KR20010112371A - 패혈증 치료에 사용하기 위한 면역흡착제 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 패혈증 치료에 사용하기 위한 면역흡착제, 특히 보체 인자 및 리포다당류(LPS) 및 필요한 경우 TNF 및 인터루킨과 같은 다른 패혈증 매개체를 체액으로부터 제거하기 위한 면역흡착제, 상기 면역흡착제의 제조방법 및 그의 용도에관한 것이다.

Description

패혈증 치료에 사용하기 위한 면역흡착제{Immunoadsorber for use in sepsis therapy}
미국, 일본 및 유럽에서는 매년 약 3.5백만의 패혈증에 환자가 발생한다. 이들 지역에 사는 7억8천5백만의 총 주민중 이들 나라에서의 발병율은 0.5% 미만이다. 그러한 발병 빈도와 관련하여 입원환자를 조사하면, 100개 병원당 2.0±0.16명의 패혈증 환자가 수용됨을 알 수 있다. 이들 환자의 약 25%가 45% 이상의 사망률을 초래하는 패혈증 쇼크 징후로 인하여 현대식으로 마련된 설비(중환자실)에서 고도의 전문지식을 갖춘 전문가를 통하여 집중적인 의료처치를 받는다는 관찰로부터 엄청난 보건정책과 개인의 중요성을 알 수 있다.
특히 다중외상 환자(교통사고, 화상, 심한 수술)는 패혈증 쇼크의 위험성이 아주 높다. 외부로부터의 감염은 차치해두고, 이들 환자의 면역체계의 부분적 기능 상실로 인하여 장에서 흔히 그람 음성 세균에 대한 장내 장벽이 파열되어 내부에 기인한 감염이 검출될 수 있다.
이런 경우의 50% 이상에서 그람 음성 세균 또는 이들의 세포 벽 성분, 내독소(리포다당류, LPS)는 패혈증 쇼크를 유발한다. 세균에 의해 방출된 LPS는 혈청 단백질(LBP)에 결합된 다음 단핵구/대식세포(CD14)의 LPS 리셉터에 의해 흡착된다. 이런 방식으로 활성화된 CD14+ 세포는 표적 세포의 사이토카인 리셉터를 통하여 이들의 효과를 갖는 사이토카인(TNFα, 인터루킨-1(IL-1), IL-6, IL-8)을 생성한다.
단핵구 및 대식세포의 자극과 병행하여, 보체계가 활성화된다. 이것은 세균의 미생물 및 외래 입자와 직접적으로 비특이적으로 싸우는 포유류의 면역 방어의 통합된 일부이다. 보체중에서 혈액 혈청에서 생기는 단백질, 단백질성 융해에 의해 활성화된 주로 프로효소, 약 1 g/l의 혈청 농도를 갖는 C3 단백질이 중요한 역할을 한다. 미생물이 C3와 접촉한 후, 보체 단백질 C3a가 떨어지는 반면에, C3b에 의해 C5 콘버타제의 형성이 개시되며(보체 활성화의 다른 방법), 한편 상기 반응은 혈청 인자의 퇴적에 의하여 C3 콘버타제로 전환하는 C3B에 의해 증폭된다. 혈청에서 생기는 보체 단백질 C5는 다량으로 제공되고 C5a를 형성하는 C5 콘버타제에 의해 단백질분해적으로 분열된다. 또한 보체 단백질(C6-C9)은 최종적으로 중합성 소수성 막 공격 콤플렉스(MAC)가 형성되어 세균 막에 침강(옵소닌화반응)하여 포어를 형성하여 식균작용을 초래함으로써 미생물(및 결합된 MAC)을 제거하도록 할 때 까지 C5b상에 퇴적된다. 보체 활성화반응 과정에서 방출된 보체 인자 C3a 및 C5a (아나필라톡신)는 관 투과성을 증가시키고 그에 의해 유발된 케모톡신의 방출에 의해 세균 공격 위치에 대한 식균 세포의 자극을 유발한다. 세균 개수의 감소는 보체계의 활성화의 감소를 초래한다. 직접적이고 비특이적 반응은 예컨대 보체 인자에 의해세포성 방어에 필수적인 사이토카인의 합성과 방출이 조절되는한 다른 면역 방어체계와 밀접하게 관련되어 있다. 염증 효과를 유발하기 위해, C3a 및 C5a는 특이적 세포 기제 리셉터에 결합되고, 면역 반응성의 작용성으로 상이한 세기로 표현된다. 면역 방어를 영구적으로 작용가능한 상태로 유지하기 위하여, 활성화된 보체 인자는 미생물에 의한 공격후 뿐만 아니라 1 내지 10 ng/ml의 농도로 표준 인간의 혈청의 합체 부분을 검출할 수 있다.
아나필라톡신의 플라즈마 수준은 특히 패혈증 발병 환자, 급성 폐렴 환자 및 빈사 환자에서 1000배 이상 증가될 수 있다.
시험관내 조사를 근거로하면, 다양한 보체 인자의 효과를 제거하기 위한 다양하고 주로 비특이적으로 효과적인 용액 변형이 존재하지만, 예상되는 부작용으로 인하여 생체내에서는 시험되기가 어려웠다(WO-A-98/34959).
인공적인 체외면(예컨대 표면 코팅)에 의해 보체 활성화를 방지하는 종래의 체내 방법에서, 비특이적 보체 활성화는 성공적으로 실시되어왔다. 또한 특이한 C5 항체를 사용하는 활성화된 보체 인자의 선택적인 제거는 미국 특허 5,853,722호로부터 공지되어 있으며 보체계의 모든 성분에 대하여 밀접히 관련이 있는 항체가 생성되므로 특히 바람직하다.
명백한 작용 단계는 생물에 세균이 침투하는 것을 방지하도록 이용된다. 침투하는 세균의 개수 및/또는 독성과 면역계의 제거능(예컨대 후-외상 면역 결핍)간에 불일치가 생기자마자, 과도한 활성화가 관측된 다음 다량의 "쇼크 매개체"(인터루킨, 트롬보사이트 활성화 인자(PAF) 뿐만 아니라 산소 라디칼, 프로스타글란딘및 이들의 대사성 생성물)의 방출이 유발되어, LPS에 대한 제거능을 제한한다. 또한 CD14-음성 세포(예컨대 엔도셀리아애)는 LPS에 의해 활성화되며, 용해성 CD14(sCD14)는 혈장에 LPS 트랩퍼(trapper)로 존재하여 이들 세포에 결합되는 것을 용이하게 하고 다른 쇼크 매개체의 형성과 방출을 유발하여 순환을 더 어렵게 만든다. 쇼크 매개체는 선택적으로 작용하지만 특이적이지 않으므로, 다양한 세포 및 기관에서 작용 제한이 관찰되며(혈액 응집계, 순환, 보체 계), 그 결과 전체 기관을 공격하는 염증 반응이 쇼크를 유발하게되어 비가역적인 기관 손상을 초래하고 순환 파괴 및 치사를 유발한다.
상술한 작용 사슬을 파괴하기 위하여, 다양한 치료 기술이 연구되었다.
LPS가 단백질(LBP, sCD14), 리셉터(CD14), 방출된 사이토카인 또는 사이토카인 리셉터에 결합되는 것을 방지하는 항체를 사용하거나 또는 리셉터의 작용 영역을 차단하는 길항물질을 사용하여 케스케이드를 방지하는 것은 동물 실험에서 다양한 패혈증 모델에서 인상적인 성공을 거두었지만, 여전히 임상시험이 실시되지 않아 성공적인 방지 및/또는 치료 연구라 할 수 없다.
LPS가 상기 치료 수법에 의해 손상받지 않는 세포와 조직의 작용 조건에 영향을 주고 변화시킨다고 꾸준히 관측되어 왔기 때문에 높은 기대를 충족시킬 수는 없었다. 또한 항체/길항물질에 의해 활성화된 LPS(면역 복합체)는 생물학적 반응성을 영구적으로 배제시키기 위하여 제거되어야하는 점을 고려해야한다. 그러나 그러한 제거는 면역계의 작용이며, 약하게되면 상기 과제를 거의 수행하지 못하거나 불완전하게 수행할 뿐이다.
패혈증 쇼크의 발생은 주로 다양한 발생원에 의한 역동적인 생성이며, 다양한 매개체는 단시간내에 아주 상이한 반응을 유발하여 초기 수명 유지 작용후 기능 이상에 의해 패혈증 쇼크로 표현되게된다.
본 발명은 패혈증 치료에 사용하기 위한 면역흡착제, 특히 보체 인자 및 리포다당류(LPS) 뿐만 아니라 경우에 따라 TNF 및 인터루킨을 체액으로부터 제거하기 위한 면역흡착제, 및 상기 면역흡착제의 제조방법과 그의 용도에도 관한 것이다.
따라서, 본 발명은 체외 해독작용을 위한 모듈식 구성의 면역흡착계의 개발업무를 기초로하여 환자 특이적 플라즈마 및 조직 수준의 감소를 가능하게한다.
그중에서도, 본 발명은 TNFα가 조절계에서 중요한 역할을 담당한다는 지식을 기초로 한다. 상처, 염증, 감염, 패혈증과 같은 다양한 "외부" 영향의 결과로서 대식세포에 의해 방출되며 사이토카인 캐스캐이드(IL-1, IL-6)를 통한 비특이적 및 특이적 방어 체계의 부분 및 전신 활성화를 유발한다. 임상적으로, TNFα 대량 방출은 증가된 체온, 식욕부진 및 이화성 대사 상태의 모든 증후에 의해 표시된다. 패혈증의 식균작용에서, 대식세포의 활성화 및 TNFα의 방출은 상기 질병의 초기 상태에서 환자의 생존에 아주 중요한 반면에, 연속된 활성화 상태는 뒤이은 경과에서 모든 방어 반응의 대상기능장애를 유발한다.
본 발명의 목적은 패혈증 치료에 사용하기 위한 면역흡착제에 의해 해결된다. 본 발명에 따른 면역흡착제는 보체 인자 및 리포다당류(LPS) 뿐만 아니라 필요한 경우 TNF 및 인터루킨과 같은 패혈증 매개체를 체액으로부터 제거하기 위해 사용된다. 보체 인자 C3a 및/또는 C5a에 대한 목적하는 폴리클로날 항체 또는 모노클로날 항체 뿐만 아니라 리포다당류(LPS)에 대한 목적하는 항체가 결합될 수 있는 유기 또는 합성 중합체로된 캐리어 물질을 특징으로 한다. 바람직한 구체예로서,다른 패혈증 매개체에 대한 목적하는 항체도 또한 캐리어에 결합될 수 있다. 바람직하게는 이들은 폴리클로날항체, 특히 바람직하게는 IgY 유형의 조류 항체이다. 패혈증 매개체에 대한 항체는 기능이상 상태에 따라 포함될 수 있다.
본 발명에 따르면, 이들은 TNF, IL1, IL6, IL8 및/또는 IL10에 대한 목적하는 항체이다.
보체 인자 C3a에 대한 목적하는 바람직한 항체는 이하의 펩티드 서열중의 적어도 하나에 대하여 특이적 활성을 나타낸다:
보체 인자 C5a에 대한 바람직한 항체는 이하의 펩티드 서열중 적어도 하나에 대하여 특이적 활성을 갖는다:
IL1α/β에 대한 바람직한 항체는 이하의 펩티드 서열중 적어도 하나에 대하여 특이적 활성을 갖는다:
IL6에 대한 바람직한 항체는 이하의 펩티드 서열중 적어도 하나에 대하여 특이적 활성을 갖는다:
IL10에 대한 바람직한 항체는 이하의 펩티드 서열중 적어도 하나에 대하여 특이적 활성을 갖는다:
TNFα에 대한 바람직한 항체는 이하의 펩티드 서열중 적어도 하나에 대하여 특이적 활성을 갖는다:
본 발명에 따른 면역흡착제는 예컨대 폴리스티렌, 셀룰로오스 또는 아가로오스 유도체와 같은 탄수화물, 또는 아크릴레이트로 구성된 캐리어 물질인 유기 또는 합성 중합체로된 막이나 입자에 주로 나타나는데, 특정 항체는 이들에 공유결합적으로 결합되거나 스페이서 또는 링커를 통하여 이들에 고정된다.
본 발명에 따른 면역흡착제의 제조는 C3a 및/또는 C5a 및 LPS에 대한 목적하는 항체 및 필요에 따라 다른 패혈증 매개체에 대한 항체가 캐리어 물질 또는 유기 또는 합성 중합체에 공유결합 또는 흡착에 의해 결합되는 공지 방법에 의해 실시할수 있다.
특정 항체는 공지된 면역화방법, 바람직하게는 마우스, 래트 또는 토끼 또는 닭등의 조류와 같은 작은 포유동물을 상응하는 항체로 면역화시키는 것에 의해 생성된다.
본 발명의 목적은 보체 인자, LPS 및 필요에 따라 다른 매개체를 환자 특이적 상황에 따라 혈장과 같은 체액으로부터 제거하는 장치에서 면역흡착제를 사용하는 것에 있다.
바람직하게는, 면역흡착제는 패혈증 또는 패혈증 쇼크에 걸린 환자에서 혈장분리를 위한 패혈증 치료에 사용된다.
항체는 대부분의 물질에 대해 얻을 수 있고 공지 방법에 의해 다양한 캐리어에 결합될 수 있지만, 조류의 항체는 바람직하게는 보체 계를 활성화시키지 않기 때문에 포유류 항체와 달리 사용될 수 있다. 활성화 특성은 포유류 항체의 Fc부분에 결합되지만, 파파인으로 분해된 Fab단편도 원칙적으로 또한 사용될 수 있다.
현재 기술 상태에 의하면, 고정화된 조류 항체는 인간 방어 체계에 대한 어떤 비특이적 효과를 갖지 않는다. 조류, 바람직하게는 닭은 보조제를 사용하거나 사용하지 않고 통상의 방법에 의해 면역화될 수 있다. 특이적 면역글로불린은 계란의 난황에서 분비되며 통상의 방법에 의해 난황으로부터 분리될 수 있다. 이들은 공지 방법에 의해 Fc 부분을 통하여 미립자 또는 막에 공유결합적으로 결합된다.
본 발명에 따른 체외 해독작용에 대한 면역흡착제계를 사용하면, 처음으로환자 특이적으로 사용될 수 있고 면역계의 기능 이상이 수정될 수 있다.
본 발명을 이하 실시예에 의해 보다 자세하게 설명한다.
실시예 1
면역원성 펩티드를 이용한 폴리클로날 항체의 생산:
표 1에 수록된 펩티드는 고상 합성법에 의해 제조하였다:
상기 펩티드는 표준 레시피에 따라 캐리어(KLH)에 단단하게 결합되어 있다. PBS에 용해된 콘쥬게이트를 프로인트 보조제와 동일한 분량으로 혼합하였다. 개별접종량은 고려중인 항원에 속하는 펩티드 200 ㎍을 함유하도록 설정된다. 15주령의 어린 암탉을 이들 혼합물로 면역화시키고 4주 간격으로 4회 추가 항원자극시켰다.
실시예 2
리포다당류(LPS)를 이용한 폴리클로날 항체의 생산
대장균 J5의 세정된 LPS(SIGMA 제조)를 PBS에 용해시키고 프로인트 보조제와 동량으로 혼합하였다. 15주령의 어린 암탉을 상기 혼합물로 면역화시켰다. LPS 투여량은 면역화당 1 mg의 LPS에 상당하였다. 추가 항원자극은 4주 간격으로 4회 실시하였다.
실시예 3
계란 난황으로부터 항체(IgY)의 수득
한배에 깐 면역화된 암탉으로부터 계란을 수집하였다. 항체를 함유하는 난황을 분리한 후, -20℃에서 저장하였다. 필요에 따라, 난황을 해동시키고 이하의 계획에 따라 처리하였다(C.SCHWARZKOPF, B. THIELE (1996) ALTEX 13 Suppl. 16, 35-3):
A TBS:20 mM 트리스/HCl, pH 7.5, 0.5M NaCl
B A 용액중의 10% (w/v) 덱스트란 술페이트
C 1M CaCl2
D 0.5 M EDTA, pH 7.5
E 포화 황산 암모늄 용액
계란 난황(10 내지 20 ml/계란 난황)을 계란 난황당 100 ml TBS에 현탁시켰다. 지질 및 지방단백질은 덱스트란 술페이트(6 ml B/100 ml TBS/난황 현탁액) 및 Ca++(15 ml C/100 ml TBS-계란 난황 현탁액)으로 석출시키고 실온에서 30 내지 60분간 교반한 다음 5,000 g에서 원심분리시켰다. 펠릿을 소량의 부피의 TBS(약 20 ml/계란 난황)로 세척하고 다시 원심분리시켰다.
모아진 상층액을 여과지를 통하여 여과시킨 다음 Ca++이온을 결합시키기 위하여 0.5 M EDTA를 여과액에 부가하여 최종 농도 약 30 mM EDTA (6 ml/100 ml)로 만들었다. 그 후, 상층액을 100 ml당 24.3 g의 황산 암모늄과 혼합(40% 포화에 상당함)하고 +4℃에서 30분간 배양하였다. 생성한 석출물(IgY)을 먼저 30% (NH4)2SO4(30 ml E + 70 ml 증류수)로 세척하고 원심분리시킨 다음 가능한한 소량의 TBS(약 10 ml/사용된 계란 난황)에 용해시키고 TBS에 대하여 투석시켰다.
IgY의 함량은 275 nm에서 광도계로 측정하였다.
실시예 4
a) 캐리어의 활성화:
실시예 3에 따라 세정된 IgY를 적합한 캐리어에 단단하게 결합시켰다. 예컨대, 이를 위하여 세파로오스를 이하에 기술한 대로 활성화시킬 수 있다(H.-F. Boeden, W. Buttner, C. Rupprich, D. Buttner, S. Heinrich, M. Becker, M. Holtzhauer (1992) Makromol. Chem. 193, 865-887):
아가로오스 캐리어는 아세톤의 양에 따라 20%씩 증가하여 서서히 변형된다. 마지막으로, 상기 캐리어를 5겹상의 용기에서 물을 갖지 않는 아세톤과 함께 철야로 방치한 다음 다시 5 내지 10 부피의 물을 갖지 않는 아세톤으로 세척한 다음 G2 슬라이스상에서 간단히 흡착한다. 10 ml의 물을 갖지 않는 아세톤중의 400 mg의 N-(클로르카르보닐옥시)-5-노르보르넨-2,3-디카르복시이미드(CICOONB)를 10 ml의 침강된 캐리어에 부가하였다. 15분 이내에 5 ml의 무수 아세톤중의 280 ㎕의 트리에틸아민 및 20 mg 4-디메틸아미노-피리딘(DMAP) 용액을 진탕하면서 적가하였다(몰비 CICOONB:트리에틸아민:DMAP 1:1.2:0.1). 그후, 15분간 더 진탕시킨 다음 캐리어를 약 200 ml의 물을 갖지 않는 아세톤으로 세척하였다.
b) 고형 캐리어에 IgY를 결합시키기
실시예 4a)에 따라 활성화된 다당류 매트릭스(겔)를 수성 매질로 서서히 변형시킨 다음 즉시 리간드를 함유하는 커플링 용액에 교반하였다. 시트레이트 완충액 pH 4.2를 커플링 완충액으로 사용하였다. 커플링은 실온에서 2시간 동안 교반하는 것에 의해 서서히 실시하였다. 에탄올아민을 부가하는 것에 의해 유리 결합을 차단시켰다. 하기 표 2는 개별 항체에 대한 자세한 조건을 나타낸다.
실시예 5
리포다당류, 인터루킨, TNF 또는 보체 인자를 완충액, 혈청 또는 혈장과 같은 액체 매질로부터 제거하기 위하여 실시예 4에 따라 고정화된 항체를 사용하였다.
이를 위하여, 캐리어를 세척하고 물리적 완충액(PBS)으로 변환시킨 후 공기 기포를 갖지 않는 플라스틱 또는 유리 필라에 충전시켰다. 크로마토그래피 장치에 연결하는 것에 의해 배치를 완성하였다. 흡착될 샘플 물질(항원, 혈청 또는 혈장 샘플로 점재된 완충액, 천연 항원 함량으로 점재된 완충액)은 비중에 의해 인도되거나 사용한 항원 특이적으로 고정화된 항체를 통하여 적합한 펌프로써 인도될 수 있다. 존재하는 항원은 인식되고 공유결합적으로 결합하므로 IgY에 의해 칼럼을 흘러들어가는 매질로부터 제거될 수 있다. 효율의 검정은 칼럼 유동을 분석(ELISA)하는 것에 의해 실시하며, 그 항원 함량은 감소되었다. 칼럼을 생리적 완충액으로 세척한 후, 적합한 용출제(0.1M 시트레이트 완충액 pH 3)를 사용하여 결합된 항원을 분리시키고 용출액을 분획화 및 분석한다. 항원의 정량적 검출을 실시하여 면역흡착제의 능력을 결정한다.

Claims (17)

  1. 보체 인자 C3a 및/또는 C5a 및 리포다당류(LPS)에 대한 결합된 폴리클로날 항체 또는 모노클로날 항체와 함께 및 필요한 경우 다른 패혈증 매개체에 대한 항체와 함께 유기 또는 합성 중합체로된 캐리어 물질을 포함하는 패혈증 치료에 사용하기 위한 면역흡착제.
  2. 제1항에 있어서, 항체가 폴리클로날 항체인 면역흡착제.
  3. 제2항에 있어서, 항체가 IgY 유형의 조류 항체인 면역흡착제.
  4. 제1항 내지 제3항중 어느 하나에 있어서, 기능 이상 상태에 따라 패혈증 매개체에 대한 다른 항체가 함유되는 면역흡착제.
  5. 제1항 또는 제4항에 있어서, 항체가 TNF, IL1, IL6, IL8 및/또는 IL10에 대한 항체인 면역흡착제.
  6. 제1항에 있어서, 결합된 항체가 하기 보체 인자 C3a 및 C5a의 펩티드 서열중 어느 하나를 목적으로 하는 면역흡착제:
    C3a:
    C5a:
  7. 제5항에 있어서, 결합된 항체가 하기 인터루킨 1α 및 1β의 펩티드 서열중 어느 하나를 목적으로 하는 면역흡착제:
    IL1α/β:
  8. 제5항에 있어서, 결합된 항체가 하기 인터루킨 6의 펩티드 서열중 어느 하나를 목적으로 하는 면역흡착제:
    IL6:
  9. 제5항에 있어서, 결합된 항체가 하기 인터루킨 10의 펩티드 서열중 어느 하나를 목적으로 하는 면역흡착제:
    IL10:
  10. 제5항에 있어서, 결합된 항체가 하기 펩티드 서열중 어느 하나를 목적으로 하는 면역흡착제:
    TNFα:
  11. 제1항 내지 제10항중 어느 하나에 있어서, 유기 또는 합성 캐리어 물질이 폴리스티렌, 셀룰로오스 또는 아가로오스 유도체와 같은 탄수화물, 또는 아크릴레이트로된 막 또는 입자를 포함하는 면역흡착제.
  12. 제1항 내지 제11항중 어느 하나에 있어서, 특정 항체가 막 또는 입자에 공유결합적으로 결합된 면역흡착제.
  13. 제1항 내지 제11항중 어느 하나에 있어서, 항체가 스페이서 또는 링커를 통하여 캐리어 물질에 고정된 면역흡착제.
  14. C3 및/또는 C5a 및 LPS에 대한 항체 및 필요에 따라 다른 패혈증 매개체에 대한 항체를 유기 또는 합성 중합체의 캐리어 물질에 공유결합적으로 또는 흡착 결합시키는 제1항 내지 제13항중 어느 하나에 따른 면역흡착제의 제조방법.
  15. 제14항에 있어서, 항체가 마우스, 래트 또는 토끼와 같은 작은 포유동물 또는 닭과 같은 조류를 상응하는 항원으로 면역화시키는 것에 의해 생성되는 방법.
  16. 보체인자, LPS 및 필요한 경우 다른 매개체를 환자 특이적 체액 조합물로부터 제거하기 위한 장치의 유효성분으로서 제1항 내지 제13항중 어느 하나에 따른 면역흡착제의 용도.
  17. 제16항에 있어서, 면역흡착제가 패혈증 또는 패혈증 쇼크뿐만 아니라 염증과 관련된 기타 질병에 걸린 환자에서 혈장분리하기 위해 사용되는 용도.
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Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7829085B2 (en) * 1999-07-14 2010-11-09 Life Sciences Research Partners Vzw Methods of treating hemostasis disorders using antibodies binding the C1 domain of factor VIII
DE10118446A1 (de) * 2001-04-12 2002-10-17 Thomas Hartung Prüfverfahren zur Untersuchung fließfähiger Medien auf Gehalte an mikrobiellen Toxinen
US20030215460A1 (en) * 2002-05-07 2003-11-20 Schall Thomas J. Methods and compositions for inducing an immune response
EP1575507A2 (en) * 2002-04-02 2005-09-21 Scantibodies Laboratory, Inc. Methods and devices for treating severe peripheral bacterial infections
US8329169B2 (en) * 2003-05-15 2012-12-11 Genentech, Inc. Methods and compositions for the prevention and treatment of sepsis
EP1706079B1 (en) 2003-08-14 2013-02-20 ThromboGenics N.V. Antibodies against factor viii with modified glycosylation in the variable region
AU2005220156B2 (en) * 2004-02-27 2011-06-02 Vaxconsulting Peptides of IL1 beta and TNF alpha and method of treatment using same
DE102004029573A1 (de) * 2004-06-18 2005-12-29 Gambro Lundia Ab MIF-Adsorbent
ITMI20041569A1 (it) * 2004-07-30 2004-10-30 Tecnogen Scpa "ligandi peptidici specifici per le immunoglobuline"
ES2433280T3 (es) * 2004-10-20 2013-12-10 Hans-Werner Prof. Dr. Heinrich Adsorbente inmunológico para el tratamiento de inflamaciones
WO2007013945A2 (en) * 2005-07-20 2007-02-01 The Regents Of The University Of California Treating disorders associated with inflammation
WO2007024825A2 (en) * 2005-08-26 2007-03-01 Genway Biotech, Inc. Immunoaffinity separation and analysis compositions and methods
US8454547B2 (en) * 2009-02-25 2013-06-04 The Invention Science Fund I, Llc Device, system, and method for controllably reducing inflammatory mediators in a subject
DE102009034150A1 (de) 2009-07-20 2011-01-27 Fresenius Medical Care Deutschland Gmbh Adsorbens zur Adsorption von Hepcidin
EP2679302A1 (de) 2012-06-28 2014-01-01 Zentrum für biomedizinische Technologie der Donau- Universität Krems Selektives Sorptionsmittel für die extrakorporale Blutreinigung
CN106659834B (zh) 2014-08-26 2019-06-18 3M创新有限公司 用于去除血液中的促炎介质以及粒细胞和单核细胞的系统
EP3477300A1 (de) 2017-10-25 2019-05-01 Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG Zellulose-basierter immunadsorber
US20190247560A1 (en) * 2018-02-13 2019-08-15 Gambro Lundia Ab Extracorporeal devices and methods of treating complement factor related diseases
CN114502210A (zh) 2019-09-30 2022-05-13 埃莫图内股份公司 用于体外治疗体液的组合件
CN113967367A (zh) * 2020-07-25 2022-01-25 苏州仝乾医疗科技有限公司 新冠病毒治疗用细胞因子抗体组合物及治疗用吸附剂

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NO162210C (no) * 1987-07-20 1989-11-22 Fasting Biotech As Monoklonale antistoffer mot c5a for in-vitro anvendelse ved immunologiske kvantitative teknikker eller ved isolering av c5a.
GB8918232D0 (en) * 1989-08-10 1989-09-20 Opal Stephen M Pharmaceutical product for the treatment of septic shock
US5626843A (en) * 1993-02-26 1997-05-06 Advanced Biotherapy Concepts, Inc. Treatment of autoimmune diseases, including AIDS, by removel of interferons, TNFs and receptors therefor
CA2156721C (en) * 1993-03-16 1999-06-01 Thomas B. Okarma Removal of selected factors from whole blood or its components
US5620886A (en) * 1993-03-18 1997-04-15 Ludwig Institute For Cancer Research Isolated nucleic acid sequence coding for a tumor rejection antigen precursor processed to at least one tumor rejection antigen presented by HLA-A2
EP0751787B1 (en) 1994-03-23 2005-01-12 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Method for reducing immune and hemostatic dysfunctions during extracorporeal circulation
US6074642A (en) * 1994-05-02 2000-06-13 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Use of antibodies specific to human complement component C5 for the treatment of glomerulonephritis
DE19515554C2 (de) * 1995-04-27 1999-06-17 Braun Melsungen Ag Verwendung eines Mittels und Vorrichtung zur simultanen extrakorporalen Elimination von Tumor-Nekrose-Faktor alpha und bakteriellen Lipopolysacchariden aus Vollblut oder/und Blutplasma
US5922690A (en) 1996-04-25 1999-07-13 Van Gorp; Cornelius L. Dermatan disulfate, an inhibitor of thrombin generation and activation
US6287516B1 (en) * 1998-07-10 2001-09-11 Immunocept, L.L.C. Hemofiltration systems, methods, and devices used to treat inflammatory mediator related disease
US6193681B1 (en) * 1998-09-14 2001-02-27 American Immuno Tech, Llc. Septicemia prevention and treatment system

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Publication number Publication date
IL145557A0 (en) 2002-06-30
US6881408B1 (en) 2005-04-19
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CN1160126C (zh) 2004-08-04

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