KR20000010880A

KR20000010880A - 종양에 대한 숙주 방어 기작의 자극

Info

Publication number: KR20000010880A
Application number: KR1019980709024A
Authority: KR
Inventors: 마이클 제라드 토베이; 토마스 제임스 카이도
Original assignee: 레이스 로버트; 파마 퍼시픽 프로프라이어테리 리미티드
Priority date: 1996-05-09
Filing date: 1997-05-05
Publication date: 2000-02-25
Also published as: EP0898478B1; AR007058A1; ES2260794T3; JP3806446B2; DE69735201T2; BR9709066A; WO1997041886A1; DE69735201D1; NZ332688A; KR100399501B1; AUPN976596A0; CN1218409A; EP0898478A4; ZA973988B; AU2710997A; EP0956040A1; KR20000010882A; BR9709223A; AU2399297A; EP0898478A1

Abstract

구강 점막 접촉에 의해 치료 효과량의 인터페론을 포유동물에게 투여하므로써 포유동물에서 신생물 질환을 치료하는 방법. 투여된 인터페론의 양은 비경구 투여할 때 병적 반응을 유도하는 양보다 적다.

Description

종양에 대한 숙주 방어 기작의 자극

α-인터페론은 모양(毛樣)세포성백혈병, 만성 골수성 백혈병, 저급 림프종, 피부 T-세포 림프종을 비롯한 다양한 혈액학적 악성종양 및 고형 종양, 예컨대, 신장세포 암종, 흑색종, 카르시노이드 종양 및 AIDS-관련된 카포시(Kaposi) 육종 등의 치료에 널리 사용된다[구터만(Gutterman J. U.), 문헌 "Proc. Natl. Acad. Sci. USA", 1994 91:1198-1205 참조]. 비경구적 주사로 투여된, 인터페론-α(IFN-α)의 높은 투여량, 종종 수 십 밀리온 단위의 투여량 수준에서 항종양 효과가 통상적으로 나타난다.

인터페론-α는 β 및 ω 인터페론을 또한 포함하는 I형 인터페론이다. 정맥내 주사, 피하 주사, 근육내 주사, 국소적 주사 및 병변내 주사를 비롯한 다수의 투여 경로가 I형 인터페론의 투여에 통상 사용되지만, 경구 투여는 일반적으로 사용되지 않았는데, 이는 인터페론이 단백질분해 효소에 의해 불활성화될 것으로 생각되고, 위장관내에서 네이티브(native) 형태로는 잘 흡수되지 않는 단백질이기 때문이다. 실제로, 경구 투여후 혈액에서 인터페론을 검출하려는 다수의 연구가 실패하였다[칸텔(Cantell) 및 피핼라(Phyhala), 문헌 "J. Gen. Virol." 1973 20:97-104; 윌스(Wills) 등, 문헌 "J. IFN Res.", 1984 4:399-409; 길슨(Gilson) 등, 문헌 "J. IFN Res.", 1985 5:403-408 참조].

많은 바이러스성 증상, 특히 인플루엔자의 치료시 비측 스프레이 또는 경구 액체 제형물로서 낮은 용량으로 투여된 인터페론의 효능에 대한 일화가 담긴 보고들이 많이 있다. 일련의 특허원에는 소에서 감염성 라이노기관염("선적열병")의 치료, 및 고양이의 백혈병 치료; 백신의 효능 향상을 위한 기타 질병의 치료; 식품 이용 효율의 개선; 및 소의 타일레리아증(theileriosis)의 방지를 위해 이종성 기원의 인터페론을 낮은 투여량으로 경구 투여하여 사용함이 기재되어 있다. 미국 특허 제 4,462,985호, 오스트레일리아 특허 제 608519호, 오스트레일리아 특허 제 583332호 및 미국 특허 제 5,215,741호를 각각 참조한다. 또한, 미국 특허 제 5,017,371호에는 암의 화학치료법 또는 방사선치료법의 부작용을 치료하기 위해 상기 방식으로 인터페론을 사용함이 개시되어 잇다. 이들 특허 명세서에서, 사용된 인터페론은 체중 1파운드당 0.01 내지 5IU의 투여량으로, 포스페이트 완충된 염수에 용해되어 투여된, 칸텔(Cantell)의 방법에 의해 제조된 인간 인터페론-α였다. 이러한 명세서에는 구강인두 점막에, 바람직하게는 구강 점막과 장기간 접촉되도록 채택된 형태로 투여된 인터페론의 이러한 낮은 투여량은 암을 비롯한 매우 다양한 증상의 치료에 효과적일 수 있는 것으로 제안되어 있는데, 선적열병, 고양이 백혈병, 개의 파라보바이러스 타일레리아증 이외의 기타 증상에 대한 실험적 증거는 일화에 불과하다. 특히, 인간 암을 위한 임의의 동물 모델에서 이러한 치료가 적절하게 조절된 시도는 존재하지 않는다.

대조적으로, 본원에 개시된 발명은 신생물질 질환을 치료하기 위해 구강점막으로 투여된 인터페론의 효능을 측정하기 위한 동물 모델에서 첫 번째로 억제된 실험을 기초로 하고 있다.

발명의 요약

본 발명은 치료 효과량의 인터페론을 구강점막 접촉을 통해 포유동물에게 투여함으로써 포유동물에서 신생물 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 투여된 인터페론의 양은 비경구적으로 투여될 때 병적 반응을 유발시키는 투여량보다 적은 양이다. 특히, 본 발명은 다발성골수종, 모양세포성백혈병, 만성 골수성 백혈병, 저급 림프종, 피부 T세포 림프종, 암종, 경부암, 카포시 육종을 비롯한 육종, 신장 종양, 신장세포암, 간세포암, 비인두 암종을 비롯한 암, 혈액학적 악성종양, 결장직장암, 신경교아세포종, 후두 유두종, 폐암, 결장암, 악성 흑색종, 및 악성 뇌종양을 비롯한 뇌종양을 치료하는 방법을 제공한다. 한 실시태양에서, 이 방법은 비-바이러스성 병인의 종양을 치료하는데 일반적으로 적용될 수 있다.

구강점막 투여는 인터페론의 효과적인 투여량을 단일 투여량으로 투여함을 포함할 수 있거나, 또는 효과 투여량을 단일 투여량의 면역자극에 해당하는 면역자극을 이끌어내기에 충분하도록 일정 기간에 걸쳐 보다 작은 투여량으로 다수회 투여할 수 있다. 이와 유사하게, 인터페론의 투여량은 단일 투여량의 효과에 해당하는 효과를 유도하기에 충분하도록 일정 기간에 걸쳐 연속적으로 투여될 수 있다.

본 발명의 방법은 선택된 투여량이 본원에서 정의한 바와 같이 비경구적 병적 반응을 유도하지 않는 투여량이거나, 또는 비경구 투여될 때 병적 반응을 유도하는 양보다 적은 양인 것을 조건으로 하여, 약 1500 IU, 바람직하게는 5000 IU 내지 약 20 × 10⁶IU, 더욱 바람직하게는 약 1 x 10⁴IU 내지 약 20×10⁶IU, 가장 바람직하게는 약 1 x 10⁴IU 내지 약 1 × 10⁶IU을 투여하므로써 실행할 수 있다. 이러한 투여량 범위를 일반적으로 인간에서 동질 인터페론 α로 부른다. 또다른 유형의 인터페론의 경우, 병적 반응을 유도하는 투여량은 인간에서 동질 인터페론 α에 의해 유도된 것과 상이할 수 있다. 특정 유형의 인터페론으로 환자를 치료하는 의사는 치료할 환자에게 적합한 투여량 범위를 쉽게 확인할 수 있을 것이다.

또다른 실시태양에서, 본 발명은 치료 효과량의 하나 이상의 인터페론을 포함하는 구강점막 투여용 약학 조성물을 제공한다. 이 조성물은 용액, 정제, 로렌지, 젤, 시럽, 페이스트 또는 방출량이 조절되는 구강점막 전달 시스템으로서 제공될 수 있다. 선택적으로, 이 조성물은 완충제, 안정화제, 농후제, 흡수 및 점도 증진제 등을 함유할 수 있다.

한 실시태양에서, 약학 조성물은 약 1500 IU, 바람직하게는 5000 IU 내지 약 20 × 10⁶IU, 더욱 바람직하게는 약 1 x 10⁴IU 내지 약 20×10⁶IU, 가장 바람직하게는 약 1 x 10⁴IU 내지 약 1 × 10⁶IU의 인터페론을 포함하는 단위 투여형으로 제공된다.

본 방법은 유일한 치료적 접근 방안으로서, 또는 방사선치료법, 화학치료법에 대한 보조방법으로서, 또는 인터류킨-2, 12 또는 15 등의 기타 사이토킨과 함께, 또는 IFN-유도물질과 함께 실행될 수 있다.

본 방법은 바람직하게는 α, β, γ, ω 및 콘센서스 인터페론으로부터 선택된 I형 또는 II형 IFN을 사용하여 수행되고, 재조합 IFN-α를 사용하여 수행되는 것이 가장 바람직하다.

본 발명은 인터페론을 구강점막을 통해 투여함으로써 숙주 포유동물에서 병적 증상에 대한 숙주 방어 기작을 자극하는 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 신생물질 질환을 치료하는 방법에 적용될 수 있다.

본 발명은 단지 참고할 목적으로 하기 정의 및 실시예를 사용하여 상세히 기술될 것이다. 본원에 언급된 모든 특허 및 간행물은 참고로 본원에 명백히 인용되어 있다.

정의

본원에서 "인터페론"이란 통상 α, β, γ 및 ω, 및 이들의 혼합물(콘센서스 서열을 포함함)로 통상 표시되는 인터페론을 포함하는 I형 또는 II형 인터페론을 지칭한다. 인터페론은 다양한 상업적인 원료로부터 입수할 수 있고, 다양한 전조(前兆)의 치료에 대해 인가되어 있다. 인터페론은 천연 원료로부터 얻어질 수 있지만, 재조합 생성물이 바람직하다. 본 발명에 있어서, "인터페론"이란 용어는 인터페론 활성을 갖는 폴리펩타이드 또는 이들의 단편, 및 예컨대 인터페론의 생물학적 활성의 성질에는 영향을 주지 않으면서 안정성을 향상시키기 위해 서열 변화가 도입된 인터페론의 키메라 또는 돌연변이 형태(예컨대, 미국 특허 제 5,582,824호, 제 5,593,667호 및 제 5,594,107호에 개시된 형태)를 또한 포함한다.

선택적으로, 인터페론은 인터페론 합성 및 방출의 유도물질과 공동으로 투여될 수 있다. 유도물질은 인터페론과 함께 투여될 수 있거나, 또는 별도로 투여될 수 있다. 인터페론의 유도물질로는, 예컨대 폴리I:C 등의 폴리누클레오티드가 포함되고, 바람직하게는 경구적으로 투여가능한 저분자량의 인터페론 유도물질이 사용된다. 적합한 유도물질은 당해 분야에 공지되어 있고, 예컨대 틸로론(Tilorone)[미국 특허 제 3592819호; 알브레츠트(Albrecht) 등, 문헌 "J. Med. Chem.", 1974, 17:1150-1156] 및 퀴놀론 유도체인 이미퀴모드(Imiquimod)[새비지(Savage) 등, 문헌 "Brit. J. Cancer", 1996, 74:1482-1486]가 있다.

본 발명의 방법 및 조성물은 선택적으로 특정 증상에 대한 하나 이상의 다른 치료제 및 치료방법과 함께 사용될 수 있고, 담당의사 또는 수의사는 그 상황에 적절할 수 있는 다른 치료제 및 치료 방법을 쉽게 선택할 수 있을 것이다.

한 실시태양에서, 본 발명은 상술된 바와 같은 인터페론의 투여 단계를 포함하는, 포유동물에서 신생물질 증상을 치료하는 방법을 제공한다. 신생물질 증상은 전이성 암일 수 있다.

본 발명의 방법은 다른 제제와 함께 동시에 치료되지 않으면서 사용될 수 있지만, 본 발명의 이러한 실시태양은 특히 하기의 경우에 유용할 것으로 생각된다:

a) 표준 프로토콜에 의해 제공되는 수술, 화학치료법 또는 방사선치료법 이후의 보조 치료법으로서 이용된다;

b) 인터페론-감수성 신생물질 형성의 치료를 위해, 본 발명의 방법은 단독으로, 또는 통상의 화학치료법 또는 방사선치료법과 함께 이용된다.

c) 인터페론-내성 신생물질 형성의 치료를 위해, 본 발명의 방법은 단독으로, 또는 가장 바람직하게는 통상의 화학치료법 또는 방사선치료법과 함께 이용된다.

상기 방법은 질환의 완화를 유도하고/하거나 유지하도록 지향된다. "다른 치료와 함께"란 인터페론이 방사선치료법 또는 다른 화학치료법을 사용하기 전, 그 동안 및/또는 그 후에 투여됨을 의미한다. 가장 적합한 프로토콜은 후술되는 바와 같이 다양한 인자에 따라 달라진다.

특히, 본 발명의 방법은 바람직하게는 세포증식억제 약제, 하나 이상의 다른 사이토킨(이는 항암 활성을 갖지만 인터페론과는 상이한 기작을 갖는다), 맥관형성억제제, 및 인터페론의 활성을 강화시키는 제제를 사용하는 화학치료법들로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 다른 치료 방법과 함께 사용될 것이다. 두번째의 사이토킨은 인터류킨-1(IL-1), 인터류킨-2(IL-2), 인터류킨-12(IL-12) 또는 인터류킨-15(IL-15)가 바람직하고; 맥관형성 억제제는 AGM-1470[(클로로아세틸)-카밤산 (3R-(3α,4α(2R^*,3R^*),5β,6β))-5-메톡시-4-(2-메틸-3-(3-메톡시-2-부테닐)옥시라닐)-1-옥사스피로(2.5)옥트-6-일에스테르]이 바람직하고; 인터페론-강화 치료제는 고체온유발제 또는 아르기닌 부티레이트가 바람직하다.

인터페론과 함께 투여될 수 있는 바람직한 세포증식억제 약제로는 사이클로포스파미드, 시스플라틴, 카르보플라틴, 카르무스틴(BCNU; N,N-비스(2-크로로에틸)-N-니트로소우레아), 메토트렉세이트, 아드리아마이신, α-디플루오로메틸오르니틴 및 5-플루오로우라실이 있지만, 이에 한정되지 않는다.

상기 방법에 영향을 받는 신생물질 증상으로는 높은 투여량의 IFN-α의 비경구 투여에 반응하는 암, 예컨대 혈액학적 악성종양, 다발성골수종, 모양세포성백혈병, 만성 골수성 백혈병, 저급 림프종, 피부 T세포 림프종, 및 고형 종양(예컨대, 신장세포암, 흑색종, 암종 및 AIDS-관련된 카포시(Kaposi) 육종), 특히 비바이러스성 병인의 악성 종양이 있으나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 약학 조성물의 제조에 있어서, IFN를 위한 다양한 비히클 및 부형제가 사용될 수 있고, 이는 당해 분야의 숙련가에게는 자명할 것이다. 대표적인 제형 기법은 특히 문헌[레밍턴(Remington), "The Science and Practice of Pharmacy, 제 19 판, Mack Publishing Co, Easton, PA, 1995 및 그의 선행판]에 교시되어 있다. IFN 제형은 미국 특허 제 4,496,537호에 기술된 바와 같이 글리신 또는 알라닌 등의 안정성 증진제, 및/또는 담체 단백질 등의 하나 이상의 담체를 포함할 수 있다. 예컨대, 인간 약학적 등급의 치료를 위해 선택적으로 포스페이트-완충된 염수를 희석제로 함께 사용한 인간 혈청 알부민이 통상적으로 사용된다. IFN용 부형제가 인간 혈청 알부민인 경우, 인간 혈청 알부민은 인간 혈청으로부터 유도될 수 있거나, 또는 재조합체 기원일 수 있다. 혈청 알부민이 사용될 때, 이는 정상적으로는 동종 기원일 것이다.

IFN은 수여자의 구강점막 공동과 IFN의 접촉을 제공하는 임의의 수단에 의해 투여될 것이다. 따라서, 본 발명이 임의의 특정 유형의 제형에 한정되지 않음을 분명히 이해할 것이다. 본 명세서에는 구강점막 공동내로 IFN를 깊이 투여함이 기재되어 있고; 이는 액체, 고체 또는 에어로졸 뿐만 아니라 비측 드롭 또는 스프레이로 달성될 수 있다. 따라서, 본 발명은 액체, 스프레이, 시럽, 로젠지, 협측(頰側) 정제 및 분무 제형을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 당해 분야의 숙련가라면 에어로졸 또는 분무 제형의 경우, 제제의 입자 크기가 중요할 수 있음을 인식할 것이고, 이러한 입자 크기를 변형시킬 수 있는 적합한 방법을 잘 알 것이다.

한 양태에서, 인터페론은 단일 투여량으로 투여된다. 다르게는, 인터페론은 순수 효과가 보다 높은 단일 투여량의 투여에 상응하도록 보다 적은 투여량으로 분포된 기간에 걸쳐 다수회 투여된다. 상기 전달 방식에 대한 하나의 접근 방안은 구강점막 공동에 부착되거나 이에 이식되고, 높은 단일 투여량에 상응하는 양으로 일정 기간에 걸쳐 인터페론을 방출하도록 고안된 서방성 장치 또는 방출 속도가 조절된 장치를 준비하는 것이다.

구강점막을 통해 사용하는 인터페론의 대표적인 제형은 다음과 같다(모든 %는 중량/중량이다):

정제는 "덱스트로즈 BP 45%; 젤라틴 BP 30%; 밀전분 BP 11%; 카멜로즈 나트륨 BP 5%; 달걀 알부민 BPC 4%; 류우신 USP 3%; 프로필렌 글리콜 BP 2%; 및 1×10⁶IU IFN-α2를 포함한다. 정제는 구강내에서 천천히 용해되고 용해되도록 허용되거나, 또는 물에 용해되고 필요에 따라 구강점막과 접촉시 구강내에 유지될 수 있다.

인터페론 페이스트는, 미국 특허 제 4,675,184호에 기재된 바와 같이, 글리신 45%, 소듐 CMC 2%, 시트레이트 완충액(pH 4.5) 25%, 100%가 되도록 하는 양의 증류수로부터 1×10⁶IU의 IFN-α2로 제조될 수 있다. 인터페론 페이스트는 구강 점막에 부착될 수 있다.

유사하게, 가글 또는 시럽은 원하는 양의 인터페론을 시판되는 구강세척액 또는 기침약 시럽 제형에 첨가함으로써 제조될 수 있다.

상기를 참조한 특정 투여량 범위내에서, 임의의 개별적인 경우에서의 최적 치료법은 관련된 증상 특성, 질환 단계, 이전의 치료법, 지속되는 다른 치료법, 포유동물의 건강에 대한 일반 상태, 인터페론에 대한 검체의 감수성 등에 따라 달라질 것이고, 따라서, 이러한 모든 상황을 염두에 두고 의사 또는 수의사의 결정에는 차이가 있을 것이다. 치료 기간은 물론 치료될 증상에 따라 달라질 것이고, 예컨대 전립선암 등의 천천히 성장하는 암의 치료는 간세포 암종 등의 신속하게 성장하는 암의 치료와는 상이한 치료 경로를 포함할 것으로 예상된다.

본원에 개시된 효과적인 투여량은 비경구적으로 투여될 때 포유동물에서 병적 반응을 발생시키지 않는 용량이다. 병적 반응은 급성, 만성 또는 누적성일 수 있고, 예컨대 백혈구감소증, 골수 저하 등의 혈액 화학성의 변화 또는 병력적인 변수에 의해 나타날 수 있다. 본원에서, 병적 반응으로는 발열, 권태감, 또는 유행성감기 유사 증후 등의 부작용, 정맥염과 같은 맥관 반응 및 주사 부위에서 국부적 염증 반응이 포함된다. 이러한 반응은 인터페론에 대한 감수성이 개별적으로 차이가 있으므로 환자들 사이에서 상당히 다를 것이다. 구강 점막 치료를 위해 허용되는 낮은 투여량의 인터페론을 확인하기 위한 간단한 시험으로는 연령, 체중, 증후, 진행도 등을 고려하여 추정되는 허용가능한 투여량을 환자에게 주사하여 주사에 의해 본원에 정의된 바와 같은 병적 반응이 유발되는 지를 확인한다. 이때, 가장 쉽게 확인가능한 기준은 주사 부위에서의 국부 자극이다. 불리한 반응이 확인되지 않는다면, 이어서 동일한 투여량을 구강 점막을 통해 투여할 수 있다. 만약 불리한 반응이 있다면, 병적 반응이 확인되지 않을 때까지 더 낮은 투여량으로 이 과정을 반복한다.

많은 환자의 경우, 구강점막 투여량은 현존하는 인가된 비경구적 프로토콜에서 효과적이고도 내약성인 것으로 공지된 투여량과 대략 같을 것이다. 그러므로, 구체적으로 확인하기 위해, 허용가능한 투여량의 인터페론은 비경구 투여할 때 병적 반응을 유도하지 않는 한, 하루에 약 1500 IU, 바람직하게는 5000 IU 내지 약 20 × 10⁶IU일 수 있다. 더욱 바람직하게는 하루에 인터페론 약 1 x 10⁴IU 내지 약 20×10⁶IU, 가장 바람직하게는 약 1 x 10⁴IU 내지 약 1 × 10⁶IU의 투여량이다. 한 실시태양에서, 총 투여량은 일정 시간에 걸쳐 보다 낮은 투여량이 수회 투여될 수 있거나, 구강점막에 부착되거나 이에 이식된, 방출속도가 조절된 장치로부터 연속적으로 또는 맥동적으로 전달될 수 있다.

인터페론 및 인터페론 제형

마우스 IFN-α/β

마우스 IFN-α/β(Mu IFN-α/β)는 이미 기재된 바와 같이 뉴캐슬(Newcastle) 질환 바이러스(NDV)에 의해 유도된 C243-3 세포의 배양물로부터 제조되고 정제되었다(토베이 등, 문헌 "Proc. Soc. Exp. Biol. and Med.", 1974 146:809-815). 이 연구에서 사용된 제제는, 소포성 구내염 바이러스(VSV)로 항원투여된 마우스 929 세포에 대해 검정될 경우 4×10⁶국제 단위(IU)/㎖의 역가 및 단백질 1㎎당 5×10⁷IU의 비활성을 가졌다(토베이 등, 문헌 "Proc. Soc. Exp. Biol. and Med.", 1974 146:809-815). 제제는 국립위생연구소(NIH)의 뮤린 IFN-α/β의 국제 기준 제제(G-002-9004-5411)에 대해 표준화되었다.

인간 IFN-α-1-8

재조합 인간 IFN-α 1-8[Hu IFN-α 1-8; BDBB 할당 번호: CGP 35269-1, 스위스 바즐 소재의 시바 가이기(Ciba-Geigy) 제품]은 이전에 기재된 바와 같이 제조되고 정제되었다[마이스터(Meister) 등, 문헌 "J. Gen. Virol.", 1986 67:1633-1643]. 이 연구에서 사용된 제제는 이미 기재된 바와 같이(토베이 등, 문헌 "Nature", 1977 267:455-457) VSV로 항원투여된 동종성 인간 WISH 세포에 대해 70×10⁶IU/㎖의 역가를 가졌고, 이종성 마우스 L929 세포에 대해 1×10⁶IU/㎖의 역가를 가졌다. 제제는 NIH 인간 IFN-α 국제 기준 제제(G-023-901-527) 및 NIH 뮤린 IFN-α/β 표준(G-002-9004-5411) 둘다에 대해 표준화되었다. IFN 제제의 비활성은 단백질 1mg당 2×10⁸IU였다.

재조합 뮤린 인터페론-α

재조합 뮤린 인터페론-α는 라이프 테크놀로지스 인코포레이티드(Life Technologies Inc.)로부터 구입되었다. 이 연구에서 사용된 제제(할당 번호: HKK 404)는 VSV로 항원투여된 마우스 L929 세포에 대해 검정될 경우 6×10⁶IU/㎖의 역가 및 단백질 1mg당 6×10⁸IU의 비활성을 가졌다(토베이 등, 문헌 "Proc. Seoc. Exp. Biol Med.", 1974, 146:406-415).

재조합 뮤린 인터페론 β

재조합 뮤린 인터페론 β는 알 앤드 디 시스템스 인코포레이티드(R&D Systems Inc.)로부터 구입되었다. 이 연구에서 사용된 제제(할당 번호: 1976-01S)는 VSV로 항원투여된 마우스 L929 세포에 대해 검정될 경우 3.2×10⁴IU/㎖의 역가 및 단백질 1mg당 8×10⁶IU의 비활성을 가졌다(토베이 등, 문헌 "Proc. Seoc. Exp. Biol Med.", 1974, 146:406-415).

재조합 뮤린 인터페론 γ

재조합 뮤린 인터페론 γ는 알 앤드 디 시스템스 인코포레이티드로부터 구입되었다. 이 연구에서 사용된 제제(할당 번호: 2580-03SA)는 VSV로 항원투여된 마우스 L929 세포에 대해 검정될 경우 2×10⁵IU/㎖의 역가 및 단백질 1mg당 1×10⁷IUg의 비활성을 가졌다(토베이 등, 문헌 "Proc. Seoc. Exp. Biol Med.", 1974, 146:406-415).

모든 인터페론 제제는 동일한 검정에서 동시에 역가검정되었고, 미국의 국립위생연구소의 뮤린 인터페론 α/β의 국제 기준 제제(G-002-9004-5411)에 대해 표준화되었다.

뮤린 인터페론 α/β 및 재조합 뮤린 인터페론 둘다는 투여 전에 페리뮨(Ferimmune, 상표명) 부형제내에 넣었다.

부형제

인터페론 제제는 소혈청 알부민(BSA)을 함유하는 포스페이트 완충된 염수내에서 희석되었다. 소혈청 알부민 분획 V[RIA 등급; 면역글로불린이 없음; 목록 번호 A7888; 미국의 시그마(Sigma) 제품]을 PBS(pH 7.4) 1㎖당 100㎍의 최종 농도로 용해시키고, 여과하여 멸균시켰다[0.2μ, 밀렉스(Millex)-GV, 미국의 밀리포어(Millipore) 제품].

본원에 기재된 실험에서, 인터페론 제제는 특허받은 부형제내에 희석되었다. 사용된 부형제는 하기와 같이 정제 형태로 공급되었다[페리뮨, 파마 퍼시픽(Pharma Pacific) 제품]:

	중량/중량%	mg/정제
덱스트로즈(글루코즈)BP^**	44.67^***	55.84
젤라틴 BP^**	30.06	37.58
밀전분 BP^**	11.31	14.14
카멜로즈 나트륨 BP^**	4.96	6.20
달걀 알부민 BPC^**	4.03	5.04
류우신 USP	3.00	3.75
프로필렌 글리콜 BP	1.88	2.35
덱스트란 40^**(덱스트란 40 주사 BP로서)	0.06	0.08
인산나트륨 BP	0.03	0.04
염화나트륨 BP	0.01	0.01
나트륨산 포스페이트 BP	0.01	0.01
총계	100.02	125.04
무수물을 기준으로 계산됨* 하기로부터 유도됨:덱스트로즈(글루코즈) BP (무수물) 44.64%글루코즈 BP(덱스트란 40 주사 BP로서) 0.03%

단일 정제를 1.5㎖ 포스페이트 완충된 염수에 용해시키고, 16,000g에서 15분 동안 원심분리하고, 이어 멸균 여과(0.2μ, 밀렉스-GV, 미국의 밀리포어 제품)시키고, 사용 전에 4℃에서 저장하였다. 부형제는 사용 전에 매일 제조하였다.

인터페론 전달 시스템

예비 실험에 따라, P20 에펜도르프 마이크로파이펫을 사용하여 다 자란 정상 마우스의 각각의 외비공(外鼻孔)에 크리스탈 바이올렛 5㎕를 적용한 결과 구강인두 공동의 전체 표면에 걸쳐 염료가 거의 즉시 분포됨을 알 수 있었다. 구강인두 공동의 염색은 염료를 적용한 후 거의 30분째에도 분명하였다. 동일한 방식으로 적용된¹²⁵I-표지된 재조합 인간 IFN-α 1-8을 사용하여 본질적으로 유사한 결과를 얻었다. 따라서, 이러한 투여 방법을 모든 후속적인 실험에서 사용하였다.

본원에 기재된 동물 실험에 있어서, IFN의 투여 경로에 관한 "구강점막" 또는 "구강인두" 또는 "비측내/구강내" 또는 "비측내 및 구강내" 또는 "in/or"이란 표현은, 구강점막 공동, 즉 수여 포유동물의 구강 및 인후내로 IFN 제제가 신속하게 분포되어 상기 공동을 둘러산 점막과 접촉되도록 비측 공동내로 상기 제제를 깊게 투여함을 의미하는 것으로 분명히 이해될 것이다.

프렌드(friend) 적백혈병 세포

프렌드 적백혈병 세포의 IFN-α/β-내성 클론을 로마의 아파브리스(E. Affabris)로부터 얻었고, 이는 아파브리스 등에 의해 상세히 기재되어 있다[문헌 "Virology", 120:441-452(1982) 참조]. 이후, 이들 세포를 생체내 계대접종하여 보유하였다. 간단히, DBA/2 마우스에 3C18 세포를 약 100LD₅₀으로 복강내 주사하여 접종하고, 1주 후 종양 세포를 마우스의 복강으로부터 수거하고, 계수하고, 다른 마우스에 다시 3C18 세포를 100 LD₅₀으로 접종시켰다. 이 절차를 60 내지 100회 계대접종하여 반복하였다. 60번째 내지 100번째 계대접종에 사용된 3C18 세포는 간 및 비장에 매우 전이성이 높은 것으로 나타났다[그리서(Gresser) 등, 문헌 "Int. J. Cancer" 1987 39:789-792]. IFN 내성의 표현형은 IFN-α/β의 존재하에 생체내 계대접종된 세포를 시험관내에서 배양함으로써 통상적으로 확인되었다[벨라르델리(Belardelli) 등, 문헌 "Int. J. Cancer" 1982 30:813-820].

본 발명의 인터페론 조성물은 실험실에서 단리된 L1210 림프종 세포의 L1210R6 클론[그레서 등, 문헌 "Interferon and cell division"(1974). IX; 인터페론-내성 L1210 세포: 문헌 "Characteristics and Origin. J. Nat. Cancer Inst.", 52:553-559] 및 화학 발암물질인 1,2-디메틸 벤즈안트레인을 접종한 마우스로부터 유도된 EL4 이식가능한 종양[고러(Gorer, P.A.), 문헌 "Br. J. Cancer", 1950 4:372-381]에 대해 또한 활성이 있다.

동물

본 연구에 사용된 마우스는 특정 병원체가 없는 콜로니로부터 수득되었다[프랑스의 이파 크레도(IFFA CREDO) 제품]. 이들은 EEC 표준 방법에 따라 빌레주이프 소재의 인스티튜트 페데라티프(Institut Federatif) CNRS에서 특정 병원체가 없는 동물 사육 장치내에서 사육되었다.

인터페론의 생물학적 검정

인터페론은 통상의 방법에 따라 검정되었다. 요약하면, 샘플(20㎕)을 2% 열-불활성화된 태내 송아지 혈청(FCS)[프랑스의 기브코(Gibco) 제품]이 함유된 이글의 최소 필수 배지(Eagle's Minimal Essential Medium; MEM)(프랑스의 기브코 제품) 80㎕내에 희석시키고, 다관 마이크로파이펫(Finnpipette, Labsystem, 50-300㎕)을 사용하여 마이크로적정 플레이트[팔콘(Falcon)제품, 목록 번호: 3072]의 각 웰에 첨가하였다. WISH 또는 L929 세포(2×10⁴세포/웰)를 2% FCS가 함유된 MEM 100㎕에 첨가하고, 공기중 5% CO₂분위기하에 37℃에서 하룻밤 배양하였다[포마(Forma) 3029 CO₂항온배양기]. 이어, 10배 대물렌즈가 구비된 올림푸스(Olympus) IM GLDW 반전 현미경을 사용하여 세포를 임의의 독성 표시에 대해 검사하였다. 이어, 검출가능한 독성을 나타내지 않은 샘플을, 2% FCS가 함유된 신선한 이글의 배지 100㎕를 각 웰당 함유한 마이크로플레이트에서 다관 마이크로파이펫에 의해 100㎕의 희석된 물질을 넣음으로써, 2% FCS가 함유된 이글의 MEM 200㎕의 총 부피에서 처음 1:10 희석배율로부터 출발하여 연속으로 2배 희석하였다. NIH 인간 IFN-α 기준 표준물(G-023-901-527) 또는 NIH Mu IFN-α/β 기준 표준물(G-002-9004-5411)의 적절한 연속적인 2배 희석물을 또한 제조하였다. 이어, 2% FCS가 함유된 이글의 MEM 100㎕중 WISH 또는 L929(2×10⁴세포/웰)를 적절한 각각의 플레이트에 첨가하고, 공기중 5% CO₂의 분위기하에 37℃에서 하룻밤 배양하였다. 이어, 임의의 독성 표시를 나타내는지와 임의의 현성(顯性) 독성이 없는지에 대하여 세포 단층을 검사하고, 배양물을 흡인시키고, VSV의 100 TCID₅₀(WISH 세포의 경우 2×10⁴VSV₂₃, 또는 L929 세포의 경우 10^-5VSV₂₃)을 포함한 2% FCS가 함유된 이글의 MEM 200㎕로 대체하였다. 이어 플레이트를 공기중 5% CO₂의 분위기하에 37℃에서 하룻밤 배양하였다. 이어, 올림푸스 IM ULWD 반전 현미경을 사용하여 특정 바이러스 세포변성 효과에 대하여 세포 단층을 검사하였다. 인터페론 역가는 특정 바이러스성 세포변성 효과에 대해 50% 보호하는 희석치 역수로부터 결정되었고, 이는 국제 기준 단위/㎖(IU/㎖)로 표시된다.

실시예 1

프렌드(Friend) 적백혈병 세포를 항원투여한 마우스에서 구강 점막 투여된 인터페론-α의 항 종양 활성

비내/경구 경로로 투여된 IFN-α가 고도의 전이성 FLC 세포로 항원 투여된 마우스의 생존율을 증가시키는지 여부를 확립하기 위해, 7 내지 8주된 숫컷 DBA/2 마우스 그룹에 0 일에 1 x 10⁵FLC 를 정맥내로 항원 투여했다.

각각의 마우스 그룹에 10㎕ BSA-PBS중 복합 뮤린 IFN-α 서브타입(Mu IFN-α)의 천연 혼합물 10⁴IU 또는 바이러스 유발물질을 생략함을 제외하고 IFN 제제와 동일한 방식으로 생산 및 정제한 동일한 용량의 모의 IFN 제제를 비내/경구 경로로 10 일간 연속해서 하루에 2회씩 처리했다. 모의 IFN 제제는 정제된 Mu IFN-α 제제와 비교 분석할 때 검출할 수 있는 IFN 활성을 나타내지 않았다. 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

그 룹	처 리	사망일	평균 사망일±SE
1	모의 Mu IFN-α	9,9,10,10,10,10	9.6±0.2
2	Mu IFN-α10⁴IU	28,31,36〉100〉100	31.7±2.3^**
^**사망한 동물 만을 계산함

하루에 2회 Mu IFN-α 10⁴IU를 구강 점막 투여하여 FLC를 주입한 마우스의 생존 시간을 극적으로 증가시켰다. 단지 20일 후에 IFN-α처리를 중단했음에도 불구하고, FLC 2 x 10⁴LD₅₀을 항원 투여한지 100일후 5 마리의 마우스중 2 마리가 건강하게 생존했기 때문에 이들은 효과적으로 치료되었다. FLC 2 x 10⁴LD₅₀을 감염시키고, 재조합 뮤린 IFN-β 10³IU 또는 재조합 뮤린 IFN-γ 10³IU로 구강 점막 처리한 10 마리의 성숙한 DBA/2 마우스 그룹에 대한 억제 시험 결과는 유사했다.

실시예 2

프렌드 적백혈병 세포를 주사한 마우스에서 적은 투여량으로 구강 점막 투여된 인터페론-α의 항 종양 활성에 대한 대규모 시험

실시예 1의 결과를 확인하기 위해, 대규모의 시험을 수행했다. 150 마리의 8주된 암컷 DBA/2 마우스에게 0 일에 1 x 10⁵FLC(2 x 10⁴FLC LD₅₀)를 정맥내로 투여했다. 마우스에게 지정된 유형 및 투여량의 IFN을 처리하고, 10일간 연속해서 하루에 2회 10㎕ 용량을 비내/경구 경로로 투여했다. 각각의 처리 그룹에는 10 마리의 마우스가 있다. 결과를 하기 표 2에 나타냈다.

그룹	처 치	투여량	부형제	평균 사망일±SE
1	하지 않음	-	없음	9.5±0.2
2	모의 Mu IFN-α	-	BSA/PBS	9.6±0.2
3	Mu IFN-α	10⁴IU	BSA/PBS	29.4±25.6%^*
4	Mu IFN-α	10³IU	BSA/PBS	11.6±0.2
5	Mu IFN-α	10²IU	BSA/PBS	10.3±0.2
6	Hu IFN-α 1-8	10⁴IU	BSA/PBS	18.2±0.8
7	Hu IFN-α 1-8	10³IU	BSA/PBS	13.1±0.8
8	Hu IFN-α 1-8	10²IU	BSA/PBS	11.4±0.5
IU : 국제 단위BSA/PBS : PBS중의 BSA 100㎍/㎖(pH 7.4)Mu IFN-α : 뮤린 IFN-α 서브타입의 천연 혼합물Hu IFN-α : 단일 재조합 인간 IFN-α 아이소타입^*: 이 그룹의 동물중 일부가 처리후 100 일째에 여전히 생존했다.

비내/경구 경로로 투여한 IFN-α는 FLC를 정맥내로 항원 투여한 마우스에서 현저한 항 종양 활성을 나타냈다. 실제로, 4 내지 5개의 FLC 세포가 동물을 사멸시키기에 충분한 시스템에서 100,000 FLC를 접종한 후 100 일이상 여전히 마우스가 생존해 있기 때문에, 일부 IFN-처리된 마우스는 치료된 것으로 간주할 수 있다.

단일 재조합 IFN-α 서브종, IFN-α 1-8, 복합 IFN-α 서브타입, Mu IFN-α, 재조합 뮤린 IFN-β 및 재조합 뮤린 IFN-γ의 천연 혼합물의 순수한 제제는 비내/경구 경로로 투여될 때 상기 모델에서 현저한 항 종양 활성을 나타내며, 이것은 구강 점막 투여된 IFN 제제의 관측된 항 종양 활성이 사실상 이들 제제의 IFN 성분에 기인한다고 강력히 시사한다.

실시예 3

항 종양 활성에 대한 인터페론의 투여 경로 효과

비내/경구 경로로 투여된 IFN의 효과를 통상적인 경로로 제공된 IFN의 효과와 비교했다. 8주된 암컷 DBA/2 마루스에 0 일에 1 x 10⁵FLC(2 x 10⁴FLC LD₅₀)을 정맥내로 항원 투여했다. 마우스에게 지정한 경로로 투여한 Mu IFN-α 10⁴IU(실시예 2에서 결정한 바와 같은 최적 투여량)를 10일간 연속해서 하루에 2 회 처리했다. 각각의 처리 그룹에는 6 마리의 마우스가 있으며, 각각의 경우에 Mu IFN-α에 대한 부형제는 PBS중 BSA이다. 결과를 하기 표 3에 요약했다.

그룹	처치	경로	평균 사망일±SE
1	하지 않음		9.6 ± 0.2
2	Mu IFN-α	비내/경구	30 ± 25.85 %^*
3	Mu IFN-α	경구	18.5 ± 2.0
4	Mu IFN-α	위내	13.5 ±1.3
5	Mu IFN-α	피하	23.5 ± 1.6
6	Mu IFN-α	근육내	23.7 ± 1.8
7	Mu IFN-α	정맥내	25.0 ± 1.2
8	Mu IFN-α	복강내	26.7 ± 4.1
IU : 국제 단위BSA/PBS : PBS중의 BSA 100㎍/㎖(pH 7.4)^*: 이 그룹의 동물중 일부가 FLC 세포를 접종한후 100 일째에 여전히 생존했다.

구강 점막(또는 비내/경구) 투여 경로는 더 효과적이지는 않더라도 적어도 정맥내, 근육내 및 피하 주사와 같은 통상의 비경구 경로 만큼은 효과적이다. 비내/경구 경로는 FLC를 정맥내 항원 투여한 마우스에서 가장 효과적인 경로로 간주되는, 복강내 주사만큼 사실상 효과적이다. 이와는 대조적으로, 입에 직접 투여된 동일한 투여량의 IFN은 비내 투여와 경구 투여가 조합된 것보다 덜 효과적인 것으로 나타났으며, 한편, 관을 통해 동물의 위장에 직접 IFN을 도입하는 것은 상당히 덜 효과적이었다.

실시예 4

세포 단백질 발현에 대한 구강 점막 인터페론의 효과

IFN-α는 단백질을 단백질 세포 표면 수용체에 결합시킨 후 다수의 세포 단백질의 발현을 유도하는 것으로 공지되었다. 이들 단백질은 IFN 작용의 유용한 마커를 제공하는 것으로 생각된다.

본 출원인은 3개의 IFN-유도 단백질인 MHC 클라스 I 항원, Ly 6A/E 항원 및 2'-5'-올리고아데닐레이트 신타제의 발현에 대한, 비내/경구 경로로 투여된 IFN-α의 작용 효과를 평가했다.

복강내로 투여된 20 IU 만큼 적은양의 Mu IFN-α가 말초 혈액 단핵구 및 과립구 둘다에서 DBA-2-마우스항원의 발현을 현저히 증가시키는 조건하에서, 비내/경구 경로로 H-2K^d에 대한 20,000 IU이하의 Mu IFN-α 처리는 말초 혈액 림프구, 단핵구 또는 과립구에서 H-2-K^d발현을 상당히 증가시키지 않았다.

유사하게, 비내/경구 경로로 20,000 IU 이하의 IFN-α를 마우스에게 처리하는 것은 Ly6 A/E 항원의 발현에 상당한 효과를 미치지 못했으며, 그러나, 이들의 발현은 I형 IFN을 비경구 처리한 후 다양한 림프양 세포 표면에서 현저히 증대되었다(더몬트(Dumont) 등의 문헌[J. Immunol, 1986 137:201-210] 참조). 비내/경구 경로로 투여한 200 또는 20,000 IU의 Mu IFN-α 또는 Hu IFN-α에 의해 유사한 결과를 얻었다.

복강내 주입한 20 IU 만큼 적은 양의 Mu IFN-α를 스위스(Swiss) 또는 DBA/2 마우스에 처리하여 말초 혈액 단핵 세포 및 비세포 둘다에서 2',5'-올리고아데닐레이트 신타제 활성의 현저한 증가가 야기되었다. 이와는 대조적으로, 비내/구강 경로로 20,000 IU 이하의 Mu IFN-α를 마우스에 처리하는 동일한 실험에서 2',5'-올리고아데닐레이트 신타제의 발현은 상당히 증가되지 않았다. 더욱더, 비내/경구 경로로 200 또는 20,000 IU의 Mu IFN-α 또는 Hu IFN-α 1-8을 처리했을 때 IFN 처리를 시작한지 10 일까지 시험한 시점중 어느 시점에서도 2',5'-올리고아데닐레이트 신타제 활성에 상당한 영향을 미치지 않았다.

실시예 5

구강 점막 투여후 인터페론의 생체이용율

IFN의 생체이용율 및 약력학을 조사하기 위해, 이 연구에 가장 우호적인 약물-혈액 용량비를 갖는 마우스에게¹²⁵I에 가능한 최고 특정 방사능까지 표지한 하나의 고 투여량의 재조합 IFN-α를 처리했다.

Hu IFN-α 1-8 70 x 10⁶IU의 순수한 제제를 PBS 1.4㎖에 용해시키고, 헌터와 그린우드(Hunter and Greenwood)의 문헌[Nature, 1962 194:495-496]에 개시된 클로르아민-T 방법의 변형된 방법을 이용하여 모겐센(Mogensen) 등의 문헌[Int. J. Cancer, 1981 28: 575-582]에 개시된 바와 같이 요오드화시켰다.

¹²⁵I-표지된 Hu IFN-α 1-8(롯트 번호 CGP35269-1)은 VSV를 항원 투여한 인간 WISH 세포에서 분석했을 때 2 x 10⁷IU/㎖ 및 VSV를 항원 투여한 마우스 L929 세포에서 분석했을 때 1 x 10⁶IU/㎖의 생물학적 활성을 나타냈다.

6 내지 7주된 암컷 스위스 마우스에게¹²⁵I Hu IFN-α 1-8 2 x 10⁷IU(1 x 10⁶뮤린 IU에 상응함)을 정맥내, 복강내 주입하거나 또는 비내/경구 처리했다(1.0369 x 10⁷cpm/마우스). 언급한 시기에, 그룹당 3마리의 마우스를 죽이고, 혈액을 수거하여 용량을 측정했다. 신장, 간, 폐, 비장 및 위/식도를 적출하여, 블롯팅하고, ±1.0㎍의 정밀도로 계량했다. 각 샘플의 방사능을 감마 카운터를 사용하여 개별 측정했다. 이어서, 원심분리(800 g x 10 분, 4℃)로 전혈을 분리하고, 혈청을 수확하고, 계수하여 -80℃에서 냉동시켰다. 이어서, 전술한 바와 같은 인간 WISH 세포 및 마우스 L929 세포상에서 표준 생검을 이용하여 혈청의 IFN 함량을 분석했다. 이어서, 혈청 샘플에 존재하는 방사능 물질을 친화성 면역침전법으로 분리하여 SDS-PAGE로 분석했다.

정맥내 거환으로¹²⁵I-표지된 Hu IFN-α 1-8을 1.0369 x 10⁷cpm/마우스로 주입한 지 5 분후 동물의 말포 혈액에서 매우 다량의 방사능(〉2 x 10⁶cpm/ml)을 검출했다. 이어서 전혈에 존재하는 방사능의 양은 15 분 및 30 분에 점진적으로 감소했다.¹²⁵I Hu IFN-α 1-8 1.0369 x 10⁷cpm을 복강내 주입한지 5 분후 동물의 말초 혈액에서 검출된 방사능량은 정맥내 거환을 주입한 후 검출된 양보다 약 20 배 적었다. 이어서 방사능의 양은 주입한지 15 및 30 분후 점진적으로 증가되었다.¹²⁵I IFN-α 1-8을 비내/경구 투여한지 5, 10 또는 15 분후 동물의 혈액에서 검출된 방사능량은 동량의 방사능 표지된 IFN을 복강내 주입한 후 주어진 시간에 검출된 방사능량보다 상당히 적었다. 3가지 투여 경로 모두에서,¹²⁵I-표지된 IFN-α 1-8을 비내/경구 투여한 후 전혈에서 보다 혈청에서 더 많은 양의 방사능이 검출되었다. 동일한 용량의 혈청과 비교하여 전혈 ㎖당 검출된 방사능의 양이 적을수록 전혈의 세포 성분을 제거한 후 계수된 혈청의 용량이 효과적으로 더 크다는 것을 의미한다.

이 실험의 모든 마우스에서 얻은 혈청 샘플에 대해 전술한 바와 같은 표준 생검을 이용하여 생물학적으로 활성의 IFN 존재에 대해 검사했으며, 시험한 시점에서 모두¹²⁵I Hu IFN-α 1-8을 정맥내 또는 복강내 주입한 모든 동물의 혈청에서 쉽게 검출가능한 양의 생물학적으로 활성의 IFN이 나타났다. 이와는 대조적으로, 이들 동물의 혈청에서 비교적 다량의 방사능이 존재함에도 불구하고, IFN을 비내/경구 투여한 후 시험한 시점중 어느 시험에서 어느 동물의 혈청에서도 생물학적으로 활성의 IFN이 검출되지 않았다.

¹²⁵I Hu IFN-α 1-8을 치료한 동물의 혈청에서 검출된 방사능 물질이 실제로 고유한 IFN을 나타내는지를 측정하기 위해, 샘플을 단백질 A-G 아가로즈로 면역침전시키고, 샘플에 존재하는 면역글로블린을 침전시키기 위해, 친화성으로 정제된 폴리클론 안티-IFN-α 항체로 처리하고, 더욱더 면역침전시켰다. 이어서, 샘플을 전술한 바와 같이 SDS-폴리아크릴아미드 겔 전기영동(SDS-PAGE)에 적용했다.

¹²⁵I Hu IFN-α 1-8을 정맥내 또는 복강내 주입한 후 혈청내의 방사능 물질의 SDS-PAGE 분석은 비주입된¹²⁵I Hu IFN-α 1-8과 동일한 전기영동 이동성으로 이동하는 단일 균질 띠를 나타냈다. 물질의 겉보기 분자량은 약 20000 달톤으로 추정되었으며, 이것은 고유한 Hu IFN-α 1-8의 분자량에 정확히 상응한다. 이와는 대조적으로, 동량의 방사능 물질이 각각의 겔위에 부하되더라도,¹²⁵I IFN-α 1-8을 비내/경구 처리한 마우스에서 얻은 혈청 샘플중 어느것도 고유한 IFN과 유사한 겉보기 분자량을 갖는 임의의 물질을 함유하지 않았다.

방사능표지된 물질의 조직 분포는¹²⁵I IFN-α 1-8을 정맥내 주입한 지 5분후에 동물의 신장에서 매우 다량의 방사능을, 간, 폐 및 비장에서 다량의 방사능을 나타냈다. 이들 4개의 기관 각각에 존재하는 방사능의 양은 15 분 및 30 분후에 점진적으로 감소하는 것으로 밝혀졌다. 이와는 대조적으로, 위장의 방사능 수준은 15 분 및 30 분에 점진적으로 증가하여 정맥내 거환 주입후 30 분에 동물의 혈청에 존재하는 양에 필적할 만한 수준에 도달했다.

복강내 주입으로 투여한¹²⁵I IFN-α 1-8은 검사한 모든 조직에서 투여후 15분내에 최고 수준의 방사능을 나타냈으며, 30 분후 감소되었다. 유사하게,¹²⁵I Hu IFN-α 1-8의 비내/경구 투여는 투여한지 15 분후 시험한 모든 조직에서 최고 수준의 방사능을 나타냈으며, 그후 30 분후에 존재하는 방사능 수준이 약간 감소되었다. 위장/식도에 존재하는 방사능의 양은¹²⁵I-표지된 IFN-α 1-8의 비내/경구 투여후 임의의 다른 기관에서 검출된 양보다 한 자리 수 범위내에서 더 많으며, 이 양은 정맥내 또는 복강내 경로로 동량의 방사능표지된 Hu IFN-α 1-8을 비경구 투여한 후 이들 조직내에 존재하는 양보다 현저히 많은 양이다.

실시예 6

비내/경구 투여후 인터페론의 약력학

Hu IFN-α 1-8의 약력학을 정밀 측정하기 위해,¹²⁵I-표지된 Hu IFN-α 1-8 1.0369 x 10⁷cpm/마우스를 마우스에게 정맥내, 복강내 또는 비내/경구 처리하고, 전혈 및 혈청 둘다에 존재하는 방사능량을 24 시간동안 일련의 시점에서 측정했다.

정맥내 거환 투여후 마우스의 혈액에 존재하는¹²⁵I-표지된 Hu IFN-α 1-8의 약력학 프로파일은 대수 클리어런스 곡선에 밀접하게 따랐다. 이것은 밀접하게 연관된 분자인 재조합 인간 α A/D(Bgl)(보호슬라웨드(Bohoslawed)등의 문헌[J. IFN Res., 1986 6: 207-213] 참조)을 이용하여 마우스에서 수행한 실시예 5의 시험의 결과와 일치했다. 농도 대 시간의 곡선 아래 면적으로부터 계산한 생체이용가능한 물질의 양은 또한 인간 α A/D의 경우와 유사했다.¹²⁵I IFN-α 1-8의 정맥내 거환을 투여한 후 이상성 시간 소비 클리어런스 곡선(biphasic time-consuming clearance curve)이 관측되었으며, 이것은 신장을 통해 제거된 물질의 특징이며 실시예 4의 결과와 일치했다.¹²⁵I-표지된 IFN-α 1-8을 복강내 주입한 후 이 물질의 약력학은 근육내 투여한 IFN에서 앞서 보고된 약력학과 밀접하게 유사했다.

쉽게 검출가능한 양의 생물학적으로 활성의 IFN이¹²⁵I-표지된 IFN-α 1-8을 정맥내 거환 또는 복강내 주입한 후의 모든 동물의 혈청에 존재했다.

프렌드 적백혈병은 매우 악성이며, 정맥내로 주입할 때 간 및 비장 모두에 전이되기 때문에, 프렌드 적백혈병 모델이 항종양 활성의 매우 엄격한 임상전 시험으로 선정되었다. 실제로, 상기 모델을 이용하여 얻은 결과는 인간 암 치료를 위해 IFN-α를 비경구 주입하는 채택 기준이 되었다. 따라서, 상기 실험에서 수행한 모든 시험에서 비처리 동물 및 대조 제제로 처리한 동물은 모두 10 내지 11 일내에 죽었다. 처리하지 않는다면 4 또는 5개의 FLC 세포만을 주입하여도 마우스를 죽일것이다. 이와는 대조적으로, 구강점막 경로에 의해 뮤린 IFN-α로 처리한 동물중 일부는 10⁵FLC를 주입한 후 100 일 이상 아직도 생존해 있으며, 치료된 것으로 생각할 수 있다.

실제로, 앞선 시험으로부터 판단컨대, 구강 점막 경로로 투여한 IFN-α는 FLC를 주입한 동물에서 단지 몇일간만 생존 시간을 증가시킨, 비경구 투여한 사이클로포스프아미드, 5-플루오로우라실 또는 메토크렉세이트보다 더욱 효과적인 것으로 나타났다(그레써(Gresser)등의 문헌[J. Natl. Cancer Inst., 1988 80: 126-131] 참조). 시플라틴, 빈크리스틴, 독소루비신, 블레오마이신 또는 에포포사이드와 같은 기타 약물들은 이 종양에 비효과적이었다(그레써(Gresser)등의 문헌[J. Natl. Cancer Inst., 1988 80: 126-131] 참조).

유사하게, 구강 점막 경로로 투여한 IFN-α는 전신 투여된 IL-1β, IL-2 및 TNF-α와 같은 기타 사이토킨보다 더 FLC에 대해 효과적인 것으로 나타났다(전신 투여된 IL-1β, IL-2 및 TNF-α는 상기 모델에서 거의 활성을 나타내지 못했다).

이전의 연구에 의하면 비경구적으로 투여된 IFN이 상기 모델에서 가장 활성의 항 종양 약물중 하나이고, 이미 간에서 종양 전이가 존재한 후 시작할 때 조차도 IFN 처리가 효과적이라고 나타났다(그레써 등의 문헌[Intl. J. Cancer, 1987 39: 789-792] 참조). 본 결과는 구강 점막 경로로 투여한 IFN이 비경구 투여와 동등하거나 또는 더한층 효과적이라고 나타낸다.

단일 투여량의 사이클로포스파미드와 함께 제공된 IFN-α을 매일 주입하여 상기 제제중 하나만을 처리한(림프종 진단후 처리를 시작함) 동물에 비해 림프종 함유 AKR 마우스의 생존을 현저히 증가시켰다(그레써 등의 문헌[Eur. J. Cancer, 1978 14:97-99] 참조). IFN-αZβ 및 BCNU, 시스-DDP(시스플라틴), 메토트렉세이트, 아드리아마이신 및 α-디플루오로메틸 오르니틴을 이용한 성공적인 조합 치료법이 다양한 임상전 동물 종양 모델에서 또한 보고되었다. 5-(플루오로우라실)(5-FU) 및 IFN과의 조합 치료도 또한 인간의 전이성 결장암 치료에 유익한 것으로 보고되었다(에른스토프(Ernstoff)등의 문헌[Journal of Clinical Oncology, 1989 7: 1764-1765] 참조). 그러나, IFN 치료를 사이클로포스프아미드(마르퀘트(Marquet)등의 문헌[Int. J. Cancer, 1983 31:223-226; Lee et al, Biochem, Pharmacol., 1984 33:4339-3443] 참조), 아드리아마이신(블랙윌(Blackwill)등의 문헌[Cancer Res., 1984 44: 904-908] 참조), 또는 5-FU(마르퀘트 등의 문헌[1985 109: 156-158] 참조) 즉, 비경구 IFN 치료와 조합 사용할 때 유익한 효과를 발휘하는 것으로 나타낸 약물을 IFN 치료와 조합할 때, 감소된 항 종양 활성이 보고된 다른 실험이 있다. IFN과 기타 화학치료제와의 조합은 본원에 개시된 방법을 사용하여 쉽게 시험할 수 있다.

조합된 인터류킨-1(IL-1) 및 IFN-α/β 치료는 FLC를 주입한 마우스에서 상승작용성 항 종양 효과를 야기한다(Belardelli et al, Int. J. Cancer, 1991 49: 274-278). 동일한 처리가 또한 Eb 림프종의 전이성 변이종(p11-R-Eb)에 대해 현저한 항 종양 효과를 발휘하는데, 이에 반해 상기 제제중 한 제제만을 사용하면 비효적이다(가브리엘(Gabriele)등의 문헌[Invasion Metastasis, 1993 13: 147-162] 참조). 시험한 모든 사이토킨중에서, IL-1이 비경구 I형 IFN 치료와 조합할 때 가장 효과적인 것으로 밝혀졌다.

IFN-α/β와 함께 제공된 혈관형성 억제제 AGM-1470 [(클로로아세틸)-카밤산(3R-(3α,4α(2R^*,3R^*),5β,6β))-5-메톡시-4-(2-메틸-3-(3-메톡시-2-부테닐)옥시라닐)-1-옥사스피로(2.5)옥트-6-일 에스테르]와의 조합 치료는 어느 한 제제만을 사용했을 때 발견된 것에 비해 현저하게 증가된 항 종양 효과를 야기했다(브램(Brem) 등의 문헌[J. Pediatric Surgery, 1993 28: 1253-1257] 참조).

과체온은 루이스 폐암에 대한 IFN-α/β의 항 종양 작용을 증대시키는 것으로 나타났다(예루살미(Yerushalmi) 등의 문헌[Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1982 169:413-415] 참조). 알기닌 부티레이트는 또한 IFN-α의 항 종양 작용을 강화시키는 것으로 나타났다(샤니 및 세루티(Chany and Cerutti)의 문헌[Int. J. Cancer, 1982 30:489-493] 참조).

주어진 유형 및 투여량의 IFN을 구강 점막 경로로 투여할 때 얻은 보호 수준과 전신 투여(복강내 주입)후 얻은 결과를 비교한 결과 IFN의 비경구 투여가 몇몇 경우에 구강 점막 투여보다 약간 더 효과적이며, 다른 경우에는 더 효과적이지 않은 것으로 나타났다.

바이오마커 파일롯트 실험 결과에 의하면 시험한 3가지 바이오마커(MHC 클라스 I 항원, Lys6 A/E 항원, 및 2',5'-올리고아데닐레이트 신타제 활성)중 어느것도 구강 점막 경로로 투여된 IFN-α에 의해 나타난 매우 현저한 항종양 활성을 적절히 나타내고 있지 않는다고 아주 분명하게 나타낸다.

20IU 만큼 적은 양의 IFN-α을 복강내 주입한 후 취한 모든 실험에서 관측된 모든 3가지 IFN-유도 단백질 발현의 매우 현저한 증가와 구강 점막 경로로 20,000 IU 이하까지의 IFN-α의 투여후 임의의 검출가능한 효과가 없다는 것을 대비하면 놀라운 사실이다.

본 출원인은 초기 또는 중기에 하나의 바이오마커 또는 기타 바이오마커에 대한 효과가 관측될 가능성을 배제할 수 없지만, IFN이 이들 단백질을 암호화하는 유전자의 전사에 작용하므로 IFN 처리후 여러 시간 경과할 때까지 이들 바이오마커중 어느 한 마커에 대한 효과를 예상할 수 없기 때문에 그럴 가능성은 없는듯하다.

다시한번 언급하면, 구강 점막 경로로 IFN-α를 처리한 후 기타 많은 IFN-유도 단백질중 하나에 대한 전체 작용이 관측될 가능성을 배제할 수 없지만, 이 작용은 특정 IFN-유도 유전자 발현의 미분 조절을 수반하기 때문에 그럴 가능성은 없는 듯 하다. 그러나, IFN 바이오마커에 대한 효과가 구강 점막 경로로 IFN-α을 투여한 후 예를 들면 비내 림프구내에서 국소적으로 관측될 수 있는 가능성이 있다.

실험한 바이오마커에 대한 검출가능한 효과가 없는 것과 일치하게, 20,000 IU 이하의 IFN-α를 처리한 동물에서 조차도 구강 점막 IFN 치료시에 관측된 혈액학 또는 혈액 화학적 변수중 어느 것에 대해서도 일치하지 않는 효과가 관측되지 않았다.

¹²⁵I-표지된 IFN-α 1-8의 구강 점막 투여후 동물의 전혈 및 혈청 둘다에서 쉽게 관측가능한 양의 방사능표지된 물질이 발견되었다. 이 결과를 다량의 비표지된 IFN를 경구 투여한 후에도 동물의 혈청에서 IFN을 검출하는데 실패한 이전 시험 결과와 비교하였다. 그러나, 구강 점막 투여후 전혈 및 혈청 모두에서 검출된 방사능 물질은 생물학적으로 불활성이었다. 더욱더, SDS-PAGE 분석 결과는 상기 물질이 저 분자량을 가졌음을 나타냈으며, 위장 및 소장내에서 IFN이 소화된 후 분해 산물의 흡수를 나타낸다. 구강 점막 투여후 방사능 표지 물질의 조직 분포 검사는 시험한 다른 기관중 어느 기관보다 위장에서 현저히 많은 양의 방사능을 나타냈다. 실험 결과는 구강 점막 투여후 생물학적 활성의 IFN이 관측되지 않더라도, 상기 처리가 생체내에서 통계학적으로 상당한 항종양 활성을 발휘함을 아주 분명하게 나타낸다.

관측된 유익한 효과에 대해 제안된 임의의 매카니즘에 구속되길 원치않지만, 시험 결과는 구강 점막 투여된 IFN이 외부에서 투여된 IFN의 직접 작용, 또는 내재성 IFN의 유도를 수반하지 않는, 현재까지 정립되지 않은 새로운 매카니즘에 의해 종양 세포에 대해 영향을 미친다고 시사하고 있다. 시험한 3가지 바이오마커 또는 순환형 IFN이 검출가능한 양으로 존재하지 않는다는 사실이 상기 제안을 지지한다. 이 기작은 비인두 및 식도를 둘러싸고 있는 풍부한 림프양 조직의 자극에 적어도 부분적으로 작용할 수 있음을 나타낸다. 본 출원인은 구강 점막 IFN이 전신 투여된 IFN과 적어도 효능면에서 필적할 만하다고 나타냈기 때문에, 시험 결과는 종양 질환 치료에 구강 점막 경로로 IFN을 투여하기 위한 강력한 후원자 역할을 수행한다. 이것은 IFN의 임상 용도에 대한 중요한 암시가 될 수 있다.

명료함 및 이해를 위해 본 발명을 일부에서 상세하게 기술했지만, 당해 분야의 숙련가들은 본 명세서에 개시된 발명의 개념 범위에서 벗어나지 않고 본원에 기술된 태양 및 방법에 대해 다양한 변화를 이룩할 수 있다는 사실을 알것이다.

Claims

비경구 투여할 때 포유동물에서 병적 반응을 야기하는 양보다 적은 양인 약 1500 IU 내지 약 20 x 10⁶IU의 치료 효과량의 인터페론을 구강 점막(oromucosal) 접촉에 의해 포유동물에게 투여함을 포함하는, 포유동물에서 신생물 증상을 치료하는 방법.
제 1 항에 있어서,

효과량의 인터페론을 단일 투여량으로 투여하는 방법.
제 1 항에 있어서,

병적 반응을 유발하지 않고, 단일 투여량에 상당하는 치료 반응을 유도하기에 충분한 시간동안 효과량의 인터페론을 복수의 더 작은 투여량으로 투여하는 방법.
제 1 항에 있어서,

병적 반응을 유발하지 않고, 단일 투여량에 상당하는 치료 반응을 유도하기에 충분한 시간동안 인터페론의 투여량을 연속 투여하는 방법.
제 1 항에 있어서,

인터페론의 총 투여량이 인터페론 약 5000 IU 내지 약 20 x 10⁶IU인 방법.
제 1 항에 있어서,

인터페론의 투여량이 하루에 인터페론 약 1 x 10⁴IU 내지 약 20 x 10⁶IU인 방법.
제 1 항에 있어서,

인터페론의 투여량이 하루에 인터페론 약 1 x 10⁴IU 내지 약 1 x 10⁶IU인 방법.
제 1 항에 있어서,

방사선 또는 화학요법을 결합함을 또한 포함하는 방법.
제 1 항에 있어서,

다른 사이토킨 또는 인터페론 유도물질의 투여를 또한 포함하는 방법.
제 1 항에 있어서,

인터페론이 I형 인터페론을 포함하는 방법.
제 10 항에 있어서,

인터페론이 IFN-α, IFN-β, IFN-ω, 콘센서스 IFN 및 이들의 혼합물로 구성된 군중에서 선택되는 방법.
제 11 항에 있어서,

IFN-α가 재조합 IFN-α를 포함하는 방법.
제 1 항에 있어서,

인터페론이 II형 인터페론을 포함하는 방법.
제 13 항에 있어서,

II형 인터페론이 γ-IFN을 포함하는 방법.
제 1 항에 있어서,

신생물 증상이 비 바이러스성 병인학을 갖는 방법.
비경구 투여할 때 포유동물에서 병적 반응을 야기하는 양보다 적은 양인 약 1500 IU 내지 약 20 x 10⁶IU의 치료 효과량의 인터페론을 구강 점막 접촉에 의해 포유동물에게 투여함을 포함하는, 포유동물에서 다발성 골수종, 모양세포성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 저급 림프종, 피부 T세포 림프종, 암종, 신장 종양, 신장세포암, 간세포암을 포함하는 암, 혈액학적 악성종양, 결장직장암, 신경교아세포종, 폐암, 결장암, 악성 흑색종 또는 악성 뇌종양을 포함하는 뇌 종양을 치료하는 방법.
제 16 항에 있어서,

효과량의 인터페론을 단일 투여량으로 투여하는 방법.
제 16 항에 있어서,

병적 반응을 유발하지 않고, 단일 투여량에 상당하는 치료 반응을 유도하기에 충분한 시간동안 효과량의 인터페론을 복수의 더 작은 투여량으로 투여하는 방법.
제 16 항에 있어서,

병적 반응을 유발하지 않고, 단일 투여량에 상당하는 치료 반응을 유도하기에 충분한 시간동안 인터페론의 투여량을 연속 투여하는 방법.
제 16 항에 있어서,

인터페론의 총 투여량이 인터페론 약 5000 IU 내지 약 20 x 10⁶IU인 방법.
제 16 항에 있어서,

인터페론의 투여량이 하루에 인터페론 약 1 x 10⁴IU 내지 약 20 x 10⁶IU인 방법.
제 16 항에 있어서,

인터페론의 투여량이 하루에 인터페론 약 1 x 10⁴IU 내지 약 1 x 10⁶IU인 방법.
제 16 항에 있어서,

방사선 또는 화학요법을 결합함을 또한 포함하는 방법.
제 16 항에 있어서,

다른 사이토킨 또는 인터페론 유도물질의 투여를 또한 포함하는 방법.
제 16 항에 있어서,

인터페론이 I형 인터페론을 포함하는 방법.
제 25 항에 있어서,

인터페론이 IFN-α, IFN-β, IFN-ω, 콘센서스 IFN 및 이들의 혼합물로 구성된 군중에서 선택되는 방법.
제 26 항에 있어서,

IFN-α가 재조합 IFN-α를 포함하는 방법.
제 16 항에 있어서,

인터페론이 II형 인터페론을 포함하는 방법.
제 28 항에 있어서,

인터페론이 γ-IFN을 포함하는 방법.
비경구 투여할 때 포유동물에서 병적 반응을 야기하는 양보다 적은 양인 약 1500 IU 내지 약 20 x 10⁶IU의 치료 효과량의 인터페론을 포함하는, 포유동물에서 신생물 증상을 치료하기 위한 구강 점막 접촉용 약제의 제조시 인터페론의 용도.
제 30 항에 있어서,

상기 신생물 증상이 다발성골수종, 모양세포성백혈병, 만성 골수성 백혈병, 저급 림프종, 피부 T-세포 림프종, 암종, 경부암, 카포시 육종을 비롯한 육종, 신장 종양, 신장세포암, 간세포암, 비인두 암을 비롯한 암, 혈액학적 악성종양, 결장직장암, 신경교아세포종, 후두 유두종, 폐암, 결장암, 악성 흑색종, 또는 악성 뇌종양을 비롯한 뇌종양을 포함하는 뇌종양인 용도.
제 30 항 또는 제 31 항에 있어서,

약제가 단일 투여량의 인터페론을 포함하는 용도.
제 30 항 또는 제 31 항에 있어서,

약제가 병적 반응을 유발하지 않고, 단일 투여량에 상당하는 치료 반응을 유도하기에 충분한 복수의 더 작은 투여량의 인터페론을 포함하는 용도.
제 30 항 내지 제 33 항중 어느 한 항에 있어서,

약제가 병적 반응을 유발하지 않고, 단일 투여량에 상당하는 항 신생물 반응을 유도하기에 충분한 시간동안 인터페론의 투여량을 연속 투여하는 용도.
제 30 항 내지 제 34 항중 어느 한 항에 있어서,

약제가 또다른 사이토킨 또는 인터페론 유도물질을 포함하는 용도.
제 30 항 내지 제 35 항중 어느 한 항에 있어서,

약제가 인터페론 약 1500 IU 내지 약 20 x 10⁶IU를 투여하기에 적합한 용도.
제 36 항에 있어서,

약제가 하루에 인터페론 약 1 x 10⁴IU 내지 약 20 x 10⁶IU를 투여하기에 적합한 용도.
제 37 항에 있어서,

약제가 하루에 인터페론 약 1 x 10⁴IU 내지 약 1 x 10⁶IU를 투여하기에 적합한 용도.
제 30 항 내지 제 38 항중 어느 한 항에 있어서,

약제가 동시 치료, 별도 치료 또는 연속 치료를 위한 또다른 치료제를 포함하는 용도.
제 39 항에 있어서,

치료제가 세포증식억제제, 항암제 및 항맥관형성제로 구성된 군중에서 선택되는 용도.
제 30 항 내지 제 40 항중 어느 한 항에 있어서,

인터페론이 I형 인터페론인 용도.
제 41 항에 있어서,

인터페론이 IFN-α, IFN-β, IFN-ω, 콘센서스 IFN 및 이들의 혼합물로 구성된 군중에서 선택되는 용도.
제 42 항에 있어서,

I형 인터페론이 IFN-α인 용도.
제 30 항 내지 제 40 항중 어느 한 항에 있어서,

인터페론이 II형 인터페론인 용도.
제 44 항에 있어서,

II형 인터페론이 IFN-γ인 용도.
제 41 항 또는 제 44 항에 있어서,

인터페론이 재조합 물질인 용도.
제 30 항 내지 제 46 항중 어느 한 항에 있어서,

상기 신생물 증상이 다발성 골수종, 모양세포성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 저급 림프종, 피부 T세포 림프종, 암종, 신장 종양, 신장세포암, 간세포암을 포함하는 암, 혈액학적 악성종양, 결장직장암, 신경교아세포종, 폐암, 결장암, 악성 흑색종 또는 악성 뇌종양을 포함하는 뇌 종양인 용도.
비경구 투여할 때 포유동물에서 병적 반응을 야기하는 양보다 적은 양인 약 1500 IU 내지 약 20 x 10⁶IU의 치료 효과량의 구강 점막 접촉에 적합한 인터페론을 포함하는, 포유동물에서 항 신생물 반응 자극용 인터페론 조성물.
제 48 항에 있어서,

인터페론 약 5000 IU 내지 약 20 x 10⁶IU 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 단위 투여형의 조성물.
제 49 항에 있어서,

인터페론 약 1 x 10⁴IU 내지 약 20 x 10⁶IU를 포함하는 조성물.
제 50 항에 있어서,

인터페론 약 1 x 10⁴IU 내지 약 1 x 10⁶IU를 포함하는 조성물.
제 48 항에 있어서,

상기 신생물 증상이 다발성골수종, 모양세포성백혈병, 만성 골수성 백혈병, 저급 림프종, 피부 T세포 림프종, 암종, 경부암, 카포시 육종을 비롯한 육종, 신장 종양, 신장세포암, 간세포암, 비인두 암을 비롯한 암, 혈액학적 악성종양, 결장직장암, 신경교아세포종, 후두 유두종, 폐암, 결장암, 악성 흑색종, 또는 악성 뇌종양인 조성물.
제 48 항 또는 제 52 항에 있어서,

단일 투여량의 인터페론을 포함하는 조성물.
제 48 항 또는 제 52 항에 있어서,

병적 반응을 유발하지 않고, 단일 투여량에 상당하는 치료 반응을 유도하기에 충분한 복수의 더 작은 투여량의 인터페론을 포함하는 조성물.
제 48 항 내지 제 54 항중 어느 한 항에 있어서,

병적 반응을 유발하지 않고, 단일 투여량에 상당하는 항-신생물 반응을 유도하기에 충분한 시간동안 인터페론의 투여량을 연속 투여하는 조성물.
제 48 항 내지 제 55 항중 어느 한 항에 있어서,

또다른 사이토킨 또는 인터페론 유도물질을 포함하는 조성물.
제 48 항 내지 제 56 항중 어느 한 항에 있어서,

동시 치료, 별도 치료 또는 연속 치료를 위한 또다른 치료제를 포함하는 조성물.
제 57 항에 있어서,

치료제가 세포증식억제제, 항암제 및 항맥관형성제로 구성된 군중에서 선택되는 조성물.
제 48 항 내지 제 58 항중 어느 한 항에 있어서,

인터페론이 I형 인터페론인 조성물.
제 59 항에 있어서,

인터페론이 IFN-α, IFN-β, IFN-ω, 콘센서스 IFN 및 이들의 혼합물로 구성된 군중에서 선택되는 조성물.
제 60 항에 있어서,

I형 인터페론이 IFN-α인 조성물.
제 48 항 내지 제 58 항중 어느 한 항에 있어서,

인터페론이 II형 인터페론인 조성물.
제 62 항에 있어서,

II형 인터페론이 IFN-γ를 포함하는 조성물.
제 59 항 또는 제 62 항에 있어서,

인터페론이 재조합 물질인 조성물.
제 48 항 내지 제 64 항중 어느 한 항에 있어서,

상기 신생물 증상이 다발성골수종, 모양세포성백혈병, 만성 골수성 백혈병, 저급 림프종, 피부 T-세포 림프종, 암종, 신장 종양, 신장세포암, 간세포암종을 포함하는 암, 혈액학적 악성종양, 결장직장암, 신경교아세포종, 폐암, 결장암, 악성 흑색종 또는 악성 뇌종양을 포함하는 뇌종양인 조성물.