KR20020072563A - γ―ＩＦＮ 액체―소적 에어로졸 및 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 환자의 호흡 경로로 전달하기 위한 액체-소적 에어로졸 조성물에 관한 것이다. 에어로졸은 안정화제 및 분산제를 포함하는 γ-IFN 수용액을 한정된 크기의 개구를 갖는 플레이트에 위치시키고, 상기 용액을 상기 개구에 부피 평균 직경이 1 내지 10 미크론 범위에서 선택된 여러 가지 크기 중 하나 이상인 수성 소적을 형성하는데 효과적인 조건 하에서 통과시킨다. 에어로졸은 목적하는 크기의 소적을 가지며, γ-IFN의 생물학적 활성 및 분자 크기 분포는 γ-IFN 수용액의 생물학적 활성 및 분자 크기 분포와 실질적으로 동일하다. 본 발명은 또한 공지의 선택된 감마-인터페론의 생물학적 활성 및 분자 크기 분포를 갖는 소정량의 인간 γ-IFN을 환자의 호흡 경로의 선택된 영역에 투여하는 방법에 관한 것이다.

Description

γ―ＩＦＮ 액체―소적 에어로졸 및 방법 {γ-IFN Liquid-Droplet Aerosol and Method}

인간 감마 인터페론 (γ-IFN)이 거의 20년 동안 단리된 형태로 사용되었지만, 간질성 폐 질환, 폐의 감염 질환, 교착성 기도 질환 및 낭성 섬유증과 같은 각종 폐 질환, 및 암, 바이러스성 또는 박테리아성 감염 및 섬유 장애와 같은 전신성 질환의 치료에서의 가능성에 대한 관심이 증가하고 있다. 이를 치료하기 위해 γ-IFN을 단독으로 사용하거나 다른 치료 화합물과 병용하는 신규한 임상적 시도가 현재 진행중이다.

현재 대부분의 γ-IFN 요법은 단백질을 주사 투여, 예를 들면 subQ 또는 IV 경로에 의해 투여하는 것이다. 주사 투여에서 중요하게 인식된 장점은 단백질의 투여량 및 활성이 조심스럽게 조절될 수 있다는 것이다. 예를 들면, 단백질은 안정한 수성 형태로 제조되고, 응집 상태에서 활성 손실이나 변화없이 저장 시간을 연장시킨 다음 정확하게 공지된 부피로 투여될 수 있다는 것이다.

반면에, γ-IFN 용액으로부터 단백질의 에어로졸화가 요구되는 흡입에 의한 γ-IFN의 투여는 여러가지 위험성을 제공한다. 특히, 목적하는 에어로졸 입자 크기 범위를 얻는데 필요한 전단 환경 하에서 에어로졸이 형성되는 경우, γ-IFN을 활성 손실 및(또는) 단백질 응집없이 에어로졸화시킬 수 있는지의 여부 및 그의 에어로졸화 방법이 지금까지 공지되지 않았다. 이러한 불확실성은 어느 정도는 감마가 단량체 형태가 아닌 비공유성 이량체 형태에서 활성이라는 사실에 의한 것이다. 또한, 단백질 응집은 활성을 감소시킬 것으로 예상된다. 여전히 에어로졸에서 목적하는 단백질 특성 및 입자 크기 특성을 가지면서 활성 및 분자 크기 특성이 오랜 저장 조건에서 유지되도록 γ-IFN을 제제화할 수 있는 방법은 공지되지 않았다.

<발명의 개요>

본 발명은 (i) 단백질의 저장 안정성 형태로부터 제조될 수 있고, (ii) 목적하는 선택된 입자 크기 및 크기 분포의 에어로졸 입자를 제조하고; (iii) γ-IFN 활성에 대한 표준 시험법으로 측정하여 γ-IFN 활성에서 변화를 거의 나타내지 않고; (iv) 단백질의 분자 크기 분포에 거의 변화를 나타내지 않는 γ-IFN 액체-소적 에어로졸을 제조하여 상기 문제점들을 제기하고 해결한다.

한 측면에서, 본 발명은 공지의 선택된 감마-인터페론의 생물학적 활성 및 분자 크기 분포를 갖는 소정량의 인간 감마-인터페론 (γ-IFN)을 환자의 호흡 경로의 선택된 영역에 투여하는 방법을 포함한다. 이 방법에는 먼저 실온에서 점도가 2 Cp 미만이고, 공지의 선택된 γ-IFN의 생물학적 활성을 가지며, 안정화제 및 분산제를 포함하는 γ-IFN 수용액을 한정된 크기의 개구를 갖는 플레이트에 위치시키는 것을 포함한다. 상기 용액은 상기 개구를 (a) (i) 1 미크론 미만, (ii) 1 내지 3 미크론, (iii) 3 내지 5 미크론, (iv) 5 내지 10 미크론, (v) 10 미크론 초과, 또는 (vi) 2가지 이상의 크기 범위에서 선택된 부피 평균 직경을 갖는 수성 소적을 형성하는데 효과적인 조건 하에서 통과한다. 소적은 γ-IFN 수용액과 실질적으로 동일한 γ-IFN의 생물학적 활성 및 분자 크기 분포를 특징으로 한다. 그다음 액체 에어로졸 소적은 환자의 호흡 경로로 전달된다.

용액 및 소적 형태에서 γ-IFN의 생물학적 활성은 (i) γ-IFN이 배양 집적된 인간 단핵구에서 CD64 항원 발현을 자극하는 능력으로 결정되거나, 또는 (ii) γ-IFN이 배양된 인간 단핵구에서 HLA-DR 항원 발현을 자극하는 능력으로 결정될 수 있다. 용액 중 γ-IFN 활성은 1 ㎖ 당 약 100만 국제 단위 이상의 감마-IFN이 바람직하고, 400만 내지 5000만 유닛/㎖가 더욱 바람직하다.

대표적인 안정화제는 만니톨로서, 5 내지 15 mM의 양으로 존재한다. 대표적인 분산제는 폴리소르베이트로서, 약 50 내지 200 ㎎/리터 중량%의 양으로 존재한다.

에어로졸을 형성하기 위한 한가지 일반적인 실시태양에서, 용액을 놓는 플레이트를 한정된 선택된 크기의 소적을 형성하는데 효과적인 진폭 및 진동수로 진동시킨다. 또다른 일반적인 실시태양에서, 용액을 놓는 플레이트가 정지되어 있고, 상기 용액을 압력하에 플레이트에 접촉시켜, 압출된 용액의 스트림을 형성하고, 플레이트 위에 기체 스트림을 통과시킴으로써 스트림을 목적하는 선택된 크기의 입자로 분쇄한다.

간질성 폐 질환, 폐의 감염 질환, 교착성 기도 질환 및 낭성 섬유증을 치료하는데 사용하기 위해서, 형성 단계는 1 내지 3 미크론 범위 크기의 소적을 형성하는데 효과적이며, 3 내지 5 미크론 범위 크기 및(또는) 1 미크론 미만 범위 크기의 소적을 형성할 수도 있다.

전신으로 투여된 γ-IFN에 반응하는 질환 상태를 치료하는데 사용하기 위해서, 형성 단계는 1 내지 3 미크론 범위 크기의 소적을 형성하는데 효과적이며, 3 내지 5 미크론 범위 크기의 소적을 형성할 수도 있다.

다른 측면에서, 본 발명은 환자의 호흡 경로로 전달하기 위한 에어로졸 조성물을 포함한다. 에어로졸은 먼저 공지의 선택된 γ-IFN의 생물학적 활성을 가지며, 실온에서 점도가 2 Cp 미만이고, 안정화제 및 분산제를 함유하는 γ-IFN 수용액을 한정된 크기의 개구를 갖는 플레이트에 위치시킴으로써 형성된다. 상기 용액은 상기 개구를 (a) (i) 1 미크론 미만, (ii) 1 내지 3 미크론, (iii) 3 내지 5 미크론, (iv) 5 내지 10 미크론, (v) 10 미크론 초과, 또는 (vi) 2가지 이상의 크기 범위에서 선택된 부피 평균 직경을 갖는 수성 소적을 형성하는데 효과적인 조건 하에서 통과한다. 소적은 γ-IFN 수용액과 실질적으로 동일한 γ-IFN의 생물학적 활성 및 분자 크기 분포를 특징으로 한다.

용액 및 소적 형태에서 γ-IFN의 생물학적 활성은 (i) γ-IFN이 배양 직접된 인간 단핵구에서 CD64 항원 발현을 자극하는 능력으로 결정하거나, 또는 (ii) γ-IFN이 배양된 인간 단핵구에서 HLA-DR 항원 발현을 자극하는 능력으로 결정하여, 1 ㎖ 당 약 100만 국제 단위 이상의 감마-IFN을 포함할 수 있고, 400만 내지 5000만IU/㎖가 더욱 바람직하다.

본 발명의 상기한 및 다른 목적 및 특성은 수반되는 도면과 함께 설명되는 경우 후술하는 본 발명의 상세한 설명에 의해 더욱 완전하게 명확해질 것이다.

본 발명은 선택된 에어로졸 입자 크기를 가지며, 목적하는 예측가능한 γ-IFN 활성을 갖는 인간 감마 인터페론 (γ-IFN)의 액체-소적 에어로졸의 제조 방법, 및 이러한 방법으로 제조된 에어로졸 조성물에 관한 것이다.

도 1A 및 1B는 본 발명의 방법을 수행하는데 유용한 장치의 단순화된 형태의 단면도로서, 저장 상태 (1A) 및 작동 상태 (1B)를 나타낸다.

도 2A 및 2B는 본 발명의 방법을 수행하는데 유용한 또다른 장치의 단순화된 형태의 단면도로서, 저장 상태 (2A) 및 작동 상태 (2B)를 나타낸다.

도 3A 및 3B는 2가지 상이한 전력 단계로 작동하는 에어로졸화 장치에서 γ-IFN 용액 대 염수 용액의 유속 (3A) 및 2가지 상이한 전력의 에어로졸화 장치에 의해 형성된 에어로졸 액체 소적의 부피 평균 직경 (VMD)의 상관 관계를 나타내는 도면이다.

도 4는 염수 및 γ-IFN 용액의 평균 공기역학 직경 (VMD)과, γ-IFN 용액 및 염수 용액에 대해 2가지 상이한 전력 단계에서 상기 에어로졸화 장치에 의해 형성된 0.5 내지 6.0 미크론 범위 크기 입자의 백분율로 정의된 미세 입자 단편 백분율 (%FPF)과의 상관 관계를 나타내는 도면이다.

도 5A 및 5B는 γ-IFN 용액 및 염수 용액에 대해 에어로졸화 장치의 고전력 및 저전력 단계에서 VMD (5A) 또는 %FPF (5B)의 함수로서의 유속의 도면이다.

도 6은 (i) 에어로졸화 후 3가지 상이한 γ-IFN 용액 (진한 마름모, 진한 정사각형, 진한 삼각형) 각각의 증가된 희석액, (ii) 에어로졸화시키지 않은 동일한γ-IFN 용액 (x), 및 (iii) 단독 배지를 증가시켜 자극된 단핵구에서 CD64 항원 발현의 도면을 나타낸다.

도 7A 및 7B는 대조구 (예비 에어로졸화된) (8A) 및 에어로졸화된 (8B) γ-IFN 용액의 액체 크로마토그래피 프로파일이다.

도 8A 및 8B는 도 7A 및 7B 크로마토그래피 각각에서 13.77 피크 영역의 질량 분광도이다.

I. 정의

다른 언급이 없는 한, 본원의 용어는 다음의 의미를 갖는다:

"인간 감마-인터페론" 또는 "γ-IFN"은 미국 특허 출원 제5,096,705호에서 정의되고 기재된 바와 같은 인간 γ-IFN의 활성을 갖는 폴리펩티드를 의미한다. 펩티드는 미국 특허 제5,096,705호에 기재된 바와 같이 완전한 천연 인간 γ-IFN 서열을 가질 수 있거나, 또는 예를 들어 미국 특허 제5,690,925호, 제5,582,824호, 제5,574,137호, 제4,921,698호, 제4,823,959호 및 제4,604,284호에 기재된 바와 같이 전장 천연 펩티드의 N-말단 및(또는) C-말단 절단을 가질 수 있거나, 또는 미국 특허 제4,845,196호에 기재된 바와 같이 내부 결손 또는 치환 변이를 포함할 수 있다.

"γ-IFN 용액"은 안정화제 및 분산제를 함유하는 γ-IFN 용액, 바람직하게는, 1 ㎖당 100만 국제 단위 (IU 또는 유닛) 이상의 감마-IFN의 γ-IFN 생물학적 활성을 갖고, 더욱 바람직하게는 400만 내지 5000만 유닛/㎖를 갖는 0.05 내지 2.5mgs/㎖ γ-IFN에 상응하는 γ-IFN 용액을 의미한다. γ-IFN 용액 1로 나타내는 한가지 바람직한 γ-IFN 조성물은 하기 표 1에 나타낸 조성을 갖는다. 이 조성물은 액티뮨(ACTIMMUNE)이라는 상표로 판매되며, 미국 특허 제5,582,824호에서 기재되고 청구되는 바와 같이 재조합 인간 인터페론 γ-1B, rhIGB를 포함한다.

"에어로졸" 또는 "액체-소적 에어로졸"은 기체 배지, 예를 들어 공기 중 액체-소적 입자의 현탁액이다. "수성 에어로졸"은 수용액으로부터 형성된 에어로졸로서 용매로서 약 90 %이상, 바람직하게는 5 % 이상의 물을 함유하는 것을 의미한다.

"평균 입자 크기" 또는 "부피 평균 공기역학 직경 (VMD)"은 표준 입자 크기 측정법으로 측정된, 입자 에어로졸에서 입자의 계산 평균 크기를 의미한다. 에어로졸 조성물을 이루는 입자는 입자 분포가 좁은 것, 예를 들어 평균에서 표준 편차 가 1 내지 2 미만인 것이 바람직하다. 별도로, 입자의 80 %, 바람직하게는 95 %가 선택된 크기 범위, 예를 들어 1 내지 3 미크론 내의 크기를 갖는다.

"% FPF (0.5 내지 6.0 ㎛)"는 부피 직경이 0.5 내지 6.0 ㎛인 미세 입자 단편 백분율이다. 레이저 앙상블 광 산란으로 측정한 이 크기 범위는 폐 침착에 적합한 단편이다.

"유속"은 초당 에어로졸화 (마이크로리터)로 측정된 에어로졸 형성 속도 (㎕/s)이다.

"폐 질환"은 과다한 섬유 또는 콜라겐 형성, 또는 폐에서의 부적합한 대식세포 침윤, 특히 감염을 특징으로 하는 폐 질환이다. 이 용어에는 간질성 폐 섬유증, 결핵증, 바이러스성 또는 박테리아성 폐렴, 및 만성 육아종병이 포함되나 이에 제한되지는 않는다.

"환자의 폐로 인간 γ-IFN 약 X ㎍ 이상을 전달하는데 효과적인 에어로졸의 양"은 환자의 폐로 인간 γ-IFN의 목적하는 양을 전달하는데 필요한 에어로졸 조성물에서 인간 γ-IFN의 양으로서, 에어로졸 전달능, 즉, 에어로졸 중 인간 γ-IFN의 총량에서 폐에 도달하는 인간 γ-IFN의 백분율과 관련된다. 예를 들면, 전달능이 50 %인 경우에 환자의 폐로 인간 γ-IFN 50 ㎍을 전달하기 위해, 인간 γ-IFN 100 ㎍의 총 에어로졸 양이 투여된다.

II. 에어로졸화 방법

한 측면에서, 본 발명은 대상, 예를 들면 인간 대상에게 γ-IFN의 선택 투여량을 투여하는데 사용하기 위한 γ-IFN의 수성 에어로졸을 형성하는 방법을 포함한다. 이미 언급한 바와 같이, 이 방법은 다음의 목적이 신뢰성있게 얻어질 수 있는 경우에만 γ-IFN 전달의 다른 형태에 비해 그 가능성이 실현될 수 있다: (i) γ-IFN의 생물학적 활성의 손실이 거의 없거나 전혀 없는 오랜 저장 시간, (ii) 잘 한정된 크기 범위(들) 내에서 에어로졸 액체 소적의 재현가능한 형성, (iii) 치료 효과를 위해 충분한 에어로졸 중 γ-IFN의 양, 및 (iv) γ-IFN의 생물학적 활성 손실 또는 분자 상태의 변화가 거의 없거나 전혀 없음. 이 부분에서는 이러한 목적을 얻기 위해, 본 발명에 따라 밝혀진 신규 조성물 및 에어로졸화 조건을 논의한다.

A. γ-IFN 용액

본 발명의 한 측면에 따라, 1 ㎖ 당 100만 국제 단위 (IU 또는 유닛) 이상의감마-IFN, 더욱 바람직하게는 400만 내지 5000만 유닛/㎖의 농도로 γ-IFN을 함유하는 안정한 γ-IFN 용액이 잘 한정된 소적 크기로 에어로졸화될 수 있으며, γ-IFN의 생물학적 활성의 손실 또는 분자 크기 분포에 변화가 거의 또는 전혀 없으면서 천연의 활성 상태에서 이량체라는 것을 밝혀 내었다. 즉, 분자는 에어로졸화 단계에서 단량체화되지도 않고 응집되지도 않는다. 상기 농도로는 예를 들어, 25 마이크로리터만큼 적은 부피의 에어로졸 중 100만 유닛만큼 높은 투여량이 가능하다.

바람직하게는 약 5.5±0.5의 pH에서 용액을 유지시키는 저농도의 완충 성분 외에, 용액은 용액에서 저장시키는 동안 단백질의 안정화를 돕는 안정화제, 및 용액에서 단분산 형태로 단백질을 유지하는 것을 돕고(돕거나), 건조된, 예를 들어 동결 건조된 상태로부터 재탈수시키는 동안 용액 성분이 용해되는 것을 것을 보조하는 분산제를 포함한다.

안정화제는 당, 예를 들어 만니톨, 락토스, 말토스, 덱스트로스, 소르비톨, 글루코스 또는 덱스트로스, 알코올, 예를 들어 글리세롤, 단량체 또는 중합체 형태의 에틸렌 글리콜, 또는 아미노산이 바람직하다. 안정화제는 약 1 내지 10 g/리터, 또는 다르게는 2 내지 25 mM의 몰량으로 존재하는 것이 바람직하다. 바람직한 안정화제 중 하나는 만니톨로서, 5 내지 15 mM의 양으로 존재한다.

분산제는 비이온성 계면활성제, 예를 들어 폴리소르베이트, 바람직하게는 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80, 또는 폴리사카라이드, 예를 들어 카르복시메틸셀룰로오스 또는 알기네이트가 바람직하다. 분산제는 20 내지 500 ㎎/리터의 양으로 존재하는 것이 바람직하다. 바람직한 분산제 중 하나는 폴리소르베이트 80으로서, 약 50 내지 200 ㎎/리터의 양으로 존재한다. 특히, 분산제는 25 ℃에서 점도를 약 10 미만, 바람직하게는 약 6 Cp 미만으로 증가시키는 양으로 존재해야 한다.

용매는 물, 또는 에탄올과 같은 수혼화성 용매를 상당히 소량, 예를 들어 5 내지 10 부피% 미만의 양으로 포함하는 물이다. 용액에서 좀더 휘발성인 용매의 한가지 단점은 에어로졸화 동안 및 그 이후에 빠른 증발이 소적 크기의 현저한 감소를 일으킬 수 있다는 것이다.

하기 표 1은 본원에서 γ-IFN 용액 1로 나타내고, 1 ㎖당 약 400만 유닛의 γ-IFN을 함유하는 한가지 바람직한 γ-IFN 용액에 대한 조성을 제공한다. 이 용액은 γ-IFN 활성의 뚜렷한 손실 또는 단백질의 분자 응집 상태의 변화 없이 수개월까지 4 ℃에서 저장할 수 있도록 한다.

공급되는 물	무색의 맑은 용액보로실리케이트이 0.86 ㎖ 충전, 부틸 고무 마개 바이알
재조합 인간 인터페론 γ-1B	0.20 ±0.02 ㎎/㎖
만니톨	40.0 ±4.0 ㎎/㎖
나트륨	0.13 ±0.01 ㎎/㎖
숙신산	0.59 ±0.03 ㎎/㎖
폴리소르베이트 20	0.10 ±0.03 ㎎/㎖
용매	주사용 물, USP Qs.
삼투압	측정되지 않음
pH	5.5 ±0.5
점도	25 ℃에서 0.6 Cp

B. 에어로졸 제조

본 발명의 중요한 특성에 따라, 상기와 같이 제제화된 γ-IFN 용액이 (i) 1 미크론 미만, (ii) 1 내지 3 미크론, (iii) 3 내지 5 미크론, (iv) 5 내지 10 미크론, (v) 10 미크론 초과, 또는 (vi) 2가지 이상의 크기 범위와 같이 선택된 범위의 크기로 한정된 크기의 소적 입자를 제조하는 조건 하에서 생물학적 활성의 손실이 거의 또는 전혀 없거나 분자 분포 상태에 변화가 거의 또는 전혀 없이 에어로졸화될 수 있다는 것을 밝혀내었다.

이 방법은 바람직하게는 먼저, 한정된 크기의 개구 또는 기공을 갖는 플레이트에 γ-IFN 용액을 위치시키는 단계를 포함한다. 기공 크기는 0.5 내지 10 미크론 크기 범위로 선택된 크기를 갖는 곧은 (일정한 직경) 기공이 바람직하다. 일반적으로, 제조된 에어로졸 입자의 크기는 플레이트 기공 크기와 직접적으로 관련된다 (반드시 동일해야 하는 것은 아님). 다른 중요한 변수는 플레이트를 통과하는 용액의 유속으로, 이는 용액의 점도 및 용액에 가해지는 "압력" 모두에 따른다. 하기에서 나타낸 바와 같이, 이 압력은 실제적인 수압이거나, 또는 소적이 진동 플레이트를 통한 움직임으로 형성되는 경우, 이하에서 고려하는 바와 같이 플레이트의 진동수 및 추진 진폭일 수 있다.

상기 용액을 개구내로 한가지 이상의 상기 선택된 크기 범위의 부피 평균 직경을 갖는 수성 소적을 형성하는데 효과적인 조건 하에서 통과시킨다. 소적은 γ-IFN 수용액과 실질적으로 동일한 γ-IFN의 생물학적 활성 및 분자 크기 분포를 특징으로 한다. 그다음 액체 에어로졸 소적은 환자의 호흡 경로로 전달된다.

본 방법을 수행하는데 바람직한 장치 중 하나가 도 1A 및 1B에 도시되어 있으며, 본원에서 참고로 포함된 미국 특허 제5,971,951호에 상세하게 기재되어 있다. 도면을 참고로 하여, 장치 (10)에는 도면 왼쪽 말단에서 마우스피스 (14)로 종결되는 에어로졸 챔버 (12)가 포함된다. 약물 전달 용기 (16)는 본 발명에 따른 γ-IFN 용액 (19)으로 부분적으로 채워진다. 용기는 에어로졸화 과정에서 가해지는 힘에 대해 압축되거나 접혀질 수 있는 벽 (18) 및 하부 벽 (21)을 갖는다.

용기는 용액이 자유롭게 통과해 흐를 수 있으나, 용액 중 임의의 미립자 물질의 통과를 막는 다공성, 저내성의 필터 (20)로 채워진다. 용기와 챔버 (12) 사이는 여기에 형성된, 에어로졸화 동안 용액이 통과하는 다수의 기공 (24)을 갖는 다공성 막 플레이트 (22)이다. 필터 플레이트는 밀도가 약 1.7 ㎎/㎠이고, 두께가 약 8 내지 12 미크론인 폴리카르보네이트 또는 폴리에스테르와 같은 물질로 형성되는 것이 바람직하다.

플레이트 (22)에서 기공 크기 (직경)는 목적하는 에어로졸 입자 직경의 약 1/2이다. 따라서, 예를 들어 1 내지 3 미크론 범위의 입자를 갖는 에어로졸을 형성하기 위해, 기공 직경이 약 0.5 내지 1.5인 막 플레이트가 선택된다. 그러나, 입자 크기는 플레이트를 통과하는 유속에 또한 민감하여, 입자 크기는 용액의 점도와 용기에 가해지는 힘 모두에 의해 결정된다.

용액 (19)을 필터에 통과시킨 다음 플레이트 (22)의 기공을 통해 용액을 압출하기 위해 용기에 가해지는 힘은 약 50 bar 이하, 더욱 바람직하게는 35 bar 이하의 유압을 제공하는 것이 바람직하다. 도 1B에 나타낸 바와 같이, 용기에 압력을 가하여 용액을 막 플레이트에 통과시키고, 그 결과 액체의 압출 스트림 (26)이형성되며, 이는 어느 정도는 화살표 (28) 방향으로 챔버를 통과하는 기류의 움직임에 의해 소적 (30)으로 분쇄된다.

도 1B에 나타낸 바와 같이, 장치 (10)는 용기에 가해지는 힘이 플레이트를 안쪽으로 변형시켜, 플레이트 외부 표면이 좀더 챔버 (12)의 중심 영역으로 위치하여 챔버 (12)의 중심 영역에 플레이트의 외부 표면이 위치하도록 설계되어, 압출된 용액이 챔버 중심 부근 근처에서 더 빠르게 움직이는 공기로 비말동반 되도록 한다.

도 2B는 목적하는 크기의 소적을 갖고 γ-IFN 활성 손실 또는 단백질에서 분자 크기 분포 변화가 거의 또는 전혀 없는 γ-IFN 에어로졸을 형성하는데 유용한 다른 종류의 에어로졸화 장치 (34)에서 에어로졸을 형성하는 핵심 부분의 단면도이다. 예를 들면, 장치 (34)는 본원에서 참고로 포함되는 미국 특허 제5,938,117호에 상세하게 기재되어 있다. 장치에는 γ-IFN 용액이 포함되고, 진동 막 (40)의 내부 표면 (38)에서 형성된 풀 (pool, 36)에 용액을 공급하는 용기 (나타내지 않음)가 포함된다.

도 2B에서 나타낸 바와 같이, 막 (40)은 플레이트가 특정 진폭 및 진동수에서 진동되는 경우 목적하는 크기의 소적 (44)을 형성하도록 성형되고 규격화된 다수의 원뿔형 개구 또는 기공들 (42)을 갖는다. 플레이트 진동은 50 내지 80 K ㎐ 범위의 전형적인 진동수에서 진동하는 압전기와 같은 진동기 (파장 (46)으로 나타냄)에 의해 얻어진다. 그 결과, 진동 플레이트는 플레이트 상에 모아진 용액이 기공을 통과하고 목적하는 크기의 입자로 분쇄되도록 하는 표면압을 형성한다. 장치에 의해 형성된 크기의 소적 뿐 아니라 소적 방출 속도는 플레이트 기공의 크기, 진동의 진폭 및 진동수, 및 에어로졸화될 용액의 점도에 따른다. 일반적으로 및 도 2B에 나타낸 바와 같이, 소적 크기는 더 작은 크기의 개구와 더 큰 크기의 개구 사이이다. 예를 들면, 1 내지 2 미크론 범위 크기의 소적 입자를 제조하기 위해서, 더 큰 기공 개구 (42A)는 약 1.5 미크론이고, 더 작은 개구 (42B)는 약 0.6 내지 0.7 미크론이다.

C. 에어로졸 공정 변수

본 발명에 따라 형성된 소적 입자의 균일성, 예측성 및 크기 분포는 에어로졸화 시스템에서 용액의 유속에 영향을 주는 용액 점도, 및 용액의 표면 장력 특성에 영향을 줄 수 있는 계면활성제 및 단백질과 같은 특성 성분의 존재에 민감하다.

상기한 바와 같은 에어로졸화 시스템은 보통 표준 희석액, 예를 들면 점도 및 표면 장력 특성이 물에 가까운 10 mM 염수 용액으로 검정된다. 표준 염수 용액을 사용하여, 소적 크기 및 크기 분포가 공정 파라미터, 특히 유속 및 플레이트 기공 크기에 대해 측정될 수 있다. 따라서, 공지된 공정 파라미터 (유속 및 기공 크기)에서 소정의 용액에서 예측가능한 소적 크기 및 크기 분포 특성을 얻기 위해서는 용액이 에어로졸화 시스템에서 실질적으로 염수 희석액과 유사하게 작용한다는 것을 입증할 필요가 있다.

본 발명의 경우, 용액 1로 확인되고 하기 표 1에 주어진 성분을 갖는 γ-IFN 용액을 실시예 1에 상세하게 설명된 에어로겐(Aerogen) 에어로졸라이저 (AG)에서 10 mM 염수 용액과 비교하였다. 명백하게, 유속, VMD 및 %FPF는 6가지 상이한 장치 각각에서 전력 설정을 2가지로 달리하여 2가지 용액에 대해 측정하였다.

저전력 (520 ㎷) 및 고전력 (750 ㎷) 모두에서 시험 용액의 유속을 측정하고 그 결과를 도 3A에 도시하였다. 각각의 점은 저전력 또는 고전력에서의 AG를 나타낸다. 9 ㎕/s 내지 18 ㎕/s 범위의 유속을 기록하였다. 용액 1의 평균 감소는 염수와 비교하여 0.4 ㎕/s이었으나, 감소는 함수적으로 의미가 없고 통계적으로도 유의하지 않았다. 도면에서는 고전력에서 유속이 증가한 것으로 나타났다.

약 3.5 내지 5.5 미크론 범위의 입자 크기의 VMD가 제조되도록 설계된 동일한 6개의 AG를 사용하여 염수와 용액 1의 VMD를 비교하였다. 도 3B에서는 용액 1의 VMD가 동등선의 약간 아래인 것으로 나타났기 때문에, 상응하는 염수 용액 값보다 약간 작다. 저전력 설정에서, 용액 1 소적과 염수 소적간 VMD의 평균차이가 약 0.2 미크론이고, 고전력 설정에서는 약 0.3 미크론이었다. VMD에서의 약간의 차이가 %FPF를 약간 증가시킨다.

염수 용액과 같이, 용액 1은 저전력 및 고전력 설정에서 VMD에 큰 차이가 없는 것으로 나타나, 평균 소적 크기에 상당한 영향을 주지 않으면서 에어로졸화 속도가 증가되도록 전력을 변화시킬 수 있는 것으로 나타났다.

VMD 및 5FPF (0.5 내지 6.0 미크론 범위 크기의 입자 %)는 도 4에 나타난 바와 같이 용액 모두와 크게 상관 관계를 갖는다. 이 데이타는 2가지 용액 각각에서 얻은 입자 크기 및 크기 분포가 거의 동일함을 암시한다.

소정의 전력 수치에서 제제간의 명확한 차이가 관찰되지 않았기 때문에, 데이타를 모으고 선형 회귀를 계산하였다. P ≤0.05에서 계수가 통계적으로 유의한것으로 밝혀졌다. 유속은 VMD에 비례하였다 (도 5A). 검출된 고전력/저전력에서 기울기간에 통계적 차이는 전혀 없었다. 흥미있는 VMD 범위 내에서 각각의 u가 VMD 증가보다 작은 경우 유속은 약 1.5 ㎕/s로 증가하였다. VMD와 %FPF간의 역관계로부터 예상할 수 있는 바와 같이 (도 4), %FPF는 유속이 감소함에 따라 증가하였다 (도 5B).

상기 연구는 본 발명에 따라 에어로졸화시킨 경우, 본 발명에 따라 제조된 γ-IFN 용액이 표준 염수 희석액과 실질적으로 동일한 유속, 소적 크기 및 소적 크기 분포 특성을 갖는다는 것을 설명한다.

D. 에어로졸 특성

소적 크기의 균일성 및 예측성 외에도, 국부적인 고전단력과 관계된 에어로졸화 공정이 에어로졸에서 γ-IFN의 생물학적 활성 또는 분자 크기 분포를 크게 변화시키지 않는다는 것이 중요하다. γ-IFN이 이량체 상태에서 활성이기 때문에 2가지 특성이 연결될 수 있고, 에어로졸화 과정에서 고전단력이 가해지는 경우 응집 또는 단량체화 및(또는) 작은 에어로졸 소적의 경우 액체/공기 계면에서의 단백질 변성에 의한 활성 손실을 예상할 수 있다.

에어로졸화 전후에 γ-IFN 용액의 생물학적 활성은 γ-IFN 활성을 평가하기 위한 시험관내 표준 방법으로 평가할 수 있다. 예를 들면, 용액 및 소적 형태에서 γ-IFN의 생물학적 활성은 (i) γ-IFN이 배양 직접된 인간 단핵구에서 CD64 항원 발현을 자극하는 능력, 또는 (ii) γ-IFN이 배양된 인간 단핵구에서 HLA-DR 항원 발현을 자극하는 능력으로 결정될 수 있다.

전자의 방법은 본 발명에 따른 에어로졸화가 IFN의 생물학적 활성에 거의 또는 전혀 영향을 주지 않는다는 것을 설명하는데 사용된다. 명백하게, 비에어로졸화 형태에서 또는 에어로졸화 이후에서 γ-IFN 용액의 농도가 감소함에 따라 배양물에서 인간 단핵구가 자극된다. 37 ℃의 표준 배지에서 밤새도록 세포를 배양하였다. 그다음 FITC 표지된 항CD64를 세포에 첨가하고, 세포 세척액을 비결합 항체로 이동시킨 후에 세포와 관계된 형광을 측정하였다.

3가지의 대표적인 에어로졸화 제제 (진한 마름모, 진한 정사각형 및 진한 삼각형), 에어로졸화 전의 γ-IFN 용액 1 (별형), 및 배지 단독 (진한 원형)에 대한 결과를 도 6에 나타내었다. 보이는 바와 같이, 3가지 에어로졸화 제제는 비에어로졸화 용액과 실질적으로 동일한 생물학적 활성을 나타내었다. 배지 단독인 경우 CD64 표면 항원의 예상되는 낮은 유도로 나타났다.

이 결과는 본 발명에 따라 에어로졸화시킨 경우, 본 발명에 따라 제조된 γ-IFN 용액에서 γ-IFN의 생물학적 활성에는 거의 또는 전혀 손실이 없다는 것을 설명한다.

γ-IFN의 분자 크기 분포에 대한 에어로졸화의 영향을 측정하기 위해, 에어로졸화 전후의 γ-IFN 용액을 액체 크로마토그래피로 분석하여 기본 γ-IFN 피크를 확인하고 단리한 후에 질량 분광법으로 γ-IFN 피크 내의 상이한 크기/전하의 종을 확인하였다.

도 7A 및 7B는 본 발명에 따른 에어로졸화 전후에 액체 크로마토그래피에 의해 γ-IFN 용액 1을 분리한 크로마토그램이다. 2개의 크로마토그램이 완전하게 동일하며, 이량체화된 γ-IFN에 상응하는 약 13.80 위치의 단일 γ-IFN 피크, 및 폴리소르베이트 피크에 상응하는 약 9.52 및 22.32 위치의 강한 다른 2개의 피크를 갖는다.

각각의 샘플로부터 γ-IFN 피크를 단리하고 질량 분광법으로 더욱 분석하여 그 결과를 도 8A 및 8B에 나타내었다. 단일 이량체 종의 각종 양성자화된 형태에 상응하는 다수의 주요한 피크가 1177 내지 1830에 위치한다.

총괄적으로, 샘플의 분자 분석은 γ-IFN 용액의 에어로졸화가 분자 크기 분포, 즉, γ-IFN의 이량체화 또는 응집 상태에 뚜렷한 영향을 주지 않는다는 것을 보여준다. 또한, γ-IFN 용액을 밤새도록 에어로졸 금속 플레이트 상에 노출시킨 것이 화합물의 분자 분포에 전혀 영향을 주지 않는다는 것으로 확인되었다.

III. 치료에서 에어로졸의 용도

본 발명에 따라, 상기와 같이 제조한 액체-소적 인간 γ-IFN 에어로졸을 호흡 경로의 감염 부위에 γ-IFN를 직접 전달함으로써 각종 폐질환을 치료하거나, 또는 혈류에 γ-IFN을 전달함으로써 전신 투여된 γ-IFN에 반응하는, 바이러스성 감염, 암 또는 섬유 장애와 같은 전신 질환을 치료하는데 사용하였다.

대부분의 경우에서, 기관지 부위로 전달하기 위한 에어로졸의 목적하는 소적 입자 크기는 1 내지 3 미크론이다. 하부 호흡 경로에서 공기 이동이 거의 없을 수 있는 낭성 섬유증과 같은 질환 상태에서는 작은 크기라도, 예를 들면 1 미크론 미만이라도 바람직할 수 있다. 호흡 경로의 다른 부위가 감염되거나, γ-IFN이 전신 투여되는 것을 목적하는 경우, 더 큰 크기의 입자, 통상적으로 3 내지 5 미크론,또는 작은 입자와 더 큰 입자의 조합, 예를 들면 1 내지 3 미크론과 3 내지 5 미크론이 가장 효과적일 수 있다.

γ-IFN의 전달되는 투여량은 10 ㎍ (200,000 유닛) 이상이 바람직하고, 200 ㎍ (400만 유닛) 정도로 높거나 그 이상일 수 있다. 통상적인 에어로졸 부피는 목적 부위에 도달하는 에어로졸 총부피의 약 50 내지 80 %인 50 내지 200 ㎕이다. 투여 일정은 치료 목적을 달성하는데 필요한 기간동안 통상적으로 일주일에 2 내지 3회이다.

치료받을 수 있는 상태의 예로서, 각종 폐 질환은 과량의 섬유 또는 콜라겐 형성, 또는 폐 부위에서 부적합한 대식세포 침윤, 특히 감염을 특징으로 한다. 몇몇의 질환, 예를 들어 간질성 폐 섬유증(IPF)에 있어서, 치료 중단점은 6 내지 12 개월 또는 그 이상이거나, 또는 심지어 질환 상태가 조절을 필요로 하는 한 더 연장된 기간 동안 투여할 수 있다. 다른 질환, 예를 들어 박테리아성 또는 바이러스성 감염에 있어서, 감염 또는 감염 증상이 완치될 때까지 투여를 반복한다.

인간 γ-IFN 치료의 주사 투여에 비해 본 발명의 한가지 이점은 상대적으로 고투여량, 예를 들면 200 내지 500 ㎍의 투여량으로도 약 250 ㎍으로 γ-IFN을 주사한 경우의 내성의 상한에서 보여지는 심각한 부작용없이 투여할 수 있다는 것이다. 예를 들어, IPF의 치료에서의 요법은 다른 치료 방법, 예를 들면 코르티코스테로이드 (일일 프레드니솔론 10 ㎎ 이하), 비스테로이드성 항염증성 약물 및 진통제와 병용하여 수행할 수 있다. IPF의 한가지 바람직한 병용 요법은 인간 γ-IFN과 일주일에 10 ㎎ 이하로 경구 투여되는 프레드니솔론과의 조합이다.

약물 내성 결핵을 치료하기 위해서, 클로파지민(clofazimine), 오플록사신(ofloxacin) 또는 리파부틴(rifabutin) (여기서, 후자의 약물은 정상 또는 감소된 투여량으로 투여함)과 같은 결핵 치료에 현재 사용되는 약물과 병용하여 치료할 수 있다. 감염이 치료될 때까지, 예를 들면 활성 감염의 증후가 더 이상 없을 때까지 치료를 계속한다.

바이러스성 또는 박테리아성 폐렴을 치료하기 위해서, 투여량당 투여되는 인간 γ-IFN의 양은 10 ㎍ 정도로 적거나, 200 내지 300 ㎍ 정도로 높을 수 있으나, 통상적으로 1주일 이하동안 2회 이상 투여한다. 바이러스성 또는 박테리아성 감염 치료에 현재 사용되는 약물과 병용하여 치료할 수 있다.

만성 육아종병 치료에 있어서, 6개월 이상 및 통상적으로 질환이 지속되고 치료가 필요한 동안 에어로졸화된 화합물을 일주일에 2 내지 3회 이상 투여한다. 유사한 요법이 낭성 섬유증(CF) 및 천식 치료에 적합하나, 천식의 경우 작은 소적과 더 큰 크기의 소적의 조합이 바람직할 수 있다.

상기로부터, 본 발명의 다양한 목적 및 특성을 충족시키는 방법이 명백할 수 있다. 에어로졸화 방법은 호흡 경로의 선택된 영역을 효과적으로 목표로하는 목적하는 크기 범위로 예측가능한 소적 크기 및 크기 분포를 갖는 γ-IFN 에어로졸을 제조하는데 효과적이다. 따라서, 50 내지 80 %의 높은 약물 투여 효능을 얻을 수 있고, 비교적 단백질 물질의 손실없이 예측가능한 투여량으로 효과적으로 투여할 수 있다.

γ-IFN 투여는 수개월 이상 동안 활성 손실이 거의 없이 장기간 저장을 위해예를 들면 액체형으로 저장될 수 있고, 이 용액은 본 발명에 따라 단백질의 생물학적 활성 또는 크기 분포의 손실이 거의 또는 전혀 없으면서 에어로졸화될 수 있다.

따라서, 보통 주사 바늘이 사용되는 비경구 투여의 다른 형태에 비해 흡입 요법의 장점은 비교적 정확한 약물 투여량 및 약물 전달 효과가 유지되면서 달성된다.

하기 실시예는 본 발명에 따른 목적하는 특성을 측정하는 방법을 설명한다. 실시예는 설명하고자 하는 것이지 본 발명의 범주를 제한하려는 것은 아니다.

실시예 1

공기 역학 연구 방법

에어로졸 형성기 (AG)를 에어로겐, 인크. (캘리포니아주 서니베일)로부터 입수하였다. 구체적으로, 약 3.5 내지 5.0 미크론 범위의 상이한 소적 크기를 형성하도록 설계된 6가지 AG를 선택하고, 저전력 (520 ㎷) 및 고전력 (750 ㎷)으로 설정하여 VMD, %FPF 및 유속을 10 mM 염수 및 γ-IFN 용액 1에서 측정하였다. 반복 측정하여 평균 및 샘플의 표준편차를 표로 만들었다. 하기 표 2에서는 목적하는 모든 성능을 상세하게 나타내었다.

기준	시험 방법 또는 원리	목적 하한	목적 상한
VMD (미크론)	레이저 회절	3.0	5.0
%FPF (0.5 내지 6.0 μM)	레이저 회절	13.2	67.1
제제 유속 (㎕/s)	고정 부피	6.7 ㎕/s	19.3
통과할 수 있는 UV/VIS	측정 불가능	--	--
AG로부터 걸러진 금속	AA	--	방법 LOQ

하기 표 3은 각종 벌크상 및 소적 특성을 측정하는데 사용하는 분석 방법을 나타낸다.

분석법	유용성 (TP#, 개요, 클라이언드, 또는 진행됨)
라벨 클레임	280 ㎚에서 UV 분광법
API 안정성 지시	측정 불가능; 3번째 부분으로 수행
점도	브룩필드 콘-플레이트 점도계
pH	유리 전극
삼투압	베스코(Wescor) 기압 삼투압기
유속	TP 1051
VMD (레이저)	TP 1502
GSD (레이저)	TP 1502
%FPF (0.5-6.0) (레이저)	TP 1503

본 발명은 특정 실시태양에 대해 기재되었으나, 청구된 발명에서 벗어나지 않고 다양한 변형이 이루어질 수 있음이 명백할 것이다.

Claims (21)

1. 공지의 선택된 γ-IFN의 생물학적 활성을 가지며, 안정화제 및 분산제를 함유하는 γ-IFN 수용액을 한정된 크기의 개구를 갖는 플레이트에 위치시키는 단계;

   상기 용액을 상기 개구내로 (a) (i) 1 미크론 미만, (ii) 1 내지 3 미크론, (iii) 3 내지 5 미크론, (iv) 5 내지 10 미크론, (v) 10 미크론 초과, 또는 (vi) 2가지 이상의 크기 범위로 이루어진 군에서 선택된 부피 평균 직경을 갖고, (b) γ-IFN의 생물학적 활성이 상기 용액의 활성과 실질적으로 동일하며, (c) γ-IFN 분자 크기 분포가 상기 용액의 분자 크기 분포와 실질적으로 동일한 수성 소적을 형성하는데 효과적인 조건 하에서 통과시키는 단계; 및

   수성 소적을 환자의 호흡 경로로 전달하는 단계

   를 포함하는, 공지의 선택된 감마-인터페론의 생물학적 활성 및 분자 크기 분포를 갖는 소정량의 인간 감마-인터페론 (γ-IFN)을 환자의 호흡 경로의 선택된 영역에 투여하는 방법.
2. 제1항에 있어서, 용액 및 소적 형태에서 γ-IFN의 생물학적 활성이 (i) γ-IFN이 배양 집적된 인간 단핵구에서 CD64 항원 발현을 자극하는 능력으로 결정되거나, 또는 (ii) γ-IFN이 배양된 인간 단핵구에서 HLA-DR 항원 발현을 자극하는 능력으로 결정되는 방법.
3. 제2항에 있어서, 상기 용액이 1 ㎖ 당 100만 국제 단위 이상의 감마-IFN을 함유하는 방법.
4. 제1항에 있어서, 상기 용액이 안정화제로서 만니톨을 포함하는 방법.
5. 제4항에 있어서, 상기 만니톨이 5 내지 15 mM의 양으로 존재하는 방법.
6. 제1항에 있어서, 상기 용액이 분산제로서 폴리소르베이트를 포함하는 방법.
7. 제6항에 있어서, 폴리소르베이트가 50 내지 200 ㎎/리터의 양으로 존재하는 방법.
8. 제1항에 있어서, 용액을 놓는 플레이트를 한정된 선택된 크기의 소적을 형성하는데 효과적인 진폭 및 진동수로 진동시키는 방법.
9. 제1항에 있어서, 용액을 놓는 플레이트가 정지되어 있고, 상기 용액을 압력하에 플레이트에 접촉시켜, 압출된 용액의 스트림을 형성하고, 플레이트 위에 기체 스트림을 통과시킴으로써 상기 스트림을 목적하는 선택된 크기의 입자로 분쇄하는 방법.
10. 제1항에 있어서, 상기 형성 과정이 1 내지 3 미크론 범위의 크기로 소적을 제조하는데 효과적이며, 간질성 폐 질환, 폐의 감염 질환, 교착성 기도 질환 및 낭성 섬유증 치료에 사용하기 위한 방법.
11. 제10항에 있어서, 상기 형성 단계가 소적을 3 내지 5 미크론 범위의 크기로 제조하는데도 효과적인 방법.
12. 제10항에 있어서, 상기 형성 단계가 소적을 1 미크론 미만 범위의 크기로 제조하는데 효과적이며, 낭성 섬유증 치료에 사용하기 위한 방법.
13. 제1항에 있어서, 상기 형성 단계가 소적을 1 내지 3 미크론 범위 크기로 제조하는데 효과적이며, 전신 투여된 γ-IFN에 반응하는 질환을 치료하는데 사용하기 위한 방법.
14. 제13항에 있어서, 상기 형성 단계가 소적을 3 내지 5 미크론 범위의 크기로 제조하는데 또한 효과적인 방법.
15. (a) 공지의 선택된 γ-IFN의 생물학적 활성을 가지며, 안정화제 및 분산제를 함유하는 γ-IFN 수용액을 한정된 크기의 개구를 갖는 플레이트에 위치시키고, 상기 용액을 상기 개구내로 (i) 1 미크론 미만, (ii) 1 내지 3 미크론, (iii) 3 내지5 미크론, (iv) 5 내지 10 미크론, (v) 10 미크론 초과, 또는 (vi) 2가지 이상의 크기 범위로 이루어진 군에서 선택된 부피 평균 직경을 갖고, (b) γ-IFN의 생물학적 활성이 상기 용액의 활성과 실질적으로 동일하고, (c) γ-IFN 분자 크기 분포가 상기 용액의 분자 크기 분포와 실질적으로 동일한 수성 소적을 형성하는데 효과적인 조건 하에서 통과시킴으로써 형성되고;

    (b) 생성된 수성 소적의 에어로졸은 (i) 1 미크론 미만, (ii) 1 내지 3 미크론, (iii) 3 내지 5 미크론, (iv) 5 내지 10 미크론, (v) 10 미크론 초과, 또는 (vi) 2가지 이상의 크기 범위로 이루어진 군에서 선택된 부피 평균 직경을 갖고, (b) γ-IFN의 생물학적 활성이 상기 용액의 생물학적 활성과 실질적으로 동일하고, (c) γ-IFN 분자 크기 분포가 상기 용액의 분자 크기 분포와 실질적으로 동일한 것을 특징으로 하는,

    환자의 호흡 경로로 전달하기 위한 액체-소적 에어로졸 조성물.
16. 제15항에 있어서, 용액 및 소적 형태에서 γ-IFN의 생물학적 활성을 (i) γ-IFN이 배양 직접된 인간 단핵구에서 CD64 항원 발현을 자극하는 능력으로 결정하거나, 또는 (ii) γ-IFN이 배양된 인간 단핵구에서 HLA-DR 항원 발현을 자극하는 능력으로 결정하여, 상기 용액이 1 ㎖당 100만 국제 단위 이상의 감마-IFN을 함유하는 조성물.
17. 제15항에 있어서, 상기 용액이 안정화제로서 만니톨을 포함하는 조성물.
18. 제17항에 있어서, 상기 만니톨이 5 내지 15 mM의 양으로 존재하는 조성물.
19. 제15항에 있어서, 상기 용액이 분산제로서 폴리소르베이트를 포함하는 조성물.
20. 제19항에 있어서, 폴리소르베이트가 50 내지 200 ㎎/리터 중량부의 양으로 존재하는 조성물.
21. 제15항에 있어서, 용액의 점도가 실온에서 2 Cp 미만인 조성물.