KR20000015417A - 두툽상어의 막단백질 형태-기질 메탈로프로테인아제를 코딩하는cdna - Google Patents

Abstract

본 발명은 유전자 재조합 기술을 이용하여 어류의 막단백질 형태-기질 메탈로프로테인아제(membrane-type matrix metalloproteinase, 이하, 'MT-MMP'라 함) cDNA를 대장균 또는 효모 발현벡터에 삽입한 다음, 이를 미생물 내에서 대량으로 생산시켜 저렴한 비용으로 이를 실용화하기 위하여, 두툽상어의 MT-MMP 유전자를 클로닝하고 염기서열을 결정한 두툽상어의 MT-MMP 유전자 cDNA에 관한 것이다. 본 발명은 두툽상어의 MT-MMP를 코딩하는 cDNA를 클로닝하고 염기서열을 제공함으로써, 유전자 재조합 기술을 이용하여 대장균 또는 효모 발현 벡터에 삽입한 다음, 이를 미생물내에서 대량으로 생산시켜 저렴한 비용으로 이를 실용화할 수 있는 바, 산업적으로 상당한 유용성을 지닌다. 또한, 본 발명은 전기의 산업적 측면 이외에도 유전학적 종의 동정(genetic stock identification)을 기초로 하여 진화적 발생계통을 연구하는 생물진화학, 생체 내 생리적 상관관계를 연구하는 생리학 등 많은 분야에서 활용될 수 있는 기초적인 자료를 제공할 뿐만 아니라, 국내생물자원의 보존과 활용, 국내산업 보호육성에도 중요한 산업적, 사회적 가치를 지닌다.

Description

두툽상어의 막단백질 형태-기질 메탈로프로테인아제를 코딩하는 ｃＤＮＡ

본 발명은 두툽상어의 막단백질 형태-기질 메탈로프로테인아제를 코딩하는 cDNA에 관한 것이다. 좀 더 구체적으로, 본 발명은 유전자 재조합 기술을 이용하여 어류의 막단백질 형태-기질 메탈로프로테인아제(membrane-type matrix metalloproteinase, 이하, 'MT-MMP'라 함) cDNA를 대장균 또는 효모 발현벡터에 삽입한 다음, 이를 미생물 내에서 대량으로 생산시켜 저렴한 비용으로 이를 실용화하기 위하여, 두툽상어의 MT-MMP 유전자를 클로닝하고 염기서열을 결정한 두툽상어의 MT-MMP 유전자 cDNA에 관한 것이다.

두툽상어(Scylliorhinus torazame)는 분류학적으로 악상어목(Order Lamnifomes) 두툽상어과(Family Scyliorhinidae) 두툽상어속(Genus Scylliorhinus)에 속하는 어류로서 우리나라 중부이남 및 일본 북해도 이남, 동중국해에 분포하고 있다. 본 종은 저지성 어류로서 연안에서 대륙붕 가장자리까지의 밑바닥에 주로 서식하고 있으며, 황갈색 바탕에 갈색의 가죽띠 모양의 무늬를 가지는 형태적 특성을 띤다. 이러한 상어는 다른 종들에 비해 자체 암발생률이 낮으며, 특히 흉상어의 연골은 오래전부터 종양, 관절염 등을 치료하는 민간요법으로 이용되어 오고 있었으나, 이것이 효과가 있는지에 대해서는 과학적으로 정확히 밝혀진 것이 없었다. 또한, 최근에는 상어의 조직에서 분리된 단백질 추출물이 혈관신생(angiogenesis)을 차단함으로써, 종양의 성장을 억제한다는 보고가 있으나(참조: Oikawa T., Ashino-Fuse H., Shimamura M., Koide U., and Iwaguchi T., Cancer Lett., 51(3):181-186(1990)), 이와 관련된 특정 유전자, 특히 산업적 실용성이 높은 특정 유전자의 분리 및 분석은 전무한 실정이다.

한편, 혈관신생(angiogenesis)은 종양의 성장 및 전이 등과 같은 병적인 과정을 유도하기도 하고, 수정란의 착상, 배의 발생과 상처 치유 등 정상적 생리 활동에서도 중요한 역할을 담당한다. 이러한 혈관신생은 혈관내피세포의 증식 및 이동을 유도하는 활성인자와 저해인자의 균형에 의해 조절받으며, 이러한 인자들로는 a/b FGF(acidic/basic fibroblast growth factor), VEGF(vascular endothelial growth factor), MMP(matrix metalloproteinase), 트롬보스폰딘-1(thrombospondin-1), 안지오스타틴(angiostatin), 메탈로프로테인아제의 조직 억제인자(tissue inhibitor of metalloproteinase, 이하, 'TIMP'라 함) 등이 있다(참조: Hanahan D., and Folkman J. Cell, 86(3):353-364(1996)). 특히, 기질 메탈로프로테인아제(MMP: matrix metalloproteinase, 이하, 'MMP'라 함)는 콜라겐(collagen)이나 프로테오글리칸(proteoglycan)과 같은 세포 외 기질 구성성분을 분해하는데 관여하는 효소로서, 정상적으로는 척추동물의 배발생과정과 조직의 재배열에 중요한 역할을 하는 효소군이다. 그러나, 최근 이들 효소군은 암 전이과정 중 악성 암세포가 이웃하는 세포들로부터 떨어져 나와 주변의 기질을 파괴하고 이동하여 혈관기저세포 안으로 침투할 때, 세포 외 기질성분들을 파괴하여 암세포의 전이가 용이하도록 하는데 결정적인 역할을 하는 것으로 알려져 있다(참조:Sato H., and Seiki M., J. Biochem., 119(2):209-215(1996)). MMP는 선구효소(zymogen)로 효소활성이 없는 상태로 만들어져 N말단 부위(약 10kDa)가 제거되면서 활성을 갖게되며, TIMP에 의해 그 효소활성이 저해됨으로서 혈관신생의 균형을 조절하게 된다.

지금까지 많은 종류의 MMP가 주로 수용성 형태(soluble form)로 클로닝되었는데, 기질에 따라 콜라겐아제(collagenase), 겔라틴아제(gelatinase), 스트로멜리신(stromelysin)으로 구분할 수 있으며, 최근에는 막단백질 형태(membrane-type)로써 세포표면에 위치하는 Mt-MMP가 클로닝 되었고, 이들은 프로겔라틴아제 A(progelatinase A: MMP-2)의 활성화를 매개하여 조직 재배열에 관여한다고 보고되고 있다(참조: Apte S.S., Fukai N., Beier D.R., and Olsen B.R., J. Biol. Chem., 272(41):25511-25517(1997)).

MT-MMP의 정상적인 발현은 발생초기 기관형성(organogenesis) 과정 중 비정상적으로 일어날 수 있는 프로겔라틴아제 A의 활성저해를 재활성화시킴으로써 정상적인 발생을 유도할 수 있으며, 지혈 및 혈전생성시 소용되는 불용성 섬유소 및 세포 외 기질을 분해함으로써, 혈전색전성 질환(throboembolic disease)의 이환율과 사망률을 감소시킬 수 있다. 또한, 전술한 상어조직 추출물의 혈관신생 억제능을 MT-MMP와의 균형 조절을 통해 상승시키는 효과를 나타낼 수 있다. 이러한 MT-MMP를 포함한 MMP들의 유전자는 주로 인간, 쥐, 닭과 같은 척추동물에서 클로닝되어 그 기능이 연구되고 있으나, 어류에서는 MT-MMP의 존재여부 및 그 실용적인 연구결과가 전혀 보고된 바가 없었다.

산업적 측면 이외에도 어류의 MT-MMP 유전자는 유전학적 종의 동정(genetic stock identification)을 기초로 하여 진화적 발생계통을 연구하는 생물진화학, 생체내 생리적 상관관계를 연구하는 생리학 등 많은 분야에서 활용될 수 있다.

따라서, 산업적으로 유용한 MT-MMP를 생산할 수 있을 뿐만 아니라, 새로운 유전자원으로서 학문적 측면의 기초적인 자료를 제공하고, 국내생물자원의 보존과 활용 및 국내산업 보호육성에도 중요한 가치를 제공할 수 있는 어류의 MT-MMP 유전자에 관한 연구가 필요하게 되었다.

이에, 본 발명자들은 유전자 재조합 기술을 이용하여 어류의 MT-MMP cDNA를 대장균 또는 효모 발현벡터에 삽입한 다음, 이를 미생물 내에서 대량으로 생산시켜 저렴한 비용으로 이를 실용화하기 위하여 예의 연구 노력한 결과, 두툽상어의 MT-MMP를 클로닝하여 MT-MMP의 cDNA 염기서열을 결정하고, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

결국, 본 발명의 목적은 두툽상어의 MT-MMP cDNA의 염기서열을 제공하는 것이다.

이하에서는, 본 발명의 두툽상어의 막단백질 형태-기질 메탈로프로테인아제 cDNA의 분리 및 특성에 대하여 구체적으로 설명하고자 한다.

본 발명의 두툽상어의 막단백질 형태-기질 메탈로프로테인아제를 코딩하는 cDNA를 얻기 위해 두툽상어의 뇌로부터 총세포 RNA를 분리한 다음, 역전사효소-중합효소 연쇄반응을 이용하여 MT-MMP 유전자의 3' 부위를 증폭시켜 클로닝하고, 5' RACE(rapid amplification of cDNA ends) 방법을 이용하여 MT-MMP 유전자의 5' 부위를 증폭시켜 클로닝하였다. 이때 사용되는 프라이머들은 인간, 쥐, 닭의 MT-MMP 유전자의 염기서열 중 진화적으로 매우 보존성이 놓은 부위의 서열로 제작된 GSP1(서열번호 3), GSP2(서열번호 1) 및 GSP3(서열번호 2) 프라이머이다. 전기의 각 클로닝의 염기서열을 확인한 다음, 각 염기서열로부터 결정되어 제작된 프라이머 MMP-NT(서열번호 5) 및 MMP-CT(서열번호 6)를 이용하여 중합효소 연쇄반응을 실행함으로써, 두툽상어의 MT-MMP 유전자의 전체길이 cDNA를 증폭시키고, 이 산물을 T-벡터에 클로닝한 후, 염기서열을 결정하였다. 그 결과, 두툽상어의 MT3-MMP를 코딩하는 cDNA로부터 유추되는 아미노산은 613개의 길이로서, N 말단의 28개 아미노산 잔기가 신호 펩티드(signal peptide)로 존재함을 알 수 있었다.

이하, 실시예에 의하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

실시예 1: 두툽상어 뇌에서부터 총세포 RNA의 분리

두툽상어 뇌로부터 총세포 RNA를 분리하기 위하여 TRI ZOL 시약(GIBCO BRL, U.S.A.)을 사용하였다. 두툽상어로부터 뇌를 분리하여 5㎖의 TRI ZOL 시약내에서 균질화한 다음, 상온에서 5분간 방치하고, 1㎖의 클로로포름을 첨가하여 15초간 강하게 흔들어 준 후, 상온에서 2 내지 3분 방치하였다. 4℃, 15,000rpm에서 15분간 원심분리한 후, 상층을 새 튜브용기에 옮기고, 여기에 0.5㎖ 이소프로필 알코올을 첨가한 다음, 10분간 상온에서 방치하고, 4℃, 15,000rpm에서 원심분리하였다. 이때, 튜브바닥에 침전된 총세포 RNA 침천물을 75% 에탄올로 간단하게 세척하고, 상온에서 5 내지 10분간 건조한 다음, 적정량의 정제수에 용해시켜 총세포 RNA를 수득하였다.

실시예 2: MT-MMP의 3' 말단부위의 원거리 역전사-중합효소 연쇄반응(long distance RT-PCR)

두툽상어 MT-MMP의 3' 부위를 클로닝하기 위하여 역전사-중합효소 연쇄반응(reverse transcriptase-polymerase chain reaction) 방법을 사용하였다: 실시예 1에서 수득한 총세포 RNA 5㎍, 올리고(dT)_12-181㎕ 및 정제수를 12㎕로 혼합한 다음, 70℃에서 10분간 방치하고 얼음에서 2분간 식혀주었다. 4㎕의 10X 1차 가닥 완충액(first strand buffer), 1㎕의 10mM dNTP 혼합액, 2㎕의 0.1M DTT, 1㎕의 역전사효소(SuperScript II RT, GIBCO BRL, U.S.A.)를 전기 RNA 혼합물에 첨가한 다음, 42℃, 50분간 반응시키고 얼음에 방치하였다. 다음 1㎕의 RNase H를 첨가한 후 37℃, 10분간 반응시켜 RNA를 제거하고 간단히 원심분리 후, 두툽상어 뇌 cDNA와 중합효소 연쇄반응액 (10X 중합효소 연쇄반응 완충용액, 2.5mM MgCl₂, 1μM GSP2(서열번호 1), 1μM GSP3(서열번호 2), dNTP 각각 200μM, 2.5U Taq DNA 중합효소)를 혼합하고, 94℃에서 1분, 60℃에서 1분, 72℃에서 3분의 순서로 30회의 원거리 중합효소 연쇄반응(long-distance PCR)을 수행하였다. 전기 중합효소 연쇄반응으로 증폭된 약 1400bp DNA 단편은 전기영동 후 겔로부터 분리한 다음 T-벡터에 클로닝하고 염기서열을 확인하였다.

실시예 3: 두툽상어 MT-MMP의 5' 말단 부위의 5' RACE(rapid amplification of cDNA ends)

두툽상어 MT-MMP의 5' 말단 부위를 클로닝하기 위하여 5' RACE System Version 2.0(GIBCO BRL, U.S.A.)을 사용하였다: 실시예 1에서 수득한 총세포 RNA 1㎍, 10μM의 GSP1(서열번호 3)과 정제수를 15.5㎕로 혼합한 다음, 70℃, 10분간 방치하고 얼음에서 1분간 냉각시켰다. 2.5㎕의 10X PCR buffer, 2.5㎕의 25mM MgCl₂, 1㎕의 10mM dNTP 혼합액, 2.5㎕의 0.1M DTT, 1㎕의 역전사효소(SuperScript II RT: GIBCO BRL, U.S.A.)를 RNA 시료에 첨가한 다음, 42℃, 50분간 반응시키고, 70℃, 15분간 방치하였다. 전기 혼합물에 1㎕의 RNase H 혼합액을 첨가한 후, 37℃, 30분간 반응시켜 RNA를 제거하고, 간단히 원심분리하여 -20℃에 보관해두었다. 1차 가닥 (first strand) cDNA 반응액에 120㎕의 결합 용액(binding solution: 6M NaI)을 첨가하고, cDNA/NaI 혼합용액을 스핀 카트리지(GlassMax Spin Cartridge: GIBCO BRL, U.S.A.)에 옮겨 15,000rpm에서 20초간 원심분리하였다. 0.4㎖의 세척완충액을 스핀 카트리지에 첨가하여 15,000rpm에서 20초간 원심분리하는 과정을 총 4번 반복하고, 400㎕의 70% 에탄올을 스핀카트리지에 첨가하여 15,000rpm에서 20초간 원심분리하는 과정을 2번 반복하였다. 그런 다음, 스핀 카트리지에 50㎕1의 증류수를 첨가하여 15,000rpm에서 20초간 원심분리하여 cDNA를 용출하였다. 분리된 cDNA의 3' 말단에 여러 개의 dCTP를 첨가하기 위하여 TdT를 이용하였다. 6.5㎕의 정제수, 5.0㎕의 5X 테일링 완충액(tailing buffer), 2.5㎕의 2mM dCTP, 10.0㎕의 스핀 카트리지로부터 순수정제된 cDNA가 혼합된 반응액을 94℃, 3분간 반응시킨 후 얼음에 1분간 방치하고, 1㎕의 TdT를 첨가하여 37℃, 10분간 반응한다. 이어 65℃, 10분간 방치하여 TdT의 활성을 제거하였다. 두툽상어 뇌 cDNA와 PCR 반응액(10X 중합효소 연쇄반응 완충용액, 1uM GSP1(서열번호 3), 1μM AUAP(abridged universal amplification primer: 서열번호 4), 각 dNTP 200μM, 1.25U Taq DNA 중합효소)을 혼합하고, 94℃에서 1분, 55℃에서 1분, 72℃에서 1분의 순서로 30회의 중합효소 연쇄반응을 수행하였다. 5' RACE로 증폭된 DNA 단편들은 전기영동 후 겔로부터 분리한 다음, T-벡터에 클로닝하고, 염기서열을 확인하였다.

실시예 4: 두툽상어의 MT3-MMP 유전자 cDNA제작 및 염기서열 분석

두툽상어 뇌의 mRNA를 cDNA로 역전사한 다음, 실시예 2의 5' 말단과 실시예 3의 3' 말단의 염기서열을 기초로 제작한 MMP-NT(서열번호 5)과 MMP-CT(서열번호 6)를 이용하여, 두툽상어의 MT3-MMP 유전자 전체길이 cDNA(1877bp)를 중합효소 연쇄반응으로 증폭하였다. 증폭된 DNA 단편은 전기영동한 후, 겔로부터 분리하여 T-벡터에 클로닝하고, 염기서열을 결정하였다(서열번호 7). 염기서열의 분석 결과, 본 발명의 두툽상어의 MT3-MMP 유전자 cDNA로부터 유추되는 아미노산은 613개의 길이로서, N 말단의 28개 아미노산 잔기가 신호 펩티드(signal peptide)로 존재함을 알 수 있었다.

이상에서 상세히 설명하였듯이, 본 발명은 두툽상어의 MT-MMP를 코딩하는 cDNA를 클로닝하고 염기서열을 제공함으로써, 유전자 재조합 기술을 이용하여 대장균 또는 효모 발현 벡터에 삽입한 다음 이를 미생물내에서 대량으로 생산시켜 저렴한 비용으로 이를 실용화할 수 있는 바, 산업적으로 상당한 유용성을 지닌다. 또한, 본 발명은 전기의 산업적 측면 이외에도 유전학적 종의 동정(genetic stock identification)을 기초로 하여 진화적 발생계통을 연구하는 생물진화학, 생체 내 생리적 상관관계를 연구하는 생리학 등 많은 분야에서 활용될 수 있는 기초적인 자료를 제공할 뿐만 아니라, 국내생물자원의 보존과 활용, 국내산업 보호육성에도 중요한 산업적, 사회적 가치를 지닌다.

<서열 목록>

서열번호: 1

서열의 길이: 25

서열의 타입: 핵산

쇄의 수: 1본쇄

토폴로지: 선형

분자의 타입: 기타 핵산 합성DNA

CGTGCCTTTG ATGTGTGGCA GAATG 25

서열번호: 2

서열의 길이: 24

서열의 타입: 핵산

쇄의 수: 1본쇄

토폴로지: 선형

분자의 타입: 기타 핵산 합성DNA

TCACACCCAC TCTTGCATAG AGCG 24

서열번호: 3

서열의 길이: 22

서열의 타입: 핵산

쇄의 수: 1본쇄

토폴로지: 선형

분자의 타입: 기타 핵산 합성DNA

CGCATTAACT GGGCAGAAGT GG 22

서열번호: 4

서열의 길이: 20

서열의 타입: 핵산

쇄의 수: 1본쇄

토폴로지: 선형

분자의 타입: 기타 핵산 합성DNA

GGCCACGCGT CGACTAGTAC 20

서열번호: 5

서열의 길이: 24

서열의 타입: 핵산

쇄의 수: 1본쇄

토폴로지: 선형

분자의 타입: 기타 핵산 합성DNA

AGCGGCTCTT TCTCTGAAAG ATGG 24

서열번호: 6

서열의 길이: 24

서열의 타입: 핵산

쇄의 수: 1본쇄

토폴로지: 선형

분자의 타입: 기타 핵산 합성DNA

TCACACCCAC TCTTGCATAG AGCG 24

서열번호: 7

서열의 길이: 1874

서열의 타입: 핵산

쇄의 수: 2본쇄

토폴로지: 선형

분자의 타입: cDNA to genomic RNA

기원

생물명: 두툽상어(Scylliorhinus torazame)

서열의 특징

특징을 나타내는 기호: sig peptide

존재 위치: 33..116

특징을 결정하는 방법: S

TGCATACAAA TGAGCGGCTC TTTCTCTGAA AG ATG GCA AAC GGG TTC ACA CAG CCT 56

Met Ala Asn Gly Phe Thr Gln Pro

TTA GCC ACA TTG TAC AAA GGA AAA CAA CTT GCA TTT GTA TAT TCC GGT GCG 107

Leu Ala Thr Leu Tyr Lys Gly Lys Gln Leu Ala Phe Val Tyr Ser Gly Ala

TTT TAT TTG CAA ACC TTG CTT TGG ATT ATT TGT TCC GTT TGT GGC GAG GAG 158

Phe Tyr Leu Gln Thr Leu Leu Trp Ile Ile Cys Ser Val Cys Gly Glu Glu

CAG CCC TTC AGC GTG GAG ATA TGG TTA CAG AAG TAC GGC TAT CTT CAA GCT 209

Gln Pro Phe Ser Val Glu Ile Trp Leu Gln Lys Tyr Gly Tyr Leu Gln Ala

AGT GAA CCC AGA ATG TCA GTA TTG CGC TCT TCA CAG TCC ATG CAT TCA GCT 260

Ser Glu Pro Arg Met Ser Val Leu Arg Ser Ser Gln Ser Met His Ser Ala

GTA GCT GCT ATG CAG CAA TTT TAT GGA ATT AAA GTT ACG GGG ACT TTG GAT 311

Val Ala Ala Met Gln Gln Phe Tyr Gly Ile Lys Val Thr Gly Thr Leu Asp

GAA AAC ACA ATA GAC TGG ATG AAG AAG CCC CGC TGT GGT GTG CCC GAC CAG 362

Glu Asn Thr Ile Asp Trp Met Lys Lys Pro Arg Cys Gly Val Pro Asp Gln

TTT GGC AGC AGC ATT AGA TTT AGT GTT AGA AGA AAG CGT TAC GCA TTA ACT 413

Phe Gly Ser Ser Ile Arg Phe Ser Val Arg Arg Lys Arg Tyr Ala Leu Thr

GGG CAG AAG TGG CAT CAT AAA CAT ATC ACC TAC AGC ATT AAG AAC TTC ACT 464

Gly Gln Lys Trp His His Lys His Ile Thr Tyr Ser Ile Lys Asn Phe Thr

CCT AAA GTA GGA AAA TTA GAA ACT CAC AGA GCG ATA CGC CGT GCC TTT GAT 515

Pro Lys Val Gly Lys Leu Glu Thr His Arg Ala Ile Arg Arg Ala Phe Asp

GTG TGG CAG AAT GTA ACA CCC CTG ACA TTT GAA GAA ATA CCA TAC GTG GAG 566

Val Trp Gln Asn Val Thr Pro Leu Thr Phe Glu Glu Ile Pro Tyr Val Glu

TTG GAA AAC AAG AAG AGG GAT GTG GAC ATT ACA ATT ATG TTT GCT TCT GGT 617

Leu Glu Asn Lys Lys Arg Asp Val Asp Ile Thr Ile Met Phe Ala Ser Gly

TTC CAT GGT GAC AGC TCA CCC TTT GAT GGA GAG GGG GGC TTC CTT GCA CAT 668

Phe His Gly Asp Ser Ser Pro Phe Asp Gly Glu Gly Gly Phe Leu Ala His

GCT TAT TTC CCT GGA CCT GGC ATT GGG GGT GAC ACG CAC TTC GAC TCC GAT 719

Ala Tyr Phe Pro Gly Pro Gly Ile Gly Gly Asp Thr His Phe Asp Ser Asp

GAG CCT TGG ACA TTA GGA AAC CCA AAT CAT GAT GGT AAT GAT CTA TTC CTG 770

Glu Pro Trp Thr Leu Gly Asn Pro Asn His Asp Gly Asn Asp Leu Phe Leu

GTT GCC GCC CAC GAA CTC GGC CAT GCA CTA GGC TTG GAA CAC TCC AAT GAT 821

Val Ala Ala His Glu Leu Gly His Ala Leu Gly Leu Glu His Ser Asn Asp

CCC AGT GCA ATC ATG GCC CCA TTT TAT CAA TAT ATG GAT ACA GAA AAC TTC 872

Pro Ser Ala Ile Met Ala Pro Phe Tyr Gln Tyr Met Asp Thr Glu Asn Phe

CAG CTT CCT CAA GAT GAC TTA CAA GGC ATC CAG AAG ATA TAT GGT CCA CCA 923

Gln Leu Pro Gln Asp Asp Leu Gln Gly Ile Gln Lys Ile Tyr Gly Pro Pro

GAT AAG ATT GCA CAT CCT ACA AAA CCC TTA CCT ACA GTA CCA CCA CAT CGT 974

Asp Lys Ile Ala His Pro Thr Lys Pro Leu Pro Thr Val Pro Pro His Arg

TTT AAT CCA CCA TCC GAT CCA AGA AAG CCT AGC AGA CAA CCA AGA CCT CCT 1025

Phe Asn Pro Pro Ser Asp Pro Arg Lys Pro Ser Arg Gln Pro Arg Pro Pro

CGA CCA CCG ACT AGG GAT AAA CCT TCC TTT CCA GGT GCC AAG CCC AAC ATC 1076

Arg Pro Pro Thr Arg Asp Lys Pro Ser Phe Pro Gly Ala Lys Pro Asn Ile

TGT GAT GGA AAT TTC AAC ACT CTG GCT ATC TTA CGG GGT GAA ATG TTT GTT 1127

Cys Asp Gly Asn Phe Asn Thr Leu Ala Ile Leu Arg Gly Glu Met Phe Val

TTT AAG GAC CAT TGG TTT TGG CGT GTT CGA AAC AAT AGA GTT TTG GAT GGT 1178

Phe Lys Asp His Trp Phe Trp Arg Val Arg Asn Asn Arg Val Leu Asp Gly

TAC CCC ATG CAA ATT GCT TAT TTC TGG AGG GGC TTG CCT TCA AAA CAT TTA 1229

Tyr Pro Met Gln Ile Ala Tyr Phe Trp Arg Gly Leu Pro Ser Lys His Leu

TCC AGT CTA GGA ACG GCC GAC GGA AAG TTT GTG TTC CTT AAA GGG AGT AAG 1280

Ser Ser Leu Gly Thr Ala Asp Gly Lys Phe Val Phe Leu Lys Gly Ser Lys

TAC TGG GTC TTC AAG GAA GCT ACG TTG GAG TTA GGA TAT CCT CAG AAT GTA 1331

Tyr Trp Val Phe Lys Glu Ala Thr Leu Glu Leu Gly Tyr Pro Gln Asn Val

GTG GAA CTC GGA AGC GGA GTG CCT TCT CAG GGT ATT GAT TCA GCA GTG TGG 1382

Val Glu Leu Gly Ser Gly Val Pro Ser Gln Gly Ile Asp Ser Ala Val Trp

TGG GAA GAT GTT GGG AAA ACC TAC TTC TTC AAA GGA GAC AGG TAC TGG AGG 1433

Trp Glu Asp Val Gly Lys Thr Tyr Phe Phe Lys Gly Asp Arg Tyr Trp Arg

TAC AAT GAA GAA ACA CAT GTT GTA GGC AGT GGT TAT CCC AAA TCC ATT TCA 1484

Tyr Asn Glu Glu Thr His Val Val Gly Ser Gly Tyr Pro Lys Ser Ile Ser

ATA TGG AAA GGA ATT CCC AAG TCT CCA CAA GGG GCC TTT GTC AGC AAA GAA 1535

Ile Trp Lys Gly Ile Pro Lys Ser Pro Gln Gly Ala Phe Val Ser Lys Glu

AGT GGC TAT ACA TTT TTT TAC AAA GGA AAG GAG TAC TGG AAA TTC AAT AAT 1586

Ser Gly Tyr Thr Phe Phe Tyr Lys Gly Lys Glu Tyr Trp Lys Phe Asn Asn

CAT AAA CTC AGG GTG GAG CCT AGC TAT CCA AGG TCA ATA CTT AAA GAA TGG 1637

His Lys Leu Arg Val Glu Pro Ser Tyr Pro Arg Ser Ile Leu Lys Glu Trp

ATG GGA TGT GAC CGA ACT AAG ACT GGA GAC AAG GAC AGG CAC GAT ACT CAA 1688

Met Gly Cys Asp Arg Thr Lys Thr Gly Asp Lys Asp Arg His Asp Thr Gln

GAT GAT GTT GAC ATC GTG ATT AAA ATT GAT AAC ACT TTG AGC ACT GTG AAT 1739

Asp Asp Val Asp Ile Val Ile Lys Ile Asp Asn Thr Leu Ser Thr Val Asn

GCC ATC GCC ATT GTT ATC CCC TGT ACG CTG GCC TTG TGC TTT CTG GTG TTG 1790

Ala Ile Ala Ile Val Ile Pro Cys Thr Leu Ala Leu Cys Phe Leu Val Leu

ATT TAC ACA GTG GTT CAA TTT AAG AGG AAA GGA ACG CCA CGC CAC ATA TTA 1841

Ile Tyr Thr Val Val Gln Phe Lys Arg Lys Gly Thr Pro Arg His Ile Leu

TAC AGT AAA CGC TCT ATG CAA GAG TGG GTG TGA 1874

Tyr Ser Lys Arg Ser Met Gln Glu Trp Val

Claims (1)

1. 두툽상어의 막단백질 형태-기질 메탈로프로테인아제를 코딩하는 서열번호 7에 개시된 염기서열을 가지는 cDNA.