KR20020089412A - 환원된 보조인자를 검출하기 위한 시약 및 방법 - Google Patents

환원된 보조인자를 검출하기 위한 시약 및 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20020089412A
KR20020089412A KR1020027012698A KR20027012698A KR20020089412A KR 20020089412 A KR20020089412 A KR 20020089412A KR 1020027012698 A KR1020027012698 A KR 1020027012698A KR 20027012698 A KR20027012698 A KR 20027012698A KR 20020089412 A KR20020089412 A KR 20020089412A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
electron transfer
signal generation
transfer agent
generation system
reagent
Prior art date
Application number
KR1020027012698A
Other languages
English (en)
Inventor
어우양톈메이
Original Assignee
라이프스캔, 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 라이프스캔, 인코포레이티드 filed Critical 라이프스캔, 인코포레이티드
Publication of KR20020089412A publication Critical patent/KR20020089412A/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
    • C12Q1/32—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving dehydrogenase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/902—Oxidoreductases (1.)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/902—Oxidoreductases (1.)
    • G01N2333/90212—Oxidoreductases (1.) acting on a sulfur group of donors (1.8)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

본 발명에 의해 시그날 생성 시스템, 시약 조성물, 시험 스트립 및 이의 키트 뿐만 아니라, 분석물 검출시 이의 이용방법이 제공된다. 본 시그날 생성 시스템은 하나 이상의 제1 전자 전달제 및 제2 전자 전달제와 산화환원 지시제를 가짐을 특징으로 하며, 수 많은 바람직한 양태에서 본 시스템은 예를 들면, 페나진 화합물 및 디아포라제와 같은 단백질성 전자 전달제 및 비단백질성 전자 전달제를 포함한다. 수 많은 바람직한 양태에서, 본 시스템 및 키트는 효소 보조인자 및 분석물 산화 활성을 갖는 효소(예: 분석물 탈수소효소)중 하나 이상 또는 종종 둘 다를 추가로 포함한다. 본 시스템, 시약 조성물, 시험 스트립 및 키트는 예를 들면, 혈액 또는 이의 분획물과 같은 생리학적 시료와 같은 시료내의 다양한 분석물의 검출시 사용할 수 있다.

Description

환원된 보조인자를 검출하기 위한 시약 및 방법{Reagents and methods for detecting a reduced cofactor}
예를 들면, 혈액 또는 혈액에서 유도된 생성물과 같은 생리학적 유체의 분석물 검출은 오늘날 사회에 있어서 중요성이 크게 증가하고 있는 것 중의 하나이다. 분석물 검출 분석법은 임상 실험 시험, 가정용 시험 등을 포함하는 다양한 적용시에 그 이용을 찾을 수 있는데, 이러한 시험의 결과는 다양한 질병의 상태를 진단하고 치료하는데 있어서 중요한 역할을 한다. 중요한 분석물로는 알코올, 포름알데하이드, 글루코스, 글루타민산, 글리세롤, 베타-하이드록시부티레이트, L-락테이트, 류신, 말산, 피루브산, 스테로이드 등이 있다. 이렇게 분석물 검출의 중요성이 더해감에 따라, 임상용 및 가정용 둘 다를 위한 다양한 분석물 검출 프로토콜(protocol) 및 장치가 개발되어 왔다. 지금까지 개발되어 온 수 많은 프로토콜 및 장치에는 혈액과 같은 생리학적 시료내의 중요한 분석물의 존재 여부를 확인하기 위한 시그날 생성 시스템(signal producing system)이 사용된다.
서로 다른 다양한 분석물의 검출시 사용되는 시그날 생성 시스템의 하나의 형태는 탈수소효소가 측정하려는 분석물을 산화시킴과 동시에 효소 보조인자[예: NAD(P)+]를 환원시키는 형태이다. 그 다음, 환원된 형태의 보조인자[예: NAD(P)H]는 산화환원 지시제(redox indicator)(예: 테트라졸륨 염)에 전자를 전달하는 보조인자 산화제(예: 페나진 메토설포네이트 또는 디아포라제)와 후속적으로 반응하여 검출가능한 생성물을 생성시킴으로써 검출된다.
현재까지 이와 같이 다양한 시그날 생성 시스템이 광범위한 다양한 분석물들을 검출하는데 사용하기 위해 개발되어 왔지만, 이러한 시스템의 추가적인 발전이 지속적으로 요구되고 있다. 예를 들면, 향상된 반응 속도 및 보다 낮은 비용을 제공하는 시그날 생성 시스템이 가장 중요할 것이다.
관련 문헌
미국 특허 제4,629,697호, 제5,126,247호 및 제5,902,731호를 포함한다. 또한, 다음 문헌을 참조한다[참조: Raap et al., Histochem. J.(1983) 15:881-893].
발명의 요약
본 발명에 의해 시그날 생성 시스템, 시약 조성물, 시험 스트립(test strip) 및 이의 키트(kit) 뿐만 아니라, 분석물 검출시 이의 이용방법이 제공된다. 본 시그날 생성 시스템은 하나 이상의 제1 전자 전달제(electron transfer agent) 및 제2 전자 전달제, 및 산화환원 지시제를 가짐을 특징으로 하며, 수 많은 바람직한 양태에서 본 시스템은 예를 들면, 페나진 화합물 및 디아포라제(diaphorase)와 같은 단백질성 전자 전달제 및 비단백질성 전자 전달제를 포함한다. 수 많은 바람직한 양태에서, 본 시스템 및 키트는 효소 보조인자 및 분석물 산화 활성을 갖는 효소(예: 분석물 탈수소효소) 둘 다를 추가로 포함한다. 본 시스템, 시약 조성물, 시험 스트립 및 키트는 예를 들면, 혈액 또는 이의 분획물과 같은 생리학적 시료내의 다양한 분석물의 검출시 사용할 수 있다.
본 발명의 분야는 분석물 검출, 특히 분석물 검출에 사용하기 위한 시약 시스템이다.
도 1은 본 발명에 따른 시험 스트립에서 관찰된 반응 속도 대 PMS와 디아포라제를 모두 포함하는 시험 스트림에 있어서의 이론적 예상 반응 속도를 도식적으로 나타낸 것인데, 예를 들면, PMS 및 디아포라제와 같은 비단백질성 전자 전달제 및 단백질성 전자 전달제 둘 다를 사용함으로써 반응 속도의 예상치 못한 증가가 제공된다는 사실을 명확히 나타내고 있다.
본 발명에 의해 시그날 생성 시스템, 시약 조성물, 시험 스트립 및 이의 키트 뿐만 아니라, 분석물 검출시 이의 이용방법이 제공된다. 본 시그날 생성 시스템은 하나 이상의 제1 전자 전달제 및 제2 전자 전달제와 산화환원 지시제를 가짐을 특징으로 하며, 수 많은 바람직한 양태에서 본 시스템은 예를 들면, 페나진 화합물 및 디아포라제와 같은 단백질성 전자 전달제 및 비단백질성 전자 전달제를 포함한다. 수 많은 바람직한 양태에서, 본 시스템 및 키트는 효소 보조인자 및 분석물 산화 활성을 갖는 효소(예: 분석물 탈수소효소) 둘 다를 추가로 포함한다. 본 시스템, 시약 조성물, 시험 스트립 및 키트는 예를 들면, 혈액 또는 이의 분획물과 같은 생리학적 시료와 같은 시료내의 다양한 분석물의 검출시 사용할 수 있다.
본 발명을 추가로 상세히 설명하기 전에, 본 발명은 하기 설명한 본 발명의 특정 양태로 국한되지 않으며, 청구항의 범주내에 여전히 속하는 다양한 특정 양태가 있을 수 있다는 사실을 주지해야 한다. 또한, 사용된 용어는 특정 양태를 설명하기 위해서이며, 이로써 한정하기 위한 것은 아니다라는 사실을 주지해야 한다. 그 대신, 본 발명의 범주는 청구항에 의해 설정될 것이다.
본 명세서 및 청구항내에서, 문맥상 달리 명확하게 명기되어 있지 않는 경우에는, 단일 참조문헌은 다수의 참조문헌을 포함한다. 달리 정의하지 않는 경우, 본원에 사용된 모든 기술적 용어 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 숙련가에게 익히 공지된 것과 동일한 의미를 갖는다.
시그날 생성 시스템
상기 요약한 바와 같이, 본 발명에 의해 시료중 환원된 효소 보조인자의 존재 여부를 검출할 수 있는 시그날 생성 시스템이 제공된다. 시그날 생성 시스템은 적용되는 경우 동시에 작용하여 당해 시료중 특정한 분석물의 존재 여부 및 양을 나타내는 검출가능한 시그날을 생성시킬 수 있는 2 이상의 화합물 또는 분자의 집합물을 의미한다. 용어 시그날 생성 시스템은 시그날 생성 시스템의 모든 시약 구성 성분의 혼합물 뿐만 아니라 하나 이상의 시약 구성 성분이 나머지 시약 구성 성분과 분리되어 있는 시스템(예를 들면, 키트로 제공됨) 둘 다를 포함하는 의미로 폭 넓게 사용된다.
본 시그날 생성 시스템의 특징은 서로 다른 2개의 전자 전달제가 존재한다는 사실이다. 전자 전달제란 환원된 효소 보조인자로부터 산화환원 지시제로 전자를 수소화물 형태로 전달할 수 있는 화합물 또는 분자를 의미한다. 본 시그날 생성 시스템에서, 서로 다른 전자 전달제중 제1 전자 전달제는 저분자량의 분자이며, 제2 전자 전달제는 고분자량의 분자이다. 본 명세서내에서, 저분자량이란 약 2000달톤(dalton)을 초과하지 않는 분자량을 의미하는데, 통상적으로는 약 1000달톤이며, 많은 양태에 있어서는 약 500달톤이다. 고분자량이란 약 5000달톤 이상의 분자량을 뜻하며, 많은 양태에 있어서는 10,000 또는 20,000달톤 이상이다. 고분자량의 전자 전달제의 분자량은 종종 약 100,000달톤을 초과하지 않는다. 수 많은 양태에서, 저분자량의 전자 전달제는 비단백질성 화합물이며, 고분자량의 전자 전달제는 단백질성 화합물이다. 단백질성이란 폴리펩타이드 또는 이의 중합체성 모방물을 의미한다.
다양한 저분자량의 비단백질성 전자 전달제가 중요하다. 이러한 시약들로는 리보플라빈(RBF), 알록사진(ALL) 및 루미크롬(LC)과 같은 플라빈; 페나진, 페나진 메토설페이트(PMS), 페나진 에토설페이트, 메톡시페나진 메토설페이트 및 사프라닌과 같은 페나진; 메틸-1,4-나프톨(메나디온), 페노티아진(예 PT 및 이의 라디칼 양이온인 PT+), 티오닌(TH), 아주레 A(AA), 아주레 B(AB), 아주레 C(AC), 메틸렌 블루(MB), 메틸렌 그린(MG) 및 톨루이딘 블루 O(TOL); 페녹사진(POA), 염기성 블루3(BB3) 및 브릴리언트 크레실 블루 ALD(BCBA), 벤조-α-페나조속늄 클로라이드(Medola's blue)와 같은 페녹사진; 2,6-디클로로페놀 인도페놀(DCIP)와 같은 인도페놀, 및 빈트쉐들러스 그린(Bindschedler's green) 및 페닐렌 블루와 같은 인다민 등이 있다. 많은 양태에서 특히 중요한 것은 예를 들면, PMS, 페나진 에토설페이트, 메톡시페나진 메토설페이트 및 사파라닌과 같은 페나진 화합물인데, 많은 양태에서 PMS는 저분자량의 비단백질성 전자 전달제이다.
많은 양태에서, 고분자량의 단백질성 전자 전달제는 예를 들면, NAD(P)H와 같은 환원된 보조인자를 산화시킬 수 있으며, 동시에 산화환원 지시제를 환원시킬 수 있는 효소이다. 많은 양태에서, 이러한 전자 전달 효소는 리포 탈수소효소, 페레독신-NADP 환원효소, 리포아미드 탈수소효소, NADPH 탈수소효소 등과 같은 디아포라제이다. 다양한 디아포라제를 이용할 수 있으며, 사용할 수 있는데, 본 시그날 생성 시스템내에 존재할 수 있는 대표적인 시판되는 디아포라제로는 바실루스 디아포라제, 클로스트리듐 디아포라제, 비브리오 디아포라제, 포르신 디아포라제 등이 있다.
본 시그날 생성 시스템에서, 제1 전자 전달제와 제2 전자 전달제의 비는 예를 들면, 하나의 전자 전달제(예: PMS 또는 디아포라제) 만을 갖는 비교가능한 시그날 생성 시스템과 같은 대조군에 비해 가속화된 반응 속도를 제공하도록 선택된다. 통상적으로, 본 시스템내의 제1 전자 전달제 대 제2 전자 전달제의 비는 각각 약 0.001 내지 10, 일반적으로는 약 0.01 내지 1.0, 보다 일반적으로는 약 0.05 내지 0.5(nmole/U)이다.
또한, 상술한 제1 전자 전달제 및 제2 전자 전달제 이외에, 본 시그날 생성 시스템은 산화환원 지시제를 포함한다. 산화환원 지시제란 전자 전달제에 의해 환원되어 발색성(chromogenic) 생성물과 같은 검출 가능한 생성물을 생성시킬 수 있는 화합물을 의미한다. 산화환원 지시제에 의해 발색성 생성물이 생성되는 경우, 즉 산화환원 지시제가 색원체(chromogen)인 경우, 적합한 색원체는 하나 이상의 전자에 의해 환원되는 경우에 색상이 변할 수 있는 임의의 화합물이며, 적합한 색원체는 일반적으로 상술한 바와 같은 전자 전달제로부터 전자를 수용하는 색원체이다.
서로 다른 다양한 산화환원 지시제 화합물이 중요하다. 중요한 화합물로는 옥사진, 티아진 및 테트라졸륨 염이 있다. 많은 양태중 특히 중요한 것은 전자 전달제로부터 포획된 수소화물을 수용하여 색상을 갖는 포름아진 생성물을 형성시킬 수 있는 테트라졸륨 염이다. 많은 양태에 있어서, 이러한 염은 유리한 특징으로서 산화된 형태에서 담황색을 나타내지만, 전자 환원시 밝은 가시적인 뚜렷한 색상으로 변하여 포름아진 염료로 전환된다. 특히 중요한 테트라졸륨 화합물 또는 염으로는 2-(2'-벤조티아졸릴)-5-스티릴-3-(4'-프탈히드라지딜) 테트라졸륨(BSPT), 2-벤조티아졸릴-(2)-3,5-디페닐 테트라졸륨(BTDP), 2,3-디(4-니트로페닐) 테트라졸륨(DNP), 2,5-디페닐-3-(4-스티릴페닐) 테트라졸륨(DPSP), 디스티릴 니트로블루 테트라졸륨(DS-NBT), 3,3'-[3,3'-디메톡시-(1,1'-디페닐)-4,4'-디일]-비스[2-(4-니트로페닐)-5-페닐(-2H 테트라졸륨(NBT)], 3-(4,5-디메틸-2-티아졸릴)-2,5-디페닐-2H 테트라졸륨(MTT), 2-페닐-3-(4-카복시페닐)-5-메틸 테트라졸륨(PCPM), 테트라졸륨 블루(TB), 티오카바밀 니트로블루 테트라졸륨(TCNBT), 테트라니트로블루 테트라졸륨(TNBT), 테트라졸륨 바이올렛(TV), 2-벤조티아조티아졸릴-3-(4-카복시-2-메톡시페닐)-5-[4-(2-설포에틸카바모일)페닐]-2H-테트라졸륨(WST-4), 2,2'-디벤조티아졸릴-5,5'-비스[4-디(2-설포에틸)카바모일페닐]-3,3'-(3,3'-디메톡시-4,4'-비페닐렌)디테트라졸륨 디나트륨 염(WST-5), 2-(p-니트로페닐)-3-(p-요오도페닐)-5-페닐테트라졸륨 클로라이드(INT) 등이 있다. 많은 양태에 있어서 WST-5가 바람직한데, 왜냐하면 수성 매질내에서 쉽게 용해되어, 생리학적 시료와 가장 잘 혼화되기 때문이다. 또한, 생성된 포름아진 화합물은 퍼플-블루 영역에서 강력한 분광 흡수를 나타내므로, 헤모글로빈으로부터의 백그라운드 시그날을 수집할 필요가 적어진다. 기타 유용한 테트라졸륨 염이 본원에서 참조문헌으로 인용되는 미국 특허 제4,490,465호, 제4,491,631호, 제4,598,042호, 제4,351,899호, 제4,271,265호, 제4,247,633호, 제4,223,090호, 제4,215,917호, 제4,142,938호, 제4,024,021호, 제3,867,259호, 제3,867,257호, 제3,791,931호 및 제4,254,222호에 기재되어 있다.
상술한 시그날 생성 시스템에 의해 시료, 특히 수성 시료, 보다 특정하게는 생리학적 시료(예: 완전 혈액 또는 이의 분획물 또는 유도물)중 환원된 효소 보조인자의 존재 여부를 검출할 수 있다. 서로 다른 다양한 환원된 효소 보조인자들을 본 시그날 생성 시스템을 사용하여 검출할 수 있는데, 대표적인 환원된 효소 보조인자로는 베타-니코틴아미드 아데닌 디누클레오티드(베타-NAD), 베타-니코틴아미드아데닌 디누클레오티드 포스페이트(베타-NADP), 티오니코틴아미드 아데닌 디누클레오티드, 티오니코틴아미드 아데닌 디누클레오티드 포스페이트, 니코틴아미드 1,N6-에테노아데닌 디누클레오티드, 니코틴아미드 1,N6-에테노아데닌 디누클레오티드 포스페이트, 및 피롤-퀴놀린 퀴논(PQQ)과 같은 보조 인자의 환원된 형태가 있다. 특히 본 시그날 생성 시스템은 NADH 또는 NAD(P)H의 검출시 사용하기에 적합하다.
본 시그날 생성 시스템을 사용할 수 있는 많은 적용에 있어서, 환원된 효소 보조인자는 시료중 중요한 분석물의 산화에 따라 생성된다. 따라서, 많은 양태에 있어서, 본 시그날 생성 시스템은 효소 보조인자, 및 중요한 분석물을 산화시킴과 동시에 효소 보조인자를 환원시킬 수 있는 분석물 산화 효소를 포함한다. 중요한 효소 보조인자는 상술한 것들, 즉, 베타-니코틴아미드 아데닌 디누클레오티드(beta-NAD), 베타-니코틴아미드 아데닌 디누클레오티드 포스페이트(beta-NADP), 티오니코틴아미드 아데닌 디누클레오티드, 티오니코틴아미드 아데닌 디누클레오티드 포스페이트, 니코틴아미드 1,N6-에테노아데닌 디누클레오티드, 니코틴아미드 1,N6-에테노아데닌 디누클레오티드 포스페이트, 및 피롤-퀴놀린 퀴논(PQQ)을 포함한다. 본 시그날 생성 시스템에 포함될 수 있는 특히 중요한 효소 보조인자로는 NADH 또는 NAD(P)H가 있다.
시그날 생성 시스템내에 존재하는 분석물 산화 효소는 필연적으로 본 시스템에 의해 검출하려는 분석물의 특성에 좌우된다. 대표적인 중요한 분석물 산화 효소로는 알코올용 알코올 탈수소효소, 포름알데하이드용 포름알데하이드 탈수소효소, 글루코스용 글루코스 탈수소효소, 글루코스-6-포스페이트용 글루코스-6-포스페이트 탈수소효소, 글루타민산용 글루타민산 탈수소효소, 글리세롤용 글리세롤 탈수소효소, 베타-하이드록시부티레이트용 베타-하이드록시부티레이트 탈수소효소, 스테로이드용 하이드록시스테로이드 탈수소효소, L-락테이트용 L-락테이트 탈수소효소, 류신용 류신 탈수소효소, 말산용 말레이트 탈수소효소 및 피루브산용 피루베이트 탈수소효소가 있다. 상기 대표적으로 나열한 것들로부터 알 수 있듯이, 분석물 산화 효소는 전형적으로는 탈수소효소이다.
시약 조성물
또한, 본 발명에 의해 적어도 환원된 효소 보조인자, 및 많은 양태에 있어서 시료중 분석물을 검출하는데 사용하기 위한 시약 조성물이 제공된다. 시약 조성물은 예를 들면, 수성 유체, 또는 무수 조성물일 수 있는데, 많은 양태에 있어서 시약 조성물은 무수 조성물이다. 최소한 본 시약 조성물은 상술한 제1 전자 전달제, 제2 전자 전달제 및 산화환원 지시제를 포함하는 조성물이다. 이러한 시약 조성물은 시료중 예를 들면, NAD(P)H와 같은 환원된 효소 보조인자의 검출시 사용하기에 적합하다. 그러나, 여러 양태에 있어서, 시약 조성물은 상술한 효소 보조인자 및 분석물 산화 효소를 추가로 포함한다.
시약 시험 스트립
또한, 본 발명에 의해 시료중 분석물의 존재 여부를 검출하는데 사용하기 위한 시약 시험 스트립이 제공된다. 특히, 본 발명에 의해 예를 들면, 베타-하이드록시부티레이트, 글루코스 등과 같은 완전 혈액내의 특정한 분석물을 분석하기 위한 무수 스트립이 제공된다. 넓은 의미에서, 시약 시험 스트립은 고체 지지체와 그 위에 존재하는 무수 시약 조성물을 포함하는데, 무수 시약 조성물은 중요한 분석물의 존재하에 검출가능한 시그날을 생성시키는데 필수적인 모든 시약 화합물로 이루어진다. 본 발명의 대부분의 양태에서, 당해 시험 스트립 위에 존재하는 무수 시약 조성물은 상기 자세하게 기재한 분석물 산화 효소, 효소 보조인자, 제1 및 제2 전자 전달제 및 산화환원 지시제와 같은 구성 성분을 포함한다.
많은 양태에서, 본 시험 스트립은 고체 지지체에 부착된 막 시험 패드(membrane test pad)를 포함한다. 지지체는 예를 들면, 폴리스티렌, 나일론 또는 폴리에스테르와 같은 플라스틱, 또는 금속성 시트 또는 기타 당해 기술 분야에 공지된 임의의 물질일 수 있다. 많은 양태에서, 본 시험 패드는 바람직하게는 여과지 또는 중합체 막과 같은 흡수성 물질을 포함한다. 이러한 시험 패드에 있어서, 시약 조성물은 시험 패드 위에 피복되어, 시험 패드에 혼입된다. 또한, 본 스트립은 예를 들면, 시험 패드가 지지체와 표면층 사이에 존재하는 경우, 보다 복잡한 배열로 배치되어 있을 수 있는데, 여기서, 시료 처리시 사용되는 하나 이상의 시약이 표면층 위에 존재할 수 있다. 또한, 당해 기술 분야에 공지된 바와 같이, 유동 경로 또는 채널이 시험 스트립 위에 존재할 수 있다. 많은 양태에 있어서, 본원에 참조문헌으로 인용되는 미국 특허 제5,902,731호에 기재된 시험 스트립 배열이 중요하다.
본 시험 스트립을 임의의 편리한 프로토콜을 사용하여 제조할 수 있다. 하나의 편리한 프로토콜은 스트립의 하나 이상의 시험 패드 부분을 최종 시약 시험 스트립내의 시험 패드와 결합시키려는 시약 조성물의 모든 구성 성분을 포함하는 수성 조성물과 접촉시키는 것이다. 간편하게는, 시험 패드를 수성 조성물에 침지시키고, 충분한 시간 동안 유지시킨 다음, 건조시킬 수 있는데, 이에 의해 시약 조성물이 결합되어 있는 시약 시험 스트립의 시험 패드가 제조된다. 상술한 바와 같이, 수성 조성물은 시약 시험 스트립의 시험 패드와 결합되는 다양한 시약 조성물 구성 성분을 포함하는데, 이러한 다양한 구성 성분은 시험 패드 위에 생성되는 시약 조성물의 목적하는 양이 제공되기에 충분한 양으로 존재한다. 이와 같이, 이러한 수성 조성물내에 존재하는 비단백질성 전자 전달제의 농도는 통상적으로는 약 1μM 내지 1000μM이고, 일반적으로는 약 10μM 내지 500μM 범위인 한편, 수성 조성물내의 단백질성 전자 전달제의 농도는 약 50U 내지 3000U, 일반적으로는 약 100U 내지 1000U의 범위이다. 수성 조성물내에 존재하는 레독스 시약의 농도는 약 3mM 내지 36mM, 일반적으로는 약 6mM 내지 24mM의 범위이다. 존재하는 경우, 효소 보조인자의 농도 범위는 약 1.5mM 내지 28mM, 일반적으로는 약 3.5mM 내지 14mM이다. 마찬가지로, 분석물 산화제 효소의 농도 범위는 존재하는 경우, 약 100U 내지 2000U이며, 일반적으로는 약 200U 내지 1000U이다. 시약 시험 스트립에 사용되는 본 수성 조성물내에 제공될 수 있는 기타 성분으로는 염화나트륨, 염화마그네슘, 트리스, PSSA, 테트로닉 1307, 크로틴-SPA, 슈크로스, 옥사민산, 나트륨 염 등이 있다. 본 시약 시험 스트립의 대표적인 제조방법의 보다 상세한 설명은 하기 실험 부분을 참조하면 된다.
분석물 검출 방법
상술한 시그날 생성 시스템, 시약 조성물 및 시험 스트립은 시료중의 분석물의 존재 여부 및 종종 분석물 양의 검출방법에 그 용도를 찾을 수 있다. 서로 다른 다양한 분석물을 본 방법을 이용하여 검출할 수 있는데, 대표적인 분석물로는 예를 들면, 알코올, 포름알데하이드, 글루코스, 글루타민산, 글리세롤, 베타-하이드록시부티레이트, L-락테이트, 류신, 말레산, 피루브산, 스테로이드 등이 있다. 원칙적으로는, 본 방법을 서로 다른 다양한 생리학적 시료(예: 소변, 눈물, 타액 등)내의 분석물의 존재 여부 및 종종 농도를 측정하는데 사용할 수 있는 한편, 이들은 혈액 또는 혈액 분획물(예: 혈액으로부터 유도된 시료 및 보다 특정하게는 완전 혈액)내의 분석물의 농도를 측정하는데 사용하기에 특히 적합하다.
본 방법의 중요한 특성은 제1 전자 전달제 및 제2 전자 전달제를 둘 다 포함하는 본 시그날 생성 시스템을 사용함으로써 대조 시스템(예: 하나의 전자 전달제를 포함하는 시스템)에 비해 신속한 반응 시간이 제공된다는 점이다. 일반적으로, 반응 속도는 PMS와 디아포라제의 비에 좌우되는 1 내지 3배 만큼 가속화되거나 향상된다. 또한, 반응 속도는 1 내지 3배 만큼 개별적인 전자 전달제에 의해 제공되는 속도의 총합을 기준으로 하여 예상되었던 이론적 속도 또는 예상 속도보다 빠르다. 반응 속도를 K/S/초로 측정하는 경우(하기 실험 부분 참조), 본 시그날 생성 시스템이 사용되는 반응에 있어서 K/S/초는 약 0.01 내지 10, 일반적으로는 약 0.05 내지 5, 보다 일반적으로는 0.1 내지 2의 범위이다.
본 방법에서, 시료 및 시그날 생성 시스템을 반응 혼합물과 혼합하고, 충분한 시간동안 반응을 진행시켜 시료중 분석물의 존재 여부(및 분석물의 양)를 나타내는 시그날을 수득하고, 시료내의 분석물의 존재 여부(및 분석물의 양)와 관련되어 있는 생성된 시그날을 검출한다. 넓은 의미로, 반응 혼합물을 크벳(cuvette) 또는 기타 유체 함유 수단과 같은 임의의 편리한 환경에서 제조할 수 있다. 그러나, 수 많은 양태에서, 상기 단계는 상술한 바와 같은 시약 시험 스트립 위에서 이루어진다. 이와 같이, 이제 본 발명을 시약 시험 스트립을 사용하는 방법의 관점에서 추가로 논의한다.
본 방법을 실시함에 있어서, 제1 단계는 상술한 시험 스트립에 생리학적 시료의 양을 적용하는 것이다. 시험 스트립에 적용되는 생리학적 시료(예: 혈액)의 양은 다양할 수 있지만, 일반적으로는 약 2㎕ 내지 40㎕, 일반적으로는 약 5㎕ 내지 20㎕의 범위이다. 본 시험 스트립의 특성으로 인해, 시험 스트립에 적용되는 혈액 시료의 양은 비교적 작은데, 약 2㎕ 내지 40㎕, 일반적으로는 약 5㎕ 내지 20㎕의 범위이다. 혈액이 생리학적 시료인 경우, 서로 다른 다양한 헤마토크릿(hematocrit)을 갖는 혈액 시료를 본 방법에 의해 분석할 수 있는데, 여기서, 헤마토크릿의 범위는 약 20% 내지 65%, 일반적으로는 약 25% 내지 60%일 수 있다.
시료를 시험 스트립에 적용한 후, 시료가 시그날 생성 시스템의 구성 성분과 반응하도록 하여 시료내에 존재하는 중요한 분석물의 초기량과 비례하는 양으로 존재하는 검출가능한 생성물을 생성시킨다. 그 다음, 검출가능한 생성물의 양, 즉 시그날 생성 시스템에 의해 생성된 시그날을 측정하고, 초기 시료중 분석물의 양을측정한다. 특정한 양태에서는, 상술한 검출 단계 및 측정 단계를 수행하는 자동 장치를 사용한다. 상술한 반응, 검출 단계 및 측정 단계 뿐만 아니라 이를 수행하기 위한 장치가 본원에 참조문헌으로 인용되는 미국 특허 제4,734,360호, 제4,900,666호, 제4,935,346호, 제5,059,394호, 제5,304,468호, 제5,306,623호, 제5,418,142호, 제5,426,032호, 제5,515,170호, 제5,526,120호, 제5,563,042호, 제5,620,863호, 제5,753,429호, 제5,573,452호, 제5,780,304호, 제5,789,255호, 제5,843,691호, 제5,846,486호, 제5,902,731호, 제5,968,836호 및 제5,972,294호에 추가로 기재되어 있다. 측정 단계에서, 예를 들면, 적합하게 장치를 보정하는 것과 같이, 유도된 분석물 농도에 있어서 관찰된 시그날과 경쟁하는 반응의 일정한 기여를 고려한다.
키트
또한, 본 발명에 의해 본 방법의 실시에 사용하기 위한 키트가 제공된다. 본 발명의 키트는 적어도 상술한 바와 같은 시그날 생성 시스템을 포함하는데, 시그날 생성 시스템 구성 성분은 단일 시약 조성물로 결합될 수 있거나 예를 들면, 별개의 용기내에 존재하는 것과 같이 분리되어 있을 수도 있다. 특정한 양태에 있어서, 상술한 바와 같이 시그날 생성 시스템은 시약 시험 스트립의 형태로 키트내에 존재한다. 본 키트는 생리학적 시료를 수득하기 위한 수단을 추가로 포함할 수 있다. 예를 들면, 생리학적 시료가 혈액인 경우, 본 키트는 손가락을 찌르기 위한 랜스(lance), 랜스 작동 수단 등과 같은 혈액 시료를 수득하기 위한 수단을 추가로포함할 수 있다. 또한, 본 키트는 예를 들면, 분석물의 표준화된 농도를 함유하는 분석물 대조 용액과 같은 대조 용액 또는 표준 용액을 포함할 수 있다. 특정 양태에서, 키트는 또한 상술한 바와 같은 시료를 적용한 후, 스트립 위에서 생성되는 생성물의 양을 측정하고, 검출된 생성물을 시료내의 분석물의 양과 관계시키기 위한 자동 장치를 포함한다. 마지막으로, 본 키트는 생리학적 시료내의 분석물 농도의 측정시 본 키트 구성 성분을 사용하기 위한 수단을 포함한다. 이러한 수단은 하나 이상의 포장기, 라벨 삽입기, 키트내에 존재하는 용기 등으로 제공될 수 있다.
하기 실시예는 본 발명을 설명하기 위한 것이며, 이로써 본 발명이 한정되는 것은 아니다.
실험
A. 케톤 시험 스트립의 제조
쿠노(Cuno)사[미국 코네티컷주 메리디안 소재]로부터 입수한 0.8㎛ 나일론 막이 포화될 때까지 표 1의 시약에 침지시켰다.
구성 성분 양
물 100㎖
트리스(하이드록시메틸)아미노메탄 1.2gm
염화 나트륨[분자량 56.44, 시그마(미국 미주리주 세인트 루이스 소재)] 560mg
염화 마그네슘[분자량 203, 시그마(미국 미주리주 세인트 루이스 소재)] 2.5gm
PSSA, 폴리스티렌설폰산, 나트륨 염(분자량 70,000) 3gm
크로틴-SPA(크로다 인코포레이티드, 미국 뉴저지주 파르시파니 소재) 3gm
옥사민산, 나트륨 염 250mg
테트로닉 1307(BASF사, 미국 뉴저지주 마운트 올리브 소재) 2gm
슈크로스(분자량 342.30, 알드리치 케미칼스, 미국 위스콘신주 밀워키 소재) 5gm
NAD(분자량 663.4, N7004, 시그마, 미국 미주리주 세인트 루이스 소재) 450gm
D-3-하이드록시부티레이트 탈수소효소 50,000U
WST-5(분자량 1331.37, 도진도, 일본) 1.8gm
디아포라제 0 내지 15000U
페나진 메토설페이트(PMS) 0 내지 3mg
과량의 시약을 유리 막대를 사용하여 천천히 벗겼다. 생성된 막을 56℃의 오븐에 10분 동안 건조시켰다. 포렉스(Porex)(두께 0.6mm)를 5%의 아질산 용액으로 침액시킨 다음, 100℃의 오븐에서 10시간 동안 건조시켰다. 마지막으로, 본 막을 폴리에스테르 스톡[ICI 아메리카(미국 델라웨어주 윌밍톤 소재)사의 0.4mm의 MelenexTM폴리에스테르]과 아질산을 함침시킨 포렉스 사이에 적층시켰다.
B. 분석
다음과 같은 프로토콜을 사용하여, 40mg/㎗(D) β-하이드록시부티레이트를 포함하는 10㎕의 수성 시료를 상술한 바와 같은 스트립 위에서 시험하였는데, 스트립은 스트립 위에 존재하는 PMS 및/또는 디아포라제의 양에 따라 변한다. 10㎖의 수성 시료를 방금 제조한 시험 스트립 위에 적용하였다. 스트립을 반사계에 삽입하고, 데이타 수집을 시작하였다. 판독 스트립의 반사를 660nm에서 2분 동안 1초 간격으로 관찰하였다. 다음, 변형된 직렬 케이블을 통해 데이타를 반사계 기억 완충장치로부터 개인용 컴퓨터로 전송시켰다. 반응 프로파일이 직선형인 범위에서 K/S의 초기 변화 속도를 기초로 하여 반응 속도를 계산하였다. 표 2에 요약한 결과는 5번 반복한 평균이다. 각각의 개별적인 분석에 있어서, 반응 속도(초당 K/S단위)를 측정하였다(K/S는 본원에서 참조문헌으로 인용되는 미국 특허 제4,935,346호의 컬럼 14에 논의 및 정의되어 있는 반사율의 척도이다). 결과를 다음 표 2에 나타내었다.
별개로 제형화시킨 DAD 및 PMS 함께 제형화시킨 DAD 및 PMS
DAD[U/㎖] 속도[K/S/초] PMS[㎛] 속도[K/S/초] 별개로 제형화시킨 것+[K/S/초] DAD[U/㎖] PMS[㎛] 함께 제형화시킨 것[K/S/초]
150 0.0166 10 0.013 0.0296 150 10 0.0385
300 0.0392 20 0.0225 0.0617 300 20 0.1054
600 0.0943 40 0.0484 0.1427 600 40 0.3095
900 0.1666 60 0.078 0.2446 900 60 0.5861
1200 0.1787 80 0.1085 0.2872 1200 80 0.9107
1500 0.2866 100 0.13 0.4166 1500 100 너무 빠름*
+이론적 속도, 즉 디아포라제 및 PMS 각각에 의해 촉진된 반응 속도의 총합을 기준으로 하여 예상한 속도.
*반응이 너무 빨라 속도를 정확히 계산할 수 없음.
C. 관찰된 속도 대 이론적 속도
하기 표 3에 상술한 분석에 있어서 관찰된 속도와 예상한 이론적 속도를 비교하였다.
이론적 속도(K/S/초) 관찰된 속도(K/S/초)
0.0296 0.0385
0.0617 0.1054
0.1427 0.3095
0.2446 0.5861
0.2872 0.9107
도 1에 관측된 속도 대 이론적 속도의 그래프를 나타내었다.
도 1의 그래프에서 알 수 있듯이, 시험 스트립의 시그날 생성 시스템의 반응 *속도는 PMS 및 디아포라제 둘 다의 존재에 의해 가속화되는데, 예상치 않게도 관찰된 가속의 크기는 PMS 및 디아포라제를 개별적으로 가지고 있는 시스템의 반응 속도의 총합을 기준으로 한 예측한 가속량보다 크다.
상기 결과 및 논의로부터, 본 발명에 의해 분석물의 산화 및 산화환원 지시제의 동시 환원에 기초한 분석물 검출 프로토콜에서 관찰된 반응 속도가 예상치 않게도 상당히 향상된다는 사실을 명백히 알 수 있다. 또한, 본 발명에 의해 예를 들면, 전자 전달제와 같은 디아포라제에 단독으로 의존하는 것과 같은 특정한 종래의 방법에 비해 보다 경제적인 분석물 검출방법이 제공된다. 이와 같이, 본 발명은 당해 기술 분야에 상당한 기여를 하였다.
각각의 개별적인 문헌 또는 특허를 참조한다는 것을 구체적이고, 개별적으로 표시하지 않았지만, 본 명세서내에 인용된 모든 문헌 및 특허는 참조문헌으로서 본원에서 인용되었다. 모든 문헌의 인용은 이의 출원일 이전의 공개에 대한 것인데, 본 발명이 종래의 발명에 의한 문헌보다 선행하여 권리를 가질 수 없음을 인정하는것으로 해석해서는 안된다.
명확한 이해를 위해 본 발명을 설명과 실시예를 통하여 상세히 설명하였지만, 본 발명의 교시를 고려할 때 당해 기술 분야의 통상의 숙련가들은 청구항의 정신 또는 범주를 이탈하지 않으면서 특정한 변화 및 개질이 이루어질 수 있다는 사실을 명백히 이해할 것이다.

Claims (35)

  1. 환원된 보조인자를 산화시킬 수 있는 제1 전자 전달제 및 제2 전자 전달제와 산화환원 지시제(redox indicator)를 포함하는, 시료내의 환원된 보조인자의 존재 여부를 검출하기 위한 시그날 생성 시스템(signal producing system).
  2. 제1항에 있어서, 제1 전자 전달제가 저분자량의 전자 전달제인 시그날 생성 시스템.
  3. 제2항에 있어서, 저분자량의 전자 전달제가 페나진(phenazine) 화합물인 시그날 생성 시스템.
  4. 제1항에 있어서, 제2 전자 전달제가 고분자량의 전자 전달제인 시그날 생성 시스템.
  5. 제1항에 있어서, 고분자량의 전자 전달제가 단백질성 화합물인 시그날 생성 시스템.
  6. 제5항에 있어서, 단백질성 화합물이 효소인 시그날 생성 시스템.
  7. 제1항에 있어서, 산화환원 지시제가 테트라졸륨 화합물인 시그날 생성 시스템.
  8. 제1항에 있어서, 효소 보조인자를 추가로 포함하는 시그날 생성 시스템.
  9. 제1항에 있어서, 분석물 산화 효소를 추가로 포함하는 시그날 생성 시스템.
  10. 제1항에 있어서, 시약 조성물로서 존재하는 시그날 생성 시스템.
  11. 분석물 산화 효소, 효소 보조인자, 비단백질성 전자 전달제, 단백질성 전자 전달제 및 산화환원 지시제를 포함하는, 시료내의 분석물 존재 여부의 검출시 사용되는 시약 조성물.
  12. 제11항에 있어서, 효소 보조인자가 NAD(P)+인 시약 조성물.
  13. 제11항에 있어서, 비단백질성 전자 전달제가 페나진 화합물인 시약 조성물.
  14. 제11항에 있어서, 단백질성 전자 전달제가 디아포라제인 시약 조성물.
  15. 제11항에 있어서, 산화환원 지시제가 테트라졸륨 화합물인 시약 조성물.
  16. 제11항에 있어서, 무수 시약 조성물인 시약 조성물.
  17. 분석물 탈수소효소, NAD(P)+, 페나진 화합물, 디아포라제 및 테트라졸륨 화합물을 포함하는, 시료내의 분석물 존재 여부의 검출시 사용하기 위한 시약 조성물.
  18. 제17항에 있어서, 페나진 화합물이 페나진 메토설페이트인 시약 조성물.
  19. 제17항에 있어서, 무수 시약 조성물인 시약 조성물.
  20. 제19항에 있어서, 무수 시약 조성물이 시험 스트립(test strip) 위에 존재하는 시약 조성물.
  21. 지지체 성분(a)와 분석물 산화 효소(i), 효소 보조인자(ii), 비단백질성 전자 전달제(iii), 단백질성 전자 전달제(iv) 및 산화환원 지시제(v)를 포함하는 무수 시약 조성물(b)을 포함하는 시약 시험 스트립.
  22. 제21항에 있어서, 제1 효소가 탈수소효소인 시약 시험 스트립.
  23. 제21항에 있어서, 보조인자가 NAD(P)+인 시약 시험 스트립.
  24. 제21항에 있어서, 비단백질성 전자 전달제가 페나진 화합물인 시약 시험 스트립.
  25. 제24항에 있어서, 페나진 화합물이 페나진 메토설페이트인 시약 시험 스트립.
  26. 제21항에 있어서, 단백질성 전자 전달제가 디아포라제인 시약 시험 스트립.
  27. 제21항에 있어서, 산화환원 지시제가 테트라졸륨 화합물인 시약 시험 스트립.
  28. 시료내의 분석물의 존재를 검출하기 위한 방법에 있어서, 제1항에 따르는 시그날 생성 시스템을 사용함을 특징으로 하는 방법.
  29. 제28항에 있어서, 시그날 생성 시스템이 제11항에 따르는 시약 조성물로서 존재하는 방법.
  30. 제29항에 있어서, 시약 조성물이 제21항에 따르는 시약 시험 스트립 위에 존재하는 방법.
  31. 제1항에 따르는 시그날 생성 시스템을 포함하는, 시료내의 분석물 존재 여부의 검출시 사용하기 위한 키트(kit).
  32. 제31항에 있어서, 시그날 생성 시스템이 제11항에 따르는 시약 조성물로서 존재하는 키트.
  33. 제32항에 있어서, 시약 조성물이 제21항에 따르는 시약 시험 스트립 위에 존재하는 키트.
  34. 제31항에 있어서, 생리학적 시료를 수득하기 위한 수단을 추가로 포함하는 키트.
  35. 제34항에 있어서, 생리학적 시료를 수득하기 위한 수단이 랜스(lance)인 키트.
KR1020027012698A 2000-03-28 2001-03-08 환원된 보조인자를 검출하기 위한 시약 및 방법 KR20020089412A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US53720300A 2000-03-28 2000-03-28
US09/537,203 2000-03-28
PCT/US2001/007619 WO2001073114A2 (en) 2000-03-28 2001-03-08 Reagents and methods for detecting a reduced cofactor

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20020089412A true KR20020089412A (ko) 2002-11-29

Family

ID=24141653

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020027012698A KR20020089412A (ko) 2000-03-28 2001-03-08 환원된 보조인자를 검출하기 위한 시약 및 방법

Country Status (13)

Country Link
EP (1) EP1268849A2 (ko)
JP (1) JP2003528623A (ko)
KR (1) KR20020089412A (ko)
CN (1) CN1419604A (ko)
AR (1) AR027726A1 (ko)
AU (1) AU2001243542A1 (ko)
CA (1) CA2404421A1 (ko)
HK (1) HK1050030A1 (ko)
IL (1) IL151262A0 (ko)
MX (1) MXPA02009469A (ko)
PL (1) PL357180A1 (ko)
RU (1) RU2266543C2 (ko)
WO (1) WO2001073114A2 (ko)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050103624A1 (en) 1999-10-04 2005-05-19 Bhullar Raghbir S. Biosensor and method of making
GB0204232D0 (en) * 2002-02-22 2002-04-10 Isis Innovation Assay
US8071030B2 (en) 2003-06-20 2011-12-06 Roche Diagnostics Operations, Inc. Test strip with flared sample receiving chamber
US8148164B2 (en) 2003-06-20 2012-04-03 Roche Diagnostics Operations, Inc. System and method for determining the concentration of an analyte in a sample fluid
PL1639352T3 (pl) 2003-06-20 2019-03-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Sposób i odczynnik do wytwarzania wąskich, jednorodnych pasków odczynnika
US7452457B2 (en) 2003-06-20 2008-11-18 Roche Diagnostics Operations, Inc. System and method for analyte measurement using dose sufficiency electrodes
US7569126B2 (en) 2004-06-18 2009-08-04 Roche Diagnostics Operations, Inc. System and method for quality assurance of a biosensor test strip
ITMI20050881A1 (it) * 2005-05-16 2006-11-17 Anna Favre Kit diagnostico per la malattia di hirschsprung megalon congenito
DE102006002165A1 (de) * 2006-01-17 2007-07-19 Merck Patent Gmbh Verfahren und Mittel zur enzymatischen Bestimmung von Acetat
EP2542887B1 (en) * 2010-03-01 2013-06-19 System Biologie AG Test strip for the detection of equol
CN102520198A (zh) * 2011-11-21 2012-06-27 宁波美康生物科技股份有限公司 乙醇浓度检测试剂盒及其制备方法
CN102520150A (zh) * 2011-12-08 2012-06-27 上海高丰医疗电器有限公司 一种伽马-羟基丁酸的测定诊断试纸及其制备方法
US8921061B2 (en) 2012-11-02 2014-12-30 Roche Diagnostics Operations, Inc. Reagent materials and associated test elements
US8920628B2 (en) 2012-11-02 2014-12-30 Roche Diagnostics Operations, Inc. Systems and methods for multiple analyte analysis
CN108359710B (zh) * 2018-02-11 2019-04-30 山东大学齐鲁医院 葡萄糖磷酸异构酶的酶显色定量测定试剂盒及测定方法
CN110117791B (zh) * 2019-05-23 2023-11-10 电子科技大学 一种用于高密度互联印制电路板棕化液的结合力促进剂

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3247894A1 (de) * 1982-12-24 1984-06-28 Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt Testsystem und verfahren zur bestimmung von nad(p)h
JPS60180600A (ja) * 1984-02-29 1985-09-14 Kyowa Medetsukusu Kk 還元型ニコチンアミド・アデニン・ジヌクレオチドの定量方法
US5036000A (en) * 1986-12-16 1991-07-30 Enzymatics, Inc. Threshold color control system
SE466158B (sv) * 1989-04-25 1992-01-07 Migrata Uk Ltd Analysmetod foer glukosbestaemning i helblod
US5902731A (en) * 1998-09-28 1999-05-11 Lifescan, Inc. Diagnostics based on tetrazolium compounds

Also Published As

Publication number Publication date
HK1050030A1 (zh) 2003-06-06
EP1268849A2 (en) 2003-01-02
WO2001073114A3 (en) 2002-03-28
WO2001073114A2 (en) 2001-10-04
AR027726A1 (es) 2003-04-09
JP2003528623A (ja) 2003-09-30
CA2404421A1 (en) 2001-10-04
IL151262A0 (en) 2003-04-10
CN1419604A (zh) 2003-05-21
RU2002123839A (ru) 2004-03-10
PL357180A1 (en) 2004-07-26
MXPA02009469A (es) 2003-02-24
AU2001243542A1 (en) 2001-10-08
RU2266543C2 (ru) 2005-12-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1317563B1 (en) Test-strips with positively charged membranes for tetrazolium based assays
EP1312922B1 (en) Stabilized tetrazolium reagent compositions with nitrite and methods for using the same
AU763065B2 (en) Diagnostics based on tetrazolium compounds
US6939685B2 (en) Stabilized tetrazolium phenazine reagent compositions and methods for using the same
US5326697A (en) Composition and method of assaying for D-β-hydroxybutyrate
KR20020089412A (ko) 환원된 보조인자를 검출하기 위한 시약 및 방법
NO852070L (no) Enzymatisk etanolpaavisning.
CN103305590A (zh) 用于测量生物液体中的分析物的自我限定大小的组合物和检验设备
AU2001288935A2 (en) Test-strips with positively charged membranes for tetrazolium based assays

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E601 Decision to refuse application