피부 자극 실험 (stinging test)Experimental Example 2. Skin irritation test (stinging test)

젖산에 민감한 자극을 보이는 피실험자를 먼저 비누 세안을 시킨 후 항온 항습실(21℃, 47% 상대습도)에서 15분간 적용시켰다. Subjects showing lactic acid-sensitive irritation were first washed with soap and then applied for 15 minutes in a constant temperature and humidity room (21 ° C, 47% relative humidity).

처방예 3, 처방예 3-1 과 비교처방예 1의 영양크림에 피부자극제인 젖산이 6.0% 되도록 넣고 피부 도포시 피부자극 완화효과를 확인하기 위해서 젖산에 민감한 반응을 보이는 남, 여 소아 및 어린이 15명(연령분포: 5~8세, 평균연령:7세, 남자 12명, 여자 3명)을 대상으로 하여 다음과 같은 임상 확인 실험을 하였다. Male, female children and children who are sensitive to lactic acid in order to confirm the skin irritation-reducing effect when applying skin stimulation to 6.0% lactic acid as a skin stimulant in the nutritional cream of Prescription Example 3 and Comparative Example 3-1 Fifteen patients (age distribution: 5 ~ 8 years old, average age: 7 years old, 12 males, 3 females) were tested as follows.

부직포에 각각 400㎕씩 도포한 후 따가움과 가려움을 잘 느낀다고 보고 된 코 주변과 뺨에 부직포를 붙인 후 20초경과 후에 제거하였다. 부직포 제거 후 경과 시간대 별로 (10초, 2분 30초, 5분, 8분) 하기 표 9의 기준에 의거하여 피시험자의 주관적 판정으로 따가움, 가려움 정도를 측정하였으며 이를 하기 표 10에 나타내고 이들로부터 항자극율을 구하여 표 11에 정리하였다. 400 μl each was applied to the nonwoven fabric, and after 20 seconds after attaching the nonwoven fabric around the nose and on the cheek, which was reported to feel good tingling and itching, it was removed. After removal of the nonwoven fabric (10 seconds, 2 minutes 30 seconds, 5 minutes, 8 minutes) on the basis of the criteria in Table 9 to measure the tingling, itching degree according to the subjective judgment of the subjects are shown in Table 10 below The anti-stimulation rate was calculated and summarized in Table 11.

* 항자극율=(대조예의 자극지수-처방예의 자극지수)x100/대조예의 자극지수* Anti-stimulation rate = (control stimulus index-prescription stimulus index) x100 / control stimulus index

표 9. 따가움, 가려움의 자극지수 Table 9. Stimulation Index of Stinging and Itching

따가움, 가려움 지수Stinging, Itching Index 판단기준Judgment 00 아무런 느낌이 없다No feeling 1One 미약하게 따끔거리거나 가렵다Slight tingling or itching 22 따끔거리거나 가렵다Tingling or itching 33 심하게 따끔거리거나 가렵다Severe tingling or itching

표 10. 각 처방의 젖산에 대한 자극 지수Table 10. Irritation index for lactic acid in each prescription

구분division 비교 처방예 1 Comparative Prescription Example 1 처방예 3  Prescription Example 3 처방예 3-1  Prescription Example 3-1 시간time 10초10 sec 2.5분2.5 minutes 5분5 minutes 8분8 minutes 10초10 sec 2.5분2.5 minutes 5분5 minutes 8분8 minutes 10초10 sec 2.5분2.5 minutes 5분5 minutes 8분8 minutes 시간별Hourly 자극지수Stimulus index 1.21.2 2.02.0 1.41.4 1.01.0 1.01.0 1.31.3 1.11.1 0.50.5 1.01.0 1.11.1 1.01.0 0.20.2 평균지수Average index 1.41.4 0.980.98 0.830.83

* 대조예(젖산 6.0%)의 자극 지수 : 1.81* Stimulation index of the comparative example (lactic acid 6.0%): 1.81

표 11. 각 처방의 젖산에 대한 항자극율 Table 11. Anti-Stimulus Rates for Lactic Acid in Each Prescription

시 료  sample 항자극율 (%)Anti-irritation rate (%) 비교 처방예 1    Comparative Prescription Example 1 22.622.6 처방예 3   Prescription Example 3 45.945.9 처방예 3-1 Prescription Example 3-1 54.154.1

이와 같이 동백꽃추출물이 함유된 처방예는 자극지수가 0.98 및 0.83으로서 함유되지 아니한 처방예의 1.4보다 자극지수가 낮음을 알 수 있으며, 시간별 자극지수에 있어서도 동백꽃추출물이 함유된 처방예가 함유되지 아니한 처방예보다 10초 후부터 8분까지 항상 자극지수가 낮음을 알 수 있고, 따라서, 항자극율에 있어서도 동백꽃추출물이 함유된 처방예가 함유되지 아니한 처방예보다 2배이상 큰 것을 알 수 있으며 특히 함유량이 많은 처방예 3-1은 그 효과가 더 큰 것임을 알 수 있어 이는 동백꽃추출물에 의한 효과라고 할 수 있다. 또한, 항자극율이 높아 성인뿐만 아니라 유소아에게도 적용 가능한 것이라 할 수 있다. As described above, the prescription example containing camellia extract showed that the stimulation index was lower than 1.4 of the prescription example without the stimulation index of 0.98 and 0.83, and the prescription example containing no camellia extract even in the hourly stimulation index. It can be seen that the stimulation index is always lower from 10 seconds to 8 minutes, and therefore, even in the anti-irritation rate, it can be seen that the prescription example containing camellia extract is more than twice as large as the prescription example without containing. Example 3-1 shows that the effect is greater, which can be said to be due to the camellia extract. In addition, the high anti-stimulation rate is applicable to infants as well as adults.

본 발명은 동백꽃(Camellia Japonica L.)추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료용 피부 자극 완화제에 관한 것으로서, 상기 동백꽃추출물은 항염증작용, 항알레르기작용을 하며 피부 진정효과를 가지며 따라서 피부에 도포시 염증, 알레르기, 부종, 홍반 등과 같은 피부자극의 완화와 예방 효과가 우수하고, 또한, 부작용이 매우 적어 성인뿐만 아니라 유아의 피부에 있어서도 안전하게 피부자극을 완화 시킬 수 있는 화장료를 제공하는 매우 유용한 발명이다.The present invention relates to a cosmetic skin irritation inhibitor containing Camellia Japonica L. extract as an active ingredient, the camellia extract has an anti-inflammatory, anti-allergic effect and has a soothing effect on the skin and thus inflammation upon application to the skin. It is a very useful invention that provides a cosmetic that can alleviate the skin irritation, such as allergies, edema, erythema and the like, and also has a very low side effects, so as to safely alleviate the skin irritation in the skin of infants as well as adults.

Claims (7)

동백꽃추출물을 함유하는 화장료용 피부자극완화제.A skin irritant for cosmetics containing camellia extract. 제 1 항에 있어서, 동백꽃 추출물은 건조된 동백꽃에 5~20배 부피량의 용매를 가하고 50~100℃에서 3~20시간 가열하여 추출하는 방법 및 건조된 동백꽃을 5 내지 37℃에서 1 내지 15일간 용매에 침적시켜 추출하는 방법 중에서 선택된 1이상의 방법으로 추출한 것임을 특징으로 하는 화장료용 피부자극완화제.According to claim 1, Camellia extract is a method of extracting by heating a dried camellia flower 5-20 times the volume of the solvent and heated for 3 to 20 hours at 50 ~ 100 ℃ and the dried camellia flowers at 1 to 15 at 5 to 37 ℃ Skin irritation emollient for cosmetics, characterized in that extracted by one or more methods selected from the method of immersion in a daily solvent extraction. 제 2 항에 있어서, 제2항에 기재된 방법으로 얻은 추출물을 추가로 헥산, 메틸렌클로라이드 및 n-부탄올을 이용하여 순차적으로 분획한 후, 수득한 n-부탄올 분획물임을 특징으로 하는 화장료용 피부자극완화제.The cosmetic skin stimulant according to claim 2, wherein the extract obtained by the method according to claim 2 is further fractionated with hexane, methylene chloride and n-butanol, and then obtained n-butanol fraction. . 제 1 항에 있어서, 피부자극완화는 피부에서의 항염증임을 특징으로 하는 화장료용 피부자극완화제.The method of claim 1 wherein the skin irritation relief is a skin irritant for cosmetics, characterized in that the anti-inflammatory in the skin. 제 1 항에 있어서, 피부자극완화는 피부에서의 항알레르기임을 특징으로 하는 화장료용 피부자극완화제.The method of claim 1, wherein the skin irritation relief is a skin irritant for cosmetics, characterized in that the anti-allergic in the skin. 제 1 항에 있어서, 피부자극 완화제는 화장수, 영양로션, 영양크림, 맛사지 크림, 영양에센스, 유화형 화운데이션, 자외선차단 로션, 자외선차단 크림, 유아전용 목욕 세정제, 샴푸 및 비누로부터 선택된 것임을 특징으로 하는 화장료용 피부자극완화제.The method of claim 1, wherein the skin irritant is selected from a lotion, nutrition lotion, nutrition cream, massage cream, nutrition essence, emulsifying foundation, sunscreen lotion, sunscreen cream, baby bath cleaner, shampoo and soap. Skin irritant for cosmetics. 제 1 항에 있어서, 동백꽃추출물은 건조 중량으로서 0.01 - 10.0 %(w/v) 함유한 것임을 특징으로 하는 화장료용 피부자극완화제.The cosmetic skin irritant according to claim 1, wherein the camellia extract contains 0.01 to 10.0% (w / v) as dry weight.
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