KR19990035757A - 생체 내 당뇨병 시험 방법 - Google Patents

생체 내 당뇨병 시험 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 세포 조정 질병 또는 세포 조정 질병에 걸리기 쉬운 경향을 진단하기 위한 제제를 제조하기 위해서 자가반응성 물질을 사용하는 방법에 관한것이며, 상기 제제는 피내로 투여되고, 진단은 적용 부위에서의 양성 반응의 발생 여부를 기준으로 한다.

Description

생체 내 당뇨병 시험 방법
도 1은 인간 GAD 65kd으로부터의 자가반응성 아미노산 서열을 나타내며,
도 2는 인간 GAD 65kd으로부터의 자가반응성 아미노산 서열을 추가로 나타내며,
서열 번호. 1 내지 7은 인간 GAD (Ⅰ) 내지 (Ⅶ)로부터의 자가반응성 아미노산 서열을 나타내며,
서열 번호. 8 내지 11은 도 1에 따른 인간 GAD로부터의 자가반응성 아미노산 서열을 나타내며,
서열 번호. 12 내지 28은 도 2에 따른 인간 GAD로부터의 자가반응성 아미노산 서열을 나타내고,
서열 번호. 29 및 30은 인간 GAD (Ⅷ) 및 (Ⅸ)으로부터의 자가반응성 아미노산 서열을 나타낸다.
본 발명은 면역 시스템에 영향을 끼치는 세포 조정 질병 또는 세포 조정 질병에 걸리기 쉬운 경향을 진단하기 위한 제제를 제조하기 위해서 자가반응성 물질을 사용하는 방법에 관한 것이다.
류마티스성관절염 및 유년성 당뇨병(IDDM)과 같은 자가면역 질병의 발달에서 분자의 관계의 해명은 최근 몇 년 동안 빠르게 진보되어 왔고, 현재 이러한 질병의 초기 진단 및 원인 치료를 위한 구체적인 적용법이 발표되고 있다.
또한, 현재 유전자 배열 이외에, 환경 인자가 이러한 질병의 발생에 역할을 한다는 것은 입증되었다. 유전적 위험 인자의 수준에서, MHC 클래스 Ⅱ 항원의 단지 몇 개의 대립유전자는, 예를 들어 IDDM의 경우에, 이러한 질병과 밀접하게 관계된다. 따라서, 이러한 대립유전자의 분석에 의해 IDDM에 대한 위험 그룹을 규정 짓는 것이 가능하다. [참조 문헌: Thomson et al., Am. J. Hum. Genet. 43 (1988), 799-816 or Todd et al., Nature 329 (1987), 599-604].
IDDM의 발생과 관계된 환경 인자는 아마도 외인성 면역원성 활성 펩티드 서열일 것이다. 이와 관련하여, 특히, 내인성 구조와 부분적 상동관계를 갖는 바이러스 항원이 논의되어 왔다. 특정 환경하에, 상세하게는 출생 후에, 소 혈청 알부민과 같은 음식을 통해 흡수된 항원이 내인성 구조와의 상동관계 때문에, 자가공격 과정을 개시할 수 있는 면역 반응을 유도할 수 있다.
세포독성 림프구에 의한 췌장 β 세포의 진행성 파괴는 IDDM에서 질병의 경로가 통상적이다. 이 과정은 글루코스 대사의 손상이 명백해 지기 전에 오래 전에 시작된다. 당뇨병의 증상을 검출할 수 있을 때는, 이미 β 세포의 80% 이상이 파괴된 시기이다. 따라서, 원인 요법을 이환 개체에 제공할 수 있도록 하기 위해 초기 위험 상태의 사람에서 이러한 자가공격성 T 세포를 검출할 수 있는 것은 매우 중요하다.
오늘날, 자가면역 질병에서 내인성 조직의 파괴가 초기에는 아주 서서히 진행된다는 것이 입증되었다. 이러한 과정의 초기 단계에서, 자가공격성 T 세포는 아마도 단지 하나 또는 몇 개의 자가항원을 인식할 것이다. 타입 Ⅰ 당뇨병의 동물 모델(NOD 마우스)에 대한 문헌[Kaufman et al. (Nature 368 (1993), 69-72) and Tisch et al. (Nature 368 (1993), 72-78)]에, 이러한 마우스 계통에서 당뇨병이 자연적으로 발생하는 경우, 초기 T 세포 조정 자가면역 반응이 글루타민산 데카르복실라제에 의해 지배됨이 기록되어 있다. 초기에, 글루타민산 데카르복실라제(GAD)의 C-말단에서의 단지 1 내지 2 개의 에피토프가 이러한 과정중에 NOD 마우스에서 인식된다. 상기에 설명한 바와 같이, 글루코스 대사작용의 변화는 아직 이 단계에서는 검출할 수 없고, 반면 이와 반대로 퍼인슐리티는 이미 검출 가능하다. 질병이 더 진행될 때 까지는, 자가공격성 T 세포에 의해 인식되는 GAD의 펩티드의 범위가 더 넓어지게 되지는 않는다. 당뇨병이 일단 발현되면, 다른 소섬 세포 항원 예를 들어, 페리페린, 열충격 단백질 HSP 65 및 카르복시펩티다제 H에 대한 사전 활성화된 T 세포를 검출하는 것이 또한 가능하다.
또한, 인간에서 GAD에 대한 면역 반응이 타입 Ⅰ 당뇨병의 발생과 인과관계가 있음을 증명한다. 따라서, 예를 들어 비록 GAD에 대한 자가항체의 병인론적 역할이 낮게 평가됐지만, 이러한 자가항체는 당뇨병 전기의 약 80%에서 검출될 수 있다. 오히려, 타입 Ⅰ 당뇨병에서 T 림프구에 의한 췌장 β-세포의 진행성 파괴가 추정될 수 있다. GAD에 지배되는 이러한 T 림프구는 이미 여러 연구 기관(Harrison et al., J.Clin. Ivest. 89 (1992), 1161; Honeyman et al., J.Exp. Med. 177 (1993), 535)에 의해 검출되었다. 이러한 기관에 의해 발견된 T 림프구는 아미노산 208 내지 404개를 포함하는 GAD 67 kd 분자의 펩티드 단편과 반응하였다.
인간 GAD 65 kd 분자로부터의 폴리펩티드의 자가면역 반응이 EP-A- 0 519 469에 기록되어 있다. 이러한 폴리펩티드는 하기 아미노산 서열을 갖는다:
X-P-E-V-K-(T 또는 E)-K-Z
상기 아미노산 서열에서,
X는 1 내지 10개의 아미노산으로부터 선택된 임의의 서열이고,
Z는 1 내지 8개의 아미노산으로부터 선택된 임의의 서열이다.
또한, 인간 GAD 65 kd으로부터의 자가반응성 펩티드 서열 및 이러한 펩티드를 함유하는 약제학적 조성물이 유럽 특허 출원 제 95 100 764.0호에 제시되어 있다. 또한, 면역 시스템에 영향을 끼치는 질병 또는 이러한 질병에 걸리기 쉬운 경향을 진단하기 위한, 또는 종양 질병 또는 종양 질병에 걸리기 쉬운 경향을 진단하기 위한 제제를 제조하기 위한 이러한 약제학적 조성물의 사용법이 설명되어 있다.
본 발명의 목적 중 하나는 한편으로는 환자에게 가능한한 불편함을 유발하지 않고, 다른 한편으로는 신속하고 믿을 수 있는 진단을 가능하게 하는 면역 시스템의 세포 조정 질병, 특히 자가면역 질병에 대한 진단 방법을 제공하는 것이다.
상기 목적은 세포 조정 질병 또는 세포 조정 질병에 걸리기 쉬운 경향을 진단하기 위한 제제를 제조하기 위해서 자가반응성 물질을 사용함으로써 달성되며, 상기 제제는 진피내 또는 피내로 투여되고, 진단은 적용 부위에서 양성 반응의 발생 여부를 기준으로 한다.
본 발명에 따른 진단 방법은 세포 조정 면역에 대한 일반적인 시험에 이용되는 시중의 현재 이용 가능한 방법과는 다르며, 이러한 시험은 환자에게 이미 노출된 외인성 항원, 예를 들어 정제된 단백질 유도체(PPD), 테타누스 유독소, 캔디다 등을 사용한다. 이러한 시험은 피검자의 면역 시스템의 일반적인 상태를 측정하는데 이용된다. 면역 시스템의 세포 조정 질병은 진단되지 않는다.
알레르기 반응을 측정하는데 이용되던 단자 시험과 같은 넓게 이용되는 또 다른 시험에서, 항원은 피내 투여되지 않는다. T 세포 조정되지 않는 양성 반응은 4 시간 내에 검출될 수 있고, 결절의 출현이 아닌 표면 종창의 출현을 특징으로 한다.
본 발명은 자가반응성 물질에 대한 세포 조정 면역 반응의 발생을 생체내에서 검출하기 위한 방법을 제공한다. 이러한 세포 조정 면역 반응은 면역 시스템의 특정 질병 특히, 자가면역 질병 또는 이러한 질병에 걸리기 쉬운 경향의 존재를 나타낸다. 또한, 세포 조정 면역 반응은 종양 질병 또는 이러한 질병에 걸리기 쉬운 경향의 존재를 나타낼 수 있다.
본 발명에 따른 방법에 적합한 자가반응성 물질 또는 자가항원은 핵산, 지질, 당, 폴리펩티드, 단백질, 펩티드 및 이들의 복합체 예를 들어, MHC 분자 또는 펩티드 결합 유도체와 같은 폴리펩티드와 펩티드의 복합체와 같은 자연적, 합성적 또는 재조합 물질이다. 또한 적합한 자가반응성 물질은 특정 면역원 에피토프, 단편, 유사체, 모방체 또는 유도체이며, 이들은 예를 들어, 화학적 변형 및 상기 언급된 물질의 혼합에 의해 제조된다. 자가반응성 물질은 담체 결합 형태 예를 들어, 리포펩티드의 형태처럼 또는 이러한 형태로 투여될 수 있다. 자가반응성 물질은 단독으로, 또는 보조의 자극 성분 또는 보조제과 같은 추가적 물질과 함께 투여될 수 있다. 자가항원은 재조합 DNA 기술, 또는 예를 들어, 펩티드 고체상 합성과 같은 합성적 방법에 의해 천연 원료로부터 생성된다. 내인성 항원의 감지에서 자가반응성 물질에 추가적으로, 외인성 항원임에도 불구하고 자가항원과 면역학적으로 관련된 이러한 자가반응성 물질을 사용하는 것이 또한 가능하다. 이러한 외인성 항원의 예는 내인성 단백질로부터의 자가반응성 펩티드 서열과 상동관계를 갖는 펩티드이다. 특정 예는 서열 Q-I-G-P-G-P-I-P-W(aa 412-420)의 영역에서 내인성 글루코스 수송체 GLUT-2에 대한 상동 영역을 갖는 서열 L-V-Y-P-G-P-I-P-N(aa 60-68)을 갖는 소 β-카세인 A로 부터의 펩티드 및 서열 R-F-K-M-F-P-E-V-K-E-K-G-M(aa 155-167)의 영역에서 글루타메이트 데카르복실라제에 대한 상동 영역을 갖는 서열 K-V-K-I-L-P-E-V-K-E-K-H-E(aa 33-45)을 갖는 콕새키 바이러스 단백질 P2-C로부터의 펩티드이다.
본 발명에 따른 방법은 각각의 자가항원의 피내 투여 및 투여 부위에서 국부적 양성 세포 반응의 발생 여부의 측정을 포함한다. 이러한 양성 반응은 T 세포 조정 면역 반응을 나타내는 시간, 바람직하게는 투여 후 24시간 이상 경과후에, 특히 바람직하게는 투여 후 24시간 내지 1주일 내에 및 가장 바람직하게는 투여 후 40시간 내지 80시간 내에 측정된다.
바람직하게는, 양성 반응이 투여 부위에서 소절의 출현을 포함하고, 시각적 관찰 및/또는 촉진에 의해 정성적으로 측정될 수 있고, 또한 예를 들어, 울트라사운드 또는 사진 촬영법에 의해 정량적으로 측정될 수 있다.
다른 한 편으로는, 양성 반응의 생성물, 예를 들어 γ 인터페론과 같은 시토킨을 측정하는 것이 또한 가능하고, 상기 γ 인터페론은 투여 부위에서 세포 예를 들어, 백혈구를 침윤시킴으로서 방출된다.
본 발명에 따른 방법은 자가면역 질병 또는 자가면역 질병에 걸리기 쉬운 경향을 진단하기에 특히 적합하다.
본 발명에 따른 방법에 의해 진단될 수 있는 자가면역 질병의 예는 특정 타입 Ⅰ 당뇨병(IDDM)중의 진성 당뇨병, 다발성 경화증, 류마티스성관절염, 바세도우병, 강직성 척추염, 급성 전포도막염, 구드패스츄어 증후군, 중증근무력증, 전신성 홍반성 루프스, 심상성 천포창, 면역 갑상선염, 피부경화증, 크론병, 쇼그렌증후군, 라이터증후군, 염증성 장병 또는 그레이브스병이다. 특히, 본 발명에 따른 방법을 IDDM, 류마티스성관절염 또는 다발성 경화증과 같은 T 세포 조정 질병을 진단하는데 이용하는 것이 바람직하고, 본 발명에 따른 방법을 IDDM을 진단하는데 이용하는 것이 가장 바람직하다.
예를 들어, IDDM 진단에 사용되는 자가반응성 물질은 글루타민산 데카르복실라제(GAD) 65kd 또는 67kd, 티로신 포스파타제(38kd 항원), 카르복시펩티다제 H, 인슐린, 열충격 단백질, 38kd 인슐린 분비 미립 단백질 또는 이들의 일부이다. 인간 GAD 65kd 또는 이들의 펩티드 일부 서열이 자가반응 물질로서 사용되는 것이 특히 바람직하다.
그러나, 유사한 진단 적용 분야는 또한 다른 자가면역 질병 진단을 가능하게 한다. 자가면역 질병과 같은 예는 예를 들어, 미엘린 염기 단백질 또는 프로테오리피드 단백질에 대한 반응성 T 세포가 측정될 수 있는 다발성 경화증, 예를 들어 교원질 타입 Ⅱ, 시토케라틴, 대장균으로부터 추출된 dnaJ 단백질 및 Hsp 65에 대한 반응성 T 세포가 측정될 수 있는 류마티스성관절염, 및 예를 들어 티로이드 퍼옥시다제에 대한 반응성 T 세포가 측정될 수 있는 바세도우병이다. 중증근무력증의 경우에서, 아세틸콜린 수용기 또는 다른 관련된 자가반응성 물질에 대한 반응성 T 세포를 측정하는 것이 가능하다. 홍반성 루푸스의 경우, HSP 90에 대한 반응성 T 세포가 측정되고, 그레이브스병의 경우는 TSH 수용기에 대한 T 세포가 측정된다.
일반적으로 진단 적용 분야는 예를 들어, 동맥경화증의 경우와 같은 면역 시스템에 영향을 끼치는 모든 질병에 대한 진단이 가능하다. 이러한 경우, 질병은 열충격 단백질 Hsp 65에 대한 면역 반응과 관련됨이 증명되었다[참고 문헌: Xu et al., Lancet 341, 8840 (1993), 255-259].
추가적 적용 분야는 종양 항원과 반응하는 T 세포의 진단상 검출이다. 이러한 예는 흑색종 환자로부터 분리된 흑색종 결합 항원 MAGE 1에 대한 T 세포이다[참고 문헌: van der Bruggen et al., Science 254 (1991), 1643-1647]. 세포 매스가 너무 적어서, 종양이 통상적인 방법에 의해 아직 검출되지 않은 단계에서 이러한 T 세포는 이미 검출될 수 있다. 게다가, 특히 T 세포 반응은 또한 항종양 백신을 모니터하는데 이용될 수 있다.
또한, 자가반응성 물질로서 비슷하게 결합하는 펩티드, 펩티드 유도체 또는 분자를 사용하는 것이 가능하다. IDDM의 진단에 있어서, GAD, 더욱 상세하게는 인간 GAD 65kd로부터의 하나 또는 몇 개의 펩티드, 또는 이들로부터 유도된 펩티드 유도체 또는 펩티드 모방체에 사용되는 것이 바람직하다.
하기 서열을 포함하는 IDDM 펩티드 또는 펩티드 유도체의 진단이 이용되는 것이 특히 바람직하다.
(a) 아미노산 서열 (Ⅰ)
D-V-N-Y-A-F-L-H-A-T-D-L-L-P-A-C-D-G-E-R,
(b) 아미노산 서열 (Ⅱ)
S-N-M-Y-A-M-M-I-A-R-F-K-M-F-P-E-V-K-E-K,
(c) 아미노산 서열 (Ⅲ)
N-W-E-L-A-D-Q-P-Q-N-L-E-E-I-L-M-H-C-Q-T,
(d) 아미노산 서열 (Ⅳ)
T-L-K-Y-A-I-K-T-G-H-P-R-Y-F-N-Q-L-S-T-G,
(e) 아미노산 서열 (Ⅴ)
P-R-Y-F-N-Q-L-S-T-G-L-D-M-V-G-L-A-A-D-W,
(f) 아미노산 서열 (Ⅵ)
T-Y-E-I-A-P-V-F-V-L-L-E-Y-V-T-L-K-K-M-R,
(g) 아미노산 서열 (Ⅶ)
F-F-R-M-V-I-S-N-P-A-A-T-H-Q-D-I-D-F-L-I,
(h) 아미노산 서열 (Ⅷ)
G-M-A-A-L-P-R-L-I-A-F-T-S-E-H-S-H-F-S-L-K-K-G-A-A,
(i) 아미노산 서열 (Ⅸ)
E-R-G-K-M-I-P-S-D-L-E-R-R-I-L-E-A-K-Q-K,
(j) 도 1 또는 2에 기재된 아미노산 서열중의 하나.
(k) 6개 이상의 아미노산 길이를 갖는 (a) 내지 (i)에 기재된 아미노산 서열의 일부 영역, 및/또는
(l) MHC 분자에 대한 결합의 특이성 및/또는 친화성이 (a) 내지 (j)에 기재된 아미노산 서열과 동등한 아미노산 서열.
아미노산 서열 (Ⅰ) 내지 (Ⅶ)은 인간 GAD 65kd의 아미노산 잔기 86 내지 105 (Ⅰ), 246 내지 265 (Ⅱ), 146 내지 165 (Ⅲ), 166 내지 186 (Ⅳ), 176 내지 195 (Ⅴ), 206 내지 225 (Ⅵ), 및 556 내지 575 (Ⅶ)에 대응한다. 아미노산 서열 Ⅰ 내지 Ⅶ은 서열 프로토콜 서열 번호.1 내지 7에 지정된다.
아미노산 서열 (Ⅷ)은 인간 GAD 65kd의 아미노산 잔기 266 내지 290에 대응하고, 아미노산 서열 (Ⅸ)은 인간 GAD 65kd의 아미노산 잔기 306 내지 325에 대응한다. 도 1 내지 도 2에 기재된 아미노산 서열은 또한 인간 GAD 65kd의 일부 서열이다. 도 1 내지 도 2의 아미노산 서열은 서열 프로토콜 서열 번호. 8 내지 28에 제공된다. 아미노산 서열 (Ⅷ) 및 (Ⅸ)은 서열 프로토콜 서열 번호. 29 및 30에 제공된다.
인간 GAD 65의 상기 영역을 함유하는 펩티드가 최근에 발견된 타입 Ⅰ 당뇨병 환자로부터 분리된 T 세포 부차집단과 특정하게 반응한다는 것이 놀랍게도 발견되었다. 따라서, 본 발명에 따른 펩티드는 타입 Ⅰ 당뇨병을 아주 초기에 진단할 수 있는 초기 자가에피토프이다.
아미노산 서열 (Ⅰ) 내지 (Ⅸ)은 부(Bu) 등(Proc. Nat. Acad. Sci. USA 89 (1992), 2115 ff)에 의해 설명된 인간 글루타민산(GAD) 전 아미노산 서열의 65kd 이소폼(isoform)의 일부 영역이다. 아미노산 서열 (Ⅰ) 내지 (Ⅸ)은 타입 Ⅰ 당뇨병의 말초 혈액으로부터의 T 세포 계통을 짜맞춘 후, 생체외에서 돼지 뇌로부터의 GAD로 또는 재조합 인간 GAD로 이들을 자극하고, 증식 분석에서 인간 GAD 서열로부터 유도된 합성 펩티드 서열로 이러한 T 세포 계통을 시험함으로서 발견되었다.
펩티드는 화학적 방법을 이용한 공지된 합성 방법에 의해 생성될 수 있거나 특정 대장균중에서 적합한 숙주 세포중의 이러한 펩티드에 대한 DNA 서열 코딩을 클로닝하고 발현시키는 유전적 기술에 의해 생성될 수 있다.
또한, 펩티드가 6개 이상의 아미노산, 바람직하게는 8개 이상의 아미노산, 특히 바람직하게는 10개 이상의 아미노산 및 가장 바람직하게는 15개 이상의 아미노산의 길이를 갖는 도 1 및 도 2에 기재된 아미노산 서열의 특정 아미노산 서열 (Ⅰ) 내지 (Ⅸ)의 일부 영역을 갖는 것이 바람직하다. 본 발명에 따른 펩티드의 최소 길이는 MHC 분자를 인식하며, MHC 분자에 특정하게 결합하고, 대응하는 T 세포 수용기와 반응하는 펩티드의 능력에 의해 결정된다.
GAD로부터 유도되고 MHC에 결합하는 본 발명에 따른 펩티드의 분획의 최대 길이는 100 아미노산이 바람직하며, 50 아미노산이 특히 바람직하고, 25 아미노산이 가장 바람직하다.
상기 펩티드에 첨가적으로, 상기 서열로서 MHC 분자에 대한 결합의 특이성 및/또는 친화성이 상기 서열과 본질적으로 동등한 펩티드를 사용하는 것이 또한 가능하고, 펩티드는 유사한 방식으로 결합하는 아미노산 잔기 또는 변형된 물질의 짧은 분획 또는 각각의 아미노산 잔기의 치환, 삭제 또는 삽입에 의해 상기 아미노산 서열로부터 유도되는 것이 바람직하다.
더욱 상세하게는, 본 발명은 또한 서열이 상기 아미노산 서열의 펩티드 서열에 완전히 대응하지 않지만, 대신 같거나 밀접하게 관계된 "유지 위치(anchor position)"를 갖는 펩티드 변형에 관한 것이다. 덧붙여 말하면, 본 원에서 사용된 용어 "유지 위치"는 MHC 분자 더욱 상세하게는, 클래스 DR3, DR4 또는 DQ의 MHC 분자에 결합하는데 필수적인 아미노산 잔기를 의미한다. DRB10401 결합 모티프의 유지 위치는 예를 들어 문헌[Hammer et al., Cell 74 (1993), 197-203]에 언급되어 있다. 이러한 유지 위치는 본 발명에 따른 펩티드에 보존되고, 선택적으로 사이드 사슬에 화학적으로 아주 밀접하게 관련된 아미노산 잔기에 의해 대체될 수 있다(예를 들어, 알라닌을 발린으로 대체, 루신을 이소루신 및 비스 벌사(vice versa)로 대체). 본 발명에 따른 펩티드중의 유지 위치는 MHC 분자에 결합하는 이들의 능력에 대한 상기 특정 펩티드의 상이함을 시험하는 간단한 방식에 의해 측정될 수 있다. 본 발명에 따른 펩티드의 특징은 MHC 분자에 대한 결합의 특이성 및/또는 친화성이 상기 펩티드와 동등하다는 점이다. 이들 펩티드로부터 유도된 펩티드는 초기 펩티드 또는 이들의 일부 서열에 대한 30% 이상, 특히 바람직하게는 50% 이상, 가장 바람직하게는 60% 이상 상동인 서열을 갖는다.
특정 펩티드의 변형의 예는 인간 GAD 67 즉, 상기의 부(Bu) 등에 또한 설명된 전 아미노산 서열로부터 대응하는 상동 펩티드 분획이다.
본 원에서 사용된 용어 "MHC 분자에 대한 결합의 특이성 및/또는 친화성이 본질적으로 동등한"은 또한 아미노산 서열 (Ⅰ) 내지 (Ⅷ) 또는 바람직하게는 8 내지 15 아미노산의 길이를 갖는 짧은 펩티드의 경우에 특히 발견되는 도 1 내지 도 2에 기재된 아미노산 서열과 비교해서 개선된 결합 특이성 및/또는 친화성을 포함한다.
또한, 본 발명은 펩티드 유도체에 관한 것이다. 이 용어는 하나 또는 몇 개의 아미노산이 화학 반응에 의해 유도된 펩티드를 포함한다. 상세하게는, 본 발명에 따른 펩티드 유도체의 예는 예를 들어, 유리 아미노기, 유리 카르복실기 및/또는 유리 수산기와 같은 백본 및/또는 반응성 아미노 사이드 기가 유도된 이러한 분자이다. 아미노기의 유도체의 특정 예는 술폰아미드 또는 카르복시아미드, 티오우레탄 유도체 및 암모늄염 예를 들어, 염산염이다. 카르복실기 유도체의 예는 염, 에스테르 및 아미드이다. 수산기 유도체의 예는 O-아실 또는 O-알킬 유도체이다. 본 발명에 따른 펩티드 유도체라는 용어는 또한 하나 또는 몇몇 아미노산이 자연적으로 발생하는 또는 비자연적으로 발생하는 20 "표준" 아미노산의 아미노산 상동물에 의해 치환된 이러한 펩티드를 포함한다. 이러한 상동물의 예는 4-히드록시프롤린, 5-히드록실신, 3-메틸히스티딘, 호모세린, 오르니틴, β-알라닌 및 4-아미노 부티릭산이다.
추가적으로 적합한 펩티드 유도체는 펩티드와 자가항원 예를 들어, 지질과 같이 투여된 보조제 성분사이의 복합체 또는 공유 결합물이다. 이러한 경우에, 펩티드는 또한 리포펩티드로서 사용될 수 있다.
본 발명은 또한 MHC 결합 펩티드 분획이 더 큰 폴리펩티드 유니트의 성분인 폴리펩티드를 포함하고, 바람직하게는 MHC 결합 펩티드와 폴리펩티드 유니트의 잔여물사이의 결합이 이미 측정된 절단 지점 예를 들어, 프로테아제 절단 부위를 갖는다.
또한, 본 발명은 상기의 펩티드 또는 펩티드 유도체로서 MHC 분자에 대한 특이성 및/또는 친화성이 상기의 펩티드 또는 펩티드 유도체와 본질적으로 동등한 펩티드 모방 물질에 관한 것이다. 펩티드 모방 물질 또는 펩티드 모방체는 MHC 분자와의 펩티드의 상호반응에 대해 펩티드를 대신할 수 있는 화합물이고, 원래 펩티드와 비교해서 더 높은 대사 안정성, 개선된 생체 이용률 및 더 긴 작용 기간을 갖는다. 펩티드 모방체의 제조 방법은 문헌[Giannis and Kolter, Angew. Chem. 105 (1993), 1303-1326, Lee et al., Bull. Chem. Soc. Jpn. 66 (1993), 2006-2010 and Dorsch et al., Kontakte (Darmstadt) (1993) (2), 48-56]에 설명되어 있다. 본 발명에 따른 펩티드 모방 물질의 제조 방법이 상기 참조 문헌에 기록되어 있다.
또한, 적합한 자가반응성 물질은 하나 이상의 펩티드, 펩티드 유도체 또는 펩티드 모방체, 및 MHC 분자의 하나 이상의 MHC 분자 또는 펩티드 결합 유도체를 함유하는 복합물이다. 이 복합물의 경우에, 바람직하게는 10-7ℓ/몰, 특히 바람직하게는 10-8내지 10-9ℓ/몰의 결합 상수를 갖는 펩티드, 펩티드 유도체 또는 펩티드 모방체는 MHC 분자 또는 MHC 분자의 펩티드 결합 유도체에 결합된다. 대안적으로, 펩티드, 펩티드 유도체 또는 펩티드 모방체는 또한 예를 들어, 포토링커(photolinker) 또는 공유 유전적 펩티드-MHC 융합을 통하여 MHC 분자에 공유적으로 또한 커플링될 수 있다. 이러한 펩티드-MHC 융합 단백질은 바람직하게는 HLA-DR 베타 사슬 및 유전적으로 이 사슬에 융합되는 자가반응성 펩티드를 함유한다. 특히 바람직하게는, 복합물은 MHC 클래스 Ⅱ 분자 또는 이들의 펩티드 결합 유도체를 함유한다.
MHC 클래스 Ⅱ 분자를 코딩하는 유전자의 누클레오티드 서열은 문헌[Corell et al., (Mol. Immunol. 28 (1991), 533-543]에 기재되어 있다. 참조문헌은 이 문헌의 내용에 첨부되어 기록되어 있다.
본 원에서 사용된 용어 "MHC 분자의 펩티드 결합 유도체"는 원래의 MHC 분자의 가수분해적 절단에 의해 또는 재조합 DNA 기술에 의해 제조되고, 이들의 펩티드 결합 특성을 본질적으로 유지하는 MHC 분자의 단편을 포함한다. 이 용어는 또한 펩티드 결합을 초래하는 MHC 부분에 추가적으로 또한 폴리펩티드 성분을 함유하는 융합 단백질을 포함하는 것으로 추정된다.
펩티드-MHC 복합물은 펩티드-유리 MHC 분자 또는 본 발명에 따른 펩티드, 펩티드 유도체 또는 펩티드 모방체를 갖는 MHC 분자 유도체의 결합에 의해 제조되는 것이 바람직하다. 펩티드-유리 MHC 분자는 예를 들어, 결합 펩티드를 분리하기 위해 원래의 MHC 분자를 언폴딩(unfolding)하고, 결여된 MHC 분자를 리폴딩(refolding)함으로서 제조될 수 있다[참조 문헌: Dornmair and McConnell, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87 (1990), 4134-4138 and WO91/14710]. 펩티드 및 MHC 분자의 복합물을 제조하기 위한 또 다른 방법은 유럽 특허 출원 제 95 100 764.0.호에 설명되어 있다. 참조 문헌은 상기 문헌에 기록되어 있다.
본 발명은 또한 조성물의 피내 투여를 포함하는 진단 방법에서 선택적으로 보조제 또는 다른 통상적인 약제학적 첨가제와 함께 활성 성분으로서 자가반응성 물질 예를 들어, 단백질, 폴리펩티드, 펩티드, 펩티드 유도체, 펩티드-모방체 및/또는 펩티드-MHC 복합체를 함유하는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 조성물은 추가적으로 보조적인 자극 성분 예를 들어, IL-2 및 IL-4와 같은 시토킨 및/또는 T 세포 상에서 표면 분자 CD-28과 결합할 수 있는 표면 항원 B7[참조: Wyss-Coray et al., Eur. J. Immunol. 23 (1993), 2175-2180; Freeman et al., Science 262 (1993), 909-911]을 함유할 수 있다. 보조적인 자극 성분의 존재는 조성물의 진단 효과를 개선하거나/하고 변경시킬 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 방법에서 양성 및/또는 음성 대조군으로 추가적인 측정이 수행되는 것이 바람직하다. 예를 들어, 인간 혈청 알부민과 같은 비반응 폴리펩티드 또는 단지 완충제와 같은 첨가제를 함유하는 제조물을 음성 대조군으로 이용할 수 있다. 예를 들어, 결핵 박테이라가 배양된(시중에서 예를 들어, Statens Serum Institute, Copenhagen Denmark로부터 구입할 수 있음) 또는 많은 사람들에서 강한 T 세포 자극을 유발하는 것으로 공지된 파상풍 변성독소가 있는 배양 배지로부터 정제된 단백질 유도체(PPD)는 양성 대조 항원으로 이용될 수 있다.
본 발명의 특정 구체예에서, 보조제와 함께 자가반응성 물질을 투여하는 것이 또한 바람직하다. 적합한 보조제의 예는 수산화알루미늄, 불완전한 프로인트보조제, 인산화알루미늄 및 펩티드와 커플링하기에 적합한 리피드(리포펩티드)이다.
자가반응성 물질은 예를 들어, 보통의 피하주사기 예를 들면, 크기가 26G인 바늘이 이용되는 공지된 방법에 의해 투여될 수 있다. 자가반응성 물질을 함유하는 조성물을 면역 시스템의 세포에 제공된 자가항원에 대해 가장 적합한 신체의 적합한 부위에 20㎕ 내지 500㎕, 바람직하게는 50㎕ 내지 200㎕의 용적을 피내로 투여하는 것이 바람직하다. IDDM 진단의 예에 있어서, 이것은 팔뚝(앞 쪽)에 주입될 수 도 있다.
조성물중의 자가항원의 농도는 각각의 경우에 사용되는 자가항원에 따라 넓은 범위가 다양해질 수 있다. 1 내지 100㎍/㎖, 특히 5 내지 20㎍/㎖의 농도가 이용되는 것이 바람직하다.
또한, 자가반응성 물질을 함유하는 제조물를 수용하기 위한 한 챔버, 양성 대조군용 제조물을 수용하기 위한 한 챔버, 및 음성 대조군용 제조물을 수용하기 위한 한 챔버를 포함하는 장치에서 투여가 수행되는 것이 가능하다. 이러한 장치는 예를 들어, 자가반응성 물질을 함유하는 제조물을 수용하기 위한 2 내지 10 챔버를 함유할 수 있다. 이러한 장치는 동시에 몇 몇의 자가반응성 물질을 시험하기 위한 간단한 방식에 사용될 수 있다.
본 발명의 추가적인 주제는 투여 부위 영역의 조직 샘플로부터 유도되는 것이 바람직한 T 세포를 함유하는 샘플이 자가반응성 물질과 접촉하고, 상기 자가반응 물질과 T 세포의 반응이 측정되는 특정 T 세포 부차집단의 측정이다. 자가항원과 T 세포의 특정 반응은 예를 들어, 방사능의 혼입에 의해 측정될 수 있는 증가된 T 세포 증식에 의해 검출될 수 있다. 또 다른 한편으로는, T 세포의 반응이 또한 표지된 자가항원 예를 들어, 가용성 MHC 분자와의 복합 형태를 이용하여 직접적으로 측정될 수 있다. 이러한 구체예에서, 자가반응성 물질이 이들에 커플링된 형광 표지 그룹과 사용되는 것이 바람직하다. 평가는 예를 들어, T 세포가 T 세포 특정 항체와 커플링되는 제 1 형광 표적과 접촉된 후, 제 2 형광 표적과 커플링되는 자가항원과 접촉되고, 이중으로 표지된 세포의 존재가 형광간접촬영 분석에 의해 측정되는 FACS 분석에 의해 수행될 수 있다. 이러한 방식에서, 자가항원과 T 세포 부차집단과의 반응성을 특징으로 하는 T 세포 부차집단이 측정된다. 방법은 또한 사전 활성화된 T 세포의 선택 예를 들어, IL-2와의 인큐베이션 및/또는 IL-2 수용기 항체와의 인큐베이션에 의한 IL-2 수용기-양성 T 세포를 선택적으로 풍부하게한 후, 예를 들어 면역-마그네틱 방법을 이용하는 항체 결합 세포의 분리를 선택적으로 포함할 수 있다. 다른 한 편으로는, 사전 활성화된 세포가 자가항원과 T 세포와의 접촉 후에 첫 번째로 선택될 수 있다.
이러한 방법의 변형에 있어서, 또한 사전 활성화된 자가반응성 T 세포 즉, 표면 표적으로서 IL-2 수용기를 갖는 T 세포 대 비활성화된 자가반응성 T 세포 즉, IL-2 수용기가 없는 T 세포의 비를 측정하는 것이 가능하다.
본 발명의 추가적인 주제는 자가항원과 반응하는 T 세포 부차집단의 분리이다. 이러한 방법에 있어서, 투여 부위 영역으로부터 유도된 T 세포를 함유하는 조직 샘플은 자가항원과 접촉되며, 자가항원과 반응하는 T 세포가 확인되고, 이들이 선택적으로 다른 T 세포로부터 분리된다. 이러한 경우, 자가항원과 T 세포를 접촉시키기 전 및/또는 후에, 사전 활성화된 T 세포 즉, IL-2 수용기를 함유하는 T 세포를 선택하는 것이 가능하다. 이러한 방법에 있어서, 예를 들어, MHC 분자와의 복합체의 형태에 즉, 다른 T 세포로부터 양성적으로 반응하는 T 세포 집단의 분리를 간단히하는 담체상에 고정된 형태에 자가항원을 사용할 수 있다. T 세포 계통은 재자극에 의한 이러한 방식으로 분리된 T 세포 부차집단으로부터 성립될 수 있다. 그 후, 이러한 자가반응성 T 세포 계통은 환자를 면역시키는데 이용된다.
특정 T 세포 부차집단을 확인하기 위한 진단 방법에 있어서, 또한 MHC 펩티드 복합체의 활성을 모방하는 자가항원 대신에 항인자형 항체를 사용하는 것이 가능하다. 이러한 항체는 항체를 생산하기 위한 면역원으로서의 특정 항원에 특정한 T 세포 부차집단을 사용하거나(예를 들어, 마우스에서) 자가항원에 대한 제 1 항체를 처음으로 생성시킨 후에 제 1 항체에 대한 항인자형 항체를 생성시킴으로서 쉽게 수득될 수 있다.
특정 T 세포 부차집단은 또한 T 세포를 분리하는 대신에 T 세포가 활성화된 생체내에서 이들의 생성물을 확인함으로서 확인될 수 있다. 이것은 조직 샘플을 모으고(예를 들어, 미세한 바늘로 빨아냄으로서), 여기에 함유된 시토킨을 측정함으로서 달성될 수 있다. 대안적으로, 시토킨은 또한 다양한 시토킨에 대한 항체가 고정된 오랜 시간 동안 플래스터(plaster)를 바름으로서 동일계에서 측정될 수 있다. 시토킨은 직접 또는 스캐너를 이용하여 읽혀지는 불용성의 채색된 생성물을 야기시키는 효소 기질을 이용하는 통상적인 고체상 면역학적 검정법에 의해 검출된다.
최종적으로 본 발명은
(a) 약제학적으로 허용가능한 조성물 형태의 1종 이상의 자가반응성 물질,
(b) 선택적으로 약제학적으로 허용가능한 조성물 형태의 1종 이상의 대조군 물질,
(c) 자가반응성 물질 및 대조군 물질의 피내 투여를 위한 장치 및
(d) 시험 결과의 진단성의 평가를 위한 임의의 장치를 포함하는, 세포 조정 질병 또는 세포 조정 질병에 걸리기 쉬운 경향을 생체 내에서 진단하기 위한 키트에 관한 것이다.
바람직하게는, 자가반응성 물질을 위한 조성물 및 대조군 물질은 보조제 및 선택적으로 다른 통상적인 약제학적 담체 물질, 희석제, 및 첨가제를 함유한다.
하기 실시예는 도 1 내지 2 및 서열 프로토콜 서열 번호. 1 내지 30과 함께 본 발명을 더욱 상세히 설명할 것이다.
실시예 1 (비교 실시예)
생체 외에서의 조사
최근에 IDDM에 걸린 환자 8 명 및 건강한 사람 12명으로부터 말초 정맥혈을 채혈하였다. 말초 혈액 림프구를 피콜-하이파크(Ficoll-Hypaque) 밀도 기울기 원심분리로 분리하고, 하기 물질에 의한 생체 외 자극을 위해 사용하였다:
a) 시험 항원으로서 재조합 인간 GAD 65kd;
b) 양성 대조 항원으로서 정제된 단백질 유도체(PPD);
c) 음성 대조 항원으로서 인간 혈청 알부민(HSA).
1×105개의 말초 혈액 림프구(PBL)를 37℃, 5% CO2에서 5일 동안, 상기 항원의 존재하에 또는 배지 단독하의 배양 배지 100㎕(RPMI 1640 배지, 5% 인간 혈청, 2mmol/ℓ 글루타민, 10U/㎖ 페니실린, 10㎍/㎖ 스트렙토마이신 및 50nmol/ℓ 2-멜캅토에탄)의 96-웰 둥근 바닥 플레이트의 한 웰에서 인큐베이팅시켰다.
5일 후에, 웰당 0.5μCi 3H 티미딘을 함유하는 RPMI 1640 배지 20㎕을 첨가하였다. 16시간 동안 계속 인큐베이트시킨 후, 세포를 채취하였다. 티미딘의 혼입을 액체 섬광 계수에 의해 측정하였다. 결과는 자극 인덱스(SI, 즉, 항원의 부재하에 즉, 배지 단독으로 존재하는 cpm에 의해 분리된 항원이 존재하는 cpm)로서 규정한다.
각각의 항원에 대한 IDDM 환자 및 대조 사람의 림프구의 증식 반응은 표 1 및 2에 요약되어 있다.
표 1
S.I.= 자극된 cpm PBL/비자극된 cpm PBL
IDDM 환자 염기 값 cpm PPD 10㎍/㎖ rhGAD 65 10㎍/㎖ HSA 10㎍/㎖
1 730 17.9 2.6 1.1
2 833 16.7 8.8 1.2
3 639 23 6.6 0.9
4 328 28.9 0.8 2.9
5 1211 10.6 1.9 0.5
6 1041 11.9 1.8 2.2
7 520 19.8 7.2 1.0
8 412 2.7 8.3 0.8
표 2
S.I.= 자극된 cpm PBL/비자극된 cpm PBL
건강한 사람 염기 값 cpm PPD 10㎍/㎖ rhGAD 65 10㎍/㎖ HSA 10㎍/㎖
1 1108 25 1.8 0.7
2 1035 2.1 3.0 0.5
3 390 6.5 2.7 1.1
4 578 6.2 0.9 1.2
5 243 1.3 0.9 1.9
6 375 6.3 2.5 2.6
7 648 12.5 4.2 0.8
8 730 20.6 4.2 0.5
9 542 0.8 0.9 2.0
10 915 0.5 2.8 2.8
11 567 90.6 3.5 2.3
12 1247 12.5 1.0 0.6
조사의 통계적 분석은 4.7(대조 인간 + 2 SD의 의미)보다 더 큰 SI값을 갖는 양성으로서 여겨질 수 있는 rhGAD 65kd을 갖는 최근에 진단된 IDDM 환자로부터 PBL의 증폭을 나타낸다.
따라서, rhGAD 65kd에 대한 생체 외에서 T 세포 반응을 IDDM 환자의 50%에서 관찰하였다(환자 2,3,7 및 8). GAD에 대한 항체를 환자 1,2,4 및 8에서 발견하였고, 환자 3 및 5에서는 발견하지 못했다. 환자 6 및 7에는 GAD에 대한 항체를 시험하지 않았다. 대조 인간은 GAD 65kd과 반응하지 않았다.
당뇨병 및 대조 인간은 대조 HSA 및 PPD에 대한 그들의 반응에서 통계학적으로 현저한 차이를 나타내지 않았다.
실시예 2
생체 내에서의 조사
100㎕ rhGAD 65kd을 10㎍/㎖ 농도로 실시예 1로부터의 8명의 IDDM 환자의 오른쪽 팔뚝에 피내로 주입하였다.
1% HSA를 함유하는 pH 7인 생리학적 식염으로 항원을 희석하였다. HSA 동부피(100㎕)를 10㎍/㎖ 농도로 음성 대조물로서 오른팔 윗쪽에 주입하였다.
18 IDDM 환자중 5명에서 PPD를 양성 대조 항원으로서 사용하였다. 모든 환자에서 HSA를 음성 대조물로서 사용하였다.
생체 내에서의 진단에 있어서, 투여 부위에서 소절(진피 두께의 특정한 증가)의 형성은 양성 반응로서 여겨진다. 투여 후 48시간에 진단하였다. 투여 부위 영역에서 울트라사운드 측정에 의해 결과를 확인하고 양을 측정하였다. 부작용은 관찰되지 않았다.
본 조사의 결과는 표 3에 기재되어 있다.
표 3
IDDM 환자 PPD 10㎍/㎖ rhGAD 65 10㎍/㎖ HSA 10㎍/㎖ 측정 시간
1 + ++ - 48시간
2 n.t. ++ - 48시간
3 n.t. + - 48시간
4 - - - 48시간
5 - - - 48시간
6 - - - 48시간
7 n.t. +++ - 48시간
8 + + - 48시간
시험한 IDDM 환자 8명의 환자중 5명이 rhGAD 65에 양성적으로 반응하였다.
(1) 일반적 사항
(i) 출원인:
(A) 성명: 뵈링거 만하임 게엠베하
(B) 거리: 잔트호퍼 슈트라쎄 112-132
(C) 도시: 만하임
(D) 국가: 독일 연방공화국
(E) 우편 번호(ZIP): 68305
(ii) 발명의 명칭: 생체 내에서의 당뇨병 시험
(iii) 서열의 수: 30개
(iv) 컴퓨터 판독 형태:
(A) 매체 유형: 플로피 디스크
(B) 컴퓨터: IBM PC 호환기종
(C) 작업 시스템: PC-DOS / MS-DOS
(D)소프트웨어: PatentIn Release #1.0, 버전 # 1.30 (EPA)
(vi) 현재 출원 상황:
(A) 출원 번호: DE 19526561.0
(B) 출원일: 1999-7-20
(1) 서열 번호 1에 대한 사항:
(i) 서열의 특성:
(A) 서열의 길이: 20 아미노산
(B) 서열의 형: 아미노산
(C) 쇄의 수:
(D) 형태: 직쇄상
(xi) 서열 설명: 서열 번호 :1:
(2) 서열번호 2에 대한 사항:
(i) 서열의 특성:
(A) 서열의 길이: 20 아미노산
(B) 서열의 형: 아미노산
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(2) 서열 번호 3에 대한 사항:
(i) 서열의 특성:
(A) 서열의 길이: 20 아미노산
(B) 서열의 형: 아미노산
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(2) 서열 번호 4에 대한 사항:
(i) 서열의 특성:
(A) 서열의 길이: 20 아미노산
(B) 서열의 형: 아미노산
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(2) 서열 번호 5에 대한 사항:
(i) 서열의 특성:
(A) 서열의 길이: 20 아미노산
(B) 서열의 형: 아미노산
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(2) 서열 번호 6에 대한 사항:
(i) 서열의 특성:
(A) 서열의 길이: 20 아미노산
(B) 서열의 형: 아미노산
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(2) 서열 번호 7에 대한 사항:
(i) 서열의 특성:
(A) 서열의 길이: 20 아미노산
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(2) 서열 번호 8에 대한 사항:
(i) 서열의 특성:
(A) 서열의 길이: 14 아미노산
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(2) 서열 번호 9에 대한 사항:
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(A) 서열의 길이: 14 아미노산
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(2) 서열 번호 10에 대한 사항:
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(A) 서열의 길이: 14 아미노산
(B) 서열의 형: 아미노산
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(2) 서열 번호 11에 대한 사항:
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(A) 서열의 길이: 14 아미노산
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(2) 서열 번호 12에 대한 사항:
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(A) 서열의 길이: 14 아미노산
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(2) 서열 번호 13에 대한 사항:
(i) 서열의 특성:
(A) 서열의 길이: 14 아미노산
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(2) 서열 번호 14에 대한 사항:
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(A) 서열의 길이: 14 아미노산
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(2) 서열 번호 15에 대한 사항:
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(A) 서열의 길이: 14 아미노산
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(2) 서열 번호 16에 대한 사항:
(i) 서열의 특성:
(A) 서열의 길이: 14 아미노산
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(2) 서열 번호 17에 대한 사항:
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(A) 서열의 길이: 14 아미노산
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(2) 서열 번호 18에 대한 사항:
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(2) 서열 번호 19에 대한 사항:
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(A) 서열의 길이: 14 아미노산
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(2) 서열 번호 20에 대한 사항:
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(A) 서열의 길이: 14 아미노산
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(2) 서열 번호 21에 대한 사항:
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(A) 서열의 길이: 14 아미노산
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(2) 서열 번호 22에 대한 사항:
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(2) 서열 번호 23에 대한 사항:
(i) 서열의 특성:
(A) 서열의 길이: 14 아미노산
(B) 서열의 형: 아미노산
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(2) 서열 번호 24에 대한 사항:
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(D) 형태: 직쇄상
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(2) 서열 번호 25에 대한 사항:
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(2) 서열 번호 26에 대한 사항:
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(A) 서열의 길이: 14 아미노산
(B) 서열의 형: 아미노산
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(D) 형태: 직쇄상
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(2) 서열 번호 27에 대한 사항:
(i) 서열의 특성:
(A) 서열의 길이: 14 아미노산
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(D) 형태: 직쇄상
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(2) 서열 번호 28에 대한 사항:
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(A) 서열의 길이: 14 아미노산
(B) 서열의 형: 아미노산
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(D) 형태: 직쇄상
(xi) 서열 설명: 서열 번호 :28:
(2) 서열 번호 29에 대한 사항:
(i) 서열의 특성:
(A) 서열의 길이: 25 아미노산
(B) 서열의 형: 아미노산
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(D) 형태: 직쇄상
(xi) 서열 설명: 서열 번호 :29:
(2) 서열 번호 30에 대한 사항:
(i) 서열의 특성:
(A) 서열의 길이: 20 아미노산
(B) 서열의 형: 아미노산
(C) 쇄의 수:
(D) 형태: 직쇄상
(xi) 서열 설명: 서열 번호 :30:

Claims (28)

  1. 세포 조정 질병 또는 세포 조정 질병에 걸리기 쉬운 경향을 진단하기 위한 제제를 제조하기 위해서 자가반응성 물질을 사용하는 방법으로서, 상기 제제를 피내 투여하고, 진단은 적용 부위에서의 양성 반응의 발생 여부를 기준으로 하는 방법.
  2. 제 1 항에 있어서, 자가면역 질병 또는 자가면역 질병에 걸리기 쉬운 경향을 진단하기 위한 방법.
  3. 제 1 항에 있어서, 종양 질병 또는 종양 질병에 걸리기 쉬운 경향을 진단하기 위한 방법.
  4. 제 1 항 내지 3 항중의 어느 한 항에 있어서, 핵산, 지질, 당류, 단백질, 폴리펩티드 및 이들의 복합체, 면역원성 에피토프, 단편, 유사체, 모방체 또는 유도체 및 이들의 혼합물이 자가반응성 물질로서 선택적으로 담체 결합 형태로 사용됨을 특징으로 하는 방법.
  5. 제 4 항에 있어서, 펩티드, 펩티드 유도체 또는 펩티드 모방체가 자가반응성 물질로서 선택적으로 MHC 분자 또는 이들의 펩티드 결합 유도체와의 복합체의 형태로 사용됨을 특징으로 하는 방법.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항중의 어느 한 항에 있어서, 진성 당뇨병, 다발성 경화증, 류마티스성관절염, 바세도우병, 강직성 척추염, 급성 전포도막염, 구드패스츄어 증후군, 중증근무력증, 전신성 홍반성 루프스, 심상성 천포창, 면역 갑상선염, 피부경화증, 크론병, 쇼그렌증후군, 라이터증후군, 염증성 장병 또는 그레이브스병을 진단하기 위한 방법.
  7. 제 6 항에 있어서, 타입 I 당뇨병(IDDM)의 진단을 위한 방법.
  8. 제 7 항에 있어서, 글루타민산 데카르복실라제(GAD) 또는 이들의 일부가 자가반응성 물질로서 사용되는 방법.
  9. 제 7 항 또는 제 8 항에 있어서, 인간 GAD 65 kd가 자가반응성 물질로서 사용되는 방법.
  10. 제 7 항에 있어서, GAD, 또는 이들로부터 유도된 펩티드 유도체 또는 펩티드 모방체로부터의 1종 이상의 펩티드가 자가반응성 물질로서 선택적으로 MHC 분자 또는 이들의 펩티드 결합 유도체와의 복합체 형태로 사용되는 방법.
  11. 제 10 항에 있어서, 하기 서열을 포함하는 펩티드 또는 펩티드 유도체가 사용되는 방법:
    (a) 아미노산 서열 (Ⅰ)
    D-V-N-Y-A-F-L-H-A-T-D-L-L-P-A-C-D-G-E-R,
    (b) 아미노산 서열(Ⅱ)
    S-N-M-Y-A-M-M-I-A-R-F-K-M-F-P-E-V-K-E-K,
    (c) 아미노산 서열(Ⅲ)
    N-W-E-L-A-D-Q-P-Q-N-L-E-E-I-L-M-H-C-Q-T,
    (d) 아미노산 서열(Ⅳ)
    T-L-K-Y-A-I-K-T-G-H-P-R-Y-F-N-Q-L-S-T-G,
    (e) 아미노산 서열(Ⅴ)
    P-R-Y-F-N-Q-L-S-T-G-L-D-M-V-G-L-A-A-D-W,
    (f) 아미노산 서열(Ⅵ)
    T-Y-E-I-A-P-V-F-V-L-L-E-Y-V-T-L-K-K-M-R,
    (g) 아미노산 서열(Ⅶ)
    F-F-R-M-V-I-S-N-P-A-A-T-H-Q-D-I-D-F-L-I,
    (h) 아미노산 서열(Ⅷ)
    G-M-A-A-L-P-R-L-I-A-F-T-S-E-H-S-H-F-S-L-K-K-G-A-A,
    (i) 아미노산 서열(Ⅸ)
    E-R-G-K-M-I-P-S-D-L-E-R-R-I-L-E-A-K-Q-K,
    (j) 도 1 또는 2에 기재된 아미노산 서열중의 하나.
    (k) 6개 이상의 아미노산 길이를 갖는 (a) 내지 (i)에 기재된 아미노산 서열의 일부 영역, 및/또는
    (l) MHC 분자에 대한 결합의 특이성 및/또는 친화성이 (a) 내지 (j)에 기재된 아미노산 서열과 동등한 아미노산 서열.
  12. 제 5 항, 제 10 항 또는 제 11 항중의 어느 한 항에 있어서, 펩티드 또는 펩티드 유도체가 8개 이상의 아미노산의 길이를 갖는 방법.
  13. 제 12 항에 있어서, 펩티드 또는 펩티드 유도체가 10개 이상의 아미노산의 길이를 갖는 방법.
  14. 제 5 항, 제 10 항 또는 제 11 항중의 어느 한 항에 있어서, 펩티드 또는 펩티드 유도체가 25개 이하의 아미노산의 길이를 갖는 방법.
  15. 제 1 항 내지 제 14 항중의 어느 한 항에 있어서, 양성 반응이 투여 후 24시간 이상 경과한 시간에 측정되는 방법.
  16. 제 15 항에 있어서, 양성 반응이 투여 후 24 시간 내지 1 주일 내에 측정되는 방법.
  17. 제 1 항 내지 제 16 항중의 어느 한 항에 있어서, 양성 반응이 투여 부위에서 소절의 발생에 의해 측정되는 방법.
  18. 제 16 항에 있어서, 양성 반응이 투여 부위의 시각적 관찰 및/또는 각각의 피부 영역의 심계항진에 의해 측정되는 방법.
  19. 제 16 항에 있어서, 양성 반응이 울트라사운드 또는 사진 촬영법에 의해 정량적으로 측정되는 방법.
  20. 제 1 항 내지 제 19 항중의 어느 한 항에 있어서, 양성 반응이 투여 부위에서 세포를 침투시킴으로서 방출되는 물질을 검출함으로써 측정되는 방법.
  21. 제 20 항에 있어서, 사이토킨이 측정되는 방법.
  22. 제 1 항 내지 제 21 항 중의 어느 한 항에 있어서, 추가의 측정이 양성 및/또는 음성 대조군에 의해 수행되는 방법.
  23. 제 1 항 내지 제 22 항 중의 어느 한 항에 있어서, 자가반응성 물질이 보조제와 함께 투여되는 방법.
  24. 제 1 항 내지 제 23 항 중의 어느 한 항에 있어서, 자가반응성 물질의 제조물을 수용하기 위한 1개 이상의 챔버, 양성 대조군용 제조물을 수용하기 위한 챔버 및 음성 대조군용 제조물을 수용하기 위한 챔버를 포함하는 장치에서 투여가 수행되는 방법.
  25. 제 1 항 내지 제 24 항 중의 어느 한 항에 있어서, 투여 부위의 영역으로부터 조직 샘플을 자가반응성 물질과 접촉시키고, 상기 자가반응성 물질과 반응하는 T 세포를 확인하고, 이들을 선택적으로 다른 T 세포로부터 분리시키는 특정 자가반응성 T 세포 부차집단의 측정 또는 분리를 추가로 포함하는 방법.
  26. 세포 조정 질병 또는 세포 조정 질병에 걸리기 쉬운 경향을 생체 내에서 진단하기 위한 방법으로서, 자가반응성 물질이 피내 투여되고, 진단이 적용 부위의 양성 반응의 발생 여부를 기준으로 하는 방법.
  27. (a) 약제학적으로 허용될 수 있는 조성물 형태의 1종 이상의 자가반응성 물질,
    (b) 선택적으로 약제학적으로 허용될 수 있는 조성물 형태의 1종 이상의 대조군 물질,
    (c) 자가반응성 물질 및 대조군 물질의 피내 투여를 위한 장치 및
    (d) 시험 결과의 진단성 평가를 위한 임의의 장치를 포함하는, 세포 조정 질병 또는 세포 조정 질병에 걸리기 쉬운 경향을 생체 내에서 진단하기 위한 시약 키트.
  28. 제 27 항에 있어서, 자가반응성 물질 및 대조군 물질용 조성물이 보조제를 함유하는 시약 키트.
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Cited By (1)

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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2044197A (en) * 1996-04-01 1997-10-22 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Diagnostic composition for diseases accompanied by autoimmune reactions caused by 65k-glutamic acid decarboxylase
US6750201B1 (en) 1997-10-17 2004-06-15 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for promoting internalization and degradation of urokinase-type plasminogen activator

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3626054A (en) * 1967-10-25 1971-12-07 Bard Hamilton Co Inc Lupus erythematosus skin test
US5674978A (en) * 1990-09-21 1997-10-07 The Regents Of The University Of California Peptides derived from glutamic acid decarboxylase
CN1112933A (zh) * 1994-01-20 1995-12-06 伯伦格·曼海姆有限公司 抗原特异性活化t淋巴细胞，其检测和用途
DE19525784A1 (de) * 1995-07-14 1997-01-16 Boehringer Mannheim Gmbh Autoreaktive Peptide aus der humanen Glutamin-Decarboxylase (GAD)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100681339B1 (ko) * 2004-12-23 2007-02-15 최성환 연탄보일러

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