KR20010043583A - 신규의 폴리펩티드, 그 폴리펩티드를 암호화하는 ｃＤＮＡ및 그 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 인간의 신규 폴리펩티드, 그 폴리펩티드를 암호화하는 cDNA 및 그 용도에 관한 것이다.

본 발명의 폴리펩티드는 조혈 세포 제어 활성, 조직 생성/수복 활성, 악티빈/인히빈 활성, 주화성/화학 운동성 활성, 응혈 및 혈전 활성, 수용체/리간드 활성 등을 지니고, 여러 가지의 질환 예방 및/또는 치료에 유용하다고 생각된다.

Description

신규의 폴리펩티드, 그 폴리펩티드를 암호화하는 ｃＤＮＡ 및 그 용도{NOVEL POLYPEPTIDES, cDNAS ENCODING THE SAME AND UTILIZATION THEREOF}

＜110＞ Ono Pharmaceutical Co., Ltd.

＜120＞ Novel Polypeptides, cDNA coding these polypeptides and Use thereof

＜130＞ ONF-2975PCT

＜141＞ 1999-05-13

＜150＞ JP 10-131815

＜151＞ 1998-05-14

＜160＞ 19

＜170＞ PatentIn Ver. 2.0

＜210＞ 1

＜211＞ 344

＜212＞ PRT

＜213＞ Homo sapiens

＜400＞ 1

Met Lys Thr Ile Gln Pro Lys Met His Asn Ser Ile Ser Trp Ala Ile

-25 -20 -15

Phe Thr Gly Leu Ala Ala Leu Cys Leu Phe Gln Gly Val Pro Val Arg

-10 -5 -1 1

Ser Gly Asp Ala Thr Phe Pro Lys Ala Met Asp Asn Val Thr Val Arg

5 10 15 20

Gln Gly Glu Ser Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Asp Asn Arg Val Thr

25 30 35

Arg Val Ala Trp Leu Asn Arg Ser Thr Ile Leu Tyr Ala Gly Asn Asp

40 45 50

Lys Trp Cys Leu Asp Pro Arg Val Val Leu Leu Ser Asn Thr Gln Thr

55 60 65

Gln Tyr Ser Ile Glu Ile Gln Asn Val Asp Val Tyr Asp Glu Gly Pro

70 75 80

Tyr Thr Cys Ser Val Gln Thr Asp Asn His Pro Lys Thr Ser Arg Val

85 90 95 100

His Leu Ile Val Gln Val Ser Pro Lys Ile Val Glu Ile Ser Ser Asp

105 110 115

Ile Ser Ile Asn Glu Gly Asn Asn Ile Ser Leu Thr Cys Ile Ala Thr

120 125 130

Gly Arg Pro Glu Pro Thr Val Thr Trp Arg His Ile Ser Pro Lys Ala

135 140 145

Val Gly Phe Val Ser Glu Asp Glu Tyr Leu Glu Ile Gln Gly Ile Thr

150 155 160

Arg Glu Gln Ser Gly Asp Tyr Glu Cys Ser Ala Ser Asn Asp Val Ala

165 170 175 180

Ala Pro Val Val Arg Arg Val Lys Val Thr Val Asn Tyr Pro Pro Tyr

185 190 195

Ile Ser Glu Ala Lys Gly Thr Gly Val Pro Val Gly Gln Lys Gly Thr

200 205 210

Leu Gln Cys Glu Ala Ser Ala Val Pro Ser Ala Glu Phe Gln Trp Tyr

215 220 225

Lys Asp Asp Lys Arg Leu Ile Glu Gly Lys Lys Gly Val Lys Val Glu

230 235 240

Asn Arg Pro Phe Leu Ser Lys Leu Ile Phe Phe Asn Val Ser Glu His

245 250 255 260

Asp Tyr Gly Asn Tyr Thr Cys Val Ala Ser Asn Lys Leu Gly His Thr

265 270 275

Asn Ala Ser Ile Met Leu Phe Gly Pro Gly Ala Val Ser Glu Val Ser

280 285 290

Asn Gly Thr Ser Arg Arg Ala Gly Cys Val Trp Leu Leu Pro Leu Leu

295 300 305

Val Leu His Leu Leu Leu Lys Phe

310 315

＜210＞ 2

＜211＞ 1032

＜212＞ DNA

＜213＞ Homo sapiens

＜400＞ 2

atgaaaacca tccagccaaa aatgcacaat tctatctctt gggcaatctt cacggggctg 60

gctgctctgt gtctcttcca aggagtgccc gtgcgcagcg gagatgccac cttccccaaa 120

gctatggaca acgtgacggt ccggcagggg gagagcgcca ccctcaggtg cactattgac 180

aaccgggtca cccgggtggc ctggctaaac cgcagcacca tcctctatgc tgggaatgac 240

aagtggtgcc tggatcctcg cgtggtcctt ctgagcaaca cccaaacgca gtacagcatc 300

gagatccaga acgtggatgt gtatgacgag ggcccttaca cctgctcggt gcagacagac 360

aaccacccaa agacctctag ggtccacctc attgtgcaag tatctcccaa aattgtagag 420

atttcttcag atatctccat taatgaaggg aacaatatta gcctcacctg catagcaact 480

ggtagaccag agcctacggt tacttggaga cacatctctc ccaaagcggt tggctttgtg 540

agtgaagacg aatacttgga aattcagggc atcacccggg agcagtcagg ggactacgag 600

tgcagtgcct ccaatgacgt ggccgcgccc gtggtacgga gagtaaaggt caccgtgaac 660

tatccaccat acatttcaga agccaagggt acaggtgtcc ccgtgggaca aaaggggaca 720

ctgcagtgtg aagcctcagc agtcccctca gcagaattcc agtggtacaa ggatgacaaa 780

agactgattg aaggaaagaa aggggtgaaa gtggaaaaca gacctttcct ctcaaaactc 840

atcttcttca atgtctctga acatgactat gggaactaca cttgcgtggc ctccaacaag 900

ctgggccaca ccaatgccag catcatgcta tttggtccag gcgccgtcag cgaggtgagc 960

aacggcacgt cgaggagggc aggctgcgtc tggctgctgc ctcttctggt cttgcacctg 1020

cttctcaaat tt 1032

＜210＞ 3

＜211＞ 1693

＜212＞ DNA

＜213＞ Homo sapiens

＜220＞

＜223＞ Clone OC001 derived from human brain

＜220＞

＜221＞ CDS

＜222＞ (130)..(1161)

＜220＞

＜221＞ sig_peptide

＜222＞ (130)..(213)

＜220＞

＜221＞ mat_peptide

＜222＞ (214)..(1161)

＜400＞ 3

gtccttcagc aaaacagtgg atttaaatct ccttgcacaa gcttgagagc aacacaatct 60

atcaggaaag aaagaaagaa aaaaaaccga acctgacaaa aaagaagaaa aagaagaaga 120

aaaaaaatc atg aaa acc atc cag cca aaa atg cac aat tct atc tct tgg 171

Met Lys Thr Ile Gln Pro Lys Met His Asn Ser Ile Ser Trp

-25 -20 -15

gca atc ttc acg ggg ctg gct gct ctg tgt ctc ttc caa gga gtg ccc 219

Ala Ile Phe Thr Gly Leu Ala Ala Leu Cys Leu Phe Gln Gly Val Pro

-10 -5 -1 1

gtg cgc agc gga gat gcc acc ttc ccc aaa gct atg gac aac gtg acg 267

Val Arg Ser Gly Asp Ala Thr Phe Pro Lys Ala Met Asp Asn Val Thr

5 10 15

gtc cgg cag ggg gag agc gcc acc ctc agg tgc act att gac aac cgg 315

Val Arg Gln Gly Glu Ser Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Asp Asn Arg

20 25 30

gtc acc cgg gtg gcc tgg cta aac cgc agc acc atc ctc tat gct ggg 363

Val Thr Arg Val Ala Trp Leu Asn Arg Ser Thr Ile Leu Tyr Ala Gly

35 40 45 50

aat gac aag tgg tgc ctg gat cct cgc gtg gtc ctt ctg agc aac acc 411

Asn Asp Lys Trp Cys Leu Asp Pro Arg Val Val Leu Leu Ser Asn Thr

55 60 65

caa acg cag tac agc atc gag atc cag aac gtg gat gtg tat gac gag 459

Gln Thr Gln Tyr Ser Ile Glu Ile Gln Asn Val Asp Val Tyr Asp Glu

70 75 80

ggc cct tac acc tgc tcg gtg cag aca gac aac cac cca aag acc tct 507

Gly Pro Tyr Thr Cys Ser Val Gln Thr Asp Asn His Pro Lys Thr Ser

85 90 95

agg gtc cac ctc att gtg caa gta tct ccc aaa att gta gag att tct 555

Arg Val His Leu Ile Val Gln Val Ser Pro Lys Ile Val Glu Ile Ser

100 105 110

tca gat atc tcc att aat gaa ggg aac aat att agc ctc acc tgc ata 603

Ser Asp Ile Ser Ile Asn Glu Gly Asn Asn Ile Ser Leu Thr Cys Ile

115 120 125 130

gca act ggt aga cca gag cct acg gtt act tgg aga cac atc tct ccc 651

Ala Thr Gly Arg Pro Glu Pro Thr Val Thr Trp Arg His Ile Ser Pro

135 140 145

aaa gcg gtt ggc ttt gtg agt gaa gac gaa tac ttg gaa att cag ggc 699

Lys Ala Val Gly Phe Val Ser Glu Asp Glu Tyr Leu Glu Ile Gln Gly

150 155 160

atc acc cgg gag cag tca ggg gac tac gag tgc agt gcc tcc aat gac 747

Ile Thr Arg Glu Gln Ser Gly Asp Tyr Glu Cys Ser Ala Ser Asn Asp

165 170 175

gtg gcc gcg ccc gtg gta cgg aga gta aag gtc acc gtg aac tat cca 795

Val Ala Ala Pro Val Val Arg Arg Val Lys Val Thr Val Asn Tyr Pro

180 185 190

cca tac att tca gaa gcc aag ggt aca ggt gtc ccc gtg gga caa aag 843

Pro Tyr Ile Ser Glu Ala Lys Gly Thr Gly Val Pro Val Gly Gln Lys

195 200 205 210

ggg aca ctg cag tgt gaa gcc tca gca gtc ccc tca gca gaa ttc cag 891

Gly Thr Leu Gln Cys Glu Ala Ser Ala Val Pro Ser Ala Glu Phe Gln

215 220 225

tgg tac aag gat gac aaa aga ctg att gaa gga aag aaa ggg gtg aaa 939

Trp Tyr Lys Asp Asp Lys Arg Leu Ile Glu Gly Lys Lys Gly Val Lys

230 235 240

gtg gaa aac aga cct ttc ctc tca aaa ctc atc ttc ttc aat gtc tct 987

Val Glu Asn Arg Pro Phe Leu Ser Lys Leu Ile Phe Phe Asn Val Ser

245 250 255

gaa cat gac tat ggg aac tac act tgc gtg gcc tcc aac aag ctg ggc 1035

Glu His Asp Tyr Gly Asn Tyr Thr Cys Val Ala Ser Asn Lys Leu Gly

260 265 270

cac acc aat gcc agc atc atg cta ttt ggt cca ggc gcc gtc agc gag 1083

His Thr Asn Ala Ser Ile Met Leu Phe Gly Pro Gly Ala Val Ser Glu

275 280 285 290

gtg agc aac ggc acg tcg agg agg gca ggc tgc gtc tgg ctg ctg cct 1131

Val Ser Asn Gly Thr Ser Arg Arg Ala Gly Cys Val Trp Leu Leu Pro

295 300 305

ctt ctg gtc ttg cac ctg ctt ctc aaa ttt tgatgtgagt gccacttccc 1181

Leu Leu Val Leu His Leu Leu Leu Lys Phe

310 315

cacccgggaa aggctgccgc caccaccacc accaacacaa cagcaatggc aacaccgaca 1241

gcaaccaatc agatatatac aaatgaaatt agaagaaaca cagcctcatg ggacagaaat 1301

ttgagggagg ggaacaaaga atactttggg gggaaaaaag ttttaaaaaa gaaattgaaa 1361

attgccttgc agatatttag gtacaatgga gttttctttt cccaaacggg aagaacacag 1421

cacacccggc ttggacccac tgcaagctgc atcgtgcaac ctctttggtg ccagtgtggg 1481

caagggctca gcctctctgc ccacagagtg cccccacgtg gaacattctg gagctggcca 1541

tcccaaattc aatcagtcca tagagacgaa cagaatgaga ccttccggcc caagcgtggc 1601

gctgcgggca ctttggtaga ctgtgccacc acggcgtgtg ttgtgaaacg tgaaataaaa 1661

agagcaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aa 1693

＜210＞ 4

＜211＞ 313

＜212＞ PRT

＜213＞ Homo sapiens

＜400＞ 4

Arg Ser Gly Asp Ala Thr Phe Pro Lys Ala Met Asp Asn Val Thr Val

1 5 10 15

Arg Gln Gly Glu Ser Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Asp Asn Arg Val

20 25 30

Thr Arg Val Ala Trp Leu Asn Arg Ser Thr Ile Leu Tyr Ala Gly Asn

35 40 45

Asp Lys Trp Cys Leu Asp Pro Arg Val Val Leu Leu Ser Asn Thr Gln

50 55 60

Thr Gln Tyr Ser Ile Glu Ile Gln Asn Val Asp Val Tyr Asp Glu Gly

65 70 75 80

Pro Tyr Thr Cys Ser Val Gln Thr Asp Asn His Pro Lys Thr Ser Arg

85 90 95

Val His Leu Ile Val Gln Val Ser Pro Lys Ile Val Glu Ile Ser Ser

100 105 110

Asp Ile Ser Ile Asn Glu Gly Asn Asn Ile Ser Leu Thr Cys Ile Ala

115 120 125

Thr Gly Arg Pro Glu Pro Thr Val Thr Trp Arg His Ile Ser Pro Lys

130 135 140

Ala Val Gly Phe Val Ser Glu Asp Glu Tyr Leu Glu Ile Gln Gly Ile

145 150 155 160

Thr Arg Glu Gln Ser Gly Asp Tyr Glu Cys Ser Ala Ser Asn Asp Val

165 170 175

Ala Ala Pro Val Val Arg Arg Val Lys Val Thr Val Asn Tyr Pro Pro

180 185 190

Tyr Ile Ser Glu Ala Lys Gly Thr Gly Val Pro Val Gly Gln Lys Gly

195 200 205

Thr Leu Gln Cys Glu Ala Ser Ala Val Pro Ser Ala Glu Phe Gln Trp

210 215 220

Tyr Lys Asp Asp Lys Arg Leu Ile Glu Gly Lys Lys Gly Val Lys Val

225 230 235 240

Glu Asn Arg Pro Phe Leu Ser Lys Leu Ile Phe Phe Asn Val Ser Glu

245 250 255

His Asp Tyr Gly Asn Tyr Thr Cys Val Ala Ser Asn Lys Leu Gly His

260 265 270

Thr Asn Ala Ser Ile Met Leu Phe Gly Pro Gly Ala Val Ser Glu Val

275 280 285

Ser Asn Gly Thr Ser Arg Arg Ala Gly Cys Val Trp Leu Leu Pro Leu

290 295 300

Leu Val Leu His Leu Leu Leu Lys Phe

305 310

＜210＞ 5

＜211＞ 939

＜212＞ DNA

＜213＞ Homo sapiens

＜400＞ 5

cgcagcggag atgccacctt ccccaaagct atggacaacg tgacggtccg gcagggggag 60

agcgccaccc tcaggtgcac tattgacaac cgggtcaccc gggtggcctg gctaaaccgc 120

agcaccatcc tctatgctgg gaatgacaag tggtgcctgg atcctcgcgt ggtccttctg 180

agcaacaccc aaacgcagta cagcatcgag atccagaacg tggatgtgta tgacgagggc 240

ccttacacct gctcggtgca gacagacaac cacccaaaga cctctagggt ccacctcatt 300

gtgcaagtat ctcccaaaat tgtagagatt tcttcagata tctccattaa tgaagggaac 360

aatattagcc tcacctgcat agcaactggt agaccagagc ctacggttac ttggagacac 420

atctctccca aagcggttgg ctttgtgagt gaagacgaat acttggaaat tcagggcatc 480

acccgggagc agtcagggga ctacgagtgc agtgcctcca atgacgtggc cgcgcccgtg 540

gtacggagag taaaggtcac cgtgaactat ccaccataca tttcagaagc caagggtaca 600

ggtgtccccg tgggacaaaa ggggacactg cagtgtgaag cctcagcagt cccctcagca 660

gaattccagt ggtacaagga tgacaaaaga ctgattgaag gaaagaaagg ggtgaaagtg 720

gaaaacagac ctttcctctc aaaactcatc ttcttcaatg tctctgaaca tgactatggg 780

aactacactt gcgtggcctc caacaagctg ggccacacca atgccagcat catgctattt 840

ggtccaggcg ccgtcagcga ggtgagcaac ggcacgtcga ggagggcagg ctgcgtctgg 900

ctgctgcctc ttctggtctt gcacctgctt ctcaaattt 939

＜210＞ 6

＜211＞ 478

＜212＞ PRT

＜213＞ Homo sapiens

＜400＞ 6

Met Phe Lys Phe His Gln Met Lys His Ile Phe Glu Ile Leu Asp Lys

1 5 10 15

Met Arg Cys Leu Arg Lys Arg Ser Thr Val Ser Phe Leu Gly Val Leu

20 25 30

Val Ile Phe Leu Leu Phe Met Asn Leu Tyr Ile Glu Asp Ser Tyr Val

35 40 45

Leu Glu Gly Asp Lys Gln Leu Ile Arg Glu Thr Ser Thr His Gln Leu

50 55 60

Asn Ser Glu Arg Tyr Val His Thr Phe Lys Asp Leu Ser Asn Phe Ser

65 70 75 80

Gly Ala Ile Asn Val Thr Tyr Arg Tyr Leu Ala Ala Thr Pro Leu Gln

85 90 95

Arg Lys Arg Tyr Leu Thr Ile Gly Leu Ser Ser Val Lys Arg Lys Lys

100 105 110

Gly Asn Tyr Leu Leu Glu Thr Ile Lys Ser Ile Phe Glu Gln Ser Ser

115 120 125

Tyr Glu Glu Leu Lys Glu Ile Ser Val Val Ile His Leu Ala Asp Phe

130 135 140

Asn Ser Ser Trp Arg Asp Ala Met Val Gln Asp Ile Thr Gln Lys Phe

145 150 155 160

Ala His His Ile Ile Ala Gly Arg Leu Met Val Ile His Ala Pro Glu

165 170 175

Glu Tyr Tyr Pro Ile Leu Asp Gly Leu Lys Arg Asn Tyr Asn Asp Pro

180 185 190

Glu Asp Arg Val Lys Phe Arg Ser Lys Gln Asn Val Asp Tyr Thr Phe

195 200 205

Leu Leu Asn Phe Cys Ala Asn Thr Ser Asp Tyr Tyr Val Met Leu Glu

210 215 220

Asp Asp Val Arg Cys Ser Lys Asn Phe Leu Thr Ala Ile Lys Lys Val

225 230 235 240

Ile Ala Ser Leu Glu Gly Thr Tyr Trp Val Thr Leu Glu Phe Ser Lys

245 250 255

Leu Gly Tyr Ile Gly Lys Leu Tyr His Ser His Asp Leu Pro Arg Leu

260 265 270

Ala His Phe Leu Leu Met Phe Tyr Gln Glu Met Pro Cys Asp Trp Leu

275 280 285

Leu Thr His Phe Arg Gly Leu Leu Ala Gln Lys Asn Val Ile Arg Phe

290 295 300

Lys Pro Ser Leu Phe Gln His Met Gly Tyr Tyr Ser Ser Tyr Lys Gly

305 310 315 320

Thr Glu Asn Lys Leu Lys Asp Asp Asp Phe Glu Glu Glu Ser Phe Asp

325 330 335

Ile Pro Asp Asn Pro Pro Ala Ser Leu Tyr Thr Asn Met Asn Val Phe

340 345 350

Glu Asn Tyr Glu Ala Ser Lys Ala Tyr Ser Ser Val Asp Glu Tyr Phe

355 360 365

Trp Gly Lys Pro Pro Ser Thr Gly Asp Val Phe Val Ile Val Phe Glu

370 375 380

Asn Pro Ile Ile Ile Lys Lys Ile Lys Val Asn Thr Gly Thr Glu Asp

385 390 395 400

Arg Gln Asn Asp Ile Leu His His Gly Ala Leu Asp Val Gly Glu Asn

405 410 415

Val Met Pro Ser Lys Gln Arg Gly Gln Cys Ser Thr Tyr Leu Arg Leu

420 425 430

Gly Glu Phe Lys Asn Gly Asn Phe Glu Met Ser Gly Val Asn Gln Lys

435 440 445

Ile Pro Phe Asp Ile His Cys Met Arg Ile Tyr Val Thr Lys Thr Gln

450 455 460

Lys Glu Trp Leu Ile Ile Arg Ser Ile Ser Ile Trp Thr Ser

465 470 475

＜210＞ 7

＜211＞ 1434

＜212＞ DNA

＜213＞ Homo sapiens

＜400＞ 7

atgtttaaat ttcatcaaat gaaacatatt tttgaaatac ttgataaaat gagatgcctg 60

agaaaacgtt ctacagtgtc attcttggga gttcttgtca tttttctcct ttttatgaac 120

ttgtacattg aagatagcta tgttctggaa ggagacaaac aacttataag ggaaacatcc 180

acacatcaac tgaattcaga acgctatgtt catactttca aggatttatc taatttctca 240

ggagccataa atgtcaccta tcgctaccta gctgccacac ctttacaaag aaagcggtat 300

cttacaattg gactttcttc agtaaagcga aaaaaaggaa actatttact tgagacaatt 360

aagtcaattt ttgagcaatc cagctatgaa gagctgaagg aaatttcagt ggtgattcac 420

ctagcagact ttaattcttc ctggcgtgat gccatggtcc aggatattac acagaaattt 480

gcgcaccata ttattgcagg aagattaatg gttatacatg ctccagagga gtattaccca 540

atcctagatg gccttaaaag aaattacaat gatccagaag atagagtcaa atttcgttcc 600

aagcaaaatg tagattatac ttttctgctt aatttttgtg ccaatacttc agactattat 660

gtaatgcttg aagatgatgt tcgatgttca aaaaatttct taactgccat caagaaagtc 720

attgcatccc tagaaggaac ttactgggta actcttgaat tctctaagct tggctacatt 780

ggtaaactct atcattctca tgatctccca cgtttggccc attttttatt aatgttttat 840

caagaaatgc cttgtgattg gctattgact catttccgtg gtctgttggc tcagaaaaat 900

gtgatccgtt ttaaaccatc tctctttcag cacatgggct attattcatc atacaaaggg 960

acggagaata agctgaagga tgatgatttt gaagaggagt catttgacat tcctgataac 1020

ccccctgcaa gtctgtacac caacatgaat gtgtttgaaa attatgaagc aagcaaggct 1080

tacagtagtg ttgatgagta cttttggggg aaaccacctt caacaggaga tgtttttgtg 1140

attgtatttg aaaatccaat tataataaaa aaaattaaag taaatactgg aacagaagat 1200

cggcaaaatg atattttgca tcatggagcc ctagatgttg gggaaaacgt tatgcctagc 1260

aaacaaaggg gacaatgttc tacttactta agactaggag aattcaaaaa tggaaacttt 1320

gaaatgtcag gtgtaaatca aaaaattcca tttgatatac attgtatgag gatatatgtc 1380

accaaaacac aaaaggaatg gctaattatt aggagtatta gcatttggac ttct 1434

＜210＞ 8

＜211＞ 2131

＜212＞ DNA

＜213＞ Homo sapiens

＜220＞

＜223＞ Clone OM237 derived from human brain

＜220＞

＜221＞ CDS

＜222＞ (114)..(1547)

＜400＞ 8

ccagaaagca cagccctgat tctgcgtgag aaaggctatc tctacagaaa ctaaaacggt 60

atcaacggtt tctgtacagc acagattatg acagcgtctt tcttaagaag aga atg 116

Met

1

ttt aaa ttt cat caa atg aaa cat att ttt gaa ata ctt gat aaa atg 164

Phe Lys Phe His Gln Met Lys His Ile Phe Glu Ile Leu Asp Lys Met

5 10 15

aga tgc ctg aga aaa cgt tct aca gtg tca ttc ttg gga gtt ctt gtc 212

Arg Cys Leu Arg Lys Arg Ser Thr Val Ser Phe Leu Gly Val Leu Val

20 25 30

att ttt ctc ctt ttt atg aac ttg tac att gaa gat agc tat gtt ctg 260

Ile Phe Leu Leu Phe Met Asn Leu Tyr Ile Glu Asp Ser Tyr Val Leu

35 40 45

gaa gga gac aaa caa ctt ata agg gaa aca tcc aca cat caa ctg aat 308

Glu Gly Asp Lys Gln Leu Ile Arg Glu Thr Ser Thr His Gln Leu Asn

50 55 60 65

tca gaa cgc tat gtt cat act ttc aag gat tta tct aat ttc tca gga 356

Ser Glu Arg Tyr Val His Thr Phe Lys Asp Leu Ser Asn Phe Ser Gly

70 75 80

gcc ata aat gtc acc tat cgc tac cta gct gcc aca cct tta caa aga 404

Ala Ile Asn Val Thr Tyr Arg Tyr Leu Ala Ala Thr Pro Leu Gln Arg

85 90 95

aag cgg tat ctt aca att gga ctt tct tca gta aag cga aaa aaa gga 452

Lys Arg Tyr Leu Thr Ile Gly Leu Ser Ser Val Lys Arg Lys Lys Gly

100 105 110

aac tat tta ctt gag aca att aag tca att ttt gag caa tcc agc tat 500

Asn Tyr Leu Leu Glu Thr Ile Lys Ser Ile Phe Glu Gln Ser Ser Tyr

115 120 125

gaa gag ctg aag gaa att tca gtg gtg att cac cta gca gac ttt aat 548

Glu Glu Leu Lys Glu Ile Ser Val Val Ile His Leu Ala Asp Phe Asn

130 135 140 145

tct tcc tgg cgt gat gcc atg gtc cag gat att aca cag aaa ttt gcg 596

Ser Ser Trp Arg Asp Ala Met Val Gln Asp Ile Thr Gln Lys Phe Ala

150 155 160

cac cat att att gca gga aga tta atg gtt ata cat gct cca gag gag 644

His His Ile Ile Ala Gly Arg Leu Met Val Ile His Ala Pro Glu Glu

165 170 175

tat tac cca atc cta gat ggc ctt aaa aga aat tac aat gat cca gaa 692

Tyr Tyr Pro Ile Leu Asp Gly Leu Lys Arg Asn Tyr Asn Asp Pro Glu

180 185 190

gat aga gtc aaa ttt cgt tcc aag caa aat gta gat tat act ttt ctg 740

Asp Arg Val Lys Phe Arg Ser Lys Gln Asn Val Asp Tyr Thr Phe Leu

195 200 205

ctt aat ttt tgt gcc aat act tca gac tat tat gta atg ctt gaa gat 788

Leu Asn Phe Cys Ala Asn Thr Ser Asp Tyr Tyr Val Met Leu Glu Asp

210 215 220 225

gat gtt cga tgt tca aaa aat ttc tta act gcc atc aag aaa gtc att 836

Asp Val Arg Cys Ser Lys Asn Phe Leu Thr Ala Ile Lys Lys Val Ile

230 235 240

gca tcc cta gaa gga act tac tgg gta act ctt gaa ttc tct aag ctt 884

Ala Ser Leu Glu Gly Thr Tyr Trp Val Thr Leu Glu Phe Ser Lys Leu

245 250 255

ggc tac att ggt aaa ctc tat cat tct cat gat ctc cca cgt ttg gcc 932

Gly Tyr Ile Gly Lys Leu Tyr His Ser His Asp Leu Pro Arg Leu Ala

260 265 270

cat ttt tta tta atg ttt tat caa gaa atg cct tgt gat tgg cta ttg 980

His Phe Leu Leu Met Phe Tyr Gln Glu Met Pro Cys Asp Trp Leu Leu

275 280 285

act cat ttc cgt ggt ctg ttg gct cag aaa aat gtg atc cgt ttt aaa 1028

Thr His Phe Arg Gly Leu Leu Ala Gln Lys Asn Val Ile Arg Phe Lys

290 295 300 305

cca tct ctc ttt cag cac atg ggc tat tat tca tca tac aaa ggg acg 1076

Pro Ser Leu Phe Gln His Met Gly Tyr Tyr Ser Ser Tyr Lys Gly Thr

310 315 320

gag aat aag ctg aag gat gat gat ttt gaa gag gag tca ttt gac att 1124

Glu Asn Lys Leu Lys Asp Asp Asp Phe Glu Glu Glu Ser Phe Asp Ile

325 330 335

cct gat aac ccc cct gca agt ctg tac acc aac atg aat gtg ttt gaa 1172

Pro Asp Asn Pro Pro Ala Ser Leu Tyr Thr Asn Met Asn Val Phe Glu

340 345 350

aat tat gaa gca agc aag gct tac agt agt gtt gat gag tac ttt tgg 1220

Asn Tyr Glu Ala Ser Lys Ala Tyr Ser Ser Val Asp Glu Tyr Phe Trp

355 360 365

ggg aaa cca cct tca aca gga gat gtt ttt gtg att gta ttt gaa aat 1268

Gly Lys Pro Pro Ser Thr Gly Asp Val Phe Val Ile Val Phe Glu Asn

370 375 380 385

cca att ata ata aaa aaa att aaa gta aat act gga aca gaa gat cgg 1316

Pro Ile Ile Ile Lys Lys Ile Lys Val Asn Thr Gly Thr Glu Asp Arg

390 395 400

caa aat gat att ttg cat cat gga gcc cta gat gtt ggg gaa aac gtt 1364

Gln Asn Asp Ile Leu His His Gly Ala Leu Asp Val Gly Glu Asn Val

405 410 415

atg cct agc aaa caa agg gga caa tgt tct act tac tta aga cta gga 1412

Met Pro Ser Lys Gln Arg Gly Gln Cys Ser Thr Tyr Leu Arg Leu Gly

420 425 430

gaa ttc aaa aat gga aac ttt gaa atg tca ggt gta aat caa aaa att 1460

Glu Phe Lys Asn Gly Asn Phe Glu Met Ser Gly Val Asn Gln Lys Ile

435 440 445

cca ttt gat ata cat tgt atg agg ata tat gtc acc aaa aca caa aag 1508

Pro Phe Asp Ile His Cys Met Arg Ile Tyr Val Thr Lys Thr Gln Lys

450 455 460 465

gaa tgg cta att att agg agt att agc att tgg act tct tagccaatta 1557

Glu Trp Leu Ile Ile Arg Ser Ile Ser Ile Trp Thr Ser

470 475

aatcagtatg ttcagtttct gaagcagttc ttcctgcttc gtcttttgct acctttgtct 1617

tttggaggga aagcaatgga tgggatatgt taaaagaaac attaattaca ttggcagttt 1677

tcatttatac attgttgaca taattttact cttaatacac acttgtattt attttaacgt 1737

ctgaagttga atatcagtct atagctaatg ctactttcat ttatattttt aaatgttctt 1797

agttttaaaa tttcaactga ttgtcgaaag ggtaatatga aagattttaa atgaaaaaaa 1857

tttgttggat gatgattttt gaaaaatagt caccaactgt atatacttcc tcaagaactg 1917

ataattcatt atatcatcag atagctttta ttaagcatct gtgggaatat acagttgggt 1977

ggaatgataa tctggtttat tttttctgta aacttaagtt tccgttgact tctgtacatc 2037

tacaatgaat acctcctcat agaagtggtg tctttacata attttttgtg taggtgacac 2097

tatggaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaa 2131

＜210＞ 9

＜211＞ 335

＜212＞ PRT

＜213＞ Homo sapiens

＜400＞ 9

Met Asp Ser Ala Leu Ser Asp Pro His Asn Gly Ser Ala Glu Ala Gly

1 5 10 15

Gly Pro Thr Asn Ser Thr Thr Arg Pro Pro Ser Thr Pro Glu Gly Ile

20 25 30

Ala Leu Ala Tyr Gly Ser Leu Leu Leu Met Ala Leu Leu Pro Ile Phe

35 40 45

Phe Gly Ala Leu Arg Ser Val Arg Cys Ala Arg Gly Lys Asn Ala Ser

50 55 60

Asp Met Pro Glu Thr Ile Thr Ser Arg Asp Ala Ala Arg Phe Pro Ile

65 70 75 80

Ile Ala Ser Cys Thr Leu Leu Gly Leu Tyr Leu Phe Phe Lys Ile Phe

85 90 95

Ser Gln Glu Tyr Ile Asn Leu Leu Leu Ser Met Tyr Phe Phe Val Leu

100 105 110

Gly Ile Leu Ala Leu Ser His Thr Ile Ser Pro Phe Met Asn Lys Phe

115 120 125

Phe Pro Ala Ser Phe Pro Asn Arg Gln Tyr Gln Leu Leu Phe Thr Gln

130 135 140

Gly Ser Gly Glu Asn Lys Glu Glu Ile Ile Asn Tyr Glu Phe Asp Thr

145 150 155 160

Lys Asp Leu Val Cys Leu Gly Leu Ser Ser Ile Val Gly Val Trp Tyr

165 170 175

Leu Leu Arg Lys Val Phe Gly Thr Asn Val Met Val Thr Val Ala Lys

180 185 190

Ser Phe Glu Ala Pro Ile Lys Leu Val Phe Pro Gln Asp Leu Leu Glu

195 200 205

Lys Gly Leu Glu Ala Asn Asn Phe Ala Met Leu Gly Leu Gly Asp Val

210 215 220

Val Ile Pro Gly Ile Phe Ile Ala Leu Leu Leu Arg Phe Asp Ile Ser

225 230 235 240

Leu Lys Lys Asn Thr His Thr Tyr Phe Tyr Thr Ser Phe Ala Ala Tyr

245 250 255

Ile Phe Gly Leu Gly Leu Thr Ile Phe Ile Met His Ile Phe Lys His

260 265 270

Ala Gln Pro Ala Leu Leu Tyr Leu Val Pro Ala Cys Ile Gly Phe Pro

275 280 285

Val Leu Val Ala Leu Ala Lys Gly Glu Val Thr Glu Met Phe Ser Tyr

290 295 300

Glu Glu Ser Asn Pro Lys Asp Pro Ala Ala Val Thr Glu Ser Lys Glu

305 310 315 320

Gly Thr Glu Ala Ser Ala Ser Lys Gly Leu Glu Lys Lys Glu Lys

325 330 335

＜210＞ 10

＜211＞ 1005

＜212＞ DNA

＜213＞ Homo sapiens

＜400＞ 10

atggactcgg ccctcagcga tccgcataac ggcagtgccg aggcaggcgg ccccaccaac 60

agcactacgc ggccgccttc cacgcccgag ggcatcgcgc tggcctacgg cagcctcctg 120

ctcatggcgc tgctgcccat cttcttcggc gccctgcgct ccgtacgctg cgcccgcggc 180

aagaatgctt cagacatgcc tgaaacaatc accagccggg atgccgcccg cttccccatc 240

atcgccagct gcacactctt ggggctctac ctctttttca aaatattctc ccaggagtac 300

atcaacctcc tgctgtccat gtatttcttc gtgctgggaa tcctggccct gtcccacacc 360

atcagcccct tcatgaataa gttttttcca gccagctttc caaatcgaca gtaccagctg 420

ctcttcacac agggttctgg ggaaaacaag gaagagatca tcaattatga atttgacacc 480

aaggacctgg tgtgcctggg cctgagcagc atcgttggcg tctggtacct gctgaggaag 540

gtatttggca ccaatgtgat ggtgacagtg gccaagtcct tcgaggcacc aataaaattg 600

gtgtttcccc aggatctgct ggagaaaggc ctcgaagcaa acaactttgc catgctggga 660

cttggagatg tcgtcattcc agggatcttc attgccttgc tgctgcgctt tgacatcagc 720

ttgaagaaga atacccacac ctacttctac accagctttg cagcctacat cttcggcctg 780

ggccttacca tcttcatcat gcacatcttc aagcatgctc agcctgccct cctatacctg 840

gtccccgcct gcatcggttt tcctgtcctg gtggcgctgg ccaagggaga agtgacagag 900

atgttcagtt atgaggagtc aaatcctaag gatccagcgg cagtgacaga atccaaagag 960

ggaacagagg catcagcatc gaaggggctg gagaagaaag agaaa 1005

＜210＞ 11

＜211＞ 1486

＜212＞ DNA

＜213＞ Homo sapiens

＜220＞

＜223＞ Clone OA004b derived from T98G cell

＜220＞

＜221＞ CDS

＜222＞ (117)..(1121)

＜400＞ 11

cacgtcactt cctgttgcct taggggaacg tggctttccc tgcagagccg gtgtctccgc 60

ctgcgtccct gctgcagcaa ccggagctgg agtcggatcc cgaacgcacc ctcgcc atg 119

Met

1

gac tcg gcc ctc agc gat ccg cat aac ggc agt gcc gag gca ggc ggc 167

Asp Ser Ala Leu Ser Asp Pro His Asn Gly Ser Ala Glu Ala Gly Gly

5 10 15

ccc acc aac agc act acg cgg ccg cct tcc acg ccc gag ggc atc gcg 215

Pro Thr Asn Ser Thr Thr Arg Pro Pro Ser Thr Pro Glu Gly Ile Ala

20 25 30

ctg gcc tac ggc agc ctc ctg ctc atg gcg ctg ctg ccc atc ttc ttc 263

Leu Ala Tyr Gly Ser Leu Leu Leu Met Ala Leu Leu Pro Ile Phe Phe

35 40 45

ggc gcc ctg cgc tcc gta cgc tgc gcc cgc ggc aag aat gct tca gac 311

Gly Ala Leu Arg Ser Val Arg Cys Ala Arg Gly Lys Asn Ala Ser Asp

50 55 60 65

atg cct gaa aca atc acc agc cgg gat gcc gcc cgc ttc ccc atc atc 359

Met Pro Glu Thr Ile Thr Ser Arg Asp Ala Ala Arg Phe Pro Ile Ile

70 75 80

gcc agc tgc aca ctc ttg ggg ctc tac ctc ttt ttc aaa ata ttc tcc 407

Ala Ser Cys Thr Leu Leu Gly Leu Tyr Leu Phe Phe Lys Ile Phe Ser

85 90 95

cag gag tac atc aac ctc ctg ctg tcc atg tat ttc ttc gtg ctg gga 455

Gln Glu Tyr Ile Asn Leu Leu Leu Ser Met Tyr Phe Phe Val Leu Gly

100 105 110

atc ctg gcc ctg tcc cac acc atc agc ccc ttc atg aat aag ttt ttt 503

Ile Leu Ala Leu Ser His Thr Ile Ser Pro Phe Met Asn Lys Phe Phe

115 120 125

cca gcc agc ttt cca aat cga cag tac cag ctg ctc ttc aca cag ggt 551

Pro Ala Ser Phe Pro Asn Arg Gln Tyr Gln Leu Leu Phe Thr Gln Gly

130 135 140 145

tct ggg gaa aac aag gaa gag atc atc aat tat gaa ttt gac acc aag 599

Ser Gly Glu Asn Lys Glu Glu Ile Ile Asn Tyr Glu Phe Asp Thr Lys

150 155 160

gac ctg gtg tgc ctg ggc ctg agc agc atc gtt ggc gtc tgg tac ctg 647

Asp Leu Val Cys Leu Gly Leu Ser Ser Ile Val Gly Val Trp Tyr Leu

165 170 175

ctg agg aag gta ttt ggc acc aat gtg atg gtg aca gtg gcc aag tcc 695

Leu Arg Lys Val Phe Gly Thr Asn Val Met Val Thr Val Ala Lys Ser

180 185 190

ttc gag gca cca ata aaa ttg gtg ttt ccc cag gat ctg ctg gag aaa 743

Phe Glu Ala Pro Ile Lys Leu Val Phe Pro Gln Asp Leu Leu Glu Lys

195 200 205

ggc ctc gaa gca aac aac ttt gcc atg ctg gga ctt gga gat gtc gtc 791

Gly Leu Glu Ala Asn Asn Phe Ala Met Leu Gly Leu Gly Asp Val Val

210 215 220 225

att cca ggg atc ttc att gcc ttg ctg ctg cgc ttt gac atc agc ttg 839

Ile Pro Gly Ile Phe Ile Ala Leu Leu Leu Arg Phe Asp Ile Ser Leu

230 235 240

aag aag aat acc cac acc tac ttc tac acc agc ttt gca gcc tac atc 887

Lys Lys Asn Thr His Thr Tyr Phe Tyr Thr Ser Phe Ala Ala Tyr Ile

245 250 255

ttc ggc ctg ggc ctt acc atc ttc atc atg cac atc ttc aag cat gct 935

Phe Gly Leu Gly Leu Thr Ile Phe Ile Met His Ile Phe Lys His Ala

260 265 270

cag cct gcc ctc cta tac ctg gtc ccc gcc tgc atc ggt ttt cct gtc 983

Gln Pro Ala Leu Leu Tyr Leu Val Pro Ala Cys Ile Gly Phe Pro Val

275 280 285

ctg gtg gcg ctg gcc aag gga gaa gtg aca gag atg ttc agt tat gag 1031

Leu Val Ala Leu Ala Lys Gly Glu Val Thr Glu Met Phe Ser Tyr Glu

290 295 300 305

gag tca aat cct aag gat cca gcg gca gtg aca gaa tcc aaa gag gga 1079

Glu Ser Asn Pro Lys Asp Pro Ala Ala Val Thr Glu Ser Lys Glu Gly

310 315 320

aca gag gca tca gca tcg aag ggg ctg gag aag aaa gag aaa 1121

Thr Glu Ala Ser Ala Ser Lys Gly Leu Glu Lys Lys Glu Lys

325 330 335

tgatgcggct ggtgcccgag cctctcaggg ccagaccaga cagatggggg ctgggcccac 1181

acaggcgtgc accggtagag ggcacaggag gccaagggca gctccaggac agggcagggg 1241

gcagcaggat acctccagcc aggcctctgt ggcctctgtt tccttctccc tttcttggcc 1301

ctcctctgct cctccccaca ccctgcaggc aaaagaaacc cccagcttcc cccctccccg 1361

ggagccaggt gggaaaagtg ggtgtgattt ttagattttg tattgtggac tgattttgcc 1421

tcacattaaa aactcatccc atggccaggg cgggccactg tgctcctgaa aaaaaaaaaa 1481

aaaaa 1486

＜210＞ 12

＜211＞ 360

＜212＞ PRT

＜213＞ Homo sapiens

＜400＞ 12

Met Arg Trp Ile Leu Phe Ile Gly Ala Leu Ile Gly Ser Ser Ile Cys

-15 -10 -5 -1

Gly Gln Glu Lys Phe Phe Gly Asp Gln Val Phe Arg Ile Asn Val Arg

1 5 10 15

Asn Gly Asp Glu Ile Ser Lys Leu Ser Gln Leu Val Asn Ser Asn Asn

20 25 30

Leu Lys Leu Asn Phe Trp Lys Ser Pro Ser Ser Phe Asn Arg Pro Val

35 40 45

Asp Val Leu Val Pro Ser Val Ser Leu Gln Ala Phe Lys Ser Phe Leu

50 55 60

Arg Ser Gln Gly Leu Glu Tyr Ala Val Thr Ile Glu Asp Leu Gln Ala

65 70 75 80

Leu Leu Asp Asn Glu Asp Asp Glu Met Gln His Asn Glu Gly Gln Glu

85 90 95

Arg Ser Ser Asn Asn Phe Asn Tyr Gly Ala Tyr His Ser Leu Glu Ala

100 105 110

Ile Tyr His Glu Met Asp Asn Ile Ala Ala Asp Phe Pro Asp Leu Ala

115 120 125

Arg Arg Val Lys Ile Gly His Ser Phe Glu Asn Arg Pro Met Tyr Val

130 135 140

Leu Lys Phe Ser Thr Gly Lys Gly Val Arg Arg Pro Ala Val Trp Leu

145 150 155 160

Asn Ala Gly Ile His Ser Arg Glu Trp Ile Ser Gln Ala Thr Ala Ile

165 170 175

Trp Thr Ala Arg Lys Ile Val Ser Asp Tyr Gln Arg Asp Pro Ala Ile

180 185 190

Thr Ser Ile Leu Glu Lys Met Asp Ile Phe Leu Leu Pro Val Ala Asn

195 200 205

Pro Asp Gly Tyr Val Tyr Thr Gln Thr Gln Asn Arg Leu Trp Arg Lys

210 215 220

Thr Arg Ser Arg Asn Pro Gly Ser Ser Cys Ile Gly Ala Asp Pro Asn

225 230 235 240

Arg Ser Trp Asn Ala Ser Phe Ala Gly Lys Gly Ala Ser Asp Asn Pro

245 250 255

Cys Ser Glu Val Tyr His Gly Pro His Ala Asn Ser Glu Val Glu Val

260 265 270

Lys Ser Val Val Asp Phe Ile Gln Lys His Gly Asn Phe Lys Cys Phe

275 280 285

Ile Asp Leu His Ser Tyr Ser Gln Leu Leu Met Tyr Pro Tyr Gly Tyr

290 295 300

Ser Val Lys Lys Ala Pro Asp Ala Glu Glu Leu Asp Lys Val Ala Arg

305 310 315 320

Leu Ala Ala Lys Ala Leu Ala Ser Val Ser Gly Thr Glu Tyr Gln Val

325 330 335

Gly Pro Thr Cys Thr Thr Val Leu

340

＜210＞ 13

＜211＞ 1080

＜212＞ DNA

＜213＞ Homo sapiens

＜400＞ 13

atgaggtgga tactgttcat tggggccctt attgggtcca gcatctgtgg ccaagaaaaa 60

ttttttgggg accaagtttt taggattaat gtcagaaatg gagacgagat cagcaaattg 120

agtcaactag tgaattcaaa caacttgaag ctcaatttct ggaaatctcc ctcctccttc 180

aatcggcctg tggatgtcct ggtcccatct gtcagtctgc aggcatttaa atccttcctg 240

agatcccagg gcttagagta cgcagtgaca attgaggacc tgcaggccct tttagacaat 300

gaagatgatg aaatgcaaca caatgaaggg caagaacgga gcagtaataa cttcaactac 360

ggggcttacc attccctgga agctatttac cacgagatgg acaacattgc cgcagacttt 420

cctgacctgg cgaggagggt gaagattgga cattcgtttg aaaaccggcc gatgtatgta 480

ctgaagttca gcactgggaa aggcgtgagg cggccggccg tttggctgaa tgcaggcatc 540

cattcccgag agtggatctc ccaggccact gcaatctgga cggcaaggaa gattgtatct 600

gattaccaga gggatccagc tatcacctcc atcttggaga aaatggatat tttcttgttg 660

cctgtggcca atcctgatgg atatgtgtat actcaaactc aaaaccgatt atggaggaag 720

acgcggtccc gaaatcctgg aagctcctgc attggtgctg acccaaatag aagctggaac 780

gctagttttg caggaaaggg agccagcgac aacccttgct ccgaagtgta ccatggaccc 840

cacgccaatt cggaagtgga ggtgaaatca gtggtagatt tcatccaaaa acatgggaat 900

ttcaagtgct tcatcgacct gcacagctac tcgcagctgc tgatgtatcc atatgggtac 960

tcagtcaaaa aggccccaga tgccgaggaa ctcgacaagg tggcgaggct tgcggccaaa 1020

gctctggctt ctgtgtcggg cactgagtac caagtgggtc ccacctgcac cactgtctta 1080

＜210＞ 14

＜211＞ 3156

＜212＞ DNA

＜213＞ Homo sapiens

＜220＞

＜223＞ Clone OAF075b derived from human bone marrow stroma cell HAS303

＜220＞

＜221＞ CDS

＜222＞ (11)..(1090)

＜220＞

＜221＞ sig_peptide

＜222＞ (11)..(58)

＜220＞

＜221＞ mat_peptide

＜222＞ (59)..(1090)

＜400＞ 14

ccccggggac atg agg tgg ata ctg ttc att ggg gcc ctt att ggg tcc 49

Met Arg Trp Ile Leu Phe Ile Gly Ala Leu Ile Gly Ser

-15 -10 -5

agc atc tgt ggc caa gaa aaa ttt ttt ggg gac caa gtt ttt agg att 97

Ser Ile Cys Gly Gln Glu Lys Phe Phe Gly Asp Gln Val Phe Arg Ile

-1 1 5 10

aat gtc aga aat gga gac gag atc agc aaa ttg agt caa cta gtg aat 145

Asn Val Arg Asn Gly Asp Glu Ile Ser Lys Leu Ser Gln Leu Val Asn

15 20 25

tca aac aac ttg aag ctc aat ttc tgg aaa tct ccc tcc tcc ttc aat 193

Ser Asn Asn Leu Lys Leu Asn Phe Trp Lys Ser Pro Ser Ser Phe Asn

30 35 40 45

cgg cct gtg gat gtc ctg gtc cca tct gtc agt ctg cag gca ttt aaa 241

Arg Pro Val Asp Val Leu Val Pro Ser Val Ser Leu Gln Ala Phe Lys

50 55 60

tcc ttc ctg aga tcc cag ggc tta gag tac gca gtg aca att gag gac 289

Ser Phe Leu Arg Ser Gln Gly Leu Glu Tyr Ala Val Thr Ile Glu Asp

65 70 75

ctg cag gcc ctt tta gac aat gaa gat gat gaa atg caa cac aat gaa 337

Leu Gln Ala Leu Leu Asp Asn Glu Asp Asp Glu Met Gln His Asn Glu

80 85 90

ggg caa gaa cgg agc agt aat aac ttc aac tac ggg gct tac cat tcc 385

Gly Gln Glu Arg Ser Ser Asn Asn Phe Asn Tyr Gly Ala Tyr His Ser

95 100 105

ctg gaa gct att tac cac gag atg gac aac att gcc gca gac ttt cct 433

Leu Glu Ala Ile Tyr His Glu Met Asp Asn Ile Ala Ala Asp Phe Pro

110 115 120 125

gac ctg gcg agg agg gtg aag att gga cat tcg ttt gaa aac cgg ccg 481

Asp Leu Ala Arg Arg Val Lys Ile Gly His Ser Phe Glu Asn Arg Pro

130 135 140

atg tat gta ctg aag ttc agc act ggg aaa ggc gtg agg cgg ccg gcc 529

Met Tyr Val Leu Lys Phe Ser Thr Gly Lys Gly Val Arg Arg Pro Ala

145 150 155

gtt tgg ctg aat gca ggc atc cat tcc cga gag tgg atc tcc cag gcc 577

Val Trp Leu Asn Ala Gly Ile His Ser Arg Glu Trp Ile Ser Gln Ala

160 165 170

act gca atc tgg acg gca agg aag att gta tct gat tac cag agg gat 625

Thr Ala Ile Trp Thr Ala Arg Lys Ile Val Ser Asp Tyr Gln Arg Asp

175 180 185

cca gct atc acc tcc atc ttg gag aaa atg gat att ttc ttg ttg cct 673

Pro Ala Ile Thr Ser Ile Leu Glu Lys Met Asp Ile Phe Leu Leu Pro

190 195 200 205

gtg gcc aat cct gat gga tat gtg tat act caa act caa aac cga tta 721

Val Ala Asn Pro Asp Gly Tyr Val Tyr Thr Gln Thr Gln Asn Arg Leu

210 215 220

tgg agg aag acg cgg tcc cga aat cct gga agc tcc tgc att ggt gct 769

Trp Arg Lys Thr Arg Ser Arg Asn Pro Gly Ser Ser Cys Ile Gly Ala

225 230 235

gac cca aat aga agc tgg aac gct agt ttt gca gga aag gga gcc agc 817

Asp Pro Asn Arg Ser Trp Asn Ala Ser Phe Ala Gly Lys Gly Ala Ser

240 245 250

gac aac cct tgc tcc gaa gtg tac cat gga ccc cac gcc aat tcg gaa 865

Asp Asn Pro Cys Ser Glu Val Tyr His Gly Pro His Ala Asn Ser Glu

255 260 265

gtg gag gtg aaa tca gtg gta gat ttc atc caa aaa cat ggg aat ttc 913

Val Glu Val Lys Ser Val Val Asp Phe Ile Gln Lys His Gly Asn Phe

270 275 280 285

aag tgc ttc atc gac ctg cac agc tac tcg cag ctg ctg atg tat cca 961

Lys Cys Phe Ile Asp Leu His Ser Tyr Ser Gln Leu Leu Met Tyr Pro

290 295 300

tat ggg tac tca gtc aaa aag gcc cca gat gcc gag gaa ctc gac aag 1009

Tyr Gly Tyr Ser Val Lys Lys Ala Pro Asp Ala Glu Glu Leu Asp Lys

305 310 315

gtg gcg agg ctt gcg gcc aaa gct ctg gct tct gtg tcg ggc act gag 1057

Val Ala Arg Leu Ala Ala Lys Ala Leu Ala Ser Val Ser Gly Thr Glu

320 325 330

tac caa gtg ggt ccc acc tgc acc act gtc tta taaactgcca aaactgggag 1110

Tyr Gln Val Gly Pro Thr Cys Thr Thr Val Leu

335 340

atactcatca gattgctcca acagaagagg aggaaggctc tcccgagggc tgtccaggag 1170

acataaaatt tctacctttt cttttctttt tgaaatggag tttcgtttcg ctcttgttgc 1230

ccaggctgga gtgcaatggc gtgatctcca ctcatcgcaa cttccgcctc ccaggttcaa 1290

gcgattcccc tgcctcagcc tcccgagtaa ctgggattat aggcatgtgc cccaccccca 1350

actaattttt gtatttttag tagagatggg gtttctccat gttggtcagt ctggtcttga 1410

gctcccgacc tcaggtgatc tgcccgcctc ggcctctcaa agtgctggga ttacaggcgt 1470

gagccacagc acccggccaa aatgtccacc ttttctaaga gcccatcttc catattcttt 1530

ataggccttg tctgtccttg ttttttcaaa aaaaaaacaa tcaatttttg tataatagca 1590

ctctatccaa cgccataggt tatggtgtgt gctacataca cagtcgacgt ttgtcctttc 1650

aagtgctggg ccttttccta gatcgccatt ttagaggaaa ataattctaa aatggatttt 1710

acactcttct gccttctaaa acagagcatg gagaagagat ttaagcccct tttttcatgg 1770

ttaagtgtac ttctcaacct cagttcgtat atgctaaagg cctactctgc cgtcttggac 1830

tgtttggacc ttctgctaaa tgatcctggc ctgttttcct tcttgtgttt gctttgtaga 1890

gttttgtgtc tcctttctcc tgccagactg tcagcagtag cttgtattgc ttcaggccaa 1950

cagcctctag caaccctttc ccctcctctt cactgattct gctccaggaa gggcttggaa 2010

acaagttctt tgggttcatc tgacttgtgg ataacacagt ttcatgtact ttttgtagtt 2070

cataagcgtg gtgattgggt tttcacgctc atgtgtgaca tatgccttcc tccaattttg 2130

ttacaatgtt ggtgcgttac ccatcagaca tgggggaaga aagggtgttc atgacagcat 2190

tatccatagt tacaaaagac atgtacaggg gccaagggaa aacttcccct ttgccttctg 2250

aaggttcatt gaaaaatcaa ctgaccaaag gcagatcgat aggagaaaag gcatacaaaa 2310

ttttatttta gtgtgcatgg cacaggggaa tcacaggaga atgatttccc aataacccaa 2370

tggggcacag aagcttgtat accctttttc atacaggagg gaggagatgt atggactggg 2430

gaggtgggag gcagatatta caggaaggtg aggggcggag ctgtacagga acaaagcttg 2490

tcttattaag cagataaagt cctccaggca atctcttgga gctgctctca gaagaataga 2550

tgaagtctgt ctgggtgtgg tgatgattcc cagtctcatc tcttctggtg gtttatcttt 2610

cttggttatt tgatgagacc tctagggagg gtgtttaaga caattgcatt tcttttggaa 2670

agatgctttc ttggtcagat gaggaaattt ccaaagacag acagtccctc cctgtgtttg 2730

gtggtggggc aggtatgggg aacaagaagt tagagggacc ttggttcggg ggcggcttct 2790

gagggccctc agcatgtcaa aacatcagcc tttgggatat cactttctga gccccaaccc 2850

ttgtaagtgt ctaaaatgtc cacctagaga atgcaggata aatacacatt tggtgcattc 2910

acacaatgca gcactacgga gcccttaaat gaatgaggta gatctatgtg cgctaaaagg 2970

gaatactcac caattgttaa ttgaaaaata catgtgcaga acagcgttaa tagtgtgttc 3030

ccattttttg ttgttgttat tgtttttaaa gagtaggtag actttcagca gggacccaaa 3090

taaagtgaag tttacaaact tcgtcatttt gactgaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3150

aaaaaa 3156

＜210＞ 15

＜211＞ 35

＜212＞ DNA

＜213＞ Artificial Sequence

＜220＞

＜223＞ Description of Artificial Sequence:Primer

＜400＞ 15

cgattgaatt ctagacctgc ctcgagnnnn nnnnn

＜210＞ 16

＜211＞ 27

＜212＞ DNA

＜213＞ Artificial Sequence

＜220＞

＜223＞ Description of Artificial Sequence:Primer OC001-F1

＜400＞ 16

gtccttcagc aaaacagtgg atttaaa 27

＜210＞ 17

＜211＞ 27

＜212＞ DNA

＜213＞ Artificial Sequence

＜220＞

＜223＞ Description of Artificial Sequence:Primer OM237-F1

＜400＞ 17

ccagaaagca cagccctgat tctgcgt 27

＜210＞ 18

＜211＞ 24

＜212＞ DNA

＜213＞ Artificial Sequence

＜220＞

＜223＞ Description of Artificial Sequence:Primer OA004-F1

＜220＞

＜221＞ modified base

＜222＞ 1

＜223＞ biotin conjugated base

＜400＞ 18

atgcacatct tcaagcatgc tcag 24

＜210＞ 19

＜211＞ 27

＜212＞ DNA

＜213＞ Artificial Sequence

＜220＞

＜223＞ Description of Artificial Sequence:Primer OAF075-F1

＜400＞ 19

ccccggggac atgaggtgga tactgtt 27

1

1/39

종래, 어떤 특정한 폴리펩티드 또는 그것을 암호화하는 cDNA를 얻고자 하는 경우, 조직이나 세포 배양액 중에 목적으로 하는 생물 활성을 확인하고, 이어서 폴리펩티드의 단리 정제를 거쳐, 유전자를 클로닝한다고 하는 방법, 또는 그 생물 활성을 지표로 하여 유전자를 발현 클로닝하는 방법이 일반적으로 이용되어 왔다. 그러나, 생체내 생리 활성 폴리펩티드는 다양한 생물 활성을 갖고 있는 경우가 많기 때문에, 어떤 하나의 활성을 지표로 하여 유전자를 클로닝한 결과, 그것이 기지의 폴리펩티드와 동일하다는 것이 후에 판명된다고 하는 사례가 증가하고 있다. 또한, 미량밖에 생산되지 않거나, 특별한 생리적 조건에서만 발현되는 인자도 많아, 그것이 단리, 정제 및 생물 활성의 확인을 곤란하게 하고 있다.

최근, cDNA의 제작 기술이나 시퀀스 기술은 급속히 발전하여, 대량의 cDNA의 시퀀스를 신속하게 행할 수 있게 되었다. 그래서 이들 기술을 이용하여, 여러 가지 세포나 조직으로부터 cDNA 라이브러리를 제작하고, 무작위로 cDNA를 클로닝하여 염기 서열을 결정하여, 신규의 폴리펩티드를 암호화하는 유전자를 단리하는 방법이 발전하고 있다. 이 방법은 생화학적, 유전학적인 해석을 일체 필요로 하지 않고서 유전자를 클로닝하여, 그 염기 서열의 정보를 얻을 수 있다고 하는 특징을 갖고 있지만, 목적으로 하는 유전자의 발견은 우발적 요소가 크다.

[발명의 요약]

본 발명자들은, 지금까지 조혈계나 면역계에서 기능하는 증식 분화 인자의 유전자 클로닝을 연구하여 왔다. 그리고, 증식 분화 인자(예컨대, 각종 시토킨 등)와 같은 분비 단백질이나 그 수용기와 같은 막 단백질(이하, 이들을 통합하여 분비 단백질 등이라 함)의 대부분이 그 N 말단에 시그널 펩티드라고 불리는 서열을 갖고 있다는 것에 착안하여, 시그널 펩티드를 암호화하는 서열을 갖는 cDNA를 효율적으로 또한 선택적으로 클로닝하는 방법을 예의 검토했다. 그 결과, 동물 세포를 이용하여, 시그널 펩티드의 유무를 간단히 선별할 수 있는 방법(시그널 시퀀스 트랩(SST)법)을 발견했다(일본국 특허 공개 평6-315380호 참조). 또한 같은 개념하에서, 효모를 이용하여 더욱 효율적으로 또한 간편하게 시그널 펩티드를 암호화하는 유전자를 단리하는 방법(효모 SST법)도 개발되었다(미국 특허 제5, 536, 637호 참조).

본 방법을 이용하여, 치료, 진단, 또는 연구상 유익한 신규의 인자(폴리펩티드), 특히 분비 시그널을 갖는 분비 단백질 및 막 단백질에 착안하여 그것을 알아내도록 예의 검토를 했다. 그 결과, 다종 다양한 분비 단백 및 막 단백을 생산하고 있다고 예상되는 세포주 및 조직, 예컨대 인간 성인의 뇌 조직 및 뇌 조직에서 유래하는 세포주 및 인간 골수에서 유래하는 세포주가 생산하고 있는 신규의 분비 단백질 또는 막 단백질 및 그것을 암호화하는 cDNA를 발견하는 것에 성공하여, 본 발명을 완성했다.

본 발명이 제공하는 cDNA 서열은 클론 OC001, OM237, OA004b로서 확인되어, 상기 효모 SST법을 사용하여 얻은 정보를 기초로 인간 성인 뇌 조직 및 뇌 조직에서 유래하는 세포주(T98G, ATCC No. CRL-1690)로 제작한 cDNA 라이브러리에서 단리되었다. 클론 OC001, OM237, OA004b는 막 단백질(여기서는 각각 OC001, OM237, OA004b 단백으로서 나타내어짐)을 암호화하는 완전한 cDNA 서열을 포함하는 전장쇄 cDNA이다.

핵산 서열 데이터 베이스에 등록되어 있는 기지의 핵산 서열에 대하여 BLASTN 및 FASTA에 의해, 또 아미노산 서열 데이터 베이스에 등록되어 있는 기지의 폴리펩티드의 아미노산 서열에 대하여 BLASTX, BLASTP 및 FASTA에 의해 검색한 결과, 본 발명의 폴리펩티드 OC001, OM237, OA004b 및 각각을 암호화하는 핵산 서열과 일치하는 서열은 없었다. 또한 얻어진 아미노산 서열의 소수성 플롯에 의한 해석으로부터 본 발명의 폴리펩티드는 막 관통 영역을 갖는다는 것이 예상되었다. 이들의 점에서, 본 발명의 폴리펩티드 OC001, OM237, OA004b는 신규의 막 단백질임이 판명되었다.

본 발명이 제공하는 cDNA 서열은 클론 OAF075b로서 확인되어, 상기 효모 SST법을 사용하여 얻은 정보를 기초로 성인의 인간 골수에서 유래하는 세포주 HAS303(인간 골수 스트로마 세포주 : 도쿄의과대학 제1내과 소토야마 게이스케 교수, 아이자와 신 조수로부터 공여. J. Cell. Physiol. 148, 245-251, 1991 및 Experimental Hematol. 22, 482-487, 1994에 기재)로부터 제작한 cDNA 라이브러리에서 단리되었다. 클론 OAF075b는 분비 단백질(여기서는 OAF075b 단백으로서 나타내어짐)을 암호화하는 완전한 cDNA 서열을 포함하는 전장쇄 cDNA이다.

핵산 서열 데이터 베이스에 등록되어 있는 기지의 핵산 서열에 대하여 BLASTN 및 FASTA에 의해, 또 아미노산 서열 데이터 베이스에 등록되어 있는 기지의 폴리펩티드의 아미노산 서열에 대하여 BLASTX, BLASTP 및 FASTA에 의해 검색한 결과, 본 발명의 폴리펩티드 OAFO75b 및 그것을 암호화하는 핵산 서열과 일치하는 서열은 없었다. 또한 얻어진 아미노산 서열의 소수성 플롯에 의한 해석으로부터 본 발명의 폴리펩티드는 막 관통 영역을 갖지 않는다는 것이 예상되었다. 이들로부터, 본 발명의 폴리펩티드는 신규의 분비 단백질임이 판명되었다.

본 발명은,

(1) 서열 번호 1, 4, 6, 9 또는 12로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드,

(2) 상기 (1)에 기재한 폴리펩티드를 암호화하는 cDNA,

(3) 서열 번호 2, 5, 7, 10 또는 13으로 나타내어지는 염기 서열로 이루어지는 cDNA,

(4) 서열 번호 3, 8, 11 또는 14로 나타내어지는 염기 서열로 이루어지는 cDNA에 관한 것이다.

본 발명은 신규의 폴리펩티드, 그 폴리펩티드를 암호화하는 cDNA 및 그 용도에 관한 것이다.

본 발명은 실질적으로 순수한 형태인 서열 번호 1, 4, 6, 9 또는 12로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드, 그 상동체, 그 서열의 단편 및 그 상동체에 관한 것이다.

본 발명은 또한, 이들 폴리펩티드를 암호화하는 cDNA에 관한 것이다. 보다 구체적으로는, 서열 번호 2, 5, 7, 10 또는 13으로 나타내어지는 염기 서열로 이루어지는 cDNA 및 서열 번호 2, 5, 7, 10, 13, 3, 8, 11 또는 14로 나타내어지는 염기 서열에 선택적으로 하이브리드화하는 단편으로 이루어지는 cDNA에 관한 것이다. 하이브리드화하는 cDNA에는, 상기 서열의 상보 서열도 포함된다. 하이브리드화는 엄중한 조건으로 행하는 것이 바람직하다.

실질적으로 순수한 형태인 서열 번호 1, 4, 6, 9 또는 12로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드란, 일반적으로, 생산시의 폴리펩티드의 90% 이상, 예컨대, 95, 98 또는 99%가 서열 번호 1, 4, 6, 9 또는 12로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드인 것을 의미한다.

서열 번호 1, 4, 6, 9 또는 12로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드의 상동체란, 일반적으로 적어도 20개, 바람직하게는 적어도 30개, 예컨대, 40, 60 또는 100개의 연속된 아미노산 영역에서, 적어도 70%, 바람직하게는 적어도 80 또는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상 상동성인 것으로, 그와 같은 상동체는 이하 본 발명의 폴리펩티드로서 기재된다.

또한, 서열 번호 1, 4, 6, 9 또는 12로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드의 단편, 또는 이들의 상동체의 단편이란, 적어도 10개의 아미노산, 바람직하게는 적어도 15개의 아미노산, 예컨대, 20, 25, 30, 40, 50 또는 60개의 아미노산 부분을 의미한다.

서열 번호 2, 5, 7, 10, 13, 3, 8, 11 또는 14로 나타내어지는 염기 서열로 이루어지는 cDNA에 선택적으로 하이브리드화하는 cDNA란, 일반적으로, 적어도 20개, 바람직하게는 적어도 30개, 예컨대, 40, 60 또는 100개의 연속된 염기 서열 영역에서, 적어도 70%, 바람직하게는 적어도 80 또는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상 상동성인 것으로, 그와 같은 cDNA는 이하 본 발명의 cDNA로서 기재된다.

서열 번호 2, 5, 7, 10, 13, 3, 8, 11 또는 14로 나타내어지는 염기 서열로부터 이루어지는 cDNA의 단편이란, 적어도 10개의 염기, 바람직하게는 적어도 15개의 염기, 예컨대 20, 25, 30 또는 40개의 염기 부분을 의미하여, 그와 같은 단편도 본 발명의 cDNA에 포함된다.

또한, 본 발명에는, 본 발명의 cDNA로 이루어지는 복제 또는 발현 벡터가 포함된다. 벡터로서는, 예컨대, ori 영역과, 필요에 따라 상기 cDNA의 발현을 위한 프로모터, 프로모터의 제어 인자 등으로 이루어지는 플라스미드, 바이러스 또는 파지 벡터를 들 수 있다. 벡터는 하나 또는 그 이상의 선택적 마커 유전자, 예컨대 암피실린 내성 유전자를 포함하고 있더라도 좋다. 벡터는 시험관내(in vitro)서, 예컨대, cDNA에 대응하는 RNA의 제조, 숙주 세포의 형질 전환에 이용할 수 있다.

더욱이, 본 발명에는, 서열 번호 2, 5, 7, 10, 13, 3, 8, 11 또는 14로 나타내어지는 염기 서열, 또는 이들의 오픈 리딩 프레임을 갖는 cDNA를 포함하는 본 발명의 cDNA를 복제 또는 발현시키기 위한 벡터로 형질 전환된 숙주 세포도 포함된다. 세포로서는 예컨대, 세균, 효모, 곤충 세포 또는 포유 동물 세포를 들 수 있다.

또한, 본 발명에는, 본 발명의 폴리펩티드를 발현시키기 위한 조건하에서, 본 발명의 숙주 세포를 배양함으로써 이루어지는 본 발명의 폴리펩티드의 제조 방법도 포함된다. 배양은 본 발명의 폴리펩티드가 발현되어, 숙주 세포로부터 제조되는 조건하에서 행해지는 것이 바람직하다.

본 발명의 cDNA는 상기와 같은 벡터의 안티센스 영역에 삽입함으로써 안티센스 RNA를 제조할 수도 있다. 이러한 안티센스 RNA는 세포 중의 본 발명의 폴리펩티드의 레벨을 제어하는 것에 이용할 수도 있다.

본 발명은 본 발명에 있어서의 폴리펩티드의 모노클로날 또는 폴리클로날 항체도 포함한다. 또한 본 발명에 있어서의 폴리펩티드의 모노클로날 또는 폴리클로날 항체의 제조 방법도 포함한다. 모노클로날 항체는, 본 발명의 펩티드 또는 그 단편을 항원으로서 이용하여, 통상의 하이브리드마의 기술에 의해 제조할 수 있다. 폴리클로날 항체는 숙주 동물(예컨대, 래트나 토끼 등)에 본 발명의 폴리펩티드를 접종하여, 면역 혈청을 회수하는 식의 통상의 방법에 의해 제조할 수 있다.

본 발명에는 본 발명의 폴리펩티드, 그 항체와 약학적으로 허용되는 부형제 및/또는 담체를 함유하는 약학적 조성물도 포함된다.

(1)의 본 발명의 폴리펩티드로서는, 서열 번호 1, 4, 6, 9 또는 12로 나타내어진 아미노산 서열로 이루어지는 것 이외에, 그 일부가 결손된 것(예컨대, 서열 번호 1 중, 생물 활성의 발현에 필수적인 부분만으로 이루어지는 폴리펩티드 등), 그 일부가 다른 아미노산과 치환한 것(예컨대, 물성이 유사한 아미노산으로 치환한 것), 및 본 발명의 폴리펩티드에 다른 아미노산이 부가 또는 삽입된 것도 포함된다.

잘 알려진 바와 같이, 하나의 아미노산을 암호화하는 코돈은 1∼6종류(예컨대, Met는 1종류, Leu는 6종류) 알려져 있다. 따라서, 폴리펩티드의 아미노산 서열을 바꾸지 않으면서 cDNA의 염기 서열을 바꿀 수 있다.

(2)로 특정되는 본 발명의 cDNA에는, (1)의 서열 번호 1, 4, 6, 9 또는 12로 나타내어지는 폴리펩티드를 암호화하는 모든 염기 서열군이 포함된다. 염기 서열을 바꿈으로써, 폴리펩티드의 생산성을 향상시킬 수 있다.

(3)으로 특정되는 cDNA는 (2)로 나타내어지는 cDNA의 한 형태이며, 천연형 서열을 나타낸다.

(4)에 나타내어지는 cDNA는 (3)으로 특정되는 cDNA에 천연의 비해독 부분을 가한 서열을 나타낸다.

서열 번호 3, 8, 11 또는 14로 나타내어지는 염기 서열을 갖는 cDNA의 제작은 이하의 방법에 따라서 행해진다.

첫째로 효모 SST법(미국 특허 No. 5,536,637에 기재)의 개요에 관해서 설명한다.

사카로마이세스·세레비제(Saccharomyces cerevisiae) 등의 효모가 자당 또는 라피노오스를 에너지원이나 탄소원으로서 이용하기 위해서는 인베르타아제를 배지중에 분비하지 않으면 안된다(인베르타아제는 라피노오스를 자당과 멜리비오스에, 자당을 프럭토스와 글루코스로 분해하는 효소이다). 또한 수많은 기지의 포유류의 시그널 펩티드는 효모의 인베르타아제를 분비시킬 수 있다는 것이 알려져 있다. 이들의 발견으로부터, 효모의 인베르타아제의 분비를 가능하게 하는 신규의 시그널 펩티드를 포유류의 cDNA 라이브러리에서 라피노오스 배지상에서의 효모의 생육을 지표로 스크리닝하는 방법으로서 본 방법은 개발되었다. 해독 개시점 ATG을 삭제한 비분비형의 인베르타아제 유전자 SUC2(젠뱅크 승인번호 V01311)를 효모의 발현 벡터[발현용 프로모터(ADH 프로모터) 및 종결인자(ADH 종결인자)는 AAH5 플라스미드(Gammerer, Methods in Enzymol. 101, 192-201, 1983) 유래로, 효모 복제 기점은 2 μori, 효모 선택 마커에는 TRP1, 대장균 복제 기점은 ColE1 ori, 대장균 약제 내성 마커에는 암피실린이 사용되고 있다]에 삽입되어 효모 SST용 벡터 pSUC2를 제작했다. 그 SUC2 유전자의 상류에 포유류의 cDNA를 삽입하여, 효모 SST cDNA 라이브러리를 조제했다. 이 라이브러리를 분비형 인베르타아제가 결손(缺損)되어 있는 효모에 형질 전환시켰다. 삽입한 포유류 cDNA가 시그널 펩티드를 코드하고 있는 경우, 효모로 발현된 인베르타아제에 대하여도 분비 작용을 갖는다고 생각되며, 그 결과 라피노오스 배지상에서의 생육이 가능해진다. 따라서 출현한 콜로니로부터 효모를 배양하여 플라스미드를 조제하여, 삽입 cDNA의 염기 서열을 결정함으로써, 신규 시그널 펩티드의 검색을 신속하고 또한 용이하게 했다.

효모 SST cDNA 라이브러리의 제작은,

(1) 대상이 되는 세포로부터 mRNA를 단리하여, 특정한 제한 효소(효소 I) 부위를 연결한 랜덤 프라이머를 이용하여 이중쇄 cDNA를 합성하고,

(2) 효소 I과는 다른 특정한 제한 효소(효소 II) 부위를 포함하는 어댑터를 연결하여, 효소 I로 소화한 후, 적당한 사이즈로 분획하고,

(3) 효모 발현 벡터 내의 시그널 펩티드를 삭제한 인베르타아제 유전자의 상류에 얻어진 cDNA 단편을 연결하여, 형질 전환하는 공정으로 이루어진다.

각 공정을 자세히 설명하면, 공정 (1)에서는, 대상이 되는 포유류의 장기나 세포주 등으로부터, 필요에 따라 적당한 자극제로 자극한 후, 공지의 방법[이하, 공지의 방법은 특별히 기재가 없으면 Molecular Cloning(Sambrook, J., Fritsch, E. F 및 Maniatis, T. 저, Cold Spring Harbor Laboratory Press에서 1989년에 발간) 또는 Current Protocol in Molecular Biology(F. M. Ausubel 등 편, John Wiley ＆ Sons, Inc에서 발간)에 기재한 방법에 따라서 행해진다]에 따라서 mRNA의 단리가 행해진다.

대상이 되는 세포로서는 HAS303(인간 골수 스트로마 세포주 : 도쿄의과대학 제1내과 소토야마 게이스케 교수, 아이자와 신 조수로부터 공여. J. Cell. Physiol. 148, 245-251, 1991 및 Experimental Hematol. 22, 482-487, 1994에 기재), 또는 인간 글리아 아종(芽腫) 세포주 T98G(ATCC No. CRL-1690)를 들 수 있다. 또한 조직으로서는, 인간 성인 뇌를 들 수 있다. 랜덤 프라이머를 이용하는 이중쇄 cDNA의 합성은 공지의 방법에 의해 행해진다.

어댑터에 연결되는 제한 효소(효소 I) 부위와 다음 공정 (2)에서 이용되는 제한 효소(효소 II) 부위는 서로 다른 것이라면 무엇을 이용하더라도 좋다. 바람직하게는, 효소 I로서 XhoI, 효소 II로서는 EcoRI이 이용된다.

공정(2)에서는 T4DNA 폴리머라제로 말단을 평활화하여, 효소 II 어댑터를 연결한 후, 효소 I로 소화하여, 아가로스 전기 영동(AGE)에 의해 300∼800 bp의 cDNA를 분획한다. 효소 II는 상기한 것과 같이 효소 I과 다르다면 무엇이나 좋다.

공정 (3)은 효모 발현용 플라스미드 벡터에 연결된 시그널 펩티드를 삭제한 인베르타아제의 유전자의 상류에 (2)에서 얻어진 cDNA 단편을 삽입하여 대장균으로 형질 전환하는 공정이다. 여기서 효모 발현용 플라스미드 벡터로서는 여러 가지의 것이 알려져 있다. 예컨대, 대장균내에서도 기능하는 YEp24 등이 이용되지만, 적합하게는 전술한 플라스미드 pSUC2가 이용된다.

형질 전환을 위한 숙주 대장균주는 이미 많은 것이 알려져 있고, 바람직하게는 DH10B의 경쟁성 세포(competent cell)이다. 또 형질 전환 방법은 공지의 어느 것을 이용하더라도 좋지만, 바람직하게는 일렉트로포레이션(electroporation)법에 의해 행해진다. 형질 전환체는 통상의 방법에 의해 배양되어, 효모 SST용의 cDNA 라이브러리를 얻을 수 있다.

이 cDNA 라이브러리에서는 모든 클론에 cDNA 단편이 도입되고 있다는 것은 아니며, 또한 전부가 미지의(신규) 시그널 펩티드를 암호화하는 유전자 단편이라고는 할 수 없다. 그래서, 다음에 이 라이브러리에서 미지의 시그널 펩티드를 암호화하는 유전자 단편을 스크리닝할 필요가 있다.

그러기 위해서는 cDNA 라이브러리를 인베르타아제 유전자를 갖지 않는 효모 사카로마이세스·세레비제(Saccharomycs cerevisiae)(예컨대 YT455주 등) 또는 인베르타아제 유전자를 인위적으로 결손시킨 주(공지의 방법에 따라서 제작 가능)에, 상기 cDNA 라이브러리를 도입하여, 시그널 펩티드를 암호화하는 서열을 갖는 단편의 스크리닝을 행한다.

효모의 형질 전환은 공지의 방법, 예컨대 초산리튬법에 의해서 행해진다. 형질 전환체를 선택 배지에서 생육한 후, 라피노오스를 탄소원으로 하는 배지에 옮겨, 생육가능한 콜로니를 선택하여, 플라스미드를 회수한다. 라피노오스를 탄소원으로 하여 효모가 생육되었다는 것은 라이브러리 중에 어떠한 분비 단백질의 시그널 펩티드가 삽입되어 있음을 나타내고 있다.

이어서, 단리한 양성 클론에 관해서, 염기 서열을 결정하여, 미지의 단백질을 암호화하는 것이 분명해진 cDNA에 대해서는 그것을 프로브로 하여 전장(全長) 클론을 단리하여, 전장의 염기 서열을 결정할 수 있다. 이들 조작은 당업자에게는 전부 공지된 방법으로 행해진다.

서열 번호 2, 5, 7, 10 또는 13으로 나타내어지는 염기 서열이, 일부, 바람직하게는 전부가 확정되면 포유류에 존재하는 본 발명의 단백질을 암호화하는 cDNA 또는 본 발명 단백질의 상동체 및 서브셋트를 암호화하는 cDNA를 얻을 수 있다. 적당한 염기 서열을 갖는 올리고뉴클레오티드를 합성하고, 그것을 이용하여, 포유류에서 유래하는 cDNA 라이브러리 또는 mRNA로부터 PCR법에 의해, 또는 적당한 염기 서열의 단편을 프로브로 하여 하이브리드화함으로써, 다른 포유류 cDNA 라이브러리 또는 그 게놈 라이브러리로부터, 다른 포유류형의 상기 단백질을 암호화하는 cDNA를 얻을 수 있다.

이와 같이 하여 얻어진 cDNA가, SST에서 얻어진 cDNA 단편의 염기 서열(또는 그 상동 서열)을 포함하고 있으면 시그널 펩티드를 코드하고 있게 되기 때문에, 그 cDNA가 전장, 또는 거의 전장임이 분명하다(시그널 펩티드는 예외없이 단백질의 N 말단에 존재하므로, cDNA의 오픈 리딩 프레임의 5' 말단에 코드되어 있다.).

또한 공지의 방법에 따라서, 상기 cDNA를 프로브로 하여 노선(Northern) 해석에 의해서 전장의 확인을 하더라도 좋다. 하이브리드화한 밴드로부터 얻어지는 mRNA의 사이즈와 상기 cDNA의 사이즈를 비교하여, 거의 동일하면 상기 cDNA는 거의 전장이라고 생각된다.

서열 번호 2, 5, 7, 10 또는 13으로 나타내어지는 염기 서열이 일단 확정되면, 그 후에는 화학 합성에 의해서, 또는 그 염기 서열의 단편을 화학 합성하여, 이것을 프로브로서 하이브리드화함으로써, 본 발명의 cDNA를 얻을 수 있다. 또한, 본 발명의 cDNA를 함유하는 벡터 cDNA를 적당한 숙주에 도입하여, 이것을 증식시킴으로써, 목적으로 하는 cDNA를 필요량 얻을 수 있다.

본 발명의 폴리펩티드를 취득하는 방법으로서는,

(1) 생체 또는 배양 세포로부터 정제 단리하는 방법,

(2) 펩티드 합성하는 방법, 또는

(3) 유전자 재조합 기술을 이용하여 생산하는 방법,

등을 들 수 있지만, 공업적으로는 (3)에 기재한 방법이 바람직하다.

유전자 재조합 기술을 이용하여 폴리펩티드를 생산하기 위한 발현계(숙주-벡터계)로서는 예컨대, 세균, 효모, 곤충 세포 및 포유 동물 세포의 발현계를 들 수 있다.

예컨대, 대장균으로 발현시키는 경우에는, 성숙 단백 부분을 암호화하는 cDNA의 5' 말단에 개시 코돈(ATG)을 부가하여, 얻어진 cDNA를, 적당한 프로모터(예컨대, trp 프로모터, lac 프로모터, λPL 프로모터, T7 프로모터 등)의 하류에 접속하여, 대장균 내에서 기능하는 벡터(예컨대, pBR322, pUC18, pUC19 등)에 삽입하여 발현 벡터를 제작한다.

이어서, 이 발현 벡터에 의해 형질 전환한 대장균(예컨대, E. Coli DH1, E. Coli JM109, E. Coli HB101주 등)을 적당한 배지에서 배양하여, 그 균체로부터 목적으로 하는 폴리펩티드를 얻을 수 있다. 또한, 박테리아의 시그널 펩티드(예컨대, pelB의 시그널 펩티드)를 이용하면, 페리프라즘 중에 목적으로 하는 폴리펩티드를 분비할 수도 있다. 또한, 다른 폴리펩티드와의 융합 단백질(fusion protein)을 생산할 수도 있다.

또, 포유 동물 세포에 의해 발현시키는 경우에는, 예컨대, 서열 번호 3, 8, 11 또는 14로 나타내어지는 염기 서열을 암호화하는 cDNA를 적당한 벡터(예컨대, 레트로바이러스 벡터, 파필로마 바이러스 벡터, 왁시니아 바이러스 벡터, SV40계 벡터 등) 중의 적당한 프로모터(예컨대, SV40 프로모터, LTR 프로모터, 메탈로티오네인 프로모터 등)의 하류에 삽입하여 발현 벡터를 제작한다. 이어서, 얻어진 발현 벡터로 적당한 포유 동물 세포(예컨대, 원숭이 COS-7 세포, 챠이니스 햄스터 CHO 세포, 마우스 L 세포 등)를 형질 전환하여, 형질 전환체를 적당한 배지에서 배양함으로써, 본 발명의 단백이 분비 단백인 경우와 막 단백인 경우에, 다음과 같이 발현된다.

본 발명의 단백이 분비 단백인 경우, 그 세포 상청 중에 목적으로 하는 폴리펩티드가 발현된다. 또한, 그 밖의 폴리펩티드, 예컨대 항체의 정상 영역(FC portion)을 암호화하는 cPNA 단편과 연결함으로써, 융합 단백질(fusion protein)을 생산할 수도 있다.

한편, 본 발명의 단백이 막 단백인 경우, 그 세포막 상에 목적으로 하는 폴리펩티드가 발현된다. 또한 서열 번호 2, 5, 7, 10 또는 13으로 나타내어지는 염기 서열의 막 관통 영역이 흠결된 결실체(缺失體)를 상기 벡터에 삽입하여, 이것을 이용하여 적당한 포유류 동물 세포를 형질 전환함으로써, 그 배양액 중에 목적으로 하는 가용성 폴리펩티드가 분비된다. 또한 그 막 관통 영역이 흠결된 결실체를 암호화하는 cDNA 단편과 그 밖의 폴리펩티드, 예컨대 항체의 정상 영역(Fc 부분)을 암호화하는 cDNA 단편을 연결함으로써, 융합 단백질을 생산할 수도 있다. 이상과 같은 식으로 얻어진 폴리펩티드는 일반적인 생화학적 방법에 의해서 단리 정제할 수 있다.

이하에 본 발명의 클론 OC001에 관한 실시예를 들어 본 발명을 보다 구체적으로 설명하지만, 이들은 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니다.

실시예 1 : poly(A)⁺RNA의 조제

인간 성인 뇌 조직으로부터 TRIzol 시약(TRIzol reagent, 등록 상표, GIBCOBRL에서 판매)을 이용하여 전 RNA를 추출하고, mRNA 퓨리피게이션·키트(mRNA Purification Kit, 상품명, 파마시아에서 판매)를 이용하여 poly(A)⁺RNA를 정제했다.

실시예 2 : 효모 SST cDNA 라이브러리의 조제

상기한 poly(A)⁺RNA를 주형에 XhoI 부위를 연결한 랜덤 9량체:5'-CGATTGAATTCTAGACCTGCCTCGAGNNNNNNNNN-3'(서열 번호 15)을 프라이머로 하여, 수퍼스크립트·플라스미드·시스템(SuperScript Plasmid System for cDNA Synthesis and Plasmid Cloning, 상품명, GIBCOBRL에서 판매)을 이용하여 이중쇄 cDNA의 합성을 행했다. EcoRI 어댑터(GIBCOBRL에서 판매)를 DNA 라이게이션·키트 Ver. 2(DNA ligation kit ver. 2, 상품명, 다까라슈조(주)에서 판매. 이하, cDNA의 연결은 전부 이 키트를 사용함)를 이용하여 연결한 후, XhoI로 소화하여, 아가로스 전기 영동으로 300∼800 bp의 cDNA를 잘라내어 분획하고, pSUC2(미국 특허 제 5536637호 참조)의 EcoRI/NotI 부위에 연결하여, 대장균 DH1OB주에 일렉트로포레이션법으로 형질 전환하여 효모 SST 용의 cDNA 라이브러리를 얻었다.

실시예 3 : SST에 의한 스크리닝 및 SST 양성 클론의 염기 서열의 결정

이 cDNA 라이브러리의 플라스미드를 조제하여, 초산리튬법(Current Protocols In Molecular Biology 13.7.1을 참조)에 의해 효모 YTK12주를 형질 전환하여, 트립토판(Trp)을 포함하지 않는 효모 형질 전환체의 선택 배지(CMD-Trp 배지)의 플레이트 상에 뿌려, 30℃에서 48시간 인큐베이트한 후, 아큐트란·레플리카플레이터(Accutran Replica Plater, 상품명, Schleicher ＆ Schuell에서 판매)를 이용하여 얻어진 콜로니(형질 전환체)의 레플리카를 라피노오스를 탄소원으로 하는 YPR 플레이트에 취하여, 30℃에서 14일간 인큐베이트했다. 3일째 이후, 출현한 각각의 콜로니를 하나씩 재차 YPR 플레이트에 획선 배양하여 30℃에서 48시간 인큐베이트한 후, 싱글 콜로니를 YPD 배지에 식균하여, 30℃에서 48시간 인큐베이트한 후, 플라스미드를 조제했다. 계속해서 pSUC2의 클로닝 부위의 양단의 서열의 2종류의 프라이머(센스쇄는 비오틴화프라이머)를 이용하여 공지의 방법에 따라서 PCR을 실시하여, 삽입 cDNA를 증폭한 후, 다이나비즈(Dynabeads, 상품명, DYNAL에서 판매)를 이용하여 비오틴화 일본쇄 cDNA를 정제하여, 염기 서열의 결정을 행했다. 염기 서열의 결정은 DNA 시퀀싱·키트[DNA Sequencing kit(Dye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction), 상품명, 어플라이드 바이오시스템스 인코포레이티드에서 판매)를 이용한 형광 다이 터미네이터 사이클 시퀀스법으로 반응을 행하고, 자동 DNA 시퀀서 373(어플라이드 바이오시스템스 인코포레이티드)으로 판독을 했다(이하, 염기 서열 결정은 전부 이 방법으로 함).

얻어진 염기 서열 및 추정되는 아미노산 서열에 관해서 데이터 베이스와의 상동성 검색을 하여, 데이터 베이스에 등록되어 있지 않은 신규의 cDNA임이 분명하게 된 클론에 관해서, 전장 cDNA의 클로닝을 시도했다.

실시예 4 : 클론 OC001의 전장 cDNA의 클로닝 및 염기 서열의 결정

전장 cDNA의 클로닝은 마라톤 cDNA 앰플리피케이션·키트(Marathon cDNA Amplification Kit, 상품명, 클론테크사에서 판매)에 의한 3' RACE(Rapid Amplification of cDNA End)법을 이용하여 행했다. 이본쇄 cDNA의 조제에는, 각 클론의 유래, 즉 인간 성인 뇌 조직의 Poly(A)⁺RNA로부터 제작했다. SST에서 얻어진 염기 서열의 정보에 기초하여 추정 해독 개시점 ATG 영역보다 상류의 27량체의 프라이머 OC001-F1:5'-GTCCTTCAGCAAAACAGTGGATTTAAA-3'(서열 번호16)을 제작하여, 이 키트에 첨부된 어댑터 프라이머로 PCR을 행했다. 클론 OC001에 특이적으로 증폭된 cDNA를 아가로스 전기 영동으로 분화한 후, pT7블루-2T-벡터(상품명, 노바겐에서 판매)에 연결하고, 대장균 DH5α에 형질 전환하여 플라스미드를 조제했다. 처음에 5'측의 염기 서열을 결정하여 OC001 SST cDNA의 염기 서열이 존재하는 것을 확인한 후, 전 염기 서열을 결정하여, 서열 번호 3에 나타내는 서열을 얻었다. 또한 오픈 리딩 프레임을 결정하고, 아미노산으로 해독하여 서열 번호 1, 2, 4 및 5에 나타내는 서열을 얻었다.

핵산 서열 데이터 베이스에 등록되어 있는 기지의 핵산 서열에 대하여 BLASTN 및 FASTA에 의해, 또 아미노산 서열 데이터 베이스에 등록되어 있는 기지의 폴리펩티드의 아미노산 서열에 대하여 BLASTX, BLASTP 및 FASTA에 의해 검색한 결과, 본 발명의 폴리펩티드 OC001 및 그것을 암호화하는 핵산 서열과 일치하는 서열은 없었다. 또한 얻어진 아미노산 서열의 소수성 플롯에 의한 해석으로부터 본 발명의 폴리펩티드에는 C 말단에 막 관통 영역이 존재하여 GPI 앵커형임이 예상되었다. 이들의 점에서, 본 발명의 폴리펩티드는 신규의 막 단백질임이 판명되었다. 더욱이 상동성 검색의 결과, BLASTX, BLASTP 및 FASTA는 클론 OC001(서열 번호 1의 아미노산 서열 12∼344 사이의 영역)과 뉴로트리민(neurotrimin[Rattus norvegicus])(젠뱅크 승인번호 U16845의 아미노산 서열 9∼344 사이의 영역) 및 오피오이드 결합 세포 접착 인자(opioid-binding cell adhesion molecule[Homo sapiens])(젠뱅크 승인번호 L34774의 아미노산 서열 9∼345 사이의 영역)와의 사이에 유용한 상동성이 있음을 보였다. 이들 상동성에 기초하여, 클론 OC001은 적어도 뉴로트리민 및 오피오이드 결합 세포 접착 인자가 속하는 신경 세포 접착 인자 패밀리와 같은 활성을 보유한다고 기대된다.

실시예 5 : 클론 OM237의 전장 cDNA의 클로닝 및 염기 서열의 결정

본 발명의 클론 OM237에 관한 실시예는 OC001과 같은 식의 수법을 이용했지만, 이하의 점만 다르다.

전장 cDNA의 클로닝은 마라톤 cDNA 앰플리피케이션·키트(Marathon cDNA Amplification Kit, 상품명, Clontech사에서 판매)에 의한 3' RACE법을 이용하여, OC001과 같은 방법으로 행했다. 이중쇄 cDNA의 조제에는 각 클론의 유래, 즉 인간 성인 뇌 조직의 poly(A)⁺RNA로부터 제작했다. SST에서 얻어진 염기 서열의 정보에 기초하여 추정 해독 개시점 ATG 영역보다 상류의 27량체의 프라이머 OM237-F1:5'-CCAGAAAGCACAGCCCTGATTCTGCGT-3'(서열 번호 17)을 제작하여, 상기 키트에 첨부된 어댑터 프라이머로 PCR를 행했다. 클론 OM237에 특이적으로 증폭된 cDNA를, OC001과 같은 수법으로 다시 클로닝하고, 전 염기 서열을 결정하여, 서열 번호 8에 나타내는 서열을 얻었다. 또한 오픈 리딩 프레임을 결정하고, 아미노산으로 해독하여 서열 번호 6 및 7에 나타내는 서열을 얻었다.

핵산 서열 데이터 베이스에 등록되어 있는 기지의 핵산 서열에 대하여 BLASTN 및 FASTA에 의해, 또한 아미노산 서열 데이터 베이스에 등록되어 있는 기지의 폴리펩티드의 아미노산 서열에 대하여 BLASTX, BLASTP 및 FASTA에 의해 검색한 결과, 본 발명의 폴리펩티드 OM237 및 그것을 암호화하는 핵산 서열과 일치하는 서열은 없었다. 또한 얻어진 아미노산 서열의 소수성 플롯에 의한 해석으로부터 본 발명의 폴리펩티드에는 막 관통 영역이 존재하는 것이 예상되었다. 이들의 점에서, 본 발명의 폴리펩티드는 신규의 막 단백질임이 판명되었다.

실시예 6 : 클론 OA004b의 전장 cDNA의 클로닝 및 염기 서열의 결정

본 발명의 클론 OA004b에 관한 실시예는, OCO001과 같은 수법을 이용했지만, 이하의 점만 다르다.

[poly(A)⁺RNA의 조제]

인간 글리아 아종 세포주 T98G(ATCC No. CRL-690)로부터 TRIzol reagent(등록 상표, GIBCOBRL에서 판매)를 이용하여 전 RNA를 추출하고, mRNA 퓨리피케이션·키트(mRNA Purification kit, 상품명, 파마시아에서 판매)를 이용하여 poly(A)⁺RNA를 정제했다.

[전장 cDNA의 클로닝 및 염기 서열의 결정]

전장 cDNA의 클로닝은 진트랩퍼 cDNA 포지티브 셀렉션 시스템(GENE TRAPPER cDNA Positive Selection System(GIBCOBRL))을 이용하여 행했다. 우선 슈퍼스크립트·플라스미드·시스템(SuperScript Plasmid System for cDNA Synthesis and Plasmid Cloning, 상품명, GIBCOBRL)을 이용하여 인간 글리아 아종 세포주 T98G의 poly(A)⁺RNA으로부터 플라스미드 pSPORT1(GIBCOBRL)을 벡터로 하여 dT-프라이밍된 cDNA 라이브러리를 제작했다. 이어서 SST로 얻어진 염기 서열의 정보에 기초하여 27량체의 비오틴화 프라이머 OA004-F1:5'-비오틴-ATGCACATCTTCAAGCATGCTCAG-3'(서열 번호 18)을 제작한 후, 진트랩퍼(Gene Trapper) 키트의 방법에 따라서 비오틴화 프라이머와 특이적으로 하이브리드화하는 플라스미드를 상기한 cDNA 라이브러리로부터 회수하여, 대장균 DH1OB에 형질 전환시켰다. 또한 랜덤 프라이머 DNA 라벨링 키트(Random Primer DNA Labeling kit, 상품명, 다까라슈죠에서 판매)를 이용하여³²P-dCTP로 표지한 OA004 SST cDNA를 프로브로 하여, 공지의 방법에 의해 콜로니 하이브리드화를 행하고, 양성 클론을 단리하여, 플라스미드를 조제했다. 전 염기 서열을 결정하여, 서열 번호 11에 나타내는 서열을 얻었기 때문에, 각각 OA004b이라고 명명했다. 또한 오픈 리딩 프레임을 결정하고, 아미노산으로 해독하여 서열 번호 9 및 10에 나타내는 서열을 얻었다.

핵산 서열 데이터 베이스에 등록되어 있는 기지의 핵산 서열에 대하여 BLASTN 및 FASTA에 의해, 또 아미노산 서열 데이터 베이스에 등록되어 있는 기지의 폴리펩티드의 아미노산 서열에 대하여 BLASTX, BLASTP 및 FASTA에 의해 검색한 결과, 본 발명의 폴리펩티드 OA004b 및 각각을 암호화하는 핵산 서열과 일치하는 서열은 없었다. 또한 얻어진 아미노산 서열의 소수성 플롯에 의한 해석으로부터 본 발명의 폴리펩티드에는 막 관통 영역이 존재하는 것이 예상되었다. 이들의 점에서, 본 발명의 폴리펩티드는 신규의 막 단백질임이 판명되었다. 그러나, 상동성 검색의 결과, BLASTX, BLASTP 및 FASTA는 클론 OA004b(서열 번호 9의 아미노산 서열 171∼311 사이의 영역)와 52.8kD 단백질(Hypothetical 52.8kD protein [Caenorhabdtis elegans])(SwissProt Accession YJ95_CAEEL의 아미노산 서열 299∼453 사이의 영역)의 사이에 유의 수준의 의미 있는 상동성이 있음을 나타냈다. 또한, 클론 OA004b(서열 번호 9의 아미노산 서열 194∼277 사이의 영역)과 프리세닐린-2(presenilin-2[Homo sapiens])(젠뱅크 승인번호 A56993의 아미노산 서열 340∼416 사이의 영역)의 사이에도 유용하다고 생각되는 상동성이 있음을 보였다. 이들의 상동성에 기초하여, 클론 OA004b는 적어도 프레세닐린(presenilin) 패밀리와 같은 활성을 유지한다고 기대된다.

실시예 7 : 클론 OAFO75b의 전장 cDNA의 클로닝 및 염기 서열의 결정

본 발명의 클론 OAFO75b에 관한 실시예는 OC001과 같은 수법을 이용했지만, 이하의 점만 다르다.

[poly(A)⁺RNA의 조제]

인간 골수 스트로마 세포주 HAS303(도쿄의과대학 제1내과 소토야마 게이스케 교수, 아이자와 신 조수로부터 공여)로부터 TRIzol 시약(등록 상표, GIBCOBRL에서 판매)을 이용하여 전 RNA를 추출하고, mRNA 퓨리피케이션·키트(mRNA Purification Kit, 상품명, 파마시아에서 판매)를 이용하여 poly(A)⁺RNA를 정제했다.

[전장 cDNA의 클로닝 및 염기 서열의 결정]

전장 cDNA의 클로닝은 마라톤 cDNA 앰플리피케이션·키트(Marathon cDNA Amplification Kit, 상품명, 클론테크사에서 판매)에 의한 3' RACE 법을 이용하여, OC001과 같은 방법으로 행했다. 이본쇄 cDNA의 조제에는 각 클론의 유래, 즉 HAS303의 poly(A)⁺RNA로부터 제작했다. SST에서 얻어진 염기 서열의 정보에 기초하여 추정 해독 개시점 ATG 영역을 포함하는 27량체의 프라이머 OAFO75-F1:5'-CCCCGGGGACATGAGGTGGATACTGTT-3'(서열 번호 19)를 제작하여, 그 키트에 첨부된 어댑터 프라이머로 PCR를 행했다. 클론 OAF075B에 특이적으로 증폭된 cDNA를 OC001과 같은 수법으로 다시 클로닝하고, 전 염기 서열을 결정하여, 서열 번호 14에 나타내는 서열을 얻었기 때문에, OAF075b이라고 명명했다. 또한 오픈 리딩 프레임을 결정하고, 아미노산으로 해독하여 서열 번호 12 및 13에 나타내는 서열을 얻었다.

핵산 서열 데이터 베이스에 등록되어 있는 기지의 핵산 서열에 대하여 BLASTN 및 FASTA에 의해, 또 아미노산 서열 데이터 베이스에 등록되어 있는 기지의 폴리펩티드의 아미노산 서열에 대하여 BLASTX, BLASTP 및 FASTA에 의해 검색한 결과, 본 발명의 폴리펩티드 OAF075b 및 각각을 암호화하는 핵산 서열과 일치하는 서열은 없었다.

또한 얻어진 아미노산 서열의 소수성 플롯에 의한 해석으로부터 본 발명의 폴리펩티드에는 막 관통 영역이 존재하지 않음이 예상되었다. 이들의 점에서, 본 발명의 폴리펩티드는 신규의 분비 단백질임이 판명되었다. 또한 상동성 검색의 결과, BLASTX, BLASTP 및 FASTA는 클론 OAF075b(서열 번호 12의 아미노산 서열 1∼359 사이 영역)과 프리프로카르복시펩티다아제 A2(preprocarboxypetidase A2[Homo sapiens])(젠뱅크 승인번호 U19977의 아미노산 서열 1∼355 사이의 영역)의 사이에 유용한 상동성이 있음을 보여, 카르복시펩티다아제 A 패밀리라고 생각되었다. 이들의 상동성에 기초하여, 클론 OAF075b는 적어도 상기한 프리프로카르복시펩티다아제 A2(preprocarboxypeptidase A2[Homo sapiens])와 동일한 활성을 유지한다고 기대된다.

본 발명의 폴리펩티드 및 그것을 암호화하는 cDNA는 하나 또는 그 이상의 효과 또는 생물 활성(이하에 열거하는 분석법(assay)에 관련되는 것을 포함한다)을 보이는 것을 생각할 수 있다. 본 발명의 단백에 관하여 기술되는 효과 또는 생물 활성은 그 단백의 투여 또는 사용에 의해, 또는 그 단백을 암호화하는 cDNA의 투여 또는 사용(예컨대, 유전자 요법이나 cDNA 도입에 알맞은 벡터)에 의해, 제공된다.

[시토킨 활성 및 세포 증식/분화 활성]

본 발명의 단백은 시토킨 활성 및 세포 증식(유도 또는 저해)/분화 활성(유도 또는 저해)을 보일 가능성, 또는 어떤 세포 집단에 다른 시토킨의 생산을 유도 또는 억제한다고 생각된다. 모든 기지의 시토킨을 포함하는, 현재 발견되어 있는 대부분의 단백성 인자는 인자에 의존한 하나 또는 그 이상의 세포 증식 분석법으로, 활성을 보여 왔기 때문에, 이들 분석법은 시토킨 활성의 편리한 확인법으로서 기능한다. 본 발명의 단백의 활성은 많은 종래의 인자 의존성의 세포주의 세포 증식 분석법 중의 어느 것에 의해서 증명될 수 있다.

[면역 자극/억제 활성]

본 발명의 단백은 면역 자극 활성 및 면역 억제 활성을 보인다고 생각된다. 또한, 어떤 단백은 예컨대, T 림프구 및 B 림프구 또는 어느 한쪽의 성장 및 증식을 제어(자극 또는 억제)하는 것이나, 마찬가지로 NK 세포나 다른 집단의 세포 상해성 활성에 영향을 줌으로써, 여러 가지 면역 부전 및 질환[중증 합병형 면역 부전(severe combined immunodeficiency(SCID))를 포함한다]의 치료에 효과를 보인다고 생각된다. 이들 면역 부전은 유전성인 경우도 있고, 예컨대 HIV 같은 바이러스나, 마찬가지로 세균이나 곰팡이의 감염이 원인으로 발생하는 경우도 있다. 또는, 자기 면역 질환으로부터 유래할 가능성도 있다. 구체적으로는, HIV, 간염 바이러스(hepatitis viruses), 헤르페스 바이러스(herpes viruses), 마이코박테리아(mycobacteria), 리슈마니아(leshmania), 말라리아(malaria) 및 칸디다(candida)와 같은 여러 가지 곰팡이 감염을 포함하는, 바이러스, 세균, 곰팡이 또는 다른 감염에 의한 감염증의 원인을, 본 발명의 단백을 이용함으로써 치료할 수 있다고 생각된다. 물론, 이와 관련하여, 본 발명의 단백은 면역 시스템이 증대하고 있다는 것이 일반적으로 시사되는 장소, 즉 암 치료의 부분에 있어서 효과를 보인다고 생각된다.

본 발명의 단백은 알레르기 반응 및 천식이나 다른 호흡기계 질환과 같은 상황의 치료에도 효과를 보인다고 생각된다. 면역 억제가 요구되는 다른 상태(예컨대, 천식이나 관련 호흡기 질환을 포함한다)에도, 본 발명의 단백을 이용하여 치료할 수 있다고 생각된다.

본 발명의 단백은 예컨대, 패혈병성의 쇼크 또는 전신성 염증 반응 증후군(SIRS)과 같은 염증성 대장염, 클론병, 또는 IL-11에 의해 효과가 증명된 TNF나 IL-1과 같은 시토킨의 과잉 생산으로부터 유래하는 감염에 관련된 만성 또는 급성의 염증을 억제할 가능성도 있다.

[조혈 세포 제어 활성]

본 발명의 단백은 조혈 세포의 제어에, 또 그것에 따라서 골수구 모양 세포 또는 림프구 모양 세포의 결핍에 대한 치료에도 효과를 보인다고 생각된다. 콜로니 형성 세포 또는 인자 의존성 세포주의 원조 하에서의 극히 약한 생물 활성에서조차도, 조혈 세포의 제어에 관계됨을 시사한다. 그 생물 활성이란, 다음에 드는 예의 전부 또는 그 어느 것으로 비유할 수 있는 것에 관계되는 것이다. 적혈구 전구 세포만의 성장 및 증식을 지지, 또는 다른 시토킨과의 조합, 또, 그것이 시사하는 유효성, 예컨대, 여러 가지 빈혈의 치료, 또는 적혈구 전구 세포 및 적혈구 또는 그 어느 하나의 생산을 자극하는 방사선 요법/화학 요법과 조합 사용; 과립구 및 단구/마크로파지와 같은 골수구의 성장 및 증식을 지지(즉, 고전적인 CSF 활성), 화학 요법에 따른 골수 억제를 막기 위한 화학 요법과의 병용; 거핵구의 성장 및 증식 및 그것에 이어지는 혈소판의 성장 및 증식의 지지, 그것에 의하여 혈소판 감소증과 같은 여러 가지 혈소판 장해의 방어 및 치료를 가능하게 하는 혈소판 수혈시 또는 상보적으로 일반적 사용; 상기 조혈 세포의 몇 가지 또는 모든 세포로 성숙할 수 있는 조혈 간(幹)세포의 성장 및 증식의 지지, 따라서, 여러 가지 간세포 장해(재생 불량성 빈혈 및 발작성 야간 혈색소뇨증을 포함하는, 이식으로 일반적으로 치료되는 것을 들 수 있으나, 이에 국한된지 않음)에 치료적 효과를 보이고, 또 정상 세포 또는 유전자 치료를 위해 유전적으로 조작된 세포를 시험관내 (in-vitro) 또는 생체외(ex-vivo)(즉, 골수 이식에 따름) 어느 것으로, 방사선 요법/화학 요법후의 간세포 분획의 재구축을 행하는 것도 같은 식이다.

여러 가지의 조혈 간세포주의 증식과 분화에 대한 적절한 분석법은 상기에 기재되어 있다.

본 발명의 단백은 다른 방법 중에서, 이하의 방법에 의해 측정하는 것이 가능하다.

[조직 생성/수복 활성]

본 발명의 단백은 손상 치유 및 조직 수복, 또, 화상, 절개, 및 궤양의 치료와 같이, 뼈, 연골, 힘줄, 인대 및 신경 조직 성장 또는 재생 중 어느 것에 사용할 수 있다고 생각된다.

뼈를 정상적으로 형성하지 않는 환경에서의 연골 및 뼈 또는 어느 하나의 성장을 유도하는 본 발명의 단백은 인간 및 다른 동물의 골절 및 연골 손상 또는 결손의 치유에 적용할 수 있다. 본 발명의 단백을 사용하고 있는 제제는 개방 골절과 같이 폐쇄 골절의 접골, 또 인공 관절의 고정의 개량에도 예방적으로도 사용할 수 있다고 생각된다. 뼈 형성제에 의해 유도된 신생골 형성은 선천성, 외상성, 암 절제술에 의해 유발한 두개 안면의 결손의 수복에 공헌한다. 또한, 미용 성형 외과 분야에도 유효하다.

본 발명의 단백은 치근막증의 치료 및 다른 이(齒)의 수복에도 사용할 수 있다고 생각된다. 그와 같은 약품은 뼈 형성 세포를 끌어 당겨, 그 세포의 증식을 자극하여, 그 전구 세포의 분화를 유도하는 환경을 제공한다고 생각된다. 본 발명의 단백은 뼈 및 연골 또는 어느 하나의 수복을 자극하는 것을 통해서, 또는 염증 또는 염증 과정에서 개재되는 조직 파괴(콜라게나아제 활성이나 파골 세포의 활성)의 과정을 저지함으로써, 골다공증 및 뼈 관절염의 치료에 유효하다고 생각된다.

본 발명의 단백에 기인한다고 생각되는 조직 재생 활성의 다른 카테고리는 힘줄/인대 형성이다. 본 발명의 단백은 힘줄/인대 모양 조직 또는 다른 조직이 정상적으로 형성되지 않는 환경에서 그와 같은 조직 형성을 유도하는 것이지만, 인간 및 다른 동물에 있어서의 힘줄/인대의 열상(裂傷), 기형 및 다른 힘줄/인대의 장해의 치유에 적용할 수 있다. 힘줄/인대 모양 조직을 유도하는 단백을 사용하고 있는 제제는 뼈 또는 다른 조직에의 힘줄/인대의 고정의 개량, 및 힘줄/인대 조직의 결손의 수복에서의 사용은 물론, 힘줄 또는 인대의 손상의 방어에 대하여 예방적 사용도 생각할 수 있다. 본 발명의 구성물에 의해 유도된 신생 힘줄/인대 모양 조직 형성은 선천성, 외상, 또는 다른 기원의 힘줄 또는 인대 결손의 수복에 공헌한다. 또한, 힘줄 또는 인대의 첨부 또는 수복이라는 미용 성형 외과에서도 유효하다. 본 발명의 구성물은 힘줄/인대 형성 세포를 끌어 당겨, 그 세포의 증식을 자극하여, 그 전구 세포의 분화를 유도하는 환경을 제공한다고 생각된다. 또는, 조직 수복을 다하기 위해서 생체내(in vivo)로의 반환에 대비하여 생체외(ex vivo)로 힘줄/인대 세포 또는 그 전구 세포를 유도한다. 본 발명의 구성물은 건염(腱炎), 손목뼈 터널 증후군(Carpal tunel syndrome) 및 다른 힘줄 또는 인대 결손의 치료에도 유효하다. 이 구성물에는 적당한 매트릭스 및 캐리어와 같이 당업자에게 잘 알려져 있는 격리(sequestering)제도 포함된다.

본 발명의 단백은 신경 세포의 증식, 및 신경 및 뇌 조직의 재생, 즉 신경 세포 또는 신경 조직에 대한 변성, 죽음, 또는 외상을 포함하는 기계적 및 외상적 장해와 같이 중추 및 말초 신경계 질환 및 신경병의 치료에 대하여도 효과를 보인다고 생각된다. 구체적으로는 어떤 단백은 말초 신경 장해, 말초 신경증 및 국소적 신경증과 같은 말초 신경계의 질환 및 알츠하이머병, 파킨슨병, 헌팅톤병, 근 위축성 측삭증(amyotropic lateral) 및 샤이·드레거(Shy-Drager) 증후군과 같은 중추 신경계 질환의 치료에 유효하다고 생각된다. 또한 본 발명에 따라서 치료될 수 있는 조건에는 척수 장해, 머리 부분 외상, 및 뇌졸중 등의 뇌혈관 질환과 같은 기계적 및 외상적 장해를 포함한다. 화학 요법 또는 다른 치료로부터 기인하는 말초 신경증도 본 발명의 단백을 이용하여 치료가 가능하다.

본 발명의 단백은 예컨대, 췌장, 간장, 장, 신장, 피부, 내피를 포함하는 장기, 평활, 골격 또는 심장 근육 및 혈관 내피를 포함하는 혈관 조직과 같은 다른 조직을 생성하는 활성, 또는 그와 같은 조직을 구성하는 세포의 증식을 촉진하는 활성을 보일 가능성도 기대된다. 요구되는 효과의 일부는 정상 조직을 재생시키는 섬유성 반흔(scarring)의 저해에 의해서도 담당된다고 생각된다.

본 발명의 단백은 소화관 보호 또는 재생 및 폐 또는 간장의 섬유화, 여러 가지 조직의 재환류 손상 및 전신성 시토킨 장해에 기인하는 상태에 대한 치료에도 유효하다고 생각된다.

[악티빈/인히빈 활성]

본 발명의 단백은 악티빈/인히빈에 관련한 활성을 보인다고 생각된다. 악티빈은 여포 자극 호르몬(FSH)의 방출을 자극하는 활성이 특징이지만, 인히빈은 여포 자극 호르몬(FSH)의 방출을 저해하는 활성이 특징이다. 따라서, 본 발명의 단백은 단독 또는 인히빈 a 패밀리의 멤버와의 이종 이량체로, 포유류 동물의 암컷의 수정율을 감소시키고, 수컷의 정자 형성을 멸소시키는 인히빈의 활성에 기초한 피임 조절제로서 유효하다고 생각된다. 충분량의 다른 인히빈의 투여에 의해서, 포유 동물의 불임을 유도할 수 있다. 한편, 본 발명의 단백은 인히빈 b 그룹의 다른 단백 서브유니트와의 동종 이량체 또는 이종 이량체로, 전뇌하수체의 세포로부터 FSH 방출을 자극하는 악티빈 분자의 활성에 기초한 치료적인 불임 유도로서 유효하다고 생각된다(미국 특허 제4,798,885호를 참조). 본 발명의 단백은 소, 양 및 돼지와 같은 가축의 일생 출산 능력 가능한 기간을 연장시키기 위해서, 성적으로 미숙한 포유류 동물에 있어서의 임신 개시를 빠르게 하는 데에 유효하다고 생각된다.

[주화성/화학 운동성 활성]

본 발명의 단백은 예컨대, 단구, 호중구, T 세포, 마스트 세포, 호산구 및 내피 세포, 또는 그 어느 하나를 포함하는 포유 동물의 세포에 대하여, 예컨대, 케모카인으로서 기능하는 주화성/화학 운동성 활성을 갖는다고 생각된다. 주화성/화학 운동성 단백은 반응이 요구되는 부위에, 요구되는 세포 집단을 고정화 또는 끌어 당기기 위해서 사용되는 것이 가능하다. 주화성/화학 운동성 단백은 국소적인 감염과 마찬가지로, 창상 및 다른 외상의 치료에 특별한 우위성을 제공한다. 예컨대, 림프구, 단구, 또는 호중구를 종양 또는 감염 부위에 끌어 당기는 것은 종양 또는 감염 부위에 대한 면역 응답을 개선하는 결과가 된다고 생각된다.

단백이나 펩티드는 혹시 그것이 직접 또는 간접으로 특수한 세포 집단에 대하여 지시된 방향 또는 운동을 자극할 수 있으면, 그와 같은 세포 집단에 대한 주화성 활성를 유지하고 있다. 바람직하게는, 그 단백이나 펩티드는 세포의 지시된 운동을 직접적으로 자극하는 활성을 유지한다. 특별한 단백이 있는 집단의 세포에 대하여 주화성 활성을 유지하는지의 여부는 기지의 어떠한 세포 주화성의 앗세이법에 그와 같은 단백 또는 펩티드를 사용하더라도 용이하게 결정할 수 있다.

[응혈 및 혈전 활성]

본 발명의 단백은 응혈 또는 혈전 활성을 보인다고 생각된다. 결과적으로, 그와 같은 단백은 다양한 응고 장해(혈우병과 같은 유전성 장해를 포함한다)의 치료에 유효하다고 예기된다. 또는, 외상, 수술 또는 다른 원인에 의해 생긴 창상의 치료에 있어서의 응고 및 다른 응혈 사상(事象)을 촉진시키는 것이 예상 기대된다. 본 발명의 단백은 혈전의 형성의 용해 또는 저해, 및 혈전 또는 졸중 등에 의해 생기는 상태의 치료 및 예방에도 효과가 있다고 생각된다.

[수용체/리간드 활성]

본 발명의 단백은 수용체, 수용체/리간드 또는 수용체/리간드의 억제제 또는 작동 물질로서의 활성을 보일 가능성도 있다. 그와 같은 수용체 및 리간드의 예로서, 시토킨 수용체 및 그 리간드, 수용체 키나제 및 그 리간드, 수용체 포스파타아제 및 그 리간드, 세포간 상호 작용에 관련한 수용체(셀렉틴(selectin), 인테구린(Integurin)및 그 리간드, 수용체 키나제를 포함하는 세포 접착 분자 등) 및 그 리간드, 및 항원 제시, 항원 인식 및 세포성 및 액성 면역 반응의 발달에 관계되는 수용체/리간드의 조합을 들 수 있지만, 본 발명을 제한하는 것은 아니다. 수용체 및 리간드는 그 상호 작용에 대한 가능한 펩티드 또는 소분자의 억제제의 스크리닝에도 유효하다. 본 발명의 단백(수용체 및 리간드의 단편을 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다)은 그 자신 수용체/리간드의 상호 작용의 억제제로서 유효하다고 생각된다.

[그 밖의 활성]

본 발명의 단백은 이하에 나타내는 부가적인 활성 또는 효과의 하나 또는 그 이상을 보인다고 생각된다: 세균, 바이러스, 곰팡이 및 다른 기생충을 포함하는 감염성 물질을 살상한다: 신장, 체중, 머리털의 색, 눈의 색, 피부 또는 다른 조직의 색소 침착, 또는 예컨대, 흉부 증량 또는 감량 등의 기관의 크기 등의 신체적 특징을 억제 또는 촉진하는 효과를 미치게 한다; 식이 지방, 단백, 또는 탄수화물의 분해에 효과를 미치게 한다; 식욕, 성욕, 스트레스, 인식(인식 장해), 우울병, 폭력 행동을 포함하는 행동 특징에 효과를 미치게 한다; 진통효과 또는 다른 통증을 감소시키는 효과를 제공한다; 배성(胚性) 간세포의 조혈계 이외의 다른 계통에의 분화 및 증식을 촉진한다; 또한 효소의 경우, 그 효소의 결실을 보충하고, 또 관련 질환을 치료한다.

상기 활성을 갖는 단백은 예컨대, B 세포, T 세포, 비만 세포의 증식 또는 세포사, 면역 글로불린의 종류 전환 촉진에 의한 종류 특이적 유도, B 세포의 항체 생산 세포로의 분화, 과립구 전구 세포의 증식 또는 분화, 세포사, 단구·마크로파지 전구 세포의 증식 또는 분화, 세포사, 호중구, 단구·마크로파지, 호산구, 호염기구의 증식 또는 기능 항진, 세포사, 거핵구 전구 세포의 증식 또는 세포사, 호중구 전구 세포의 증식 또는 분화, 세포사, B 또는 T 전구 세포의 증식 또는 분화, 세포사, 적혈구의 생산 촉진, 적혈구, 호중구, 호산구, 호염기구, 단구·마크로파지, 비만 세포, 거핵구 전구 세포의 증식 지지, 호중구, 단구·마크로파지, B 세포 또는 T 세포의 유주 촉진, 흉선 세포의 증식 또는 세포사, 지방 세포의 분화 억제, 천연 킬러 세포의 증식 또는 세포사, 조혈 간세포의 증식 또는 세포사, 간세포 및 각종 조혈 전구 세포의 증식 억제, 간엽계 간세포로부터의 골아 세포, 연골 세포로의 분화 촉진 또는 증식, 세포사, 또는 파골 세포의 활성화나 단구로부터 파골 세포로의 분화 촉진에 의한 뼈 흡수의 촉진 작용을 본 폴리펩티드만으로, 또 리간드-수용체 사이의 결합을 통해, 또는 다른 분자와 상승적으로 작용함으로써 갖는다고 생각된다.

또 본 발명의 펩티드는 신경계에도 작용하는 것이 예측되기 때문에, 각종 신경 전달 물질 작동성 신경 세포로의 분화 및 이들의 생존 유지 또는 세포사, 글리아 세포의 증식 촉진 또는 세포사, 신경 돌기의 신전(伸展), 신경절 세포의 생존 유지 또는 세포사, 아스트로사이트의 증식 또는 분화 촉진 또는 세포사, 말초 신경의 증식 또는 생존 유지, 세포사, 슈완 세포의 증식 또는 세포사, 운동 신경의 증식 또는 생존 유지, 세포사의 작용도 있다고 생각된다.

또한, 본 발명의 폴리펩티드는 초기 배의 발생 과정에서, 외배엽 유도 작용에 의한 표피, 뇌, 등뼈, 신경의 기관 형성, 중배엽 유도 작용에 의한 배색(背索) 결합 조직(뼈, 근육, 힘줄), 혈구 세포, 심장, 신장, 생식소의 기관 형성, 또는 내배엽 유도 작용에 의한 소화기계 장기(위, 장, 간장, 췌장), 호흡기계(폐, 기관)의 형성에 촉진적 또는 억제적으로 작용한다고 생각되며, 생체에 있어서도 상기 기관의 증식 또는 증식 억제 작용을 갖는다고 생각된다. 따라서, 본 발명의 폴리펩티드는 그 자신으로, 면역계 또는 신경계 또는 골대사의 기능의 저하 또는 항진에 관한 질환, 또는 조혈계 세포의 발육 부전 또는 이상 증식, 예컨대, 염증성 질환(류머티즘, 궤양성 대장염 등), 골수 이식후의 조혈 간세포의 감소증, 암, 백혈병에 대한 방사선 조사 또는 화학 요법제 투여후의 백혈구, 혈소판, B 세포 또는 T 세포의 감소증, 빈혈, 감염증, 암, 백혈병, 에이즈(AIDS), 골대사 이상(골다공증), 각종 변성 질환(알츠하이머병, 다발성 경화증 등), 또는 신경 손상의 예방 또는 치료약으로서 이용하는 것이 기대된다.

또 본 발명의 폴리펩티드는 외배엽, 중배엽 또는 내배엽 유래 기관의 분화 또는 증식 작용을 갖는다고 생각되기 때문에, 각 기관(표피, 뼈, 근육, 힘줄, 심장, 신장, 위, 장, 간장, 췌장, 폐, 기관 등)의 조직 수복제로서 이용하는 것도 기대된다.

또한, 본 발명의 폴리펩티드의 폴리클로날 항체 또는 모노클로날 항체를 이용하여, 생체에 있어서의 그 폴리펩티드의 정량을 행할 수 있어, 이것에 의해서 그 폴리펩티드와 질환과의 관계의 연구 또는 질환의 진단 등에 이용할 수 있다. 폴리클로날 항체 및 모노클로날 항체는 상기 폴리펩티드 또는 그 단편을 항원으로서 이용하여 통상의 방법에 의해 제작할 수 있다.

또한 본 발명의 폴리펩티드(바람직하게는 그 세포외 도메인의 폴리펩티드)를 이용함으로써, 예컨대, 친화도 컬럼을 제작하여, 본 발명의 폴리펩티드와 결합하는 기지 또는 미지의 단백(리간드)의 확인, 정제 또는 그 유전자 클로닝을 행할 수 있다.

또 본 발명의 폴리펩티드(바람직하게는 그 막 관통 영역 또는 세포내 도메인의 폴리펩티드)를 이용하여, 예컨대 웨스트-웨스턴법에 의해, 또는 본 발명의 cDNA(바람직하게는 본 발명의 폴리펩티드의 막 관통 영역 또는 세포내 도메인을 암호화하는 cDNA)를 이용하여, 예컨대 효모2-하이브리드법에 의해 본 발명의 폴리펩티드와 세포질 내에서 상호 작용하는 하류의 시그널 전달 분자의 확인, 유전자 클로닝을 행할 수도 있다.

또한 본 발명의 폴리펩티드를 이용함으로써, 본 발명의 폴리펩티드 수용체 작동 물질, 길항 물질 및 수용체-시그널 전달 분자 사이의 저해제 등의 스크리닝을 행할 수도 있다.

본 발명의 cDNA는 많은 유용성이 기대되는 본 발명의 폴리펩티드를 생산할 때의 중요하고 또한 필수적인 주형이 될 뿐만 아니라, 유전병의 진단이나 치료(유전자 결손증의 치료 또는 안티센스 DNA(RNA)에 의해서, 폴리펩티드의 발현을 정지시킴에 의한 치료 등)에 이용할 수 있다. 또한, 본 발명의 cDNA를 프로브로 하여 게놈(genomic) DNA를 분리할 수 있다. 같은 식으로, 본 발명 cDNA와 상동성이 높은 인간의 관련 폴리펩티드의 유전자, 또 마우스 이외의 생물에 있어서의 본 발명 폴리펩티드와 상동성이 높은 폴리펩티드의 유전자를 분리하는 것도 가능하다.

[의약품에의 적용]

상기한 질환에 적응하기 위해서, 본 발명의 폴리펩티드, 또는 본 발명의 폴리펩티드에 대한 항체는 통상, 전신적 또는 국소적으로, 일반적으로는 경구 또는 비경구의 형태로 투여한다. 바람직하게는, 경구 투여, 정맥내 투여 및 뇌실내 투여이다.

투여량은 연령, 체중, 증상, 치료 효과, 투여 방법, 처리 시간 등에 따라 다르지만, 통상, 성인 1인당, 1회에, 100 ㎍에서 100 mg의 범위에서, 하루 1회에서 수회 경구 투여되거나 또는, 성인 1인당, 1회에, 10 ㎍에서 100 mg의 범위에서, 하루 1회에서 수회 비경구 투여된다.

물론 상기한 것과 같이, 투여량은 여러 가지 조건에 따라 변동하기 때문에, 상기 투여량보다 적은 양으로 충분한 경우도 있고, 또 범위를 넘어서 필요한 경우도 있다.

본 발명의 화합물을 투여할 때는, 경구 투여를 위한 고체 조성물, 액체 조성물 및 그 밖의 조성물, 비경구 투여를 위한 주사제, 외용제, 좌제 등으로서 이용된다.

경구 투여를 위한 고체 조성물에는 정제, 환제, 캡슐제, 산제, 과립제 등이 포함된다. 캡슐에는, 소프트 캡슐 및 하드 캡슐이 포함된다.

이러한 고체 조성물에 있어서는, 하나 또는 그 이상의 활성 물질이, 적어도 하나의 불활성의 희석제(예컨대, 락토오스, 만니톨, 글루코스, 히드록시프로필셀룰로오스, 미결정셀룰로오스, 전분, 폴리비닐피롤리돈, 메타규산알루민산마그네슘 등)와 혼합된다. 조성물은 통상의 방법에 따라서, 불활성의 희석제 이외의 첨가물, 예컨대, 윤활제(스테아린산마그네슘 등), 붕괴제(섬유소 글리콜산칼슘 등), 안정화제(인간 혈청 알부민, 락토오스 등), 용해 보조제(아르기닌, 아스파라긴산 등)를 함유하고 있더라도 좋다.

정제 또는 환제는 필요에 따라 백당, 젤라틴, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로오스프탈레이트 등의 위용성 또는 장용성의 막으로 피막하더라도 좋고, 또한 2 이상의 층으로 피막하더라도 좋다. 더욱이 젤라틴과 같은 흡수될 수 있는 물질의 캡슐도 포함된다.

경구 투여를 위한 액체 조성물은 약학적으로 허용되는 유탁제, 용액제, 현탁제, 시럽제, 엘릭시르제 등을 포함하며, 일반적으로 이용되는 불활성의 희석제(예컨대, 정제수, 에탄올 등)를 포함하고 있더라도 좋다. 이와 같은 조성물은 불활성인 희석제 이외에 습윤제, 현탁제와 같은 보조제, 감미제, 풍미제, 방향제, 방부제를 함유하고 있더라도 좋다.

경구 투여를 위한 그 밖의 조성물로서는, 하나 또는 그 이상의 활성 물질을 포함하고, 그 자체 공지의 방법에 의해 처방되는 스프레이제가 포함된다.

이 조성물은 불활성의 희석제 이외에 아황산수소나트륨과 같은 안정제와 등장성을 부여하는 안정화제, 염화나트륨, 시트르산나트륨 또는 시트르산과 같은 등장제를 함유하고 있더라도 좋다. 스프레이제의 제조 방법은 예컨대, 미국 특허 제2,868,691호 및 동 제3,095,355호 명세서에 자세히 기재되어 있다.

본 발명에 의한 비경구 투여를 위한 주사제로서는 무균의 수성 또는 비수성의 용액제, 현탁제, 유탁제를 포함한다. 수성 또는 비수성의 용액제, 현탁제로서는 하나 또는 그 이상의 활성 물질이, 적어도 하나의 불활성의 희석제와 혼합된다. 수성의 희석제로서는, 예컨대, 주사용 증류수 및 생리 식염수를 들 수 있다. 비수성의 희석제로서는, 예컨대, 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브유와 같은 식물유, 에탄올과 같은 알콜류, 폴리솔베이트 80(등록 상표) 등을 들 수 있다.

이러한 조성물은, 또한 방부제, 습윤제, 유화제, 분산제, 안정화제(예컨대, 인간 혈청 알부민, 락토오스 등), 용해 보조제(예컨대, 아르기닌, 아스파라긴산 등)과 같은 보조제를 포함하고 있더라도 좋다.

Claims (10)

1. 실질적으로 순수한 형태인 서열 번호 1, 4, 6, 9 또는 12로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드, 그 상동체, 그 단편 또는 그 단편의 상동체로 이루어지는 폴리펩티드.
2. 제1항에 있어서, 서열 번호 1, 4, 6, 9 또는 12로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드.
3. 제1항에 기재된 폴리펩티드를 암호화하는 cDNA.
4. 서열 번호 2, 5, 7, 10 또는 13으로 나타내어지는 염기 서열로 이루어지는 제3항에 기재한 cDNA, 또는 그 서열에 선택적으로 하이브리드화하는 단편으로 이루어지는 cDNA.
5. 서열 번호 3, 8, 11 또는 14로 나타내어지는 염기 서열로 이루어지는 제3항에 기재한 cDNA, 또는 그 서열에 선택적으로 하이브리드화하는 단편으로 이루어지는 cDNA.
6. 제3항 내지 제5항 중의 어느 하나의 항에 기재한 cDNA로 이루어지는 복제 또는 발현 벡터.
7. 제6항에 기재한 복제 또는 발현 벡터에 의해 형질 전환된 숙주 세포.
8. 제1항 또는 제2항에 기재된 폴리펩티드를 발현시키기 위한 조건하에서 제7항에 기재한 숙주 세포를 배양하는 것을 특징으로 하는 상기 폴리펩티드의 제조 방법.
9. 제1항 또는 제2항에 기재된 폴리펩티드의 모노클로날 또는 폴리클로날 항체.
10. 제1항 또는 제2항에 기재된 폴리펩티드 또는 제9항에 기재한 항체 및 약학적으로 허용되는 부형제 및/또는 담체를 함유하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.