KR20020022691A - 아미노옥시기를 포함하는 원자가 플랫폼 분자 - Google Patents

아미노옥시기를 포함하는 원자가 플랫폼 분자 Download PDF

Info

Publication number
KR20020022691A
KR20020022691A KR1020017015842A KR20017015842A KR20020022691A KR 20020022691 A KR20020022691 A KR 20020022691A KR 1020017015842 A KR1020017015842 A KR 1020017015842A KR 20017015842 A KR20017015842 A KR 20017015842A KR 20020022691 A KR20020022691 A KR 20020022691A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
group
compound
molecule
formula
conjugate
Prior art date
Application number
KR1020017015842A
Other languages
English (en)
Inventor
존즈데이비드에스.
톤-뉴훵-튜
지에팡
타오안핑
주통
함마커제프리로버트
Original Assignee
와이즈먼 앤드루
라 졸라 파마슈티칼 컴파니
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 와이즈먼 앤드루, 라 졸라 파마슈티칼 컴파니 filed Critical 와이즈먼 앤드루
Publication of KR20020022691A publication Critical patent/KR20020022691A/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D295/16—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms acylated on ring nitrogen atoms
    • C07D295/18—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms acylated on ring nitrogen atoms by radicals derived from carboxylic acids, or sulfur or nitrogen analogues thereof
    • C07D295/182—Radicals derived from carboxylic acids
    • C07D295/185—Radicals derived from carboxylic acids from aliphatic carboxylic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C251/00—Compounds containing nitrogen atoms doubly-bound to a carbon skeleton
    • C07C251/32—Oximes
    • C07C251/50—Oximes having oxygen atoms of oxyimino groups bound to carbon atoms of substituted hydrocarbon radicals
    • C07C251/60—Oximes having oxygen atoms of oxyimino groups bound to carbon atoms of substituted hydrocarbon radicals of hydrocarbon radicals substituted by carboxyl groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C271/06—Esters of carbamic acids
    • C07C271/08—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C271/10—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C271/16—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by singly-bound oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C271/06—Esters of carbamic acids
    • C07C271/08—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C271/10—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C271/20—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/50—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/51—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C323/60—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton with the carbon atom of at least one of the carboxyl groups bound to nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D295/16—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms acylated on ring nitrogen atoms
    • C07D295/20—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms acylated on ring nitrogen atoms by radicals derived from carbonic acid, or sulfur or nitrogen analogues thereof
    • C07D295/205—Radicals derived from carbonic acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/775—Apolipopeptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
    • C08B37/0009—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid alpha-D-Glucans, e.g. polydextrose, alternan, glycogen; (alpha-1,4)(alpha-1,6)-D-Glucans; (alpha-1,3)(alpha-1,4)-D-Glucans, e.g. isolichenan or nigeran; (alpha-1,4)-D-Glucans; (alpha-1,3)-D-Glucans, e.g. pseudonigeran; Derivatives thereof
    • C08B37/0012—Cyclodextrin [CD], e.g. cycle with 6 units (alpha), with 7 units (beta) and with 8 units (gamma), large-ring cyclodextrin or cycloamylose with 9 units or more; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
    • C08G65/333—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing nitrogen
    • C08G65/33396—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing nitrogen having oxygen in addition to nitrogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G83/00—Macromolecular compounds not provided for in groups C08G2/00 - C08G81/00
    • C08G83/002—Dendritic macromolecules
    • C08G83/003—Dendrimers

Abstract

아미노옥시기를 포함하는 분자가 제공되는데, 아미노옥시기 는 다른 분자의 공유 결합을 위한 결합 부위를 제공한다. 하나의 구체예에서, 폴리(아미노산)를 포함하는 다양한 생물학적 활성 분자에 콘쥬게이션될 수 있는, 아미노옥시기를 포함하는 폴리옥시에틸렌 분자가 제공된다. 다른 구체예에서, 아미노옥시기를 사용하여 폴리(아미노산)과 같은 생물학적 분자와 공유 결합을 형성시킬 수 있다. 아미노옥시기는 예컨대 글리옥실기와 같은 카르보닐기를 함유하는 변형된 폴리(아미노산)과 반응하여 옥심결합을 통해서 아미노기를 포함하는 원자가 플랫폼의 콘쥬게이트를 형성한다. 아미노옥시기를 포함하는 원자가 플랫폼 분자는 유리하게는 콘쥬게이트 형성에서 반응성, 또한 이들을 사용하여 매우 낮은 다분산성을 가진 조성물을 형성할 수 있다.

Description

아미노옥시기를 포함하는 원자가 플랫폼 분자{VALENCY PLATFORM MOLECULES COMPRISING AMINOOXY GROUPS}
"원자가 플랫폼"은 일반 비계(scaffold)에 관심있는 생물학적 활성 분자를 공유 결합시키도록 사용될 수 있는 하나 이상의( 및 통상 다수의) 결합 부위를 가진 분자이다. 일반 비계에 생물학적 활성 분자의 결합은 다가의 콘쥬게이트를 제공하는데, 생물학적 활성 분자의 다수의 사본은 동일한 플랫폼에 연결된다. "한정된, 정의된" 또는 "화학적으로 한정된" 원자가 플랫폼은 한정된 구조를 가진 플랫폼이고, 따라서 한정된 수의 결합점과 한정된 원자가를 가진 플랫폼이다. 한정된 원자가 플랫폼 콘쥬게이트는 한정된 구조의 콘쥬게이트이고, 한정된 수의 결합된 생물학적 활성 화합물을 가진다. 생물학적 활성 분자의 예는 올리고뉴클레오티드, 펩티드, 폴리펩티드, 단백질, 항체, 당류, 다당류, 에피토프, 미모토프, 약물 등을 포함한다. 예컨대, 생물학적 활성 화합물은 특히 단백질성 수용체와 상호작용한다.
어떤 부류의 화학적으로 한정된 원자가 플랫폼, 그들의 제조 방법, 그들을 포함하는 콘쥬게이트 및 이러한 콘쥬게이트의 제조 방법은 미국특허번호 5,162,515; 5,391,785; 5,276,013; 5,786,512; 5,726,329; 5,268,454; 5,552,391; 5,606,047 및 5,663,395호에 기재되어 있다. 카르바메이트 결합을 포함하는 원자가 플랫폼 분자는 1999. 12. 8에 출원된 미국임시특허출원 일련번호 60/111,641; 및 미국 일련번호 09/457,607에 기재되어 있다.
본 출원은 다른 분자에 공유 결합될 수 있는 아미노옥시기를 포함하는 분자에 관한 것이다. 특히, 본 출원은 생물학적 활성 분자와 같은 하나 이상의 분자들이 결합되어 콘쥬게이트를 형성할 수 있는 아미노옥시기를 포함하는 원자가 플랫폼 분자에 관한 것이다.
도 1은 아미노기전이된 폴리펩티드의 합성을 보여주는 반응식이다.
도 2는 아미노아세틸 원자가 플랫폼 분자의 합성을 보여주는 반응식이다.
도 3은 알킬아미노옥시 원자가 플랫폼 분자의 합성을 보여주는 반응식이다.
도 4는 알킬아미노옥시 원자가 플랫폼 분자의 합성의 다른 구체예를 보여주는 반응식이다.
도 5 및 6은 티오에테르 기능성(functionalities)을 포함하는 알킬아미노옥시 원자가 플랫폼 분자의 합성을 보여주는 반응식이다.
도 7은 알킬아미노옥시 원자가 플랫폼 분자의 합성의 다른 구체예를 보여주는 반응식이다.
도 8은 알킬아미노옥시 원자가 플랫폼 분자의 합성의 다른 구체예를 보여주는 반응식이다.
도 9는 피페라진 부분 및 옥심 결합을 포함하는 알킬아미노옥시 원자가 플랫폼 분자의 합성을 보여주는 반응식이다.
도 10은 알킬아미노옥시 원자가 플랫폼 분자의 합성을 보여주는 반응식이다.
도 11은 피페라진 부분 및 폴리펩티드를 포함하는 아미노옥시아세틸 원자가 플랫폼 분자의 콘쥬게이트의 합성을 보여주는 반응식이다.
도 12는 알킬아미노옥시 원자가 플랫폼 분자 및 폴리펩티드의 콘쥬게이트의 합성을 보여주는 반응식이다.
도 13은 모델 알킬아미노옥시 화합물 및 모델 아미노옥시아세틸 화합물에 대한 콘쥬게이트 형성 비율을 비교하는 그래프이다.
도 14는 모델 알킬아미노옥시 화합물 및 모델 아미노옥시아세틸 화합물의 합성 및 글리옥실화 폴리펩티드와 이들의 반응을 보여주는 반응식이다.
도 15는 알킬아미노옥시 원자가 플랫폼 분자 및 폴리(아미노산)의 콘쥬게이트의 합성의 다른 구체예를 보여주는 반응식이다.
도 16은 아미노옥시 링커 및 할로아세틸 플랫폼을 함유하는 티올을 사용하는 폴리펩티드의 다른 제조방법을 보여주는 반응식이다.
도 17은 원자가 플랫폼 분자상의 대표적 G2-ONH2기를 보여준다.
도 18은 아미노옥시기를 포함하는 원자가 플랫폼 분자에 대한 일부 대표적화학식을 보여준다.
도 19는 아미노옥시기를 포함하는 원자가 플랫폼 분자에 대한 다른 구체예를 보여준다.
도 20은 아미노옥시기를 포함하는 원자가 플랫폼 분자의 구체예를 보여준다.
도 21은 아미노옥시기를 포함하는 원자가 플랫폼 분자의 다른 구체예를 보여준다.
도 22는 아미노옥시기를 포함하는 원자가 플랫폼 분자의 또 다른 구체예를 보여준다.
도 23은 화합물 85의 합성 반응식을 보여준다.
도 24는 화합물 86의 합성 반응식을 보여준다.
도 25는 화합물 91의 합성 반응식을 보여준다.
도 26은 화합물 92의 합성 반응식을 보여준다.
도 27은 화합물 113의 합성 반응식을 보여준다.
도 28은 다양한 분자량의 폴리에틸렌 옥사이드기를 포함하는 다가의 플랫폼 분자의 합성 반응식을 보여준다.
도 29는 폴리에틸렌 옥사이드기들 및 분지기들(branching groups)을 포함하는 다가의 플랫폼 분자의 합성 반응식을 보여준다.
도 30은 하나의 폴리에틸렌 옥사이드기 및 분지형기를 포함하는 다가의 플랫폼 분자의 합성 반응식을 보여준다.
도 31은 폴리에틸렌 글리콜기들을 포함하는 다가의 플랫폼 분자의 합성 반응식을 보여준다.
도 32는 하나의 폴리에틸렌 글리콜기를 포함하는 다가의 플랫폼 분자의 합성 반응식을 보여준다.
도 33은 원자가 플랫폼 분자와 생물학적 활성 분자의 일부 대표적 콘쥬게이트의 구조를 보여준다.
도 34는 폴리에틸렌 옥사이드(여기서, n은 예컨대, 112임)를 포함하는 8가의 플랫폼의 합성을 보여준다.
도 35는 두 개의 폴리에틸렌 옥사이드기(여기서, n 은 예컨대, 500이상임)를 포함하는 원자가 플랫폼 분자의 합성을 보여준다.
발명의 실시 형태
아미노옥시기를 포함하는 분자가 제공된다. 아미노옥시기는 중합체와 같은 분자상에서, 예컨대 생물학적 활성 분자와 같은 다른 분자의 공유 결합을 위한 결합 부위를 제공하는 말단 위치에서 제공될 수 있다. 예컨대, 폴리(에틸렌옥사이드) 중합체, 특히 폴리에틸렌 글리콜을 포함하는 폴리(알킬렌옥사이드) 중합체와 같은 다양한 중합체는 아미노옥시기를 함유하도록 변형될 수 있다. 아미노옥시기를 사용하여 반응성기, 바람직하게는 알데히드 또는 케톤기를 함유하는 다른 분자들과 신속하고 우수한 수율로 반응시켜 다른 분자와 공유 콘쥬게이트를 형성할 수 있으므로, 아미노옥시기가 바람직하다. 아미노옥시기는 아민, 히드라지드, 카르바지드 및 세미카르바지드 등의 작용기를 함유하는 다른 질소에 비하여, 알데히드 또는 케톤과 반응시켜 C=N 결합 형태의 안정한 콘쥬게이트를 형성하는 개선된 결과를 제공한다. 아미노옥시기는 반응 시간을 감소시키고, 생성물 수율을 증가시키는 것을 모두 가능하게 한다.
아미노옥시기를 포함하도록 변형될 수 있는 다른 분자는 예컨대, 폴리옥시에틸렌 부분과 같은 폴리옥시알킬렌 부분을 포함하는 분지형, 선형, 블록형, 및 별모양 중합체 및 공중합체, 특히 폴리에틸엔 글리콜을 포함한다. 폴리에틸렌 글리콜은 바람직하게는 약 10,000 달톤 미만의 분자량을 가진다. 하나의 구체예에서, 낮은 다분산성을 가진 중합체가 사용될 수 있다. 예컨대, 폴리에틸렌 글리콜을 포함하는 폴리옥시프로필렌 및 폴리옥시에틸렌 중합체 및 공중합체는 아미노옥시기를 포함하도록 변형될 수 있는데, 중합체는 예컨대, 1.5 미만 또는 1.2 미만, 또는 선택적으로 1.1 미만 또는 1.07 미만의 낮은 다분산성을 가진다. 바람직하게는, 중합체는 3 이상의 아미노옥시기, 또는 적어도 4, 5, 6, 7, 8, 또는 그 이상을 포함한다.
또한, 비중합 분자가 본원에서 기재된 아미노옥시기를 포함하도록 변형될 수 있다. 예컨대, 미국특허번호 5,552, 391에 기재된 바와 같은 화학적으로 한정된 비-중합 원자가 플랫폼 분자는 아미노옥시기를 포함하도록 변형될 수 있다.
또한, 예를 들어, 약제학적으로 허용가능한 형태, 예컨대, 약제학적으로 허용가능한 담체에서 이러한 분자 및 콘쥬게이트를 포함하는 조성물이 제공된다. 경구, 정맥내, 및 에어로졸 투여를 포함하는 다른 투여 경로를 위한 담체가 당업계에 설명되어 있다.(예컨대, 본원에서 참고문헌으로 포함된 개시인 "Reminton: The Science and Practice of Pharmacy, "Mack Publishing Company, Pennsylvania, 1995, 참조). 담체는 예컨대, 물, 당류, 다당류, 완충액, 부형제 및 폴리에스테르와 같은 생분해성 중합체, 폴리무수물, 폴리아미노산 및 리포좀을 포함할 수 있다.
약제학적으로 허용가능한 조성물은 개체에 투여, 예컨대 단위 용량형태, 멸균 주사용액 또는 현탁액, 멸균 경구용액 또는 경구 용액 또는 현탁액, 수중 오일 또는 오일중 물 에멀젼 등으로 개체에 전신 또는 국소 투여에 적합한 형태의 조성물이다.
원자가 플랫폼
하나의 양태에서, 아미노옥시기를 포함하는 원자가 플랫폼 분자의 생물학적 활성 분자와 같은 분자와 그의 콘쥬게이트, 및 그러한 플랫폼과 콘쥬게이트의 제조 방법이 제공된다.
다양한 원자가 플랫폼 분자가 당업계에 공지되어 있다. 화학적으로 한정된 원자가 플랫폼 분자가 바람직하다. 원자가 플랫폼 분자의 제조 방법이 예컨대, 미국특허번호 제 5,162,515호; 제 5,391,785호; 제 5,276,013호; 제 5,786,512호; 제 5,726,329호; 제 5,268,454호; 제 5,552,391호; 제 5,606,047호; 제 5,663,395호 및 제 5,874,409호 외에도 미국일련번호 60/111,641 및 PCT US97/10075에 설명되어 있다. 일반적으로, 이들 플랫폼은 코어기 또는 히드록실기, 카르복실기, 아미노기, 알데히드, 케톤, 또는 알킬 할라이드에서 종결되는 분지형 코어기를 함유한다. 이들 기를 더 변형시켜 바람직한 반응성기를 제공할 수 있고, 바람직하게는 3 이상의 아미노옥시기를 포함하는 원자가 플랫폼 분자를 얻을 수 있다.
원자가 플랫폼은 바람직한 원자가를 함유하는 코어기로부터 제조된다. 사슬은 사슬이 어떻게 종결되는지에 따라, 하나 또는 둘의 원자가를 제공할 수 있다.분지형 사슬은 분지 또는 곁사슬의 수에 따라 3 이상의 원자가를 제공할 수 있다. 예컨대, 트리에틸렌 글리콜은 원자가가 2이고, 에탄올은 원자가가 1이며, 펜타에리트리톨은 원자가가 4이다. 이들은 더 변형되어 바람직한 반응성기를 제공할 수 있는 히드록실기에서 종결되는 사슬들이다. 사슬은 또한 아민, 티올, 알킬 할라이드, 카르복실기, 알데히드, 케톤과 같은 다른 기 또는 더 변형될 수 있는 다른 기에서도 종결된다.
이들 사슬은 코어기로서 작용할 수 있다. 코어기의 원자가는 분지 부분을 가진 말단 기능성을 유도함으로써 증가될 수 있다. 예컨대, 트리에틸렌 글리콜을 비스-클로로포르메이트 유도체로 전환시킴으로써 원자가가 2인 트리에틸렌 글리콜이 원자가 4인 플랫폼으로 전환될 수 있다. 적합하게 치환된 디에틸렌트리아민과 비스-클로로포르메이트의 반응은 실시예 6에서 설명되는 바와 같이 4가 플랫폼을 제공한다. 마찬가지로, 이미노디아세트산과 트리에틸렌글리콜 비스-클로로포르메이트의 반응은 실시예 7에 나타난 바와 같이 카르복실기에서 종결되는 4가 플랫폼을 제공한다.
당업계에 공지된 원자가 플랫폼 분자의 제조 방법은 예컨대, 증식법(propagation method) 또는 분절 접근법(segmented approach)을 포함한다. 이러한 방법은 생성된 분자상의 아미노옥시기기를 제공하기에 적합한 반응시약을 사용하여 변형될 수 있다. 예컨대, 할라이드기, 히드록실기, 아미노기, 알데히드, 케톤, 또는 카르복실기와 같은 반응성기를 반응시켜, 아미노옥시기를 포함하고 선택적으로 보호된, 링커와 같은 분자를 결합시킬 수 있다. 대표적인 방법은 본원의실시예에 설명되어 있다.
원자가 플랫폼 분자 사용의 장점은 각각의 합성이, 예컨대 다른 알킬렌옥시 또는 디알콜아민기를 사용함으로써 원자가 플랫폼의 "팔"의 길이 및 수용해도를 조절하는 능력, 및 코어기의 선택에 의해 원자가 플랫폼의 특성을 더 약화시키는 능력을 포함한다.
하나의 양태에서, 실질적으로 단일분산인 원자가 플랫폼 분자를 제공된다. 아미노옥시 원자가 플랫폼 분자는 유리하게는 분자량 분포가 협소하다. 아미노옥시기 원자가 플랫폼 분자 샘플의 분자량 분포 넓이의 기준이 샘플의 다분산성이다. 다분산성은 분자량 균일성 또는 중합체 샘플의 비균일성 기준로서 사용된다. 다분산성은 평균 분자량(Mw)을 수평균 분자량(Mn)으로 나눔으로써 계산된다. Mw/Mn의 값은 완전히 단일분산 중합체에 대한 균일성이다. 다분산성 (Mw/Mn)은 겔투과 크로마토그래피와 같은 당업계에서 이용가능한 방법에 의해서 측정된다. 아미노옥시기 원자가 플랫폼 분자 샘플의 다분산성(Mw/Mn)은 바람직하게는 2 미만, 더욱 바람직하게는 1.5 미만, 또는 1.2 미만, 1.07 미만, 1.02 미만, 또는 예컨대 약 1.05 내지 1.5 또는 약 1.05 내지 1.2이다. 일반적으로 통상의 중합체의 다분산성은 2 내지 5이고, 어떤 경우는 20이상이다. 원자가 플랫폼 분자의 낮은 다분산성 특성의 장점은 개선된 생체적합성 및 생체이용가능성을 포함하는데, 이는 상기 분자의 크기가 실질적으로 균일하고, 분자량의 광범위한 변수에 기인한 생물학적 활성의 변수가 최소화되기 때문이다. 따라서, 낮은 다분산성 분자가 약제학적으로 가장 바람직하게 제제화되고, 분석이 용이하다. 또한, 샘플 중 제어된 원자가 집단의 분자가있다.
어떤 구체예에서, 원자가 플랫폼 분자는 연속하는 분기점의 존재 때문에 "수지상 조직(dendritic)" 으로 설명될 수 있다. 수지상 조직의 원자가 플랫폼 분자는 다수의 말단, 대표적으로 4 이상의 말단, 예컨대 8 말단 또는 16 말단을 가진다.
하나의 구체예에서, 아미노옥시기를 포함하고, 카르바메이트외의작용기를 포함하는 화학적으로 한정된 원자가 플랫폼 분자가 제공된다.
본원에 개시된 화학식들은 "합성" 및 "비합성" 원자가 플랫폼을 포함하는 것을 말한다는 것에 주의하라. 하나의 구체예에서, 원자가 플랫폼은 대칭적이다. 다른 구체예에서는, 원자가 플랫폼은 비대칭이다.
일반 화학식
하나의 구체예에서, 말단 아미노옥시기, 예컨대 1 내지 100, 예컨대 1-50, 2-16, 4-16, 또는 예컨대 2, 3, 4, 8, 16, 32 또는 그이상의 아미노옥시기를 포함하는 원자가 플랫폼 분자가 제공된다. 하나의 구체예에서, 3 또는 4 이상의 아미노옥시기를 가지고, 선택적으로 옥시에틸렌기와 같은 옥시알킬렌기 또는 그의 중합체를 더 포함하는 원자가 플랫폼 분자가 제공된다.
하나의 구체예에서, 화학식 1을 가지는 원자가 플랫폼 분자가 제공된다.
(화학식 1)
R-(ONH2)m
상기식에서,
m은 1 내지 100, 예컨대, 1-50, 1-16, 2-16, 4-16, 또는 예컨대 2, 4, 8, 16, 32 또는 그 이상이고, 하나의 구체예에서, 3 이상, 예컨대, 3-50이고; 그리고
R은 예를 들어, 예컨대, H, C, N, O, P, Si 및 S 원자외에도 할로겐 원자를 포함하여, 원자 예컨대 1 내지 10,000 원자, 1 내지 1000원자, 또는 예컨대 1-100 원자를 포함하는 유기 부분이다. 예컨대, R은 1 내지 1000 또는 1-100, H, N, 또는 O 원자를 포함할 수 있다.
다른 구체예에서, 원자가 플랫폼 분자는 화학식 2를 가진다.
(화학식 2)
Rc[G1(ONH2)n]y
상기식에서,
y는 예를 들어, 1 내지 100, 예컨대, 1-50, 1-32, 1-16, 2-16, 4-16, 또는 예컨대 1, 2, 3, 4, 8, 16, 32 또는 그 이상이고;
n은 예를 들어, 1 내지 100, 예컨대 1-50, 1-32, 1-16, 2-16, 4-16, 또는 예컨대 2, 3, 4, 8, 16, 32 또는 그 이상이고;
(여기서, 하나의 구체예에서, y * n (y의 n배)의 결과는 3 이상이다); 그리고
Rc및 각 G1은 독립적으로, 예컨대, 1000 미만의 원자, 1,000 내지 10,000 또는 그 이상의 예컨대, H, C, N, O, P, Si 및 S 원자의 군으로부터 선택되는 원자를 포함하는 유기 부분이다.
하나의 구체예에서, Rc은 하기에 정의된 바와 같고, G1은 하기에 정의된 G2와 같다. 하나의 구체예에서, 화학식 2의 분자는 옥시알킬렌기를 포함한다.
다른 구체예에서, 또한 도 18에 제시된 다음 화학식 중 하나를 가지는 원자가 플랫폼 분자가 제공된다:
(화학식 3)
RC[O-C(=O)-NR1-G2-(ONH2)n]y
(화학식 4)
Rc[C(=O)-NR1-G2-(ONH2)n]y
(화학식 5)
Rc[NR1-C(=O)-G2-(ONH2)n]y
(화학식 6)
Rc[NR1-C(=O)-O-G2-(ONH2)n]y
(화학식 7)
Rc[R1C=N-0-G2-(ONH2)n]y
(화학식 8)
Rc[S-G2(ONH2)n]y
상기식에서, 하나의 구체예에서;
y는 1 내지 100, 예컨대 1-50, 1-32, 1-16, 2-16, 4-16, 또는 예컨대 1, 2, 3, 4, 6, 8, 16, 32, 64 또는 그 이상이고;
n은 1 내지 100, 예컨대 1-50, 1-32, 1-16, 2-16, 4-16, 또는 예컨대 2, 3, 4, 8, 16, 32, 64 또는 그 이상이고;
(여기서, 하나의 구체예에서, y * n (y의 n배)의 결과는 3 이상이다); 그리고
Rl이 존재하면 예컨대, H, 알킬, 헤테로알킬, 아릴, 헤테로아릴이고, 또는 선택적으로 본원에서 정의된 G2(ONH2)n이고; 그리고
Rc및 각 G2은 독립적으로 예컨대, H, C, N, O, P, Si 및 S 원자, 또는 선택적으로 할로겐 원자의 군으로부터 선택되는 원자를 포함하는, 예컨대, 1 내지 10,000, 1 내지 1000 원자, 또는 1 내지 100 원자의 유기 부분이다.
따라서, Rl은 하나의 구체예에서, 메틸, 에틸 또는 프로필과 같은 탄소와 수소기를 포함하는 어떤 알킬 부분, 또는 직쇄, 분지형 또는 고리 구조를 포함하는, 다른 탄화수소일 수 있고, 이것은 포화되거나 불포화될 수 있고, 아니면 예컨대, O, S 또는 N 원자를 더 포함하는 헤테로알킬기일 수 있고, 아니면 아릴이나 헤테로아릴기일 수 있다.
하나의 구체예에서, Rc및 각 G2독립적으로 예컨대, 직쇄, 분지형 또는 그리 구조를 포함하고, 다음으로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택된다:
오직 H 및 C 원자만으로 구성되고, 1 내지 5,000, 1 내지 500, 1 내지 200, 1 내지 100, 또는 예컨대 1 내지 20 탄소 원자를 가지는 히드로카르빌기;
오직 탄소, 산소, 및 수소 원자만으로 구성되고, 1 내지 5,000, 1 내지 500, 1 내지 200, 1 내지 100, 또는 예컨대 1 내지 20 탄소 원자를 가지는 유기기;
오직 탄소, 산소, 질소, 및 수소 원자만으로 구성되고, 1 내지 5,000, 1 내지 500, 1 내지 200, 1 내지 100, 또는 예컨대 1 내지 20 탄소 원자를 가지는 유기기;
오직 탄소, 산소, 황, 및 수소 원자만으로 구성되고, 1 내지 5,000, 1 내지 500, 1 내지 200, 1 내지 100, 또는 예컨대 1 내지 20 탄소 원자를 가지는 유기기;
오직 탄소, 산소, 황, 질소, 및 수소 원자만으로 구성되고, 1 내지 5,000, 1 내지 500, 1 내지 200, 1 내지 100, 또는 예컨대 1 내지 20 탄소 원자를 가지는 유기기.
상기 화학식에서, Rc는 원자가 플랫폼의 코어를 형성하고, 유기기인 "코어기"를 뜻하고, 이것에 하나 이상의 유기기가 결합된다. 하나의 구체예에서, 코어기의 원자가는 y에 대응한다. 만일 y가 1 이면, Rc는 1가이고; y가 2이면 Rc는 2가이고; y가 3이면, Rc는 3가이고; y가 4이면, Rc는 4가; 기타 등등이다.
Rc는 예컨대, 알킬, 헤테로알킬, 아릴, 헤테로아릴일 수 있고, 예컨대 직쇄, 분지형 또는 고리일 수 있다.
하나의 구체예에서, Rc는 1 내지 2000, 또는 1 내지 200 탄소 원자, 예컨대 1 내지 100 탄소 원자, 또는 1 내지 50 탄소 원자를 가지는 히드로카르빌기(즉, 탄소 및 수소만으로 구성됨)이다. Rc는 예컨대, 선형 또는 분지형일 수 있고, 고리 구조를 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, Rc는 고리이다. Rc는 포화되거나 아니면 완전하게 또는 부분적으로 불포화될 수 있다. Rc는 방향족 구조이거나 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, Rc는 예컨대 1 내지 6의 원자가를 가지는, 벤질기와 같은 방향족기이다. Rc는 예컨대 -CH2- ; -CH2CH2- ; -CH2CH2CH2- ; 또는 C(CH2-)4일 수 있다. 또한 Rc는 예컨대, -(CH2)n-(여기서, n은 1 내지 20임)일 수 있다.
하나의 구체예에서, Rc는 탄소, 산소, 및 수소 원자만으로 구성되고, 예컨대 1 내지 5,000, 1 내지 500, 1 내지 200, 1 내지 50, 또는 1 내지 20 탄소 원자를, 또는 예컨대 1 내지 10 탄소 원자, 또는 예컨대 1 내지 6 탄소 원자를 가지는 유기기이다. Rc는 알콕시기이거나 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, Rc는 폴리옥시에틸렌기 또는 폴리옥시프로필렌기와 같은 폴리옥시알킬렌기를 포함하거나 아니면 그로부터 유도될 수 있다. Rc는 2가 폴리옥시에틸렌 또는 폴리옥시프로필렌기와 같은 2가 폴리옥시알킬렌기이거나 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, Rc는 예컨대, 약 1 내지 5,000, 1 내지 500, 1 내지 200, 1 내지 100 또는 1 내지 50 옥시프로필렌 단위, 또는 1 내지 20, 1 내지 10, 또는 1, 2, 3, 4, 또는 5 옥시프로필렌 단위를 포함하는 2가 폴리옥시프로필렌기이거나 포함할 수 있다. 다른 구체예에서, Rc는 예컨대, 약 1 내지 5,000, 1 내지 500, 1 내지 200, 1 내지 100 또는 1 내지 50 옥시에틸렌 단위, 또는 예컨대 1 내지 20, 1 내지 10, 또는 1, 2, 3, 4, 또는 5 옥시에틸렌 단위를 포함하는 2가 옥시에틸렌기이거나 포함할 수 있다.
하나의 구체예에서, Rc는:
이다.
상기식에서, p는 양수 2 내지 약 500, 예컨대 2-200, 예컨대 2 내지 약 50, 2 내지 약 20, 2 내지 약 10, 또는 2 내지 약 6이다. 하나의 구체예에서, p는 2, 3, 4, 5 또는 6이다.
하나의 구체예에서, Rc는 탄소, 산소, 질소, 및 수소 원자만으로 구성되고, 1 내지 5,000, 1 내지 500, 1 내지 200, 또는 1 내지 20 탄소 원자, 예컨대 1 내지10 탄소 원자를 가지는 유기기이다.
하나의 구체예에서, Rc는 탄소, 산소, 황, 및 수소 원자만으로 구성되고, 1 내지 5,000, 1 내지 500, 1 내지 200, 예컨대 1 내지 100 탄소 원자, 또는 1 내지 10 탄소 원자를 가지는 유기기이다.
Rc는 예컨대, C1-200 탄화수소 부분; C1-200 알콕시 부분; 또는 방향족기를 포함하는 C1-200 탄화수소 부분일 수 있다.
Rc는 에틸렌 글리콜, 디에틸렌 글리콜(DEG로도 칭함), 트리에틸렌 글리콜 (TEG로도 칭함), 테트라에틸렌 글리콜, 펜타에틸렌 글리콜, 헥사에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜(PEG로도 칭함) (여기서, n은 통상 1 내지 약 200이고, 1,4-디히드록시메틸벤젠임)과 같은 두개의 히드록실기를 가지는 코어 화합물을 함유하는 알콜이거나 포함할 수 있다. 3개의 히드록실기를 가지는 코어 화합물을 함유하는 알콜의 예는 플루오로글루시놀(1,3,5-트리히드록시벤젠으로서 공지됨), 1,3,5-트리히드록시메틸벤젠, 및 1, 3,5-트리히드록시시클로헥산을 포함한다. 4개의 히드록실기를 가지는 코어 화합물을 함유하는 알콜의 예는 펜타에리트리톨을 포함한다.
상기 화학식에서, G2는 유기 "링커기"를 지시할 수 있다. 하나의 구체예에서 G2는 알킬, 헤테로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴과 같은 유기기이거나 포함할 수 있고, 예컨대, 직쇄, 분지형 또는 고리 구조이거나 함유할 수 있다. G2는 예컨대, 히드로카르빌, 에틸렌옥시, 폴리에틸렌옥시, 프로필렌옥시 또는 폴리프로필렌옥시기,또는 그의 조합을 포함할 수 있다. G2는 선택적으로 S 및 N을 포함하는 그외 헤테로원자를 포함할 수 있다.
또한, G2는 아민, 아미드, 에스테르, 에테르, 케톤, 알데히드, 카르바메이트 및 티오에테르와 같은 작용기를 포함할 수 있다. 또한 G2는 피레라지닐 또는 피레리디닐기와 같은, 1차, 2차 및 3차의, 포화되거나 불포화된 알킬 아민기와 같은 작용기를 포함할 수 있다. 또한, G2는 폴리알콜, 폴리아민; 폴리에테르; 히드라지드; 히드라진; 카르복실산; 무수물; 할로; 술포닐; 술포네이트; 술폰; 이미데이트; 시아네이트; 이소시아네이트; 이소티오시아네이트; 포르메이트; 티올; 알콜; 옥심; 이민; 아미노옥시; 및 말레이미드를 포함하는 작용기를 포함할 수 있다.
하나의 구체예에서, G2는 1 내지 5,000, 1 내지 500 또는 1 내지 200 탄소 원자, 예컨대 1 내지 100 탄소 원자, 또는 1 내지 10 탄소 원자를 포함하는 히드로카르빌기(즉, 탄소 및 수소만으로 구성됨)이다. 하나의 구체예에서, G2는 알킬기, 예컨대, -(CH2)q-(q는 1 내지 20임)이거나 포함한다. 하나의 구체예에서, G2는 선형, 분지형, 또는 고리 구조이거나 포함한다. G2는 완전히 또는 부분적으로 불포화되거나 포화될 수 있다. 하나의 구체예에서, G2는 방향족 구조를 포함한다. 하나의 구체예에서, G2는 방향족이다. 하나의 구체예에서, G2는 2가이다. 하나의 구체예에서, G2는 -(CH2)q- (q는 1 내지 약 20, 예컨대 1 내지 약 10, 또는 1 내지 약 6, 또는 1 내지 약 4이다)이거나 포함한다. 하나의 구체예에서, G2는 -CH2-이다. 하나의 구체예에서, G2는 -CH2CH2-이거나 포함한다. 하나의 구체예에서, G2는 -CH2CH2CH2-이거나 포함한다.
하나의 구체예에서, G2는 탄소, 산소, 및 수소만으로 구성되고, 1 내지 5,000, 1 내지 500, 1 내지 200, 1 내지 50, 예컨대 1-20 탄소 원자, 또는 예컨대 1 내지 10 탄소 원자, 또는 1 내지 6 탄소 원자를 가지는 유기기이다. 하나의 구체예에서, G2는 폴리옥시알킬렌기로부터 유도된다. 하나의 구체예에서, G2는 2가 폴리옥시알킬렌기이거나 포함한다. 하나의 구체예에서, G2는 2가 폴리옥시에틸렌기이거나 포함한다. 하나의 구체예에서, G2는 2가 폴리옥시프로필렌기이거나 포함한다. 하나의 구체예에서, G2는
이거나 포함한다.
상기식에서, p는 2 내지 약 200 또는 500, 예컨대 2 내지 약 50, 또는 2 내지 약 20, 또는 2 내지 약 10, 또는 2 내지 약 6이다. 하나의 구체예에서, p는 2, 3, 4, 5 또는 6이다.
하나의 구체예에서, G2는 탄소, 산소, 질소, 및 수소 원자만으로 구성되고, 1 내지 5,000, 1 내지 500, 예컨대 1 내지 200 탄소 원자, 예컨대 1 내지 100 탄소원자, 또는 1 내지 10 탄소 원자를 가지는 유기기이다.
G2는 예컨대, C1-200 탄화수소 부분; C1-200 알콕시 부분; 또는 방향족기를 포함하는 C1-200 탄화수소 부분일 수 있다.
하나의 구체예에서, 원자가 플랫폼 분자는 도 19에 제시된 화학식 9 내지 13중 어느 하나를 가진다. 도 9 내지 13에서, 하나의 구체예에서, Rc및 G2는 상기 정의한 바와 같고, n은 약 1-500, 예컨대 1-200, 1-100, 또는 1-50, 예컨대 1-20, 1-10, 또는 예컨대 1, 2, 3, 4 또는 5이다. 하나의 구체예에서, G2-ONH2는 도 17에 제시된 구조 중 어느 하나를 가진다.
다른 구체예에서, 원자가 플랫폼 분자는 도 20, 21 및 22에 제시된 구조 중 어느 하나를 가진다.
본원에서 개시된 각각의 화합물 및 화학식의 바람직한 구체예에서, 원자가 플랫폼 분자는 아미노옥시알킬기, 예컨대 -CH2CH2ONH2인 아미노옥시기를 포함한다.
아미노옥시기를 포함하는 분자의 제조
다양한 분자가 본원에서 개시된 반응성 아미노옥시기를 포함하도록 변형될 있 수 있다. 예컨대, 10,000 달톤미만의 분자량을 가지는, 예컨대, 폴리(에틸렌옥사이드)중합체를 포함하는 폴리(알킬렌옥사이드) 중합체, 특히 폴리에틸렌 글리콜과 같은 다양한 중합체가 아미노옥시기를 함유하도록 변형될 수 있다.
아미노옥시기를 포함하도록 변형될 수 있는 그외 분자는 예컨대, 폴리(에틸렌옥사이드)분자와 같은 폴리(알킬렌옥사이드)부분을 포함하는, 분지형, 선형, 블록형, 및 별모양 중합체 및 공중합체를 포함한다. 바람직한 구체예에서, 3 이상의 아미노옥시기를 포함하고, 선택적으로 약 10,000 미만의 분자량을 가지는 폴리에틸렌 글리콜 분자가 제공된다.
한 양태에서, 원자가 플랫폼 분자는 아미노옥시기를 포함하도록 변형될 수 있다. 원자가 플랫폼 분자의 제조 방법이 예컨대 미국특허번호 제 5,162,515호; 제 5,391,785호; 제 5,276,013호; 제 5,786,512호; 제 5,726,329호; 제 5,268,454호; 제 5,552,391호; 제 5,606,047호; 제 5,663,395호 및 제 5,874,409호 외에도 미국일련번호 60/111,641 및 PCT US97/10075에 설명되어 있다.
당업계에 공지된 원자가 플랫폼 분자의 제조 방법은 예컨대 증식법, 또는 분절 접근법을 포함한다. 이러한 방법은 최종 분자상에 아미노옥시기를 제공하기에 적당한 반응시약을 사용하여 변형될 수 잇다. 예컨대, 할라이드기 또는 히드록시기와 같은 반응성기를 반응시켜 아미노옥시기를 포함하고 선택적으로 보호된, 링커와 같은 분자를 결합시킬 수 있다. 대표적인 방법이 본원의 실시에에 설명되어 있다.
원자가 플랫폼은 분절이 독립적으로 합성되고 이어서 코어기에 결합하는 분절 접근법으로부터 제조될 수 있다. 분절 접근법에 대한 대안은 수지상 조직 구조를 발생시키도록 사용될 수 있는 반복 공정인 코어 증식법이다.
코어 화합물의 예는 코어 화합물 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 및 메톡시폴리에틸렌 글리콜을 함유하는 알콜, 모노-히드록실아민, 에틸렌 글리콜, 디에틸렌 글리콜, 트리에틸렌 글리콜, 테트라에틸렌 글리콜, 펜타에틸렌 글리콜,헥사에틸렌 글리콜, 1,4-비스-(히드록시메틸)벤젠 및 폴리에틸렌 글리콜, HO(CH2CH2O)nH,(여기서, 예컨대, n은 약 1-500 또는 1-200, 예컨대 1-10, 또는 1 내지 5이다), 또는 2개의 히드록실기를 가지는 1차 또는 2차 아민을 포함한다.
아미노옥시 플랫폼은 예컨대 원자가 4를 제공하도록 제조될 수 있다. 화학식 2의 원자가 플랫폼 분자는 예를 들어 실시예, 예컨대 실시예 9에 설명된 바와 같이 제조될 수 있다. 상기 분자들은 아미노옥시기로 전환될 수 있는 말단기를 가진 4가 원자가 플랫폼 분자로부터 제조될 수 있다. 일반적으로, 할라이드 또는 술포네이트기와 같은, 보호된 히드록실아민 유도체의 산소와 치환될 수 있는 우수한 이탈기가 사용될 수 있다. 또한 히드록실기는 옥사지리딘 형태 시약 또는 미츠노부 화학(Mitsunobu Chemistry)을 사용하여 아미노옥시기로 전환될 수 있다. 본 실시예에서, 테트라알킬 할라이드 플랫폼이 제조되어, 할라이드가 N-(tert-부톡시카르보닐) 히드록실아민의 산소원자와치환된다. Boc(N-(테트라부톡시카르보닐))보호기의 제거는 아미노옥시 플랫폼을 제공한다.
다른 실시예는 플랫폼의 말단기에 결합되는, 적합하게 보호된 알콕시아민 2작용기성 링커의 제조를 포함한다. 화학식 3의 원자가 플랫폼 분자는 실시예, 예컨대 실시예 3에서 설명된 방법에 의하여 히드록실기에서 종결되는 원자가 플랫폼 분자로부터 제조될 수 있다. 활성화 카르보네이트로 히드록실기는 전환된다. 유리 아미노기 및 보호된 아미노옥시기를 가지 2가 링커가 제조된다. 2가 링커가 카르보네이트 에스테르와 유리 아미노기의 반응에 의하여 플랫폼에 연결되어 카르바메이트결합을 형성하고, 보호기는 아미노옥시기로부터 제거되어 아미노옥시 플랫폼을 유리시킨다.
화학식 4의 원자가 플랫폼 분자는 실시예 예를 들어, 예컨대, 실시예 7에서 상세하게 설명된 방법에 의하여 카르복실기에서 종결되는 원자가 플랫폼 분자로부터 제조될 수 있다. 유리 아미노기 및 보호된 아미노옥시기를 가지는 2 가 링커가 제조된다. 카르복실기는 활성화되고, 링커는 활성화된 카르복실기와 유리 아미노기의 반응에 의하여 플랫폼에 연결되어 아미드 결합을 형성한다. 보호기는 아미노옥시기로부터 제거되어 아미노옥시 플랫폼을 유리시킨다.
화학식 5의 원자가 플랫폼 분자는 예를 들어, 실시예, 예컨대 실시예 2에서 상세하게 설명된 방법에 의하여 예컨대 아미노기에서 종결되는 원자가 플랫폼 분자로부터 제조될 수 있다. 활성화된 카르복실기 및 보호된 아미노옥시기를 가지는 2 가 링커가 제조된다. 플랫폼상의 아미노기는 링커에서 활성화된 카르복실기와 반응하여 아미드 결합을 형성한다. 보호기는 아미노옥시기로부터 제거되어 아미노옥시 플랫폼을 유리시킨다.
화학식 6의 원자가 플랫폼 분자는 예를 들어, 실시예, 예컨대 실시예 4 및 6에서 상세하게 설명된 방법에 의하여 아미노기에서 종결되는원자가 플랫폼 분자로부터 제조될 수 있다. 실시예에서 제공된 반응성 할로아세틸기가 사용된다. 유리 티올 및 보호된 아미노옥시기를 가지는 2 가 링커가 제조된다. 플랫폼상의 아미노기는 링커에서 활성화된 카르보네이트와 반응하여 카르바메이트 결합을 형성한다. 보호기는 아미노옥시기로부터 제거되어 아미노옥시 플랫폼을 유리시킨다.
화학식 7의 원자가 플랫폼 분자는 예를 들어, 실시예, 예컨대 실시예 8에서 상세하게 설명된 방법에 의하여 알데히드 또는 케톤기에서 종결되는 원자가 플랫폼 분자로부터 제조될 수 있다. 2개의 유리 아노옥시기를 가지는 2 가 링커가 제조된다. 플랫폼상의 알데히드 또는 케톤(실시예 8의 케톤)은 과잉의 2가 비스-아미노옥시 링커와 반응하여 아미노옥시 플랫폼을 제공한다.
화학식 8의 원자가 플랫폼 분자는 예를 들어, 실시예, 예컨대 실시예 5a 및 5b에서 상세하게 설명된 방법에 의하여 알킬 할라이드기에서 종결되는 원자가 플랫폼 분자로부터 제조될 수 있다. 제공된 실시예에서, 반응성 할로아세틸기가 사용된다. 유리 티올 및 보호된 아미노옥시기를 가지는 2 가 링커가 제조된다. 플랫폼상의 할라이드(또는 다른 적합한 이탈기)는 링커상의 유리 티올과 반응하여 티오에테르 결합을 형성한다. 보호기는 아미노옥시기로부터 제거되어 아미노옥시 플랫폼을 유리시킨다.
도 34에 나타난 바와 같이, 하나의 구체예에서 bPEG 8-mer 플랫폼 M은 4가로된 PNP 카르보네이트 에스테르 (화합물50a)가 화합물 133과 반응하여 화합물 K이 형성되는 방법에 의하여 합성된다. Boc-보호기는 화합물K로 부터 제거되고, 생성된 옥타-아민은 화합물106으로 처리되어 화합물L이 형성된다. 화합물M으로부터 Boc-보호기의 제거하면 화합물M이 형성된다.
다른 구체예에서, 결합된 두개의 PEG 사슬을 가진 4가 아미노옥시 플랫폼은 도 35에 나타난 바와 같이 결합된 두개의 PEG 사슬을 가지는 중간체 122로부터 합성된다. 따라서, 화합물122는 NHS 에스테르O(Shearwater Polymer)와 반응하여플랫폼P를 형성한다. "PEG" 또는 "폴리에틸렌 글리콜" 또는 "폴리에틸렌 옥사이드" 는 본원에서 에틸렌 옥사이드의 중합체를 말하는 것으로 상호교환적으로 사용된다.
콘쥬게이트, 제조 방법 및 그의 용도
폴리옥시에틸렌 중합체와 같은 분자상의 아미노옥시기 및 다양한 원자가 플랫폼 분자는 생물학적 활성 분자와 같은 하나 이상의 분자가 공유 결합하여 콘쥬게이트를 형성할 수 있는 반응성기를 제공한다.
용어 "생물학적 활성 분자"는 바람직하게는 생체내에서 생물학적 활성을 가지는 분자를 말하는 것으로 본원에서 사용된다. 하나의 구체예에서, 생물학적 활성 분자는 특히 수용체 단백질과 상호작용하는 것이다. 생물학적 활성 분자는 예컨대 폴리펩티드 또는 핵산일 수 있다. 플랫폼의 원자가에 따라, 플랫폼 분자 콘쥬게이트는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 그 이상의 생물학적 활성 분자, 또는 예컨대 16, 18, 32, 36 또는 그 이상을 포함할 수 있다.
콘쥬게이트는 유효량의 콘쥬게이트를 개체에 투여하는 것을 포함하여 이러한 치료가 필요한 개체에서 항체 매개 질병 또는 그외 질환을 치료하는 방법에 사용될 수 있다. 또한, 콘쥬게이트는 유효량의 콘쥬게이트를 개체에 투여하는 것을 포함하여 개체에서 면역원에 대한 특정 B 세포 아네르기를 유발하는 방법에 사용될 수 있다. 또한, 콘쥬게이트는 유효량의 콘쥬게이트를 개체에 투여하는 것을 포함하여 원하지 않는 항체가 면역원에 대한 반응으로 생성되는 항체-매개 이상 (antibody-mediated pathology)에 대하여 개체를 치료하는 방법에 사용될 수 있다.
하나의 구체예에서, 예컨대, 콘쥬게이트가 기능성 면역관용원 (functional toleragen)으로서 효과적이기 위해서는 콘쥬게이트의 전체 분자량은 약 200,000 달톤 이하인 것이 바람직하다.
하나의 구체예에서, 생물학적 활성 분자는 예컨대, 본원에서 참고문헌으로 포함된 개시인, 미국 일련 번호 60/103,088; 미국 일련번호 09/328,199(1999년 6월 8일 출원); 및 PCT US99/13194(1999년 12월 16일 공고)에 기재된 바와 같이 β2GPI의 도메인 1 폴리펩티드이다. 도메인 1 콘쥬게이트는 안정한 항원-항체 복합체의 형성을 허용하는 조건하에서 콘쥬게이트와 샘플내의 항체를 접촉시키고; 경우에 따라 형성된 안정한 복합체를 검출함으로써 샘플내의 β2GPI-의존 안티인지질 항체(또는 도메인 1 β2GPI 폴리펩티드(들)에 특히 결합하는 항체)의 검출 방법에 사용될 수 있다. 또한, 콘쥬게이트는 개체에 유효량의 콘쥬게이트, 특히 T 세포 에피토프를 결여하는 도메인 1 β2GPI 폴리펩티드(들)을 포함하는 콘쥬게이트를 투여하는 것을 포함하는 개체내의 내성을 유발하는 방법에 사용될 수 있는데, 유효량은 내성을 유발하기에 충분한 양이다.
다른 구체예에서, 안티αGal 항체에 특히 결합하는 원자가 플랫폼 분자의 콘쥬게이트 및 하나 이상의 αGal 에피토프 또는 그의 유사체가 제공된다. 다른 구체예에서, 개체에 유효량의 콘쥬게이트를 투여하는 것을 포함하는 개체내 안티 αGal 항체의 순환 수치를 감소시키는 방법이 제공되는데, 여기서, 유효량은 안티 αGal 항체의 순환 수치를 감소시키거나 아니면 안티 αGal 항체의 순환 수치를 중화시키기에 충분한 양이다. 다른 양태에서, 면역원 내성(일반적으로 제노이식 (xenotransplantation) 항원에 대한, 더욱 상세하게는 αGal에 대한)을 유발시키는 방법이 제공되는데, 상기 방법은 αGal 에피토프 또는 그의 유사체를 포함하는 유효량의 콘쥬게이트를 투여하는 것을 포함한다. 또한 콘쥬게이트는 생물학적 샘플내 안티 αGal 항체의 존재 및/또는 양을 검출하는데에 사용된다. 또한, 개체에 콘쥬게이트를 투여하는 것; 및 개체에 이종조직(xenotissue)을 유발하는 것을 포함하는, 개체에서 제노이식을 실행하는 방법이 제공된다. 다른 양태에서, 거부반응을 억제하기에 충분한 양으로 개체에 콘쥬게이트를 투여하는 것을 포함하는, 이식된 조직의 거부반응을 억제하는 방법이 제공된다. 상기 방법이 일반적으로 PCT US99/29338에 기재되어 있다.
또한, 콘쥬게이트는 선택적으로 개체로부터의 항체(즉, 루퍼스와 연관된 항체, 소위 안티 2중 표준 DNA 항체)의 초기 친화성 평가에 기초한 루퍼스의 면역내성 치료에 사용될 수 있고, 그리고 치료를 위한 개체를 선택하기 위한 기초로서, 또는 항체 친화성 평가에 기초한 치료에 대하여 적합한 (또는 부적합한) 개체를 확인하는 방법에 사용될 수 있다. 개체에서 전신성 루퍼스 에리테마토수스(SLE)를 치료하는 방법은 2중 표준 DNA에 특히 결합하는 (a) 비면역성 원자가 플랫폼 분자 및 (b) 개체로부터 항체에 특히 결합하는 둘이상의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 콘쥬게이트를 개체에 투여하는 것을 포함한다. 상기 방법은 일반적으로 PCT US99/29336에 기재되어 있다.
따라서, 원자가 플랫폼은 올리고뉴클레오티드, 펩티드, 폴리펩티드, 단백질,항체, 당류, 다당류, 에피토프, 미모토프, 효소, 호르몬 및 약물, 지질, 지방산, 또는 그의 혼합물을 포함하는 하나 이상의 생물학적 활성 분자를 가진 콘쥬게이트를 형성하기 위해 공유 결합되어 콘쥬게이트를 형성할 수 있다.
용어 "단백질", "폴리펩티드", 및 "펩티드"는 어떤 길이의 아미노산의 중합체를 말하는 것으로 본원에서 호환성있게 사용될 수 있다. 중합체는 선형 또는 분지형일 수 있고, 변형된 아미노산을 포함할 수 있고, 비아미노산에 의하여 단절될 수 있다. 또한, 저절로 또는 개입 예컨대, 2황화물 결합형성, 글리코실화, 미리스틸레이션(myristylation), 아세틸화, 알킬화, 인산화 또는 탈인산화에 의하여 변형될 수 있다. 또한, 아미노산(예컨대, 천연 아미노산을 포함)의 하나 이상의 유사체외에도 당업계에 공지된 다른 변형체를 함유하는 폴리펩티드가 상기 정의에 포함된다.
원자가 플랫폼 분자 및 아미노옥시기를 포함하는 다른 분자들의 콘쥬게이트의 장점은 예컨대, 결합 상대가 클러스터에 연결될 경우, 결합 상대에 대한 결합된 생물학적 활성 분자의 증가된 친화성을 도입하는 능력이다. 예컨대 플랫폼 분자상에서 서로 연결될 때 원자가 플랫폼 분자에 대한 복수의 생물학적 분자의 공유 결합은 생물분자의 증가된 국소 농도를 제공한다. 원자가 플랫폼 분자의 또 다른 장점은 복수의 리간드의 결합을 촉진시키는 능력인데, 이는 B 세포 내성에 유용하기 때문이다. 예컨대, 콘쥬게이트는 존재하는 다가의 에피토프에 대한 면역관용원으로서 사용되어 B 세포의 표면에서 클러스터링을 유발할 수 있다. 원자가 플랫폼의 다른 장점은 독립적으로 변형될 수 있는 "코어"상에 기능성을 포함시켜 특정 목적에맞출 수 있는 콘쥬게이트의 제조를 가능하게 하는 능력이다.
일반적으로, 아미노옥시기를 포함하는 분자는 알데히드 또는 케톤과 같은 카르보닐기를 포함하는 제 2의 분자와 반응하여 옥심 콘쥬게이트를 형성한다. 제 2의 분자는 반응성 알데히드 또는 케톤을 함유하도록 변형될 수 있다. 또한, 옥심 결합도 변형될 수 있다. 예컨대, 공지의 방법에 의하여 친핵체와의 환원 또는 반응을 통하여 아미노옥시 결합으로 전환되어 아미노옥시 콘쥬게이트를 형성할 수 있다.
하나의 구체예에서, 아미노옥시기를 포함하는 바람직하게는 비면역성인 다가의 원자가 플랫폼 분자로써 천연 폴리펩티드 또는 단백질의 화학적으로 한정된 다가의 콘쥬게이트를 제조하는 방법이 제공되는데, 필요시, 폴리펩티드는 선택적으로 변형되어 폴리펩티드상의 특정 위치에서 알데히드 또는 케톤을 발생시킨다. 그 다음 폴리펩티드는 아미노옥시기를 함유하는 다가의 원자가 플랫폼 분자와 반응하여 플랫폼과 폴리펩티드간의 하나 이상의 옥심 결합을 형성한다.
예컨대, 사실상 어떤 폴리펩티드 또는 다른 분자의 N-말단에서의 아민은 아미노기전이 반응으로 당업계에 공지된 반응에 의하여 알데히드 또는 케톤으로 전환될 수 있다. 본질적으로, 아미노기전이 반응은 탄소-질소 단일 결합을 탄소 산소 2중 결합으로 전환시킨다. 예컨대, N-말단에서 글리신이 반응하여 도 1에 나타난 글리옥실기, 알데히드를 형성할 수 있다. 대부분 다른 아미노산은 반응하여 아미노산 측쇄에 의하여 케톤을 형성한다.
N-말단에서 글리옥실기를 발생시키는 다른 방법은 과요오드산나트륨으로 N-말단 세린 또는 트레오닌을 산화시키는 것이다. 이 산화는 글리옥실기를 제공하는N-말단 세린 또는 트레오닌의 히드록실기 및 아미노기간의 탄소-탄소 결합을 절단한다. 따라서, 하나의 구체예에서. 폴리펩티드는 N-말단에서 케톤 또는 알데히드를 형성함으로써 특히 변형되는 부위일 수 있다. 합성 폴리펩티드 및 다른 약물 또는 생물학적 활성 분자는 옥심 결합을 형성하도록 사용될 수 있는 알데히드 또는 케톤을 포함시키도록 유사하게 변형될 수 있다.
아미노옥시 반응성기를 함유하는 다가의 플랫폼은 플랫폼에 대하여 선택적으로 변형된 폴리펩티드의 공유 결합을 가능하게한다. 원자가 플랫폼 분자는 예컨대 아미노옥시아세틸기 또는 아미노옥시알킬기를 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 "아미노옥시아세틸기"가 -COCH2-ONH2와 같은 알파 카르보닐을 가진 아미노옥시기를 말하는 데 반해, "아미노옥시알킬기"는 제 1의 탄소상의 아미노옥시기를 말하는데, 여기서 제 1의 탄소는 카르보닐기의 부분인 제 2의 탄소와 같은, 전자 끄는 기에 직접 바람직하게는 결합하지 않는다. 하나의 바람직한 아미노옥시알킬기는 -CH2-CH2-ONH2이다. 아미노옥시아알킬기의 다른 구체예는 -CH(OH)CH2O NH2및 -CH2CH(CH3)ONH2를 포함한다.
아미노옥시아세틸(AOA)기는 N-보호된 아미노옥시아세틸기와 아실화, 이어서 보호기의 제거에 의하여 아민기를 함유하는 다가의 플랫폼에 결합될 수 있다. 아미노옥시아세틸기와 글리옥실 폴리펩티드의 반응은 서서히 진행하여 폴리펩티드 및 아미노옥시 기능성화된 플랫폼간의 옥심 결합을 형성한다. 반응에 필요한 긴 반응시간은 발생하는 부반응을 길항하는 것을 허용할 수 있다. N-말단 아미노산 외에글리신의 아미노기전이반응으로 형성되는 N-말단 α-케토-아미드는 다가의 콘쥬게이트를 형성하기 위하여 훨씬 더 서서히 반응하거나 또는 전혀 반응하지 않는다.
아미노옥시알킬기(AO 알킬기)가 바람직하고, 케톤 및 알데히드와 더 용이하게 반응하여 아미노옥시아세틸기 보다 옥심을 형성한다. 알킬 사슬상의 아미노옥시기(예컨대, 트리에틸렌 글리콜 사슬)은 예컨대 유사체 아미노옥시아세틸기보다 옥심을 형성하는 데에 10 배 이상 반응성이다. 일반적으로 아미노옥시아세틸기는 카르보닐과 인접하지 않는 다른 아미노옥시기(아미노옥시알킬기) 보다 덜 반응성이다. 아미노옥시아세틸기의 카르보닐이 전자 끌기 효과 때문에 반응성을 저하시킨다고 생각된다.
하나의 구체예에서, 옥심 형성에 대하여 증가된 반응성으로 의도된, 플랫폼상의 글리옥실-폴리펩티드와 반응할 수 있는 말단 아미노옥시알킬기가 제공된다. 하나의 구체예에서, 트리에틸렌 글리콜 또는 헥실 사슬상의 아미노옥시기가 제공되고, 한편 어떤 다른 사슬은 탄소, 산소, 질소 또는 황 원자를 포함하는 것들을 포함시키는 것이 가능하다. 하나의 바람직한 구체예에서, 플랫폼 분자내 아미노옥시기는 -CH2CH2ONH2과 같은 아미노옥시알킬기이다.
옥심 결합 형성을 통한 아미노옥시 플랫폼에 대한 알데히드 또는 케톤 기능성과를 가진 생물분자의 결합이 실시예에서 제공된다. 실시예 10 및 11은 어떻게 아미노기전이된 폴리펩티드, 또는 그렇지 않으면 알데히드 또는 케톤기로 변형된 폴리펩티드가 아미노옥시 플랫폼과 반응하는가를 설명한다. 이 경우에서, 아미노기전이된 도메인 1은 산성 수용액에서 글리옥실-폴리펩티드로 플랫폼을 처리함으로써 4가의 플랫폼에 결합된다. 바람직한 산성 조건은 100 mM pH 4.6 아세트산나트륨이다. 4가 도메인 1 콘쥬게이트를 제조하는 경우에, 과량의 4 당량, 예컨대 6 당량의 아미노기전이된 도메인 1을 사용한다. 아미노옥시알킬 반응성기는 더 적은 부산물을 위한 조건을 가지고 더욱 용이하게 반응이 일어나도록 허용하는 아미노옥시아세틸기보다 더 반응성이다. 실시예 10은 아미노옥시아세틸 플랫폼과의 콘쥬게이트 형성을 설명하고 있다. 실시예 11은 아미노옥시알킬 플랫폼과의 콘쥬게이트 형성을 설명하고 있다.
4가의 도메인 1 콘쥬게이트를 제조하는 두가지 또다른 방법은 실시예 13 및 14에 제시된다. 이들 두 실시예는 옥심 결합을 통하여 아미노기전이된 도메인 1에 링커를 결합시킨 후 링커를 이용하여 적합한 반응성기로 플랫폼에 결합시키는 것을 포함한다. 먼저 아미노기전이된 도메인 1에 링커를 결합시키는 것의 장점은 과잉의 링커를 가하여 옥심 형성 반응을 완결시킬 수 있다는 것이다.
실시예 13은 어떻게 비스-아미노옥시 링커를 도메인 1에 먼저 결합시킨 후 결합된 아미노옥시 링커를 가진 폴리펩티드를 케톤 파생된 플랫폼과 반응시켜 원하는 4가의 콘쥬게이트를 얻는가를 설명한다.
실시예 14는 어떻게 헤테로2작용성 링커를 사용하여 옥심 결합을 통해서 도메인 1에 티올 링커를 결합시킬 수 있는가를 설명한다. 그 다음, 결합된 티올 링커를 가진 도메인 1을 반응성 알킬 할라이드 플랫폼과 반응시켜 4가의 콘쥬게이트를 얻는다.
실시예 13 및 14에서 형성된 콘쥬게이트는 링커가 먼저 플랫폼에 결합되고 이어서 아미노기전이된 도메인 1과 콘쥬게이션될 경우 형성될 수 있는 동일한 콘쥬게이트라는 것이 명백하다.
본원에서 예시함으로써 언급된 모든 문헌, 특허, 특허 출원 및 공고된 특허출원의 개시물은 이들 모두가 본원에서 참고문헌으로써 포함된다.
본 발명은 다음의 비제한적 실시예에 의하여 더 잘 이해될 것이다.
발명의 개시
아미노옥시기를 포함하는 분자 뿐만아니라, 생물학적 활성 분자와 같은 다른 분자를 가진 그의 콘쥬게이트, 및 그들의 합성 방법이 제공된다. 아미노옥시기는 다른 분자의 공유 결합을 위한 결합 부위를 제공한다.
하나의 구체예에서, 폴리(아미노산)을 포함하는 다양한 생물학적 활성 분자에 콘쥬게이션될 수 있는 아미노옥시기를 포함하는 폴리에틸렌 옥사이드 분자, 또는 더욱 상세하게는 폴리에틸렌 글리콜 분자가 제공된다. 다른 구체예에서, 아미노옥시기를 포함하는 원자가 플랫폼 분자가 제공된다. 아미노옥시기를 사용하여 폴리(아미노산)과 같은 생물학적 분자와 공유 결합을 형성시킬 수 있다. 아미노옥시기는 예컨대 글리옥실기와 같은 카르보닐기를 함유하는 변형된 폴리(아미노산)과 반응하여, 옥심 결합을 통해서 원자가 플랫폼 및 생물학적 활성 분자의 콘쥬게이트를 형성한다. 아미노옥시기를 포함하는 원자가 플랫폼 분자는 유리하게는 콘쥬게이트 형성에서 반응성이고, 또한 이들은 용이하게 합성되어 매우 낮은 다분산성을 가진 조성물을 형성할 수 있다.
아미노옥시기를 포함하는 원자가 플랫폼 분자와 같은 아미노옥시기, 바람직하게는 3 이상의 아미노옥시기를 포함하는 분자는 하나 이상의(예컨대, 30 이상의), 예컨대 올리고뉴클레오티드, 펩티드, 폴리펩티드, 단백질, 항체, 당류, 다당류, 에피토프, 미모토프, 또는 약물을 포함하는 3 이상의 생물학적 활성 분자와 공유 결합할 수 있다.
하나의 구체예에서, 아미노옥시기를 포함하는 분자가 제공되는데, 그 분자는 옥시알킬렌기, 예컨대 옥시에틸렌기 또는 폴리옥시에틸렌기를 포함한다. 분자는 예컨대, 3 이상의 아미노옥시기, 또는 4, 5 이상의 아미노옥시기를 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 "옥시에틸렌, 옥시프로필렌 및 옥시알킬렌"은 "에틸렌 옥사이드, 프로필렌 옥사이드 및 알킬렌 옥사이드"와 상호교환적으로 사용된다.
다른 구체예에서, 아미노옥시기를 포함하는 원자가 플랫폼 분자가 제공된다. 바람직한 하나의 구체예에서, 원자가 플랫폼 분자는 3 이상의 아미노옥시기를 포함한다. 원자가 플랫폼 분자는 옥시알킬렌기, 예컨대 옥시에틸렌 또는 폴리옥시에틸렌기, 예컨대 -(CH2CH2O)n- (n은 200 내지 500)을 더 포함할 수 있다.
또한, 아미노옥시기를 포함하고, 1.2 미만, 예컨대 1.1 또는 1.07 미만의 다분산성(polydispersity)을 가지는, 본원에서 개시된 것과 같은, 원자가 플랫폼 분자와 같은 분자를 포함하는 조성물이 제공된다.
하나의 구체예에서, 화학식 1을 가지는 원자가 플랫폼 분자가 제공된다:
R-(ONH2)m
하나의 구체예에서:
m은 1-50 또는 그 이상, 예컨대, 3-50 이고;
R은 H, C, N, O, P, Si 및 S 원자로 구성되는 군으로부터 선택되는 1-1000, 또는 10,000 또는 그 이상 원자를 포함하는 유기 부분이다.
다른 구체예에서, 화학식 2를 가지는 원자가 플랫폼 분자가 제공된다:
RC[Gl(ONH2)n]y;
하나의 구체예에서:
y는 1 내지 16이고;
n은 1 내지 32이고;
하나의 구체예에서, y * n (y의 n배)의 결과는 3 이상이고;
Rc및 각 Gl은 독립적으로 유기 부분이다.
하나의 구체예에서, Rc및 각 Gl은 독립적으로 H, C, N. 0. P, Si 및 S 원자의 군으로부터 선택되는 원자를 포함하는 유기 부분이고, 선택적으로 옥시알킬렌기를 포함한다. 그 분자는 1.2 미만의 다분산성을 가지는 조성물에서 제공될 수 있다.
다른 구체예에서, 다음으로 구성되는 군으로부터 선택되는 화학식을 가지는 원자가 플랫폼 분자가 제공된다:
RC[O-C(=O)-NR1-G2-(ONH2)n]y
Rc[C(=O)-NR1-G2-(ONH2)n]y
Rc[NR1-C(=O)-G2-(ONH2)n]y
Rc[NR1-C(=O)-O-G2-(ONH2)n]y
Rc[R1C=N-0-G2-(ONH2)n]y
Rc[S-G2(ONH2)n]y
상기식에서, 예컨대:
y는 1 내지 16이고;
n은 1 내지 32이고;
하나의 구체예에서, y * n (y의 n배)의 결과는 3 이상이고;
R1은 H, 알킬, 헤테로알킬, 아릴, 헤테로아릴 또는 G2-(ONH2)n이고;
Rc및 각 G2은 독립적으로 H, C, N. 0. P, Si 및 S 원자의 군으로부터 선택되는 원자를 포함하는 유기 부분이다.
하나의 구체예에서, Rc및 각 G2는 독립적으로 다음으로 구성되는 군으로부터 선택된다:
오직 H 및 C 원자로 구성되고, 1 내지 200 탄소 원자를 가지는 히드로카르빌기;
오직 탄소, 산소, 및 수소 원자로 구성되고, 1 내지 200 탄소 원자를 가지는 유기기;
오직 탄소, 산소, 질소, 및 수소 원자로 구성되고, 1 내지 200 탄소 원자를 가지는 유기기;
오직 탄소, 산소, 황, 및 수소 원자로 구성되고, 1 내지 200 탄소 원자를 가지는 유기기;
오직 탄소, 산소, 황, 질소, 및 수소 원자로 구성되고, 1 내지 200 탄소 원자를 가지는 유기기.
원자가 플랫폼 분자의 한 구체예에서, Rc는 C1-200 탄화수소 부분; C1-200 알콕시 부분; 및 방향족기를 포함하는 C1-200 탄화수소 부분으로 구성되는 군으로 부터 선택된다.
Rc는 선택적으로 옥시에틸렌 부분 (-CH2CH20-)과 같은 옥시알킬렌 부분을 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, Rc는 옥시에틸렌 단위 -(CH2CH20)n- (여기서, n은 1-500, 예컨대, 200-500, 1-200, 1-100 또는 1-20이다)를 포함한다.
하나의 구체예에서, 각 G2는 독립적으로 알킬, 헤테로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴으로 구성되는 군으로부터 선택되는 작용기를 포함한다.
다른 구체예에서, 각 G2는 C1-200 탄화수소 부분; C1-200 알콕시 부분; 및 방향족기를 포함하는 C1-200 탄화수소 부분으로 구성되는 군으로부터 선택되는 작용기를 포함한다.
각 G2는 독립적으로 옥시에틸렌 부분 (-CH2CH2O-)과 같은 옥시알킬렌 부분을 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, 각 G2는 독립적으로 옥시에틸렌 단위 -(CH2CH20)n- (여기서, n은 1-500, 예컨대, 200-500, 1-200, 1-100 또는 1-20이다)를 포함한다.
원자가 플랫폼 분자의 하나의 구체예에서, 각 G2는 독립적으로 아민; 아미드; 에스테르; 에테르; 케톤; 알데히드; 카르바메이트; 티오에테르; 피페라지닐; 피페리디닐; 알콜; 폴리아민; 폴리에테르; 히드라지드; 히드라진; 카르복실산; 무수물; 할로; 술포닐; 술포네이트; 술폰; 시아네이트; 이소시아네이트; 이소티오시아네이트; 포르메이트; 카르보디이미드; 티올; 옥심; 이민; 아미노옥시; 및 말레이미드로 구성되는 군으로부터 선택되는 작용기를 포함한다.
원자가 플랫폼 분자의 하나의 구체예에서, 각 G2-ONH2는 도 17에 제시된 부분으로부터 독립적으로 선택된다.
다른 구체예에서, 원자가 플랫폼 분자는 아미노옥시 또는 말단상의 보호된 아미노옥시기를 포함하는 링커를 사용하여 합성된다. 다른 말단은 실시예 3 및 17, 그리고 도 3 및 25에서 화합물 11 및 100로 설명된 아민; 화합물 18 및 28, 그리고 실시예 4 및 6외에 도 4 및 7으로 도시된 산 카르보네이트 에스테르; 화합물 22a 및 22 b, 실시예 5a 및 5b, 그리고 도 5 및 6에 의해 도시된 티올; 화합물 37, 실시예 8 및 도 9에 의해 도시된 아미노옥시, 또는 화합물 105 및 106, 실시예 16 및 20, 그리고 도 24 및 28에 의하여 도시된 카르복실산 또는 활성화 유도체를 포함할 수 있다.
다른 구체예에서, 도 19에 제시된 화학식 9-13의 화합물이 제공된다. 화학식 9-13에서, 하나의 구체예에서, Rc및 G2는 상기 정의된 바와 같고, n은 약 1-500, 예컨대 200-500, 1-200, 1-100 또는 1-50이다.
또 다른 구체예에서, 다음 구조를 가지는 원자가 플랫폼 분자가 제공된다:
(상기식에서, n은 약 503, 또는 예컨대, 약 500이상, 약 600 이상, 또는 약 700 이상 또는 800 이상이다);
(상기식에서, n은 약 112, 또는 예컨대, 약 500이상, 약 600 이상, 또는 약 700 이상 또는 800 이상이다);
또는
(상기식에서, n은 약 481, 또는 예컨대, 약 500이상, 약 600 이상, 또는 약 700 이상 또는 800 이상이다).
또한, 본원에서 개시된 어느 하나의 원자가 플랫폼 분자와 같은 아미노옥시기를 포함하는 분자, 및 생물학적 활성 분자의 콘쥬게이트가 제공된다. 생물학적 활성 분자는 예컨대, 폴리(당류), 폴리(아미노산), 핵산, 지질 및 약물, 그의 조합을 포함할 수 있다. 콘쥬게이트는 옥심 콘쥬게이트 또는 그의 변형된 형태(예컨대,아미노옥시와 같은 환원 생성물 및 알킬화된 형태)를 포함한다.
또한, 본원에서 개시된 어느 하나의 원자가 플랫폼 분자와 같은 아미노옥시기를 포함하는 분자, 및 생물학적 활성 분자의 콘쥬게이트의 제조방법이 제공되는데, 상기 방법은 생물학적 활성 분자상의 카르보닐기(예컨대, 알데히드 또는 케톤기)와 같은 반응성 작용기와 원자가 플랫폼 분자와 같은 아미노옥시기를 포함하는 분자상의 아미노옥시기를 반응시켜 옥심 콘쥬게이트를 형성시키는 것을 포함한다. 생물학적 활성 분자가 폴리(아미노산)인 구체예에서, 상기 방법은 콘쥬게이트 형성전에 폴리(아미노산)을 변형시켜 말단 알데히드기를 포함시키는 것을 더 포함한다.
또한 본원에서 개시된 콘쥬게이트, 선택적으로 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적으로 허용가능한 조성물이 제공된다.
다음 실시예에서, 다음 약어가 사용된다: DCC, 1,3-디시클로헥실카르보디이미드; DIC, 1,3-디이소프로필카르보디이미드; DBU, 1,8-디아자비시클로[5.4.0] 운데크-7-엔; NHS, N-히드록시숙신이미드; HOBt, 1-히드록시벤조트리아졸; DMF, 디메틸포름아미드.
실시예 1-도메인 1의 아미노기전이반응
아미노기전이된 도메인 1의 합성 (TA/D1): 물 및 아세트산나트륨 완충액을 사용전에 헬륨으로 살포하였다.본원에 포함된 개시인 미국 일련번호 60/103,088 (1998. 10. 5. 출원) ; 미국 일련번호 09/328,199(1999. 6. 8. 출원); 및 PCT US99/13194에 기술된, β2GPI의 도메인 1 폴리펩티드를 사용하였다. 도 1에 도시된 도메인 1 폴리펩티드는 N-말단 글리신이다. 도메인 1(10.55 mg, 1.49 μmol)을 폴리프로필렌 튜브 중에서 0.5 mL의 H20 에 용해시키고, 4.0 mL의 2 M pH 5.5 NaOAc 완충액을 가하였다. 0.5 mL의 H20중의 3.73 mg (14.9 μmol)의 CuS04, 이어서 0.5mL의 2 M pH 5.5 NaOAc 완충액 중의 2.75 mg (29.9 μmol)의 글리옥실산 용액을 혼합물에 가하였다. 혼합물을 질소 분위기하에서 방치하고, 280 nm (1 mL/분; 기울기 25%-45% B, 0-20 분, A = 0.1% TFA/H2O, B = 0.1% TFA/CH3CN)에서 검출하며 4.6 mm x 250 mm, 300 Å, 5 μm, 디페닐 컬럼 (Vydac, Hesperia, CA)을 사용하는 분석 HPLC에 의하여 반응이 완결되는 것으로 나타나는 시간인 18시간 동안 부드럽게 교반하였다. 대강의 체류시간은 다음과 같다: D1,13.2분; TA/D1,13.7 분; 산화된 TA/D1,13.4 분. 혼합물을 0.1 % TFA/H20로 부피 20 mL로 희석하고, 여과하고, HPLC(22.4 mm X 250 mm, 300 Å, 10 pm, 디페닐 컬럼 (Vydac) (12 mL/분; 기울기 25%-40% B, 0-40 분, A = 0.1% TFA/H2O, B = 0.1% TFA/CH3CN)로 정제하였다. 분석 HPLC에 의해 입증된 순수한 TA/D1을 함유하는 분획을 모으고, 동결건조시켜 5.0 mg (48%)의 TA/D1을 얻었다. 반응식이 도 1에 제시된다.
실시예 2-아미노옥시아세틸/PITG 플랫폼의 합성
반응식이 도 2에 제시된다.
4-니트로페닐-N-(tert-부틸옥시카르보닐) 아미노옥시아세테이트(2):0℃에서 35 mL의 무수 THF 중의 1.5 g (7.85 mmol)의 N-tert-부틸옥시카르보닐)아미노옥시아세트산(Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO)(화합물 1)의 교반 용액을 1.09 g (7.85 mmol)의 4-니트로페닐, 이어서 1.62 g (7.85 mmol)의 DCC를 가하였다. 혼합물을 질소 분위기하에 0℃에서 0.5시간 동안, 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하여 디시클로헥실우레아를 제거하고, 여액을 농축하고 실리카겔 크로마토그래피 (95/5 CHCl3/이소프로필 알콜)로 정제하여 백색고체로서 2.30 g (94%)의 화합물2를 얻었다:1H NMR (CDCl3) δ1.51 (s, 9H), 4.73 (s, 2H), 7. 36 (d, 2H), 7.73 (s, 1H), 8. 32 (d, 2H).
Boc-보호된 아미노옥시아세틸/PITG 플랫폼(4의 합성): 화합물3(300 mg, 0.235 mmol (PCT/US97/10075에서 설명된 바에 따라 제조)을 아세트산중의 30%의 HBr 용액 1.5 mL로 30분 동안 처리하였다. 생성된 테트라-아민의 HBr염을 디에틸 에테르를 첨가하여 침전시켰다. 혼합물을 원심분리하고, 상청액을 제거하여 폐기하였다. 잔여 고체를 에테르로 세척하고, 진공하에 건조하고, DMF 9 mL에 용해시켰다. 생성된 혼합물에 294 μL (1.69 mmol)의 디이소프로필에틸아민, 이어서 DMF 3 mL중의 410 mg (1.31 mmol)의 화합물2를 가하였다. 혼합물을 질소 분위기하에 4시간 동안 교반하고, 15/1 CHC13/MeOH 및 염수간에 분배하였다. 수성층을 15/1 CHC13/MeOH로 2회 세척하고, 합한 유기층을 건조(Na2SO4)하고, 농축하여 680 mg의 오일을 얻었다. 실리카겔 크로마토그래피(단계 기울기 95/5 내지 75/25 CHCl3/MeOH)에 의하여 정제하여 백색고체로서 215 mg (65%)의 화합물4를 얻었다:1H NMR (CDCl3) δ 1.49 (s, 36H), 3.40-3.73 (m, 40H), 4.24 (m, 12H), 4.59 (중첩 단일선, 8H), 8.21 (s, 2H), 8.32 (s, 2H).
아미노옥시아세틸/PITG 플랫폼(5):HC1 가스를 10/1/1 EtOAc/CHC13/ MeOH에서 67 mg(.047 mmol)의 화합물4의 교반 용액을 통해서 15 분 동안 기포발생시키고, 혼합물을 15분 동안 더 교반하였다. 혼합물을 진공중에서 농축하고, 16시간 동안 진공중에 방치하여 백색고체로서 43 mg (78%)의 화합물 5를 얻었다:1H NMR (DMSO) δ 3.33-3.67 (m, 40H), 4.08 (m, 4H), 4.18 (s, 8H), 4.90 (s, 8H); C40H69N14018(M+H)에 대한 질량 스펙트럼(ES) m/z 계산치: 1033. 실측치: 1033.
실시예 3-AOTEG/DEA/DEG 플랫폼의 합성
합성 반응식이 도 3에 제시된다.
2-[2-(2-요오도에톡시)에톡시]에탄올(7):2-[2-(2-요오도에톡시)에톡시]에탄올 7(Aldrich Chemical Co.)(12.66 g, 75.1 mmol) 및 요오드화나트륨(33.77 g, 225.3 mmol)을 250 mL의 아세톤에 용해시켰다. 환류 콘덴서를 플라스크에 부착시키고, 혼합물을 18시간 동안 환류하며 가열하였다. 냉각시, 혼합물을 농축하고, 잔사를 400 mL 의 CH2Cl2및 300 mL의 물과 100 mL의 포화 아황산 수용액 혼합물을 뒤섞었다. 수성층을 CH2C12의 400 mL의 부분으로 2회 세척하고, 합한 CH2C12층을 건조하고(MgS04), 여과하고, 농축하여 담황색 오일로서 18. 3 g (94%) 의7을 얻고, 다음 단계에 더 이상 정제하지 않고 사용하였다:1H NMR (CDCl3) δ 2.43 (brd s, 1H), 3.28 (t, 2H), 3.61 (m, 2H), 3.68 (s, 4H), 3.78 (m, 4H); C6H1303INa (M+Na)에 대한 질량 스펙트럼(ES) m/z 계산치 : 283.0. 실측치: 283.0.
2-[2-(2-N-(tert-부틸옥시카르보닐)아미노옥시에톡시)에톡시]에탄올(8): 5.85 g (1.50 mmol)의 2-[2-(2-요오도에톡시)에톡시]에탄올(화합물 7)에 2.00 g (1.00 mmol)의 N-(tert-부틸옥시카르보닐)히드록실아민 (Aldrich Chemical Co.) 및 3. 36 mL(3.42 g, 1.50 mmol)의 DBU를 가하였다. 혼합물을 교반하여 점성의 액체를 얻어 만지기에 뜨겁게 하고 55℃ 오일욕에 18시간 동안 넣어 백색의 침전물을 형성시켜 혼합물을 고체화하였다. 혼합물을 20 mL의 CH2C12에 용해시키고, 500 mL의 교반된 EtOAc에 가하여 침전물을 형성시키고 이것을 여과에 의해 제거하고, 여액을 농축하여 황갈색 오일을 얻었다. 플래시 크로마토그래피(50% 아세톤/헥산)으로 정제하여 오일로서 2.61 g (67%)의8을 얻었다:1H NMR (CDCl3) δ 1.50 (s, 9H), 3.65 (t, 2H), 3.70 (brd s, 4H), 3.76 (m, 4H), 4.06 (t, 2H), 7.83 (brd s, 1H);13C NMR (CDCl3) δ 28.0, 61.3, 68.9, 70.1, 70.3, 72.5, 72.6, 75.1, 81.2, 157.1.
2-[2-(2-N-(tert-부틸옥시카르보닐)아미노옥시에톡시)에톡시]에틸브로마이드 (화합물 9):브롬(약 0.283 mmol)을 2 mL의 CH2C12중의 화합물8의 50 mg(0.188 mmol)의 용액, 74 mg(0. 283 mmol)의 트리페닐포스핀 및 31μL(30 mg, 0.377 mmol)의 피리딘을 오랜지색이 나타날 때까지 적가하였다. 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하고, 1 mL의 아황산나트륨 포화용액을 가하여 과량의 브롬을 퀀칭하였다. 그 다음, 혼합물을 10 mL 의 H2O 및 2 x 15 mL의 EtOAc간에 분배하였다. 합한 유기층을 염수로 세척하고, 건조하고(Na2SO4), 여과하고, 농축하였다. 잔사를 실리카겔 크로마토그래피(35/65 아세톤/헥산)으로 정제하여 오일로서 54 mg의 화합물9를 얻었다:1H NMR (CDCl3) δ 1.49 (s, 9H), 3.48 (t, 2H), 3.68 (s, 4H), 3. 73 (m, 2H), 3.84 (t, 2H), 4.03 (t, 2H), 7.50 (s, 1H);13C NMR (CDC13) δ 28.3, 30.4, 69.4, 70.6 (2 시그날), 71.3, 75.5, 81.7, 156.9.
2-l2-(2-N-(tert-부틸옥시카르보닐)아미노옥시에톡시)(2-N-(tert-부틸옥시카르보닐)아미노에톡시)에톡시] 에틸아지드(10):
화합물 9로부터의 합성: 0.25 mL의 무수 DMF중의 100 mg (0.305 mmol)의 화합물9의 용액을 0.5 mL의 무수 DMF중의 159 mg (2.44 mmol)의 소듐 아지드 용액에 가하였다. 0.25 mL의 DMF를 더 사용하여 잔사9를 반응혼합물내로 헹구어 넣고, 혼합물을 115℃에서 3 시간 동안 가열하였다. 냉각시, 혼합물을 3 mL 의 H20과 4 x 3 mL의 CH2Cl2간에 분배하였다. 합한 유기층을 10 mL의 H20로 세척하고, 건조하고 (Na2SO4), 여과하고, 농축하여 황색 오일을 얻었다. 실리카겔 크로마토그래피(35/65 아세톤/헥산)에 의하여 오일로서 67 mg (76%)의10을 얻었다:1H NMR (CDCl3) δ 1.47 (s, 9H), 3.41 (t, 2H), 3.69 (brd s, 4H), 3. 73 (m, 4H), 4.03 (t, 2H), 7.50 (s, 1H);13C NMR (CDC13) δ 28.1,50.5,69.1,70.1,70.4 (2 시그날), 75.2,81.3, 156.7.
화합물 13으로부터 10의 합성:질소 분위기하에서 5 mL의 DMF중의 258 mg (0.69 mmol) 의 화합물13의 용액에 358 mg (5.50 mmol)의 소듐 아지드를 가하였다.혼합물을 18시간 동안 실온에서 교반하고, 100 mL의 물을 가하고, 혼합물을 3 x 50 mL의 EtOAc로 추출하였다. EtOAc층을 합하고, 50 mL의 물로 세척하고, 건조하고(Na2SO4), 여과하고, 농축하여 294 mg의 무색 오일을 얻었다. 실리카겔 크로마토그래피(30/70 아세톤/헥산)로 정제하여 무색 오일로서 화합물10을 얻었다.
화합물 11: 화합물10(1.36 g, 4.70 mmol) 및 트리페닐포스핀(1.48 g, 5.64 mmol)을 24 mL의 THF 및 8 mL의 H20에 용해시키고, 생성된 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 약 160 μL (8 방울)의 1 N NaOH를 가하고, 혼합물을 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공중에서 농축하고, 농축물을 실리카겔 크로마토그래피(80/8/2 CH3CN/H2O/진한 NH40H)로 정제하여 황색 오일로서 1.16 g (94%)의11을 얻었다:1H NMR (CDCl3) δ 1.50 (s, 9H), 1.90 (brd, 2H), 2.88 (t, 2H), 3.56 (t, 2H), 3.65 (m, 4H), 3.71 (m, 2H), 4.01 (m, 2H).
1,2-비스(2-요오도에톡시)에탄(화합물 12): 110 mL 아세톤중의 10.0 g(5.3 mmol)의 1,2-비스(2-클로로에톡시)에탄 (Aldrich Chemical Co.) 및 16.0 g (107 mmol)의 요오드화나트륨의 용액을 18시간 동안 환류하며 가열하였다. 혼합물을 농축하고 잔사를 CHC13로 분쇄하여 염이 용해되지 않고 남아있는 동안 생성물을 용해시켰다. 혼합물을 여과하고, 여액을 농축하여 오랜지색 오일을 얻었다. 실리카겔 크로마토그래피(단계 기울기, 10/90 EtOAc/헥산 내지 15/85 EtOAc/헥산)로 정제하여 오랜지색 오일 17.8 g (90%)을 얻었다:1H NMR (CDCl3) δ 3.28 (t, 4H), 3.67 (s, 4H), 3.78 (t, 4H);13C NMR (CDC13) 8 3.6,70.5,72.2.
화합물 13: DBU (284 μL, 290 mg, 1.90 mol)을 266 mg (2.0 mmol)의 N- (tert-부틸옥시카르보닐)히드록실아민 (Aldrich Chemical Co.) 및 2.96 g (8.0 mmol)의 화합물12의 혼합물에 가하고, 혼합물을 뚜껑을 덮고 균일할 때까지 뒤섞었다. 15분 후 혼합물을 고체화하고, 45분 동안 두었다. 혼합물에 5 mL의 CH2Cl2를 가하고, 혼합물을 다시 뒤섞어 고체를 용해시켰다. 생성된 용액을 200 mL의 EtOAc에 가하였다. 50 mL의 EtOAc를 더 가하고, 혼합물을 여과하여 고체를 제거하였다. 여액을 농축하여 오일을 얻고, 100 mL의 EtOAc 및 3 x 50 mL 의 1 N HC1 용액간에 분배하였다. EtOAc층을 2 x 50 mL의 1 N NaOH, 이어서 2 x 50 mL의 5% 아황산나트륨 용액으로 세척하고, 농축하여 황색 오일 2.6 g을 얻었다. 실리카겔 크로마토그래피(단계 기울기, 20/80 내지 45/55 EtOAc/헥산)로 정제하여 황색 오일로서 515 mg (69%)의 화합물13을 얻었다:1H NMR (CDCl3) δ 1.50 (s, 9H), 3.28 (t, 2H), 3.68 (s, 4H), 3.72 (m, 4H), 4.02 (t, 2H), 7.72 (s, 1H) ;13C NMR (CDCl3) δ 2.9, 28.3, 68.9, 69.4, 70.2, 70.6, 72.0, 75.4, 81.6, 156.9.
디에틸렌글리콜 비스-4-니트로페닐카르보네이트(화합물 60): 피리딘(30.5 mL, 377 mmol)을 THF 500 mL중의 5.0 g (47.11 mmol)의 디에틸렌글리콜 및 23.74 g (118 mmol)의 4-니트로페닐클로로포르메이트의 0℃ 용액에 서서히 가하였다. 냉각욕을 제거하고, 혼합물을 18시간 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 0℃로 다시 냉각시키고, 6 N HCl로 산성화하고, 400 mL의 1 N HCl 및 2 X 400 mL의 CH2Cl2간에 분배하였다. 합한 유기층을 건조하고(MgS04), 여과하고, 농축하여 24.3 g의 백색고체를 얻었다. 헥산/EtOAc로부터 결정화하여 백색분말로서 16.0 g (78%)의 화합물60을 얻었다: mp 110 C ;1H NMR (CDCl3) δ 3.89 (t, 4H), 4.50 (t, 4H), 7.40 (d, 4H), 8.26 (d, 4H).
화합물 61: 피리딘 17 mL중의 2.5 g (5.73 mmol)의 화합물60을 피리딘 3 mL중의 1.8 g (17.2 mmol)의 디에탄올아민 0℃ 용액에 가하였다. 냉각욕을 제거하고, 혼합물을 5시간 동안 실온에서 교반하여 화합물61을 수득하여, 단리하지 않고 그대로 다음 단계에 사용하였다.
화합물 14: 전 단계로부터의 혼합물을 0℃로 다시 냉각하고, 40 mL의 CH2Cl2, 이어서 60 mL의 CH2Cl2중의 11. 55 g (57.3 mmol)의 4-니트로페닐클로로포르메이트를 가하고, 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 혼합물을 0℃로 다시 냉각하고, 1 N HCl로 산성화하고, 300 mL의 1 N HCl 및 2 X 200 mL의 CH2Cl2간에 분배하였다. 합한 유기층을 건조하고(MgS04), 여과하고, 농축하여 황색고체 13.6g을 얻었다. 실리카겔 크로마토그래피(CH2Cl2/MeOH 및 EtOAc/헥산)로 정제하여 점착성이 있는 비결정질 고체로서 4.91 g (83%)의 화합물14를 얻었다:1H NMR (CDCl3) δ 3.72 (m, 12H), 4.31 (t, 4H), 4.48 (m, 8H), 7.40 (m, 8H), 8. 29 (m, 8H).
BOC-보호된 AOTEG/DEA/DEG 플랫폼 (화합물 15):
트리에틸아민 (157 μL, 114 mg, 1.13 mmol)을 화합물14(상기 및 미국 일련번호 60/111,641(1998. 12. 9. 출원)에서 설명한 바와 같이 제조)의 193 mg (0.188mmol) 교반용액, 이어서 298 mg (1.13 mmol)의 화합물11에 가하였다. 혼합물을 실온으로 하고 밤새 교반하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 1 N HCl로 산성화하고, 20 mL의 1 N HCl 및 4 x 20 mL의 CH2Cl2간에 분배하였다. 합한 유기층을 포화 NaHC03용액으로 세척하고, 건조하고(MgSO4), 여과하고, 농축하여 279 mg의 황색 오일을 얻었다. 실리카겔 크로마토그래피(97/3 CH2Cl2/MeOH)로 정제하여 오일로서 138 mg (48%)의15를 얻었다:1H NMR (CDCl3) δ 1.49 (s, 36H) 3. 35 (m, 8H), 3. 46-3.78 (m, 44H), 4.04 (t, 8H), 4.21 (m, 12H), 5.80 (m, 4H), 7.91 (s, 4H); C62H117N10O33(M+H)에 대한 질량 스펙트럼 (ES) m/z 계산치: 1528.8. 실측치: 1528.5.
화합물 16: 화합물15(60 mg, 39.2 μmol)를 10 mL의 1/9 트리플루오로아세트산/CH2Cl2에 용해시키고, 혼합물을 실온에서 3시간 동안 두었다. 부드러운 질소기류를 사용하여 용매를 증발시키고, 잔사를 실리카겔 컬럼으로 혼합물을 이송하도록 사용되는 최소량의 크로마토그래피 용매 (5/7.5/87.5 진한 NH40H/H20/CH3CN)에 용해시켰다. 실리카겔 크로마토그래피(단계 기울기, 5/7.5/87.5 내지 5/10/85 진한 NH40H/H20/CH3CN)로 정제하여 무색 오일로서 36 mg (82%)의16을 얻었다:1H NMR (CDCl3) δ 3. 37 (m, 8H), 3.58 (m, 16H), 3.67 (s, 16H), 3.71 (m, 12H), 3.86 (m, 8H), 4.17-4.29 (m, 12H), 4.93 (brd, 8H), 5.91 (m, 4H);13C NMR (CDCl3) δ40.9, 47.7, 48.2, 62.9, 64.7, 69.4, 69.6,70.2, 70.3, 70.5, 74.8, 156.1, 156.6; C42H85N10025(M+H)에 대한 질량 스펙트럼 (ES) m/z 계산치: 1129. 실측치: 1129.
분석 HPLC에 의해서 순도를 확인하기 위하여, 테트라-아세톤 옥심을 다음과 같이 제조하였다. 화합물16(0.38 mg, 0.34 μmol)을 HPLC 샘플 바이알내에 240 μL의 0.1M NaOAc 완충액에 용해시켰다. 용액에 2.0 mL의 0.1 M NaOAc 완충액에서 49μL의 아세톤중의 10μL의 용액을 가하였다. 혼합물을 1시간 동안 정치시키고, 분액을 HPLC에 의하여 분석하였다(4.6 mm C18컬럼, 1 mL/분, 210 nm 검출, 기울기, 10-60% B 20 분 이상, A = 0.1 % TFA/H20, B = 0.1% TFA/CH3CN, tR= 19 분); C54H101N10O25(M+H)에 대한 수집한 용리액의 질량 스펙트럼 (ES) m/z 계산치 : 1289. 실측치: 1289.
실시예 4-AOTEG/PIZ/DEA/DEG 플랫폼의 합성
합성 반응식이 도 4에 제시된다.
화합물 17: 피리딘(610 μL, 596 mg, 7.54 mmol)을 14 mL의 CH2C12중의 500 mg (1.88 mmol)의 화합물8및 760 mg (3.77 mmol)의 p-니트로페틸클로로포르메이트의 교반 용액에 서서히 가하고, 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 1N 수성 HCl로 산성화하였다. 생성된 혼합물을 100mL의 1N 수성 HCl 및 3 x 100 mL의 CH2Cl2간에 분배하였다. 합한 유기층을건조하고(MgS04), 여과하고, 농축하여 1.05 g의 점착성의 고체를 얻었다. 실리카겔 크로마토그래피 (6/4 헥산/EtOAc)로 정제하여 엷은 황색오일로서 505 mg (62%)의 화합물17을 얻었다:1H NMR (CDCl3) δ 1.47 (s, 9H), (m, 6H), 3.80 (m. 2H), 4.02 (m, 2H), 4.48 (m, 2H), 7.40 (d, 2H), 7.50 (s, 1H), 8.29 (d, 2H); Cl8H26N2Ol0Na (M+Na)에 대한질량 스펙트럼 (ES) m/z 계산치 : 453.1. 실측치: 453.0.
Boc-보호된 AOTEG/PIZ/DEA/DEG 플랫폼(화합물 19): 수성 중탄산나트륨 및 디옥산의 혼합물중의 화합물18(미국 일련번호 60/111,641(1998. 12. 9. 출원에서 설명된 바와 같이 제조)의 용액에 디옥산중의 4 당량의 화합물17의 용액을 가하였다. 반응의 완결시, 혼합물을 물과 CH2Cl간에 분배하였다. CH2Cl층을 농축하고, 건조하고, 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 화합물19를 얻었다.
AOTEG/PIZ/DEA/DEG 플랫폼(화합물 20): 화합물16의 제조에 대하여 설명한 것과 본질적으로 유사한 방법으로 Boc-보호기를 화합물19로부터 제거하여 화합물20을 얻었다.
실시예 5a-AOTEG/SA/AHAB/TEG 플랫폼의 합성
합성 반응식이 도 5에 제시된다.
S-아세틸-2-[2-(2-N-tert-부틸옥시카르보닐아미노옥시에톡시)에톡시]에틸메르캅탄(화합물 21a): 30 mL의 아세톤중의 화합물9a의 500 mg (1.52 mmol)의 용액에 191 mg (1.68 mmol)의 티오아세트산칼륨(Aldrich Chemical Co.)을 가하였다. 혼합물을 18시간 동안 실온에서 교반하고, 생성된 침전물을 여과하여 제거하였다. 여액을 농축하고, 300 mL의 EtOAc 및 2 x 80 mL의 염수간에 분배하였다. EtOAc층을 건조하고(NaS04), 여과하고, 농축하여 담갈색 오일로서 460 mg (93%)의 화합물21a를 얻었다:1H NMR (CDCl3) δ 1.48 (s, 9H), 2.35 (s, 3H), 3.12 (t, 2H), 3.61 (t, 2H), 3.64 (m, 4H), 3. 73 (m, 2H), 4.02 (m, 2H), 5.52 (s, 1H) ;13C NMR (CDCl3) δ 28.3,28.8,30.6,69.3,69.8,70.2,70.5,75.3,81.5,156.8,195.3.
2-[2-(2-N-tert-부틸옥시카르보닐아미노옥시에톡시)에톡시]에틸메프캅탄(화합물 22a): 화합물21a를 4/1 6N NH40H/CH3CN의 질소 살포된 용액으로 실온에서 1시간 동안 질소 분위기하에 처리하였다. 혼합물을 진공중에 농축하여 더 이상 정제하지 않고 사용할 수 있는 화합물22a를 얻었다.
Boc-보호된 AOTEG/SA/AHAB/TEG 플랫폼(24a): 화합물 23(Jones et al. J. Med. Chem. 1995, 38, 2138-2144.에 기재된 바와 같이 제조)를 질소 살포된 10/90 H2O/CH3CN중의 4당량의 화합물22a의 용액에 가한다. 생성된 용액에 4 당량의 디이소프로필에틸아민을 가한다. 반응 완결시, 혼합물을 물과 CH2Cl2간에 분배한다. CH2Cl2층을 농축하고, 건조하고, 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 화합물24a를 얻는다.
AAOTEG/SA/AHAB/TEG 플랫폼 (25a): 화합물16의 제조에 대하여 설명한 것과본질적으로 유사한 방법으로 Boc-보호기를 화합물24a로부터 제거하여 화합물25a를 얻는다.
실시예 5b-AOHEX/SA/AHAB/TEG 플랫폼의 합성
합성 반응식이 도 6에 제시된다.
1-요오도-6-(N-tert-부틸옥시카르보닐)아미노옥시헥산(화합물 9b): 140 mg (1.05 mmol)의 N-(tert-부틸옥시카르보닐)히드록실아민 (Aldrich Chemical Co.) 및 658 μL (1.35 mg, 4.0 mmol)의 화합물12의 불균일 혼합물에 149 μL (152 mg, 1.0 mmol)의 DBU을 가하였다. 혼합물을 반응혼합물이 고체화하는 시간인 30초 동안 실온에서 교반하였다. 고체 덩어리를 밤새 두고, 50 mL의 CH2Cl2에 용해시켰다. 용액을 2 x 25 mL의 1 N NaOH 및 3 x 25 mL의 1 N HCl로 세척하였다. 합한 염기성 수성층을 25 mL의 CH2Cl2로 추출하고, 합한 산성 수성층을 25 mL의 CH2Cl2로 추출하였다. 합한 CH2Cl2층을 건조하고(Na2S04), 여과하고, 농축하여 황색오일을 얻었다. 실리카겔 크로마토그래피(단계 기울기; 1/99/0.1 내지 15/85/0.1 EtOAc/헥산/MeOH)로 정제하여 황색오일로서 216 mg (68%)의9b를 얻었다:1H NMR (CDCl3) δ 1.40 (m, 4H), 1.48 (s, 9H), 1.62 (m, 2H), 1.83 (m, 2H), 3.20 (t, 2H), 3.84 (t, 2H), 7.10(s, 1H).
S-아세틸-6-(N-tert-부틸옥시카르보닐)아미노옥시헥산-1-티올(화합물 21b):
화합물 9b(209 mg, 0.61mmol)을 15mL의 아세톤중 티오아세트산칼륨 용액에가하고, 혼합물을 18시간 동안 실온에서 교반하였다. 아세톤을 진공중에서 제거하여, 잔사를 50mL의 CH2C12및 3 x 25 mL의 1 N NaOH간에 분배하였다. CH2C12층을 건조하고(Na2SO4), 여과하고, 농축하여 갈색오일을 얻었다. 실리카겔 크로마토그래피 (15/85 EtOAc/헥산)로 정제하여 무색오일로서 166 mg (94%)의 화합물 21b를 얻었다:1H NMR (CDC13) δ1.39 (m, 4H), 1.48 (s, 9H), 1.59 (m, 4H), 2.32 (s, 3H). 2.86 (t, 2H), 3.82 (t, 2H), 7.10 (s, 1H).
6-(N-tert-부틸옥시카르보닐)아미노옥시헥산-1-티올(화합물 22b): 22b의 정제된 샘플을 다음과 같이 제조하였다. 화합물 21b (50 mg, 172 μmol) 및 22 μL (17.4 mg, 85.8 μmol)의 트리-n-부틸포스핀을 질소하에 넣고, MeOH중의 2 mL의 질소 살포된 1 M 용액을 혼합물에 가하였다. 혼합물을 18시간 동안 실온에서 교반하고, 172 μL (180 mg, 3 mmol)의 트리플루오로아세트산을 가하였다. 혼합물을 25 mL의 EtOAc 및 3 x 25 mL의 1N HCl간에 분배하였다. 합한 수성층을 25 mL의 EtOAc로 추출하고, 건조하고(Na2SO4), 여과하고, 농축하여 오일을 얻었다. 실리카겔 크로마토그래피(15/85/0.1 EtOAc/헥산/MeOH)로 정제하여 무색오일로서 28 mg의 22b를 얻었다:1H NMR (CDCl3) δ 1. 32 (t, 1H), 1.40 (m, 4H), 1.49 (s, 9H), 1.62 (m, 4H), 2.53 (d oft, 2H). 3.84 (t, 2H), 7.09 (s, 1H).
Boc-보호된 AOHEX/SA/AHAB/TEG 플랫폼 (24b): 화합물 21b (13 mg, 45 μmol) 및 6 μL (4.5 mg, 22.3 μLmol)의 트리-n-부틸포스핀을 질소하에 넣고, 4/1 6NNH40H/CH3CN의 3 mL의 질소 살포된 용액을 혼합물에 가하였다. 혼합물을 1 시간 동안 실온에서 교반하고, 진공중에서 농축하였다. 잔사를 10/90 물/CH3CN의3 mL의 질소 살포된 용액에 용해시켰다. 질소 분위기하에 유지시킨 생성된 용액에 10 mg(7.44 μmol)의 화합물 23, 이어서 8 μL (5.77 mg, 44.6 μmol)의 디이소프로필에틸아민을 가하였다. 혼합물을 18시간 동안 교반하고 진공중에서 농축시켰다. 잔사를 실리카겔 크로마토그래피(다단계 기울기, 1/99 내지 5/95 내지 7.5/92.5 내지 10/90 내지 15/85 MeOH/CH2Cl2)로 정제하여 무색오일로서 14 mg (93%)의 24b를 얻었다: TLC (10/90 MeOH/CH2Cl2), Rf = 0.3; C92Hl74N14026S4(M+2H)에 대한 질량 스펙트럼 (ES) m/z 계산치/2: 1010. 실측치: 1010.
AOHEX/SA/AHAB/TEG 플랫폼(25b): 화합물 16의 제조에 대하여 설명한 것과 본질적으로 유사한 방법으로 Boc-보호기를 화합물 24b로부터 제거하였다.
실시예 6-AOHOC/DT/TEG 플랫폼의 합성
합성 반응식이 도 7에 제시된다.
6-(tert-부틸옥시카르보닐아미노옥시)헥산-1-올(27): 1mL의 CH2Cl2중의 179 μL (183 mg, 1.2 mmol)의 DBU의 용액에 133 mg (1.0 mmol)의 N-(tert-부틸옥시카르보닐)히드록실아민 (Aldrich Chemical Co.) 및 157 μL (217 mg, 1.2 mmol)의 6-브로모헥산-1-올 (Aldrich Chemical Co.)을 가하고, 혼합물을 18시간 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 농축하여 황색 오일을 얻었다. 실리카겔 크로마토그래피(35/5/65 EtOAc/MeOH/헥산)로 정제하여 무색 오일로서 180 mg (77%)의 화합물 27을 얻었다:1H NMR (CDCl3) δ 1.39 (m, 4H), 1.48 (s, 9H), 1.59 (m, 4H), 3. 63 (t, 2H), 3.85 (t, 2H), 7.42 (s, 1H);13C NMR (CDCl3) δ 25.6, 25.8, 28.1, 28.4, 62.8, 76.8, 81.7, 157.2.
화합물 28: 0℃에서 2 mL의 CH2Cl2중의 100 mg (0.428 mmol)의 화합물 27의 용액에 90 μL (88.1 mg, 1.11 mmol)의 피리딘, 이어서 113 mg (0.557 mg)의 p-니트로페닐클로로포르메이트 (Aldrich Chemical Co.)를 가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고, 0℃로 냉각시키고, 1 N HC1로 산성화하고, 20 mL의 1 N HC1 및 3 x 20 mL의 CH2Cl2간에 분배하였다. 합한 CH2Cl2층을 NaHC03포화용액으로 세척하고, 건조하고(MgS04), 여과하고, 농축하였다. 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 화합물 28을 얻었다.
화합물 29: EtOAc중의 디에틸렌트리아민 용액에 2 당량의 디이소프로필에틸아민, 이어서 2 당량의 화합물 28을 가한다. 혼합물을 반응이 완결될 때까지 교반한다. 용매를 제거하고, 생성물(화합물 29)를 실리카겔 크로마토그래피로 정제한다.
Boc-보호된 AOHOC/DT/TEG 플랫폼 (30): 피리딘중의 트리에틸렌 글리콜 비스-클로로포르메이트 (Aldrich Chemical Co.)의 용액에 2 당량의 화합물 29를 가한다.혼합물을 반응이 완결될 때까지 교반하고, 1N HCl 및 CH2Cl2간에 분배한다. CH2Cl2층을 건조하고 농축하고, 생성물을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 화합물 30을 얻는다.
AOHOC/DT/TEG 플랫폼 (31): 화합물 16의 제조에 대하여 설명한 것과 본질적으로 유사한 방법으로 Boc-보호기를 화합물 30으로부터 제거하였다.
실시예 7-AOTEG/IDA/TEG 플랫폼의 합성
합성 반응식이 도 8에 제시된다.
화합물 32: 피리딘중의 트리에틸렌 글리콜 비스-클로로포르메이트 (Aldrich Chemical Co.)용액에 2 당량의 이미노디아세트산(Aldrich Chemical Co.)을 가한다. 혼합물을 반응이 완결될 때까지 교반하고, 1 N HC1 및 CH2Cl2간에 분배한다. CH2Cl2층을 건조하고, 농축하고, 생성물을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 화합물 32를 얻는다.
화합물 33: THF중의 화합물 32의 용액을 6 당량의 NHS 및 6 당량의 DCC로 1 시간동안 처리한다. 혼합물에 4 당량의 화합물 11을 가하고, 혼합물을 반응이 환결될 때까지 교반한다. 아세트산을 가하여 과량의 DCC를 퀀칭하고, 생성된 고체를 여과하여 제거한다. 여액을 농축하여 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 화합물 33을 얻는다.
화합물 34: 화합물 16의 제조에 대하여 설명한 것과 본질적으로 유사한 방법으로 Boc-보호기를 화합물 33으로부터 제거하였다.
실시예 8-AOTEGO/LEV/PITG 플랫폼의 합성
합성 반응식이 도 9에 제시된다.
p-니트로페닐-레불리네이트(35): 4.25 mL의 피리딘중의 800 mg (6.89 mmol)의 레불린산(Aldrich Chemical Co.)용액에 1.78 g (7.58 mmol)의 4-니트로페닐트리플루오로아세테이트(Aldrich Chemical Co.)를 가하였다. 생성된 용액을 15 분 동안 교반하고, 28 mL의 물 및 2 x 28 mL의 CH2Cl2간에 분배하였다. 합한 CH2Cl2층을 건조하고(MgS04), 여과하고, 농축하였다. 실리카겔 크로마토그래(단계 기울기, 25/75 내지 30/70 EtOAc/헥산)로 정제하여 1.06 g (74%)의 화합물 35를 얻었다:1H NMR (CDC13) δ 2.28 (s, 3H), 2.87 (m, 4H), 7.29 (d, 2H), 8.28 (d, 2H).
1,2-비스(2-(tert-부틸옥시카르보닐)아미노옥시에톡시)에탄(화합물 36):
243 mg (0.66 mmol)의 화합물 12에 219 mg (1.64 mmol)의 N(tert-부틸옥시카르보닐)히드록실아민 (Aldrich Chemical Co.), 이어서 246 μL (250 mg, 1.64 mmol)의 DBU를 가하였다. 혼합물을 고체화될 때까지 실온에서 교반하였다(약 1 시간). 추가의 시간을 정치시킨 후, 혼합물을 2 mL의 CH2Cl2에 용해시키고, 생성된 용액을 100 mL의 EtOAc에 가하여 DBU의 수소-요오드화물 염을 침전시켰다. 50 mL의 EtOAc을 더 가하고, 혼합물을 여과하였다. 여액을 2 x 50 mL의 lN HC1, 2 x 50 mL의 5% 아황산나트륨 용액, 및 25 mL의 염수로 세척하였다. EtOAc층을 건조하고(Na2SO4), 여과하고, 농축하여 오일을 얻었다. 실리카겔 크로마토그래피 (단계 기울기, 40/60 내지 50/50 내지 80/20 EtOAc/헥산)로 정제하여 무색오일로서 164 mg (65%)의 화합물 36을 얻었다:1H NMR (CDCl3) δ 1.48 (s, 18H), 3.65 (s, 4H), 3.72 (t, 4H), 4.02 (t, 4H), 7.80 (s, 2H);13C NMR (CDC13) δ 28.2, 69.0, 70.3, 75.2, 81.3, 156.8.
1,2-비스(2-아미노옥시에톡시)에탄 (화합물 37): 화합물 36 (559 mg, 1.47 mmol)을 15 mL의 EtOAc에 용해시키고, HCl 가스를 30분 동안 용액을 통하여 기포발생시켰다. 혼합물을 진공중에서 농축하여 점착성 잔사인 HCl염으로서 72 mg (90%)의 화합물 37을 얻었다:1H NMR (D20) δ 3.75 (s, 4H), 3.87 (m, 4H), 4.27 (m, 4H); C6Hl7N204(M+H)에 대한 질량 스펙트럼 (ES) m/z 계산치 : 181.1. 실측치: 181.1.
화합물 38: 화합물 3을 아세트산중의 HBr의 30% 용액으로 처리하여 CBZ보호기를 제거하고, 테트라-아민 브롬화수소 염을 얻는다. 테트라-아민을 물 및 디옥산중의 중탄산나트륨 용액에 용해시키고, 생성된 용액에 4 당량의 화합물 35를 가한다. 반응의 완결시, 혼합물을 물 및 CH2Cl2간에 분배한다. CH2Cl2층을 농축하고, 건조하고, 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 화합물 38을 얻는다.
AOTEGO/LEV/PITG 플랫폼 (화합물 39): 0.1 M pH 4.6 아세트산나트륨 완충액중의 화합물 38의 용액에 20 당량의 화합물 37을 가한다. 반응의 완결시, 혼합물을물 및 CH2Cl2간에 분배한다. CH2Cl2층을 농축하고, 건조하고, 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 화합물 39를 얻는다.
실시예 9-AO/DEGA/DEG 플랫폼의 합성
합성 반응식이 도 10에 제시된다.
화합물 41: 오랜지색이 나타날 때까지, 브롬(약 6 당량)을 화합물 40의 용액, 6 당량의 트리페닐포스핀, 및 CH2Cl2중의 8 당량의 피리딘에 적가한다. 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 또는 반응이 완결될 때까지 교반하고, 아황산나트륨 포화용액을 가하여 과잉의 브롬을 버린다. 그 다음, 혼합물을 H20 및 EtOAc간에 분배한다. 합한 유기층을 염수로 세척하고, 건조하고(Na2SO4), 여과하고, 농축하고, 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 화합물 41을 얻는다.
화합물 42: 화합물 41에 6 당량의 N-(tert-부틸옥시카르보닐)히드록실아민 (Aldrich Chemical Co.) 및 6 당량의 DBU를 가한다. 혼합물을 반응을 완결시키기에 충분한 시간 동안 필요한 만큼 가열한다. 냉각시, 혼합물을 CH2Cl2에 용해시키고, 생성된 용액을 EtOAc에 가하여 침전을 형성시켜 여과에 의해 제거하고, 여액을 농축한다. 플래시 크로마토그래피로 정제하여 42를 얻는다.
화합물 43: 화합물 16의 제조에 대하여 설명한 것과 본질적으로 유사한 방법으로 Boc-보호기를 화합물 42로부터 제거하였다.
실시예 10-4가 D1 콘쥬게이트의 합성
합성 반응식이 도 11에 제시된다.
4가 D1 콘쥬게이트의 합성 (화합물 44): 실시예 1에 설명된 바와 같이 제조한 TA/D1(0.90 mg, 1.28 x 10-7mol)를 폴리프로필렌 튜브내의 250 LL의 0.1 M 아세트산나트륨 pH 4.60 완충액에 용해시켰다. 혼합물에 0.1 M 아세트산나트륨 pH 4.60 완충액중의 16.6 μL (18.9 μg, 1.60 x 10-8mol)의 0.97 μmol/mL 용액 AOA/PITG 플랫폼(화합물 5)를 가하였다. 혼합물을 280 nm (1 mL/분 ; 기울기 25%-45% B, 0-20 분, A = 0.1% TFA/H20, B = 0.1% TFA/CH3CN)로 검출하며 4.6 mm X 250 mm, 300 Å, 5 μm, 디페닐 컬럼 (Vydac)을 사용하는 분석 HPLC에 의하여 반응이 완결된 것으로 나타나는 시간인 6일 동안 질소하에서 부드럽게 교반하였다.대강의 체류시간은 다음과 같다: TA/D1,13.7 분; 화합물44, 17.2 분).
혼합물을 95/5 물/아세토니트릴로 1 mL 부피로 희석하고, HPLC (10 mm X 250 mm, 300 Å, 5 μm, 디페닐 컬럼 (Vydac) (3 mL/분; 기울기 25%-45% B, 0-40 분, A = 0.1 % TFA/H20, B = 0.1 % TFA/CH3CN)로 정제하였다. 분석 HPLC로 입증된 순수한 44를 함유하는 분획을 모으고, 동결건조하여 0.4 mg (25%)의 44를 얻었다: Cl320H2032N338O370S20에 대한 질량 스펙트럼 (ES, 평균 m/z) 계산치: 29,198. 실측치: 29,218.
실시예 11-4가 D1 콘쥬게이트의 합성
합성 반응식이 도 12에 제시된다.
4가 D1 콘쥬게이트의 합성 (화합물 45): 실시예 1에서 설명한 바와 같이 제조한 TA/D1 (5.20 mg, 7.37 x 10-7mol)을 폴리프로필렌 튜브내의 2.0 mL의 He 살포된 0.1 M 아세트산나트륨 pH 4.60 완충액에 용해시켰다. 혼합물에 0.1 M 아세트산나트륨 pH 4.60 완충액중의 15.07 μL (139 μg, 1.23 x 10-7mol)의 8.147 μmol/mL 용액중 을 가하였다.(혼합물에 0.1 M 아세트산나트륨 pH 4.60 완충액중에서 AOTEG/DEA/DEG 플랫폼(화합물 16) 8.147 μmol/mL 용액중 15.07 μL (139 μg, 1.23 x 10-7mol)을 가하였다.) 혼합물을 280 nm (1 mL/분; 기울기 25%-45% B, 0-20 분, A = 0.1% TFA/H20, B = 0.1% TFA/CH3CN)로 검출하며 4.6 mm X 250 mm, 300 Å, 5 μm, 디페닐 컬럼 (Vydac)를 사용하는 분석 HPLC에 의하여 반응이 완결된 것으로 나타나는 시간인 23 시간 동안 질소하에 부드럽게 교반하였다. 대강의 체류시간은 다음과 같다: TA/D1,13.7 분;45, 17.2 분. 혼합물을 물로 부피 5 mL로 희석하고, HPLC (10 mm X 250 mm, 300 Å, 5 μm, 디페닐 컬럼 (Vydac) (3 mL/분; 기울기 25%-45% B, 0-40 분, A = 0.1 % TFA/H20, B = 0.1 % TFA/CH3CN)로 정제하였다. 분석 HPLC로 입증된 순수한45를 함유하는 분획을 모으고, 동결건조하여 1.73 mg (48%)의45를 얻었다: C1322H2048N3340377S20에 대한 질량 스펙트럼 (ES, average m/z) 계산치: 29,294. 실측치: 29,294.
실시예 12-모델 아미노옥시 화합물의 제조 및 글리옥실-펩티드와의 반응성 비교
합성 반응식이 도 14에 제시된다.
글리옥실-펩티드 (화합물 47)의 합성: 화합물46(SEQ. ID No. 1)을 N-Fmoc 보호된 아미노산을 사용하여, Wang 수지에 대한 표준 고체상 합성법에 의하여 제조하였다. DMF중의 3 당량의 N-Fmoc-보호된 아미노산, 3 당량의 DIC, 및 3 당량의 HOBt으로 커플링을 행하였다. DMF중의 20% 피리딘으로 탈보호하였다. 펩티드를 수지로부터 절단하고, 역상 HPLC(C18, 기울기, 10-30% B, 0-40 분, A = 0.1% TFA/H20, B = 0.1% TFA/CH3CN)로 정제하였다. 분석 HPLC (4.6 x 250 mm C18, 1 mL/분, 기울기, 10-60% B, 0-20 분, A = 0.1 % TFA/H20, B = 0.1 % TFA/CH3CN, Tr= 10.3 분)에 의하여 입증된 순수한 분획을 동결건조하여 솜털같은 백색고체로서 화합물46을 얻었다: (M+H) C41H67N12011에 대한 량 스펙트럼 (ES) 계산치: 903.5. 실측치: 903.5.
3.67 mL의 CH3CN 및 19mL의 10 mM 인산나트륨 pH 7.0 완충액중의 163 mg (0.18 mmol)의 화합물 46의 용액에 5.4 mL 물중의 77.2 mg (0.361 mmol)의 과요오드산나트륨 용액을 가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 아세트산 100 μL를 가하였다. 혼합물을 여과하고, 여액을 HPLC(Cl8, 기울기, 15-30% B, 0-40 분, A = 0.1 % TFA/H20, B = 0.1 % TFA/CH3CN)로 정제하였다. 분석 HPLC (4.6 x 250 mm Cl8, 1 mL/분, 기울기, 10-35% B, 0-20 분, A = 0.1% TFA/H2O, B = 0.1 % TFA/CH3CN, Tr= 17.6 분)에 의해 입증된 순수한 분획을 동결건조하여 동결건조 후,백색고체로서 124 mg (79%)의 화합물47(SEQ ID No. 2)을 얻었다: (M+H) C40H62N11O11에 대한 질량 스펙트럼 (ES) 계산치: 872.5. 실측치: 872.5.
화합물 49의 합성: 5 mL의 CH2Cl2중의 250 mg (0.801 mmol)의 화합물 2의 용액에 158 μL (166 mg, 1.58 mmol)의 아미노디에틸렌글리콜(Aldrich Chemical Co.)을 가하였다. 생성된 용액에 298 μL(221 mg, 1.71 mmol)의 디이소프로필에틸아민을 가하고, 혼합물을 질소 분위기하에 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 100 mL의 CH2Cl2및 20 mL의 Na2CO3포화용액간에 분배하고, CH2Cl2층을 2회분의 20 mL의 Na2CO3포화용액, 2회분의 20 mL의 1 N HCl, 및 20 mL의 염수로 연속적으로 세척하였다. 수성 HCl 층을 5회분의 50mL CH2Cl2로 추출하고; 수성 Na2CO3층을 2회분의 50mL의 CH2Cl2로 추출하였다. 합한 유기층을 건조하고(MgS04), 여과하고, 농축하여 황색오일을 얻었다.
실리카겔 크로마토그래피(70/30 EtOAc/헥산)로 정제하여 점착성의 무색오일로서 화합물49에 대한 164 mg (73%)의 Boc-보호된 전구체를 얻었다:1H NMR (CDCl3) δ 1.48 (s, 9H), 3.52 (m, 2H), 3.62 (m, 4H), 3.77 (m, 2H), 4.35 (s, 2H), 7.64 (s, 1H), 8. 33 (brd s, 1H).
Boc 보호기를 다음과 같이 제거하였다. Boc 보호된 전구체 (164 mg, 0.59 mmol)를 5 mL의 50/50 트리플루오로아세트산 트리플루오로아세트산/CH2Cl2에 용해시키고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 부드러운 질소 기류하에 증발시키고, 잔사를 CH2Cl2에 다시 용해시켰다. 용액을 진공중에서 농축하여 무색오일로서 화합물49의 트리플루오로아세테이트 염 179 mg (이론치의 104 %, TFA인 것으로 가정된 잔사)을 얻었다: (M+H) C6Hl5N204에 대한 질량 스펙트럼 (ES) 계산치: 179.2. 실측치: 179.1.
화합물 50의 합성: 7.6 mL의 0.1 M pH 4.6 아세트산나트륨 완충액중의 5.0 mg (5.62 μmol)의 화합물 47의 용액에 10 mL의 0.1 M pH 4.6 아세트산나트륨 완충액중의 3.29 mg의 화합물49의 582 μL의 용액 (평가 순도 96%, 1.70 mg, 5.82 μmol)을 가하고, 혼합물을 6일 동안 교반하였다. 혼합물을 HPLC (C18; 기울기, 25%-45% B, 0-40 분, A = 수성 pH 7.0 트리에틸암모늄 포스페이트(pH 7.0을 제공하는 약 500 mL의 0.3% Et3N와 500 mL의 0.1 % H3PO4를 혼합함으로써 제조), B = CH3CN)로 곧 바로 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 동결건조하여 0.3 mg의 화합물 50을 얻었다: (M+H) C46H74N13Ol4에 대한 질량 스펙트럼 (ES) 계산치: 1032.5, 실측치: 1032.6.
화합물 51의 합성: 화합물8(100 mg, 0.38 mmol)을 25 mL의 1/9 트리플루오로아세트산/CH2Cl2에 용해시키고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 정치시켰다. 혼합물을 질소의 부드러운 기류하에 증발시키고, 잔사를 CH2Cl2에 다시 용해시켰다. 용액을 진공중에서 농축하여 무색오일로서 152 mg (이론치의 145%, TFA인 것으로 가정된 잔사)의 화합물51의 트리플루오로아세테이트 염을 얻었다: (M+H) C6H16NO4에 대한 질량 스펙트럼 (ES) 계산치 : 165.1. 실측치: 165.1.
화합물 52의 합성: 7.6 mL의 0.1 M pH 4.6 아세트산나트륨 완충액중의 5.0 mg (5.62 μmol)의 화합물 47의 용액에 10 mL의 0.1 M pH 4.6 아세트산나트륨 완충액중의 3.29 mg의 화합물 51의 845 μL의 용액(평가 순도 69%, 1.63 mg, 5.82 μmol)을 가하고, 혼합물을 21시간 동안 교반하였다. 혼합물을 HPLC (C18; 기울기, 25%-45% B, 0-40 분, A = 수성 pH 7.0 트리에틸암모늄 포스페이트(pH 7.0을 제공하는 약 500 mL의 0.3% Et3N와 500 mL의 0.1 % H3PO4를 혼합함으로써 제조), B = CH3CN)로 곧 바로 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 동결건조하여 3 mg의 화합물52를 얻었다: (M+H) C46H75N12014에 대한 질량 스펙트럼 (ES) 계산치: 1019.5. 실측치: 1019.5.
49에서 50로 및 51에서 52로의 전환 비율의 비교:49 (옥시아세틸기를 포함하는 AOA-ADEG-OH)에서 생성물 50으로, 및 51 (아미노옥시알킬기를 포함하는 AO-TEG-OH)에서 52로의 전환 비율을 다양한 시점에서 분석 HPLC로 반응혼합물의 분액을 주입함으로써 측정하고, 분석 HPLC(C18, 기울기, 10-60% B, 0-40 분, A = 0.1 % TFA/H20, B = 0.1% TFA/CH3CN)로 그 시간에서 생성물의 양을 측정함으로써 측정하였다. 도 13에 도시된 바와 같이, 아미노옥시기를 포함하는 원자가 플랫폼 분자는 더욱 신속하게 모델 펩티드를 가진 옥심 콘쥬게이트를 형성하였다.
실시예 13-2작용성 링커로서 화합물 37를 사용하는 4가 콘쥬게이트의 다른 제조 방법
4가 아미노옥시 플랫폼과 아미노기전이된 도메인 1 β2GPI 폴리펩티드, 또는 다른 어떤 글리옥실화된 폴리펩티드를 직접 반응시키는 다른 방법으로서, 아미노기전된 폴리펩티드를 pH 4.6 100 mM 아세트산나트륨 완충액중의 과잉의 화합물 37을 반응시켜 아미노옥시 링커가 옥심 결합을 통해서 폴리펩티드(여기서, 도메인 1 폴리펩티드)에 결합하는 화합물 53을 얻을 수 있다. 합성 반응식이 도 15에 제시된다. 화합물 53을 과잉의 링커로부터 분리하고, 4당량의 화합물53을 pH 4.6 100 mM 아세트산나트륨 완충액중의 플랫폼 38과 반응시켜 제 2 세트의 옥심 결합을 형성시켜 4가 콘쥬게이트(화합물 54)를 얻는다.
실시예 14- 2작용성 링커에 대한 전구체로서 화합물 21를 사용하는 4가 콘쥬게이트의 다른 제조 방법
수산화암모늄으로 화합물21a을 처리하여 아세틸 황 보호기를 제거한 후, 트리플루오로아세트산으로 처리하여 Boc 보호기를 제거하여 링커55를 얻는다. 이 경우 TA/D1에서, 글리옥실-함유 폴리펩티드를 화합물 55와 반응시켜 옥심 결합을 통해서 결합된 술프히드릴 링커를 가진 화합물56, 도메인 1을 얻는다. 4 당량의 화합물 56은 플랫폼 23과 반응하여 4가 도메인 1 폴리펩티드 콘쥬게이트, 화합물 57을 얻을 수 있다. 합성 반응식이 도 16에 제시된다.
실시예 15-화합물 85의 합성 (도 21)
아미노옥시 플랫폼 (화합물 85)의 합성을 화합물 20(도 4에 제시)의 합성과 본질적으로 동일한 방법으로 수행한다; 그러나, 화합물 28을 화합물 17 대신에 사용한다. 화합물 18을 화합물 28과 도 23에 제시된 바와 같이 반응시켜 Boc-보호된 플랫폼 99를 얻는다.
Boc-보호기를 화합물 16의 제조에 대하여 설명한 것과 본질적으로 동일한 방법으로 화합물 99로부터 제거하여 85를 얻는다.
실시예 16-화합물 86의 합성 (도 21)
화합물 86의 제조는 도 24의 반응식 B에 제시된 바와 같이 Boc-보호된 아미노옥시헥사논산 (화합물 105)를 제조하는 것과, 테트라-아미노 플랫폼 (화합물 108)을 아실화하기 하기 위하여 그것을 사용하는 것을 수반하였다.
에틸 6-(N-tert-부틸옥시카르보닐)아미노옥시헥사노에이트 (화합물 104):
500 mg (3.76 mmol)의 N-(tert-부틸옥시카르보닐)히드록실아민 (Aldrich Chemical Co.) 및 267 μL (335 mg, 1.50 mmol)의 에틸 6-브로모헥사노에이트의 자기 교반 혼합물에 1.12 mL (1.14 g, 7.51 mmol)의 DBU를 약 1 분의 기간에 걸쳐서 가하였다. 혼합물을 그것이 부분적으로 고체화하는 시간인 24시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 100 mL의 CH2Cl2에 용해시키고, 생성된 용액을 4회분의 25 mL의 1 N HCl 및 25 mL의 염수를 가지고 분별 깔대기에서 뒤섞었다. 수성층을 버리고, CH2Cl2층을 건조하고(MgSO4), 여과하고, 농축하였다. 생성된 황색 오일을 실리카겔 크로마토그래피 (3/7 EtOAc/헥산)로 정제하여 285 mg의 화합물 104를 얻었다:1H NMRCDC13(δ) 1.25 (t, 3H), 1.42 (m, 2H), 1.50 (s, 9H), 1.65 (m, 4H), 2.30 (t, 2H), 3. 83 (t, 2H), 4.12 (q, 2H), 7.28 (s, 1H) ;13C NMR CDC13(δ) 14.4, 24.9, 25.6, 27.8, 28.4, 34.3, 60.4, 76.6, 81.7, 157.1, 173.1, 173.8; (M+Na) C13H25NaNO5에 대한 HRMS (MALDI-FTMS) 계산치 298.1630. 실측치: 298.1631.
6-(N-tert-부틸옥시카르보닐) 아미노옥시헥사논산 (화합물 105):
20 mL의 EtOH중의 1.50 g (5.44 mmol)의 화합물 104의 용액에 5.44 mL (54.4 mmol)의 10 N NaOH을 가하고, 혼합물을 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 100 mL의 1 N HC1 및 4회분의 100 mL의 CH2Cl2간에 분배하였다. CH2Cl2층을 합하고, 건조하고(MgS04), 여과하고 농축하여 오일을 수득하였다. 실리카겔 크로마토그래피 (50/50/1 헥산/EtOAc/HOAc)로 정제하여 무색 오일로서 1.22 g (90%)의 화합물 105를 얻었다:1H NMR CDCl3δ 1.45 (m, 2H), 1.48 (s, 9H), 1.66 (m, 4H), 2. 37 (t, 2H), 3.85 (t, 2H), 7.21 (s, 1H);13C NMR (CDCl3) (δ) 24.6, 25.5, 27.8, 28.4, 34.0, 76.6, 82.0, 157.5, 179.3.
N-히드록시숙신이미딜 6-(N-tert-부틸옥시카르보닐)아미노옥시헥사노에이트(화합물 106): 1.07 g (4.32 mmol)의 화합물 105 및 20 mL의 CH2Cl2중의 497 mg (4. 32 mmol)의 N-히드록실숙신이미드의 용액에 818 mg(1.01 mL, 6.48 mmol)의 디이소프로필카르보디이미드를 가하였다. 반응물을 18시간 동안 실온에서 교반하고, 1 mL의 HOAc를 가하였다. 혼합물을 3시간 더 교반하고, 진공중에서 농축하였다. 잔사를 75% EtOAc/헥산에 용해시키고, 불용성 물질을 여과하여 제거하였다. 여액을 농축하고, 생성된 황색 오일을 실리카겔 크로마토그래피(50/50 EtOAc/헥산)로 정제하여 무색오일로서 1.31 g (88%)의 화합물 106을 얻었다:1H NMR CDCl3(δ) 1.50 (s, 9H), 1.52 (m, 2H), 1.69 (m, 2H), 1.80 (m, 2H), 2.63 (t, 2H), 2.84 (s, 4H), 3.88 (t, 2H), 7.25 (s, 1H);13C NMR (CDCl3) (δ) 24.4, 25.1, 25.6, 27.5, 28.2, 30.8, 76.1, 81.5, 157.3, 168.6, 169.4.
Boc-보호된 아미노옥시헥사노일/TEG 플랫폼 (109):
앞서 설명한 바와 같이(미국 특허번호 5,633,395, 반응식 4) 화합물 107을 얻어서 화합물 108로 전환시켰다. 1mL의 THF중의 50mg(0.0058 mmol)의 화합물 108의 용액에 38μL (37 mg, 0.464 mmol)의 피리딘, 이어서 1mL의 THF중의 120mg (0.348 mmol)의 화합물 106을 가하였다. 혼합물을 18시간 동안 교반하고, 1N HCl으로 산성화하고, 15 mL의 1N HCl 및 3회분의 15 mL의 CH2Cl2간에 분배하였다. 합한 CH2Cl2층을 건조하고(MgS04), 여과하고, 농축하였다. 생성된 오일을 실리카겔 크로마토그래피(단계 기울기; 95/5 CH2Cl2/MeOH 내지 90/10 CH2Cl2/MeOH 내지 80/20 CH2Cl2/MeOH)로 정제하여 고무로서 25 mg (24%)의 화합물109를 얻었다:1H NMRCDCl3(δ) 1. 32 (M, 1 8H), 1.47 (s, 9H), 1.65 (m, 18H), 2.20 (t, 16H), 1.80 (m, 2H), 3.21 (m, 8H), 3.40 (brd s, 16H), 3.68 (m, 8H), 3.82 (t, 8H), 6.52 (t, 2H). 6.60 (t. 2H), 7.13 (t, 2H), 7. 21 (t, 2H), 7.88 (s, 1H); C84H57N14026에 대한 질량 스펙트럼 (ESI) (M+H) 계산치: 1777. 실측치 1778.
아미노옥시헥사노일//AHAB/TEG 플랫폼 (86): Boc-보호기를 화합물 16에 대하여 설명한 것과 본질적으로 동일한 방법으로 화합물 109로부터 제거하여 86을 얻었다.
실시예 17 화합물 91의 합성 (도 22)
1-아지도-6-(N-tert-부틸옥시카르보닐)아미노옥시헥산(화합물 99)의 합성:
300mg (0.874 mmol)의 1-요오도-6-(N-tert-부틸옥시카르보닐)-아미노옥시헥산(Jones 등이 Tetrahedron Letters 2000,41,1531-1533에서 설명한 바와 같이 제조된 화합물 98) 및 4 mL의 DMF중의 455 mg (7.00 mmol)의 소듐 아지드의 용액을 72시간 동안 질소하에서 교반하였다. 혼합물을 50 mL의 EtOAc 및 3회부분의 25 mL의 H2O간에 분배하였다. EtOAc층을 건조하고(MgS04), 여과하고, 농축하였다. 실리카겔 크로마토그래피(15/85 EtOAc/헥산)로 정제하여 무색오일로서 219 mg (97%)의 화합물 99를 얻었다:1H NMR CDCl3(δ) 1.41 (m, 4H), 1.49 (s, 9H), 1.63 (m, 4H), 3.28 (t, 2H), 3.83 (t. 2H), 7.22 (s, 1H);13C NMR CDCl3(δ) 25.7, 26.7, 28.0, 28.4, 28.9, 51.5, 76.7, 81.7, 157.1.
화합물 96의 합성: 드라이 아이스 콘덴서가 장착된 반응 용기에서, 액체 암모니아를 화합물 22a (6.6-8.8 mmol)에 가하고, 생성된 혼합물을 5분 동안 교반한다. per-6-데옥시-6-요오도-시클로덱스트린 (1 mmol, (Ashton et al.,J. Org. Chem. 1996,61,903; Gadelle and Defaye,Angew. Chem. Int. Ed. Engl.1991, 30, 78.)을 가한다. 6시간 동안 교반한 후, 암모니아를 증발시켜, 잔사를 진공중에서 더 건조시키고 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 96을 얻는다.
1-아미노-6-(N-tert-부틸옥시카르보닐)아미노옥시헥산, 화합물 100:
4 mL의 THF 및 1 mL의 H20중의 180 mg (0.697 mmol)의 화합물 99 및 219 mg (0.836 mmol)의 트리페닐포스핀의 용액을 18시간 동안 실온에서 교반하였다. TLC로 입증된 바와 같이 여전히 출발 물질이 존재하여, 다른 55 mg (0.209 mmol)의 트리페닐포스핀을 가하고, 혼합물을 7시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 실리카겔 크로마토그래피(단계 기울기; 2/5/93 내지 2/10/88 진한 NH40H/H20/CH3CN)로 정제하여 무색오일로서 151 mg의 화합물 100을 얻었다::1H NMR CDC13(δ) 1.35 (m, 4H), 1.49 (s, 9H), 1.61 (m, 4H), 2.69 (t, 2H), 3.82 (t, 2H);13C NMR CDCl3(δ) 25.8, 26.7, 28.1, 28.3, 33.2, 41.9, 76.7, 81.3, 157.1.
화합물 101의 합성: 1 mL의 CH2Cl2중의 84 mg (81.8 μmol)의 화합물 14의 용액에 0.5 mL의 CH2Cl2중의 114 mg (491 μmol)의 화합물 100의 용액, 이어서 86 μL(63 mg, 491 μmol)의 디이소프로필에틸아민을 가하였다. 혼합물을 18시간 동안 실온에서 교반하고, 38 μL (39 mg, 654 μmol)의 아세트산으로 퀀칭하고, 오일로 농축하였다. 실리카겔 크로마토그래피(단계 기울기; 2/98 내지 7.5/92.5 MeOH/CH2Cl2)로 정제하여 오일로서 115 mg (100%)의 101을 얻었다:1H NMR CDCl3(δ) 1.38 (m, 16H), 1.47 (s, 36H), 1.59 (m, 16H), 3.13 (m, 8H), 3.50 (m, 8H), 3.69 (t, 4H), 3.82 (t, 8H), 4.18 (m, 4H), 4.22 (m, 8H), 5.42 (m, 2H), 5.56 (m, 2H); C62H116NaN10025에 대한 질량 스펙트럼 (ESI) (M+Na) 계산치: 1423. 실측치 1423.
화합물 91: 화합물 16의 제조에 대하여 설명한 것과 본질적으로 동일한 방법으로 Boc-보호기를 화합물 101로부터 제거하여 화합물 91을 얻었다. 반응식이 도 25에 제시된다.
실시예 18 (화합물 92의 합성, 도 22)
화합물 92를 도 26에 설명한 바와 같이 제조하였다. 테트라 N-Boc-아미노 플랫폼 39b'를 PCT US99/29338에 기재된 바와 같이 제조하였다. 본질적으로, 디에틸렌글리콜을para-니트로페닐클로로포르메이트와 반응시켜para-니트로페닐카르보네이트 화합물을 수득하여, 그 다음 디에탄올아민과 반응시켜 테트라히드록시 화합물을 형성하고, 그다음para-니트로페닐클로로포르메이트와 반응시켜 테트라para-니트로페닐카르보네이트 화합물을 수득하고, 그다음tert-부틸 N-(2-아미노에틸)카르바메이트와 반응시켜 39'를 수득한다. 화합물39'를 트리플루오로아세트산으로 탈보호하여 테트라-아민 (화합물 102)을 얻는다.
화합물 103: 0.5 mL의 중탄산나트륨 포화용액중의 20 mg (0.023 mmol)의 화합물 102 용액에 0.5 mL의 디옥산중의 60 mg (0.140 mmol)의 화합물 17 용액을 가하였다. 혼합물을 5시간 동안 실온에서 교반하고, 0℃로 냉각시키고, 1 N HCl를 적가하여 산성화한다. 혼합물을 7 mL의 H20 및 4회분의 10 mL의 CH2C12간에 분배하였다. 합한 CH2C12층을 중탄산나트륨 포화용액으로 세척하고, 건조하고(MgS04), 여과하고, 농축하였다. 준비 HPLC (C18, 기울기, 30% B 내지 50% B 40 분 이상, A = 0.1 % TFA/H20, B = 0.1 % TFA/CH3CN)로 정제하여 점성의 오일로서 12 mg (27%)의103을 얻었다:1H NMR CDCl3(δ) 1.48 (s, 36H), 3.26 (m, 16H), 3.51 (m, 8H), 3.68 (m, 44H), 4.02 (m, 8H), 4.21 (m, 12H), 6.12 (brd m, 8H), 8.09 (brd s, 4H); C79H136NaNl4O4l에 대한 질량 스펙트럼 (ESI) (M+Na) 계산치 : 1900. 실측치 1900.
화합물 92: 화합물 16의 합성에 대하여 설명한 것과 본질적으로 동일한 방법으로 Boc-보호기를 화합물 103으로부터 제거하여 92를 얻었다. 반응식이 도 26에 제시된다.
실시예 19 (8가의 플랫폼 113의 합성)
0℃에서 8 mL의 MeOH중의 화합물21b의 0.50 g (1.71 mmol)의 질소 살포된 용액에 MeOH (2.57 mmol)중의 NaOMe 25% 용액의 537 μL를 가하고, 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하고, 5.14 mL (5.14 mmol)의 질소 살포된 1 M KHC03용액을 가하고, 혼합물을 질소하에서 15분 동안 교반하였다. 혼합물에 10 mL의 2/1 MeOH/물중의 화합물111(Xeno 특허에 설명된 바와 같이 제조)의 283 mg (0.14 mmol)의 용액을 적가하였다. 반응혼합물을 농축하여 MeOH을 제거하고, 농축물을 아세토니트릴에 다시 용해시켰다. 그 다음, 반응혼합물을 실온에서 질소하에 3일 동안 교반하고, 농축하고, 40 mL의 EtOAc 및 20 mL의 물간에 분배하였다. EtOAc층을 농축하고, 생성물을 Amberchromo(70/30 아세토니트릴/H20)로정제하여 백색 분말로서 100 mg의 화합물 112을 얻었다:1H NMR (CD30D): δ 1.36 (m, 48H), 1.42 (s, 72H), 1.57 (m, 64H), 2. 14 (m, 8H), 2.55 (m, 16H), 3.11 (m, 36H), 3.24 (m, 8H), 3. 30 (brd s, 16H), 3.71 (t, 16H), 4.2 (m, 4H);13C NMR (CD30D): δ 24. 31, 25.58, 26.73, 27.77, 28.82, 29.16, 29.73, 29.78, 30.17, 30.24, 30.35, 33.21, 33.69, 36.35, 36.53, 37.17, 38.87, 39.09, 40.43, 40.53, 54.95, 66.07, 70.50, 71.65, 77.44, 82.00, 158.25, 159.25, 159.20, 172.63, 172.78, 173.97, 176.28; C168H312Na2N26O46S8에 대한 질량 스펙트럼 (ESI) (M+2Na)/2계산치 :1866. 실측치1866.
화합물 113: 화합물 16의 제조에 대하여 설명한 것과 본질적으로 동일한 방법으로 Boc-보호기를 화합물 112로부터 제거하여 화합물 113을 얻었다. 반응식이 도 257에 제시된다.
실시예 20 (화합물 125의 합성)
화합물 115: 80 mL의 무수 DMF중의 8.00 g (13.4 mmol)의 화합물 114 (미국특허번호 5,552,391에 기재된 바와 같이 제조)에 4.00 g(16.1 mmol)의 N- (벤질옥시카르보닐옥시)숙신이미드(Aldrich Chemical Co.)를 가하였다. 혼합물을 2시간 동안 질소하에서 실온에서 교반하면서, 600 mL의 얼음물에 붓고, 4회분의 100 mL의 CH2Cl2로 추출하였다. 합한 CH2Cl2층을 100 mL의 H20로 세척하고, 건조하고(Na2SO4), 여과하고, 농축하였다. 헵탄으로부터 농축하여 조생성물을 고체화시켰다. EtOAc로부터 재결정하여 백색고체로서 화합물 115를 얻었다:1H NMR CDCl3δ 1.26 (m, 4H), 1.43-1.62 (m, 8H), 2.05 (m, 4H), 3.16 (q, 4H), 3.40 (brd s, 8H), 4.98 (s, 2H) 중첩 5.08 (s, 4H) 및 5.11 (s, 2H), 6.31 (s, 1H), 6.44 (s, 1H), 7.26-7.38 (m, 15H).
트리아민 (화합물 116)의 합성: 18 mL의 시클로헥산 및 36 mL의 무수 에탄올중의 화합물 115의 9.0 g (12.3 mmol)의 용액을 그것을 통해 N2가스를 기포발생시킴으로써 탈산소화시켰다. 용액에 1.80 g의 10% Pd/C를 가하고, 혼합물을 3시간 동안 환류하며 가열하였다. 냉각시, 혼합물을 MeOH을 사용하는 셀라이트(Celte)를 통해서 여과하여 린스하였다. 여액을 농축하고, 농축물을 CH2Cl2로 부터 농축하여 백색고체로서 4.20 g (87%)의 화합물을 얻었다.
화합물 117의 합성: 10 mL의 무수 아세토니트릴중의 화합물 105의 5.39 g(21.8 mmol)의 용액에 3.02 g (23.9 mmol)의 CDI(카로보닐디이미다졸)을 가하고, 혼합물을 1.5 시간 동안 질소 분위기하에 교반하였다. 생성된 용액을 15 mL의 무수 DMF중의 화합물 116의 4. 20 g (10.7 mmol)의 용액에 가하고, 혼합물을 2시간 동안교반하고, 500 mL의 얼음물에 부었다. 생성된 혼합물을 4회분의 100 mL의 CH2Cl2로 추출하였다. 합한 CH2Cl2층을 100 mL의 H20로 세척하고, 건조하고(Na2SO4), 여과하고, 농축하였다. 생성된 반고형 잔사를 10% 이소프로필 알콜/EtOAc로부터 결정화하여 백색고체로서 4.0 g (44%)의 117을 얻었다:1H NMR CDCl3(δ) 1.35 (m, 4H), 1.42 (m, 4H), 1.49 (s, 18H), 1.63 (m, 16H), 2.01 (brd s, 1H), 2.20 (t, 4H), 3. 23 (m, 4H), 3.34 (m, 4H), 3.85 (t, 4H), 6.34 (t, 2H), 6.70 (t, 2H), 7.98 (brd s, 1H).
화합물 119: 15 mL의 디옥산중의 3. 65 g (14.11 mmol)의의 9-플루오로메틸클로로포르메이트(Fmoc-Cl)의 용액에 15 mL의 디옥산중의 화합물 118 (Bondunov et al., J. Org. Chem. 1995, Vol. 60, pp. 6097-6102)의 3.00 g (15.5 mmol)의 용액, 이어서 30 mL의 H20중의 1.95 g (14.11 mmol)의 탄산칼륨의 용액을 가하였다. 혼합물을 18시간 동안 실온에서 교반하고, 농축하였다. 생성된 오일을 50 mL의 1 N NaOH 용액 및 3회분의 150 mL의 CH2Cl2간에 분배하였다. 합한 CH2Cl2층을 건조하고(MgS04), 여과하고, 농축하여 황색오일을 얻었다. 실리카겔 크로마토그래피(단계 기울기; 90/10 EtOAc/AcOH 내지 90/10/1 EtOAc/AcOH/MeOH)로 정제하여 점성의 오일로서 3.85 g (66%)의 119를 얻었다:1H NMR CDCl3(δ) 3.26 (m, 4H), 3.39 (m, 2H), 3.49 (m, 2H), 3.59 (m, 2H), 3.65 (m, 4H), 3.69 (m,2H), 4.25 (t, 1H), 4.60 (d, 2H), 7.35 (t, 2H), 7.41 (t, 2H), 7.59 (d, 2H), 7.78 (d, 2H).
화합물 120: 0℃에서 50 mL의 CH2Cl2중의 3.77 g (9.08 mmol)의 화합물 119의 용액 및 7.32 g (36.3 mmol)의 4-니트로페닐클로로포르메이트에 0℃에서 5.88 mL (5.75 g, 72.6 mmol)의 피리딘을 가하였다. 혼합물을 질소 분위기하에 실온에서 72시간 동안 교반하고, 혼합물을 200 mL의 CH2Cl2및 4회분의 100 ml의 10% 중탄산 수용액간에 분배하였다. CH2Cl2층을 100 mL의 H20, 100 mL의 1 N HCl, 그 다음 100 mL의 염수로 연속하여 세척하였다. 용액을 건조하고(MgS04), 여과하고 농축하여 오랜지색 오일을 수득하였다. 실리카겔 크로마토그래피(15/50/35/1 EtOAc/CH2Cl2/헥산 /AcOH)로 정제하여 황색고무로서 2.67 g (39%)의 화합물 120을 얻었다:1H NMR CDCl3δ 3.32 (m, 4H), 3.52 (m, 2H). 3.60 (m, 4H), 3.74 (m, 2H), 4.23 (t, 1H), 4.38 (m, 2H), 4.41 (m, 2H), 4.57 (d, 2H), 7.37 (m, 8H), 7.59 (d, 2H), 7.78 (d, 2H), 8.26 (중첩 d, 4H); C37H36N3O14에 대한 질량 스펙트럼 (ESI) (M+H) 계산치 : 746. 실측치 746.
화합물 121: 5 mL의 CH2Cl2중의 482 mg (0.612 mmol)의 화합물 117의 용액에 182 mg (0. 245 mmol)의 화합물 120, 이어서 171 μL (124 mg, 1.22 mmol)의 Et3N 및 26 mg (. 490 mmol)의 HOBt를 가하였다. TLC (1/9 MeOH/CH2Cl2)에 의하여 판단된바와 같이, 반응이 완결될 때까지 혼합물을 실온에서 교반하였다. 혼합물을 300 mL의 CH2Cl2및 3회분의 50 mL의 1 N HCl간에 분배하였다. CH2Cl2층을 염수로 세척하고, 건조하고(MgS04), 여과하고, 농축하여 황색오일을 얻었다. 실리카겔 크로마토그래피(다단계 기울기 t; 5/1/94 내지 10/1/89 내지 15/1/84 내지 20/1/79 MeOH/HOAc/CH2Cl2)로 정제하여 점착성의 백색고체로서 317 mg (63%)의 화합물 121을 얻었다:1H NMR (CD3OD) δ 1. 34 (m, 16H), 1.43 (m, 8H), 1.48 (s, 36H), 1.64 (m, 24H), 2.20 (m, 16H), 3.19 (m, 12H), 3.25-3.52 (m, 18H), 3.55 (m, 2H), 3.79 (t, 8H), 4.16 (m, 4H), 4.28 (t, 1H), 4.59 (d, 2H), 7.33 (t, 2H), 7.41 (t, 2H), 7.60 (d, 2H), 7.84 (d, 2H);13C NMR (CD30D) δ 14.6, 23.8, 26.7, 26.7, 26.9, 27.7, 28.8, 28.9, 30.3, 37.1, 38.8, 39.8, 39.1, 40.3, 65.8, 66.0, 68.1, 70.2, 70.3, 77.3, 82.0, 121.2, 126,.0, 128.4, 129.0, 142.9, 145.6, 157.9, 158.2, 159.2, 176.1, 176.3; C101H171Na2N15028에 대한 질량 스펙트럼 (ESI) (M+2Na)/2 계산치 : 1044. 실측치 1044.
화합물 122: 2.4 mL의 DMF중의 163 mg (79.8 mmol)의 화합물 121의 용액에 600 μL의 디에틸아민을 가하였다. 혼합물을 3시간 동안 교반하고 농축하였다. 실리카겔 크로마토그래피(다단계 기울기; 10/1/89 내지 15/1/84 MeOH/진한 NH40H/CH2Cl2)로 정제하여 매끄러운 고무로서 127 mg (81%)의 화합물 122을 얻었다:1H NMR (CD30D) δ 1. 38 (m, 16H), 1.48 (m, 44H), 1.65 (m, 24H), 2.20 (t, 16H), 2.83 (t, 4H), 3.17 (t, 8H), 3.38 (m, 16H), 3.63 (t, 4H), 3.69 (t, 4H), 3.78 (t, 4H), 4.21 (m, 4H);13C NMR (CD30D) δ 26.7, 27.0, 27.8, 28.8, 28.9, 30.3, 37.1, 38.8, 39.1, 40.3, 49.9, 66.0, 70.4, 70.9, 77.3, 82.0 , 158.2, 159.2, 176.1, 176.3; 질량 스펙트럼 (ESI) (M+H) 계산치 C86H162N15O26: 1821. 실측치 1821.
화합물 124b: 5 mL의 DMF중의 20 mg (11.0 μmol)의 화합물 122의 용액에 분자량 11,690 g/mol의 103 mg (8.8 μmol)의 메톡시폴리에틸렌글리콜 벤조트리아놀카르보네이트(mPEGl2K-BTC, 화합물 123b, Shearwater Polymers), 이어서 5 μL(3.6 mg, 35.9 μmol)의 Et3N을 가하였다. 혼합물을 실온에서 18시간 도안 교반하고, 농축하였다. 잔사를 실리카겔 크로마토그래피(다단계 기울기; 5/95 내지 15/85 내지 20/80 MeOH/CH2Cl2)로 정제하여 윤기잃은 백색고체로서 109 mg의 화합물 124b를 얻었다:1H NMR (CDCl3)δ 1.37 (m, 16H), 1.49 (m, 44H), 1.65 (m, 24H), 2. 20 (t, 16H), 3.20 (q, 8H), 3.36 (m, 16H), 3.61 (m, 4H), 3.68 (m, 약 1056H), 3.84 (t, 8H), 3.91 (m, 4H), 4.23 (m, 4H).
화합물 124a: 화합물 124b의 제조에 대하여 사용된 본질적으로 동일한 방법을 사용하여 이 화합물을 제조하고; 다만, 분자량 5, 215 g/mol의 메톡시폴리에틸렌글리콜 벤조트리아졸카르보네이트(mPEG5K-BTC, 화합물 123a, Shearwater Polymers)을 사용하였다:1H NMR (4: 1 CDCl3/CD30D) δ 1.37 (m, 16H), 1.49 (m, 44H), 1.65 (m, 24H), 2.20 (t, 16H), 3.20 (q, 8H), 3.36 (m, 16H), 3.61 (m, 4H), 3.68 (m, 약 468H), 3.84 (t, 8H), 3.91 (m, 4H), 4.23 (m, 4H).
화합물 124c: 화합물 124b의 제조에 대하여 사용된 본질적으로 동일한 방법을 사용하여 이 화합물을 제조하고; 다만, 분자량 22,334 g/mol의 메톡시폴리에폴리에리콜 벤조트리아졸카르보네이트(mPEG5K-BTC, 화합물 123c, Shearwater Polymers)을 사용하였다:1H NMR (5: 1 CDCl3/CD30D) δ 1.37 (m, 16H), 1.49 (m, 44H), 1.65 (m, 24H), 2.20 (t, 16H), 3.20 (q, 8H), 3.36 (m, 16H), 3.61 (m, 4H), 3.68 (m, 약 2024H), 3.84 (t, 8H), 3.91 (m, 4H), 4.23 (m, 4H).
화합물 125b: 화합물 16의 제조에 대하여 설명한 것과 본질적으로 유사한 방법으로 Boc-보호기를 화합물 124a-c로부터 제거하여 화합물 125a-c을 얻었다.
반응식이 도 28에 제시된다.
실시예 21 (화합물 129의 합성)
화합물 126:5 mL의 무수 DMF중의 14 mg (18.6 μmol)의 화합물 120 및 29 mg (186. 3 μmol)의 HOBT의 용액에 56 μL (38 mg, 373 μmol)의 Et3N을 가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 1 mL의 DMF중의 85 mg (46.6 μmol)의 화합물 122의 용액을 가하였다. 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하고, 150 mL의 CH2Cl2및 50 mL의 1 N HCl간에 분배하였다. CH2Cl2층을 염수로 세척하고, 건조하고(MgS04), 여과하고, 농축하였다. 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 윤기있는 백색고체로서 34 mg (44%)의 화합물 126을 얻었다:1H NMR (CD30D) δ 1.37 (m, 32H), 1.49 (m 1.48,88H에서 중첩 s) 1.62 (m, 48H), 2.20 (t, 32H), 3.18 (t, 16H), 3. 36 (m, 32H), 3.50 (m, 12H), 3.64 (m, 24H), 3.79 (t, 16H) 4.17 (m, 12H), 4.29 (t, 1H), 4.60 (d, 2H), 7.37 (t, 2H), 7.43 (t, 2H), 7.65 (d, 2H), 7.84 (d, 2H); C197H347Na3N31060에 대한 질량 스펙트럼 (ESI) (M+3Na)/3 계산치: 1393. 실측치 1393.
화합물 127: 1.6 mL의 DMF중의 34 mg (8.27 μmol)의 화합물 126의 용액에 400 μL의 디에틸아민을 가하였다. 혼합물 실온에서 4 시간 동안 교반하고 농축하였다. 농축물을 실리카겔 크로마토그래피(1/10/89 진한 NH40H/MeOH/CH2Cl2)로 정제하여 13 mg (40%)의 화합물 127을 얻었다:1H NMR (CD30D) 8 1.35 (m, 32H), 1.49 (m 1.48,88H에서 중첩 s ), 1.63 (m, 48H), 2.19 (t, 32H), 3.08 (brd t, 4H) 3.17 (t, 16H), 3.38 (m, 36H), 3.52 (m, 8H), 3.63 (t, 8H), 3.70 (m, 12H), 3.78 (t, 16H), 4.21 (m, 12H); Cl82H337Na3N31058에 대한 질량 스펙트럼 (ESI) (M+3Na)/3 계산치: 1319. 실측치: 1319.
화합물 128: 5 mL의 피리딘중의 13 mg (3.34 μmol)의 화합물 127 용액에 분자량이 22,334 g/mol인 60 mg (2.68 μmol)의 메톡시폴리에틸렌글리콜 벤조트리아졸릴카르보네이트(mPEG20K-BTC, Shearwater Polymers), 이어서 5 μL (3.6 mg, 35.9 μLmol)의 Et3N을 가하였다. 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하고, 농축하였다. 잔사를 실리카겔 크로마토그래피(다단계 기울기; 10/90 내지 15/85 내지 20/80 MeOH/CH2Cl2)로 정제하여 윤기있는 고체로서 45 mg의 화합물 128을 얻었다:1H NMR (CDCl3) δ 1.30 (m, 32H), 1.50 (m 1.48,88H에서 중첩 s), 1.67 (m, 48H), 2.24 (t, 32H), 3.23 (m, 16H), 3.41 (m, 32H), 3.65 (m, 약 2024H), 3.70 (t, 24H), 3.89 (m, 16H), 4.21 (m, 12H).
화합물 129: 도 29에 나타난 바와 같이, 화합물 16에 대하여 설명한 것과 본질적으로 유사한 방법으로 Boc-보호기를 화합물 128로부터 제거하였다.
실시예 22 (화합물 132의 합성)
화합물 131: 5 mL의 피리딘중의 22 mg (27.3 μmol)의 화합물 117 용액에 분자량이 21,529 g/mol인 236 mg (10.9 μmol)의 폴리에틸렌글리콜 비스-벤조트리아졸릴카르보네이트(PEG20K-비스-BTC, 화합물 130, Shearwater Polymers), 이어서 8 μL (5.8 mg, 57.4 μmol)의 Et3N을 가하였다. 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하고, 농축하였다. 잔사를 실리카겔 크로마토그래피(다단계 기울기; 5/95 내지 10/90 내지 15/85 내지 20/80 MeOH/CH2Cl2))로 정제하여 백색고체로서 242 mg (96%)의 화합물131을 얻었다:1H NMR (CDCl3) δ 1. 35 (m, 16H), 1.48 (m, 44H), 1.61 (m, 24H), 2.20 (m, 16H), 3.22 (m, 8H), 3.52-3.96 (m, 약 2000H), 4.23 (m, 4H).
화합물 132: 화합물 16의 제조에 대하여 설명한 것과 본질적으로 유사한 방법으로 Boc-보호기를 화합물 131c로부터 제거하여 화합물 132를 얻었다.
합성 반응식이 도 30에 제시된다.
실시예 23 (화합물 136의 합성)
화합물 134:5 mL의 피리딘중의 3.87 mg (4.85 μmol)의 펜타에리트롤 테트라키스-(4-니트로페닐카르보네이트 에스테르) (para-니트로페닐클로로포르메이트와 펜타에리트롤의 반응에 의해 제조되어 테트라para-니트로페닐카르보네이트 화합물을 수득함) 용액에 분자량이 5094 g/mol인 124 mg (24.2 μmol)의 mono-Boc-보호된 디아미노폴리에틸렌 글리콜 (화합물 133, BocNH-PEG(5K)-NH2), 및 5 μL (3.63 mg, 35.9 μmol)의 Et3N을 가하였다. 혼합물을 18시간 동안 교반하고, 농축하였다. 잔사를 실리카겔 크로마토그래피(단계 기울기; 5/95 내지 15/85 MeOH/CH2Cl2)로 정제하여 백색고체로서 77 mg (77%)의 화합물134를 얻었다:1H NMR (CDCl3) δ 1.48 (s, 36H), 3.32 (m, 16H), 3.52-3.96 (m, 약 1818H), 4.10 (m, 8H).
화합물 135: 화합물134(77 mg, 3.73 μmol)를 5 mL의 트리플루오로아세트산에 용해시키고, 혼합물을 3시간 동안 정치시켰다. TFA를 N2의 기류하에 제거하고,잔사를 5 mL의 CH2Cl2에 용해시켰다. 생성된 용액에 5 mL의 CH2Cl2중의 7.72 mg (22.4 μmol)의 화합물 106의 용액, 이어서 35 μL (25.4 mg, 251 μmol)의 Et3N를 가하였다. (주의: 혼합물의 pH를 확인해야 하고 따라서 그것이 염기성임을 확실히 하도록 Et3N로 조절해야 한다.) 혼합물을 질소하에 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 50 mL의 CH2Cl2및 3회분의 25 mL의 1 N HCl간에 분배하였다. CH2Cl2층을 염수로 세척하고, 건조하고(MgS04), 여과하고, 농축하였다. 실리카겔 크로마토그래피(단계 기울기; 5/95 내지 10/90 MeOH/CH2Cl2)로 정제하여 윤기있는 고체로서 42 mg(53%)의 화합물 135를 얻었다:1H NMR (CDCl3) δ 1.40 (m, 8H), 1.48 (s, 36H), 1.66 (m, 16H), 2.18 (t, 8H), 3.32 (m, 16H), 3.38-3.89 (m, 약 1818H), 4.10 (m, 8H), 4.97 (t, 4H), 7.47 (s, 4H).
화합물 136: 도 31에 나타난 바와 같이, 화합물 16의 제조에 대하여 설명한 것과 본질적으로 유사한 방법으로 Boc-보호기를 화합물 135로부터 제거하여 화합물 136을 얻었다.
실시예 24 (화합물 143의 합성)
화합물 137: 질소 분위기하에 5 mL의 CH2C12중의 200 mg (1.11 mmol)의 에틸 3,5-디아미노벤조에이트의 0℃ 용액에 928 μL (674 mg, 6.66 mmol)의 Et3N을 가하였다. 혼합물에 5 mL의 CH2Cl2중의 510 μL (710 mg, 3.33 mmol)의 6-브로모헥사노일 클로라이드를 적가하였다. 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하고, 50 mL의 1 N HCl 및 2회분의 50 mL의 CH2Cl2간에 분배하였다. CH2Cl2층을 중탄산나트륨 포화용액으로 세척하고, 건조하고(MgS04), 여과하고, 농축하였다. 생성물을 실리카겔 크로마토그래피(6/4 헥산/EtOAc)로 정제하여 오일로서 554 mg (93%)의 화합물 137을 얻었다:1H NMR (CDCl3): δ 1.39 (t, 3H), 1.52 (m, 4H), 1.75 (m, 4H), 1.90 (m, 4H), 2.40 (t, 4H), 3.42 (t, 4H), 4.36 (q, 2H), 7.60 (s, 2H), 7.88 (s, 2H), 8.17 (s, 1H).
화합물 138: DBU (612 μL, 623 mg, 4.01 mmol)를 547 mg (1.02 mmol)의 화합물 137 및 272 mg(2.05 mmol)의 N-(tert-부틸옥시카르보닐)히드록실아민 (Aldrich Chemical Co.)의 용액에 가하였다. 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하고, 50 mL의 1 N HCl 및 3회분의 50 mL의 CH2Cl2간에 분배하였다. 합한 CH2Cl2층을 건조하고(MgS04), 여과하고, 농축하였다. 생성물을 실리카겔 크로마토그래피 (1/1 헥산/EtOAc)로 정제하여 백색고체로서 216 mg (33%)의 화합물 138을 얻었다: mp 55-60 C ;1H NMR (CDCl3) : δ 1.38 (t, 3H), 1.48 (s, 18H; buried m, 4H), 1.60 (m, 4H), 1.73 (m, 4H), 2.40 (m, 4H), 3.86 (t, 4H), 4.36 (q, 2H), 7.41 (s, 2H), 7.90 (s, 2H), 8.06 (s, 2H), 8.11 (s, 1H); C31H50NaN4O10에 대한 질량 스펙트럼 (ESI) (M+Na) 계산치: 661. 실측치 661.
화합물 139: 1/1 아세톤/EtOH중의 205 mg (0.32 mmol)의 화합물 138 용액에 256 μL (2.56 mmol)의 10 N NaOH을 가하고, 혼합물을 4시간 동안 60℃로 가열하였다. 냉각시, 혼합물을 50 mL의 1 N HCl 및 4회분의 50 mL의 4/1 CH2Cl2/MeOH간에 분배하였다. 합한 유기층을 건조하고(MgSO4), 여과하고, 농축하였다. 생성물을 실리카겔 크로마토그래피(3/97/1 MeOH/CH2Cl2/HOAc)로 정제하여 점성의 오일로서 184 mg (94%)의 화합물 139를 얻었다:1H NMR (CDCl3) : δ 1.38 (m, 4H), 1.42 (s, 18H), 1.60 (m, 4H), 1.70 (m, 4H), 2.38 (m, 4H), 3.80 (t, 4H), 7.77 (s, 2H), 8.00 (s, 2H), 8.11 (s, 1H), 8.91 (s, 2H); C29H46NaN4010에 대한 질량 스펙트럼 (ESI) (M+Na) 계산치 : 633. 실측치 633.
화합물 140: 2.0 mL의 건조 THF중의 64 mg (0.268 mmol)의 화합물 139의 0℃ 용액에 31 mg (0.268 mmol)의 N-히드록시숙신이미드, 이어서 83 mg (0.403 mmol)의 DCC를 가하였다. 혼합물을 실온으로 하고, 질소 분위기하에 18시간 동안 교반하고, 200 μL의 HOAc를 가하였다. 혼합물을 추가의 시간 동안 교반하고, 약 5 mL의 EtOAc로 희석하고, 1시간 동안 정치시켰다. 생성된 침전물을 여과하여 제거하고, 여액을 농축하였다. 실리카겔 크로마토그래피(3/97/MeOH/CH2Cl2)로 정제하여 백색고체로서 129 mg (68%)의 화합물 140을 얻었다:1H NMR (CDCl3): δ 1.40 (m, 4H), 1.43 (s, 18H), 1.65 (m, 4H), 1.80 (m, 4H), 2. 34 (m, 4H), 2.93 (s, 4H), 3.85(t, 4H), 7.68 (s, 2H), 7.87 (s, 2H), 8.36 (s, 1H), 8.61 (s, 2H).
화합물 142: 0.5 mL의 CH2Cl2중의 60 mg (0.85 mmol)의 화합물 140의 용액에 14 μL(13.3 mg, 0.168 mmol)의 피리딘을 가하였다. 혼합물을 0℃로 냉각하고, 0.5 mL의 CH2C12중의 71 mg (0.021 mmol)의 디아미노-PEG(화합물 141)의 용액을 가하였다. 혼합물을 질소 분위기하에 실온에서 18시간 동안 교반하고, 10 mL의 1 N HCl 및 3회분의 10 mL의 CH2Cl2간에 분배하였다. 합한 CH2Cl2층을 건조하고(MgS04), 여과하고, 농축하였다. 실리카겔 크로마토그래피(단계 기울기 5/95 MeOH/CH2Cl2내지 10/90 MeOH/CH2Cl2)로 정제하여 점성의 오일로서 66 mg (69%)의 화합물 142를 얻었다:1H NMR (CDCl3): δ 1.45 (s, 36H), 1.60-1.80 (m, 24H), 2.39 (t, 8H), 3. 39 (m, 8H), 3.50-3.80 (brd s, 약 318H), 3.87 (t, 8H), 4.22 (t, 4H), 7.50 (brd s, 2H), 7.63 (s, 4H), 7.77 (s, 2H), 8.08 (s, 2H), 8.60 (s, 2H); C207H389Nl2O93에 대한 질량 스펙트럼 (MALDI) (M+H) 계산치 : 4535. 실측치 분포 중앙 약 4324.
화합물 143: 도 32에 나타난 바와 같이, 화합물 16의 제조에 대하여 설명한 것과 본질적으로 유사한 방법으로 Boc-보호기를 화합물 142로부터 제거하여 화합물 143을 얻었다.
실시예 25-콘쥬게이트의 제조 방법
콘쥬게이트 200, 201, 202, 203, 204, 및 205 (도 33)를 다음과 같이 제조하였다.
화합물 200: 10 mL의 헬륨 살포된 0.1 M, pH 4.6 아세트산나트륨 완충액중의 68.8 mg (9.74 μLmol, 6 당량)의 TA/D1의 용액에 6.15 mL의 1/1 아세토니트릴/0.1 M, pH 8.0 트리스 아세테이트 완충액중의 36.8 mg (1.62 μmol)의 화합물 125c의 용액을 가하였다. 실온에서 18시간 동안 교반하는 동안, 혼합물을 질소 분위기하에 유지시키도록 주의를 기울였다. 반응이 완결될 때, 그것을 PolyLC Inc.사 제의 PolyCat A WCX 컬럼 (기울기 10% B 내지 25% B, A = 1/9 아세토니트릴/H20중의 10 mM 인산나트륨 pH 7)을 사용하는 양이온 교환 크로마토그래피로 정제하여 즉시 57 mg (40%)의 화합물 200을 얻었다.
화합물 201: 화합물 200과 본질적으로 유사한 방법으로 화합물 201을 제조하였다. 따라서, 헬륨 살포된 0.1 M, pH 4.6 아세트산나트륨 완충액중의 6 당량의 TA/D1의 약 1 mM 용액에 1/1 아세토니트릴/0.1 M, pH 8.0 트리스 아세테이트 완충액중의 0.25 내지 10 mM 만큼의 1 당량의 화합물 125a를 가하였다. 실온에서 18시간 동안 교반하는 동안, 혼합물을 질소 분위기하에 유지시키도록 주의를 기울였다. 반응이 완결될 때, 그것을 즉시 양이온 교환 크로마토그래피로 정제하여 화합물 201을 얻었다.
화합물 202:200과 본질적으로 유사한 방법으로 화합물 202을 제조하였다. 따라서, 헬륨 살포된 0.1 M, pH 4.6 아세트산나트륨 완충액중의 6 당량의 TA/D l의 약 1 mM 용액에 1/1 아세토니트릴/0.1 M, pH 8.0 트리스 아세테이트 완충액중의0.25 내지 10 mM 용액 만큼의 1 당량의 화합물 132를 가하였다. 실온에서 18시간 동안 교반하는 동안, 혼합물을 질소 분위기하에 유지시키도록 주의를 기울였다. 반응이 완결될 때, 그것을 바로 양이온 교환 크로마토그래피로 정제하여 화합물 202를 얻었다.
화합물 203: 200과 본질적으로 유사한 방법으로 화합물 203을 제조하였다. 따라서, 헬륨 살포된 0.1 M, pH 4.6 아세트산나트륨 완충액중의 6 당량의 TA/D1의 약 1 mM 용액에 1/1 아세토니트릴/0.1 M, pH 8.0 트리스 아세테이트 완충액중의 0.25 내지 10 mM 용액 만큼의 1 당량의 화합물 136을 가하였다. 실온에서 18시간 동안 교반하는 동안, 혼합물을 질소 분위기하에 유지시키도록 주의를 기울였다. 반응이 완결될 때, 그것을 바로 양이온 교환 크로마토그래피로 정제하여 화합물 203을 얻었다.
화합물 204: 200과 본질적으로 유사한 방법으로 화합물 204를 제조하였다. 따라서, 헬륨 살포된 0.1 M, pH 4.6 아세트산나트륨 완충액중의 6 당량의 TA/D1의 약 1 mM 용액에 1/1 아세토니트릴/0.1 M, pH 8.0 트리스 아세테이트 완충액중의 0.25 내지 10 mM 용액 만큼의 1 당량의 화합물 143을 가하였다. 실온에서 18시간 동안 교반하는 동안, 혼합물을 질소 분위기하에 유지시키도록 주의를 기울였다. 반응이 완결될 때, 그것을 바로 양이온 교환 크로마토그래피로 정제하여 화합물 204를 얻었다.
화합물 205: 200과 본질적으로 유사한 방법으로 화합물 205를 제조하였다. 따라서, 헬륨 살포된 0.1 M, pH 4.6 아세트산나트륨 완충액중의 6 당량의 TA/D1의약 1 mM 용액에 1/1 아세토니트릴/0.1 M, pH 8.0 트리스 아세테이트 완충액중의 0.25 내지 10 mM 용액 만큼의 1 당량의 화합물 125b를 가하였다. 실온에서 18시간 동안 교반하는 동안, 혼합물을 질소 분위기하에 유지시키도록 주의를 기울였다. 반응이 완결될 때, 그것을 바로 양이온 교환 크로마토그래피로 정제하여 화합물 205를 얻었다.
실시예 26: 면역관용원 효율 및 혈장 반감기의 평가
도메인 1-키홀 림페트 헤모시아닌 콘쥬게이트 (D1-KLH)를 동물 면역화에 사용하기 위하여 제조하였다. 50개의 시스테인을 가진 재조합 도메인 1을 박큘로바이러스(baculovirus) 발현 벡터 시스템을 사용하는 곤충 세포에서 글루타치온 혼합된 2황화물로서 발현시켰다. 구조는 천연 사람 β2-당단백질 I에 존재하는 제 1의 66 아미노-말단 아미노산, 이어서 C-말단 leu-(his)5발현 태그로 구성된다. C-말단에서의 폴리히스티딘 발현 태그는 니켈 친화성 크로마토그래피에 의한 정제 방법에 대한 기준이었다. Iverson et al. (1998)Proc. Nit'L Acad Sci.95: 15542-15546 참조.
유리 술프히드릴 (D1-SH)을 가진 생성된 도메인 1을 말레이미딜-KLH에 의하여 알킬화하였다. 말레이미딜로 활성화된 KLH(Pierce Chemical Co.; Rockford, IL)을 제조자의 지침에 따라 물에 10 mg/mL로 용해시켰다. 즉시, KLH를 mg D1-SH 당 1.27 mg의 비율로 D1-SH에 가하였다. KLH 및 D1을 함유하는 튜브를 2h x RT로 회전함으로써 혼합하였다. 인큐베이션의 종료시, 내용물을 비콘쥬게이션된 D1의 제거를위한 > 25,000 MW 컷-오프 멤브레인을 사용하여 찬 PBS에 대하여 투석하였다. 투석된 샘플의 분액을 제거하고, 환자로 유도된 친화성 정제된 안티인지질 항체 (aPL)를 가진 ELISA에 의하여 면역반응성 D1의 존재에 대하여 시험하였다.
면역된 래트 모델을 면역관용원 효율(toleragen efficacy) 측정을 위하여 사용하였다. Lewis rats (Harlan Sprague Dawley, Indianapolis, IN)를 백일해 애주번트로 명반내 10 μg의 D1-KLH을 가지고 i. p. 면역화하였다. 준비한 3주 후, 4마리 동물군을 면역관용원 또는 PBS 대조군으로 i. v. 처리하였다. 처리한지 5일 후, 동물을 10 μg D1-KLH로 i. p. 부양하고(boost), 혈청 샘플을 부양한지 7일 후 수집하였다.
ELISA를 래트 혈청중의 안티-도메인 1 항체를 검출하기 위하여 사용하였다. Nunc Maxisorp Immunoplates (Nalge Nunc International, Rochester, NY)를 카르보네이트 완충액 (Sigma, St. Louis, MO) pH 9.6 (4℃에서) 50 μL의 5 μg/ml 재조합 사람 β2-GPI로 밤새 코팅하였다. 다음 단계를 실온에서 실행하였다. 플레이트를 인산염 완충액 함염물(PBS)로 3회 세척한 후, PBS에서 250 μl 2% 탈지 분유 (Carnation, Solon, OH)로 1 시간 차단시켰다. 세척후, 웰을 3중으로 각 혈청 샘플의 PBS에서 50μl 연속 희석제로 1시간 인큐베이션시켰다. 비-면역화된 혈청을 대조군으로서 사용하고, 면역화된 동물로부터의 혈청 풀(pool)을 사용하여 표준곡선을 만들었다. 세척 후, 웰을 PBS/0. 1% BSA에서 1: 2000 희석된, 알칼리성 포스파타제-콘쥬게이트된 염소 안티-래트 IgG (Jackson Immuno Research, West Grove,PA)로 1 시간 인큐베이션시켰다. 웰을 dIH20로 3회 세척하고, PPMP 용액 ( (10 gm 페놀프탈레인 모노-포스페이트(Sigma, St. Louis MO), 97.4 ml 2-아미노-2-메틸-l-프로판올(Sigma), 9.62 ml dIH2O, 21 ml HC1))으로 20분 현상하였다. 색상 현상(Color development)을 50 μl 0.2 M Na2HP04로 중지하고, OD550을 Bio-Tek Instruments PowerWave 340 마이크로플레이트 분광광도계 (Winooski, VT)로 판독하였다. 아주 적은 항체 단위를 표준 풀에 배정하고, 시험 혈청내의 안티-도메인 1 항체 (단위/ml)의 농도를 표준곡선으로부터 구하였다. 콘쥬게이트 200, 201, 202 및 203를 사용하는, 다가의 플랫폼 콘쥬게이트에 의한 안티 도메인 1의 백분율 억제및 203 처리를 PBS-처리된 대조군과 비교함으로써 계산하였다. 결과를 하기의 표 1에 나타낸다.
면역화된 래트의 안티 도메인 1의 백분율 억제
나노몰 약몰/래트화합물 0.17 1.7 17
200 61 82 89
201 34 73 86
202 72 89 96
203 73 93 94
명확도에 의한 PBS 대조군 = 0%억제
또한, 래트 플라즈마에서 화합물의 반감기를 측정하였다. 화합물을 iodine monochloride법을 사용하는125I로써 방사성동위원소표시를 하였다. Contreras et al., 1983, Methods in Enzymology 92: 277-292 참조. 표지된 화합물을 i. v.(정맥내) 주입하고, 플라즈마 샘플을 24시간 동안 주기적으로 수집하였다. 플라즈마중의약물의 양을 Packard Instruments Model Cobra gamma 카운터 (Downers Grove, IL)를 사용하여 검출하였다. 약물의 흡수분배대사 과정 파라미터를 WinNonLin software (Pharsight Corp., Mountain View, CA)를 사용하여 계산하고, 플라즈마 반감기를 수학식 1을 사용하여 측정하였다.
t1/2= 0.693(MRT)
결과를 하기의 표 2에 나타낸다.
래트 플라즈마에서 화합물 반감기(시간)
204 8
200 20.2
201 9.8
205 14
202 1804
203 20

Claims (53)

  1. 옥시알킬렌기를 포함하는 셋 이상의 아미노옥시기를 포함하는 분자.
  2. 제 1 항에 있어서, 옥시에틸렌기를 포함하는 것을 특징으로 하는 분자.
  3. 제 1 항에 있어서, 폴리옥시에틸렌기를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 분자.
  4. 약 1.2 미만의 다분산성을 가지는 제 1 항의 분자를 포함하는 조성물 .
  5. 3 이상의 아미노옥시기를 포함하는 원자가 플랫폼 분자.
  6. 제 5 항에 있어서, 옥시알킬렌기를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 분자.
  7. 제 6 항에 있어서, 옥시에틸렌기를 포함하는 것을 특징으로 하는 분자.
  8. 제 6 항에 있어서, 폴리옥시에틸렌기를 포함하는 것을 특징으로 하는 분자.
  9. 약 1.2 미만의 다분산성을 가지는 제 5 항의 원자가 플랫폼 분자를 포함하는조성물.
  10. 제 9 항에 있어서, 약 1.07 미만의 다분산성을 가지는 원자가 플랫폼 분자를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  11. 화학식 1을 가지는 원자가 플랫폼 분자:
    (화학식 1)
    R-(ONH2)m
    (상기식에서,
    m은 3-50이고;
    R은 H, C, N, O, P, Si 및 S 원자로 구성되는 군으로부터 선택되는 1-10,000 원자를 포함하는 유기부분이다).
  12. 화학식 2를 가지는 원자가 플랫폼 분자
    (화학식 2)
    RC[Gl(ONH2)n]y
    (상기식에서,
    y는 1 내지 16이고;
    n은 1 내지 32이고;
    y * n은 3 이상이고;
    Rc및 각 G1은 독립적으로 유기 부분이다).
  13. 제 11 항에 있어서, Rc및 각 Gl는 독립적으로 H, C, N, O, P, Si 및 S 원자의 군으로부터 선택되는 원자를 포함하는 유기부분인 것을 특징으로 하는 분자.
  14. 제 11 항에 있어서, 옥시알킬렌기를 포함하는 것을 특징으로 하는 분자.
  15. 약 1.2 미만의 다분산성을 가지는 제 12 항의 원자가 플랫폼 분자를 포함하는 조성물.
  16. 다음으로 구성되는 군으로부터 선택되는 화학식을 가지는 원자가 플랫폼 분자:
    (화학식 3)
    RC[O-C(=O)-NR1-G2-(ONH2)n]y
    (화학식 4)
    Rc[C(=O)-NR1-G2-(ONH2)n]y
    (화학식 5)
    Rc[NR1-C(=O)-G2-(ONH2)n]y
    (화학식 6)
    Rc[NR1-C(=O)-O-G2-(ONH2)n]y
    (화학식 7)
    Rc[R1C=N-0-G2-(ONH2)n]y
    (화학식 8)
    Rc[S-G2(ONH2)n]y
    (상기식에서,
    y는 1 내지 16이고;
    n은 1 내지 32이고;
    y * n은 3 이상이고;
    Rc는 H, 알킬, 헤테로알킬, 아릴, 헤테로아릴 또는 G2-(ONH2)n이고;
    Rc및 각 G2은 독립적으로 H, C, N. 0. P, Si 및 S 원자의 군으로부터 선택되는 원자를 포함하는 유기 부분이다).
  17. 제 16 항에 있어서, Rc및 각 G2는 독립적으로 다음으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 원자가 플랫폼 분자:
    오직 H 및 C 원자만으로 구성되고, 1 내지 200 탄소 원자를 가지는 히드로카르빌기;
    오직 탄소, 산소, 및 수소원자만으로 구성되고, 1 내지 200 탄소 원자를 가지는 유기기;
    오직 탄소, 산소, 질소, 및 수소원자만으로 구성되고, 1 내지 200 탄소 원자를 가지는 유기기;
    오직 탄소, 산소, 황, 및 수소원자만으로 구성되고, 1 내지 200 탄소 원자를 가지는 유기기;
    오직 탄소, 산소, 황, 질소, 및 수소원자만으로 구성되고, 1 내지 200 탄소 원자를 가지는 유기기.
  18. 제 16 항에 있어서, Rc는 C1-200 탄화수소 부분; C1-200 알콕시 부분; 및 방향족기를 포함하는 C1-200 탄화수소 부분으로 구성되는 군으로 부터 선택되는 것을 특징으로 하는 원자가 플랫폼 분자.
  19. 제 16 항에 있어서, Rc는 옥시알킬렌 부분을 포함하는 것을 특징으로 하는원자가 플랫폼 분자.
  20. 제 19 항에 있어서, Rc는 옥시에틸렌 부분을 포함하는 것을 특징으로 하는 원자가 플랫폼 분자.
  21. 제 16 항에 있어서, Rc는 옥시에틸렌 단위; -(CH2CH20)n- (n은 1-100이다)를 포함하는 것을 특징으로 하는 원자가 플랫폼 분자.
  22. 제 16 항에 있어서, G2는 알킬, 헤테로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴으로 구성되는 군으로부터 선택되는 작용기를 포함하는 것을 특징으로 하는 원자가 플랫폼 분자.
  23. 제 16 항에 있어서, G2는 C1-200 탄화수소 부분; C1-200 알콕시 부분; 및 방향족기를 포함하는 C1-200 탄화수소 부분으로 구성되는 군으로부터 선택되는 작용기를 포함하는 것을 특징으로 하는 원자가 플랫폼 분자.
  24. 제 16 항에 있어서, G2는 옥시알킬렌 부분을 포함하는 것을 특징으로 하는 원자가 플랫폼 분자.
  25. 제 16 항에 있어서, G2는 옥시에틸렌 부분을 포함하는 것을 특징으로 하는 원자가 플랫폼 분자.
  26. 제 16 항에 있어서, G2는 옥시에틸렌 단위; -(CH2CH20)n- (n은 1-100이다)를 포함하는 것을 특징으로 하는 원자가 플랫폼 분자.
  27. 제 16 항에 있어서, 각 G2는 독립적으로 아민; 아미드; 에스테르; 에테르; 케톤; 알데히드; 카르바메이트; 티오에테르; 피페라지닐; 피페리디닐; 알콜; 폴리아민; 폴리에테르; 히드라지드; 히드라진; 카르복실산; 무수물; 할로; 술포닐; 술포네이트; 술폰; 이미데이트; 시아네이트; 이소시아네이트; 이소티오시아네이트; 포르메이트; 카르보디이미드; 티올; 옥심; 이민; 아미노옥시; 및 말레이미드로 구성되는 군으로부터 선택되는 작용기를 포함하는 것을 특징으로 하는 원자가 플랫폼 분자.
  28. 제 16 항에 있어서, 화학식 3을 가지는 것을 특징으로 하는 원자가 플랫폼 분자.
    (화학식 3)
    RC[O-C(=O)-NR1-G2-(ONH2)n]y
  29. 제 16 항에 있어서, 화학식 4를 가지는 것을 특징으로 하는 원자가 플랫폼 분자.
    (화학식 4)
    Rc[C(=O)-NR1-G2-(ONH2)n]y
  30. 제 16 항에 있어서, 화학식 5를 가지는 것을 특징으로 하는 원자가 플랫폼 분자.
    (화학식 5)
    Rc[NR1-C(=O)-G2-(ONH2)n]y
  31. 제 16 항에 있어서, 화학식 6을 가지는 것을 특징으로 하는 원자가 플랫폼 분자.
    (화학식 6)
    Rc[NR1-C(=O)-O-G2-(ONH2)n]y
  32. 제 16 항에 있어서, 화학식 7을 가지는 것을 특징으로 하는 원자가 플랫폼 분자.
    (화학식 7)
    Rc[R1C=N-0-G2-(ONH2)n]y
  33. 제 16 항에 있어서, 화학식 8을 가지는 것을 특징으로 하는 원자가 플랫폼 분자.
    (화학식 8)
    Rc[S-G2(ONH2)n]y
  34. 약 1.2 미만의 다분산성을 가지는 제 16 항의 원자가 플랫폼 분자를 포함하는 조성물.
  35. 제 16 항에 있어서, 각 G2-(ONH2)는 다음으로 구성되는 군으로부터 선택되는것을 특징으로 하는 원자가 플랫폼 분자.
  36. 제 16 항에 있어서, 다음으로 구성되는 군으로부터 선택되는 화학식을 가지는 것을 특징으로 하는 원자가 플랫폼 분자:
    및
    (상기식에서, n은 1 내지 100이다).
  37. 제 36 항에 있어서, G2는 옥시에틸렌기를 포함하는 것을 특징으로 하는 원자가 플랫폼 분자.
  38. 다음 구조를 가지는 원자가 플랫폼 분자:
    화합물125c (상기식에서, n은 약 503이다); 또는
    화합물132 (상기식에서, n은 약 481이다).
  39. 다음 구조를 가지는 원자가 플랫폼 분자:
    화합물136 (상기식에서, n은 약 112이다).
  40. 제 1 항의 분자 및 하나 이상의 생물학적 활성 분자의 콘쥬게이트.
  41. 제 1 항의 분자 및 셋 이상의 생물학적 활성 분자의 콘쥬게이트.
  42. 제 40 항에 있어서, 콘쥬게이트는 옥심 콘쥬게이트 또는 그의 변형된 형태인것을 특징으로 하는 콘쥬게이트.
  43. 제 12 항의 분자 및 생물학적 활성 분자의 콘쥬게이트.
  44. 제 16 항의 분자 및 생물학적 활성 분자의 콘쥬게이트.
  45. 제 36 항의 분자 및 생물학적 활성 분자의 콘쥬게이트.
  46. 제 38 항의 분자 및 생물학적 활성 분자의 콘쥬게이트.
  47. 제 39 항의 분자 및 생물학적 활성 분자의 콘쥬게이트.
  48. 제 40 항에 있어서, 생물학적 활성 분자는 폴리(당류), 폴리(아미노산), 핵산 및 지질로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 콘쥬게이트.
  49. 제 43 항에 있어서, 생물학적 활성 분자는 폴리(당류), 폴리(아미노산), 핵산 및 지질로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 콘쥬게이트.
  50. 생물학적 활성 분자상의 알데히드 또는 케톤기와 원자가 플랫폼 분자상의 아미노옥시기를 반응시켜 옥심 콘쥬게이트를 형성시키는 것을 포함하는 제 40 항의콘쥬게이트의 제조 방법.
  51. 제 50 항에 있어서, 생물학적 활성 분자는 폴리(아미노산)이고, 상기 방법은 콘쥬게이션 전에 폴리(아미노산)을 변형시켜 말단 알데히드기를 포함시키는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  52. 약 1.2 미만의 다분산성을 가지는 제 40 항의 콘쥬게이트를 포함하는 조성물.
  53. 제 40 항의 콘쥬게이트 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적으로 허용가능한 조성물.
KR1020017015842A 1999-06-08 2000-06-08 아미노옥시기를 포함하는 원자가 플랫폼 분자 KR20020022691A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US13826099P 1999-06-08 1999-06-08
US60/138,260 1999-06-08
PCT/US2000/015968 WO2000075105A1 (en) 1999-06-08 2000-06-08 Valency platform molecules comprising aminooxy groups

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20020022691A true KR20020022691A (ko) 2002-03-27

Family

ID=22481220

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020017015842A KR20020022691A (ko) 1999-06-08 2000-06-08 아미노옥시기를 포함하는 원자가 플랫폼 분자

Country Status (10)

Country Link
US (3) US20040224366A1 (ko)
EP (1) EP1183230A1 (ko)
JP (1) JP2003501412A (ko)
KR (1) KR20020022691A (ko)
CN (2) CN1762990A (ko)
AU (1) AU779887B2 (ko)
CA (1) CA2376057A1 (ko)
HK (1) HK1042287A1 (ko)
NO (1) NO20016006L (ko)
WO (1) WO2000075105A1 (ko)

Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6858210B1 (en) 1998-06-09 2005-02-22 La Jolla Pharmaceutical Co. Therapeutic and diagnostic domain 1 β2GPI polypeptides and methods of using same
KR20020059808A (ko) * 1999-11-28 2002-07-13 와이즈먼 앤드루 항체 친화도에 기초한 루프스 치료방법 및 그것의 사용을위한 스크리닝 방법과 조성물
US6951939B2 (en) * 2000-06-08 2005-10-04 La Jolla Pharmaceutical Company Multivalent platform molecules comprising high molecular weight polyethylene oxide
US7176037B2 (en) 2000-07-13 2007-02-13 The Scripps Research Institute Labeled peptides, proteins and antibodies and processes and intermediates useful for their preparation
US6951947B2 (en) 2000-07-13 2005-10-04 The Scripps Research Institute Labeled peptides, proteins and antibodies and processes and intermediates useful for their preparation
EP1330471A4 (en) * 2000-09-29 2005-03-30 Scripps Research Inst MARKED PEPTIDES, AND METHOD AND INTERMEDIATE PRODUCTS SUITED TO THEIR PREPARATION
DK2423335T3 (da) 2001-06-21 2014-08-18 Dynavax Tech Corp Kimæriske immunmodulatoriske forbindelser og fremgangsmåder til anvendelse deraf
US20030114405A1 (en) * 2001-08-13 2003-06-19 Linnik Matthew D. Methods of treating systemic lupus erythematosus in individuals having significantly impaired renal function
EP1551376A4 (en) 2002-08-12 2010-10-06 Dynavax Tech Corp IMMUNOMODULATORY COMPOSITIONS, THEIR METHODS OF PREPARATION AND USE
US20040208864A1 (en) * 2002-12-27 2004-10-21 Vibeke Strand Methods of improving health-related quality of life in individuals with systemic lupus erythematosus
US20040258683A1 (en) * 2003-03-30 2004-12-23 Linnik Matthew D. Methods of treating and monitoring systemic lupus erythematosus in individuals
NZ541374A (en) 2003-05-23 2008-09-26 Nektar Therapeutics Al Corp PEG derivatives having an amidocarbonate linkage
US7947261B2 (en) 2003-05-23 2011-05-24 Nektar Therapeutics Conjugates formed from polymer derivatives having particular atom arrangements
US8759305B2 (en) 2004-09-01 2014-06-24 Dynavax Technologies Corporation Methods and compositions for inhibition of innate immune responses and autoimmunity
EP1688150A1 (en) * 2005-02-08 2006-08-09 Novo Nordisk A/S Process for the preparation of alkoxyamine functionalised poly ethylene glycols
US7601798B2 (en) * 2005-10-04 2009-10-13 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Methods of preparing polymers having terminal amine groups using protected amine salts
US8795680B2 (en) * 2006-07-21 2014-08-05 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Methods for conjugation of oligosaccharides or polysaccharides to protein carriers through oxime linkages via 3-deoxy-D-manno-octulsonic acid
EP2457920B1 (en) 2007-01-18 2017-10-25 Genzyme Corporation Oligosaccharides comprising an aminooxy group and conjugates thereof
CA2703931C (en) 2007-10-26 2016-08-16 Dynavax Technologies Corporation Methods and compositions for inhibition of immune responses and autoimmunity
ES2856055T3 (es) 2009-07-27 2021-09-27 Baxalta GmbH Glicopolisialilación de proteínas diferentes de las proteínas de coagulación de la sangre
AU2011268211B2 (en) 2010-06-16 2015-07-16 Dynavax Technologies Corporation Methods of treatment using TLR7 and/or TLR9 inhibitors
WO2011163572A2 (en) 2010-06-24 2011-12-29 University Of Kansas Bifunctional conjugate compositions and associated methods
PL2654794T3 (pl) * 2010-12-22 2020-07-27 Baxalta GmbH Materiały i sposoby sprzęgania rozpuszczalnej w wodzie pochodnej kwasu tłuszczowego z białkiem
EP2714684B1 (en) * 2011-05-27 2018-09-05 Ambrx, Inc. Compositions containing, methods involving, and uses of non-natural amino acid linked dolastatin derivatives
AU2012262559B2 (en) * 2011-05-27 2016-03-17 Ambrx, Inc. Compositions containing, methods involving, and uses of non-natural amino acid linked dolastatin derivatives
US9228184B2 (en) 2012-09-29 2016-01-05 Dynavax Technologies Corporation Human toll-like receptor inhibitors and methods of use thereof

Family Cites Families (78)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4234563A (en) * 1978-06-02 1980-11-18 American Hospital Supply Corporation Insolubilized deoxyribonucleic acid (DNA)
DE3108534A1 (de) * 1981-03-06 1982-09-23 Agfa-Gevaert Ag, 5090 Leverkusen Verfahren zur verarbeitung eines belichteten photographischen materiales und verarbeitungsband zur durchfuehrung des verfahrens
US4568737A (en) * 1983-01-07 1986-02-04 The Dow Chemical Company Dense star polymers and dendrimers
US4558120A (en) * 1983-01-07 1985-12-10 The Dow Chemical Company Dense star polymer
US5370871A (en) * 1983-01-24 1994-12-06 The Johns Hopkins University Therapeutic suppression of specific immune responses by administration of oligomeric forms of antigen of controlled chemistry
US6022544A (en) * 1983-01-24 2000-02-08 The John Hopkins University Therapeutic suppression of specific immune responses by administration of oligomeric forms of antigen of controlled chemistry
US5126131A (en) * 1983-01-24 1992-06-30 The Johns Hopkins University Therapeutic suppression of specific immune responses by administration of antigen-competitive conjugates.
US5447722A (en) * 1983-12-12 1995-09-05 University Of Manitoba Method for the suppression of an immune response with antigen-MPEG conjugates in nonsensitized individuals
US4734363A (en) * 1984-11-27 1988-03-29 Molecular Diagnostics, Inc. Large scale production of DNA probes
US5206344A (en) * 1985-06-26 1993-04-27 Cetus Oncology Corporation Interleukin-2 muteins and polymer conjugation thereof
US5338532A (en) * 1986-08-18 1994-08-16 The Dow Chemical Company Starburst conjugates
US5527524A (en) * 1986-08-18 1996-06-18 The Dow Chemical Company Dense star polymer conjugates
US6312679B1 (en) * 1986-08-18 2001-11-06 The Dow Chemical Company Dense star polymer conjugates as dyes
US5135737A (en) * 1986-11-10 1992-08-04 The State Of Oregon Acting By And Through The State Board Of Higher Education On Behalf Of The University Of Oregon Amplifier molecules for enhancement of diagnosis and therapy
US4822594A (en) * 1987-01-27 1989-04-18 Gibby Wendell A Contrast enhancing agents for magnetic resonance images
US5674911A (en) * 1987-02-20 1997-10-07 Cytrx Corporation Antiinfective polyoxypropylene/polyoxyethylene copolymers and methods of use
US5229490A (en) * 1987-05-06 1993-07-20 The Rockefeller University Multiple antigen peptide system
CA2000549A1 (en) * 1988-10-12 1990-04-12 David V. Woo Radiotherapeutic immunoconjugates labeled with iodine-125
US5252720A (en) * 1989-03-06 1993-10-12 Board Of Regents, The University Of Texas System Metal complexes of water soluble texaphyrins
US5324844A (en) * 1989-04-19 1994-06-28 Enzon, Inc. Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides
DE69028513T2 (de) * 1989-10-19 1997-02-06 Yamasa Shoyu Kk Träger zur bindung von antiphospholipid-antikörpern, diese antikörper verwendender immunotest und kit dafür
US5391785A (en) * 1990-01-16 1995-02-21 La Jolla Pharmaceutial Company Intermediates for providing functional groups on the 5' end of oligonucleotides
US5268454A (en) * 1991-02-08 1993-12-07 La Jolla Pharmaceutical Company Composition for inducing humoral anergy to an immunogen comprising a t cell epitope-deficient analog of the immunogen conjugated to a nonimmunogenic carrier
US5162515A (en) * 1990-01-16 1992-11-10 La Jolla Pharmaceutical Company Conjugates of biologically stable polymers and polynucleotides for treating systemic lupus erythematosus
US5552391A (en) * 1990-01-16 1996-09-03 La Jolla Pharmaceutical Company Chemically-defined non-polymeric valency platform molecules and conjugates thereof
JPH04218000A (ja) * 1990-02-13 1992-08-07 Kirin Amgen Inc 修飾ポリペプチド
US5171264A (en) * 1990-02-28 1992-12-15 Massachusetts Institute Of Technology Immobilized polyethylene oxide star molecules for bioapplications
US5238940A (en) * 1990-03-22 1993-08-24 Quadra Logic Technologies Inc. Compositions for photodynamic therapy
US5185433A (en) * 1990-04-09 1993-02-09 Centocor, Inc. Cross-linking protein compositions having two or more identical binding sites
US5219564A (en) * 1990-07-06 1993-06-15 Enzon, Inc. Poly(alkylene oxide) amino acid copolymers and drug carriers and charged copolymers based thereon
US6011020A (en) * 1990-06-11 2000-01-04 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid ligand complexes
FR2664274B1 (fr) * 1990-07-09 1992-09-11 Rhone Poulenc Sante Procede de preparation de sulfates cycliques.
US5229366A (en) * 1990-10-23 1993-07-20 Fuji Photo Film Co., Ltd. Peptide-containing polyethylene glycol derivatives and application thereof
US5386020A (en) * 1991-01-10 1995-01-31 New York University Multiply connected, three-dimensional nucleic acid structures
ES2140408T3 (es) * 1991-03-19 2000-03-01 Cytrx Corp Copolimeros de polioxipropileno/polioxietileno con actividad biologica mejorada.
US5495006A (en) * 1991-09-27 1996-02-27 Allelix Biopharmaceuticals, Inc. Antiviral polynucleotide conjugates
US5278051A (en) * 1991-12-12 1994-01-11 New York University Construction of geometrical objects from polynucleotides
AU3423293A (en) * 1991-12-19 1993-07-19 Baylor College Of Medicine Pva or peg conjugates of peptides for epitope-specific immunosuppression
US5747244A (en) * 1991-12-23 1998-05-05 Chiron Corporation Nucleic acid probes immobilized on polystyrene surfaces
WO1993024476A1 (en) * 1992-06-04 1993-12-09 Clover Consolidated, Limited Water-soluble polymeric carriers for drug delivery
US5321095A (en) * 1993-02-02 1994-06-14 Enzon, Inc. Azlactone activated polyalkylene oxides
FR2701263B1 (fr) * 1993-02-09 1995-04-21 Elie Stefas Procédé d'obtention d'une composition aqueuse protéinique, composition correspondante, glycoprotéine contenue et son utilisation pour la stabilisation de l'albumine et la détection ou le dosage d'anticorps.
US5681811A (en) * 1993-05-10 1997-10-28 Protein Delivery, Inc. Conjugation-stabilized therapeutic agent compositions, delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same
US5359030A (en) * 1993-05-10 1994-10-25 Protein Delivery, Inc. Conjugation-stabilized polypeptide compositions, therapeutic delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same
KR100361933B1 (ko) * 1993-09-08 2003-02-14 라 졸라 파마슈티칼 컴파니 화학적으로정의된비중합성결합가플랫폼분자및그것의콘주게이트
ES2282988T3 (es) * 1993-09-08 2007-10-16 La Jolla Pharmaceutical Company Moleculas plataforma de valencia no polimericas,.
US5880131A (en) * 1993-10-20 1999-03-09 Enzon, Inc. High molecular weight polymer-based prodrugs
US5840900A (en) * 1993-10-20 1998-11-24 Enzon, Inc. High molecular weight polymer-based prodrugs
US5965566A (en) * 1993-10-20 1999-10-12 Enzon, Inc. High molecular weight polymer-based prodrugs
US5919455A (en) * 1993-10-27 1999-07-06 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5618528A (en) * 1994-02-28 1997-04-08 Sterling Winthrop Inc. Biologically compatible linear block copolymers of polyalkylene oxide and peptide units
US5730990A (en) * 1994-06-24 1998-03-24 Enzon, Inc. Non-antigenic amine derived polymers and polymer conjugates
US5650234A (en) * 1994-09-09 1997-07-22 Surface Engineering Technologies, Division Of Innerdyne, Inc. Electrophilic polyethylene oxides for the modification of polysaccharides, polypeptides (proteins) and surfaces
US5932462A (en) * 1995-01-10 1999-08-03 Shearwater Polymers, Inc. Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces
US5874409A (en) * 1995-06-07 1999-02-23 La Jolla Pharmaceutical Company APL immunoreactive peptides, conjugates thereof and methods of treatment for APL antibody-mediated pathologies
US5672662A (en) * 1995-07-07 1997-09-30 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications
DE19541404A1 (de) * 1995-11-07 1997-05-15 Degussa Verfahren zur selektiven Synthese von Silylalkyldisulfiden
EP0876165B1 (en) * 1995-12-18 2006-06-21 Angiotech BioMaterials Corp. Crosslinked polymer compositions and methods for their use
US6106828A (en) * 1996-02-15 2000-08-22 Novo Nordisk A/S Conjugation of polypeptides
US5780319A (en) * 1996-04-19 1998-07-14 Pasteur Sanofi Diagnostics Immunoassays to detect antiphospholipid antibodies
US6214966B1 (en) * 1996-09-26 2001-04-10 Shearwater Corporation Soluble, degradable poly(ethylene glycol) derivatives for controllable release of bound molecules into solution
US6258351B1 (en) * 1996-11-06 2001-07-10 Shearwater Corporation Delivery of poly(ethylene glycol)-modified molecules from degradable hydrogels
US5990237A (en) * 1997-05-21 1999-11-23 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) aldehyde hydrates and related polymers and applications in modifying amines
US6284246B1 (en) * 1997-07-30 2001-09-04 The Procter & Gamble Co. Modified polypeptides with high activity and reduced allergenicity
US6368612B1 (en) * 1997-12-12 2002-04-09 Biohybrid Technologies Llc Devices for cloaking transplanted cells
US5985263A (en) * 1997-12-19 1999-11-16 Enzon, Inc. Substantially pure histidine-linked protein polymer conjugates
US5965119A (en) * 1997-12-30 1999-10-12 Enzon, Inc. Trialkyl-lock-facilitated polymeric prodrugs of amino-containing bioactive agents
EP1061954B1 (en) * 1998-03-12 2004-06-09 Nektar Therapeutics Al, Corporation Poly(ethylene glycol) derivatives with proximal reactive groups
US6251382B1 (en) * 1998-04-17 2001-06-26 Enzon, Inc. Biodegradable high molecular weight polymeric linkers and their conjugates
US6153655A (en) * 1998-04-17 2000-11-28 Enzon, Inc. Terminally-branched polymeric linkers and polymeric conjugates containing the same
US6858210B1 (en) * 1998-06-09 2005-02-22 La Jolla Pharmaceutical Co. Therapeutic and diagnostic domain 1 β2GPI polypeptides and methods of using same
CA2283597C (en) * 1998-10-02 2008-02-05 Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. Reduced cortisol conjugates
US6399578B1 (en) * 1998-12-09 2002-06-04 La Jolla Pharmaceutical Company Conjugates comprising galactose α1,3 galactosyl epitopes and methods of using same
US6458953B1 (en) * 1998-12-09 2002-10-01 La Jolla Pharmaceutical Company Valency platform molecules comprising carbamate linkages
US6365173B1 (en) * 1999-01-14 2002-04-02 Efrat Biopolymers Ltd. Stereocomplex polymeric carriers for drug delivery
DK1259563T4 (en) * 1999-12-22 2016-11-21 Nektar Therapeutics PROCEDURE FOR PREPARING 1-BENZOTRIAZOLYL CARBONATE ESTERS OF WATER SOLUBLE POLYMERS
US6951939B2 (en) * 2000-06-08 2005-10-04 La Jolla Pharmaceutical Company Multivalent platform molecules comprising high molecular weight polyethylene oxide
US20040208864A1 (en) * 2002-12-27 2004-10-21 Vibeke Strand Methods of improving health-related quality of life in individuals with systemic lupus erythematosus

Also Published As

Publication number Publication date
CN1358171A (zh) 2002-07-10
CA2376057A1 (en) 2000-12-14
US20040224366A1 (en) 2004-11-11
NO20016006D0 (no) 2001-12-07
HK1042287A1 (zh) 2002-08-09
US20060141597A1 (en) 2006-06-29
JP2003501412A (ja) 2003-01-14
AU779887B2 (en) 2005-02-17
US20070191263A1 (en) 2007-08-16
EP1183230A1 (en) 2002-03-06
WO2000075105A1 (en) 2000-12-14
CN1762990A (zh) 2006-04-26
AU5479600A (en) 2000-12-28
NO20016006L (no) 2002-01-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20060141597A1 (en) Valency platform molecules comprising aminooxy groups
US6951939B2 (en) Multivalent platform molecules comprising high molecular weight polyethylene oxide
EP2052011B1 (en) Targeted polylysine dendrimer therapeutic agent
ES2404685T3 (es) Derivados heterobifuncionales de poli(etilenglicol) y métodos para su preparación
US6436386B1 (en) Hydroxyapatite-targeting poly (ethylene glycol) and related polymers
EP1699491B1 (en) Branched polyethylene glycol for linking polymer residues to antibodies
US8372422B2 (en) Hydroxyapatite-targeting poly(ethylene glycol) and related polymers
KR20090057235A (ko) 리신계 폴리머 링커
EP3769786A1 (en) Antibody-drug conjugate having acidic self-stabilization junction
US6933352B2 (en) Amphiphilic compounds having a dendritic branch structure
KR20010085742A (ko) 정밀한 길이의 폴리아미드 사슬, 그 제조방법 및 단백질결합체의 제조방법
EP2750681A1 (en) Branched discrette peg constructs
US20100203066A1 (en) Polymeric linkers containing pyridyl disulfide moieties
US6194543B1 (en) Dendritic polypeptides
AU772167B2 (en) Polypeptide dendrimers as unimolecular carriers of diagnostic imaging contrast agents, bioactive substances and drugs
WO1991015242A1 (en) Conjugate compounds of polymers with other organic molecular entities
KR20220069994A (ko) 비대칭 분기형 분해성 폴리에틸렌글리콜 유도체
JPS62263198A (ja) 細胞保護作用を有する環状ペプチド

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E601 Decision to refuse application