KR20010094262A - 규리 황화 모틀 모자이크 바이러스 외피단백질디앤에이서열 및 그의 아미노산서열 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 규리 황화 모틀 모자이크 바이러스 (kyuri green mottle mosaic virus ; KGMMV)의 외피단백질 염기서열과 아미노산 서열에 관한 것이다.본 발명은 KGMMV 병원체의 게놈 유전자중에서 외피단백질 (coat protein) 유전자에 대한 cDNA를 합성하고 클로닝하여 염기서열을 결정하고, 이로부터 외피단백질의 아미노산 서열을 결정한 것에 관한 것이다.

Description

규리 황화 모틀 모자이크 바이러스 외피단백질 디앤에이서열 및 그의 아미노산 서열{Nucleotide and amino acid sequences of full-length coat protein gene of kyuri green mottle mosaic virus (KGMMV)}
본 발명은 규리 황화 모틀 모자이크 바이러스 (kyuri green mottle mosaic virus ; KGMMV)의 외피단백질 염기서열과 아미노산 서열에 관한 것이다.
본 발명은 KGMMV 병원체의 게놈 유전자중에서 외피단백질 (coat protein) 유전자에대한 cDNA를 합성하고 클로닝하여 염기서열을 결정하고, 이로부터 외피단백질의 아미노산 서열을 결정한 것에 관한 것이다.
박과식물 중에서 오이와 호박은 국내의 중요작물로서 우리나라를 비롯하여 아시아권과 유럽, 미국등 전세계에서 대량 재배되고 있다. 그러나, 오이 및 박과작물은 각종 바이러스로 인한 경제적 피해가 매우 큰 현실이며, 이들 바이러스를 방제할 농약이 없는 현실이며, 따라서, 바이러스의 방제를 목적으로 바이러스 저항성 형질전환 식물체를 제작 활용하고 있는 국제적 추세에 있다. 박과식물에는 cucumber green mottle mosaic virus (CGMMV), kyuri green mottle mosaic virus (KGMMV), zucchini yellow mosaic virus (ZYMV), cucumber mosaic virus (CMV), zucchini green mottle mosaic virus (ZGMMV) 등이 문제가 되고 있으며, 국내에도 이들 바이러스가 해마다 큰 경제적 피해를 주고 있다. 따라서, 본 발명에서는 KGMMV의 신속한 유전자 검정과 바이러스 방제를 목적으로 유전공학적으로 바이러스 저항성 식물육성에 직접적으로 활용 가능하며, 인공적인 항체생산의 재료와 식물발현용 바이러스 벡터개발 등에 이용 가능한 KGMMV의 외피단백질 유전자를 유전공학적으로 클로닝하였고 이들의 염기서열과 아미노산 서열을 결정하였다.
본 발명은 규리 황화 모틀 모자이크 바이러스 (kyuri green mottle mosaic virus ; KGMMV)의 외피단백질 염기서열과 아미노산 서열에 관한 것이다.본 발명은 KGMMV 병원체의 게놈 유전자중에서 외피단백질 (coat protein) 유전자에 대한 cDNA를 합성하고 클로닝하여 염기서열을 결정하고, 이로부터 외피단백질의 아미노산 서열을 결정한 것에 관한 것이다.
도면1은 KGMMV에 의한 오이에서의 전형적인 심한 모틀 및 모자이크 병징이고
도면2는 전자현미경 관찰시 300 x 18 nm 크기로 전형적인 tobamovirus 의 전자현미경 사진이며
도면3은 KGMMV의 RT-PCR에 의한 510 bp 크기의 외피단백질 유전자 DNA 산물 (그림A 1번 화살표), 그림A의 1번 산물을 플라스미드벡터 (pGEM-T-Easy)에 클로닝하여 얻은 재조합 클론(클론명 : pKGM-CP)을EcoR I 제한효소로 처리한 다음 삽입된 KGMMV 외피단백질 유전자 (그림B 1번 화살표, M: 1kb plus DNA ladder)를 전기영동에서 확인한 사진이다.
전형적인 심한 모틀 및 모자이크 병징을 발현하는 오이 및 박과식물에서 KGMMV를 분리 및 증식하여 유전자 클로닝의 재료로 사용하였고 (도면 1)
본 바이러스는 Tobamovirus genus에 속하는 전형적인 식물바이러스이며
전자현미경 관찰시 300 x 18 nm 크기로 전형적인 tobamovirus 였다 (도면 2)
정제된 KGMMV genomic RNA를 주형으로 하여 RT-PCR (역전사 중합효소연쇄반응법)로 510 bp 크기의 KGMMV 외피단백질 유전자를 증폭하였으며, 이를 pGEM-T-Easy (Promega) 벡터에 클로닝 하였다 (도면 3). 외피단백질 유전자를 포함하는 재조합 클론은EcoR I 처리로서 삽입된 510 bp 크기의 외피단백질 유전자를 확인하였고 이 재조합 유전자 클론을 사용하여 KGMMV에 대한 외피단백질의 염기서열을 Automatic DNA sequencing법을 사용하여 결정하였다. 결정된 DNA 염기서열을 토대로 외피단백질 유전자의 아미노산 서열을 결정하였다. KGMMV 외피단백질은 169개의 아미노산으로 구성되며 외피단백질의 분자량은 18,191.8 Dalton였다.
실시예1:바이러스 분리 및 증식
1999년 7월 오이에서 심한 모자이크와 모틀증상을 보이는 이병식물체를 수집하였으며 (도면 1) 이로부터 바이러스를 생물학적으로 순수 분리 및 증식 사용하였다.
실시예2:바이러스 정제 및 유전자 분리
바이러스를 떡잎상태의 건전한 쥬키니 호박에 인공적으로 즙액접종하여 바이러스를 대량증식한 다음, 이를 재료로 바이러스를 정제하였다(도면 2). 정제된 바이러스로부터 바이러스 유전자를 SDS-phenol 추출법으로 분리 정제하였다.
실시예3: 외피단백질 유전자의 클로닝
정제된 KGMMV genomic RNA를 주형으로 하고, 외피단백질에 특이적인 프라이머를 제작하여 RT-PCR법으로 target 유전자를 대량 증폭하였고 (도면 3 그림A), 이를 pGEMT-Easy (Promega) 벡터에 TA 클로닝을 실시하여 재조합 유전자를 제작하였다. 선발된 재조합 유전자는 클로닝 부위 양 말단에 존재하는EcoR I 부위를 사용하여EcoR I 제한효소로 절단하여 삽입된 유전자의 크기를 확인하였으며, 이들을 사용하여 DNA 염기서열을 결정하였다 (도면 3 그림B). 결정된 염기서열을 토대로 아미노산 서열을 결정하였으며, 클로닝된 유전자가 유전자 분석을 통해 KGMMV 외피단백질임을 동정하였다.
본 발명에서는 KGMMV의 신속한 유전자 검정과 바이러스 방제를 목적으로 유전공학적으로 바이러스 저항성 식물육성에 직접적으로 활용 가능하며, 인공적인 항체생산의 재료와 식물발현용 바이러스 벡터개발 등에 이용 가능한 KGMMV의 외피단백질 유전자를 유전공학적으로 클로닝하였고 이들의 염기서열과 아미노산 서열을 결정하였다.

Claims (5)

  1. KGMMV의 외피단백질 DNA 염기서열 및 아미노산 서열과 그와 기능적 등가물
    아래 bold체 ATG (1-3)는 외피 단백질의 개시코드이며 아래의 밑줄친 염기(508-510)은 종결코드.
    ATGAACCACCTCGTTTATAACAAGATGTCTTACTCAACCAGTGGTATTC
    GTTCGCTTCCTGCTTTCGCTAAGTCTTTTTATCCTTTTTATGATGTGTA
    TAACCTGTTGGTTTCGGCCCAAGGAGGTGCTCTGCAAACGCAAAATGGT
    AAAGACATTTTGCGTGAGTCCCTCACTGGGTTGTTAACTTCTGTTGCGT
    CTCTCAATTCACGTTTTCCTGCTAATGAGTTTTTCGTGTGGTCTCGTGA
    GTCGCGCATTGCTGCCATAATCGATTCGTTGTTATCCGCTTTGGATTCTA
    GAAATAGGGCTATCGAAGTTGAAAACCCTTCTAATCCTTCTACCGGAGAA
    GCTCTGAATGCGACCAAGCGCAATGACGACGCGTCTACAGCCGCGCACAAC
    GACATTCCTCTGCTTTTAGCAGCTCTGAATGACGGTGTGGGCGTTTTTGA
    TAGTGCGTCTTTTGAGTCAGCTTTCGGTCTTACTTGGACCGCAAGCGCTA
    CTTCCTCAAAGTGA
    MNHLVYNKMSYSTSGIRSLPAFAKSFYPFYDVYNLLVSAQGGALQTQNGKD
    ILRESLTGLLTSVASLNSRFPANEFFVWSRESRIAAIIDSLLSALDSRNRAIEV
    ENPSNPSTGEALNATKRNDDASTAAHNDIPLLLAALNDGVGVFDSASFESA
    FGLTWTASATSSK
  2. KGMMV 외피단백질 유전자를 사용한 식물형질전환벡터의 제작과 그와 기능적 등가물
  3. KGMMV 외피단백질을 이용한 대장균에서의 대량 발현 및 발현산물을 이용한 항체제작과 고등식물에서의 발현을 통한 바이러스 저항성 식물체 개발 및 그와 기능적 등가물
  4. KGMMV 외피단백질 유전자를 사용한 식물체 발현 벡터의 제작과 그와 기능적 등가물
  5. KGMMV 외피단백질 유전자 염기서열을 사용한 바이러스 검정 및 진단용 probe 제작과 그와 기능적 등가물
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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KR100496015B1 (ko) * 2002-11-29 2005-06-16 대한민국 큐리녹반모자이크바이러스 진단용 특이 프라이머
CN107058611A (zh) * 2016-12-19 2017-08-18 云南农业大学 一种烟草花叶病毒属病毒通用检测引物及其方法

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100496015B1 (ko) * 2002-11-29 2005-06-16 대한민국 큐리녹반모자이크바이러스 진단용 특이 프라이머
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