KR20000064953A

KR20000064953A - 인터페론 α/β수용체에 대한 항체

Info

Publication number: KR20000064953A
Application number: KR1019980708393A
Authority: KR
Inventors: 다니엘 노빅; 메나켐 루빈스타인
Original assignee: 에다 리서치 앤드 디벨럽먼트 컴퍼니 리미티드
Priority date: 1996-05-01
Filing date: 1997-04-29
Publication date: 2000-11-06
Also published as: CN1220699A; US6136309A; EA199800968A1; HK1019339A1; IL126835A; ATE342981T1; EA002543B1; UA76396C2; PT927252E; CA2253239C; DE69736835T2; ES2274542T3; DE69736835D1; IL118096A0; KR100581798B1; AU719995B2; CA2253239A1; BR9709202A; CN1198929C; DK0927252T3

Abstract

인터페론-α/β의 리간드 결합 성분에 대한 항체를 제공하는데 이는 다양한 타입-I 인터페론의 활성을 선택적으로 조절할 수 있다.

Description

인터페론 α/β수용체에 대한 항체

타입 I 인터페론(IFNs) (IFN-α, IFN-β, IFN-ω)은 구조적으로 연관이 있는 사이토킨 족으로 구성되는데 이는 바이러스성 감염에 저항성을 제공하는 능력으로 한정한다. 세포 증식을 방해, MHC-I 항원의 유도, 몇 가지 다른 면역-조절된 활성(1)을 포함하는 타입 I 인터페론의 많은 다른 생물학적 활성에 대해 보고된 바 있다. IFN-α와 IFN-β는 간염-C(2,3), 바이러스성 사마귀(4,5) 뿐만 아니라 모발 세포 백혈병(6), 만성 골수성 백혈병(7)와 Kaposis 육종(8)을 포함하는 몇 가지 다양한 바이러스성 질환을 치료하는데 유용하다.

IFN-α는 전신 홍반성 낭창(9)과 같은 자가면역 질환을 가지는 환자 및 AIDS 환자(10)의 혈청에서 감지되었다. IFN-α는 청소년 당뇨병(11)의 진행에 관계하는 것으로 보인다. 또한, IFN-α치료법은 일부 경우에는 열과 신경성 질환(12)을 포함하는 원하지 않는 부작용을 일으키는 것을 알 수 있다. 따라서, 임의 병적인 상태에서는 IFN-α의 활성을 중화시키는 것이 환자에게 유익하다.

다른 사이토킨의 경우에, IFN-α는 모든 IFN-α수용체와 IFN-β(13)에 특이적인 세포 표면 수용체에 결합을 함으로서 이들의 생물학적 활성을 나타낸다. 사람 IFN-α수용체(IFNAR)가 확인되었고, daudi 세포에서 클론되었다(14). 클론된 수용체는 한 개의 막통과 도메인, 세포외 도메인 및 세포내 도메인을 가지고 있다. 쥐 세포에서 발현되었을 경우에, 이 수용체는 사람 IFN-αB에는 반응성을 제공하나 다른 IFN-α와 IFN-β에는 반응성을 제공하지 않기 때문에 IFN-β와 다양한 IFN-α서브타입의 반응에 관계하는 추가 성분이 있다는 것을 나타낸다.

몇 가지 다른 연구에서는 IFN-α와 IFN-β의 결합에 관계하는 추가 성분 또는 수용체 소단위가 있다는 것을 알 수 있다(15-17). 그럼에도 불구하고, 전술한 수용체(14)는 모든 IFN-α와 IFN-β종(18)의 결합에 관계한다는 것이 보고된 바 있다. 또한, IFN-α/β수용체로 명해진 제 1 수용체 성분이 최근에 확인되어 클론되었다(EP publication No. 676,413 and ref. 19). 우리는 IFN-α/β수용체의 세포외 도메인은 IFNAB-BPI이 타입 I 인터페론 수용체의 주요 리간드-결합 성분이기 때문에 동일한 서열을 가진다는 것을 설명하였다. 또한 인터페론-α/β수용체와IFNAR은 리간드-결합에 협력하여 세포 표면에서 타입 I 인터페론과 3차 복합체를 형성한다.

IFNAR에 대한 단클론성 항체와 비-선택적인 방식으로 타입 I 인터페론의 활성을 방해할 수 있는 항체에대해서는 설명되었다(21). 또 다른 미확인된 수용체 성분에 대한 항체에 대해서도 설명되었다. 이와 같은 항체는 비-특정 방식으로 타입 I 인터페론의 활성을 방해한다(22).

발명의 요약

본 발명은 IFN-α와 IFN-β에 공통 수용체인 IFN-α/β수용체에 대한 단클론항체를 제공한다. 이와 같은 항체는 IFNAB-BPI와 IFNAB-BPII의 가용성 형태로 또는 사람 세포에서 발현되는 몇 가지 형태의 수용체에 결합할 수 있다. 한 가지 형태는 IFN-α와 IFN-β의 항바이러스성 활성을 차단하는 경우에 이용했을 때 더 높은 역가를 나타내었다. 제 2 타입은 IFN-α의 항바이러스성 활성에 대해서만 높은 차단 역가를 나타내고, IFN-β의 항바이러스성 활성에 대해서는 매우 낮은 역가를 나타내었다. 따라서, IFN-α의 활성을 선택적으로 차단하는데 특정 농도 범위에서 기대하지 않은 제 2 형태의 단클론항체를 이용할 수 있고 이는 IFN-β의 활성에는 영향을 주지 않는다.

본 발명은 또한 사람 세포에서 발현되는 IFN-α/β수용체 IFNAB-BPI와 IFNAB-BPII에 대한 인체에 적응시킨 단클론항체를 제공한다. 인체에 적응시킨 단클론항체는 쥐-사람 하이브리드 항체 분자인데 이때 가변부분 도메인은 쥐에서 유도한 것이고, 항상부분 도메인은 사람에서 기인한 것이다.

본 발명은 또한 단클론항체를 인코드하는 DNA 분자와 IFN-α/β수용체인 IFNAB-BPI와 IFNAB-BPII에 대한 사람에 적응시킨 단클론항체를 제공한다.

또한 본 발명은 상기 DNA 분자를 포함하는 복제 가능한 발현벡터, 벡터로 형질변환된 숙주, 이와 같은 숙주세포로부터 생산된 단클론항체을 제공한다. "DNA"분자에는 게놈 DNA, cDNA, 합성 DNA 및 이를 복합한 것을 포함한다.

또한 본 발명은 상기 DNA에 하이브리드할 수 있는 엄격한 조건하에서 하이브리드할 수 있는 그리고 단클론항체와 IFN-α/β수용체인 IFNAB-BPI와 IFNAB-BPII에 대한 사람에 적응을 시킨 단클론항체와 동일한 생물학적 활성을 가지는 단클론항체을 인코드하는 DNA 분자를 제공한다.

본 발명은 또한 IFN-α/β수용체인 IFNAB-BPI와 IFNAB-BPII에 대한 단클론항체 및 사람에 적응시킨 단클론항체를 만들 수 있는 숙주 세포를 준비하기 위한 방법을 제공한다.

본 발명에 따른 단클론항체는 사람 인터페론-β에 영향을 주지 않고 사람 인터페론-α의 생물학적 활성을 방해한다. 사람 WISH 세포와 베스큘라 스타마티티스 바이러스를 이용하여 세포질병 효과 저해 검사에서 테스트하였을 경우에 항체의 저해 효과를 정량적으로 평가하여 생물학적 활성을 측정한다.

본 발명은 다양한 타입 I 인터페론의 활성을 선택적으로 조절할 수 있는 인터페론 α/β 수용체의 리간드-결합 성분에 대한 항체에 관계한다.

EP publication No. 588,177에서는 분자량이 약 40,000인 가용성 IFN-α에 대해 상술하고 있는데 이는 항-IFN-α단클론항체와 면역침전 및¹²⁵I-IFN-α2에 교차 결합을 하는 것으로 확인할 수 있다. 혈청으로부터 수득하였을 경우에, 이와 같은 종류는 분자량이 50K이다. 또한 균질한 상태에서 뇨에서 수득한 40,000 IFN-α결합 단백질(이하 "IFNAB-BP" or "IFNAB-BPII"라고 칭함)로 다른 공지 단백질과는 다른 서열을 가지는 것이다. IFNAB-BP는 다양한 IFN-α서브타입과 IFN-β에 결합하여 다양한 활성을 조절한다.

EP publication No 676,413에서는 IFNAB-BP의 전구체를 코딩하는 두 개의 cDNA 클로닝과 서열에 대해 상술하고 있다. 이 두 가지는 동일한 유전자에서 유도할 수 있는데 예를 들면 절단을 달리하는 방식으로 얻을 수 있다. 포유류 및 다른 동물에서 IFNAB-BPI와 IFNAB-BPII으로 지정한 두 가지 재조합 단백질을 만드는 것도 설명을 하고 있다. IFNAB-BP에 대한 다클론성 항체 및 단클론성 항체는 IFN 수용체를 차단하는데, IFNAB-BPI와 IFNAB-BPII의 면역검사 및 면역정제를 하는데 이용할 수 있다는 것도 상술하고 있다.

본 발명에서 사람 세포에서 타입 I 인터페론 수용체에 결합을 할 수 있는 IFNAB-BPII에 대한 항체를 중화시키는 두 가지 집단에 대해 상술하고 있다. 한 집단의 항체는 IFN-α서브타입과 IFN-β의 활성을 차단할 수 있다. 또 다른 집단의 항체는 인터페론-β의 기능에 영향을 주지 않고 사람 세포에서 인터페론-α의 다양한 서브타입의 활성을 선택적으로 방해할 수 있다. 따라서, 전술한 항체의 한 집단은 IFN-β의 활성에 거의 영향을 주지 않고 원하지 않는 IFN-α의 효과를 방해할 수 있다.

이스라엘 특허 출원 No. 106591에 따르면, 분자량이 40,000(IFNAB-BP)인 IFN-α/β결합 단클론항체을 두 가지 크로마토그래피 단계를 이용하여 정상 소변으로부터 분리하였다. 원래 뇨 단클론항체가 아가로즈에 결합된 IFN-α2로 구성된 칼럼에 얹는다. 칼럼을 세척하여 연관이 없는 단백질을 제거하고 결합된 단백질은 낮은 pH에서 용출시킨다. 용출된 단백질은 크기 압출 HPLC에 의해 분리하여, 몇 가지 단백질 피크를 얻는데, 이중 하나는¹²⁵I-IFN-α2와 특이적으로 반응하는 능력이 있고 IFN-α와 IFN-β의 항바이러스성 활성을 차단하는 능력을 가진다. 이 단백질은 N-단부 마이크로시퀸스 분석을 통하여 추가 특징을 조사한다. 생성 서열을 공지의 IFNAR 서열과 비교하여 다른 점을 발견하였다. 또한 이는 다른 공지의 단백질과 다른데, FastA 프로그램(2)을 이용하여 Swissprot와 Genebank 데이터 라이브러리의 것과 비교하였을 때 임의 공지의 DNA 서열을 코드하지는 않았다.

뇨 IFNAB-BP 균질물을 이용하여 항체를 만드는데 이뮤노겐으로 사용한다.

"항체"는 다클론성 항체, 단클론항체(Mabs), 키메라항체, 가용성 또는 결합된 형으로 라벨링할 수 있고 임의 공지 기술(효소에 의한 절단, 펩티드 합성 또는 재조합 기술)에 의해 활성 단편으로 라벨링할 수 있는 항체에 대한 항-이디오타입(항-Id) 항체 등을 포함한다.

다클론성 항체는 항원으로 면역화시킨 동물의 혈청으로부터 유도한 이형 항체 분자 집단이다. 단클론항체는 항원에 특이적인 실제 동질의 항체 집단이고 이 집단에는 유사한 에피토프 결합 주위를 포함한다. Mabs는 공지의 방법으로 수득할 수 있다(Kohler and Milstein, Nature 256:495-497 (1975); US Patent No. 4,376,110; Ausubel et al, eds., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Assoc. and Wiley Interscience, N.Y., (1987-1996); Harlow and Lane, ANTIBODIES: A LABORATORY MANUAL, Cold Spring Harbor Laboratory (1988); and Colligan et al., eds., Current Protocols in Immunology, Greene Publishing Assoc. and Wiley Interscience, N.Y., (1992-1996)). 이와 같은 항체는 IgG, IgM, IgE, IgA, GILD와 이의 서브클래스를 포함하는 임의 이뮤노글로블린이 될 수 있다. 본 발명의 Mab를 생산하는 하이브리도마는 in vitro, in situ, in vivo에서 배양할 수 있다. 키메라 항체를 면역원성을 감소시키는데 이용할 수 있고 생산량을 증가시키는데 이용할 수 있는데 쥐 Mabs는 하이브리도마로부터 더 많은 양을 생산할 수 있으나 사람에서 더 높은 면역원성을 가진다. 이와 같은 사람/쥐 키메라 Mab를 이용한다. 이와 같은 항체와 이를 생산하는 방법은 공지되어 있다(Cabilly et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:3273-3277 (1984); Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855 (1984); Boulianne et al., Nature 312:643-646 (1984); Cabilly et al., European Patent Application 125023 (published November 14, 1984); Neuberger et al., Nature 314:268-270 (1985); Taniguchi et al., European Patent Application 171496 (published February 19, 1985); Morrison et al., European Patent Application 173494 (published March 5, 1986); Neuberger et al., PCT Application WO 8601533, (published March 13, 1986); Kudo et al., European Patent Application 184187 (published June 11, 1986); Morrison et al., European Patent Application 173494 (published March 5, 1986); Sahagan et al., J. Immunol. 137:1066-1074 (1986); Robinson et al., International Patent Publication, WO 9702671 (published 7 May 1987); Liu et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:3439-3443 (1987); Sun et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:214-218 (1987); Better et al., Science 240:1041-1043 (1988); and Harlow and Lane, ANTIBODIES: A LABORATORY MANUAL, supra.

항-이디오타입(항-Id) 항체는 항체의 항원결합부위와 일반적으로 연합되는 독특한 결정부위를 인지하는 항체이다. Id 항체는 Mab의 원으로써 동일한 종과 유전자형(가령, 쥐 세포주)을 가지는 동물을 항-Id를 준비하는 Mab와 면역화시킴으로써 분지할 수 있다. 면역화된 동물은 이와 같은 이디오타입 결정부위(항-Id 항체)에 대한 항체를 생산함으로써 면역 항체를 인지하고 이의 이디오타입 결정부위에 반응을 한다. 참고로 미국 특허 4,699,880을 보라.

항-Id 항체는 또한 다른 동물에서 면역 반응을 유도하기 위한 "이뮤노겐"으로 이용하여 소위 항-항-Id를 생산한다. 항-항-Id는 항-Id를 유도한 원래 Mab의 에피토프와 동일하다. 따라서, Mab의 이디오타입 결정부위에 대한 항체를 이용하면 동일한 특이성의 항체를 발현하는 다른 클론을 확인할 수 있다.

따라서, 본 발명의 IFNAB-BPI, IFNAB-BPII와 다른 관련 단백질에 대한 Mab를 이용하여 BALB/c 쥐와 같은 적절한 동물에서 항-Id 항체를 유도할 수 있다. 이와 같은 면역화된 쥐의 지라 세포를 이용하여 항-Id Mab를 분비할 수 있는 항-Id 하이브리도마를 생산한다. 또한, 항-Id Mab를 키홀 림페트 헤모시아닌(KLH)와 같은 담체에 결합시켜 추가 BALB/c 쥐를 면역화시키는데 이용한다. 이와 같은 쥐에서 수득한 혈청에는 IFNAB-BPI 또는 IFNAB-BPII에 특이적인 원래 Mab의 결합 성질을 가지는 항-항-Id 항체를 포함한다.

따라서, 항-Id Mab는 고유의 이디오타입 에피토프를 가지거나 또는 IFNAB-BPI 또는 IFNAB-BPII와 같이 에피토프와 구조적으로 유사한 "이디오타입"을 가진다.

"항체"는 고유 분자 뿐만 아니라 이의 활성 단편 가령 항원에 결합을 할 수 있는 Fab와 F(ab')₂와 같은 것을 포함한다. Fab와 F(ab')₂단편은 고유 항체에서 Fc 단편이 없고 순환계로부터 신속하게 제거되고 고유 항체와 비교할 때 다소 비-특이적인 조직 결합을 가진다(Wahl et al., J. Nucl. Med. 24:316-325 (1983)).

Fab와 F(ab')₂및 본 발명에 유용한 다른 항체를 이용하여 고유 항체 분자에 대해 설명하는 방법에 따라 IFN-α의 생물학적 활성을 선택적으로 차단하는데 이용된다. 이와 같은 단편은 일반적으로 파파인(Fab 단편을 생산) 또는 펩신(F(ab')₂단편)과 같은 효소를 이용하여 단백질 분해에 의해 생산될 수 있다.

항체는 분자와 특이적으로 결합할 수 있어 항체에 분자가 결합하는 "결합 능력"을 가지는 분자를 말한다. "에피토프"는 항체에 의해 인지될 수 있는 항체가 결합할 수 있는 임의 분자의 일부분을 말한다. "에피토프" 또는 "항원 결정부위"는 아미노산 또는 당의 측쇄와 같은 분자의 화학적으로 활성이 있는 표면 집단으로 구성되고 3차원 구조적 특이성 및 특이적인 전하 특징을 가진다.

"항원"은 항체가 결합을 할 수 있는 분자 또는 분자의 일부분으로 이 항체는 항원의 에피토프에 결합을 할 수 있는 항체를 생산하기 위해 동물을 유도할 수 있는 항체이다. 전술한 특이적인 반응은 매우 선택적인 방식으로 항원이 이에 상응하는 항체에 결합을 하고 다른 항원에 의해 유도되는 다른 다수의 항체와는 반응을 하지 않는 것이다.

항체의 단편을 포함하는 본 발명에 유용한 항체는 인터페론-β에는 거의 영향을 주지 않고 IFN-α서브타입의 생물학적 활성을 차단하는데 이용된다.

본 발명은 또한 전술한 것과 같은 본 발명의 임의 항체를 인코드하는 DNA 분자, 이와 같은 DNA분자로 구성된 복제 가능한 발현 벡터, 이와 같은 발현 벡터로 형질변환된 숙주 세포, 숙주세포에는 진핵 또는 원핵 세포를 포함한다.

본 발명은 또한 본 발명에 따른 하이브리도마를 배양하고 분비된 단클론항체를 회수하는 것으로 구성된 본 발명의 임의 항체를 생산하는 공정을 포함한다.

본 발명은 또한, 본 발명에 따라 형질변환된 세포를 배양하고, 숙주세포내에 DNA 분자와 발현 벡터에 의해 인코드된 분비된 항체를 회수하는 것으로 본 발명의 항체를 생산하는 방법을 포함한다.

본 발명은 또한 타입 I IFNs의 생물학적 활성을 차단하는 유사한 활성을 가지는 활성 뮤테인, 항체의 활성 단편, 야생형 항체 또는 이의 활성 뮤테인 또는 이의 활성 단편으로 구성된 융합 단백질, 또는 또 다른 펩티드 또는 단백질에 융합된 단백질에 관계한다.

이와 같은 항체, 이들의 활성 단편, 뮤테인 또는 융합된 단클론항체 및 전사 및 해독 조절 시그날을 인코드하는 DNA를 숙주 세포 염색체내에 원하는 유전자 서열을 삽입할 수 있는 능력을 가지는 진핵 벡터에 삽입한다. 이들의 염색체 안에 유도된 DNA를 안정적으로 삽입한 세포를 선별하기 위해 발현 벡터를 포함하는 숙주세포를 선택할 수 있도록 하나 이상의 선택 표식을 이용한다. 영양 요구성 숙주에 야생영양체, 살충제 저항성 가령, 항생제, 구리와 같은 중금속에 대한 저항성을 제공한다. 선택성 표식 유전자는 발현될 DNA 유전자에 바로 연결하거나 공동 형질감염에 의해 동일한 세포로 유도시킬 수 있다. 단일 사슬 결합 단백질의 mRNA을 적절하게 합성하는데 필요한 추가 원소가 요구될 수 있다. 이와 같은 원소에는 절단 시그날, 전사 프로모터, 인헨서 및 종료 시그날(24)을 포함한다.

이와 가튼 항체를 발현시키기 위한 목적으로, 선택한 세포내로 도입시킬 항체, 이의 활성 부분, 유도체, DNA 분자를 수용할 숙주세포에서 자체 복제할 수 있는 플라스미드 또는 바이러스성 벡터에 결합시킬 수 있다.

특정 플라스미드 또는 바이러스성 벡터를 선택하는데 중요한 인자는 다음과 같다; 벡터를 포함하는 수용 세포를 용이하게 인지할 수 있어야 하고, 벡터를 포함하지 않는 수용 세포로부터 벡터를 포함하는 세포를 용이하게 분리할 수 있어야 하고, 특정 숙주에서 원하는 벡터의 복사체를 얻을 수 있어야 하며, 상이한 종의 숙주간에 벡터를 "셔틀"시킬 수 있는 지를 알아야 한다. 적절한 원핵 벡터에는 대장균(E. coli)에서 복제할 수 있는 플라스미드 가령,pBR322, ColEl, pSC101, pACYC 184, 등(25); pC194, pC221, pT127 등의 바실러스(Bacillus) 플라스미드(26); pIJ101를 포함하는 스트렙토마이세스(Streptomyces)(27); IC31와 같은 스트렙토마이세스 박테리오파아지(Streptomyces); 슈도모나스(Pseudomonas) 플라스미드(29,30)등이 있다.

적절한 진핵 플라스미드에는 BPV, 벡시니아, SV40, 2-micron circle 또는 이의 유도체를 포함한다. 이와 같은 플라스미드는 본 기술분야에 공지의 것이다.

벡터 또는 발현을 위한 DNA 서열을 포함하는 구조가 준비되면, 발현 벡터는 형질도입, 형질감염, 리포펙틴, 접합, 원형질 융합, 전기천공, 인산칼슘 침전, 직접 주사등과 같은 적절한 여러 가지 수단을 이용하여 적절한 숙주 세포로 유입시킨다.

본 발명에서 이용되는 숙주 세포는 진핵 또는 원핵 세포가 될 수 있다. 적절한 진핵 숙주 세포는 대장균(E. coli), 바실러스(Bacillus), 스트렙토마이세스(Streptomyces), 슈도모나스(Pseudomonas), 살모넬라(Salmonella), 세라티아(Serratia)등과 같은 박테리아를 포함한다. 가장 적절한 원핵 숙주는 대장균(E. coli)이다. 특히 관심이 있는 박테리아 숙주는 대장균(E. coli) K12 균주 294 (ATCC 31446), 대장균(E. coli) X1776 (ATCC 31537), 대장균(E. coli) W3110 (F-, lambda-, phototropic (ATCC 27325)) 및 살모넬라 티피모리움(Salmonella typhimurium) 또는 세라티아 마르세센스(Serratia marcescens) 및 다양한 슈도모나스종(Pseudomonas)을 포함한다. 이와 같은 조건하에서는 단백질이 글리코실화되지 않는다. 원핵 숙주는 발현 플라스미드에서 복제 및 조절 서열에 적합성이 있어야 한다.

적절한 진핵 세포에는 사람, 원숭이, 쥐, 차이니즈 헴스터 난 세포(CHO)와 같은 포유류 세포가 되는데 그 이유는 이들은 정확한 폴딩, 정확한 이황화결합 형성 및 정확한 부위에서 글리코실화를 포함하는 단백질에 해독후 변형을 제공한다. 또한 이스트 세포와 곤충 세포는 상당한 만노즈 글리코실화를 포함하는 해독후-펩티드 변형을 실시한다. 다수의 재조합 DNA 전략은 강력한 프로모터 서열과 다수의 플라스미드 복사체를 이용하는데 이는 이스트 및 곤충 세포에서 원하는 단클론항체을 생산하는데 이용할 수 있다. 이스트 세포는 클론된 포유류 생성물에 있는 리더 서열을 인지하고 리더 서열을 가지는 펩티드를 분비한다. 벡터를 유도한 후에, 숙주 세포는 선택성 배지에서 생장시켜, 벡터를 포함하는 세포의 생장을 선별할 수 있다. 클론된 유전자 서열을 발현시키면 원하는 항체, 융합 단백질 또는 뮤테인 또는 이의 활성 단편을 만들게 된다. 발현된 항체는 추출, 침전, 크로마토그래피, 전기영동등과 같은 통상적인 과정 또는 친화성 크로마토그래프를 이용하여 분리 정체한다.

여기에서 사용하고 있는 "뮤테인"은 항체의 유사체로써 항체의 한 개 이상의 아미노산 또는 이의 활성 단편이 다른 아미노산 잔기로 대체되고 또는 결소노디고또는 한 개 이상의 아미노산이 서열에 첨가되는데 이때 이와 같은 변화는 야생형 항체 또는 이의 활성 단편과 비교하였을 때 생성된 산물과 활성이 거의 차이가 없다. 이와 같은 뮤테인은 공지의 합성 또는 부위-직접적인 돌연변이 또는 임의 다른 기술을 이용하여 준비할 수 있다.

이와 같은 뮤테인에는 항체 또는 이의 활성 단편과 실제 유사한 활성을 가지도록 하기위해 항체의 아미노산 서열을 가진다. 이와 같은 항체의 한 집단으로는 사람 IFN-α2 및 IFN-β의 항바이러스성 활성을 차단할 수 있는 것이다. 또 다른 집단의 항체는 사람 IFN-α2의 항바이러스 활성을 차단하면서 사람 IFN-β활성은 그대로 유지시키는 능력을 가진 것이다. 따라서, 주어진 뮤테인이 항체와 실제 동일한 활성을 가지는 지를 검사하기 위해 일상적인 실험을 하는데 뮤테인을 간단한 항바이러스 검사를 할 수 있다; 타입 I 인터페론을 차단하는 뮤테인은 항체의 활성을 보유하고 있고 따라서 전술한 항체의 용도를 적어도 하나 가지고 따라서 이에 유사한 활성을 가진다.

구체예에서, 임의 뮤테인은 항체의 서열에 적어도 40% 동일성 또는 유사성을 가진다. 더욱 적절하게는 적어도 50%, 60%, 70%, 80% 가장 적절하게는 90% 동일성 또는 유사성을 가진다.

본 발명에 이용할 수 있는 항체 또는 이의 단편의 뮤테인, 이를 코딩하는 핵산에는 당업자가 준비할 수 있는 치환 펩티드 또는 폴리뉴클레오티드와 같은 이에 상응하는 세트를 포함한다. 단백질 화학 및 구조에 대한 상세한 설명은 Schulz, G.E. et al., Principles of Protein Structure, Springer-Verlag, New York, 1978; and Creighton, T.E., Proteins: Structure and Molecular Properties, W.H. Freeman & Co., San Francisco, 1983을 참고로 한다. 코드 선호와 같은 뉴클레오티드 서열 치환에 대해서는 Ausubel et al, supra, at §§ A.1.1-A.1.24, and Sambrook et al, supra, at Appendices C and D을 참고로 한다.

본 발명에 따른 적절한 뮤테인에 주는 변화는 "보존성" 치환으로 공지된 것이다. 항체, 폴리펩티드, 단백질 또는 이의 활성 단편의 보존성 아미노산 치환에는 유사한 물리 화학적 성질을 가지는 집단 내에 동종 아미노산을 포함하는데 집단내에서 치환하면 분자의 생물학적 기능을 보존하게 되는데(Grantham, Science, Vol. 185, pp. 862-864(1)), 이는 아미노산의 기능에 영향을 주지 않고 아미노산을 삽입 또는 결손시킬 수 있는데 특히, 삽입 또는 결손이 30개 이하 적절하게는 10개 이하의 적은 아미노산이 관여하고 기능적인 형태의 중요한 아미노산, 예를 들면 시스테인 잔기등은 제거하거나 치환되지 않는다(Anfinsen, "Principles That Govern The Folding of Protein Chains", Science, Vol. 181, pp. 223-230 (1973)). 이와 같은 결손 또는 삽입에 의해 생성된 단백질 및 뮤테인은 본 발명의 범위에 속한다.

적절하게는 동종 아미노산 집단은 표 1에 나타내었다. 더욱 적절하게는 동종 아미노산 집단은 표 2에 나타내었고 가장 바람직한 동종 아미노산 집단은 표 3에 나타내었다.

동종 아미노산 집단

아미노산	동종 집단
Ser	Ser, Thr, Gly, Asn
Arg	Arg, Gln, Lys, Glu, His
Leu	Ile, Phe, Tyr, Met, Val, Leu
Pro	Gly, Ala, Thr, Pro
Thr	Pro, Ser, Ala, Gly, His, Gln, Thr
Ala	Gly, Thr, Pro, Ala
Val	Met, Tyr, Phe, Ile, Leu, Val
Gly	Ala, Thr, Pro, Ser, Gly
Ile	Met, Tyr, Phe, Val, Leu, Ile
Phe	Trp, Met, Tyr, Ile, Val, Leu, Phe
Tyr	Trp, Met, Phe, Ile, Val, Leu, Tyr
Cys	Ser, Thr, Cys
His	Glu, Lys, Gln, Thr, Arg, His
Gln	Glu, Lys, Asn, His, Thr, Arg, Gln
Asn	Gln, Asp, Ser, Asn
Lys	Glu, Gln, His, Arg, Lys
Asp	Glu, Asn, Asp
Glu	Asp, Lys, Asn, Gln, His, Arg, Glu
Met	Phe, Ile, Val, Leu, Met
Trp	Trp

동종 아미노산 서열의 적절한 예

아미노산	동종 집단
Ser	Ser
Arg	His, Lys, Arg
Leu	Leu, Ile, Phe, Met
Pro	Ala, Pro
Thr	Thr
Ala	Pro, Ala
Val	Val, Met, Ile
Gly	Gly
Ile	Ile, Met, Phe, Val, Leu
Phe	Met, Tyr, Ile, Leu, Phe
Tyr	Phe, Tyr
Cys	Cys, Ser
His	His, Gln, Arg
Gln	Glu, Gln, His
Asn	Asp, Asn
Lys	Lys, Arg
Asp	Asp, Asn
Glu	Glu, Gln
Met	Met, Phe, Ile, Val, Leu
Trp	Trp

동종 아미노산 서열의 가장 적절한 예

아미노산	동종 집단
Ser	Ser
Arg	Arg
Leu	Leu, Ile, Met
Pro	Pro
Thr	Thr
Ala	Ala
Val	Val
Gly	Gly
Ile	Ile, Met, Leu
Phe	Phe
Tyr	Tyr
Cys	Cys, Ser
His	His
Gln	Gln
Asn	Asn
Lys	Lys
Asp	Asp
Glu	Glu
Met	Met, Ile, Leu
Trp	Met

본 발명에 이용할 수 있는 항체 또는 이의 활성 단편을 얻기 위해 이용되는 단백질에서 아미노산 치환을 하는 예는 미국 특허 33,653, 4,959,314, 4,588,585 and 4,737,462, to Mark et al; 5,116,943 to Koths et al., 4,965,195 to Namen et al; 4,879,111 to Chong et al; and 5,017,691 to Lee et al에 상술하고 있고; 리신 치환된 단백질에 대해서는 미국 특허 No. 4,904,584(Shaw et al)에서 상술하고 있다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 항체의 임의 뮤테인 또는 이의 활성 단편은 항체의 서열에 상응하는 아미노산 서열을 기본적으로 가진다. 이때 "기본적으로 상응하는"의 의미는 IFN-α와 IFN-β의 활성을 완전하게 또는 선택적으로 차단할 수 있는 능력에 관계하는 한 천연 단백질의 기본적인 특징에 영향을 주지 않고 천연 단백질의 서열에 최소의 변화를 가지는 단백질로 이해하면 된다. "기본적으로 상응하는" 의미의 범위 내에 있는 일반적인 변화는 이들 항체를 인코드하는 DNA 기술의 통상적인 돌연변이 기술로 인하여 최소한의 변화가 생성되고 전술한 것과 마찬가지로 원하는 활성을 스크리닝하게 된다.

본 발명에 따른 뮤테인에는 엄격한 조건에서 본 발명에 따른 항체를 인코드하는 DNA 또는 RNA에 하이브리드할 수 있는 핵산에 의해 인코드된 단백질을 포함한다. 발명에는 또한 원하는 핵산의 학인 및 정제 시에 프로브로 이용할 수 있는 이와 같은 핵산을 포함한다. 또한, 이와 같은 핵산은 본 발명의 항체의 기능적인 호라성을 가지는 폴리펩티드를 인코드하는 지를 결정하는 가장 좋은 추천물질이 될 수 있다. "엄격한 조건"은 통상적으로 "엄격한"이라고 하는 당업자에 공지된 하이브리드반응 및 연속적인 세척 조건을 말한다(Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, supra, Interscience, NY, §§6.3 and 6.4 (1987, 1992), and Sambrook et al., supra). 엄격한 조건에는 연구중의 하이브리드의 계산된 Tm이하인 12-20℃의 세척 조건을 포함하는데 가령, 5분간 2*SSC와 0.5% SDS, 15분간2*SSC와 0.1% SDS; 37℃에서 30-60분간 0.1*SSC와 0.5% SDS, 그 다음 68℃에서 30-60분간 0.1*SSC와 0.5% SDS 등을 예로들 수 있으나 이에 한정하는 것은 아니다. 본 기술에 숙지의 지식을 가진 자는 엄격한 조건은 DNA 서열의 길이, 올리고뉴클레오티드 프로브(10-40개 염기) 또는 혼합된 올리고뉴클레오티드 프로브에 따라 또한 달라진다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 혼합형 프로브를 이용할 경우에 SSC 대신에 테트라메틸 암모니움 클로라이드(TMAC)를 이용하는 것이 바람직하다(Ausubel, supra).

"융합된 단백질"이란 신체유체에서 연장된 잔류 시간을 가지는 또 다른 단백질과 융합된 항체 또는 이의 활성 단편 또는 이의 뮤테인으로 구성된 폴리펩티드로 구성된다. 이와 같은 항체 또는 이의 활성 단편은 또 다른 단백질, 폴리펩티드 또는 이와 유사한 것에 융합될 수 있다.

"염"이란 항체, 이의 활성 단편, 뮤테인 또는 이의 융합된 단백질의 카르복실기 염과 아미노기의 산 첨가염을 말한다. 이와 같은 카르복시기 염은 본 기술의 공지의 수단으로 형성될 수 있는데 여기에는 나트륨, 칼슘, 암모니움, 철 또는 아연염과 이와 유사한 염 그리고 트리에탄올아민, 아르기닌 또는 리신, 피페리딘, 프로카인 및 이와 유사한 아민으로 형성된 것과 같은 유기 염기 염을 포함한다. 산 첨가염에는 예를 들면, 염산 또는 황산과 같은 미네랄산 염과 아세트산 또는 옥살산과 같은 유기산 염을 포함한다. 물론 이와 같은 염은 항체 또는 이의 활성부분에 실제 유사한 활성을 가지고 있어야 한다.

여기에서 이용하고 있는 "기능적인 유도체"는 항체 또는 이의 활성 단편 및 이들의 뮤테인 및 융합된 단백질 등의 유도체를 포함하는데 이는 본 기술의 공지의 방법으로 잔기 또는 N- 또는 C- 단부기에 있는 측쇄에서 일어나는 기능기로 부터 만들 수 있는데, 이들이 제약학적 수용 가능한 활성 가령, 항체의 활성에 실제 유사한 단백질의 활성을 파괴하지 않고, 이를 포함하는 조성물에 독성 성질을 부여하지 않는 한 본 발명에 포함된다. 이와 같은 유도체는 예를 들면, 항원 부위를 차단하고 신체 유체에서 이들 항체 또는 이들 활성 부분의 잔류를 연장하는 폴리에틸렌 글리콜 측쇄 등을 포함한다. 또 다른 유도체에는 카르복실기의 지방족 에스테르, 암모니아 또는 1차 또는 2차 아민과의 반응에 의한 카르복실기 아미드, 아실 부분(가령 알카노일 또는 카르보사이클 아로일 기)으로 형성된 아미노산 잔기의 아미노기의 N-아실 유도체 또는 아실 부분으로 형성된 자유 하이드로실 기(가령 세릴 또는 트레오닐 잔기의 하이드록실 기)의 O-아실 유도체를 포함한다.

항체, 뮤테인 및 융합된 단백질의 "활성 단편"으로는 본 발명에서는 항체의 폴리펩티드 사슬의 임의 단편 또는 전구체 또는 항체의 이와 같은 단편만을 포함하는 융합된 단백질 또는 당 또는 인산 잔기 또는 전술한 항체의 임의 응집체에 연결된 잔기 또는 연합된 분자와 함께 항체의 단편을 포함하는 융합된 단백질을 포함하는데 단, 조건은 이와 같은 단편은 항체와 실제 유사한 활성을 가지는 것이다.

본 발명은 또한 본 발명의 항체 또는 이의 뮤테인, 융합된 단백질 및 이의 염, 기능적 유도체 또는 이의 활성 단편과 제약학적 수용 가능한 담체로 구성된 제약학적 조성물에 관계한다.

본 발명의 제약학적 조성물은 생리적으로 수용가능한 담체 또는 안정화제 또는 부형제와 항체 또는 이의 유도체를 혼합하고 원하는 약형으로 만들고 가령 약량 바이알에 냉동 건조시켜 만들어 투여할 수 있도록 준비한다. 투여 방법은 유사한 물질을 투여하기 위해 사용하는 방식을 통하여 투여할 수 있는데 이는 처리할 조건에 따라 달라지는데 가령, 정맥을 통하여, 근육을 통하여, 피하를 통하여, 국소 주사 또는 국소 적용 또는 연속적인 주입 등을 통하여 투여할 수 있다. 투여될 활성 성분의 양은 투여경로, 치료할 질병 및 환자의 상태에 따라 달라진다. 예를 들면 국소 주사는 정맥 주입보다는 체중을 기초로하여 더 적은 양을 투여해야 한다.

이와 같은 항체는 IFN-α를 이상적으로 발현시키는 가령, 타입 I 당뇨병, 다양한 자가면역 질환, 이식 거부, AIDS, 유사 질병등에서 다양한 IFN-α의 생물학적 활성을 차단하는데 또는 조절하는데 이용할 수 있는데, 이와 같은 항체는 IFN-α의 발현이 내생적으로 유도되는 또는 외부에서 투여되는 임의 질병에 이용될 수 있다.

따라서, 항체, 인체에 적응된 항체, 이의 활성 단편, 뮤테인, 융합된 단백질, 이의 염, 기능적인 유도체 및 이의 활성 단편은 자가면역 질환 및 포유류의 다른 염증 질환의 치료, 청소년 당뇨병, 낭창성 홍반 및 AIDS에 서 인터페론-α 또는 인터페론-β를 투여하여 발생한 독성의 치료에 사용할 수 있다.

본 발명은 다음의 실시예로 설명하나 이에 국한시키는 것은 아니다.

실시예 1: IFNAB-BP로 쥐를 면역화시키고 골수 세포와 융합

암컷 Balb/C 쥐(3개월됨)에 컴플리트 플루언트 어쥬번트 에멸젼에 2㎍ 정제된 IFNAB-BP를 우선 주사하고, 3주후에, 인컴플리트 플루언브 어쥬번트를 이용하여 피하로 투여한다. PBS에 IFNAB-BP를 10일 간격으로 피하를 통하여 5회 추가 주사를 한다. 이와 같은 쥐의 혈청은 IsRIA(see below)에 의해 결정된 결합 역가 1:100,000를 가진다. 다음과 같이 결정된 것과 같이 항혈청은 IFN-α 또는 IFN-β의 항바이러스성 활성을 차단한다; 96웰 플레이트에서 사람 WISH 세포의 선형성된 단층은 2배 희석된 항혈청(또는 단클론성 항체)를 이용하여 2시간동안 37℃에서 배양하였다. IFN-α2 또는 IFN-β(최종 10U/㎖; NIH 표준에 대해 계산함)를 모든 웰에 첨가하고 플레이트는 추가 4시간동안 배양한다. 세포는 VSV(vesicular stomatitis virus)으로 자극하여 IFN이 부족한 기준과 비교하였을 경우에 완전한 세포병인 효과가 나타날 때까지 하룻밤동안 배양한다. 50% CPE를 나타내는 항체의 중화 역가는 9unit/㎖이다. 따라서, 1 차단 unit/㎖은 이와 같은 검사 조건하에 IFN 1 Unit/㎖활성을 차단하는데 필요한 항체의 농도이다. 면역화된 쥐의 혈청에는 IFN-α와 IFN-β 모두에 대한 120,000U/㎖의 중화 역가를 가진다.

융합전에 3일과 4일에 정제된 IFNAB-BP를 복막을 통하여 최종적으로 부스트시킨다. 융합 짝으로 면역화된 쥐의 임파구와 지라에서 분비한 임파세포와 NSO/1 골수종 세포주를 이용하여 융합을 실행한다. 융합된 세포는 96웰 플레이트에 분배하고 하이브리도마는 HAT와 15% 말 혈청이 보충된 DMEM에서 선별한다.

실시예 2; 하이브리도마의 스크리닝 및 단클론항체의 특징을 조사

항-IFNAB-BP 단클론항체를 생산하는 하이브리마는 다음과 같이 스크리닝한다; 하이브리도마 현탁액은 다음과 같이 역상 방사능면역 검사(sRIA)에 의해 항-IFNAB-BP 항체가 있는 지를 테스트한다; PVC 미량적정 판(Dynatech Laboratories, Alexandria, VA)에는 친화력에 의해 정제된 염소 항-쥐 혈청 F(ab)₂항체(Jackson Labs. USA) (10 ㎍/㎖, 100㎕/well)로 피복한다. 4℃에서 하룻밤동안 배양한 후에, 플레이트는 BSA(0.5%), Tween 20(0.05%)를 포함하는 PBS로 세척하고 37℃에서 적어도 2시간동안 세척용액에서 차단시킨다. 하이브리도마 배양물 상층액(100㎕/well)을 첨가하고 플레이트는 37℃에서 4시간동안 배양한다. 플레이트는 세척용액으로 3회 세척하고¹²⁵I-IFNAB-BP (100㎕, 105 cpm)를 첨가하여 4℃에서 16시간동안 추가 배양한다. 플레이트는 3회 세척하고 각 웰을 절단하여 감마 카운터에서 카운터한다. 음성 기준 치보다 적어도 5배 이상인 샘플의 카운터는 양성으로 간주한다(표 4). 모든 양성 클론을 선택하고 클론한다. 개별 서브클론을 복수생산을 위해 원래 프라임된 Balb/C 쥐에 주사한다. 황산 암모니움(50% 포화)으로 침전시켜 복수액으로부터 이뮤노글로빌린을 분리한다. 시판하는 ELISA kit (Amersham, UK)를 이용하여 항체의 이소타입을 정의한다.

하이브리도마 상청액, 농축된 하이브리도마 성청액, 복수액 또는 복수액으로부터 수득한 이뮤노글로블린 등의 다양한 단클론항체는 면역화된 쥐 혈청에서 전술한 것과 같이 수용체를 차단하는 능력, IFN-α2와 IFN-β의 항바이러스 활성을 방해하는 능력에 대해 테스트한다. 이 결과를 표 4에 나타내었다. 따라서, 단클론항체 16.3, 53.2, 392.1은 필적할 수 있을 역가에서 IFN-α와 IFN-β의 항바이러스성 활성을 차단하나, 단클론항체 35.9, 51.44, 234.14의 IFN-α2에 대한 역가는 IFN-β에 대한 역가보다 상당히 높다는 것을 알 수 있다. 따라서, 단클론항체 35.9, 51.44 및 234.14는 특정 농도범위에서 IFN-β의 활성에는 영향을 주지 않고 IFN-α의 활성을 선택적으로 차단하는데 이용할 수 있을 것이다.

IFN-α/β 수용체(IFNAB-BP)의 단클론항체의 특징

항체	IsRIA(cpm)	IFN-α2(U/㎖)의 중화 역가	IFN-β(U/㎖)의 중화 역가	Ig 종류
16.3 하이브리도마 상청액	39,103	>5,120	ND	IgG1
16.3 복수액¹	ND²	60,000	60,000	IgG1
35.9 하이브리도마 상청액	33,100	1,280	150	IgG1
35.9 복수액¹	ND	60,000	15,000	IgG1
51.44하이브리도마 상청액	6,345	1,000	<75	IgG2a
51.44 Ig(5㎎/㎖)	ND	15,000	<2500	IgG2a
53.2 하이브리도마 상청액	26,737	2,000	ND	IgG1
53.2 복수액	ND	120,000	70,000	IgG1
117.7하이브리도마 상청액	38,945	2,000	ND	IgG1
117.7 Ig(10㎎/㎖)	ND	28,800,000	2,000,000	IgG1
234.14 하이브리도마상청액	21,812	>5,120	<200	IgG2a
234.14 Ig(10㎎/㎖)	ND	1,440,000	23,000	IgG2a
392.1 하이브리도마상청액	34,390	2,400	ND	IgG1
392.1 복수액	ND	160,000	70,000	IgG1
1은 약 5㎎/㎖ Ig, 2는 실행하지 않음

실시예 3; IFNAB-BP의 ELISA 테스트를 위해 단클론항체를 이용

미량적정 플레이트(Dynatech or Maxisorb, bNunc)에는 4℃에서 하룻밤동안 항-IFNAB-BP 단클론항체를 피복하였다. 이와 같은 피복은 단클론항체 No. 46.10(Ig 부분, 120㎕/well, 10㎍/㎖, PBS)으로 실행한다. 단클론항체 No.46.10은 EP 676,413에서 상술하고 있다.

또는 단클론항체 No.117.7을 이용하여 제1피복에 이용할 수 있다. 플레이트는 BSA(0.5%), Tween 20(0.05%), NaN₃(0.02%)(차단액)으로 세척하고, 동일한 용액으로 37℃에서 하룻밤동안 차단한다. 세트트한 샘플은 0.1% NP40와 0.65M NaCl을 포함하는 차단 용액으로 연속하여 2배 희석하고(시작은 1:4), 37℃에서 4시간동안 웰(100㎕)에 첨가한다. 그 다음 플레아트는 0.05% Tween 20(PBS/Tween)을 포함하는 PBS로 3회 세척하고 4℃에서 추가 하룻밤동안 배양을 하기 위해 바이오티닐화된 단클론항체 No.234.14(차단용액과는 1:1000, 그러나 NaN₃는 없고 100㎕/well)을 첨가한다. 플레이트는 그 다음 PBS/Tween(100㎕/well)로 3회 세척하고, 2시간동안 실온에서 스트렙타아비딘-양고추냉이 과산화효소(Jackson Labs, 1:10,000, PBS/Tween. 100㎕/well)를 첨가한다. 플레이트는 PBS/Tween으로 3회 세척하고 각 웰에는 새로 준비한 ABTS(2,2'-아지노-비스(3-에틸벤즈티아졸린-6-설폰산, Sigma, 10㎎; 6.4㎖ H₂O; 2.2㎖ of 0.2M Na₂HPO₄; 1.4㎖ 0.2M citric acid; 1㎕ H₂O₂, 기질로 이용) 100㎖을 첨가하여 색을 발생시킨다. 색은 30분경에 발생하고 반응은 0.2M 시트르산 100㎕/well을 첨가하여 중지한다. 플레이트는 405㎚에서 자동 ELISA 판독기로 읽고, 630㎚에서 비-특이적인 수치를 보정한다. 이 검사의 감지 최저 한계는 30pg/㎖이다.

특정 구체예의 전술한 설명은 본 발명의 일반적인 특징을 나타내는 것으로 현재의 지식을 이용하여 일반적인 개념을 벗어나지 않고 특정 구체예에 다양한 응용 및 변화를 할 수 있으며 따라서 이와 같이 채택된 변화 및 수정은 전술한 구체예의 의미와 범위내에 속한다는 것을 인지할 것이다. 여기에서 이용된 용어등은 본 발명을 설명하기 위함이고 이에 국한시키고자 함은 아니다.

하이브리도마 46.10, 117.7, 234.14는 특허를 목적으로 1996년 4월 23일자 Pasteur Institue(CNCM)에 각 I-1697, I-698, I-1699로 기탁되었다.

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Claims

IFN-α/β수용체 또는 IFNAB-BPI 또는 IFNAB-BPII 가용성 형태에 결합을 하는 항체에 있어서 이 항체는 IFN-α의 생물학적 활성을 차단하는 것을 특징으로 하는 항체.
제 1 항에 있어서 항체는 IFN-α와 IFN-β의 생물학적 활성을 차단하는 것을 특징으로 하는 항체.
제 1 항에 있어서, 항체는 IFN-α의 생물학적 활성을 선택적으로 차단하는 것을 특징으로 하는 항체.
제 1 항에 있어서 항체는 단클론항체인 것을 특징으로 하는 항체.
제 1 항에 있어서 항체는 다클론항체인 것을 특징으로 하는 항체.
제 1 항에 있어서, 항체는 키메라 항체인 것을 특징으로 하는 항체.
제 1 항에 있어서, 항체는 인체에 적응시킨 것을 특징으로 하는 항체.
제 3 항에 있어서, 항체는 단클론항체인 것을 특징으로 하는 항체.
제 3 항에 있어서, 항체는 다클론항체인 것을 특징으로 하는 항체.
제 3 항에 있어서, 항체는 키메라 항체인 것을 특징으로 하는 항체.
제 3 항에 있어서, 항체는 인체에 적응시킨 것을 특징으로 하는 항체.
제 1 항에 따른 항체를 인코드하는 DNA 단편으로 구성된 것을 특징으로 하는 DNA 분자.
제 12 항에 있어서, DNA는 재조합 DNA 분자인 것을 특징으로 하는 DNA 분자.
제 12 항에 있어서, 항체를 인코드하는 DNA 단편은 전사 및 해독 조절 시그날에 연결된 것을 특징으로 하는 항체.
제 13 항에 따른 재조합 DNA 분자로 구성된 것을 특징으로 하는 발현 벡터.
항체를 발현할 수 있는 숙주세포에 있어서 숙주 세포는 제 15 항에 따른 발현벡터를 가지는 것을 특징으로 하는 숙주 세포.
제 16항에 따른 숙주 세포를 배양하여 항체를 발현시키는 것을 특징으로 하는 항체를 생산하는 방법.
IFN-α의 생물학적 활성을 조절하거나 차단하는 제약학적 조성물에 있어서, 제 1 항에 따른 항체와 제약학적 수용가능한 담체로 구성된 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
IFN-α의 생물학적 활성을 조절하거나 차단하는 방법에 있어서, 제 18 항에 따른 제약학적 조성물의 효과량을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 것을 구성된 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 따른 항체를 발현하는 하이브리도마에 있어서 1996년 4월 23일자 Pasteur Institut에 기탁번호가 I-1698로 기탁된 NUR 2 117.7인 하이브리도마.
제 1 항에 따른 항체를 발현하는 하이브리도마에 있어서 1996년 4월 23일자 Pasteur Institut에 기탁번호가 I-1699로 기탁된 NUR 2 234.14인 하이브리도마.
IFNAB-BPI 또는 IFNAB-BPII의 ELISA 테스트에 있어서, 단클론항체 46.10 또는 117.7을 제 1 피복하고, 단클론항체 234.14를 제 2 피복한 시판되는 미량 적정 판으로 구성된 것을 특징으로 하는 ELISA 테스트.