KR20000018071A - 오이 황화 모틀 모자이크 앤에스 계통의 바이러스외피단백질 디앤에이 서열 및 그의 아미노산 서열 - Google Patents
오이 황화 모틀 모자이크 앤에스 계통의 바이러스외피단백질 디앤에이 서열 및 그의 아미노산 서열 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20000018071A KR20000018071A KR1020000000833A KR20000000833A KR20000018071A KR 20000018071 A KR20000018071 A KR 20000018071A KR 1020000000833 A KR1020000000833 A KR 1020000000833A KR 20000000833 A KR20000000833 A KR 20000000833A KR 20000018071 A KR20000018071 A KR 20000018071A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- cgmmv
- amino acid
- nucleotide
- coat protein
- acid sequences
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8201—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation
- C12N15/8202—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation by biological means, e.g. cell mediated or natural vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
- C12N15/8283—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for virus resistance
Abstract
본 발명은 오이 황화 모틀 모자이크 바이러스 (cucumber green mottle mosaic virus ; CGMMV) NS 계통의 외피단백질 염기서열과 아미노산 서열에 관한 것이다.
본 발명은 CGMMV-NS 계통의 게놈 유전자중에서 외피단백질 (coat protein) 유전자에 대한 cDNA를 합성하고 클로닝하여 염기서열을 결정하고, 이로부터 외피단백질의 아미노산 서열을 결정한 것에 관한 것이다.
Description
본 발명은 오이 황화 모틀 모자이크 바이러스 (cucumber green mottle mosaic virus ; CGMMV) NS 계통의 외피단백질 염기서열과 아미노산 서열에 관한 것이다.
본 발명은 CGMMV-NS 계통의 게놈 유전자중에서 외피단백질 (coat protein) 유전자에 대한 cDNA를 합성하고 클로닝하여 염기서열을 결정하고, 이로부터 외피단백질의 아미노산 서열을 결정한 것에 관한 것이다.
박과식물 중에서 수박은 국내의 중요작물로서 우리나라를 비롯하여 아시아권과 유럽, 미국등 전세계에서 대량 재배되고 있다. 그러나, 수박 등은 각종 바이러스로 인한 경제적 피해가 매우 큰 현실이며, 이들 바이러스를 방제할 농약이 없는 현실이며, 따라서, 바이러스의 방제를 목적으로 바이러스 저항성 형질전환 식물체를 제작 활용하고 있는 국제적 추세에 있다. 박과식물에는 cucumber green mottle mosaic virus (CGMMV), zucchini yellow mosaic virus (ZYMV), cucumber mosaic virus (CMV) 등이 문제가 되고 있으며, 국내에도 이들 바이러스가 수박과 메론 등에서 해마다 큰 경제적 피해를 주고 있다. 특히, 수박에 CGMMV가 발병되면 잎의 병징뿐만 아니라 과육이 피수박이 되어 상품적인 가치가 전혀 없게 된다. CGMMV는 국내의 주요 수박재배단지를 중심으로 1980년대 중반부터 현재까지 경제적인 피해가 막심한 바이러스이며, 이로 인한 사회적 불안까지 일으킨 주요방제대상 병원체이다.
본 발명에서는 CGMMV의 방제를 목적으로 유전공학적으로 바이러스 저항성 식물육성에 직접적으로 활용 가능하며, 인공적인 항체생산의 재료와 식물발현용 바이러스 벡터개발 등에 이용 가능한 CGMMV의 외피단백질 유전자를 유전공학적으로 클로닝하였고 이들의 염기서열과 아미노산 서열을 결정하였다.
도면1은CGMMV에 의한 수박에서의 심한 모틀 및 모자이크 병징이고
도면2는 CGMMV-NS 계통의 전자현미경 사진이며
도면3은CGMMV-NS 계통의 RT-PCR에 의한 524 bp 크기의 외피단백질 유전자 DNA 산물 (1번 화살표), 그림의 1번 산물을 플라스미드벡터 (pGEMT-Easy)에 클로닝하여 얻은 재조합 클론(클론명 : pCGNS-CP)을 EcoR I 제한효소로 처리한 다음 삽입된 CGMMV-NS 계통의 외피단백질 유전자 (2번 화살표, M: 1kb DNA ladder)를 전기영동에서 확인한 사진이다.
1 gaagagtcca gttctgtttc ttttgaagat ggcttacaat ccgatcacac ctagcaaact
61 tattgcgttt agtgcttctt atgttcccgt caggacttta cttaattttc tagttgcttc
121 acaaggtacc gctttccaga ctcaagcggg aagagattct ttccgcgagt ccctgtctgc
181 gttaccctcg tctgtcgtag atattaattc tagattccca gatgcgggtt tttacgcttt
241 cctcaacggt cctgtgttga ggcctatctt cgtttcgctt ctcagctcca cggatacgcg
301 taatagggtc attgaggttg tagatcctag caatcctacg actgctgagt cgcttaacgc
361 tgtaaagcgt actgatgacg cgtctacggc cgctagggct gagatagata atttaataga
421 gtctatttct aagggttttg atgtttacga tagggcttca tttgaagccg cgttttcggt
481 agtctggtca gaggctacca cctcgaaagc ttagtttcga gggt
1 MAYNPITPSK LIAFSASYVP VRTLLNFLVA SQGTAFQTQA GRDSFRESLS
51 ALPSSVVDIN SRFPDAGFYA FLNGPVLRPI FVSLLSSTDT RNRVIEVVDP
101 SNPTTAESLN AVKRTDDAST AARAEIDNLI ESISKGFDVY DRASFEAAFS
151 VVWSEATTSK A
실시예1:바이러스 분리
1998년 9월 나주지역에서 심한 모자이크와 모틀증상을 보이는 이병된 수박을 수집하였으며 (도면 1) 이로부터 바이러스를 생물학적으로 순수 분리하였다.
실시예2:바이러스 정제 및 유전자 분리
바이러스를 떡잎상태의 건전한 오이에 인공적으로 즙액접종하여 바이러스를 대량증식한 다음, 이를 재료로 바이러스를 정제하였다. 정제된 바이러스로부터 바이러스 유전자를 phenol 추출법으로 분리 정제하였다.
실시예3:외피단백질 유전자의 클로닝
정제된 CGMMV-NS 계통 RNA를 주형으로 하고, 외피단백질에 특이적인 프라이머를 제작하여 RT-PCR법으로 target 유전자를 대량 증폭하였고, 이를 pGEMT-Easy (Promega) 벡터에 TA 클로닝을 실시하여 재조합 유전자를 제작하였다. 선발된 재조합 유전자는 클로닝 부위 양 말단에 존재하는 EcoR I 부위를 사용하여 EcoR I 제한효소로 절단하여 삽입된 유전자의 크기를 확인하였으며, 이들을 사용하여 DNA 염기서열을 결정하였다 (도면 3 참조). 결정된 염기서열을 토대로 아미노산 서열을 결정하였으며, 클로닝된 유전자가 유전자 분석을 통해 CGMMV 외피단백질임을 동정하였다.
본 발명에서는 CGMMV의 방제를 목적으로 유전공학적으로 바이러스 저항성 식물육성에 직접적으로 활용 가능하며, 인공적인 항체생산의 재료와 식물발현용 바이러스 벡터개발 등에 이용 가능한 CGMMV의 외피단백질 유전자를 유전공학적으로 클로닝하였고 이들의 염기서열과 아미노산 서열을 결정하였다.
Claims (3)
- CGMMV-NS 계통의 외피단백질 DNA 염기서열 및 아미노산 서열과 그와 기능적 등가물
- CGMMV-NS 계통 외피단백질 유전자의 클로닝 방법 및 식물형질전환벡터의 제작과 그와 기능적 등가물
- CGMMV-NS 계통 외피단백질을 이용한 대장균에서의 대량 발현 및 발현산물을 이용한 항체제작과 고등식물에서의 발현을 통한 바이러스 저항성 식물체 개발 및 그와 기능적 등가물
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020000000833A KR20000018071A (ko) | 2000-01-10 | 2000-01-10 | 오이 황화 모틀 모자이크 앤에스 계통의 바이러스외피단백질 디앤에이 서열 및 그의 아미노산 서열 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020000000833A KR20000018071A (ko) | 2000-01-10 | 2000-01-10 | 오이 황화 모틀 모자이크 앤에스 계통의 바이러스외피단백질 디앤에이 서열 및 그의 아미노산 서열 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20000018071A true KR20000018071A (ko) | 2000-04-06 |
Family
ID=19637276
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020000000833A KR20000018071A (ko) | 2000-01-10 | 2000-01-10 | 오이 황화 모틀 모자이크 앤에스 계통의 바이러스외피단백질 디앤에이 서열 및 그의 아미노산 서열 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR20000018071A (ko) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101156476B1 (ko) * | 2009-11-10 | 2012-06-18 | 주식회사 엔엔피 | 투명발열 글라스 제조방법 |
-
2000
- 2000-01-10 KR KR1020000000833A patent/KR20000018071A/ko not_active Application Discontinuation
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101156476B1 (ko) * | 2009-11-10 | 2012-06-18 | 주식회사 엔엔피 | 투명발열 글라스 제조방법 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Bezerra et al. | Increase of tospoviral diversity in Brazil with the identification of two new tospovirus species, one from chrysanthemum and one from zucchini | |
| US7235710B2 (en) | Regulatory sequence | |
| CN111206041B (zh) | OsBAK1P基因在控制水稻抗旱性中的应用 | |
| CN109852618A (zh) | 一种节瓜WRKY类转录因子基因CqWRKY1及其应用 | |
| CN1119422C (zh) | 抗病毒植物 | |
| CN109134633B (zh) | 抗稻瘟病蛋白和基因、分离的核酸及其应用 | |
| CN114958903A (zh) | 一种增强大豆香味的方法 | |
| CN106591320A (zh) | 促进提前开花的白桦BplSPL1基因及其编码蛋白 | |
| JP2003527834A (ja) | 新規な核酸分子 | |
| CN103320448B (zh) | 一种岷江百合bZIP转录因子基因LrbZIP1及应用 | |
| KR20000018071A (ko) | 오이 황화 모틀 모자이크 앤에스 계통의 바이러스외피단백질 디앤에이 서열 및 그의 아미노산 서열 | |
| CN107698672A (zh) | 一种水稻雄性不育相关蛋白及其编码基因与应用 | |
| US6300133B1 (en) | RNA transformation vectors derived from an uncapped single-component RNA virus | |
| KR20000018072A (ko) | 오이 황화 모틀 모자이크 와이 계통의 바이러스외피단백질 디앤에이 서열 및 그의 아미노산 서열 | |
| CN108517322B (zh) | 一种掌叶半夏胰蛋白酶抑制剂基因、其编码的蛋白及抗虫应用 | |
| CN104611335A (zh) | 花生特异启动子AhRSP与应用 | |
| CN114349834B (zh) | 富含半胱氨酸毒蛋白、表达载体及其在抑制植物病毒侵染中的应用 | |
| CN109762833B (zh) | 一种易变山羊草苯丙氨酸解氨酶基因及其应用 | |
| CN114230649B (zh) | 水稻分蘖力相关的Tn1蛋白及其相关生物材料与应用 | |
| KR102256363B1 (ko) | 토마토잎말림뉴델리바이러스 dna-a 및 dna-b를 접종할 수 있는 감염성 클론 및 이의 용도 | |
| CN110295192B (zh) | 利用Gateway技术构建TYLCV和ToCV的双价RNAi表达载体及其应用 | |
| CN112899305B (zh) | 一种缩短水稻生育期的方法、蛋白质、核酸分子、生物材料及其应用 | |
| US6300134B1 (en) | RNA transformation vectors derived from a single-component RNA virus and contain an intervening sequence between the cap and the 5′ end | |
| KR20010094262A (ko) | 규리 황화 모틀 모자이크 바이러스 외피단백질디앤에이서열 및 그의 아미노산서열 | |
| KR20000018073A (ko) | 유전자 증폭용 프라이머의 고안과 이를 이용한이병식물체로부터 오이 황화 모틀 모자이크 바이러스의신속한 유전자 진단 방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| WITN | Withdrawal due to no request for examination |