KR20010034137A - 설페이트화 사카라이드 - Google Patents

설페이트화 사카라이드 Download PDF

Info

Publication number
KR20010034137A
KR20010034137A KR1020007007754A KR20007007754A KR20010034137A KR 20010034137 A KR20010034137 A KR 20010034137A KR 1020007007754 A KR1020007007754 A KR 1020007007754A KR 20007007754 A KR20007007754 A KR 20007007754A KR 20010034137 A KR20010034137 A KR 20010034137A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
sulfated
sulfated polysaccharide
present
polysaccharide
polysaccharides
Prior art date
Application number
KR1020007007754A
Other languages
English (en)
Inventor
사카이다케시
기무라히토미
가타야마가오루
시마나카가즈오
이카이가츠시게
가토이쿠노신
Original Assignee
오미야 히사시
다까라 슈조 가부시키가이샤
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 오미야 히사시, 다까라 슈조 가부시키가이샤 filed Critical 오미야 히사시
Publication of KR20010034137A publication Critical patent/KR20010034137A/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/72—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds
    • A61K8/73—Polysaccharides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C10—PETROLEUM, GAS OR COKE INDUSTRIES; TECHNICAL GASES CONTAINING CARBON MONOXIDE; FUELS; LUBRICANTS; PEAT
    • C10M—LUBRICATING COMPOSITIONS; USE OF CHEMICAL SUBSTANCES EITHER ALONE OR AS LUBRICATING INGREDIENTS IN A LUBRICATING COMPOSITION
    • C10M145/00—Lubricating compositions characterised by the additive being a macromolecular compound containing oxygen
    • C10M145/40—Polysaccharides, e.g. cellulose

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

화학식 1로 표시되는 설페이트화 사카라이드; 구성당의 필수성분으로 설페이트화 사카라이드를 포함하는 설페이트화 폴리사카라이드; 또는 이들의 염.
화학식
(식에서, R은 OH 또는 OSO3H이고, n은 1 내지 5의 정수이다)

Description

설페이트화 사카라이드{SULFATED SACCHARIDES}
갈조류에 속하는 해조류가 설페이트화 폴리사카라이드를 함유하고 있음이 알려져 왔고 설페이트화 퓨코스가 구성당의 주성분인 퓨코이단의 구조가 갈조류의 종류에 따라 상당히 다양하다는 것이 보고되어 왔다.
또한, 설페이트화 폴리사카라이드로부터 유도된 설페이트화 사카라이드가 갈조류의 종류에 따라 상당히 다양하다는 것도 보고되어 왔다.
발명의 해결과제
본 발명의 목적은 시약, 약제 등으로 유용한, 신구조를 갖는 설페이트화 사카라이드 및 설페이트화 폴리사카라이드를 제공하는 것이다.
과제 해결수단
본 발명자는 전술한 목적을 달성하기 위하여 갈조류로부터 유도된 설페이트화 폴리사카라이드에 대한 집중적인 조사를 벌였고, 화학식 1로 표시되는 설페이트화 사카라이드를 구성당의 필수성분으로 하는 설페이트화 폴리사카라이드(이하, 간단히 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드로 칭함) 및 설페이트화 사카라이드의 제조방법을 확립하였고 이에 본 발명을 달성하였다.
간단히 말해서, 본 발명은 화학식 1로 표시되는 설페이트화 사카라이드 또는 설페이트화 사카라이드가 구성당의 필수성분인 설페이트화 폴리사카라이드 및 이들의 염에 관한 것이다.
(식에서, R은 OH 또는 OSO3H이고; n은 1 내지 5의 정수이다)
본 발명의 제 2 특징은 조류로부터 폴리양이온 물질과 설페이트화 폴리사카라이드 간의 가교결합 비파괴 조건하에서 추출하는 단계를 포함함을 특징으로 하는, 폴리양이온 물질과 가교결합된 설페이트화 폴리사카라이드의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명의 제 3 특징은 등전점이 설페이트화 폴리사카라이드 용액의 pH보다 높은 폴리양이온 물질을 용액에 첨가함을 특징으로 하는, 폴리양이온 물질과 가교결합된 설페이트화 폴리사카라이드의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명의 제 4 특징은 폴리양이온 물질이 설페이트화 폴리사카라이드에 첨가됨을 특징으로 하는, 설페이트화 폴리사카라이드의 점탄성 강화방법에 관한 것이다.
본 발명의 제 5 특징은 적어도, 점탄성이 낮은 설페이트화 폴리사카라이드 및 폴리양이온 물질을 함유하는 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 제 6 특징은 폴리양이온 물질과 가교결합되는 설페이트화 폴리사카라이드가 유효성분으로 함유됨을 특징으로 하는 약제에 관한 것이다.
본 발명의 제 7 특징은 폴리양이온 물질과 가교결합되는 설페이트화 폴리사카라이드가 유효성분으로 함유됨을 특징으로 하는 윤활제에 관한 것이다.
본 발명의 제 8 특징은 폴리양이온 물질과 가교결합되는 설페이트화 폴리사카라이드가 유효성분으로 함유됨을 특징으로 하는 화장품에 관한 것이다.
본 발명은 약제, 당쇄공학 연구용 시약, 화장품 등으로 유용한, 해조류로부터 유도된 설페이트화 사카라이드 및 설페이트화 폴리사카라이드에 관한 것이다.
도 1은 설페이트화 사카라이드의 질량분석 결과를 도시한다.
도 2는 설페이트화 사카라이드의1H-NMR 스펙트럼을 도시한다.
도 3은 설페이트화 사카라이드의13C-NMR 스펙트럼을 도시한다.
도 4는 분획번호 67의1H-NMR 스펙트럼을 도시한다.
도 5는 본 발명에 따른 설페이트화 폴리사카라이드의1H-NMR 스펙트럼을 도시한다.
도 6은 본 발명에 따른 설페이트화 폴리사카라이드의 IR 스펙트럼을 도시한다.
발명의 실시양식
본 발명은 이하에서 구체적으로 설명된다.
본 발명에 사용된 갈조류의 종류로는, 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드를 함유하고 있는 한 특별한 제한은 없다. 크젤마니엘라 크래시폴리아(Kjellmaniella crassifolia), 라미나리아 자포니카(Laminaria japonica), 운다리아 피내티피다(Undaria pinnatifida), 에클로니아 쿠로메(Ecklonia kurome), 에이세니아 비사이클리스(Eisenia bicyclis), 에클로니아 카바(Ecklonia cava), 자이언트 켈프(giant kelp), 레소니아 니그레센스(Lessonia nigrescens) 등과 같은 라미나리알레스(Laminariales) 목에 속하는 해조류는 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드를 다량 함유하고 있으므로 특히 바람직한 출발물질이다.
본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드의 제조시, 설페이트화 폴리사카라이드의 추출물은 수성 용매를 사용하여 갈조류로부터 수득된다. 추출에 사용된 해조류는 생 조류일 수 있거나 갈조류는 추출물을 수득하기 전에 건조시키거나 건조분말로 만들 수 있다.
또한, 건조된 조류 물질이 60 내지 100% 알콜, 아세톤 등으로 세척될 때, 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드 중으로 착색 물질의 오염은 현저히 감소되며, 따라서 추후 수행하게 될 본 발명의 설페이트화 사카라이드의 제조에 유리하다.
본 발명에 따른 갈조류로부터 설페이트화 폴리사카라이드의 추출은 바람직하게는 에틸 알콜의 존재하에서 수행되며 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드는 5 내지 40% 에틸 알콜 또는 더욱 바람직하게는 8 내지 15% 에틸 알콜의 존재하에 수성 용매로 선택적으로 추출될 수 있다.
또한, 칼슘 클로라이드 또는 칼슘 아세테이트와 같이 알긴산과의 침전물을 형성하는 무기 염이 갈조류로부터 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드의 추출에 사용될 때, 알긴산의 오염은 대폭 감소되고, 따라서 추후에 수행될 정제에 유리하다.
본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드 추출온도는 바람직하게는 50℃ 이하, 또는 유리하게는 15 내지 30℃이다.
추출시 pH는 온도에 좌우될 수 있지만, 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드가 산과 알칼리에 불안정하므로, 약 pH 6 내지 8의 중성 영역에서의 추출이 바람직하다.
추출은 교반하에 수행될 수 있지만, 가장 유리하게는 비-전단 조건하에서 수행하여 본 발명의 설페이트화 폴리사카이드가 효율적으로 제조될 수 있다.
첨언하면, 갈조류의 전술한 추출물은 종종 중성당 및 단백질과 같은 불순물로 오염된다. 중성당의 제거는 배제 분자량이 약 100,000 이하인 한외여과에 의해 용이하게 달성될 수 있다. 단백질의 제거시, 프로테아제 처리 등이 효과적이다.
본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드로부터 저분자 물질인 본 발명의 설페이트화 사카라이드의 제조시, 설페이트화 폴리사카라이드는 폴리사카라이드에 대한 선택적 작용에 의해 본 발명의 설페이트화 사카라이드의 방출작용을 지닌 엔도-설페이트화 폴리사카라이드 분해효소로 처리된다. 상기 엔도-설페이트화 폴리사카라이드 분해효소에는 특별한 제한이 없으며 이의 예로는 실시예 1-(1)에서 언급되는 앨터로모나스 종 SN-1009(FERM BP-5747)에 의해 생성된 엔도-설페이트화 폴리사카라이드 분해효소이다.
본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드를 상기 엔도-설페이트화 폴리사카라이드 분해효소로 처리한 다음 생성되는 반응산물을 그 자체로 사용하는 것이 가능하지만, 산물이 약제나 시약으로 사용될 경우, 반응용액으로부터 본 발명의 설페이트화 사카라이드를 정제하는 것이 권장된다. 한외여과가 적용될 수 있거나 음이온 교환 수지, 소수성 크로마토그래피용 수지, 겔 여과용 수지 등이 정제 수행에 사용될 수 있다.
본 발명의 설페이트화 사카라이드는 생 갈조류를 전술한 엔도-설페이트화 폴리사카라이드 분해효소로 직접 처리하여 수득되는 분해산물로부터 정제될 수 있거나 건조 해조류, 알콜-세척 해조류, 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드 함유물 등을 전술한 엔도-설페이트화 폴리사카라이드 분해효소로 처리하여 수득되는 분해산물로부터 정제될 수 있다. 첨언하면, 본 발명의 설페이트화 사카라이드의 생산 효율은 본 발명의 설페이트화 사카라이드가 반응용액으로부터 분리되는 단계를 상기 효소반응에 병합시킬 때 향상된다.
본 발명의 설페이트화 사카라이드의 예는 화학식 1에서 n이 1 내지 5인 각종 설페이트화 사카라이드이며 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드가 상기 엔도-설페이트화 폴리사카라이드 분해효소로 처리되는 효소 작용조건에 따라 분자량이 다양한 설페이트화 사카라이드가 제조될 수 있다. 각각의 생성되는 설페이트화 사카라이드는 설페이트화 사카라이드의 분자량 분획화에 의해 수득한 분획화 산물로부터 상기 정제수단에 의해, 예를 들면, 겔 여과나 한외여과에 의해 분리해낼 수 있다. 겔 여과의 예로, 셀룰로화인 GCL-300은 예를 들면, 분자량이 25,000 이상, 10,000 이상 25,000 이하, 5,000 이상 10,000 이하 등인 분획의 제조에 사용되며, 다른 예로 셀룰로화인 GCL-90은 분자량이 20,000 이하인 분획을 예를 들면, 분자량이 15,000 이상 20,000 이하, 10,000 이상 15,000 이하, 5,000 이상 10,000 이하 등인 분획으로 분리하는 데 사용된다.
한외여과의 경우, 분자량 분획화는 예를 들면, 한외여과막과 한외여과용 홀로화이버(holofiber)를 사용하여 수행될 수 있다. 예를 들면, 분자량이 30,000 이하인 분획 및 6,000 이하인 분획은 각각 FE10-FUS0382 및 FE-FUS-653(모두 Daicel 제조)를 사용하여 제조될 수 있다. 이러한 겔 여과 및 한외여과를 병합할 경우, 임의 분자량의 분획이 제조될 수 있고 목적하는 설페이트화 사카라이드가 제조된 분획으로부터 분리될 수 있다. 따라서, 본 발명의 설페이트화 사카라이드는 화학식 1에서 n이 5 이상인 설페이트화 사카라이드도 포함한다.
본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드 및 설페이트화 사카라이드의 염으로는, 약학적으로 허용되는 염이 있으며 공지방법에 의해 제조될 수 있다.
본 발명에 의해 수득된 설페이트화 사카라이드, 설페이트화 폴리사카라이드 또는 이들의 염은 퓨코스 잔기 함량 및 설페이트화 정도가 매우 높고 설페이트화-퓨코스-함유 폴리사카라이드의 구조 연구용 시약으로서 및 또한 설페이트화-퓨코스-함유 폴리사카라이드의 생리학적 기능 연구용 시약으로서 유용하다.
본 발명의 설페이트화 사카라이드 및 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드내 설페이트 그룹과 관련하여, 설페이트 그룹의 수는 설페이트화 폴리사카라이드 추출조건 및 설페이트화 사카라이드 제조조건에 따라 다양할 수 있다. 예를 들면, 설페이트 그룹의 에스테르 결합은 통상적으로 산에 약한 반면에 퓨코스의 2- 및 3-위치에 결합된 설페이트 에스테르는 알칼리에 약하다. 따라서, 본 발명의 설페이트화 사카라이드 및 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드내 설페이트 그룹의 수에는 특별한 제한이 없지만, 적당한 조건을 설정함으로써 임의 설페이트 그룹 함량이 이용가능하다.
본 발명에 따른 설페이트화 사카라이드, 설페이트화 폴리사카라이드 또는 이들의 염은 또한 퓨코스 잔기 중의 메틸 그룹에 기인한 소수성을 보이며, 따라서 각종 염기성 유기물과 단백질에 친화성이 높다. 따라서, 본 발명에 따른 설페이트화 사카라이드, 설페이트화 폴리사카라이드 또는 이들의 염은 높은 보수능 뿐만 아니라 예를 들면, 자체의 소수성과 전하에 기인한 케라틴층에 대한 높은 친화성을 띠어, 본 발명에 따른 설페이트화 사카라이드, 설페이트화 폴리사카라이드 또는 이들의 염은 화장재로 매우 유용하다.
본 발명에 따른 설페이트화 사카라이드, 설페이트화 폴리사카라이드 또는 이들의 염은 화장품으로 적용될 수 있는 임의 물질과 혼합시킴으로써 사용될 수 있다. 일반적으로는, 물, 알콜, 지방/오일, 지방산, 글리세롤, 무기염, 방부제, 계면활성제, 비타민, 아미노산, 사카라이드 등과 혼합함으로써 로션, 밀크 로션, 크림 등으로 사용될 수 있다.
본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드 함유물은 크젤마니엘라 크래시폴리아, 라미나리아 자포니카, 운다리아 피내티피다, 에클로니아 쿠로메, 자이언트 켈프, 레소니아 니그레센스 등과 같은 갈조류에 속하는 생 해조류 또는 건조 해조류 또는 에탄올 같은 60% 이상의 유기 용매를 함유하는 용액으로 상기 해조류를 세척하여 수득한 산물(이하, 이들 모두는 "해조류 물질"로 칭한다)로부터 추출된다. 물, 염화칼륨 및 염화나트륨 같은 염 및/또는 40% 이하 에탄올과 같은 유기 용매의 수용액이 추출액으로 사용될 수 있다. 예를 들면, 상기 해조류 물질을 상기 추출액에 침지시킨 다음 50℃ 이하에서 정치시키거나 교반하여 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드 함유물을 제조한다. 본 발명의 설페이트화 사카라이드가 구성당의 필수성분인 설페이트화 폴리사카라이드를 함유하는 한은 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드 함유물에는 특별한 제한이 없으며, 생성되는 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드 함유물에는 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드 외에도 폴리사카라이드, 알긴산, 아미노산, 당 알콜, 지방/오일, 무기염, 단백질 등이 추가로 함유될 수 있다. 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드 함유물은 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드의 생리활성에 기인하여 바이러스 감염-억제작용, 수정-억제작용, 항-염증작용, 혈관내피 비대 억제작용, 혈전 형성 억제작용, 지혈증 제거작용, 혈청 콜레스테롤 강하작용, 항-앨러지작용 등을 보이며 약제용 재료로 유용하다. 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드의 생리활성에 기인하여, 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드 함유물은 보습작용, 멜라닌 염료 합성 억제작용 등을 보이고 화장재로 유용하다. 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드 함유물에 함유된 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드의 예는 구성당으로서 퓨코스 및 퓨코스 분자 당 설페이트 그룹 약 2분자를 함유하는 설페이트화 폴리사카라이드이다. 설페이트화 폴리사카라이드의 설페이트 그룹은 카운터 이온으로서 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 아연, 망간, 철 등과 같이 해수 또는 추출물에 존재하는 양이온과 결합될 수 있다. 해조류로부터 추출된 설페이트화 폴리사카라이드는 통상적으로, 해조류로부터 유도된 점탄성이 강한 단백질과 가교결합되며, 따라서 겔 여과에 의한 분자량 측정이 적당하지 않다. 그러나, 1 M 이상의 염화나트륨과 같이 고농도 염하에서 1 시간 이상 교반할 경우, 가교결합이 절단될 수 있고 이에 따라 설페이트화 폴리사카라이드의 분자량을 측정할 수 있다. 풀루란이 표준물질로 사용될 경우, 분자량은 약 10,000,000인 것으로 측정된다.
본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드 함유물은 또한 하기와 같이 제조되는 폴리양이온 물질과 가교결합된 설페이트화 폴리사카라이드도 포함한다. 따라서, 폴리양이온 물질과 가교결합된 설페이트화 폴리사카라이드는 조류로부터의 추출과정이 폴리양이온 물질과 설페이트화 폴리사카라이드 또는 이의 용액과의 가교결합 비파괴 조건하에서 수행되고 이어서 등전점이 용액의 pH보다 높은 폴리양이온 물질을 첨가하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된다.
설페이트화 폴리사카라이드 특성의 예는 흡수성, 보수성, 점성, 쓰레드 형성성 및 점탄성이며 이들은 예를 들면, 출발물질로부터의 추출조건의 작은 차이에 따라 대폭적으로 변동한다. 비록, 이러한 특성이 화장품, 윤활제 및 보습제로 사용하기에 매우 유용하지만, 재현성이 우수한 설페이트화 폴리사카라이드의 제조 및 이러한 특성의 조절이 곤란하였다.
따라서, 설페이트화 폴리사카라이드가 화장품, 윤활제, 보습제 또는 특정 유형의 약제로 사용될 경우, 흡수성, 보수성, 점탄성 등의 재현성이 좋지 않으면 양호한 사용감과 특성의 재현성이 이용될 수 없어, 시장에 출하하는 데 큰 문제를 일으키게 된다. 그러나, 본 발명에 따라 비로서, 흡수성, 보수성, 점탄성 등이 안정한 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드 함유물, 이의 제조방법 및 이의 사용을 제공할 수 있게 되었다.
따라서, 본 발명자는 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드와 단백질 같은 폴리양이온 간의 상호작용에 대한 집약적인 연구를 수행하여 설페이트화 폴리사카라이드가 특정 조건에서 폴리양이온 물질과 공존하는 경우 점탄성이 상당히 증가함을 밝혀내었다.
본 발명자는 또한, 갈조류에 천연형태로 함유되어 있는 설페이트화 폴리사카라이드가 갈조류에 함유되어 있는 단백질과 가교결합을 형성하며 특정 조건하에서 가교결합을 유지하면서 아울러 높은 점탄성을 갖는 설페이트화 폴리사카라이드 함유물로서 이용될 수 있음을 밝혀내었다.
본 발명에서 설페이트화 폴리사카라이드에는 특별한 제한이 없으며, 예를 들면 설페이트화-퓨코스-함유 폴리사카라이드, 덱스트란 설페이트, 카라기난, 헤파린, 람난 설페이트 및 콘드로이틴 설페이트가 있다.
본 발명에서 폴리양이온 물질에는 특별한 제한이 없으며 폴리펩타이드, 단백질, 폴리아민, 폴리에틸렌이민, 폴리글루코사민 및 폴리갈락토사민 같은 폴리양이온이 포함된다.
설페이트화 폴리사카라이드와 폴리양이온 물질의 가교결합이, pH가 사용된 설페이트화 폴리사카라이드의 등전점보다 높고, pH가 사용된 폴리양이온 물질의 등전점보다 낮으며, 공존하는 전해질의 농도가 충분히 낮아 설페이트화 폴리사카라이드와 사용된 폴리양이온 물질의 가교결합이 교란되지 않으며, 첨가된 폴리양이온 물질의 양이 설페이트화 폴리사카라이드의 전체 전하를 중화시키기 위한 양보다 적은 조건하에서 수행될 때 설페이트화 폴리사카라이드의 점탄성은 상당히 높다.
젤라틴 또는 콜라겐 같은 비교적 등전점이 높은 단백질이 폴리양이온 물질로 사용될 때, 다수의 양 전하가 존재하며 이들은 설페이트화 폴리사카라이드와 가교결합하기 쉬우며, 따라서 점탄성이 용이하게 주어진다. 그러나, 비교적 등전점이 낮은 단백질의 경우에서도, 설페이트화 폴리사카라이드 용액의 pH를 사용된 단백질의 등전점보다 낮게 만들면 젤라틴 및 콜라겐 경우에서와 같이 설페이트화 폴리사카라이드에 강한 점탄성을 부여할 수 있다.
본 발명에 따른 폴리양이온 물질과 가교결합되는 설페이트화 폴리사카라이드는 조류로부터 제조될 수 있다. 예를 들면, 갈조류에 함유된 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드의 경우에, 이의 추출효율과 특성은 추출방법에 따라 상당히 변동한다.
목적이 단지 단기간에 다량의 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드를 수득하는 것이면, 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드는 조류를 분쇄하고 가열과 교반하에 물로 또는 산, 염, 알칼리 등의 수용액으로 추출하는 경우 용이하게 추출될 수 있다.
그러나, 이와 같이 제조된 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드는 분자량이 더 낮으며 조류에 존재하는 형태의 것과 비교해서 거의 점탄성을 보이지 않는다. 따라서, 화장품용으로 사용될 때, 비록 설페이트화 사카라이드로서의 효과가 이용될 수 있지만, 점액성 및 윤활성 같은 특징적인 특성이 없으며 또한 윤활제로서 사용하는 것도 거의 불가능하다.
그러나, 조류를 50℃보다 높지 않은 온도, 바람직하게는 약 30℃보다 높지 않은 온도에서 물이나 중성 상태 부근의 수용액에 침지시키고 전단력이 거의 생기지 않거나, 예를 들면 강한 점탄성을 띤 추출물이 조류로부터 분리되지 않는 정도로 교반속도를 맞출 때, 비로서 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드가 조류에서 단백질과 가교결합되는 형태로 추출될 수 있다.
이와 같이 단백질과 가교결합되는 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드는 신선한 난백 같은 특성, 즉 점탄성을 갖는다.
단백질과 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드 간의 가교결합은 비교적 용이하게 해리된다. 단백질과 가교결합된 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드가 교반될 때, 액체는 교반축을 따라 감기지만(바이젠베르크 효과), 전단력이 강하게 적용되는 교반이 장기간 수행될 경우, 점탄성은 저하되고 액면은 교반축과 접촉하는 영역에서 다소 중공성이 된다. 더욱이, 단백질과 설페 이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드 간의 가교결합은 가열, 고농도 염의 첨가, 프로테아제 처리시 등에 해리되어, 점탄성이 사라진다.
따라서, 전술한 바와 같이 추출되는 단백질과 가교결합된 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드의 강한 점탄성은 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드에 고유한 것이 아니라 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드와 단백질이 가교결합할 때 이용될 수 있는 특성이다.
따라서, 일단 자체 점탄성을 상실한 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드에 대한 점탄성을 회복할 수 있으며, 단백질 같은 폴리양이온 물질이 이러한 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드에 첨가될 때, 점탄성이 용이하게 회복될 수 있다. 단백질 같은 폴리양이온 물질의 첨가량을 변화시킴으로써 점탄성 정도를 임의 범위로 조정하는 것도 가능하다. 따라서, 본 발명은 폴리양이온 물질을 설페이트화 폴리사카라이드에 첨가함을 특징으로 하는 설페이트화 폴리사카라이드의 점탄성 강화방법을 제공한다.
예를 들면, 혼합과정이 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드와 같은 설페이트화 폴리사카라이드의 전하가 중화되지 않는 양으로 단백질 같은 폴리양이온 물질의 등전점보다 약간 더 낮은 pH인 조건하에서 수행될 때, 단백질 같은 폴리양이온 물질의 혼합량과 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드 용액의 점탄성 간에는 양의 상관관계가 존재한다.
물론, 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드 같은 설페이트화 폴리사카라이드 용액의 pH가 첨가될 폴리양이온 물질의 등전점보다 훨씬 더 낮거나 첨가될 폴리양이온의 양이 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드의 전하를 중화시킬 정도로 높을 때 침전물이 생성되며 점탄성은 저하된다.
단백질과 가교결합된 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드의 수득에 사용된 해조류에는 특별한 제한이 없으며 크젤마니엘라 크래시폴리아, 크젤마니엘라 기라타(K. gyrata)(다시마류 플레이크), 라미나리아 자포니카, 에클로니아 카바, 에이세니아 비사이클리스, 운다리아 피내티피다, 네마시스투스 데시피엔스(Nemacystus decipiens), 클래도시폰 오카무라누스(Cladosiphon okamuranus) 등과 같이 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드를 함유하는 한 어떠한 종류의 갈조류도 사용될 수 있다.
갈조류는 생 해조류, 건조 해조류, 소금에 절인 해조류 등과 같은 임의 형태로 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 단백질과 가교결합된 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드를 추출하기 전에 약 60-100%의 알콜로 해조류를 세척할 경우, 해조류에 부착된 염, 착색물질 등을 제거할 수 있다. 본 발명에 따른 단백질과 가교결합된 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드의 추출시, 물, 함염수, 알콜 함유수 등과 같은 다양한 용매가 사용될 수 있다. 그러나, 염은 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드와 단백질 간의 가교결합을 해리시키는 작용이 있어, 점탄성 감소를 불러오고 따라서 염은 바람직하게는 100 mM 이하이다. 알콜의 경우, 30% 이하인 것이 바람직하다.
추출온도는 바람직하게는 50℃ 이하, 유리하게는 5 내지 30℃이다. 추출하는 동안은 교반하지 않을 수도 있지만, 추출용액이 정지해 있는 경우, 장기간 추출하는 것이 필수이다. 교반될 경우, 교반속도는 단백질과 가교결합된 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드의 점탄성이 전술한 바와 같이 지나치게 낮아지지 않는 범위로 선택된다. 그러나, 교반력의 강도가 교반속도보다 점탄성에 훨씬 더 많은 영향을 미치고, 따라서 비-전단 조건하에서 낮은 교반속도로 추출하는 것이 바람직하다.
첨언하면, 교반에 의한 감소된 점탄성의 회복은 젤라틴 또는 콜라겐 같은 폴리양이온 물질을 첨가함으로써 수행될 수 있다.
따라서, 폴리양이온 물질이 점탄성이 낮은 설페이트화 폴리사카라이드에 첨가될 때, 설페이트화 폴리사카라이드의 점탄성이 증가될 수 있고 적어도 점탄성이 낮은 설페이트화 폴리사카라이드와 폴리양이온 물질을 구성성분으로 함유하는 조성물이 제공될 수 있다. 이러한 조성물은 화장품 및 윤활제를 포함하여 다양한 용도에 점탄성이 강한 조성물로서 유용하다.
폴리양이온 물질과 가교결합된 설페이트화 폴리사카라이드의 경우, 추출물은 그 자체로 또는 추가 정제 후에 사용될 수 있다.
구내용 제제와 같이 본 발명에 따른 폴리양이온 물질과 가교결합된 설페이트화 폴리사카라이드를 유효성분으로 함유하는 약제는 본 발명에 따른 폴리양이온 물질과 가교결합된 설페이트화 폴리사카라이드가 유효성분으로 사용되고 공지의 약학 담체와 배합될 경우에 제조될 수 있다.
타액 분비가 지나치게 불충분하여 구강이 건조해지고 구강 개폐가 곤란한 경우에 본 발명의 구내용 제제가 구강에서 유지될 때, 증상이 상당히 호전될 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 폴리양이온 물질과 가교결합된 설페이트화 폴리사카라이드는 윤활제로서 사용될 수 있다. 이러한 본 발명의 윤활제는 매우 부드럽고 윤활작용이 양호하며 각종 의료기기 또는 약제가 항문이나 질에 삽입될 때 매우 양호한 윤활작용을 보인다. 성교 중이나 마사지 중에도 윤활제로서 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 폴리양이온 물질과 가교결합된 설페이트화 폴리사카라이드는 화장품으로 사용될 수 있는 임의 물질과 혼합함으로써 사용될 수 있다. 일반적으로, 물, 알콜, 지방/오일, 지방산, 글리세롤, 무기염, 방부제, 계면활성제, 비타민, 아미노산, 사카라이드 등과 혼합되며, 로션, 밀크 로션, 크림 등으로 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 폴리양이온 물질과 가교결합된 설페이트화 폴리사카라이드가 화장품으로 사용될 때, 자체 점탄성으로 인하여 부드럽고 좋은 사용감을 주며, 피부에 도포될 때 자체 점액성이 피부에 즉시 흡착된다. 따라서, 도포 후 끈적거림이 없고 이러한 점은 화장품으로서 매우 바람직한 특성이다. 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드가 설페이트화 폴리사카라이드로 사용될 경우, 전술한 바람직한 특성은 특히 현저하다.
본 발명의 설페이트화 사카라이드 및 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드는 항원으로 사용될 수 있다. 항체의 제조는 통상의 방법으로 수행될 수 있으며, 예를 들면, 본 발명의 설페이트화 사카라이드 또는 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드를 보조제와 함께 토끼와 같은 동물에 면역시키며 이에 따라 폴리클로날 항체가 제조될 수 있다. 모노클로날 항체의 경우, 목적하는 항체를 생성하는 하이브리도마를 선별하기 위하여 항원을 면역시켜 수득한 항체-생성 B 세포와 흑색종 세포를 융합시킨 다음 이 세포를 배양하는 방식으로 제조될 수 있다. 이와 같이 제조된 항체는 본 발명의 설페이트화 사카라이드 또는 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드의 정제에 사용될 수 있다. 또한, 이들은 해조류내 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드의 동정에도 사용될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 항체가 사용되는 경우, 해조류 추출물내 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드의 함량은 용이하게 측정될 수 있어, 함량이 높은 추출물을 효율적으로 제조할 수 있다. 따라서, 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드가 예를 들면, 크젤마니엘라 크래시폴리아, 레소니아 니그레센즈, 라미나리아 자포니카 등의 추출물에 다량 함유되어 있어, 설페이트화 폴리사카라이드의 공업적 생산이 효율적으로 수행될 수 있음이 밝혀졌다. 또한, 본 발명의 설페이트화 사카라이드 또는 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드를 인식하는 항체는 본 발명의 설페이트화 사카라이드 또는 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드의 생리적 기능 규명에 유용하다. 따라서, 예를 들면, 본 발명의 설페이트화 사카라이드 또는 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드의 수정 억제작용 기능, 바이러스 감염 억제작용 기능, 생체내 대사 등의 분석에 유용하다.
본 발명의 설페이트화 사카라이드는 당쇄공학용 물질로서 유용하며, 이의 2-아미노피리딜 유도체를 제조하기 위하여 일본 특허 공개공보 평-05/65108에 기재된 방법에 의해 2-아미노피리딜화시킬 경우, 당쇄공학용 물질로서 매우 유용한 물질을 제공할 수 있다.
또한, 항-종양제, 암 전이 억제제, 항바이러스제, 수정 억제제, 함염증제, 동맥내막 과형성 억제제, 혈전 형성 억제제, 지혈증 제거제, 혈청 콜레스테롤 강하제 등과 같이 본 발명의 설페이트화 사카라이드 및/또는 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드를 유효성분으로 함유하는 약제를 제조할 수 있다. 이들은 이러한 약제의 투여를 요하는 그러한 질환의 치료나 예방에 사용될 수 있다. 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드 함유물은 이들 약제의 재료로도 사용될 수 있다. 또한, 본 발명의 설페이트화 사카라이드, 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드 및 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드 함유물 중에서 선택된 물질이 함유, 희석 및/또는 첨가되는 전술한 생리활성을 지닌 식품 또는 음료도 제공할 수 있다. 또한, 본 발명의 설페이트화 사카라이드, 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드 및 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드 함유물 중에서 선택된 물질을 유효성분으로 함유하는 화장품도 제공할 수 있다.
본 발명은 하기 실시예로 좀더 구체적으로 설명되지만 본 발명은 이러한 실시예에만 한정되지는 않는다.
실시예 1
(1)앨터로모나스 종 SN-1009(FERM BP-5747)를 글루코스 0.25%, 펩톤 1.0% 및 효모 추출물 0.05%를 함유하는 인공해수(Jamarin Laboratory 제조)로 이루어진 배지(120℃에서 20분간 멸균)(pH 8.2) 600 ml가 들어 있는 2 리터 들이 삼각 플라스크에 접종하고 25℃에서 26 시간 배양하여 시드 배양배지를 수득한다. 펩톤 1.0%, 효모 추출물 0.02%, 하기 실시예 2에서 언급된 설페이트화 폴리사카라이드 0.2% 및 소포제(KM 70, Shin-Etsu Chemical Industry 제조) 0.01%를 함유하는 인공해수(pH 8.0)로 이루어진 배지(20 리터)를 30 리터 들이 자(jar) 발효조에 넣고 120℃에서 20분간 멸균시킨다. 냉각 후, 상기 제조한 시드 배양배지 600 ml를 접종하고 분 당 통기 10 리터 및 250 rpm 교반 조건하에 24 ℃에서 24 시간 배양한다. 배양 완료 후, 배지를 원심분리하여 세포와 상등액을 수득한다. 생성되는 상등액을 배제 분자량이 10,000인 홀로화이버가 구비된 한외여과 시스템으로 농축한 다음 황산암모늄(85% 포화)으로 염석하고 생성되는 침전물을 원심분리 수집한 다음 인공해수를 1/10 농도로 함유하는 트리스-HCl 완충액(pH 8.2) 20 mM에 대해 완전 투석하여 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드에 선택적으로 작용하는 엔도-설페이트화 폴리사카라이드 분해효소 600 ml를 수득한다.
(2)건조시킨 크젤마니엘라 크래시폴리아(2 kg)를 1 mm 직경의 그물눈을 가진 체가 구비된 커터 밀(Masuko Sangyo 제조)로 분말화 하고, 생성되는 다시마 칩을 80% 에탄올 20 리터에 현탁시키며, 25℃에서 3 시간 교반하여, 여과지를 사용하여 여과한 다음 잔사를 잘 세척한다. 생성되는 잔사를 상기 실시예 1-(1)에서 제조한 엔도-설페이트화 폴리사카라이드 분해효소, 10% 에탄올, 100 mM 염화나트륨, 염화칼슘 50 mM 및 이미다졸 50 mM를 함유하는 완충액(pH 8.2) 20 리터에 현탁시킨 다음, 현탁액을 25℃에서 48 시간 교반한다. 현탁액을 32 ㎛의 그물눈을 가진 스테인레스 와이어 망을 통해 여과한 다음 잔사를 염화칼슘 50 mM을 함유하는 10% 에탄올로 세척한다. 잔사를 50 mM 염화칼슘을 함유하는 10% 에탄올 10 리터에 추가 현탁시키고, 3 시간 교반하여 스테인레스 와이어 망을 통해 여과한 다음 세척한다. 이어서, 잔사를 동일 조건하에서 다시 현탁시키고, 16 시간 교반하여 32 ㎛ 직경의 스테인레스 와이어 망을 통해 여과한 다음 세척한다.
생성되는 여액과 세척액을 수집하고 배제 분자량이 3000인 홀로화이버가 구비된 한외여과 시스템을 사용하여 한외여과하여 여액과 비-여액으로 분리한다.
여액을 회전 증발기를 이용하여 약 3 리터로 농축한 다음 원심분리하여 상등액을 수득한다. 생성되는 상등액을 배제 분자량이 300인 막을 구비한 전기 투석기를 이용하여 탈염시키고, 칼슘 아세테이트를 첨가하여 0.1 M 농도로 만든 다음 생성되는 침전물을 원심분리 제거한다. 상등액을 칼슘 아세테이트 50 mM로 사전에 평형시킨 DEAE-셀룰로화인(수지량:4 리터) 위에 놓고, 칼슘 아세테이트 50 mM와 염화나트륨 50 mM로 잘 세척한 다음 50 mM에서 800 mM 구배의 염화나트륨으로 용출시킨다. 그 시기에 수집량은 용출 당 500 ml였다. 수집 분획을 셀룰로스 아세테이트 막 전기영동법[참조문헌:Analytical Biochemistry, 37, 197-202(1970)]으로 분석한 결과 염화나트륨 농도가 약 0.4 M인 용출된 설페이트화 사카라이드(분획번호 63 부근)가 균질한 것으로 밝혀졌다. 더욱이, 약 0.6 M의 농도에서 용출된 설페이트화 사카라이드(분획번호 67 부근)는 전기영동적으로 거의 균질하였다.
따라서, 1차로, 분획번호 63의 액체를 150 ml로 농축하고, 염화나트륨을 가하여 4 M 농도로 만든 다음, 4 M 염화나트륨으로 사전에 평형시킨 페닐-셀룰로화인(수지량:200 ml) 위에 놓고 4 M 염화나트륨으로 잘 세척한다. 비-흡착성 설페이트화 사카라이드 분획을 수집하여 배제 분자량이 300인 막을 구비한 전기 투석기로 탈염하여 탈염용액 505 ml를 수득한다.
생성되는 탈염용액 40 ml를 10% 에탄올을 함유하는 0.2 M 염화나트륨으로 평형시킨 셀룰로화인 GCL-90의 칼럼(4.1 cm X 87 cm) 위에 놓고 겔 여과를 수행한다. 수집과정을 분획 당 9.2 ml의 속도로 수행한다.
전 분획에서 사카라이드 전량 분석은 페놀-황산법에 의해 수행한다[참조문헌:Analytical Chemistry, 28, 350 (1956)].
결과적으로, 설페이트화 사카라이드는 피크를 형성하고, 따라서 피크의 중앙 부분(분획번호 63-70)을 수집하고, 배제 분자량이 300인 막을 구비한 전기 투석기로 탈염시킨 다음 동결건조시켜 본 발명의 설페이트화 사카라이드의 건조 산물 112 mg을 수득한다.
건조 산물의 일부를 당 조성 분석 및 질량분석한다.
또한, 건조 산물 10 mg을 통상의 방법에 의해 중수로 대치하고 NMR 분석한다.
당 조성 분석 결과, 생성되는 설페이트화 사카라이드는 퓨코스만으로 이루어진 설페이트화 사카라이드인 것으로 판명되었다.
API-III 질량분석계(Perkin-Elmer Sciex)를 사용하여 설페이트화 사카라이드에 대한 질량분석 결과를 도 1에 도시하며 분석결과를 이하에 제시한다. 따라서, 도 1은 설페이트화 사카라이드의 질량분석 결과를 보여주는 도면이며 종축은 상대강도(%)를 표시하고 횡축은 m/z값을 표시한다.
분자량의 경우, 모든 설페이트 그룹이 나트륨 염으로 있는 상태에서 2264±1의 결과가 수득되었다. 따라서, 이는 구성당이 퓨코스만인 설페이트화 사카라이드이므로, 퓨코스 7 분자와 설페이트 그룹 12 분자가 결합되고, 설페이트 그룹 전부가 나트륨 염으로 있으며 이론적 분자량이 2265인 것으로 판명되었다.
따라서, 본 물질을 "M"로 표현할 경우, 도 1에서의 주 시그널은 다음과 같이 배속될 수 있다.
m/z 1109.05 --- [M-2Na+]2-(계산치:1109.5)
731.45 --- [M-3Na+]3-(계산치:732)
542.75 --- [M-4Na+]4-(계산치:543.25)
430.05 --- [M-5Na+]5-(계산치:430)
결과적으로, 본 물질은 퓨코스 7 분자와 설페이트 그룹 12 분자로 이루어진 올리고사카라이드이다.
이어서, 퓨코스의 결합형태와 설페이트 그룹의 결합위치를 결정하기 위하여, 핵자기 공명기(JNM-α 500; Nippon Denshi 제조)를 사용하여 NMR 분석한다.1H-검출 이종핵 검출법인 HMBC법으로 구성당의 결합형태를 분석한다.1H-NMR의 배속의 경우, DQF-COSY법과 HOHAHA법을 사용하며,13C-NMR의 배속의 경우, HSQC법을 사용한다.
NMR의 배속결과를 이하에서 제시하며 본 발명의 설페이트화 사카라이드의1H-NMR 스펙트럼 및13C-NMR 스펙트럼을 각각 도 2와 3에 도시한다. 첨언하면,1H-NMR에서의 화학 쉬프트 값에서, 디옥산의 화학 쉬프트 값은 3.53 ppm으로 표현되며, 반면에13C-NMR의 경우에서, 디옥산의 화학 쉬프트 값은 66.5 ppm으로 표현된다. 두 경우 모두 60℃에서 측정되었다. 따라서, 도 2는 본 발명의 설페이트화 사카라이드의1H-NMR 스펙트럼을 보여주는 그래프이며 도 3은 본 발명의 설페이트화 사카라이드의13C-NMR 스펙트럼을 보여주는 그래프이다. 도 2와 도 3 모두에서, 종축과 횡축은 각각 시그널 강도 및 화학 쉬프트 값(ppm)을 표시한다.
1H-NMR(D2O)
δ 5.30 (1H, d, J=3.1Hz, A-1-H), 5.23 (1H, d, J=3.4Hz, B-1-H), 5.20 (1H, d, J=3.4Hz, E-1-H), 5.19 (1H, d, J=3.7Hz, F-1-H), 5.18 (1H, d, J=2.8Hz, C-1-H), 5.16 (1H, br-s, D-1-H), 5.09 (1H, d, J=4.3Hz, G-1-H), 4.72 (1H, d, J=2.4Hz, B-4-H), 4.67 (1H, t, J=2.3Hz, A-4-H), 4.65 (1H, m, E-4-H), 4.64 (1H, m, D-4-H), 4.62 (1H, m, C-4-H), 4.49 (1H, d, J=3.1Hz, F-4-H), 4.37 (1H, m, E-2-H), 4.36 (1H, m, G-3-H), 4.35 (1H, m, C-2-H), 4.33 (1H, m, B-2-H), 4.32 (1H, m, C-3-H), 4.30 (1H, m, A-2-H), 4.27 (1H, m, F-2-H), 4.27 (1H, m, F-5-H), 4.25 (1H, m, D-5-H), 4.24 (1H, m, C-5-H), 4.21 (1H, m, E-5-H), 4.18 (1H, m, B-3-H), 4.18 (1H, m, F-3-H), 4.17 (1H, m, A-3-H), 4.17 (1H, m, E-3-H), 4.16 (1H, m, D-3-H), 4.14 (1H, m, A-5-H), 4.10 (1H, m, B-5-H), 3.98 (1H, m, D-2-H), 3.97 (1H, m, G-4-H), 3.96 (1H, m, G-5-H), 3.78 (1H, d-d, J=4.3, 10.4Hz, G-2-H), 1.34 (3H, d, J=7.0Hz, D-5-CH3의 H3), 1.15 (3H, d, J=6.7Hz, E-5-CH3의 H3), 1.12 (3H, d, J=6.7Hz, A-5-CH3의 H3), 1.11 (3H, d, J=6.7Hz, C-5-CH3의 H3), 1.08 (3H, d, J=6.7Hz, B-5-CH3의 H3), 1.06 (3H, d, J=6.4Hz, F-5-CH3의 H3), 1.04 (3H, d, J=6.7Hz, G-5-CH3의 H3)
13C-NMR(D2O)
δ 99.2 (G-1-C), 98.9 (C-1-C), 98.3 (B-1-C), 97.1 (E-1-C), 94.6 (F-1-C), 89.3 (A-1-C), 89.3 (D-1-C), 81.3 (F-4-C), 80.6 (B-4-C), 78.6 (A-4-C), 77.9 (G-3-C), 77.5 (C-4-C), 77.4 (E-4-C), 75.9 (B-3-C), 75.4 (A-2-C), 74.8 (F-2-C), 74.5 (B-2-C), 74.2 (D-3-C), 73.9 (A-3-C), 73.9 (D-2-C), 73.6 (C-2-C), 73.0 (D-4-C), 73.0 (E-2-C), 70.9 (C-3-C), 70.6 (D-5-C), 70.1 (G-4-C), 69.9 (E-3-C), 68.0 (B-5-C), 67.5 (A-5-C), 67.5 (E-5-C), 66.9 (C-5-C), 66.7 (G-5-C), 66.5 (F-3-C), 66.3 (F-5-C), 65.6 (G-2-C), 16.0 (C-5-CH3의 C), 15.9 (B-5-CH3의 C), 15.8 (E-5-CH3의 C), 15.8 (F-5-CH3의 C), 15.4 (G-5-CH3의 C), 15.3 (A-5-CH3의 C), 13.1 (D-5-CH3의 C)
첨언하면, NMR의 피크의 배속번호는 화학식 2에 나타낸 바와 같다.
상기 결과로부터, 이러한 물질이 화학식 3으로 표시된 설페이트화 사카라이드인 것으로 판명되었다.
(3)실시예 1-(2)에서 언급한 DEAE-셀룰로화인의 분획번호 67을 분획번호 63에서와 완전히 동일한 방식으로 정제하여 동결건조 산물을 수득한다.
HPLC에 의한 분석결과, 생성되는 산물은 분획번호 63보다 분자량이 더 높은 설페이트화 사카라이드인 것으로 판명되었지만, NMR에 의한 분석결과에 따르면, 분획번호 63과 거의 동일한 스펙트럼이 수득되었다.
도 4는 중수가 용매로 사용된 분획번호 67의1H-NMR 스펙트럼을 도시하며1H-NMR에서의 화학 쉬프트 값은 디옥산의 화학 쉬프트 값을 3.53 ppm으로 하여 표시하였다. 측정은 60℃에서 수행된다. 따라서, 도 4는 분획번호 67의1H-NMR 스펙트럼을 도시하는 그래프이며 종축은 시그널 강도를 표시하고 횡축은 화학 쉬프트 값(ppm)을 표시한다.
결과적으로, 분획번호 6은 분획번호 63의 수 분자가 결합된 구조를 취하고 있음을 강력히 시사한다. 따라서, 분획번호 67은 실시예 1-(1)에서 언급한 엔도-설페이트화 폴리사카라이드 분해효소에 의해 분해되며 분해산물을 HPLC로 분석한 결과 다수의 반응산물이 실시예 1-(2)에서 언급한 DEAE-셀룰로화인의 분획번호 63으로부터 수득된 설페이트화 사카라이드와 동일한 위치로 용출되었다.
첨언하면, HPLC에 대한 분석조건은 다음과 같다.
칼럼: Shodex SB 802.5
칼럼온도; 25℃
용액: 나트륨 아자이드 5 mM을 함유하는 50 mM 염화나트륨
검출: 시차 굴절율 검출기(Shodex RI-71)
전술한 분획번호 67 및 63의 분자량을 표준물질로서 풀루란(Showa Denko 제조)을 사용하여 겔 여과에 의해 측정할 때, 분획번호 63은 풀루란을 기준으로 분자량이 약 8,500인 반면에 분획번호 67은 분자량이 약 26,000이었으며 이에 따라 분획번호 67은 분획번호 63의 설페이트화 사카라이드의 삼량체였음이 판명되었다.
7-당 잔기의 반복의 결합위치에 대하여, 분획번호 67의1H-NMR 스펙트럼을 상세히 검토한 결과 α-(1→3) 결합에 의해 화학식 2에서 F의 퓨코스의 3 위치에 결합된 것으로 판명되었다.
이와 유사한 방법으로 화학식 3으로 표시되는 설페이트화 사카라이드의 오량체, 즉 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드의 분해산물로부터의 설페이트화 사카라이드(화학식 1에서 n=5)를 제조한다.
실시예 2
(1)건조시킨 크젤마니엘라 크래시폴리아(2 kg)를 1 mm 직경의 그물눈을 가진 체가 구비된 커터 밀(Masuko Sangyo 제조)로 분말화 하고, 생성되는 다시마 칩을 80% 에탄올 20 리터에 현탁시키고, 25℃에서 3 시간 교반하여, 여과지로 여과한 다음 잔사를 잘 세척한다. 생성되는 잔사를 95℃에서 가열한 염화나트륨 50 mM을 함유하는 20 mM 인산나트륨 완충액(pH 6.5) 40 리터에 현탁시킨 다음, 현탁액을 간헐적인 교반하에 95℃에서 2 시간 가열하여 설페이트화 폴리사카라이드를 추출한다.
추출물 중의 현탁물을 여과하여 여액을 수득하고 반면에 여과 후의 잔사는 100 mM 염화나트륨 3.5 리터로 세척하여 추가적인 여액을 수득한다.
두 여액 모두를 합하고 30℃로 냉각하며, 알긴산 리아제(Nagase Seikagaku Kogyo 제조) 3,000 단위를 가한 다음, 에탄올 4 리터를 가하고 혼합물을 25℃에서 24 시간 교반한다. 이를 원심분리하고, 생성되는 상등액을 배제 분자량이 100,000인 홀로화이버가 구비된 한외여과 시스템을 이용하여 4 리터로 농축시킨 다음 10% 에탄올을 함유하는 염화나트륨 100 mM을 사용하여 더 이상의 착색물질이 여과되지 않을 때까지 한외여과를 계속한다.
비-여액에 형성된 침전물을 원심분리 제거하고, 상등액을 5℃로 냉각시킨 다음 0.5 N 염산으로 pH 2.0으로 조정하고, 단백질 등으로 이루어진 생성되는 침전물을 원심분리 제거하고 생성되는 상등액을 1 N 수산화나트륨을 사용하여 즉시 pH 8.0으로 조정한다.
이어서, 배제 분자량이 100,000인 홀로화이버가 구비된 한외여과 시스템을 이용하여 한외여과를 수행하고, 용매를 20 mM 염화나트륨, pH 8.0으로 완전히 대치한 다음, pH를 다시 8.0으로 조정하고, 원심분리를 수행한 다음 동결건조시켜 약 95 g의 설페이트화 폴리사카라이드를 제조한다.
(2)실시예 2-(1)에서 언급한 건조된 설페이트화 폴리사카라이드 10 g을 염화나트륨 100 mM, 염화칼슘 50 mM 및 이미다졸 50 mM을 함유하는 완충액(pH 8.0)에 용해시키고, 실시예 1-(1)에서 언급한 엔도-설페이트화 폴리사카라이드 분해효소 20 ml를 가하고, 혼합물을 25℃에서 24 시간 반응시키며, 반응 용액을 배제 분자량이 3,500인 투석관을 사용하여 완전히 투석하며, 투석액(저분자 물질)을 농축시켜 배제 분자량이 300인 막을 구비한 전기 투석기로 탈염시킨 다음 이의 일부를 셀룰로화인 GCL-90(40 X 87 cm)를 사용하여 겔 여과한다. 수집량은 튜브 당 10 ml였다.
분획번호 63 부근의 분획을 셀룰로스 아세테이트 막 전기영동 및 HPLC로 분석한 결과 실시예 1-(2)에서 언급한 구조 3을 갖는 설페이트화 사카라이드와 동일한 행태를 보이는 것으로 나타났다. 따라서, 화학식 3으로 표시된 설페이트화 사카라이드가 설페이트화 폴리사카라이드로부터 제조된다. 이와 유사하게 화학식 3에 의해 제조된 설페이트화 사카라이드의 삼량체 및 오량체, 즉, 화학식 1에서 n이 각각 3과 5인 설페이트화 사카라이드가 제조된다.
실시예 3
실시예 2-(1)에서 언급한 설페이트화 폴리사카라이드를 염화나트륨 100 mM, 염화칼슘 50 mM 및 이미다졸 50 mM을 함유하는 완충액(pH 8.0)에 용해시켜 리터 당 설페이트화 폴리사카라이드 5 g 농도로 만든 용액(10 리터)을 제조한다. 이 설페이트화 폴리사카라이드 용액 2 리터에 실시예 1-(1)에서 언급한 엔도-설페이트화 폴리사카라이드 분해효소 30 ml를 가하고, 혼합물을 배제 분자량이 3,000인 한외여과용 홀로화이버가 구비된 한외여과 시스템으로 처리한 다음 25℃에서 작업을 수행하여 시간 당 여과속도 200 ml로 여과한다. 작업 중에, 여액량과 동일한 양의 상기 설페이트화 폴리사카라이드 용액을 효소반응 용액에 가한다. 설페이트화 폴리사카라이드 용액을 가한 후, 상기 완충액만을 유사하게 가한다.
그 후에, 여액을 농축 및 원심분리하고 생성되는 상등액을 탈염시키며 칼슘 아세테이트로 침전물을 형성시키며 상등액을 원심분리로 수득하는 실시예 1-(2)에서와 동일한 작업을 수행한다. 생성되는 상등액을 DEAE-셀룰로화인을 사용하여 실시예 1-(2)에서와 동일한 방식으로 정제하여 화학식 3으로 표시되는 설페이트화 사카라이드를 제조한다.
실시예 4
크젤마니엘라 크래시폴리아(500 g)를 세단하고 80% 에탄올 10 리터로 세척하여 염화칼륨 1 mM을 함유하는 10% 에탄올 50 리터 중 25℃에서 3일간 교반한 다음 32 ㎛의 그물눈을 가진 스테인레스 와이어 망을 통해 여과하여 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드의 추출물을 수득한다.
상기 추출물 100 ml를 배제 분자량이 12,000인 투석관에 넣고 물 5 리터에 대해 2회 투석한다. 비-투석 분획을 동결건조시켜 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드를 수득하고 이 설페이트화 폴리사카라이드의1H-NMR 스펙트럼(도 5) 및 적외선 스펙트럼(IR)(도 6)을 측정한다. 따라서, 도 5는 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드의1H-NMR 스펙트럼을 도시하는 그래프이며 종축은 시그널 강도를 표시하고 횡축은 화학 쉬프트 값(ppm)을 표시한다. 첨언하면, 중수가 용매로 사용되며,1H-NMR 스펙트럼에서의 화학 쉬프트 값에 있어, HOD의 화학 쉬프트 값은 4.65 ppm으로 표현된다. 도 6은 KBr법에 의한 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드의 IR 스펙트럼을 도시하는 그래프이며 종축은 투과율(%)을 표시하고 횡축은 파수(cm-1)를 표시한다. 첨언하면, FTIR-8000 PC 적외선 분광광도계(Shimadzu 제조)로 IR 스펙트럼을 측정한다.
도 5에 도시된 바와 같이, 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드의1H-NMR은 도 4에 도시된 설페이트화 사카라이드의 것과 거의 동일하다. 따라서, 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드는 화학식 1로 표시되는 설페이트화 사카라이드를 구성당의 필수성분으로하는 설페이트화 폴리사카라이드이다.
4 M 염화나트륨을 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드 추출물에 첨가하고, 혼합물을 격렬한 교반하에 혼합하며, 최종 농도를 1 M 염화나트륨 용액으로 하여, 이를 HPLC 분석하여 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드의 분자량을 측정한다. 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드는 풀루란 표준물질을 기준으로 하여 평균 분자량이 약 13,000,000이었다. HPLC 조건은 다음과 같다.
장치: L-6200형 HPLC(Hitachi 제조)
칼럼: Shodex SB-806HQ(8 X 300 mm)(Showa Denko 제조)
용출제: 50 mM 염화나트륨
검출: 시차 굴절율 검출기, Shodex RI-71(Showa Denko 제조)
칼럼온도: 25℃
본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드 용액을 실시예 1-(1)에서 언급한 엔도-설페이트화 폴리사카라이드 분해효소로 처리할 때, 화학식 1로 표시되는 설페이트화 사카라이드가 검출된다.
실시예 5
크젤마니엘라 크래시폴리아(500 g)를 세단하고, 80% 에탄올 10 리터로 세척하며, 내경이 40 cm인 용기 중 25℃에서 2일간 염화칼륨 1 mM을 함유하는 10% 에탄올 50 리터에서 200 rpm의 속도로 교반하여 본 발명에 따른 해조류의 단백질과 가교결합된 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드를 추출한다. 추출물은 강한 점탄성을 보이고 추출물이 교반축을 따라 감기는 바이젠베르크 효과를 보인다.
통상적으로, 크젤마니엘라 크래시폴리아내 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드의 함량은 최대로는 건조 해조류의 약 5%이고, 따라서 본 추출물내 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드의 함량은 최대 0.05%이다.
그러나, 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드의 시판 수용액(Fucoidan; Sigma 제조)은 0.05%에서 뿐만 아니라 2% 정도로 높은 농도에서 조차도 전혀 점탄성을 보이지 않으며 본 발명에 따른 조류의 단백질과 가교결합되는 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드와는 완전히 상이한 특성을 보유한다.
본 추출물내 단백질 함량이 Protein Assay(Bio-Rad 제조)에 의해 측정될 때, 함량은 7.5 ㎍/ml인 것으로 밝혀졌다.
본 추출물을 액티나제 E(프로테아제의 일종; Kaken Pharmaceutical 제조)로 0.1 mg/ml 농도로 처리할 때, 이의 점탄성이 상당히 감소하였다.
또한, 본 추출물 5 ml를 앨터로모나스 종 SN-1009(FERM BP-5747)에 의해 생성된 엔도-설페이트화-퓨코스-함유 폴리사카라이드 분해효소를 함유하는 용액 10 ㎕로 처리할 때, 점탄성은 완전히 사라졌다.
상기 결과로부터, 갈조류 추출물의 점탄성의 원인이 되는 물질이 단백질과 가교결합된 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드이고, 갈조류의 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드가 특이적 조건하에서 추출될 때, 본 발명에 따른 단백질과 가교결합된 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드가 효율적으로 추출될 수 있음이 밝혀졌다.
생성 추출물을 피부에 도포할 때, 강한 점액성이 우선적으로 인지되지만, 부드럽게 문질렀을 때, 점액성은 피부에 흡착되어 어떠한 끈적거림도 주지 않으며 피부가 보습됨으로써 추출물은 피부 관리용 화장재로 매우 유용한 것으로 밝혀졌다.
실시예 6
(1)크젤마니엘라 크래시폴리아(50 g)를 세단하고, 80% 에탄올 2 리터로 세척한 다음 내경이 20 cm인 용기 중 25℃에서 2일간 200 rpm의 속도로 염화칼륨 1 mM 및 에틸 파라벤 0.075%를 함유하는 수용액 5 리터와 교반하여 본 발명에 따른 단백질과 가교결합된 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드를 추출한다.
추출물은 강한 점탄성을 띠며 추출물이 교반축을 따라 감기는 바이젠베르크 효과를 보인다. 이러한 추출물의 특성은 실시예 5의 추출물의 것과 동일하였다. 이 추출물은 피부가 에탄올 민감성인 사람을 위한 화장품으로 효과적이다.
(2)건조된 크젤마니엘라 크래시폴리아(2 kg)를 1 mm 직경의 그물눈을 가진 체가 구비된 커터 밀(Masuko Sangyo 제조)로 분말화하고, 생성되는 다시마 칩을 80% 에탄올 20 리터에 현탁시키며, 현탁액을 25℃에서 3 시간 교반하고 여과한 다음 잔사를 잘 세척한다. 생성되는 잔사를 95℃에서 가열한 염화나트륨 50 mM을 함유하는 20 mM 인산나트륨 완충액(pH 6.5) 40 리터에 현탁시키고 상등액을 간헐적인 교반하에 95℃에서 2시간 가열하여 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드를 추출한다.
추출물내 현탁물을 여과하여 여액을 제조하고 반면에 여과 후의 잔사는 100 mM 염화나트륨 3.5 리터로 세척하여 추가의 여액을 수득한다. 이와 같이 제조된 추출물을 25℃로 냉각시킨다. 이 추출물은 실시예 5 및 실시예 6-(1)에서 언급된 추출물보다 더 많은 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드를 함유하였지만 점탄성은 보이지 않았다. 더욱이, 이 추출물은 배제 분자량이 100,000인 홀로화이버가 구비된 한외여과 시스템에 의한 완전 탈염 후에도 강한 점탄성을 보이지 않았지만, 설페이트화 폴리사카라이드에 특이적인 점성은 보였다. 따라서, 추출온도가 지나치게 높을 경우, 본 발명에 따른 단백질과 가교결합된 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드는 제조될 수 없음이 판명되었다.
(3)크젤마니엘라 크래시폴리아(500 g)를 세단하고, 80% 에탄올 10 리터로 세척한 다음 내경이 40 cm인 용기 중 25℃에서 2일간 800 rpm의 속도로 1 mM 염화칼륨을 함유하는 10% 에탄올 50 리터에서 교반하여 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드를 추출한다. 추출물의 점탄성은 약하였고, 심지어는 교반 중에도 바이젠베르크 효과가 인지되지 않았다. 비록 추출물이 피부 도포시 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드에 특이적인 보습효과를 보이기는 하였지만, 본 발명에 따른 단백질과 가교결합된 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드에 특이적인 점액성이 거의 없었고 실제 사용감은 완전히 상이하였다. 그러나, 그 안에 함유된 단백질의 농도는 7.5 ㎍/ml였고 실시예 5의 추출물에서와 동일하였다. 따라서, 교반속도가 지나치게 높을 경우, 환언하면 교반시 전단력이 강하게 적용될 경우, 단백질과 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드 간의 가교결합이 파괴되는 것으로 밝혀졌다.
(4)실시예 6-(1)에서 수득된 추출물이 내경이 20 cm인 용기 중 실온에서 600 rpm의 교반속도로 18 시간 교반될 때, 상대 점탄성은 2.0에서 1.2로 감소한다. 다양한 양으로 젤라틴 1% 수용액을 점탄성이 감소된 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드에 첨가할 때, 점탄성이 회복되었다. 점탄성과 젤라틴의 최종 농도 간의 관계는 표 1에 주어진다.
하기 표 1에서, 점탄성은 상대치로 나타낸다. 따라서, 시험 용액이 내경 2 mm의 실리콘 관으로부터 중력에 의해 수직으로 흘러내리고 출구에서 아래쪽으로 약 1 내지 5 cm 지점에 흘러 떨어진 시험 용액을 유리봉에 의해 수평 방향으로 밀어낼 때, 흐름을 끊지 않으면서 밀어내어질 수 있는 최대 거리(cm)를 상대 점탄성으로 정의한다. 첨언하면, 시험 용액의 액면에서 시험 용액의 출구까지의 거리는 20 내지 21 cm이고 물의 상대 점탄성은 0이다.
젤라틴의 최종농도(%) 상대 점탄성
00.010.0120.020.030.05 1.21.81.83.51.50
상기 결과로부터, 본 발명에 따른 해조류의 단백질과 가교결합된 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드의 점탄성은 강력한 전단력으로 교반함으로써 저하되지만, 적당량의 젤라틴을 적당한 pH에서 또는 적당한 염 농도의 조건하에서 첨가할 경우, 점탄성이 회복될 수 있고 이에 따라 점탄성 산물이 수득될 수 있음이 밝혀졌다. 첨언하면, 점탄성 산물은 투명한 젤리-유사 외관을 보이는 졸-유사 특성을 보유한다.
젤라틴의 첨가량이 지나치게 많을 경우, 점탄성이 사라지고, 따라서 양은 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드의 양에 따라 증가 또는 감소시켜야 하는 것으로 밝혀졌다.
실시예 7
실시예 5의 추출물을 타액 분비가 지나치게 불충분하여 구강이 상당히 건조하고 개폐가 곤란하며 어떤 제제도 증상에 개선을 보이지 않는 80세 여성의 구강에 적용한 경우, 구강의 건조, 입술의 갈라짐 등에 개선이 있고 구강 개폐의 어려움이 상당히 개선되었다. 또한, 추출물이 3개월 이상의 계속된 기간 동안 적용된 경우에 조차도 효과는 지속되었다.
실시예 8
(1)크젤마니엘라 크래시폴리아(500 g)를 세단하고, 80% 에탄올 10 리터로 세척한 다음 내경이 40 cm인 용기 중 25℃에서 2일간 120 rpm의 속도로 1 mM 염화칼륨을 함유하는 10% 에탄올 50 리터에서 교반하여 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드를 추출한다. 추출물은 강한 점탄성을 띠며 추출물이 교반축을 따라 감기는 바이젠베르크 효과를 나타냈다. 추출물을 32 ㎛의 그물눈을 갖는 스테인레스 와이어 망을 통해 여과하여 점탄성이 높은 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드의 용액을 제조한다.
설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드를 함유하는 상기 용액 46 리터에 교반하에, 팜유(Kao 제조; 화장품용)를 에탄올 1 리터에 용해시킨 다음 글리세롤 1 리터를 가한 팜유 용액 1 리터를 가하여 화장 로션을 제조한다. 생성되는 화장 로션은 고 점탄성 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드에 기인한 보습효과 및 세제의 첨가 없이 팜유가 균일하고 효율적으로 분산된 팜유에 기인한 항-건조효과 모두를 보이고, 이에 따라 화장 로션은 오일의 끈적거림 없이 및 우수한 도포로 양호한 사용감을 보였다.
다른 화장 로션도 팜유 대신 코코넛 오일(Kao 제조; 화장품용)을 사용하여 이와 유사하게 제조하며 생성되는 화장 로션 또한 양호한 사용감을 지닌 것으로 판명되었다.
(2)실시예 6-(3)에서 제조한 추출물에 젤라틴과 방향제를 첨가하여 최종농도 0.02%가 되게 하여 젤라틴을 함유하는 화장 로션을 수득한다. 콜라겐 첨가에 의한 유사한 방법으로 콜라겐을 함유하는 화장 로션도 수득한다. 화장액 각각은 고 점탄성 설페이트화-퓨코스-함유 설페이트화 폴리사카라이드를 함유하고, 첨가된 단백질과의 상승작용 결과로, 보습성이 우수하고 도포성이 양호한 화장 로션이었다.
이와 같이, 전술한 화장 로션이 사용될 때, 사용감은 자체의 점탄성에 기인한 부드러운 감촉으로 양호하고, 더욱이 적당량이 피부에 도포될 때, 점액성이 피부에 즉시 흡착되는 특성을 나타내었다. 또한, 사용 후에 끈적거림이 전혀 없고 이러한 점은 화장품으로 매우 호적한 특성이었다.
실시예 9
실시예 4에서 제조한 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드의 추출물을 화장 로션으로 사용한다. 이 화장 로션은 부드러운 촉감으로 인한 양호한 사용감을 지녔고, 피부에 도포시, 점액성이 피부에 즉시 흡착되었다. 아울러, 사용 후에도 끈적거림이 전혀 없고 이러한 점은 화장품으로 매우 호적한 특성이었다. 또한, 이 화장 로션이 사용될 때, 얼굴과 손등의 반점이 엷은 색으로 되는 효과가 있다.
본 발명에 따라, 당쇄공학 연구용 약제나 시약으로 유용한 설페이트화 사카라이드, 설페이트화 폴리사카라이드 또는 이들의 염이 제공된다. 전술한 설페이트화 사카라이드, 설페이트화 폴리사카라이드 또는 이들의 염은 이의 보수능 등에 기인하여 화장재로서 매우 유용하다.
본 발명은 또한, 점탄성이 높은 설페이트화 폴리사카라이드 및 이의 제조방법도 제공한다. 또한, 고 점탄성 설페이트화 폴리사카라이드를 함유하는 약제 및 화장품도 제공된다. 본 발명의 약제는 예를 들면, 구내용제로 유용하다. 더욱이, 본 발명의 고 점탄성 설페이트화 폴리사카라이드는 보수능과 윤활성이 우수할 뿐만 아니라 이의 소수성으로 인하여 피부의 케라틴층에 대해 친화성이 높고 피부 적합성도 매우 양호하여, 본 발명의 설페이트화 폴리사카라이드, 특히 고 점탄성 설페이트화-퓨코스-함유 폴리사카라이드는 화장재로서 매우 유용하다.

Claims (14)

  1. 화학식 1로 표시되는 설페이트화 사카라이드 또는 이러한 설페이트화 사카라이드가 구성당의 필수성분인 설페이트화 폴리사카라이드 및 이들의 염.
    화학식 1
    (식에서, R은 OH 또는 OSO3H이고; n은 1 내지 5의 정수이다)
  2. 제 1 항에 있어서, 설페이트화 폴리사카라이드가 라미나리알레스 목에 속하는 해조류로부터 수득될 수 있는 설페이트화 폴리사카라이드.
  3. 제 1 항 또는 2 항에 있어서, 설페이트화 폴리사카라이드가 폴리양이온 물질과 가교결합되는 설페이트화 폴리사카라이드.
  4. 제 3 항에 있어서, 폴리양이온 물질이 단백질인 설페이트화 폴리사카라이드.
  5. 제 4 항에 있어서, 단백질이 해조류로부터 유도된 단백질 및/또는 해조류로부터 유도된 단백질 이외의 단백질인 설페이트화 폴리사카라이드.
  6. 제 5 항에 있어서, 단백질이 콜라겐 및/또는 젤라틴인 설페이트화 폴리사카라이드.
  7. 조류로부터 폴리양이온 물질과 설페이트화 폴리사카라이드 간의 가교결합 비-파괴 조건하에서 추출하는 단계를 포함함을 특징으로 하는, 폴리양이온 물질과 가교결합된 설페이트화 폴리사카라이드의 제조방법.
  8. 등전점이 설페이트화 폴리사카라이드 용액의 pH보다 높은 폴리양이온 물질을 용액에 첨가함을 특징으로 하는, 폴리양이온 물질과 가교결합된 설페이트화 폴리사카라이드의 제조방법.
  9. 폴리양이온 물질이 설페이트화 폴리사카라이드에 첨가됨을 특징으로 하는, 설페이트화 폴리사카라이드의 점탄성 증가방법.
  10. 적어도 저 점탄성 설페이트화 폴리사카라이드 및 폴리양이온 물질을 함유하는 조성물.
  11. 폴리양이온 물질과 가교결합되는 설페이트화 폴리사카라이드가 유효성분으로 함유됨을 특징으로 하는 약제.
  12. 제 11 항에 있어서, 약제가 구내용제인 약제.
  13. 폴리양이온 물질과 가교결합되는 설페이트화 폴리사카라이드가 유효성분으로 함유됨을 특징으로 하는 윤활제.
  14. 폴리양이온 물질과 가교결합되는 설페이트화 폴리사카라이드가 유효성분으로 함유됨을 특징으로 하는 화장품.
KR1020007007754A 1998-02-17 1999-02-10 설페이트화 사카라이드 KR20010034137A (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP4998998 1998-02-17
JP10/49989 1998-02-17
JP10/125415 1998-04-21
JP12541598 1998-04-21
PCT/JP1999/000606 WO1999041288A1 (fr) 1998-02-17 1999-02-10 Saccharides sulfates

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20010034137A true KR20010034137A (ko) 2001-04-25

Family

ID=26390421

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020007007754A KR20010034137A (ko) 1998-02-17 1999-02-10 설페이트화 사카라이드

Country Status (8)

Country Link
US (1) US20030176395A1 (ko)
EP (1) EP1057833A4 (ko)
KR (1) KR20010034137A (ko)
CN (1) CN1263772C (ko)
AU (1) AU756864B2 (ko)
CA (1) CA2307868A1 (ko)
EA (1) EA004702B1 (ko)
WO (1) WO1999041288A1 (ko)

Families Citing this family (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000062785A1 (fr) * 1999-04-15 2000-10-26 Takara Shuzo Co., Ltd. Remedes
DE60039695D1 (de) * 1999-06-11 2008-09-11 Takara Bio Inc Antifucoidan antikörper
EP1306387A4 (en) * 2000-07-13 2005-07-06 Takara Bio Inc MEDICAMENTS AND COSMETICS
EP1327448A4 (en) * 2000-09-13 2005-06-15 Takara Bio Inc AGENTS MAINTAINING HOMEOSTASE
DE60202427T2 (de) 2001-10-24 2005-12-29 Takara Bio Inc., Otsu Sulfatiertes Fucan-Oligosaccharid
WO2003062412A1 (fr) * 2002-01-18 2003-07-31 Takara Bio Inc. Fucane sulfate
CN1662648A (zh) * 2002-06-20 2005-08-31 宝生物工程株式会社 分解源自海参的硫酸化脱氧半乳聚糖的酶
US7741311B2 (en) * 2005-01-03 2010-06-22 Shaker Mousa Composition and method for treating occlusive vascular diseases, nerve regeneration, and wound healing
US8211308B2 (en) 2010-04-06 2012-07-03 Heliae Development, Llc Extraction of polar lipids by a two solvent method
WO2011127127A2 (en) 2010-04-06 2011-10-13 Arizona Board Of Regents For And On Behalf Of Arizona State University Extraction with fractionation of oil and co-products from oleaginous material
US8273248B1 (en) 2010-04-06 2012-09-25 Heliae Development, Llc Extraction of neutral lipids by a two solvent method
US8308951B1 (en) 2010-04-06 2012-11-13 Heliae Development, Llc Extraction of proteins by a two solvent method
US8313648B2 (en) 2010-04-06 2012-11-20 Heliae Development, Llc Methods of and systems for producing biofuels from algal oil
MX2012011559A (es) 2010-04-06 2013-02-21 Heliae Dev Llc Extraccion secuencial con soslvente de aceite y material proteinaceo a partir de material oleaginoso usando solventes de polaridad disminuida.
US8202425B2 (en) 2010-04-06 2012-06-19 Heliae Development, Llc Extraction of neutral lipids by a two solvent method
US8475660B2 (en) 2010-04-06 2013-07-02 Heliae Development, Llc Extraction of polar lipids by a two solvent method
US8211309B2 (en) 2010-04-06 2012-07-03 Heliae Development, Llc Extraction of proteins by a two solvent method
US8115022B2 (en) 2010-04-06 2012-02-14 Heliae Development, Llc Methods of producing biofuels, chlorophylls and carotenoids
CN107281549B (zh) 2010-11-23 2021-10-15 爱力根制药国际有限公司 与多糖交联的蛋白质的制备和/或制剂
US8365462B2 (en) 2011-05-31 2013-02-05 Heliae Development, Llc V-Trough photobioreactor systems
USD682637S1 (en) 2011-06-10 2013-05-21 Heliae Development, Llc Aquaculture vessel
USD661164S1 (en) 2011-06-10 2012-06-05 Heliae Development, Llc Aquaculture vessel
USD679965S1 (en) 2011-06-10 2013-04-16 Heliae Development, Llc Aquaculture vessel
US9200236B2 (en) 2011-11-17 2015-12-01 Heliae Development, Llc Omega 7 rich compositions and methods of isolating omega 7 fatty acids
FR2998894B1 (fr) * 2012-12-03 2015-07-31 Seprosys Procede de fractionnement d'algues et utilisation des molecules obtenues
WO2015112364A1 (en) * 2014-01-22 2015-07-30 Baxco Pharmaceutical, Inc. Sweetener composition
JP5982070B1 (ja) * 2014-10-09 2016-08-31 株式会社メディプロデュース まつ毛用洗浄剤
CN111875714B (zh) * 2020-08-05 2022-05-20 青岛海洋生物医药研究院股份有限公司 低分子量硫酸半乳聚糖及其制备方法和应用

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3853804A (en) * 1970-08-14 1974-12-10 California Inst Of Techn Ionic block elastomeric polymers
US3971848A (en) * 1970-12-21 1976-07-27 Kimitsu Chemical Laboratory Co. Ltd. Lubricating composition for mucosa or epidermis
US3833518A (en) * 1972-04-13 1974-09-03 Warner Lambert Co Denture adhesive preparation
FR2608456B1 (fr) * 1986-12-18 1993-06-18 Mero Rousselot Satia Microcapsules a base de gelatine et de polysaccharides et leur procede d'obtention
FR2648463B1 (fr) * 1989-06-14 1993-01-22 Inst Fs Rech Expl Mer Polysaccharides sulfates, agent anticoagulant et agent anticomplementaire obtenus a partir de fucanes d'algues brunes et leur procede d'obtention
US5049403A (en) * 1989-10-12 1991-09-17 Horsk Hydro A.S. Process for the preparation of surface modified solid substrates
JP3023485B2 (ja) * 1990-09-11 2000-03-21 日清紡績株式会社 ヘパリノイド活性を有する多糖類組成物或いは多糖類、それらの製造方法及びそれらを有効成分とする抗血液凝固剤
JP3090350B2 (ja) 1991-08-30 2000-09-18 日本精機株式会社 フィルム包装機
US5260002A (en) * 1991-12-23 1993-11-09 Vanderbilt University Method and apparatus for producing uniform polymeric spheres
JP3403496B2 (ja) * 1993-09-24 2003-05-06 株式会社ヤクルト本社 抗潰瘍剤およびヘリコバクター・ピロリの定着阻害剤
JPH0892303A (ja) * 1994-09-20 1996-04-09 Showa Sangyo Co Ltd 新規な糖、その製造方法および免疫賦活剤
JPH08301772A (ja) * 1995-05-01 1996-11-19 Nippon Oil Co Ltd 硫酸多糖類のカルシウム塩を含んで成る抗ウイルス剤
CA2243543A1 (en) * 1996-01-26 1997-07-31 Research Institute For Glycotechnology Apoptosis inducers

Also Published As

Publication number Publication date
CN1263772C (zh) 2006-07-12
EA200000843A1 (ru) 2001-02-26
CA2307868A1 (en) 1999-08-19
US20030176395A1 (en) 2003-09-18
CN1287558A (zh) 2001-03-14
EA004702B1 (ru) 2004-06-24
EP1057833A4 (en) 2003-04-16
AU2440199A (en) 1999-08-30
AU756864B2 (en) 2003-01-23
WO1999041288A1 (fr) 1999-08-19
EP1057833A1 (en) 2000-12-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20010034137A (ko) 설페이트화 사카라이드
US4514560A (en) Aggregating polysaccharide derived from aureobacidium
DE69023957T2 (de) Sulfatierte Polysaccharide, Antikoagulierungs- und Antikomplementärmittel, hergestellt aus Fukanen aus braunen Algen, und Verfahren zu deren Herstellung.
Greer et al. Characterization of hybrid (beta-kappa-gamma) carrageenan from Eucheuma gelatinae J. Agardh (Rhodophyta, Solieriaceae) using carrageenases, infrared and 13C-nuclear magnetic resonance spectroscopy
DE69228362T2 (de) Hochmolekulare, N,O-sulfatierte Heparosane; Verfahren zu deren Herstellung und diese enthaltende Arzneimittel
US6946551B2 (en) Preparation of hyaluronic acid from eggshell membrane
Schubert Intercellular macromolecules containing polysaccharides
JPH0353321B2 (ko)
de Carvalho et al. Conformational analysis of ulvans from Ulva fasciata and their anticoagulant polycarboxylic derivatives
Byankina et al. Polysaccharide structure of tetrasporic red seaweed Tichocarpus crinitus
DE60014065T2 (de) Fucogalactan-sulfate
EP0849280B1 (en) Fucans with low molecular weight having anticoagulant, antithrombinic and antithrombotic activity
CN101501014B (zh) 从废弃的卵壳中分离和稳定低分子量多糖的方法
Mettwally et al. Biological activities and structural characterization of sulfated polysaccharide extracted from a newly Mediterranean Sea record Grateloupia gibbesii Harvey
JPH03204804A (ja) 皮膚化粧料
EP0475383B1 (en) Polysaccharide composition or polysaccharide having heparinoid activity, process for producing the same, and anticoagulant containing the same as active ingredient
Rodrigues et al. Extraction and structural properties of Acanthophora muscoides (Rhodophyceae) extracellular matrix sulfated polysaccharides and their effects on coagulation
JP3762234B2 (ja) ポリ陽イオン物質で架橋された硫酸化多糖ならびにその製造方法
Holtkamp Isolation, characterisation, modification and application of fucoidan from Fucus vesiculosus
Acevedo-Garcia et al. Acetone Precipitation of Heterofucoidans from Sargassum muticum autohydrolysis extracts
Morgan Mucopolysaccharides associated with blood group specificity
Thunberg et al. Isolation and characterization of heparin from human mastocytoma tissue
AVRĂMIA et al. Research on obtaining high β-glucans content from different sources of yeast by harnessing their biologically active potential
Birgersson et al. Structural characterization and immunomodulating assessment of ultra-purified water extracted fucoidans from Saccharina latissima, Alaria esculenta and Laminaria hyperborea
Karthik et al. Proteoglycans from marine sponges and their biomedical applications

Legal Events

Date Code Title Description
WITN Application deemed withdrawn, e.g. because no request for examination was filed or no examination fee was paid