KR20000052743A - 백신 - Google Patents
백신 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20000052743A KR20000052743A KR1019990703543A KR19997003543A KR20000052743A KR 20000052743 A KR20000052743 A KR 20000052743A KR 1019990703543 A KR1019990703543 A KR 1019990703543A KR 19997003543 A KR19997003543 A KR 19997003543A KR 20000052743 A KR20000052743 A KR 20000052743A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- protein
- tmr
- hsv2
- gene
- vaccine
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title abstract description 37
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 118
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 81
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims abstract description 42
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 claims description 35
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 27
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 17
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 16
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 15
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 12
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 claims description 5
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 4
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 abstract description 30
- 230000037430 deletion Effects 0.000 abstract description 20
- 238000012217 deletion Methods 0.000 abstract description 20
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 9
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 abstract description 7
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 abstract description 5
- 238000009826 distribution Methods 0.000 abstract description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 abstract description 2
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 49
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 33
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 19
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 18
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 15
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 15
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 15
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 15
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 14
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 14
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 13
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 12
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 12
- 230000004044 response Effects 0.000 description 12
- LEBVLXFERQHONN-UHFFFAOYSA-N 1-butyl-N-(2,6-dimethylphenyl)piperidine-2-carboxamide Chemical compound CCCCN1CCCCC1C(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C LEBVLXFERQHONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 229960003150 bupivacaine Drugs 0.000 description 11
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 10
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 10
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 10
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 10
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 10
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 10
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 10
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 9
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 9
- -1 but not limited to Proteins 0.000 description 9
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 9
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 9
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 8
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 8
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 8
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 7
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 7
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 7
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 7
- 102100038132 Endogenous retrovirus group K member 6 Pro protein Human genes 0.000 description 6
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 6
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 6
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 6
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 6
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 6
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 6
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 5
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 5
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 5
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 5
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 4
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 4
- 230000029662 T-helper 1 type immune response Effects 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 4
- CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N creatine Chemical compound NC(=[NH2+])N(C)CC([O-])=O CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 4
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 4
- INWLQCZOYSRPNW-UHFFFAOYSA-N mepivacaine Chemical compound CN1CCCCC1C(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C INWLQCZOYSRPNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N monobenzene Natural products C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 230000029069 type 2 immune response Effects 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- 125000000027 (C1-C10) alkoxy group Chemical group 0.000 description 3
- 101000678879 Homo sapiens Atypical chemokine receptor 1 Proteins 0.000 description 3
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 3
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 3
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 3
- 150000003931 anilides Chemical class 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 3
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 3
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 229960002409 mepivacaine Drugs 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 1,4-benzoquinone Chemical compound O=C1C=CC(=O)C=C1 AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- 102100022717 Atypical chemokine receptor 1 Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 2
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 108020005350 Initiator Codon Proteins 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 102000003505 Myosin Human genes 0.000 description 2
- 108060008487 Myosin Proteins 0.000 description 2
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- BLFLLBZGZJTVJG-UHFFFAOYSA-N benzocaine Chemical compound CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 BLFLLBZGZJTVJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001558 benzoic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- VDANGULDQQJODZ-UHFFFAOYSA-N chloroprocaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1Cl VDANGULDQQJODZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002023 chloroprocaine Drugs 0.000 description 2
- 229960001747 cinchocaine Drugs 0.000 description 2
- PUFQVTATUTYEAL-UHFFFAOYSA-N cinchocaine Chemical compound C1=CC=CC2=NC(OCCCC)=CC(C(=O)NCCN(CC)CC)=C21 PUFQVTATUTYEAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZPUCINDJVBIVPJ-LJISPDSOSA-N cocaine Chemical compound O([C@H]1C[C@@H]2CC[C@@H](N2C)[C@H]1C(=O)OC)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZPUCINDJVBIVPJ-LJISPDSOSA-N 0.000 description 2
- 229960003624 creatine Drugs 0.000 description 2
- 239000006046 creatine Substances 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 2
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000017730 intein-mediated protein splicing Effects 0.000 description 2
- 239000003589 local anesthetic agent Substances 0.000 description 2
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 2
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 2
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 2
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 1
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UCTWMZQNUQWSLP-VIFPVBQESA-N (R)-adrenaline Chemical compound CNC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 UCTWMZQNUQWSLP-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229930182837 (R)-adrenaline Natural products 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- XFDUHJPVQKIXHO-UHFFFAOYSA-N 3-aminobenzoic acid Chemical class NC1=CC=CC(C(O)=O)=C1 XFDUHJPVQKIXHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzoic acid Chemical class NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SHSGDXCJYVZFTP-UHFFFAOYSA-N 4-ethoxybenzoic acid Chemical class CCOC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 SHSGDXCJYVZFTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005029 5' Flanking Region Proteins 0.000 description 1
- 241000713826 Avian leukosis virus Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 0 C=*1C=CCC=C1 Chemical compound C=*1C=CCC=C1 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- MQIXMJWNEKUAOZ-KCFXOXMASA-N Cinnamoylcocaine Natural products O=C(O[C@H]1[C@H](C(=O)OC)[C@@H]2N(C)[C@H](C1)CC2)/C=C/c1ccccc1 MQIXMJWNEKUAOZ-KCFXOXMASA-N 0.000 description 1
- NMPOSNRHZIWLLL-XUWVNRHRSA-N Cocaethylene Chemical group O([C@H]1C[C@@H]2CC[C@@H](N2C)[C@H]1C(=O)OCC)C(=O)C1=CC=CC=C1 NMPOSNRHZIWLLL-XUWVNRHRSA-N 0.000 description 1
- 101100344930 Drosophila melanogaster MED20 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010031111 EBV-encoded nuclear antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N Lidocaine Chemical compound CCN(CC)CC(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 description 1
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 1
- 241000713333 Mouse mammary tumor virus Species 0.000 description 1
- 108700001237 Nucleic Acid-Based Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YQKAVWCGQQXBGW-UHFFFAOYSA-N Piperocaine Chemical compound CC1CCCCN1CCCOC(=O)C1=CC=CC=C1 YQKAVWCGQQXBGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 description 1
- CAJIGINSTLKQMM-UHFFFAOYSA-N Propoxycaine Chemical compound CCCOC1=CC(N)=CC=C1C(=O)OCCN(CC)CC CAJIGINSTLKQMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005091 Replication Origin Proteins 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 1
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 108010006886 Vitrogen Proteins 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 150000001409 amidines Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229940051881 anilide analgesics and antipyretics Drugs 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000003622 anti-hsv Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 150000001555 benzenes Chemical class 0.000 description 1
- 229960005274 benzocaine Drugs 0.000 description 1
- VXJABHHJLXLNMP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid [2-methyl-2-(propylamino)propyl] ester Chemical compound CCCNC(C)(C)COC(=O)C1=CC=CC=C1 VXJABHHJLXLNMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940105270 carbocaine Drugs 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000030570 cellular localization Effects 0.000 description 1
- 210000002230 centromere Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 229960003920 cocaine Drugs 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005139 epinephrine Drugs 0.000 description 1
- 230000010502 episomal replication Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 101150036031 gD gene Proteins 0.000 description 1
- 229940044627 gamma-interferon Drugs 0.000 description 1
- 229960002963 ganciclovir Drugs 0.000 description 1
- IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N ganciclovir Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2COC(CO)CO IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000003840 hydrochlorides Chemical class 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- YGSFZBYOMFZJPV-UHFFFAOYSA-N isobucaine Chemical compound CC(C)CNC(C)(C)COC(=O)C1=CC=CC=C1 YGSFZBYOMFZJPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150000417 izt gene Proteins 0.000 description 1
- 231100000225 lethality Toxicity 0.000 description 1
- 229960004194 lidocaine Drugs 0.000 description 1
- 230000031852 maintenance of location in cell Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 1
- 229950007594 meprylcaine Drugs 0.000 description 1
- LJQWYEFHNLTPBZ-UHFFFAOYSA-N metabutoxycaine Chemical compound CCCCOC1=C(N)C=CC=C1C(=O)OCCN(CC)CC LJQWYEFHNLTPBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950004316 metabutoxycaine Drugs 0.000 description 1
- MQIXMJWNEKUAOZ-UYCDZTDFSA-N methyl (1s,3s,4r,5r)-8-methyl-3-[(e)-3-phenylprop-2-enoyl]oxy-8-azabicyclo[3.2.1]octane-4-carboxylate Chemical compound O([C@H]1C[C@@H]2CC[C@@H](N2C)[C@H]1C(=O)OC)C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 MQIXMJWNEKUAOZ-UYCDZTDFSA-N 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 150000004682 monohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 125000001446 muramyl group Chemical group N[C@@H](C=O)[C@@H](O[C@@H](C(=O)*)C)[C@H](O)[C@H](O)CO 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 229940075930 picrate Drugs 0.000 description 1
- OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-M picrate anion Chemical compound [O-]C1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- XIMBESZRBTVIOD-UHFFFAOYSA-N piperidine-2-carboxamide Chemical compound NC(=O)C1CCCCN1 XIMBESZRBTVIOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001045 piperocaine Drugs 0.000 description 1
- 229960001896 pramocaine Drugs 0.000 description 1
- DQKXQSGTHWVTAD-UHFFFAOYSA-N pramocaine Chemical compound C1=CC(OCCCC)=CC=C1OCCCN1CCOCC1 DQKXQSGTHWVTAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 229960001807 prilocaine Drugs 0.000 description 1
- MVFGUOIZUNYYSO-UHFFFAOYSA-N prilocaine Chemical compound CCCNC(C)C(=O)NC1=CC=CC=C1C MVFGUOIZUNYYSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 1
- 229940021993 prophylactic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229950003255 propoxycaine Drugs 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 1
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 102000055501 telomere Human genes 0.000 description 1
- 108091035539 telomere Proteins 0.000 description 1
- 210000003411 telomere Anatomy 0.000 description 1
- 229960002372 tetracaine Drugs 0.000 description 1
- GKCBAIGFKIBETG-UHFFFAOYSA-N tetracaine Chemical compound CCCCNC1=CC=C(C(=O)OCCN(C)C)C=C1 GKCBAIGFKIBETG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 150000003673 urethanes Chemical class 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- 229960004854 viral vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- HLDCSYXMVXILQC-UHFFFAOYSA-N xenysalate Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=CC(C=2C=CC=CC=2)=C1O HLDCSYXMVXILQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003434 xenysalate Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/245—Herpetoviridae, e.g. herpes simplex virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16611—Simplexvirus, e.g. human herpesvirus 1, 2
- C12N2710/16622—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16611—Simplexvirus, e.g. human herpesvirus 1, 2
- C12N2710/16634—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
예방 및 치료 백신이 기재됨. 허피스 심플렉스 바이러스 감염 예방 또는 치료백신이 기재됨. 허피스 심플렉스 바이러스 감염의 예방 및 허피스 심플렉스 바이러스 감염 개체의 치료방법 및 허피스 심플렉스 바이러스 예방 및 치료백신 제조를 위한 조성물 및 방법이 기재됨.
Description
두 허피스 심플렉스 바이러스 1(HSV1) 및 허피스 심플렉스 바이러스 2(HSV2) 모두를 포함한 허피스 심플렉스 바이러스(HSV)는 바이러스에 감염된 개체 및 집단의 비감염원 모두에 건강상의 심각한 우려를 제기한다. 증상을 완화하고 잠복 중인 바이러스가 활동성으로 되어 그 자체로 생식기 또는 구강 조직에 통증으로 나타나는 바이러스 플레어 업(flair-up)을 경감시키거나 일소하기 위한 효과적인 치료 조성물 및 방법의 동정에 수 많은 노력이 경주되어왔다. 또한, 비감염 개체의 감염 예방을 위한 백신이 개발 중에 있다. 개발중인 백신 유형 중 하나는 정제된 당단백질 D(gD)를 함유하는 아단위 백신이다. gD 단백질은 HSV-1(gD-1) 또는 HSV-2(gD-2)로부터 유도될 수 있다.
이러한 치료 조성물 및 백신은 일부 혜택을 제공할 수 있지만, HSV 감염에 대해 개체를 예방적으로 면역시키는 효과적인 조성물 및 방법과 HSV 감염 개체의 치료방법이 여전히 필요하다. 이러한 예방제 및 치료제 제조용 조성물 및 방법의 필요성이 존재한다.
본 발명은 HSV2 gD2를 포함한 분리된 허피스 심플렉스 바이러스 유전자 및 이러한 유전자의 변형형에 관한 것이다. HSV2 gD2의 변형형은 기능성 수송막(transmembrane) 영역 및/또는 기능성 시그널 펩타이드가 결여되어 있는 것들을 포함한다.
본 발명은 HSV2 gD2 또는 진핵세포에서의 발현에 필수적인 조절요소에 작동적으로 결합된 HSV gD2의 변형체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 플라스미드에 관한 것이다.
본 발명은 HSV2 gD2 또는 진핵세포에서의 발현에 필수적인 조절요소에 작동적으로 결합된 HSV gD2의 변형형을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 플라스미드를 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 HSV2 gD2에 대한 면역반응을 유도하는 방법에 관한 것이다.
본 발명은 HSV2 gD2 또는 진핵세포에서의 발현에 필수적인 조절요소에 작동적으로 결합된 HSV gD2의 변형형을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 플라스미드를 개체에 투여하는 단계를 포함하는, HSV 감염 개체의 치료방법에 관한 것이다.
본 발명은 HSV2 gD2 또는 진핵세포에서의 발현에 필수적인 조절요소에 작동적으로 결합된 HSV gD2의 변형형을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 HSV에 의한 개체 감염 예방방법에 관한 것이다.
본 발명은 HSV2 gD2 또는 진핵세포에서의 발현에 필수적인 조절요소에 작동적으로 결합된 HSV gD2의 변형형을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 DNA 백신에 관한 것이다. 일부 양태에서, 백신은 HSV2 gD2 또는 이의 변형체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 플라스미드로 구성된다. 일부 양태에서, 백신은 폴리뉴클레오타이드 기능 인핸서를 추가로 포함하는 촉진된 DNA 백신 또는 기타 촉진 조성물이다.
본 발명은 허피스 심플렉스 바이러스용 백신을 포함한 예방 및 치료백신, 허피스 심플렉스 바이러스 감염 예방 및 허피스 심플렉스 바이러스 감염 개체의 치료방법 및 허피스 심플렉스 바이러스 예방 및 치료백신 제조용 조성물과 방법에 관한 것이다.
도 1a 내지 1d는 gD 작제물를 도시한다.
도 2는 진뱅크로부터의 HSV gD에 대한 서열을 도시한다.
도 3a 내지 3e는 HSV gD2 암호화 서열에 gD2 결실이 있는 각종 삽입체 및 플라스미드를 도시한다.
도 4a 내지 4e는 면역시킨 마우스에서의 체액성 반응을 도시한다. 표시된 gD2 발현벡터로 면역시킨 마우스에서의 AntigD2 특이성 혈청 항체는 79일째 되는 날에 표준 ELISA로 측정하였다. 혈청 샘플을 1:100으로 희석하였다.
도 5는 항체 동위형 분류를 도시한다. 79일째 되는 날에 IgG1 및 IgG2a gD2-특이성 항체의 상대수준은 표준 ELISA로 측정하였다.
도 6a 내지 6e는 면역시킨 뒤 마우스 비장 세포의 림프증식성 반응을 도시한다. DNA 40 ㎍으로 면역시킨 마우스로부터의 105개의 전 비장 세포를 20 ng gD2/웰로 배양한다. 배양 4일 후에 세포를 1 μCi3H-티미딘으로 18 시간 배양한다. 이어서,3H-티미딘 흡수율의 함수로 림프증식을 측정한다.
도 7은 본 발명에 따른 작제물을 도시한다.
본 발명은 개량된 DNA 백신과 백신 프로토콜, 및 조성물과 이의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명은 개량된 DNA 안티-HSV 백신과 백신 프로토콜, 및 조성물과 이의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명은 백신 중으로 혼입시킬 수 있는 HSV2 gD2 cDNA를 제공한다. 추가로, 본 발명은 백신 중으로 혼입시킬 수 있는 변형된 HSV2 gD2에 대한 암호화 서열을 제공한다. 일부 양태에 있어서, 변형된 HSV gD2는 기능성 시그널 펩타이드가 결여되어 있다. 일부 양태에 있어서, 변형된 HSV gD2는 기능성 수송막 영역(TMR)이 결여되어 있다. 일부 양태에 있어서, 변형된 HSV gD2는 기능성 시그널 펩타이드와 기능성 수송막 영역이 결여되어 있다.
야생형 또는 완전한 길이의 작제물은 gD 폴리펩타이드를 글리코실화 장소인 소포체로 지시하는 시그널 펩타이드를 함유한다. 이는 분비경로를 통해 세포 표면으로 이동하여 C 말단 부근에 위치한 소수성 영역인 수송막 영역(TMR)을 통해 표면 막과 결합된 채로 잔류한다.
세포로부터 분비되어 항원 제공 세포에 의한 포획에 이용될 수 있고 gD에 대한 체액성 반응을 증강시키도록 TMR 결실을 작제한다. 세포성 반응 또한 증강시킬 수 있다. 본 발명자는 이러한 작제물로 전달된 세포가 그것을 배지 중으로 분비하며 세포막과 결합된 어떠한 검출가능한 gD도 존재하지 않음을 입증하였다.
세포질에 국재되고(localized) 아마도 잘못 접히도록 시그널 펩타이드 결실을 작제한다. 이러한 작업은 더 많은 gD가 프로테오좀으로 수송되어, 결과적으로 더 많은 gD 유도된 펩타이드가 MHC 클래스 1 분자와 복합체를 형성할 수 있게 되는 수단을 제공한다. 이렇게 함으로써 gD에 대한 세포성 반응이 증강된다. 두종의 시그널 펩타이드 결실형 작제물이 존재한다. 하나는 TMR을 보유하고 다른 하나는 보유하지 않는다. 두 유형의 단백질 모두 세포질에 국재될 것으로 예상되지만 이들의 소수성 차이에 따라 세포질내 분포에 차이를 보일 수도 있다.
이러한 작제물로 형질감염된 세포가 세포질로 국재되는 gD를 발현함이 본 발명자에 의해 입증되었다. 세포막과 결합된 어떠한 검출가능한 gD도 존재하지 않으며 형질감염된 세포 배지에서 어떠한 gD도 검출되지 않았다. 발현된 gD의 분자량에 의하면 비-글리코실화된 것으로 보인다.
도 1a는 HSV2 gD2 단백질의 다이어그램을 도시한다. 일부 양태에 있어서, 조절서열의 조절하에서 상기 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이 백신에 포함된다. 일부 바람직한 양태에서, 백신은 DNA 백신이다.
도 1b는 TMR이 결실된 HSV2 gD2 단백질의 다이어그램이다. 일부 양태에 있어서, 전 TMR이 결실된다. 일부 양태에 있어서, TMR 기능은 TMR 암호화 서열의 대부분을 결실시킴으로써 억제된다. 일부 양태에서, 조절서열의 조절하에 상기 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이 백신에 포함된다. 일부 바람직한 양태에서, 백신은 DNA 백신이다.
도 1c는 시그널 펩타이드가 결실된 HSV2 gD2 단백질의 다이어그램을 도시한다. 일부 양태에서, 전 시그널 펩타이드가 결실된다. 일부 양태에서, 시그널 펩타이드 기능은 시그널 펩타이드 암호화 서열의 대부분을 결실시킴으로써 억제된다. 일부 양태에서, 조절서열의 조절하에 상기 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이 백신에 포함된다. 일부 바람직한 양태에서, 백신은 DNA 백신이다.
도 1d는 TMR이 결실되고 시그널 펩타이드가 결실된 HSV2 gD2 단백질의 다이어그램을 도시한다. 일부 양태에서, 전 TMR이 결실된다. 일부 양태에서, TMR 기능은 TMR 암호화 서열의 대부분을 결실시킴으로써 억제된다. 일부 양태에서, 전 시그널 펩타이드가 결실된다. 일부 양태에서, 시그널 펩타이드 기능은 시그널 펩타이드 암호화 서열의 대부분을 결실시킴으로써 억제된다. 일부 양태에서, 조절서열의 조절하에 상기 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이 백신에 포함된다. 일부 바람직한 양태에서, 백신은 DNA 백신이다.
도 4a 내지 4e, 5 및 6a 내지 6e의 데이터는 HSV gD 단백질의 TMR을 제거함으로써, IgG2a에서 IgG1으로의 IGg 항체 동위형의 전환이 달성됨을 보여준다. 이러한 전환은 유력한 TH1에서 유력한 TH2 반응으로, 또는 세포반응에서 항체반응으로의 전환을 표시하는 대리 마커로 생각된다. 따라서, 세포에 의해 방출된 사이토킨 또한 상이할 것으로 예상된다.
통상적으로 막에 고정되어 있는 임의 단백질, 예를 들면, 기타 허피스 바이러스 외피 단백질, HSV1, HSV2, EBV, CMV, HZV의 TMR 또는 막 결합 영역을 암호화하는 서열을 결실시키거나 돌연변이시킴으로써 유사한 효과가 달성될 수 있다. 이러한 바이러스 목록은 단지 부분적인 목록에 불과하며 당해분야의 숙련인이라면 본 발명의 실행에 사용될 수 있는 기타 바이러스를 손쉽게 선택할 수 있다. 또한, 사용될 수 있는 기타 단백질로는 세포 외피 결합 단백질이 사용될 수 있다. 이와 마찬가지로, 분비경로로 들어가지만 기타 바이러스로부터의 소포체 보유 시그널과 같은 다른 막 보유 시그널을 함유하는 단백질 및 세포 외피와 결합되는 숙주 세포 단백질도 TMR 또는 기타 막 보유 시그널을 제거하거나 결실시킴으로써 분비되도록 할 수 있다. 또한, 세포 외피와 결합되어 있지 않은 세포 또는 바이러스에 의해 암호화되는 단백질은 시그널 펩타이드를 첨가하고 막 또는 세포 구획 국재화 시그널을 제거함으로써 분비되도록 디자인할 수 있다.
분비는 유력한 TH2 반응으로의 전환을 유도하면서 작제물에 하기의 변화에 의해 소망하는 경우에 달성될 수 있다:
1)TMR 또는 막 결합 영역의 제거 또는 돌연변이;
2)시그널 또는 리더 서열의 첨가;
3)막 결합영역을 첨가된 프로테아제 부위에서 클리핑하는 공-발현 w/a 프로테아제;
4)자가절단되게 될 인테인을 암호화하는 서열의 첨가. 인테닌 암호화 서열은 TMR을 유전자의 나머지와 분리시키는 절단을 일으키는 방식으로 유전자에 삽입된다. 이러한 방식으로, 면역학적 에피토프를 함유하고 단백질을 세포 외피에 고정함에 있어 TMR을 비기능성으로 만들 수 있는 TMR 단백질 발현을 유지할 것이다.
단백질의 세포내 보유를 소망하는 경우, 시그널 또는 리더 서열을 제거시킬 수 있거나, ER(소포체)에 특이적으로 표적화하기를 소망하는 경우, ER 보유 시그널 및 분비 펩타이드에 대한 서열이 첨가될 수 있다.
주된 TH1에서 주된 TH2로의 면역반응 전환능은 개선된 백신 프로토콜의 디자인을 허용한다. 일부 양태에서, 주된 및 가능하게는 1차 증강은 aTH1 반응을 산출하도록 디자인된다. 1차 증강 또는 후속 증강은 TH2 반응을 추진하도록 디자인될 수 있으며, 이에 따라 백신 투여체에 향상된 보호가 제공된다.
일부 바람직한 양태에서, 도 1a 내지 1d에 기술된 작제물이 DNA 백신에 혼입된다. DNA 백신은 본원에서 참조로 인용되는 미국 특허 제5,589,466호 및 미국 특허 제5,593,971호, 본원에서 참조로 인용되는 PCT/US90/01515, PCT/US93/02338, PCT/US93/048131, PCT/US94/00899, 및 이들 문헌에 인용된 선출원, 및 본원에서 참조로 인용되는 1996년 5월 6일 출원된 미국 특허출원 제08/642,045호에 기재되어 있다. 이들 특허출원에 기재된 전달 프로토콜 외에도, DNA를 전달하는 대안의 방법이 본원에서 참조로 인용되는 미국 특허 제4,945,050호 및 제5,036,006호에 기재되어 있다.
DNA 백신 기술을 이용하여, 유전자 발현에 필요한 조절요소에 작동적으로 결합된 도 1a 내지 1d에 나타낸 암호화 서열을 포함하는 플라스미드 DNA를 개체에 투여한다. 개체의 세포는 플라스미드 DNA를 흡수하며 암호화 서열이 발현된다. 생성된 항원은 표적이 되며 이에 대해 면역반응이 지시된다. 항원에 대한 면역반응은 개체에 HSV에 대해 예방 또는 치료 혜택을 제공한다.
DNA 백신은 네이키드 및 촉진된 백신을 포함한다. 아울러, 이들은 물질을 조직에 투여하기 위한 몇몇 상이한 장치를 포함하여 다양한 기술에 의해 투여될 수 있다. 간행문헌은 DNA 백신 기술의 일면을 기술하는 몇몇 논평기사를 싣고 있으며 기술을 이용하여 수득된 결과의 다수의 보고서 중 일부를 인용하고 있다. 각 논평기사에 인용된 각 참조문헌인 본원에서 각각 참조로 인용되는 하기의 논평기사가 DNA 백신 기술에 대해 논의하고 있다:McDonnel W.M and F.K. Askari 1996 New Engl.J.Med. 334(1)42-45; Robinson, A. 1995 Can. Med. Assoc.J. 152(10);1629-1632;Fynan, E.F. et al. 1995 Int.J.Immunopharmac. 17(2)79-83; Pardoll, D.M. and A.M. Beckerleg 1995 Immunity 3:165-169; and Spooner et al. 1995 Gene Therapy 2:173-180.
본 발명에 따르면, 도 1a 내지 1d에 기술된 삽입체의 암호화 서열이 플라스미드 중으로 삽입되고 이어서 백신 조성물에 사용된다.
본원에서 사용되는 삽입체란 용어는 비-기능성 TMR 및/또는 비-기능성 시그널 펩타이드를 포함하는 gD2 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 셔열을 포함하여 도 1a 내지 1d에 기재된 gD2 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 말한다.
본원에서 사용되는 유전자 작제물이란 용어는 진핵세포에서 삽입체의 발현에 요구되는 조절요소에 작동적으로 결합된 삽입체를 포함하는 플라스미드를 말한다. DNA 발현을 위한 조절요소는 프로모터 및 폴리아데닐화 시그널을 포함한다. 추가로, 코작영역과 같은 기타 요소도 유전자 작제물에 포함될 수 있다. 개시 및 종결 시그널은 종종 암호화 서열의 일부로 종종 생각되는 필요한 조절요소이다. 본 발명의 유전자 작제물의 암호화 서열은 기능성 개시 및 종결 시그널을 포함한다.
본 발명은 유전물질을 개체의 세포 중으로 도입시켜 HSV에 대한 면역반응을 유도하는 방법에 관한 것이다. 본 방법은 발현에 필요한 조절요소에 작동적으로 결합된 도 1a 내지 1d에 도시된 것들과 같은 삽입체에 대한 암호화 서열을 포함하는 DNA를 개체의 조직에 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명은 도 1a 내지 1d에 도시된 바와 같은 삽입체에 대한 암호화 서열을 포함하는 DNA 백신으로서 유용한 유전자 작제물을 제공한다.
일부 양태에서, 본원에서 참조로 인용되는 문헌[참조:Watson et al. 1983 Gene 26:307-312]에 의해 보고된 cDNA가 삽입체 작제에 사용된다. 서열은 본원에서 참조로 인용되는 Genebank 보존번호 K01408로 공개되어 있으며 도 2에 나타내었다. Watson 클론의 암호화 서열은 268-1449이다. 시그널 펩타이드를 암호화하는 서열은 268-342를 포함한다. TMR은 1249-1446에 의해 암호화된다.
일부 양태에서, 삽입체는 전 암호화 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 삽입체는 전 암호화 서열로 구성된다.
일부 양태에서, 삽입체는 프레임 전위 또는 결실이나 삽입이 단백질의 나머지 부분에는 영향을 미치지 않으면서 시그널 펩타이드를 비-작동성으로 만드는 것을 제외하고는 전 암호화 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 시그널 펩타이드를 암호화하는 서열이 결실되고 삽입체는 잔류 암호화 서열을 포함한다. 일부 양태에서는, 예를 들면, 단지 287-1449, 297-1449, 307-1449, 317-1449, 327-1449 및 337-1449만을 포함하는 삽입체와 같이 시그널 펩타이드를 암호화하는 완전한 서열이 결코 포함되지 않는다.
일부 양태에서, 삽입체는 프레임 전위 또는 결실이나 삽입이 단백질의 잔류부분에는 영향을 미치지 않으면서 TMR을 비-작동성으로 만드는 것을 제외하고는 전 암호화 서열을 포함한다. 일부 경우에, TMR을 암호화하는 서열이 결실되고 삽입체는 잔류 암호화 서열을 포함한다. 일부 양태에서는, 예를 들면, 단지 268-1426, 268-1406, 268-1386, 268-1366, 268-1346, 268-1326, 268-1306, 268-1286, 268-1266 및 268-1246만을 포함하는 삽입체와 같이 TMR을 암호화하는 완전한 서열이 결코 포함되지 않는다.
일부 양태에서, 삽입체는 프레임 전위 또는 결실이나 삽입이 시그널 펩타이드를 비-작동성으로 만들고 프레임 전위 또는 결실이나 삽입이 단백질의 잔류부분에 영향을 미침이 없이 TMR을 비-작동성으로 만드는 것을 제외하고는 전 암호화 서열을 포함한다. 일부 경우에, 시그널 펩타이드를 암호화하는 서열이 결실되고 삽입체는 TMR이 결실되거나 비-작동성인 잔류 암호화 서열을 포함한다. 일부 양태에서, TMR을 암호화하는 서열이 결실되고 삽입체는 시그널 펩타이드가 결실되거나 비-작동성인 잔류 암호화 서열을 포함한다. 일부 경우에, 시그널 펩타이드 및 TMR을 암호화하는 서열이 결실된다. 일부 경우에, 삽입체는 278-1426, 288-1386, 298-1346, 308-1306, 318-1266, 328-1246, 및 342-1248로 구성된다.
일부 양태에서, 삽입체는 본원에서 참조로 인용되는, 1994년 1월 26일자로 출원되어 1994년 8월 4일자 WO 94/16737로 공개된 PCT/US94/00899에 기재된 플라스미드 중으로 삽입된다. 일부 양태에서, 삽입체는 본원에서 참조로 인용되는, 1996년 5월 6일자 출원된 미국 특허출원 제08/642,045호에 기재된 플라스미드 중으로 삽입된다.
본 발명에 따라, HSV1 및 HSV2를 포함하여 HSV, 특히 HSV2에 대해 개체를 예방 및/또는 치료적으로 면역시키는 조성물 및 방법이 제공된다. 유전물질, 즉 삽입체는 표적 단백질, 즉 기능성 시그널 펩타이드 및/또는 TMR이 있거나 없는 gD2를 암호화한다. 유전물질은 개체의 세포에 의해 발현되어 면역원성 표적으로 작용하며 이에 대해 면역반응이 도출된다.
본 발명은 HSV2 gD2 단백질에 대한 면역반응 도출에 유용하다. 도출된 면역반응은 HSV1 gD1 단백질과 교차반응할 수 있다. 본 발명은 HSV2 gD2에 대한 면역반응이 HSV에 대해 보호성 면역을 제공하도록, HSV, 특히 HSV2에 대해 개체를 면역시키는 데 유용하다. 본 발명은 바이러스 단백질을 발현하는 감염세포에 대해 지향될 수 있는 HSV gD2에 대해 면역반응을 도출시킴으로써 감염개체내 HSV에 대항하는 데 유용하다.
본 발명에 따라, DNA는 조절요소에 작동적으로 결합된 비변형 또는 변형 HSV2 gD2 단백질을 암호화한다. DNA 발현을 위한 조절요소는 프로모터 및 폴리아데닐화 시그널을 포함한다. 아울러, 코작영역과 같은 기타 요소도 유전자 작제물에 포함될 수 있다.
본원에서 사용되는 "발현가능한 형태"란 용어는 개체의 세포 안에 존재할 때 삽입체가 발현되게 되도록 삽입체에 작동적으로 결합된 필수 조절요소를 함유하는 유전자 작제물을 말한다.
세포에 의해 흡수될 때, 유전자 작제물은 기능성 염색체외 분자로서 세포에 존재하거나 세포의 염색체 DNA 중으로 통합될 수 있다. DNA는 플라스미드(들) 형태로 별도의 유전물질로서 잔류하게 되는 장소인 세포 중으로 도입될 수 있다. 또한, 염색체 중으로 통합될 수 있는 선형 DNA를 세포 중으로 도입시킬 수 있다. DNA를 세포 중으로 도입시킬 때, 염색체 중으로의 DNA 통합을 촉진하는 시약이 첨가될 수 있다. 통합 촉진에 유용한 DNA 서열이 또한 DNA 분자에 포함될 수 있다. 이와 달리, RNA를 세포 중으로 투여할 수도 있다. 센트로미어, 텔로미어 및 복제기원을 포함한 선형 미니 염색체로서 유전자 작제물을 제공하는 것도 고려에 넣을 수 있다. 유전자 작제물은 세포에서 생존하는 약독화 생 미생물 또는 재조합 미생물 벡터내 유전물질의 일부로 잔류할 수 있다. 유전자 작제물은 유전물질이 세포의 염색체 중으로 통합되거나 염색체외 요소로서 잔류하게 되는 재조합 바이러스 백신의 게놈의 일부일 수 있다.
유전자 작제물은 핵산 분자의 유전자 발현에 필수적인 조절요소를 포함한다. 이러한 요소에는 프로모터, 개시코돈, 중지코돈, 및 폴리아데닐화 시그널이 포함된다. 또한, 인핸서는 종종 면역원성 표적 단백질을 암호화하는 서열의 유전자 발현에 요구된다. 이러한 요소는 목적 단백질을 암호화하는 서열에 작동적으로 결합되고 조절요소는 이들이 투여되는 개체에서 작동성이어야 함이 필수이다.
개시코돈 및 중지코돈은 일반적으로 면역원성 표적 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열의 일부인 것으로 생각된다. 그러나, 이러한 요소는 유전자 작제물이 투여되는 개체 안에서 기능성이어야 함이 필수이다. 개시 및 종결코돈은 암호화 영역이 있는 프레임에 존재하여야 한다.
사용된 프로모터 및 폴리아데닐화 시그널은 개체의 세포 안에서 기능성이어야 한다.
본 발명의 실행, 특히 인체용 유전자 백신 생산에 유용한 프로모터의 예로는 원숭이 바이러스 40(SV 40), 마우스 유방 종양 바이러스(MMTV)프로모터, 인간 면역결핍 바이러스(HIV)(예를 들면, HIV 긴 말단 반복(LTR) 프로모터), 몰로니 바이러스, ALV, 사이토메갈로바이러스(CMV)(예를 들면, CMV 즉시 초기 프로모터), 엡스타인 바 바이러스(EBV), 라우스 육종 바이러스(RSV)로부터의 프로모터 및 인간 액틴, 인간 마이오신, 인간 헤모글로빈, 인간 근육 크레아틴 및 인간 메탈로티오네인과 같이 인간 유전자로부터의 프로모터가 포함되며 이에 국한되지는 않는다.
본 발명의 실행, 특히 인체용 유전자 백신의 생산에 유용한 폴리아데닐화 시그널의 예에는 SV40 폴리아데닐화 시그널 및 LTR 폴리아데닐화 시그널이 포함되며 이에 국한되지는 않는다. 특히, pCEP4 플라스미드(Invitrogen, San Diego, CA)에 들어있는 SV40 폴리아데닐화 시그널(SV40 폴리아데닐화 시그널로 언급)이 사용된다.
DNA 발현에 요구되는 조절요소 외에도, 기타 요소가 또한 DNA 분자에 포함될 수 있다. 이러한 추가요소는 인핸서를 포함한다. 인핸서는 인간 액틴, 인간 마이오신, 인간 헤모글로빈, 인간 근육 크레아틴 및 바이러스 인핸서, 예를 들면, CMV, RSV 및 DBV로부터의 인핸서를 포함한 그룹 중에서 선택될 수 있으며 이에 국한되지는 않는다.
작제물을 염색체외 요소로 유지시키고 작제물의 다중 복제물을 세포에서 생성하도록 하기 위해 유전자 작제물에 포유류의 복제기원을 제공할 수 있다. 플라스미드 pCEP4 및 pREP4(Invitrogen, San Diego, CA)는 엡스타인 바 복제기원 및 통합없이 높은 복제수의 에피솜 복제를 일으키는 핵 항원 EBNA-1 암호화 영역을 함유한다.
특정 이유로 해서 유전자 작제물 수용 세포를 제거하고자 하는 경우 세포 파괴를 위한 표적으로 작용하는 추가요소가 첨가될 수 있다. 발현가능한 형태의 허피스 티미딘 키나제(tk) 유전자가 유전자 작제물에 포함될 수 있다. 갠시클로버 약제를 개체에 투여할 수 있으며, 그러한 약제는 tk 생성 세포의 선택적 치사를 초래할 것이며, 따라서 유전자 작제물이 있는 세포의 선택적 파괴 수단이 제공된다.
단백질 생산을 극대화하기 위하여, 작제물이 투여되는 세포에서의 유전자 발현에 잘 맞는 조절서열이 선택될 수 있다. 더욱이, 세포 안에서 가장 효율적으로 전사되는 코돈이 선택될 수 있다. 당해분야의 숙련인은 세포에서 기능을 띠는 DNA 작제물을 제조할 수 있다.
본 발명의 방법은 개체의 조직에 핵산 분자를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 바람직한 양태에서, 핵산 분자는 근육내, 비내, 복강내, 피하, 피내, 국소투여되거나 질, 직장, 자궁, 구강 및 혀밑으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 점막조직에 세척에 의해 투여된다.
일부 양태에서, 핵산 분자는 촉진제의 투여와 병행하여 세포에 투여된다. 촉진제는 또한 폴리뉴클레오타이드 기능 인핸서 또는 유전자 백신 촉진제로도 언급된다. 촉진제는 각각 본원에서 참조로 인용되는, 1993년 1월 26일자 출원된 미국 특허출원 제08/008,342호, 1993년 3월 11일자 출원된 미국 특허출원 제08/029,336호, 1993년 9월 21일자 출원된 미국 특허출원 제08/125,012호, 및 1994년 1월 26일자 출원된 국제특허 출원 PCT/US94/00899에 기재되어 있다. 아울러, 촉진제는 본원에서 참조로 인용되는 PCT 출원 PCT/US95/04071(1995년 3월 30일 출원)에도 기재되어 있다. 핵산 분자와 병행해서 투여되는 촉진제는 핵산 분자의 투여 전이나 후에 핵산 분자와의 혼합물로서 투여되거나 별도로 동시에 투여될 수 있다. 또한, 형질감염제 및/또는 복제제 및/또는 염증제로서 작용할 수 있고 촉진제와 함께 또는 촉진제 없이 함께 투여될 수 있는 기타 제제로는 생장인자, 사이토킨 및 림포킨, 예를 들면, -인터페론, 감마 인터페론, 혈소판 유도 생장인자(PDGF), GC-SF, GM-CSF, TNF, 표피 생장인자(EGF), IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10 및 B7.2와 섬유 아세포 생장인자, 계면활성제, 예를 들면, 면역-자극 복합체(ISCOMS), 프로인트 불완전 보조제, 모노포스포릴 지질 A(MPL)을 포함한 LPS 동족체, 뮤라밀 펩타이드, 퀴논 동족체 및 소낭, 예를 들면, 스쿠알렌이 포함되며, 히알루론산을 유전자 작제물과 병행투여하여 사용될 수 있다.
일부 바람직한 양태에서, 본 발명의 유전자 작제물은 국소 마취제 계열의 것들과 같이 벤조산 에스테르, 아닐라이드, 아미딘, 우레탄 및 이들의 하이드로클로라이드 염으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 촉진제와 제형되거나 이와 병행하여 투여된다.
일부 바람직한 양태에서의 촉진제는 하기 화학식의 것을 갖는 화합물일 수 있다.
화학식
Ar-R1-O-R2-R3
Ar-N-R1-R2-R3
R4-N-R5-R6
R4-O-R1-N-R7
상기식에서,
Ar은 벤젠, p-아미노벤젠, m-아미노벤젠, o-아미노벤젠, 치환 벤젠, 치환 p-아미노벤젠, 치환 m-아미노벤젠, 치환 o-아미노벤젠이고, 여기에서 아미노벤젠 화합물 중의 아미노 그룹은 아미노, C1-C5알킬아민, C1-C5디알킬아민일 수 있고 치환 화합물 중의 치환체는 할로겐, C1-C5알킬 및 C1-C5알콕시이며;
R1은 C=O이며;
R2는 측쇄 알킬을 포함한 C1-C10알킬이며;
R3는 수소, 아민, C1-C5알킬아민, C1-C5, C1-C5디알킬아민이며;
R2+ R3는 사이클릭 알킬, C1-C10알킬 치환 사이클릭 알킬, 지환족 아민, C1-C10알킬 치환 지환족 아민, 헤테로사이클, C1-C10알킬 치환 헤테로사이클(C1-C10알킬 N-치환 헤테로사이클 포함)이며;
R4는 Ar, R2또는 C1-C5알콕시, 사이클릭 알킬, C1-C10알킬 치환 사이클릭 알킬, 지환족 아민, C1-C10알킬 치환 지환족 아민, 헤테로사이클, C1-C10알킬 치환 헤테로사이클 및 C1-C10알콕시 치환 헤테로사이클(C1-C10알킬 N-치환 헤테로사이클 포함)이며;
R5는 C=NH이며;
R6는 Ar, R2또는 C1-C5알콕시, 사이클릭 알킬, C1-C10알킬 치환 사이클릭 알킬, 지환족 아민, C1-C10알킬 치환 지환족 아민, 헤테로사이클, C1-C10알킬 치환 헤테로사이클 및 C1-C10알콕시 치환 헤테로사이클(C1-C10알킬 N-치환 헤테로사이클 포함)이며;
R7은 Ar, R2또는 C1-C5알콕시, 사이클릭 알킬, C1-C10알킬 치환 사이클릭 알킬, 지환족 아민, C1-C10알킬 치환 지환족 아민, 헤테로사이클, C1-C10알킬 치환 헤테로사이클 및 C1-C10알콕시 치환 헤테로사이클(C1-C10알킬 N-치환 헤테로사이클 포함)이다.
에스테르로는 예를 들면, 피페로카인, 메프릴카인 및 이소부카인과 같은 벤조산 에스테르; 프로카인, 테트라카인, 부테타민, 프로폭시카인 및 클로로프로카인과 같은 파라-아미노벤조산 에스테르; 메타부타민 및 프리마카인을 포함한 메타-아미노벤조산 에스테르; 및 파레톡시카인과 같은 파라-에톡시벤조산 에스테르가 있다. 아닐라이드의 예로는 리도카인, 에티도카인, 메피바카인, 부피바카인, 피롤카인 및 프릴로카인을 들 수 있다. 이러한 화합물의 다른 예로는 디부카인, 벤조카인, 다이클로닌, 프라목신, 프로파라카인, 부타카인, 베녹시네이트, 카보카인, 메틸부피바카인, 부타신 피크레이트, 페나카인, 디오탄, 루카인, 인트라카인, 누페르카인, 메타부톡시카인, 피리도카인, 비페나민 및 식물에서 유도된 바이사이클릭 화합물, 예를 들면, 코카인, 시나모일코카인, 트럭실린 및 코카에틸렌 및 하이드로클로라이드와 착체를 형성한 모든 이러한 화합물이 포함된다.
바람직한 양태에서, 촉진제는 부피바카인이다. 부피바카인과 메피바카인의 차이는 부피바카인의 경우 메피바카인의 N-메틸 그룹 대신에 N-부틸 그룹을 갖는다는 점이다. 화합물은 그러한 N에 C1-C10을 가질 수 있다. 화합물은 프로카인 및 클로로프로카인과 같이 할로겐으로 치환될 수 있다. 아닐라이드가 바람직하다.
촉진제는 유전자 작제물에 앞서, 이와 동시에 또는 이 뒤에 투여된다. 촉진제 및 유전자 작제물은 동일 조성물로 제형화될 수 있다.
부피바카인-HCl은 화학명이 2-피페리딘카복사미드, 1-부틸-N-(2,6-디메틸페닐)-모노하이드로클로라이드, 모노하이드레이트이며, Astra Pharmaceutical Products Inc.(Westboro, MA) 및 Sanofi Winthrop Pharmaceuticals(New York, NY), Eastman Kodak(Rochester, NY)을 포함하여 다수의 공급처로부터 제약 용도로 광범위하게 시판되고 있다. 부피바카인은 메틸파라벤과 함께 또는 없이 및 에피네프린과 함께 또는 없이 상업적으로 제형화된다. 여타의 이러한 제형이 사용될 수 있다. 본 발명에 사용될 수 있는 0.25%, 0.5% 및 0.75%의 농도로 제약용으로 시판되고 있다. 필요에 따라, 이와 다른 농도, 특히 목적 효과를 도출하는 0.05 내지 1.0%의 것들이 제조될 수 있다. 본 발명에 따라, 부피바카인 약 250 ㎍ 내지 약 10 mg이 투여된다. 일부 양태에서, 약 250 ㎍ 내지 약 7.5 mg이 투여된다. 일부 양태에서, 약 0.05 내지 약 5.0 mg이 투여된다. 일부 양태에서, 약 0.5 내지 약 3.0 mg이 투여된다. 일부 양태에서 약 5 내지 50 ㎍이 투여된다. 예를 들면, 일부 양태에서, 등장성 제약용 담체내 0.25 내지 0.50% 부피바카인-HCl 약 50 ㎕ 내지 약 2 ml, 바람직하게는 50 내지 약 1500 ㎕, 더욱 바람직하게는 약 1 ml 및 0.1% 메틸파라벤을 바카틴 투여 전에, 이와 동시에 또는 투여 후에 동일 부위에 투여한다. 이와 유사하게, 일부 양태에서, 등장성 제약용 담체내 0.25 내지 0.50% 부피바카인-HCl 약 50 ㎕ 내지 약 2 ml, 바람직하게는 50 내지 1500 ㎕, 더욱 바람직하게는 약 1 ml를 백신 투여 전에, 이와 동시에 또는 투여 후에 투여한다. 부피바카인 및 여타 유사작용 화합물, 특히 국소 마취제 관련 계열의 화합물이 세포에 의한 유전자 작제물의 목적하는 흡수 촉진을 제공하는 농도로 투여될 수 있다.
본 발명의 일부 양태에서, 개체는 유전자 작제물 투여에 앞서 먼저 촉진제 주사를 맞는다. 즉, 예를 들면, 유전자 작제물 투여 1주 내지 10일 전까지, 개체에 먼저 촉진제를 주사한다. 일부 양태에서는 유전자 작제물 투여 약 1 내지 5일 전이나 후에, 일부 양태에서는 24 시간 전이나 후에 개체에 촉진제를 주사한다. 이와 달리, 일단 사용되면, 촉진제는 유전자 작제물 투여 수분 전이나 후에 또는 동시 투여된다. 따라서, 촉진제와 유전자 작제물을 배합하여 단일 약학 조성물을 형성시킬 수도 있다.
일부 양태에서, 유전자 작제물은 촉진제 없이 투여, 즉 유전자 작제물이 촉진제 투여와 병행하여 투여되지 않는 투여 프로토콜을 이용하여 촉진제가 없는 제형으로 투여된다.
허피스 심플렉스 2 당단백질 D(gD)은 바이러스 외피 및 감염세포 원형질막과 결합되어 있는 당단백질을 암호화한다. gD 암호화된 시그널 펩타이드는 분비경로로 들어가서, 글리코실화되고 접혀지게 되는 장소인 소포체의 관강 중으로의 초기 폴리펩타이드 전좌를 지시한다. 단백질은 수송막 영역 또는 TMR로 언급되는 소수성 C 말단 영역을 통해 원형질막과 결합된 채로 잔류한다.
허피스 심플렉스 2 당단백질 D 유전자를 발현하는 플라스미드에 의한 DNA 면역화는 몇몇 동물 모델에서 체액성 및 세포성 면역반응을 유도하는 것으로 나타났다. 마우스에서, 초기 gD-발현 플라스미드에 의해 발생된 면역반응은 주로 TH1 또는 세포성 반응인 것으로 밝혀졌다. 본 발명자는 gD의 유력한 분비체가 백신의 플라스미드 성분에 의해 발현되도록 유전자를 변형시키면 면역화 중에 TH2 또는 체액성 반응이 유도될 수 있음을 입증하였다. 암호화된 단백질은 TMR을 암호화하는 최종 66개 아미노산의 결실에서만 천연 gD2 단백질과 상이하다. 본 발명자는 TMR-결실 단백질을 암호화하도록 공학처리된 작제물이 형질감염 세포의 배지 중으로 우세하게 분비되는 단백질을 발현함을 입증하였다. 소량의 단백질만이 세포-결합된 채로 잔류한다. 고수준의 가용성 항원이 TH2 반응을 자극하는 것으로 나타난 반면에, 저용량의 가용성 항원은 IL-12의 생성을 자극하여 TH1 반응을 이끈다[참조문헌: Abbas, A.K., Murphy, K.M., Sher, A. (1996). Functional diversity of helper T lymphocytes. Nature 381: 787-793]. 항원 분비를 촉진하도록 디자인된 작제물은 TH2 면역반응을 촉진할 것이다.
따라서, 본 발명은 목적하는 TH1 또는 TH2 면역반응을 유도할 항원 단백질을 발현할 수 있는 공학처리된 폴리뉴클레오타이드 작제물, 이러한 공학처리 폴리뉴클레오타이드 작제물을 함유하고 발현할 수 있는 플라스미드 또는 기타 벡터, 및 목적하는 TH1 또는 TH2 면역반응을 달성하기 위해 이러한 작제물로 포유동물을 면역시키는 방법에 관한 것이다. 하나의 바람직한 양태에서, 본 발명은 암호화된 단백질이 세포로부터 분비되어, TH2 반응을 할 수 있도록 유전자 또는 유전자 그룹을 공학처리하는 방법에 관한 것이다. 다른 바람직한 양태에서, 본 발명은 포유동물을 TH1 반응을 유도하는 단백질을 암호화하는 플라스미드로 적어도 한번 먼저 면역시킨 다음 반응이 TH2 반응쪽으로 재촉될 수 있도록 단백질의 효율적인 분비를 허용하는 플라스미드 시스템으로 면역시키는 면역방법에 관한 것이다. 일부 적용에서, 본 발명은 포유동물을 TH2 반응을 유도하는 폴리뉴클레오타이드 백신으로 먼저 면역시킨 다음 TH1 반응을 재촉하는 백신으로 증강시키는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 다른 양태에서, 두 TH1 및 TH2 반응은 이러한 두 반응 모두를 재촉하는 하나 이상의 백신 조성물로 동시 면역시킴으로써 달성될 수 있다.
본 발명의 작제물은 다음과 같이 공학처리된다:
하나의 바람직한 양태에서, 변형된 작제물은 외세포 구획 중으로의 발현된 항원 단백질의 증진된 분비를 유도하여, 증진된 TH2 또는 체액성 면역반응을 일으키는 TMR 결실을 함유한다. 하나의 바람직한 양태에서, 변형된 작제물은 세포질 구획 중으로의 세포내 국재를 유도하여, 증진된 TH1 또는 세포성 면역반응을 일으키는 시그널 또는 리더 펩타이드 결실을 함유하다. 다른 바람직한 양태에서, 시그널 및 TMR이 모두 결실되며, 이에 따라 세포질 구획으로 국재되어, 증진된 TH1 또는 세포성 면역반응을 초래하는 면역원 단백질이 발현된다.
세포 결합 단백질을 분비시킬 수 있는 방안의 목록을 하기에 기재한다. 우선 분비경로로 돌입하지 않는 세포 결합 단백질에 대해 단백질의 아미노 말단에서 시그널 펩타이드를 공학처리하는 것이 필요하다. 이러한 작업은 이러한 단백질 중 일부의 효율적인 분비에 필요한 전부일 수 있지만 이러한 단백질의 나머지는 추가 변형이 필요하게 된다. 예를 들면, 정상적으로 분비되지 않는 일부 단백질은 막과 상호작용하는 영역을 함유할 수 있고 이러한 상호작용은 단백질의 분비를 억제할 수 있다. 이와 달리, 이들 단백질은 단백질을 핵과 같은 특정 아세포 구획에 국재시키는 모티프를 함유할 수 있으며 이러한 서열이 단백질의 효율적인 분비를 방지할 수 있음이 가능하다. 따라서, 결실 또는 돌연변이에 의해 이들 영역을 파괴하는 것이 필요할 것이다. 다수의 경우, 이러한 서열은 이미 공지되어 있을 것이며, 다른 경우에서는 공지 영역과의 상동성 및 국재화 모티프가 서열 스캐닝에 의해 동정될 수 있다. 다른 경우에서는, 비동정 억제서열을 도태에 기초한 돌연변이 유도법을 통해 지도작성하여 파괴할 수 있다.
정상적으로 분비경로로 돌입하되 분비경로내 아구획으로 단백질을 국재화하는 막 보유 영역(들)을 통해 세포와 결합된 채로 잔류하는 단백질의 경우, 우선적으로 이들 영역을 제거하는 것이 필수이다. 이들은 결실 또는 돌연변이를 통해 제거시킬 수 있다. 일부 경우, 이들 단백질에 의해 암호화된 천연 시그널 펩타이드는 단백질을 ER 중으로 전좌시키는 데 비효율적일 수 있다. 이러한 경우에, 이종 시그널 펩타이드를 천연 시그널 펩타이드 대신 사용할 수 있다. 이종 시그널 펩타이드의 예로는 HSV2 gD 유전자에 의해 암호화된 것이 될 것이다.
서열의 결실은 작제물 자체내 서열의 결실 또는 돌연변이를 통해 수행될 수 있다(도 7). 이와 달리, 억제 서열이 뚜렷한 영역으로 존재하고(즉, 단백질 전반에 걸쳐 마블링되지 않음) 이들이 단백질의 C 말단에 국재되며, 이러한 서열을 면역원성을 위해 작제물에 보유시키는 것이 요망되는 일부 경우, 작제물은 이러한 서열이 분비될 단백질의 일부에 공유결합되지 않는 방식으로 공학처리될 수 있다. 이러한 과정은 분비될 단백질 부분과 분비 억제성 서열이 달린 단백질 부분 사이에 있는 프로테아제 부위를 암호화시킴으로써 수행될 수 있다. 이러한 프로테아제 부위는 백신 단백질을 발현하는 세포에 내생성인 프로테아제에 대한 절단부위가 될 것이다. 또한, 프로테아제는 암호화된 백신 단백질로서 동일 작제물상에 또는 백신 플라스미드와 함께 주사되는 별도의 플라스미드상에 트랜스로 제공될 수 있다. 이러한 경우에, 절단은 백신 플라스미드를 발현하는 세포내에서 자연적으로 생기는 프로테아제에 의존하지 않을 것이다. 분리시킬 단백질 영역 사이에 폴리오 3c 프로테아제(2) 또는 인테인(3)과 같은 자가 절단성 프로테아제를 포함시키는 것도 가능하다. 프로테아제법에 의해 영역을 제거시킬 수 없는 일부 경우가 존재한다. 예를 들면, 아세포 국재 영역은 먼저 전구체 폴리펩타이드(단백질 분해 전)의 일부로서 발현되어 사실상 ER 중으로의 초기 폴리펩타이드 전좌를 방해할 수 있다. 이러한 경우, 영역은 결실 또는 부위-지향성 돌연변이를 통해 제거시켜야 할 것이다. 또한, 목적하는 단백질 분해반응이 ER에서 발생할지를 확인하여야 할 것이다.
표적화된 분비에 대한 다른 고려사항은 세포외 구획안에서 단백질의 안정성이다. 단백질이 불안정하면, 융합 단백질과 같이 다른 펩타이드 또는 단백질과 융합시킴으로써 안정성을 증가시키고 항원성을 유지시키는 것이 가능할 수 있다. 일부 경우에, 융합 단백질은 혈청 안정 입자로 조립될 수 있다.
본 발명은 또한, 조립되어 입자를 형성하는 융합 단백질을 발현하도록 공학처리된 폴리뉴클레오타이드 작제물, 및 이러한 폴리뉴클레오타이드 작제물로 면역시키는 방법에 관한 것이다. 이러한 단백질은 안정할 뿐만 아니라, APC(항원 부여 세포)에 의해 우선적으로 흡수되는 크기이며, 이들은 두 MHC 클래스 1과 클래스 2 분자 모두에 의해 제공되는 방식으로 프로세싱된다.
우세하게 분비되는 단백질을 암호화하도록 변형된 본 발명의 작제물은 바이러스, 기생충 및 세균 감염증에 대한 예방백신에서와 같이, TH2 또는 체액성 반응이 요구되는 다수의 항원에 적절할 것이다. 발현되도록 선택되는 단백질은 바이러스 입자, 기생충, 세균 또는 포자를 구성하는 항원 단백질일 것이다. 그러나, 감염성 유기체 자체의 일부는 아니지만, 특별히 감염 세포막과 결합되어 있는 단백질은, 이들 항원에 대한 체액성 반응이 보체 경로 또는 ADCC 경로를 통해 세포사를 유도할 수 있으므로 발현용 표적이 될 수 있다.
실시예 1
삽입체 TMR은 HSV2 gD2 5′플랭킹 서열의 37개 뉴클레오타이드와 HSV gD2 리더 펩타이드 암호화 서열 및 성숙 단백질의 최초 302개 아미노산으로 구성되어 있다. 66개 아미노산이 카복시 말단에서 결실되어 있다. 작제물은 3′HSV gD2 플랭킹 서열의 1개 뉴클레오타이드를 갖는다.
삽입체를 벡터 APL-400-004에 클로닝시켜 도 3a에 도시된 APL-400-004 TMR을 생성시킨다.
일부 양태에서, 2차 작제물인 APL-400-024 TMR을 제조한다. 이 플라스미드는 벡터 APL-400-004에 카나마이신 내성 유전자 대신, 1996년 5월 6일자 출원된 미국 특허출원 제08/642,045호의 키메릭 카나마이신 내성 작제물을 갖는 점을 제외하고는 APL-400-004 TMR과 동일하다.
실시예 2
삽입체 L-1은 ATG, 이어서 26번 아미노산으로 시작하는 성숙 단백질 암호화 영역에 대한 암호화 서열이 뒤따르는, HSV2 gD2의 ATG를 플랭킹하는 진정한 5′서열의 9 bp로 구성되어 있다. 리더 펩타이드를 포함하는 최초 25개 아미노산에 대한 암호화 서열이 결실되어 있다. 삽입체는 또한 중지코돈을 플랭킹하는 3′서열의 대략 550 bp를 포함한다.
삽입체를 벡터 APL-400-004에 클로닝시켜 도 3b에 도시된 APL-400-004 L-1을 생성시키며 이는 추가로 TA 벡터(PCR II, In Vitrogen)로부터의 진정한 플랭킹(5′) 서열의 39 bp를 포함한다.
일부 양태에서, 2차 작제물인 APL-400-024 L-1을 제조한다. 이 플라스미드는 벡터 APL-400-004에 카나마이신 내성 유전자 대신, 1996년 5월 6일자로 출원된 미국 특허출원 제08/642,045호의 키메릭 카나마이신 내성 작제물을 갖는 점을 제외하고는 APL-400-004 L-1과 동일하다.
실시예 3
삽입체 L-II은 ATG, 이어서 26번 아미노산으로 시작하는 성숙 단백질 암호화 영역에 대한 암호화 서열이 뒤따르는, HSV2 gD2의 ATG를 플랭킹하는 진정한 5′서열의 41 bp로 구성되어 있다. 리더 펩타이드를 포함하는 최초 25개 아미노산에 대한 암호화 서열이 결실되어 있다. 삽입체는 또한 중지코돈 뒤에 오는 3′ 서열의 대략 550 bp를 포함한다.
삽입체를 벡터 APL-400-004에 클로닝시켜 도 3c에 도시된 APL-400-004 L-II을 생성시킨다.
일부 양태에서, 2차 작제물인 APL-400-024 L-II을 제조한다. 이 플라스미드는 벡터 APL-400-004에 카나마이신 내성 유전자 대신, 1996년 5월 6일자로 출원된 미국 특허출원 제08/642,045호의 키메릭 카나마이신 내성 작제물을 갖는 점을 제외하고는 APL-400-004 L-II과 동일하다.
실시예 4
삽입체 L-3은 ATG, 코작 부위를 보존하기 위하여 ATG 뒤에 6 bp, 이어서 26번 아미노산으로 시작하는 성숙 단백질 암호화 영역에 대한 암호화 서열이 뒤따르는, HSV2 gD2의 ATG를 플랭킹하는 진정한 5′서열의 41 bp로 구성되어 있다. 리더 펩타이드를 포함하는 최초 25개 아미노산에 대한 암호화 서열이 결실되어 있다. 삽입체는 또한 중지코돈 뒤에 오는 3′서열의 대략 550 bp를 포함한다.
삽입체를 벡터 APL-400-004에 클로닝시켜 도 3d에 도시된 APL-400-004 L-3을 생성시킨다.
일부 양태에서, 2차 작제물인 APL-400-024 L-3을 제조한다. 이 플라스미드는 벡터 APL-400-004에 카나마이신 내성 유전자 대신, 1996년 5월 6일자로 출원된 미국 특허출원 제08/642,045호의 키메릭 카나마이신 내성 작제물을 갖는 점을 제외하고는 APL-400-004 L-3과 동일하다.
실시예 5
삽입체 L-3TMR은 ATG, 코작 부위를 보존하기 위하여 ATG 뒤에 6 bp, 이어서 26번 아미노산으로 시작하는 성숙 단백질 암호화 영역에 대한 암호화 서열이 뒤따르는, HSV2 gD2의 ATG를 플랭킹하는 진정한 5′서열의 41 bp로 구성되어 있다. 리더 펩타이드를 포함하는 최초 25개 아미노산에 대한 암호화 서열 및 수송막 영역을 포함하는 성숙 단백질의 카복시 말단에서 66개 아미노산에 대한 암호화 서열이 결실되어 있다. 삽입체는 또한 중지코돈 뒤에 3′서열의 1 bp를 포함한다.
삽입체를 벡터 APL-400-004에 클로닝시켜 도 3e에 도시된 APL-400-004 L-3TMR을 생성시킨다.
일부 양태에서, 2차 작제물인 APL-400-024 L-3TMR을 제조한다. 이 플라스미드는 벡터 APL-400-004에 카나마이신 내성 유전자 대신, 1996년 5월 6일자로 출원된 미국 특허출원 제08/642,045호의 키메릭 카나마이신 내성 작제물을 갖는 점을 제외하고는 APL-400-004 L-3TMR과 동일하다.
실시예 6
마우스를 0일 및 14일째 되는 날에 20 ㎍ DNA/0.4% 부피바카인으로 면역시킨다(I.M.). 마우스를 14일 및 42일째 되는 날에 채혈하여 혈청을 안티-gD 항체의 존재에 대해 혈청 분석한다. TMR 결실체로 며역시킨 마우스는 완전한 길이의 HSV gD 작제물로 면역시킨 마우스에서 보다 더 높은 체액성 반응을 증가시키는 것으로 보인다. 시그널 펩타이드 결실체 중 어느 하나로 면역시킨 마우스에서는 어떠한 혈청-전환도 검출되지 않았다.
Claims (5)
- 기능성 수송막 영역 및/또는 기능성 시그널 펩타이드가 결여된 HSV2 gD2 단백질을 암호화하는 분리된 허피스 심플렉스 바이러스 HSV2 gD2 유전자.
- 유전자가 진핵세포에서의 발현에 필수적인 조절요소에 작동적으로 결합되는 제 1 항에 따른 허피스 심플렉스 바이러스 HSV2 gD2 유전자를 포함하는 플라스미드.
- 제 2 항에 따른 플라스미드를 개체에 투여하는 단계를 포함하는, HSV2 gD2에 대한 면역반응을 개체에서 유도하는 방법.
- 제 2 항에 따른 플라스미드를 개체에 투여하는 단계를 포함하는, HSV 감염 개체의 치료방법.
- 제 2 항에 따른 플라스미드를 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 개체의 HSV 감염 예방방법.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US2875496P | 1996-10-23 | 1996-10-23 | |
| US60/028,754 | 1996-10-23 | ||
| US5320697P | 1997-07-21 | 1997-07-21 | |
| US60/053,206 | 1997-07-21 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20000052743A true KR20000052743A (ko) | 2000-08-25 |
| KR100564268B1 KR100564268B1 (ko) | 2006-03-27 |
Family
ID=26704047
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1019997003543A KR100564268B1 (ko) | 1996-10-23 | 1997-10-23 | 백신 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5958895A (ko) |
| EP (1) | EP0958373A4 (ko) |
| JP (1) | JP2002514056A (ko) |
| KR (1) | KR100564268B1 (ko) |
| AU (1) | AU734443C (ko) |
| BR (1) | BR9712366A (ko) |
| CA (1) | CA2269754A1 (ko) |
| WO (1) | WO1998017820A1 (ko) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100369237B1 (ko) * | 2000-09-14 | 2003-01-24 | 김원중 | 음식물 쓰레기와 축산폐수의 혼합처리 방법 |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6828415B2 (en) * | 1993-02-19 | 2004-12-07 | Zentaris Gmbh | Oligopeptide lyophilisate, their preparation and use |
| AU1606100A (en) * | 1998-11-04 | 2000-05-22 | Pharmadigm, Inc. | Compounds and methods for genetic immunization |
| AU2150900A (en) | 1998-11-16 | 2000-06-05 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Hiv-specific t-cell induction |
| WO2000044410A2 (en) * | 1999-01-28 | 2000-08-03 | Stichting Biomedical Primate Research Centre | Composition and method for obtaining specific immunisation against one or more antigens using different recombinant vectors |
| WO2001077157A2 (en) | 2000-04-06 | 2001-10-18 | University Of Iowa Research Foundation | FULL-LENGTH gb virus c (HEPATITIS G VIRUS) RNA TRANSCRIPTS ARE INFECTIOUS IN PRIMARY CD4 POSITIVE T CELLS AND METHODS OF TREATING HIV |
| AU8467201A (en) * | 2000-07-27 | 2002-02-13 | Univ Pennsylvania | Compositions for and methods of using herpes simplex virus glycoprotein d to suppress immune responses |
| GB0023008D0 (en) * | 2000-09-20 | 2000-11-01 | Glaxo Group Ltd | Improvements in vaccination |
| US6867000B2 (en) * | 2000-12-07 | 2005-03-15 | Wyeth Holdings Corporation | Method of enhancing immune responses to herpes |
| CA2484044A1 (en) * | 2002-03-19 | 2003-10-02 | Powdermed Limited | Imidazoquinolineamines as adjuvants in hiv dna vaccination |
| DK2011510T3 (da) * | 2002-07-18 | 2011-03-28 | Univ Washington | Farmaceutiske sammensætninger indeholdende immunologisk aktive Herpes simplex-virus(HSV) proteinfragmenter |
| AU2003287216A1 (en) * | 2002-10-24 | 2004-05-13 | Sarah George | Gb virus c and methods of treating viral infections |
| EP2368570A3 (en) | 2006-01-18 | 2012-05-02 | University Of Chicago | Compositions and methods related to staphylococcal bacterium proteins |
| EP2341929B1 (en) | 2008-10-06 | 2017-01-25 | University Of Chicago | Compositions and methods related to bacterial emp proteins |
| SI3281947T1 (sl) | 2009-04-03 | 2020-07-31 | The University Of Chicago | Sestave in metode v zvezi z variantami proteina A (SPA) |
| WO2011127032A1 (en) | 2010-04-05 | 2011-10-13 | University Of Chicago | Compositions and methods related to protein a (spa) antibodies as an enhancer of immune response |
| EP2413950A4 (en) | 2009-04-03 | 2013-05-01 | Univ Washington | ANTIGENIC HSV-2 PEPTIDE AND METHOD OF USE THEREOF |
| CN106924728B (zh) | 2009-05-22 | 2021-02-05 | 健诺西生物科学公司 | 针对ⅱ型单纯疱疹病毒的疫苗：诱发免疫应答的组合物和方法 |
| EP2588120B1 (en) | 2010-07-02 | 2017-11-15 | The University of Chicago | Compositions and methods related to protein a (spa) variants |
| WO2012034067A1 (en) | 2010-09-09 | 2012-03-15 | The University Of Chicago | Methods and compositions involving protective staphylococcal antigens |
| WO2012074881A2 (en) | 2010-11-24 | 2012-06-07 | Genocea Biosciences, Inc. | Vaccines against herpes simplex virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response |
| US8945588B2 (en) | 2011-05-06 | 2015-02-03 | The University Of Chicago | Methods and compositions involving protective staphylococcal antigens, such as EBH polypeptides |
| CA2885693C (en) | 2011-11-23 | 2020-07-28 | Genocea Biosciences, Inc. | Nucleic acid vaccines against herpes simplex virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response |
| ES2806945T3 (es) | 2012-04-26 | 2021-02-19 | Univ Chicago | Antígenos de coagulasa estafilocócica y métodos para su uso |
| WO2018064232A1 (en) | 2016-09-28 | 2018-04-05 | Genocea Biosciences, Inc. | Methods and compositions for treating herpes |
| WO2019183500A1 (en) | 2018-03-23 | 2019-09-26 | Hung Chiung Yu | Coccidioides antigens and methods of their use |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5612041A (en) * | 1984-07-17 | 1997-03-18 | Chiron Corporation | Recombinant herpes simplex gD vaccine |
| US5585264A (en) * | 1988-07-15 | 1996-12-17 | University Of Saskatchewan | Nucleotide sequences encoding recombinant bovine herpesvirus type-1 GI, GIII and GIV polypeptides |
| NZ262582A (en) * | 1993-01-26 | 1997-10-24 | David B Weiner | Compositions and methods for delivery of genetic material |
| US5654174A (en) * | 1995-07-07 | 1997-08-05 | Competitive Technologies, Inc. | Herpes simplex virus glycoprotein D variants |
| CA2267645A1 (en) * | 1996-10-01 | 1998-04-09 | Merck & Co., Inc. | A polynucleotide herpes virus vaccine |
-
1997
- 1997-10-23 EP EP97946338A patent/EP0958373A4/en not_active Withdrawn
- 1997-10-23 BR BR9712366A patent/BR9712366A/pt not_active Application Discontinuation
- 1997-10-23 KR KR1019997003543A patent/KR100564268B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1997-10-23 JP JP51972698A patent/JP2002514056A/ja not_active Ceased
- 1997-10-23 CA CA 2269754 patent/CA2269754A1/en not_active Abandoned
- 1997-10-23 US US08/956,998 patent/US5958895A/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-10-23 WO PCT/US1997/019542 patent/WO1998017820A1/en active IP Right Grant
- 1997-10-23 AU AU51530/98A patent/AU734443C/en not_active Ceased
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100369237B1 (ko) * | 2000-09-14 | 2003-01-24 | 김원중 | 음식물 쓰레기와 축산폐수의 혼합처리 방법 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1998017820A1 (en) | 1998-04-30 |
| JP2002514056A (ja) | 2002-05-14 |
| CA2269754A1 (en) | 1998-04-30 |
| US5958895A (en) | 1999-09-28 |
| AU5153098A (en) | 1998-05-15 |
| KR100564268B1 (ko) | 2006-03-27 |
| AU734443C (en) | 2005-04-14 |
| BR9712366A (pt) | 1999-08-31 |
| AU734443B2 (en) | 2001-06-14 |
| EP0958373A1 (en) | 1999-11-24 |
| EP0958373A4 (en) | 2001-11-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR100564268B1 (ko) | 백신 | |
| González Armas et al. | DNA immunization confers protection against murine cytomegalovirus infection | |
| CA1341435C (en) | Recombinant pox virus for immunization against tumor-associated antigens | |
| EP3247722B1 (en) | Cytomegalovirus antigens and uses thereof | |
| Chow et al. | Improvement of hepatitis B virus DNA vaccines by plasmids coexpressing hepatitis B surface antigen and interleukin-2 | |
| Lewis et al. | Altering the cellular location of an antigen expressed by a DNA-based vaccine modulates the immune response | |
| JP4838259B2 (ja) | 組み換えウイルスベクターを含む多価ワクチン | |
| US8470560B2 (en) | CR-2 binding peptide P28 as molecular adjuvant for DNA vaccines | |
| Gierynska et al. | Induction of CD8 T-cell-specific systemic and mucosal immunity against herpes simplex virus with CpG-peptide complexes | |
| JPH11500014A (ja) | ウイルス調製物、ベクター、免疫原、及びワクチン | |
| KR19990022654A (ko) | 보호 면역 반응을 증강시키는 방법 | |
| WO1999061068A1 (en) | Anti-prostate cancer vaccines, and methods of making, using and evaluating the same | |
| EP0237546A1 (en) | Pseudorabies virus deletion mutants and vaccines containing same | |
| JP2005333990A (ja) | ｇｐ３５０／２２０非スプライシング変異体 | |
| CN116217736A (zh) | 用于避免感染与治疗远程新冠肺炎之针对SARS-CoV-2变体的疫苗组成物 | |
| EP1238086B1 (en) | Vaccine for enhancing immune responses to herpes simplex virus | |
| AU708460B2 (en) | A polynucleotide herpes virus vaccine | |
| EP1274851B1 (en) | A nucleic acid construct encoding a processing component derived from the n-terminal region of the hepatitis virus orf2, and an antigenic polypeptide | |
| AU700104B2 (en) | Prolactin as a vaccine adjuvant | |
| EP0328390B1 (en) | Peptide treatment of refractory infectious diseases | |
| Paolazzi et al. | Rabies vaccine: Developments employing molecular biology methods | |
| CN1324139C (zh) | 疫苗 | |
| WO2000025820A1 (en) | Compounds and methods for genetic immunization | |
| KR20030089291A (ko) | 고발현 효과를 갖는 ｄｎａ 백신용 벡터 및 이를 이용하여만든 간염 백신 | |
| against Lung | Novel Chlamydia muridarum T Cell Antigens |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant | ||
| LAPS | Lapse due to unpaid annual fee |