KR20020059865A - 다중격막 진공차폐 커버씰 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 복수의 격막을 포함하는 다중격막 커버씰에 있어서, 상기 격막 사이에 혼성화 반응에서 발생할 수 있는 격막 간의 용액 누수를 방지하기 위한 진공 흡착홈이 설계된 것을 특징으로 하는 다중격막 커버씰에 관한 것이다.
본 발명에 따르면, 핵산(DNA 또는 RNA), 핵산유도체, 단백질, 세포, 조직 등의 혼성화 반응 등에 사용되는 커버씰(coverseal)에 진공흡착홈을 설계함으로써 유리슬라이드와의 흡착력을 높이고 격막 간의 용액 누수현상을 방지하며, 설령 격막에서 스며나올 수도 있는 용액은 격막 사이의 진공흡착홈에 흡수되게 함으로써 격막 간의 용액 누수를 완전히 차단할 수 있다. 또한, 본 발명의 다중격막 커버씰은 단일 유리슬라이드 상에서 핵산, 핵산유도체, 단백질, 세포, 조직 등의 혼성화 반응을 위한 마이크로어레이(microarray)용으로도 사용가능하다.
Description
본 발명은 복수의 격막을 포함하는 다중격막 커버씰에 관한 것으로, 더욱 구체적으로는 상기 격막 사이에 혼성화 반응에서 발생할 수 있는 격막 간의 용액 누수를 방지하기 위한 진공 흡착홈이 설계된 것을 특징으로 하는 다중격막 커버씰에 관한 것이다.
일반적으로, 커버씰은 유리슬라이드 위에서 핵산(DNA 또는 RNA), 핵산유도체의 염기쌍 형성, 단백질의 항원-항체 반응, 세포(Cell) 또는 조직(tissue)의 형광염색과 현미경을 통한 이미지 분석 등의 각종 혼성화 반응과 형광염색 실험에서 커버글라스 역할로 사용되고 있으며, 이러한 커버씰을 사용함으로써 얻을 수 있는 장점은 유리슬라이드 위에 스포팅(spotting)된 두 종이상의 핵산 또는 단백질 등을 혼성화 반응에 필요한 일정 온도로 유지시킬 수 있으며, 완충용액(buffer)의 증발을 방지하여 적은 양으로도 효과적인 반응을 유도할 수 있다는 것이다(Pasotre, Joseph, N., C. Clampett, J. Miller, K. Porter and D. Miller, A Slide-Incubation Chamber Improves Microwave Assisted Immunostaining. The Journal of Histotechnology 18:115-117, 1995).
최근에는, 각 방(cell)마다 여러 다른 종의 혼성화 반응을 단일 유리슬라이드 위에서 동시에 수행하기 할 수 있도록 복수의 격막을 포함하는 다중격막 커버씰이 사용되고 있다 (McGrath, Charles,M., J.L. Grudzien and A.J. Levine, High-Definition Cell Analysis In Situ Using Microporous Films. CellVision 2:499-509, 1995).
그러나, 종래에 사용되고 있는 커버씰은 위에서 언급한 바와 같이 단지 혼성화 반응시 사용되는 완충용액의 증발방지를 통한 사용량의 최소화의 의미 이상으로는 발전되지 못했다. 또한, 다중격막 커버씰의 경우 실험중 격막 간 완충용액의 누수가 가능하므로 방(cell)안의 반응조건이 오염되어 정확한 반응 데이터를 얻을 수 없는 문제점이 있기 때문에, 동시에 다중 반응관찰을 원하는 사용자들에게는 선호되고 있지 않은 실정이다.
이에, 본 발명자들은 다중격막 커버씰의 격막 사이에 진공 흡착홈을 설계함으로써 유리슬라이드와의 흡착력을 높일 뿐만 아니라, 혼성화 반응 등에서 발생할 수 있는 격막 간의 용액 누수를 효과적으로 방지하기 할 수 있음을 발견하여 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
따라서, 본 발명의 목적은 종래의 다중격막 커버씰의 문제점인 각종 혼성화 반응시 격막간의 용액 누수를 효과적으로 배제할 수 있고, 또한 핵산, 핵산유도체, 단백질, 세포 또는 조직의 혼성화 반응과 형광염색뿐 만 아니라 위 실험의 마이크로어레이(microarray)용으로도 사용가능하게 고려하여 동시에 다중 반응관찰이 용이한 진보된 커버씰을 제공하기 위한 것이다.
도 1은 실리콘 틀을 도시한 정면도이고,
도 2는 실리콘 틀을 도시한 측면도이고,
도 3은 진공 흡착홈을 확대 도시한 측면도이고,
도 4는 투명 필름판을 도시한 정면도이고,
도 5는 투명 필름판을 도시한 측면도이고,
도 6은 다중격막 진공차폐 커버씰 전체 모형도이다.
< 도면의 주요부분에 대한 부호의 설명 >
1,2,3,4. 커버씰(cover seal)의 각 방(cell)
5. 진공 흡착홈 6. 실리콘 틀
7,8,9,10 각 방(cell)의 창(window)
11. 완충용액(buffer) 주입구 12. 실리콘 틀과의 접착부분
13. 손잡이
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 복수의 격막으로 이루어진 다중격막 커버씰에 있어서, 상기 격막 사이에 진공 흡착홈이 설계된 것을 특징으로 하는 다중격막 커버씰을 제공한다.
바람직하게는, 본 발명은 상기 커버씰이 진공 흡착홈이 설계된 실리콘 틀과이에 부착된 투명필름으로 구성되는 것을 특징으로 하는 다중격막 커버씰을 제공한다. 본 발명에서, 실리콘 틀은 유리슬라이드와 특수한 점착성을 가지고 있으며 혼성화 과정전후 탈부착이 가능하며 온도저항성이 있다. 또한, 투명필름은 방(cell)내의 반응을 관찰할 수 있을 정도의 투명도를 가진다.
구체적으로, 본 발명에서는 실리콘의 물성을 이용하여 격막 가운데 진공 흡착홈을 냄으로써 커버씰에 압력을 가할 시 유리슬라이드와의 흡착력을 높일 뿐만 아니라, 진공 흡착홈내의 공기가 빠져나와 내부를 진공상태로 만든다. 이로 인해, 혼성화 반응중 발생하는 다중 격막간의 용액 누수, 즉 유리슬라이드와 실리콘 격막 사이의 미세 공간으로 스며나오는 용액이 모두 격막 사이에 가로질러진 진공 흡착홈에 빨려들게 된다.
본 발명에서, 진공 흡착홈의 길이는 방(cell)의 세로길이보다 긴 것이 바람직하며, 따라서 누수된 어떤 용액도 다른 방(cells)으로의 전이가 발생치 않으므로 누수에 의한 오염 문제는 고려치 않아도 된다.
본 발명에서, 투명필름의 각 방에는 상단과 하단에 각각 완충용액 주입구가 형성되어 있는 것이 바람직하며, 이 주입구를 통해 각 방의 반응조건에 맞는 완충용액을 주입할 수 있다.
본 발명에서, 투명필름의 한쪽 단부에는 손잡이가 달린 것이 바람직하며, 이는 혼성화 과정전후에 커버씰의 탈부착을 용이하게 할 수 있다.
본 발명의 다중격막 커버씰은 각 방(cell)마다 서로 다른 종의 반응을 필요로 하는 어떤 다중반응의 커버씰에도 사용될 수 있으며, 예를 들면, 핵산, 핵산유도체, 단백질, 세포 또는 조직의 혼성화 반응에 사용될 수도 있다(McGrath, Charles, M., J.L. Grudzien and A.J. Levine, Influence of Surface:Volume Ratio of Reaction Chambers on Stoichiometry of Antibody-Based Reactions In Situ. CellVision 2:165-169. 1995., Mantyjarvi M, Syrjanen S, Kaipiainen S, Mantyjarvi R, Kahols T, Syrjanen K, Detection of human papillomavitus type 11 DNA in a conjunctival squamous cell papilloma by in situ hybridization with biothinylated probes. Acta Ophthalmol(Copenh) 67(4):425-429. 1989.).
또한, 본 발명은 핵산, 핵산유도체, 단백질, 세포 또는 조직의 마이크로어레이(microarray)용으로 사용될 수도 있다(David j. Duggan, Michael Bittner, Yidong Chen, Paul Meltzer & Jeffery M. Trent. Nature genetics 21(no.1):10-14. 1999., Nicole L.W. van Hal, Oscar Vorst, Adele M.M.L. van Houwelingen, Esther J.Kok, Ad Peijnenburg, Asaph Aharoni, Arjen J. van Tunen, Jaap Keijer. The application of DNA microarrays in gene expression analysis. Journal of Biotechnology 78:271-280. 2000.).
또한, 본 발명은 핵산, 핵산유도체, 단백질, 세포 또는 조직의 형광염색에 사용될 수도 있다(Pasotre, Joseph, N., C. Clampett, J. Miller, K. Porter and D. Miller, A Slide-Incubation Chamber Improves Microwave Assisted Immunostaining The Journal of Histotechnology 18:115-117, 1995., Baker-Cairns, B., K. Meyers, R. Hamilton, C. Smith and C. Tornatore Immunohistochemical Staining of Fixed Tissue Using Antigen Retrieval and aThermal Cycler. BioTechniques 20:641-650, 1996., Tarasova N.I., R.. Stauer, J.K. Choi, E.A. Hudson, G. Czerwinski, J.L. Miller, G.N. Pavlakis, C.J. Michejda and S.A. Wank, Visualization of G protein-coupled receptor trafficking with the aid of the green fluorescent protein. Endocytosis and recycling of cholecystokinin receptor type A. J. Biol. Chem. Jun 6;272(23):14817-14824, 1997.).
또한, 본 발명은 기타 핵산, 핵산유도체, 단백질, 세포 또는 조직의 산화방지, 보관 또는 완충용액의 증발방지에도 사용될 수 있다.
이하, 본 발명의 바람직한 실시예를 첨부한 도면을 참조하여 설명하면 다음과 같다. 그러나 이것은 예시에 불과할 뿐이며 본 발명의 범위가 실시예 및 도면에 나타난 커버씰에만 한정된 것은 아니다.
도 1은 본 발명의 실리콘 틀의 정면도로서 실리콘 판에 4개의 방(1,2,3,4)을 구성하도록 디자인되었으며 투명필름으로 덮혀 지지되고있다. 실리콘 틀(6) 가운데 직사각형 형태의 진공 흡착홈(5)이 외부격막(방과 외부 사이)과 내부격막(방과 방 사이)에 파져있다. 이는 커버씰에 압력을 가할 시 유리슬라이드와의 진공상태를 만들어 접착력을 더 높이게 만들기 위함이다. 또한 격막 간 내부 진공 흡착홈(5)은 내부 격막보다 길이가 길며 이는 용액누수가 발생할 시 용액이 내부 진공 흡착홈(5)으로 빨려들게 하여 각 방(1,2,3,4)마다의 용액에 의한 오염을 방지하기 위한 안정장치이기도 하다.
도 2는 본 발명의 실리콘 틀로의 측면도로서 직사각형 점선은 가로 진공 흡착홈(5)이며 반원형은 세로 진공 흡착홈(5)의 단면부이다. 실리콘 틀의 내부와 외부 가운데 진공 흡착홈(5)을 판다.
도 3은 본 발명의 진공 흡착홈(5)의 단면부를 확대도시한 측면도이다. 이때 진공 흡착홈은 반원통형이다.
도 4는 본 발명의 투명필름의 정면도로서 바깥 테두리 구역은 접착제가 도포되는 영역(12)을 표시한 것이다. 투명필름에 4개의 방(7,8,9,10)은 크기와 모양이 도 1의 실리콘 틀의 4개방(1,2,3,4)과 일치하게 설계하였으며 각 방(7,8,9,10)에는 완충용액 주입구(11)가 각각 상단과 하단에 원형으로 나있다. 이를 통해 완충용액이 주입된다. 손잡이(13)은 혼합화 과정전후의 커버씰 탈부착을 용이케 한다.
도 5는 본 발명의 투명필름의 측면도로서 접착제 도포부분을 깊게 홈을 내어 실리콘 틀(6)과 투명필름과의 접착부분(12)에만 접착제가 붙도록 고안하였으며 또한 혼성화 반응시 유리 슬라이드에 심어진 핵산, 핵산유도체, 단백질, 세포, 조직들과의 오염을 제거토록 하였다. 투명필름의 두께는 실리콘 틀 두께보다 작으며 필름의 두께에 따라 방(cell)의 부피가 조정되어 진다.
도 6은 본 발명의 다중격막 커버씰의 최종 모형으로서 도 5의 투명필름 판과 도1의 실리콘 틀을 접착하여 만든다. 이때 먼저 실리콘 틀과 투명필름과의 접착부분(12)에 접착제를 붓으로 얇게 도포후 60℃에서 15분 정도 열풍건조후 접착하여 120℃에서 1.5시간에서 2시간 정도 건조시킨다. 얇은 유리면으로 아래위로 가볍게 눌러주면 효과적으로 접착이 된다.
따라서, 본 발명 이전에 있어서는 격막 간의 용액누수에 의한 오염도 문제때문에 사용을 기피하고 있는 일반적인 다중격막 커버씰의 보다 효과적인 개선안으로서 격막간 진공 흡착홈(5)을 설계하여 유리슬라이드와의 흡착력을 높이고 용액누수에 의한 오염을 방지할 수 있었다. 또한 본 다중격막 커버씰은 핵산, 핵산유도체, 단백질, 세포, 조직등의 혼성화 반응과 형광염색뿐만 아니라 이들 실험의 마이크로어레이(microarray)용도로도 스포팅(spotting)이 가능하게 디자인하였다.
이러한 다중격막 커버씰은 서로 다른 상태의 유전자 발현을 한 유리슬라이드 상에서 또는 동시에 동일한 시료 여러 개에 다른 반응조건을 가하여 한 유리슬라이드 상에서 실험되도록 하여 각 단계별 반복 처리절차를 축소시켜 관찰, 정확한 결과를 얻는 방법에 적용될 수 있다.
이상에서와 같이 본 발명에 의하면, 다중격막 커버씰의 격막 사이에 진공 흡착홈을 설계함으로써 격막 간의 용액누수와 이에 따른 오염을 방지할 수 있고, 따라서 다중격막 커버씰의 장점인 유전자 발현의 각 단계별 반복 처리절차를 단일 유리슬라이드 내에 축소시켜 관찰하거나 또한 동일한 여러 개의 시료(sample)에 동시적인 다른 반응조건 실험하는데 효과적으로 사용될 수 있다
Claims (5)
- 복수의 격막을 포함하는 다중격막 커버씰에 있어서, 상기 격막사이에 진공 흡착홈이 설계된 것을 특징으로 하는 다중격막 커버씰.
- 제 1 항에 있어서, 상기 커버씰은 진공 흡착홈이 설계된 실리콘 틀과 이에 부착된 투명필름으로 구성되는 것을 특징으로 하는 다중격막 커버씰.
- 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 핵산, 핵산유도체, 단백질, 세포 또는 조직의 혼성화 반응에 사용되는 것을 특징으로 하는 다중격막 커버씰.
- 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 핵산, 핵산유도체, 단백질, 세포 또는 조직의 마이크로어레이(microarray)용으로 사용되는 것을 특징으로 하는 다중격막 커버씰.
- 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 핵산, 핵산유도체, 단백질, 세포 또는 조직의 형광염색에 사용되는 것을 특징으로 하는 다중격막 커버씰.
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