KR19980702490A - 면역 반응의 자극 방법 - Google Patents

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KR19980702490A
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마크 알더슨
킴 에이. 캠블
메리 케이. 케네디
찰스 알. 말리스제프스키
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스티븐 엘. 말라스카
임뮤넥스 코포레이션
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Abstract

본 발명은 유효량의 CD40 결합 단백질을 투여하는 것을 포함하는 면역 반응의 자극 방법에 관한 것이다. 이 방법은 병원성 또는 기회성 생물체로 감염된 개체, 및 세포 면역 반응이 저하된 개체를 치료하는데 유용하다. CD40 결합 단백질로는 CD40 리간드, CD40에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체 및 그의 배합물을 들 수 있다.

Description

면역 반응의 자극 방법
병원체에 대한 면역 반응은 크게 세포 매개된 (세포 면역) 또는 항체 매개된 (체액성 면역)으로서 분류될 수 있다. 세포 면역에서, 활성화된 대식세포 및 세포독성 림프구는 병원체를 제거한다. 대조적으로, 체액성 면역은 주로 항체 생성을 통해 이루어진다. 통상적으로 이러한 두 분류의 면역 반응은 특정 시토킨 배열을 분비하는 헬퍼 T(TH) 세포의 별개의 서브셋트에 의해 조절되는 것으로 알려져 있다(Immunological Reviews 123, 1991 참조).
타입 1 TH세포(TH1 세포)는 지연형 과감작(DTH)을 매개하고 인터페론-γ(IFN-γ) 및 인터루킨-2(IL-2)를 분비하는 반면, 타입 2 TH세포(TH2 세포)는 주로 인터루킨 4, 5 및 10(각각 IL-4, IL-5 및 IL-10)을 분비하고 B 세포 헬프를 제공한다. TH1 또는 TH2 중 어느 하나의 경로를 따른 면역 반응의 발생은 종종 감염 초기에 분명하며, 감염을 일으키는 생물체의 유형에 의해(Scott and Kaufmann, Immunol. Today 12:346, 1991), 또한 감염된 숙주의 유전자 구조에 의해 지배되는 것으로 보인다. 면역 반응이 부적절하게 진행될 때, 면역병변의 발생 또는 질병 치료의 실패가 일어날 수 있다. TH1, 세포 매개된 반응, 또는 TH2, 항체 매개된 반응 중 어느 하나를 향한 면역 반응을 조절하는 능력은 감염성 질환에서 뿐만 아니라 염증 및 알러지 질환에서도 유용한 수단을 제공할 것이다(예를 들면, Powrie and Coffman, Immunol. Today 14:270, 1993 참조).
발명의 요약
본 발명은 병원성 또는 기회성 생물체에 대한 보호성 TH1 면역 반응을 자극하는데 유효한 양의 CD40 결합 단백질을 투여하는 것을 포함하는, 병원성 또는 기회성 생물체로 감염된 포유 동물의 치료 방법에 관한 것이다. CD40 결합 단백질은 CD40을 결합하고 생물학적 시그날을 변환할 수 있는 제약 조성물이다. 병원성 또는 기회성 생물체는 레이슈마니아(Leishmania), 리스테리아(Listeria), 마이코박테리아(Mycobacteria), 살모넬라(Salmonella), 트리파노소마(Trypanosoma), 뉴머시스티스(Pneumocystis) 및 톡소플라스마(Toxoplasma) 종을 개별적으로 또는 함께 포함할 수 있다. CD40 결합 단백질은 CD40 리간드, CD40에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체 및 그의 배합물로 이루어진 군에서 선택된다.
인터루킨-12(IL-12)는 보호성 TH1 반응의 발생에 중대한 영향을 미치는, 대식세포/단핵세포에 의해 생성되는 중요한 시토킨이다. IL-12는 CD 결합 단백질로 자극될 때 생성된다. 따라서, CD40 결합 단백질은 TH1 반응이 필요한 질병을 치료하는데, 적절한 TH1 반응의 발생을 통해 질병을 예방하는데, 또한 세포 매개된 면역이 저하된 개체의 질병을 치료하는데 유용할 것이다.
본 발명은 유효량의 올리고머 CD40 리간드를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서의 면역 반응을 자극하는 방법, 및 그에 유용한 조성물에 관한 것이다.
도 1은 CD40L 결핍된 마우스의 항-CD3 활성화된 비세포(脾細胞)의 IL-12 생성 능력은 손상되었지만, IL-2, IFN-γ 또는 IL-10의 생성 능력은 손상되지 않았음을 입증하는 것이다. 비세포는 실시예 3에 기재한 바와 같이 처리하였으며, 상징액을 IL-12 또는 IL-2의 존재에 대해서는 생물 검사법으로 시험하고(도 1A 및 도 1B), IFN-γ 또는 IL-10에 대해서는 효소 면역측정법으로 시험하였다(도 1C 및 도 1D).
도 2는 항-IL-10에 의한 T 세포 의존성 IL-12 생성의 증가를 예시한다. 분석은 실시예 4에 기재된 바와 같이 수행하였다. 항-IL-10 존재하에 항-CD3으로 자극된 대조군 비세포로부터 얻은 상징액은 항-IL-10 부재하에 생성된 것보다 약 4배 더 높은 농도의 IL-12를 함유하였다. 또한, 항-CD3 및 항-IL-10과 함께 인큐베이션된 CD40L KO 비세포의 상징액에서는 낮은 농도의 IL-12가 검출되었다.
도 3은 CD40L이 항원에 대한 세포 면역 반응의 발생에 있어서 중요하다는 것을 확인해주는 결과를 나타낸다. 이 실험은 실시예 6에 기재한 바와 같이 수행하였다. 시험된 개개의 CD40L KO 마우스 중에서 DTH 반응에 약간의 변화가 있긴 하지만(도 3A), 군으로서의 CD40L 결핍된 마우스는 항원에 대한 DTH 반응을 개시하는 그들의 능력이 심하게 손상되었다(도 3B).
도 4는 그들이 유래된 어버이 마우스 종족과는 대조적으로, CD40 리간드 결핍된 마우스에서 관찰된 엘. 메이저(L. Major)에 의한 감염에 이어서 일어나는 발 패드의 진행성 팽윤을 나타낸다. 마우스는 실시예 7에 기재한 바와 같이 감염시켰으며, 질병 진행은 발 패드의 두께를 측정함으로써 결정되었다.
도 5는 CD40LT의 투여가 과민성 마우스에서의 감염의 심각도를 감소시킨 결과를 나타내는 것이다. 감염된 마우스는 실시예 8에 기재한 바와 같이 처리하였으며, 처리 효과는 발 패드의 두께를 측정함으로써 결정되었다.
도 6은 CD40LT가 민감성 CD40 리간드 결핍된 마우스에서의 뉴머시스티스(Pneumocystis) 감염을 조절하거나 또는 경감시키는 것을 입증한다. 마우스는 실시예 9에 기재한 바와 같이 처리하였으며, 죽음의 원인을 밝히기 위해 부검하였다.
본 발명은 병원체에 대한 면역 반응을 자극하는데 유효한 양의 CD40 결합 단백질을 투여하는 것을 포함하는, 병원성 또는 기회성 생물체로 감염된 포유 동물의 치료 방법에 관한 것이다. 병원체 레이슈마니아로 감염된 마우스를 병원체에 대한 효과적인 면역 반응을 자극하는 CD40 결합 단백질로 처리하였다. 당업계의 숙련인은 사용된 마우스 모델이 인간을 포함한 각종 포유 동물 종에서 얻은 결과와 관련이 있으며 다른 감염성 생물체와도 관계있는 결과를 제공하는 것으로 믿고 있다.
따라서, 본 명세서에서의 연구 결과는 예언적 동물 모델에서 병원성 또는 기회성 생물체로 감염된 포유 동물을 CD40 결합 단백질 활성을 가진 물질을 포함하는 제약 조성물로 치료하는 진보적 방법을 얻을 수 있게 하는 데이터를 제공한다.
병원성/기회성 생물체
병원성 생물체는 건강한 개체에서 질병을 야기시킬 수 있는 생물체인 반면, 기회성 생물체는 일반적으로 건강한 개체에서는 질병을 야기시키지 않지만, 면역 무방비 상태 숙주에서는 질병 상태에 이르게 할 수 있다. 두 유형의 생물체에는 바이러스, 박테리아, 효모, 균류 및 원충류가 포함된다. 또한, 몇가지 증후군에서 집합 생물체가 존재할 수 있으며 그것은 증후군에서 원인적 역할을 할 수 있다.
병원성 원충류의 전형적인 예는 내장, 피부 또는 점막 병변에 의해 특징지워지는 각종 질병을 야기시키는 절대 세포내 대식세포 기생충인 레이슈마니아이다. 다른 종 및 레이슈마니아의 분리물은 생체내 및 시험관내에서 대식세포에서 복제하고 감염시키는 능력면에서 차이가 있다. 임상학적으로, 엘. 브라질리엔시스(L. braziliensis)에 의한 감염은 단일 또는 다중 피부 병변으로서 존재하며, 작은 비율만이 더욱 심각한 점막 질환으로 진행된다. 피부 병변은 자발적으로 치유되거나 또는 화학요법에 잘 반응할 수 있는 반면, 점막 병변은 종종 아주 해로우며 비교적 치료에 저항력이 있다. 점막 병변이 치료된다 하더라도, 1년 후쯤에 자발적으로 재발되는 경우가 종종 있다. 원충류 및 대식세포 병원체 레이슈마니아에 의한 감염 경로는 이들 생물체에 대한 유일한 숙주 세포인 대식세포에서의 초기 복제에 의해 부분적으로 결정된다. 레이슈마니아의 억제 또는 증식에 기여하는 요인은 잘 알려지지 않았지만, 특정 시토킨이 감염 경로에 영향을 미칠 수 있다. 예를 들면, IL-12는 민감한 BALB/c 마우스에서의 레이슈마니아증을 치료한다(Heinzel et al., J. Exp. Med. 177:1505, 1993 참조).
병원성 주혈편모충류 원충류 트리파노소마 크루지(Trypanosoma cruzi)는 라틴 아메리카의 많은 국가에서 주요한 공중 위생 문제인 샤가스병(Chagas' disease)을 발생시킨다. 이러한 기생충에 의한 감염은 급성이거나 또는 만성일 수 있고, 심장, 식도 및 대장 조직에서 진행성 병변을 빈번하게 발생시킨다. 기생충은 대식세포를 포함한 핵이 있는 각종 세포를 감염시킨다. 인간 및 실험 동물에서, 트리파노소마 크루지 감염은 T 세포 및 대식세포에 의해 매개된 비특이적 면역 억제에 의해 수반된다. 급성 및 만성 반응 시기 중에 기생충 복제를 억제하고 만성 반응 시기 중에 순환 기생충 수를 적지만 안정되게 유지하는 메카니즘은 잘 알려지지는 않았다.
병원체의 추가의 예로는 마이코박테리아 튜베르쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis) 및 마이코박테리아 레프래에(Mycobacterium leprae) 및 원충류 톡소플라스마 곤디이(Toxoplasma gondii)를 들 수 있다. 균류 히스토플라스마 캡슐라텀(Histoplasma capsulatum), 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 칸디다 파라프실로시스(Candida parapsilosis) 및 크립토코커스 네오포르만스(Cryptococcus neoformans)도 또한 기회성 또는 병원성 생물체로서 간주될 수 있다. 특정 리켓챠(Rickettsia), 예를 들면 알. 프로와제키이(R. prowazekii), 알. 코로니이(R. coronii), 및 알. 쯔츄가무쉬(R. tsutsugamushi)도 또한 2종 이상의 생물체의 복합체로서 포함된다.
인간을 감염시키는 것 이외에도, 이러한 많은 생물체는 이후에 인간에 대한 감염 보유자로서 존재할 수 있는 다른 포유 동물을 감염시킨다. 예를 들면, 애완견은 레이슈마니아의 주요한 저장소로서 작용하는 것으로 알려져 있으며, 고양이는 톡소플라스마를 보유하는 것으로 알려져 있다. 따라서, 이러한 생물체에 대한 포유 동물의 면역 및(또는) 염증성 반응을 증가시키는 방법은 인간 이외의 다른 포유 동물 종에서도 마찬가지로 유용하다.
CD40
인간 CD40 항원(CD40)은 30,600의 분자량을 갖는 277 아미노산의 펩티드이다(Stamenkovic et al., EMBO J. 8:1403, 1989 참조). 인간 CD40을 코딩하는 cDNA를 버킷(Burkitt) 림프종 세포주 라지(Raji)로부터 제조된 cDNA 라이브러리에서 분리하였다. CD40 cDNA에 의해 코딩된 추정 단백질은 추정 리더 서열, 막 관통 도메인 및 막 결합된 수용체 단백질에 공통적인 다른 많은 특징을 갖는다. CD40은 B 림프구, 상피세포 및 몇가지 악성 종양 세포주에서 발현되는 것으로 밝혀졌다.
CD40은 세포외 영역 중의 시스테인 풍부 요소의 존재에 의해 정의되는, 종양 괴사 인자(TNF)/신경 성장 인자(NGF) 수용체 그룹의 요소이다(Smith et al., Science 248:1019, 1990; Mallett and Barclay, Immunology Today 12:220; 1991 참조). 이러한 그룹에는 림프구 항원 CD27, CD30(호지킨(Hodgkin's) 림프종 및 리드-스턴베르그(Reed-Sternberg) 세포에서 발견된 항원), TNF에 대한 2개의 수용체, 4-1BB로서 불리우는 쥐의 단백질, 래트 OX40 항원, NGF 수용체 및 Fas 항원이 포함된다.
CD40은 당업계에 알려진 몇가지 수단 중의 어느 하나에 의해 세포 표면 상에서 검출될 수 있다. 예를 들면, CD40에 특이적인 항체는 형광 활성화된 세포 분류 기술에 이용되어 세포가 CD40을 발현하는지를 결정한다. 세포 표면 분자를 검출하는 다른 방법도 또한 CD40을 검출하는데 유용하다.
CD40 모노클로날 항체
CD40 표면 항원에 대한 모노클로날 항체(CD40 mAb)는 인간 B 세포에 대한 각종 생물학적 활성을 매개하는 것으로 밝혀졌다. 예를 들면, CD40 mAb는 동형 및 이형 유착을 유도하며(Barrett et al., J. Immunol. 146:1722, 1991; Gordon et al., J. Immunol. 140:1425, 1988), 세포 크기를 증가시킨다(Gordon et al., J. Immunol. 140:1425, 1988; Valle et al., Eur. J. Immunol. 19:1463, 1989). CD40 mAb는 또한 항-IgM으로, CD20 mAb로 또는 포르볼 에스테르 단독으로(Clark and Ledbetter, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83:4494, 1986; Gordon et al., LEUKOCYTE TYPING III; A.J. McMichael ed. Oxford University Press. Oxford, p. 426; Paulie et al., J. Immunol. 142:590, 1989) 또는 IL-4와 함께(Valle et al., Eur. J. Immunol. 19:1463, 1989; Gordon et al., Eur. J. Immunol. 17:1535, 1987) 활성화된 B 세포의 증식을 유도하며, IL-4 자극된 T 세포 결핍 배양액으로부터 IgE(Jabara et al., J. Exp. Med. 172:1861, 1990; Gascan et al., J. Immunol. 147:8, 1991), IgG 및 IgM(Gascan et al., J. Immunol. 147:8, 1991)를 생성시킨다.
또한, CD40 mAb는 B 세포로부터의 IL-4 매개된 가용성 CD23/FcεRII 방출을 증가시키고(Gordon and Guy, Immunol. Today 8:339, 1987; Cairns et al., Eur. J. Immunol. 18:349, 1988) IL-6의 B 세포 생성을 촉진시키는(Clark and Shu, J. Immunol. 145:1400, 1990) 것으로 보고되었다. 최근에, CDw32+ 유착 세포의 존재하에 인간 B 세포주는 IL-4 및 CD40 mAb를 갖는 원래의 B 세포 개체군으로부터 생성되었다(Banchereau et al., Science 241:70, 1991 참조). 또한, 배중추 중심세포는, 그들이 CD40 및(또는) 항원에 대한 수용체를 통해 활성화된다면 세포 소멸되는 것으로부터 방지될 수 있다(Liu et al., Nature 342:929, 1989 참조). 상기 각각의 문헌들은 B 세포의 생물학적 활성을 자극하는 CD40 mAb를 기재하고 있다.
본 명세서에 참고로 인용한, 1993년 10월 1일자로 출원된 미국 특허 출원 제08/130,541호는 hCD40m2 및 hCD40m3으로서 불리우는, CD40에 특이적으로 결합하는 2개의 모노클로날 항체를 기재하고 있다. 다른 CD40 mAb와 달리, hCD40m2(ATCC HB11459) 및 hCD40m3은 CD40에 결합하고 CD40L을 구조적으로 발현하는 세포에 대한 CD40의 결합을 억제한다. 결합을 95% 넘게 억제하는 것은 무관한 IgG 또는 대조군 CD40 mAb, G28.5에 비해 12.5 ㎍/ml 만큼 낮은 농도에서 hCD40m2 또는 CD40 mAb M3으로 관찰되었다. hCD40m2는 또한 CD40L 유도된 TNF-α 생성을 억제할 수 있다.
다른 CD40 모노클로날 항체는 통상의 기술을 이용하여 생성될 수 있다(본 명세서에 참고로 인용한 미국 특허 제RE32,011호, 4,902,614호, 4,543,439호 및 4,411,993호 참조; Monoclonal Antibodies, Hybridomas: A New Dimension in Biological Analyses, Plenum Press, Kennett, McKearn, and Bechtol (eds.), 1980, and Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow and Lane (eds.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988 참조).
간단하게 설명하면, 동물을 CD40에 대한 면역 반응을 생성시키기에 적합한 CD40 형태로 주사하였다. 동물을 CD40에 대한 혈청 항체의 농도가 안정기에 도달할 때까지 필요한 만큼 재면역화시키고, 이어서 가용성 CD40의 최종 효능촉진제를 제공하고 3 내지 4일 후에 희생시켰다. 비장 및 림프선과 같은 많은 수의 B 세포를 함유하는 기관을 수거하고 메쉬 스크린을 통해 기관을 통과시키거나 또는 세포를 캡슐화하는 비장 또는 림프선 막을 파괴함으로써 단일 세포 현탁액으로 분쇄하였다.
별법으로, 모노클로날 항체를 제조하기에 적합한 세포는 시험관내 면역화 기술을 이용하여 얻어진다. 간략하게 설명하면, 동물을 희생시키고, 비장 및 림프선을 제거한다. 단일 세포 현탁액을 제조하고, 세포를 상기한 면역 반응을 형성하기에 적합한 CD40 형태를 함유하는 배양액에 넣는다. 이어서, 림프구를 수거하고 하기하는 바와 같이 융합시킨다.
시험관내 면역화 기술을 이용하여 또는 상기한 바와 같은 면역화된 동물로부터 얻은 세포는 바이러스로 트랜스펙션시킴으로써 불멸하게 될 수 있다. 예를 들면, 엡스타인 바르 바이러스(Epstein bar virus)(EBV; Glasky and Reading, Hybridoma 8(4):377-389, 1989 참조)는 인간 B 세포를 형질변환시킬 수 있다. 또한, 수거된 비장 및(또는) 림프선 세포 현탁액은 모노클로날 항체를 분비하는 하이브리도마를 형성하기 위해 적합한 골수종 세포와 융합된다. 적합한 골수종 세포주는 바람직하게는 항체의 제조 및 발현에 결함이 있는 것이며, 또한 면역화된 동물의 세포와 공통 유전형인 것이다. 그러한 많은 골수종 세포주는 당업계에 잘 알려져 있으며 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection(ATCC); Rockville, Maryland 소재)과 같은 공급원으로부터 얻을 수 있다(Catalogue of Cell Lines Hybridomas, 6th ed., ATCC, 1988 참조).
CD40 리간드
활성화된 CD4+ T 세포는 CD40에 대한 고농도의 리간드(CD40L)를 발현한다. 최근에, 인간 CD40L인 막 결합된 당단백질은 본 명세서에 참고로 인용한 문헌(Spriggs et al., J. Exp. Med. 176:1543 1992) 및 1992년 10월 23일자로 출원된 미국 특허 출원 제07/969,703호에 기재된 바와 같이 말초 혈액 T-세포로부터 클로닝되었다. 마우스 CD40L의 클로닝은 문헌(Armitage et al., Nature 357:80, 1992)에 기재되어 있다. CD40L은 임의의 동시 자극원의 부재하에 B-세포 증식을 유도하며 또한 시토킨의 존재하에 임뮤노글로불린의 생성을 유도한다. 또한, CD40 리간드-트랜스펙션된 세포는 단핵세포를 자극하여 종양 파괴성이 된다(Alderson et al., J. Exp. Med. 178:669, 1993).
CD40L은 그의 C-말단에서의 세포외 영역, 막관통 영역 및 N-말단에서의 세포내 영역을 갖는 타입 II 막 폴리펩티드이다. 가용성 CD40L은 CD40L의 세포외 영역(서열 번호 1의 아미노산 47 내지 아미노산 261) 또는 그의 단편을 포함한다. CD40L 생물학적 활성은 CD40L의 세포외 영역을 CD40과 결합시킴으로써 매개되며 그것은 B 세포 증식 및 항체 분비(IgE 분비를 포함)의 유도를 포함한다.
미국 특허 출원 제07/969,703호는 CD40L/FC2로서 불리우는 가용성 CD40L/Fc 융합 단백질의 제조를 기재하고 있다. CD40L/FC2는 호프(Hopp) 등의 문헌(Hopp et al., Bio/Technology 6:1204, 1988: Flag(등록상표)로서 칭함)에 기재된 8 아미노산 친수성 서열, IgG1Fc 도메인, 링커 서열(미국 특허 제5,073,627호에 기재됨) 및 인간 CD40L의 세포외 영역을 함유한다. 미국 특허 출원 제07/969,703호에는 삼합체 CD40L로서 칭해지는 가용성 CD40L 융합 단백질이 기재되어 있으며, 그것은 로이신 지퍼(leucine zipper)로서 불리우는 33 아미노산 서열, 호프(Hopp) 등의 문헌(상기 참조)에 기재된 8 아미노산 친수성 서열 및 이어지는 인간 CD40L의 세포외 영역을 함유한다. CD40L의 두 올리고머 형태는 임의의 동시 자극원의 부재하에 (또한 적절한 시토킨과 함께) 인간 B 세포 증식을 유도하여 IgG, IgE, IgA 및 IgM을 생성시킨다.
미국 특허 출원 제07/969,703호에 기재된 CD40L/FC2 및 삼합체 CD40L은 재조합 단백질의 공지된 제조법을 이용하여 제조될 수 있는 CD40L의 다른 형태와 같이 본 발명의 방법에 유용할 것이다.
다른 CD40 결합 단백질
결합 단백질은 CD40에 대한 항체를 코딩하는 유전자의 가변 영역을 포함시키는 재조합 DNA 기술을 이용하여 제조될 수도 있다(James W. Larrick et al., Polymerase Chain Reaction Using Mixed Primers: Cloning of Human Monoclonal Antibody Variable Region Genes From Single Hybridoma Cells, Biotechnology 7:934-938, September 1989; Reichmann et al., Reshaping Human Antibodies for Therapy, Nature 332:323-327, 1988; Roberts et al., Generation of an Antibody with Enhanced Affinity and Specificity for its Antigen by Protein Engineering, Nature 328:731-734, 1987; Verhoeyen et al., Reshaping Human Antibodies: Grafting an Antilysozyme Activity, Science 239:1534-1536, 1988; Chaudhary et al., A Recombinant Immunotoxin Consisting of Two Antibody Variable Domains Fused to Pseudomonas Exotoxin, Nature 339:394-397, 1989 참조).
간단하게 설명하면, CD40 mAb의 항원 결합 부위(또는 CD40 결합 도메인; 가변 영역)를 코딩하는 DNA는 단리되고, 증폭되고, 다른 단백질, 예를 들면 인간 IgG를 코딩하는 DNA에 연결된다(Verhoeyen et al., 상기 참조; Reichmann et al., 상기 참조). 또한, 항원 결합 부위(가변 영역)는 완전히 다른 단백질에 연결되거나 또는 그곳에 삽입되어(Chaudhary et al., 상기 참조), 완전히 다른 단백질의 기능적 활성 뿐만 아니라 항체의 항원 결합 부위를 갖는 새로운 단백질이 형성될 수 있다.
또한, 항체의 더 작은 부분 또는 포유 동물 CD40에 특이적으로 결합하는 가변 영역을 코딩하는 DNA 서열도 또한 본 발명의 범위내에서 이용될 수 있다. 마찬가지로, CD40 리간드의 CD40 결합 영역(세포외 도메인)은 다른 CD40 결합 단백질을 제조하는데 이용될 수 있다. 올리고머를 형성하는 단백질 또는 펩티드를 코딩하는 DNA 서열은 CD40 항체의 항원 결합 도메인, 또는 CD40 리간드의 세포외 도메인을 포함하는 CD40 결합 단백질의 제조에 특히 유용하다. 그러한 올리고머 형성 단백질 중 몇가지가 미국 특허 출원 제07/969,703호에 기재되어 있으며, 유용한 다른 올리고머 형성 단백질이 또한 1993년 8월 13일자로 출원된 미국 특허 출원 제08/107,353호 및 1993년 9월 29일자로 출원된 미국 특허 출원 제08/145,830호에 기재되어 있다.
적합한 항체 또는 결합 단백질이 일단 얻어지면, 그들은 당업계의 숙련인에게 공지된 많은 기술에 의해 분리 또는 정제될 수 있다(Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow and Lane (eds), Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988 참조). 적합한 기술로는 펩티드 또는 단백질 친화성 칼럼, HPLC 또는 RP-HPLC, 단백질 A 또는 단백질 G 칼럼 상에서의 정제, 또는 이들 기술의 혼용법을 들 수 있다. 재조합 CD40 결합 단백질은 표준 방법에 따라 제조될 수 있고, 예를 들면 ELISA, ABC 또는 도트 블롯 분석을 포함한 당업계에 공지된 분석법을 이용하여 또한 CD40 mAb에 대해 기재된 바와 같은 생활성 분석법에 의해 CD40에 대한 결합 특이성에 대해 시험하였다.
시험관내 및 생체내 모델
본 명세서에 기재된 레이슈마니아증의 마우스 모델은 TH1 반응을 요구하는 감염성 질환의 적절한 동물 모델로서 인정된다. 다른 많은 감염성 인간 질환의 마우스 모델은 당업계에 알려져 있다. 예를 들면, 쉐르(Sher)는 후천성 면역 결핍증(AIDS), 톡소플라스마병, 레이슈마니아증, 트리파노소마병 및 쉬스토소마병을 포함한 몇가지의 다른 인간 질환의 마우스 모델을 논의하였다(Imm. Rev. 127:183-204, 1992 참조). 나단(Nathan)은 각종 인간 질환의 연구에서의 마우스의 이용을 재검토하였고, 마우스 모델에서 처음으로 관찰되었던 결과를 확인한 인간에서 수행된 연구 결과를 제시하였다(Mechanisms of Host Resistance to Infectious Agents, Tumors, and Allografts, R.M. Steinman and R.J. North, eds., Rockefeller University Press, New York, pp. 165-184 참조). 래트 및(또는) 마우스는 크립토스포리디아증(Meulbroek et al., Workshop on Pneumocystis, Cryptospridium and Microsporidium 113S), 살모넬라 티피무리엄(Salmonella typhimurium) 감염(Hougen et al., APMIS 98:30; 1990), 마이코박테리아 아비엄(Mycobacterium avium) 감염(Furney et al., Antimicrobial Agents and Chemotherapy 34:1629; 1990) 및 뉴머시스티스 카리니이(Pneumocystis carinii) 폐렴(Boylan and Current, J. Protozool. 38:138S; 1991; Soulez et al., Workshop on Pneumocystis, Cryptospridium and Microsporidium 123S)의 동물 모델에 사용되어 왔다.
다른 종도 또한 유용한 동물 모델을 제공한다. 예를 들면, 와이안드(Wyand)는 AIDS 약 및 백신의 증상발현전 평가를 위한 SIV-감염된 붉은털 원숭이의 사용을 논의하였다(AIDS Res. and Human Retroviruses 8:349; 1992 참조). 유인원 및 고양이 모델(Gardner, Antiviral Res. 15:267; 1991; Stahl-Hennig et al., AIDS 4:611; 1990) 및 마우스 모델(Ruprecht et al., Cancer Res. 50:5618s; 1990)은 항-레트로바이러스 요법의 평가를 위해 제안되었다. 붉은털 원숭이는 또한 샤가스병의 모델에 사용되었다(Bonecini-Almeida et al., Mem. Inst. Osaldo Cruz 85:163; 1990; Rio de Janeiro 참조). 각종 비인간 영장류는 자연적으로 또는 실험적으로 얻은 나병을 앓고 있는 것으로 관찰되었다(Meyers et al., Am. J. Trop. Med and Hyg. 44:24; 1991 참조). 당업계의 숙련인은 대식세포 병원체에 의해 야기되는 질환의 이러한 동물 모델 및 다른 가능한 많은 동물 모델을 인식하고 있을 것이다.
대식세포/단핵세포
활성화된 대식세포 영양 (식작용) 미생물은 고반응성 세포내 산소 종을 생성하고 방출하며 미생물(들)에 대한 포유 동물의 면역 및 염증 반응을 상향 조절하는 각종 시토킨을 분비한다. 대식세포의 활성화는 1가지 이상의 이러한 활성을 측정하는 것을 포함한 각종 수단에 의해 시험관내 시험으로 확인된다.
말초 혈액 단핵세포의 1차적 기능 중의 하나는 효소, 혈장 단백질 및 시토킨을 포함한 생물학적 활성 분자 배열의 합성 및 분비에 의해 면역 및 염증 반응을 조절하는 것이다. 단핵세포 유래된 시토킨으로는 IL-1α, IL-1β, IL-6, IL-8, IL-12 및 TNF-α를 들 수 있다. 단핵세포에 의해 생성된 이들 시토킨 모두는 감염에 대한 숙주 반응의 기본이 되는 광범위한 면역조절 특성을 갖는다.
LPS 및 펩티도글리칸과 같은 미생물 생성물은 단핵세포에 의한 시토킨 분비의 효과적인 유도제이다. 단핵세포 합성된 시토킨은 또한 자기조절을 통해 단핵세포 시토킨 합성을 조절하는 것으로 입증되었다. 특히, IL-1α, IL-1β, TNF-α, TGF-β, IFN-γ, GM-CSF 및 IL-3은 모두 단독으로 또는 다른 자극원과 같은 함께 작용하여 단핵세포 시토킨 분비의 어떠한 면을 자극하는 것으로 밝혀졌다. 반대로, IL-4는 시토킨 분비 및 호흡 폭발 활성을 포함한 단핵세포 활성화의 유도에 대한 잠재적인 길항 효과를 갖는다.
활성화된 대식세포는 인터루킨-6(IL-6), 인터루킨-1α 및 β(IL-1α, IL-1β), 종양 괴사 인자 α(TNF-α), 인터루킨-8(IL-8), 대식세포 억제 펩티드-1α(MIP-1α), 대식세포 억제 펩티드-1β(MIP-1β), 인터루킨-12(IL-12) 및 성장 조절 단백질(GRO)을 포함한 각종 시토킨을 생성하고 분비한다. 따라서, 활성화는 이러한 1종 이상의 시토킨의 분비를 측정하거나 또는 이러한 1종 이상의 시토킨에 대한 mRNA의 전사 정도를 분석함으로써 확인될 수 있다. 또한, 대식세포는 시험관내에서 얻어지고 배양되며(시험관내 또는 생체내에서의 활성화 후에), 활성화는 미생물체의 효과적인 식작용 및(또는) 각종 시토킨의 생성을 관찰함으로써 확인될 수 있다. 반응성 산소 종의 생성 및 방출을 측정하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다.
임의의 자극원에 대한 반응에서 대식세포에 의해 합성되는 IL-12는 세포 면역에 대한 개시 시토킨인 것으로 알려져 있다(Scott, P., Science 260:496, 1993; Romagnini, S., Immunol. Today 13:379, 1992; Locksley, R.M., Proc., Natl. Acad. Sci. USA 90:5970, 1993 참조). 단핵세포/대식세포는 IFN-γ를 분비하기 위해 천연 킬러 세포(NK) 및 수용되지 않은 T 세포를 자극하는 각종 병원체에 대한 반응에서 IL-12를 방출한다(Trinchierei, G., Immunol. Today 14:335, 1993 참조). IL-12는 또한 T 세포 및 NK 세포의 세포 용해 활성을 증가시키며(Gately et al., Int. Immunol. 6:57, 1994), 많은 감염성 질환에 중요한 역할을 하는 것으로 밝혀졌다(Gazzinelli et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6115, 1993; Heinzel et al., J. Exp. Med. 177:1505, 1993; Hsieh et al., Science 260:547, 1993; Tripp et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:3725, 1993; Sypek et al., J. Exp. Med. 177:1797, 1993 참조).
다른 연구에서, IL-12는 항-종양 및 항-물질대사 활성을 나타내었다(Brunda et al., J. Exp. Med. 178:1223, 1993 참조). 또한, IL-12 생성은 인간 면역결핍증 바이러스(HIV)로 감염된 개체에서 손상된 것으로 밝혀졌으며, IL-12 생성 능력의 손상은 HIV-관련 질환의 특징인 면역결핍증에 영향을 미치는 것으로 생각된다(Chehimi et al., J. Exp. Med. 179:1361, 1994 참조). IL-12의 농도는 예를 들면 장(Zhang) 등의 문헌(J. Clin. Invest. 93:1733, 1994)에 기재된 바와 같이 또는 본 명세서에 기재된 효소 면역측정법 또는 생물 검사법에 의해 평가될 수 있다.
CD40 결합 단백질의 투여
본 발명은 유효량의 CD40 결합 단백질 및 적절한 희석제 및 담체를 포함하는 치료 조성물을 사용하는 방법, 및 면역 및 염증성 반응을 조절하는 방법을 제공한다. CD40 결합 단백질을 가용성 시토킨 수용체 또는 시토킨, 또는 다른 면역조절 분자와 함께 사용할 수도 있다. 예를 들면, CD40 결합 단백질은 과립구-대식세포 콜로니 자극 인자(GM-CSF), 인터페론-감마(IFN-γ) 및 미국 특허 제5,073,627호에 기재된 바와 같은 GM-CSF를 포함하는 융합 단백질과 같은 단핵세포/대식세포를 활성화시키는 것으로 알려진 인자들과 함께 사용될 수 있다. CD40 결합 단백질 및 인자(들)은 적합한 용액 중에 배합되거나, 또는 동시에, 순차적으로 또는 개별적으로 투여될 수 있다.
치료 용도를 위해서, 정제된 CD40 결합 단백질은 징후에 적합한 방법으로 치료하기 위해 환자, 바람직하게는 인간에게 투여된다. 따라서, 예를 들면 면역 및(또는) 염증 반응을 증가시키기 위해 투여된 CD40 결합 단백질 조성물은 거환약 주사, 연속 주입, 이식물로부터의 지연된 방출 또는 다른 적합한 기술에 의해 제공될 수 있다. 전형적으로, 치료제는 생리학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제와 함께 정제된 CD40 결합 단백질을 함유하는 조성물 형태로 투여될 것이다. 그러한 담체는 이용된 투약량 및 농도에서 수용자에 대해 비독성이어야 한다.
통상적으로, 그러한 CD40 결합 단백질 조성물의 제조는 CD40 결합 단백질과 완충액, 항산화제, 예를 들면 아스코르브산, 저분자량(약 10 잔기 미만) 폴리펩티드, 단백질, 아미노산, 글루코스, 수크로스 또는 덱스트린을 포함한 탄수화물, 킬레이트화제, 예를 들면 EDTA, 글루타티온 및 다른 안정화제 및 부형제와의 배합을 필요로 한다. 중성 완충된 염수 또는 동종 혈청 알부민과 혼합된 염수는 전형적인 적절한 희석제이다. 바람직하게는, 생성물은 희석제로서 적절한 부형제 용액(예를 들면, 수크로스)을 사용하여 동결건조물로서 제형화된다.
적절한 투약량은 시험으로, 처음에는 적절한 동물 모델에서, 이후에는 치료될 종에서 결정될 수 있다. 투여량 및 투여 횟수는 물론 치료될 징후의 특성 및 심도, 필요한 반응, 치료될 개체의 조건 등과 같은 인자에 좌우될 것이다. 적절한 투약량은 단독으로 또는 다른 면역 반응 조절제와 함께 약 10 ng/㎏/일 내지 약 100 ㎍/㎏/일의 범위내에 든다. 바람직하게는, 약 1 내지 20일 동안 약 100 ng/㎏/일 내지 약 1000 ng/㎏/일의 투약량이 적절한 생물학적 효과를 유도하는 것으로 예상될 수 있다. 약 1 ㎍/㎏/일 내지 약 100 ㎍/㎏/일의 거환약 주입은 약 4일 간격으로 이루어져 면역 및(또는) 염증 반응의 자극을 통해 효과를 발휘할 수 있다.
본 명세서에 인용된 모든 참고 문헌의 관련 설명은 특별하게 참고로 삽입되었다. 다음 실시예는 특정 실시태양을 예시하려는 것일뿐 본 발명의 영역을 제한하려는 것은 아니다.
실시예 1
이 실시예는 CD40 리간드가 비장의 항원 제공 세포(APC)에 의한 IL-12 생성의 T 세포 의존성 조절에 관여한다는 것을 입증하는 것이다. 이 계에서는, 항-CD3이 비장 T 세포를 활성화시키며, 그들이 비장 APC에 의한 IL-12 생성을 조절하도록 하는 것으로 추측되었다.
실험되지 않은 순수한 C57BL/6 마우스로부터 얻은 비분할된, 비자극된 비세포를 항-CD40L(MR1; PharMingen으로부터 시판됨, San Diego, CA 소재) 10 ㎍/웰의 존재 또는 부재하에 CD3에 대한 항체(333 ng/웰)로 코팅된 96-웰 플레이트 중의 4 x 105세포/웰에서 배양시켰다. 20시간 후에 상징액을 제거하고 각종 시토킨의 존재에 대해 시험하였다. IFN-γ 농도를 시판되는 모노클로날 항체 쌍(PharMingen사 제품, San Diego, CA 소재)을 이용하며 파르밍겐(PharMingen)사에 의해 제공된 프로토콜에 따라 수행된 2부위 ELISA에 의해 결정하였다. IFN-γ에 대한 ELISA는 IFN-γ 100 pg/ml에 대해 민감한 것이었으며, 표준으로서 젠자임(Genzyme)(Cambridge사 제품, MA 소재)으로부터의 마우스 IFN-γ를 이용하였다. IL-12에 대한 분석은 문헌 [Kennedy et al., Eur. J. Immunol. 24:2271 (1994)]에 기재된 바와 같이 수행하였다. 하기 표 1에 나타낸 바와 같이, IL-12를 이러한 배양액에서 생성시켰으며, 항-CD40L을 포함시킨 결과 IL-12 생성이 〉90%까지 억제되었다.
활성화된 비세포에 의한 시토킨 생성에 대한 항-CD40L의 효과
자극원 IL-12 (pg/ml) IFN-γ(ng/ml)
배지 〈1 〈0.2
항-CD3 42.3 72.8
항-CD3 + 항-CD40L 3.6 46.2
항-CD40L은 또한 IFN-γ의 생성을 부분적으로 억제하였지만, IL-2의 생성을 억제하지는 못하였다. 또한, 항-CD40L은 자극된 비세포에 의한 IL-10의 생성을 증가시키지 못하였다. 따라서, 항-CD40L은 IL-10 유도에 의한 IL-12 생성 억제는 수행하지 못하였다.
실시예 2
이 실시예는 항원 의존성 계에서 IL-12의 생성이 CD40L에 의존적이라는 것을 입증하는 것이다. CD6으로서 불리우는 TH1 클론(키홀 림펫 헤모시아닌; KLH에 대해 특이적임)의 수를 변화시키며 항-CD40L의 존재 또는 부재하에 4 x 105자극된 공통 유전형의 비세포 및 항원(50 ㎍/ml KLH)으로 96-웰 플레이트에서 자극시켰다. 20시간 후에 상징액을 모으고 상기한 바와 같이 IL-12 또는 IFN-γ에 대해 시험하였다. 결과를 하기 표 2에 나타내었다.
IL-12의 항원 의존성 생성의 CD40L에 대한 의존성
세포/웰 IL-12(pg/ml) IFN-γ(ng/ml)
배지 항-CD40La 항-IFN-γb 배지 항-CD40L
20,000 22 〈2 25 30 24
10,000 24 〈2 22 23 17
5,000 16 〈2 15 13 8
2,500 10 〈2 8 7 5
a: 10 ㎍/ml MR1 (PharMingen사 제품, San Diego, CA 소재)
b: 1,500 (v/v) XMG1.2 (PharMingen사 제품, San Diego, CA 소재)
항-CD40L을 혼입시킨 결과 이들 항원 의존성 계에서 IL-12의 생성이 〉90%까지 억제되었다. 대조적으로, IFN-γ로의 중화 항체의 혼입은 IL-12 생성에 대한 억제 효과를 갖지 못하였다. 항-CD40L은 IL-12 생성에 대한 그의 강한 억제 효과에도 불구하고, 동일한 배양액에서 IFN-γ의 생성을 부분적으로만 억제하였다. IL-2는 상징액에서 검출되지 않았다.
C3G9로서 불리우는 H-2d-특이적인 동종 반응성 TH1 클론이 조사된 C.B17 SCID 비세포 또는 유착 BALB/c 복막 삼출물 세포(PEC)로 자극되었을 때 유사한 결과가 관찰되었다. 두 경우에서, 이 배양액으로의 항-CD40L의 혼입은 IL-12의 생성을 〉90%까지 억제한 반면, 항-IFN-γ의 혼입은 억제 효과를 나타내지 못하였다.
실시예 3
이 실시예는 기능적 CD40L이 결핍된 마우스로부터 얻은 비세포가 IL-12의 T 세포 의존성 생성에서 결함이 있는 것으로 나타났음을 입증하는 것이다. 비세포는 실질적으로 상기 실시예 1에 기재한 바와 같이 자극되었다. CD40 리간드 유전자의 파괴를 위한 동질접합성인 실험되지 않은 순수한 C57BL/6 X 129/J 마우스(CD40 리간드 녹아웃, 또는 CD40L KO 마우스, 현재 계류중인 1994년 1월 20일에 출원된 미국 특허 출원 제08/184,422호에 기재됨) 또는 대조군 B6(C57BL/6) 또는 F1(B6x129)로부터 얻은 비분할된, 비자극된 비세포를 CD3(333 ng/웰)에 대한 항체로 코팅된 96-웰 플레이트 중의 4 x 105세포/웰에서 배양하였다. 20시간 후에 상징액을 제거하고 생물 검사법으로 (IL-12 및 IL-2, 도 1A 및 도 1B) 또는 ELISA(IFN-γ 및 IL-10, 도 1C 및 도 1D)에 의해 각종 시토킨의 존재에 대해 시험하였다. IL-2 ELISA는 케네디 등의 문헌(상기 참조)에 기재된 바와 같은 CTLL-2 세포주를 이용하였다. IL-10 ELISA는 파르밍겐사의 모노클로날 항체 및 프로토콜을 이용하는 상기한 IFN-γ ELISA와 유사하였다. 표준으로서 사용하기 위한 정제된 IL-10은 바이오소스 인터내셔날(Biosource International)(Camarillo, CA) 또는 젠자임(Genzyme)(Cambridge, MA)사로부터 얻을 수 있다. 이 결과를 도 1에 나타내었고, 이것은 3가지 실험의 대표가 된다.
IL-12는 B6 및 F1 마우스의 항-CD3 자극된 비세포에 의해 생성되지만, 항-CD3 자극된 CD40L KO 비세포로부터 얻은 상징액에서 검출되지 않았다(〈2 pg/ml). 대조적으로, CD40L KO 비세포에 의해 생성된 IFN-γ 농도(ng/ml)가 대조군의 것 보다 낮긴 하지만(도 1C), CD40L 비세포는 IL-2, IL-10 또는 IFN-γ를 생성하는 그의 능력 면에서 명확한 결함은 없었다. CD40L KO 및 B6 대조군 마우스에 의해 생성된 IL-10의 양은 둘다 F1 대조군 마우스에 의해 생성된 것보다 일관되게 낮았다(도 1D). 항-CD3 결핍된 배양액에서 시토킨은 검출되지 않았다.
실시예 4
이 실시예는 항-IL-10 및 CD40L의 가용성 삼합체 형태(CD40LT)가 CD40L KO 비세포에 의한 T 세포 의존성 IL-12 생성을 증강시킨다는 것을 입증하는 것이다. IL-12 생성을 억제하는 IL-10도 또한 상기 배양액에 존재하기 때문에, 항-CD3 만의 존재하에 또는 항-IL-10(2 ㎍/ml)을 함께 혼합시켜 상기한 바와 같이 복제 배양액을 제조하였다. 항-IL-10의 존재하에 항-CD3으로 자극된 대조군 비세포로부터 얻은 상징액은 항-IL-10의 부재하에 생성된 것보다 약 4배 더 높은 농도의 IL-12를 함유하였다(도 2). 또한, 항-CD3 및 항-IL-10과 함께 인큐베이션된 CD40L KO 비세포로부터 얻은 상징액에서 낮은 농도의 IL-12가 검출되었다(도 2).
CD40LT의 존재 또는 부재하에 이러한 조건하에 IL-12를 생성하는 CD40L KO 비세포의 능력을 하기 표 3에 나타내었다.
활성화된, CD40L 결핍된 비세포에 의한 시토킨 생성에 대한 항-IL-10 및 CD40LT의 효과
실험 1 실험 2
자극원 IL-12a IL-2a IFN-γb IL-12a IL-2a IFN-γb
αCD3 〈2 658 58 〈2 495 21
αCD3+CD40LT NTc NTc NTc 6.9 522 28
αCD3 + αIL-10 3.4 383 68 5.4 468 29
αCD3 + αIL-10 + CD40LT 20.1 378 54 18.6 627 41
a: pg/ml
b: ng/ml
c: 시험되지 않음
항-CD3, 항-IL-10 및 CD40L 삼합체(25 ㎍/ml)로 자극된 CD40L KO 비세포는 항-CD3 + 항-IL-10으로 자극된 CD40L KO 비세포 보다 약 5배 더 높은 농도의 IL-12를 생성하였다. CD40LT는 또한 항-CD3을 함유하지만 항-IL-10을 함유하지 않은 배양액에서 저농도의 IL-12 생성을 유도하였다. CD40LT는 항-CD3 활성화된 CD40L KO 비세포에 의한 IL-12의 생성에 대한 그의 효과와는 대조적으로 이 배양액에서 IL-2 또는 IFN-γ의 생성을 일관되게 증가시키지 못하였다. 항-CD3 결핍된 배양액에서는 시토킨이 검출되지 않았다.
실시예 5
이 실시예는 CD40L의 가용성 삼합체 형태(CD40LT)가 인간 단핵세포에 의한 IL-12 생성을 증가시킨다는 것을 입증하는 것이다. 2가지의 다른 공여체로부터 전혈을 얻고, 문헌 [Alderson et al., J. Exp. Med. 178:669 (1993]에 기재된 바와 같이 역류 세정에 의해 단핵세포를 분리하였다. 단핵세포를 배지 만에서, 또는 CD40LT(1 ㎍/ml), IFN-γ(10 ng/ml), 또는 GM-CSF(10 ng/ml) 만의 존재하에 또는 복합체(CD40LT + IFN-γ 또는 CD40LT + GM-CSF)에서 24-웰 플레이트(Costar Corp., Cambridge, MA) 중의 5 x 105세포/웰에서 배양시켰다. CD40L(10 ㎍/ml)에 대한 중화 모노클로날 항체를 동시 자극 효과가 특이적인지를 결정하기 위해 포함시켰다. 배양한지 24시간 후에, 상징액을 회수하고 헤테로이량체 IL-12를 검출하는 시판 EIA(R D Systems, Minneapolis, MN)를 이용하여 IL-12의 존재에 대해 시험하였다. 결과를 하기 표 4에 나타내었다.
인간 단핵세포에 의한 IL-12 생성에 대한 CD40LT의 효과
자극원 공여체 1 공여체 2
없음 〈7.8 〈7.8
CD40LT 〈7.8 〈7.8
IFN-γ 105.6 53.2
GM-CSF 〈7.8 〈7.8
IFN-γ + CD40LT 495.3 146.2
GM-CSF + CD40LT 〈7.8 〈7.8
IFN-γ + CD40LT +항CD40L 107.5 58.3
배지에 CD40LT 및 IFN-γ를 첨가한 결과, IFN-γ만 존재하는 경우에 비해 IL-12 생성이 증가되었다(4 내지 5배). 이러한 증가는, CD40L에 특이적으로 결합하고 그의 수용체인 CD40에 대한 CD40의 결합을 억제하는 모노클로날 항체에 의한 효과를 차단하는 능력에 의해 입증되는 바와 같이, 특별하게는 CD40LT로 인한 것이었다. GM-CSF 및 CD40LT는 단독으로 또는 함께 이 실험에서 IL-12의 분비를 자극하지 않았으며, 막 결합된 CD40L로 자극된 단핵세포에 의한 다른 시토킨의 생성을 동시 자극하는 GM-CSF 또는 IFN-γ 중 어느 하나의 능력과는 뚜렷한 차이가 있었다(Alderson et al., 상기 참조). 이러한 결과는 가용성 CD40L이 인간 단핵세포에 의한 IL-12 분비에 대한 잠재적인 동시 자극원이라는 것을 입증하는 것이다.
실시예 6
이 실시예는 CD40L KO 마우스가 심각한 T 세포 아네르기를 나타낸다는 것을 입증하는 것이다. CD40L KO 마우스 및 대조군 C57BL/6 X 129/J F1 하이브리드(F1)를 문헌 [Van Buren, et al., Transplantation 40:694 (1985)]에 기재된 바와 같이, 주로 그레이 및 제닝스(Gray and Jennings)의 방법(Ann. Rev. Tuberculosis 72:171, 1955 참조)의 방법에 따라 정제된 단백질 유도체(PPD)에 대한 지연형 과감작(DTH)에 대해 시험하였다.
마우스(CD40L KO 또는 대조군)를 완전 프로인트(Freund's) 보조액(CFA; H37Ra) 200 ㎕로 피하 주사하여 면역화시켰다. 3주 후에, 면역화된 마우스 및 비면역화된 대조군의 한 군을 발 패드 후면에 50 ㎕ 부피의 PPD 2 ㎍을 피내 주사하여 챌린지시켰다. 동 부피의 생리 식염수를 동시에 반대측 발 패드에 주사하였다.
48시간 후에, 마이크로메터로 발 패드 두께를 측정하고, 결과를 PPD 챌린지된 발 패드 및 식염수 챌린지된 발 패드 사이의 팽윤 정도의 차이로서 표시하고, PPD로 챌린지된 비면역화된 동물로 관찰된 팽윤 정도와 비교하였다. 결과를 도 3에 나타내었다.
이 결과는 시험된 개개의 CD40L KO 마우스 사이에 반응 차이가 약간 있긴 하지만(도 3A), 하나의 군으로서의 CD40L 결핍된 마우스는 항원에 대한 DTH 반응을 일으키는 그의 능력이 심하게 손상되었음을 입증하는 것이다(도 3B). 이 결과는 CD40L이 항원에 대한 세포 면역 반응의 발생에 중요한 것임을 확인시켜 주는 것이다.
실시예 7
이 실시예는 CD40 리간드가 레이슈마니아에 대한 세포 매개된 면역 반응의 발생에 중요함을 입증하는 것이다. 다른 동종 번식 마우스 족에서의 엘. 메이저(L. Major) 감염 경로는 TH1 또는 TH2 CD4+T 림프구의 차별적 발생에 의해 결정되었다. IL-4 분비 TH2 세포의 팽창은 BALB/c 마우스를 질병 및 기생충 전이에 민감하게 한다. 대조적으로, IFN-γ 생성 TH1 세포의 팽창은 C57BL/6 및 129/J를 포함한 저항 마우스 족이 보호 면역성을 얻을 수 있게 한다.
CD40L KO 마우스 또는 대조군 마우스(129/J, C57BL/6)를 2 x 105엘. 메이저로 뒷 발 패드에 주사하여 감염시켰다. 물리적 징후를 관찰하고, 비감염된 반대측 발에 비해 감염된 발의 발 패드 두께를 측정함으로써 질병 진행을 확인하였다. CD40L KO 마우스는 전편모충 접종 후 4 내지 6주 내에 감염된 뒷발 패드에 큰 병변을 발생시켰다. 대조적으로, 대조군 마우스는 엘. 메이저 감염의 진행에 내성을 나타내었다. 발 패드 크기의 평균 변화율을 도 4에 나타내었다.
감염된 동물의 비장 및 드레이닝 림프선(LNC)으로부터 얻은 림프구를 고정 항-CD3 또는 가용성 레이슈마니아 항원으로 시험관내에서 자극하고, 시토킨 분비를 평가하였다. IFN-γ 농도를 상기한 바와 같은 2부위 ELISA에 의해 측정하였다. IL-4 농도를 표준으로서 임뮤넥스 코포레이션(Immunex Corporation)(Seattle, WA)사에서 제조된 재조합 마우스 IL-4를 사용하여, 파르밍겐사로부터 얻은 항체 및 프로토콜을 사용하는 유사한 방법에 의해 측정하였다. 결과를 표 5에 나타내었다.
레이슈마니아 감염된 마우스의 세포에 의한 시토킨 분비
세포 유형 자극원 CD40L KO 129/J C57BL/6
IFN-γ(ng/ml) IL-4(ng/ml) IFN-γ(ng/ml) IL-4(ng/ml) IFN-γ(ng/ml) IL-4(ng/ml)
비장 항-CD3 164.4 694 211.3 35a 458.1 45a
LNC 항-CD3 188.3 32a 336.2 NDb 379.8 NDb
비장 레이슈c 2 NDb 81.1 NDb 283.3 NDb
LNC 레이슈c 5.7 NDb 118.3 NDb 76 NDb
a: 검출가능성의 한계
b: 검출될 수 없음
c: 가용성 레이슈마니아 항원
CD40L KO 마우스의 세포는 대조군 마우스의 세포 보다 훨씬 더 적은 IFN-γ 및 훨씬 더 많은 IL-4를 생성시켰으며, 이것은 CD40L KO 마우스가 레이슈마니아에 대한 TH1 반응을 일으키는 능력에 결함을 나타내었음을 암시하는 것이다. 이 결과는 CD40L KO 마우스가 그의 내성에도 불구하고 엘. 메이저에 민감하다는 것을 입증하는 것이다.
실시예 8
이 실시예는 가용성, 삼합체 CD40 리간드가 민감성 마우스에서의 레이슈마니아증의 경과를 경감시켰음을 입증하는 것이다. CD40L KO 마우스, 민감성 BALB/c 마우스 및 대조군 C57BL/6 X 129/J F1 (F1) 하이브리드를 상기한 바와 같이 엘. 메이저로 감염시켰다. 재조합 CD40 리간드의 가용성 삼합체 형태(CD40LT)를 감염시킨 날을 0일로 시작으로 2주 동안 1일 마다 마우스에 투여하였다(50 ㎍/일). 질병 진행을 상기한 바와 같이 발 패드 두께를 측정하고 질병의 징후를 관찰하여 모니터하였다. 결과를 도 5에 나타내었다. CD40 리간드는 CD40L KO 및 BALB/c 마우스 모두에서 레이슈마니아증의 생리학상 심각성을 감소시켰다.
실시예 9
이 실시예는 가용성, 삼합체 CD40 리간드가 뉴머시스티스에 의한 민감성 마우스의 감염을 조절하거나 또는 경감시킨다는 것을 입증하는 것이다. CD40L KO 마우스를 특정 병원체 유리 환경에서 유지하였다. 한 군의 마우스(n=12)에 출생후 두 번째 날을 개시일로 하여 12주 동안 1주 마다 3회씩 CD40LT를 투여하였다(50 ㎍/일). 두 번째 군의 마우스(n=12)에 출생후 16번째 주를 개시일로 하여 5주 동안 1주 마다 3회씩 CD40LT를 투여하였다(50 ㎍/일). 대조군 마우스(n=34)에는 CD40LT를 투여하지 않았다. 결과를 도 6에 나타내었다.
대조군 마우스는 생후 약 5개월 째에 죽기 시작하였으며, 약 11개월 까지 모두 죽었다. 죽은 동물에 대해서 부검을 실시하고 조직학적 연구를 실시하여 죽음의 원인을 알아내었다. 확인된 병원성/기회성 병원체는 뉴머시스티스였으며, 죽은 마우스의 폐에서는 은 염색에 의한 뉴머시스티스 감염의 특징적인 결과가 나타났다. 대조적으로, 출생 직후를 개시일로 하여 12주 동안 또는 생후 16주째를 개시일로 하여 5주 동안 CD40LT를 투여한 마우스는 상당히 오랫동안 생존하였으며, 최초의 사망은 약 10개월째에 발생하였으며, 아주 많은 마우스가 생후 1년이 경과한 후에도 명백하게 건강하게 생존하고 있었다. 따라서, CD40L KO 마우스는 뉴머시스티스 감염의 유용한 동물 모델이며, 이러한 기회성 생물체는 정상 상(flora)으로서 마우스에 존재하는 것으로 보이지만, 질병은 완전 세포 매개된 면역계에 의해 억제된다. CD40 리간드는 민감한 개체에서의 뉴머시스티스 감염을 억제하는데 유용할 것이며, 마찬가지로 세포 면역 반응이 저하된 개체에서 다른 질병을 억제하는 데에도 유용할 것이다.

Claims (26)

  1. 제약학상 허용되는 담체에 지지된, 병원성 또는 기회성 생물체에 대한 보호성 TH1 면역 반응을 자극하는데 유효한 양의 CD40 결합 단백질을 투여하는 것을 포함하는, 병원성 또는 기회성 생물체로 감염된 포유 동물의 치료 방법.
  2. 제1항에 있어서, CD40 결합 단백질이 CD40 리간드, CD40에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체 및 그의 배합물로 이루어진 군에서 선택된 것인 방법.
  3. 제1항에 있어서, 병원성 또는 기회성 생물체가 트리파노소마(Trypanosoma), 살모넬라(Salmonella), 뉴머시스티스(Pneumocystis), 톡소플라스마(Toxoplasma), 리스테리아(Listeria), 마이코박테리아(Mycobacteria) 및 레이슈마니아(Leishmania)로 이루어진 군에서 선택된 것인 방법.
  4. 제1항에 있어서, CD40 결합 단백질의 투여량이 약 10 ng/kg/일 내지 약 100 ㎍/kg/일인 방법.
  5. 제약학상 허용되는 담체에 지지된, 대식세포를 활성화시키는데 유효한 양의 CD40 결합 단백질을 투여하는 것을 포함하는, 대식세포의 활성화 방법.
  6. 제5항에 있어서, CD40 결합 단백질이 CD40 리간드, CD40에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체 및 그의 배합물로 이루어진 군에서 선택된 것인 방법.
  7. 제6항에 있어서, CD40 결합 단백질의 투여량이 약 10 ng/kg/일 내지 약 100 ㎍/kg/일인 방법.
  8. 제약학상 허용되는 담체에 지지된, 세포 면역 반응을 자극하는데 유효한 양의 CD40 결합 단백질을 투여하는 것을 포함하는, 세포 면역 반응이 저하된 포유 동물의 치료 방법.
  9. 제약학상 허용되는 담체에 지지된 유효량의 CD40 결합 단백질을 투여하는 것을 포함하는, 포유 동물에서의 항종양 반응을 자극하는 방법.
  10. 제약학상 허용되는 담체에 지지된 유효량의 CD40 결합 단백질을 투여하는 것을 포함하는, 포유 동물에서의 보호성 TH1 면역 반응을 유도하는 방법.
  11. 병원성 또는 기회성 생물체에 대한 보호성 TH1 면역 반응을 자극하는데 유효한 양의 CD40 결합 단백질 및 제약학상 허용되는 담체를 포함하는, 병원성 또는 기회성 생물체로 감염된 포유 동물 치료용 조성물.
  12. 제11항에 있어서, CD40 결합 단백질이 CD40 리간드, CD40에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체 및 그의 배합물로 이루어진 군에서 선택된 것인 조성물.
  13. 제11항에 있어서, 병원성 또는 기회성 생물체가 트리파노소마(Trypanosoma), 살모넬라(Salmonella), 뉴머시스티스(Pneumocystis), 톡소플라스마(Toxoplasma), 리스테리아(Listeria), 마이코박테리아(Mycobacteria) 및 레이슈마니아(Leishmania)로 이루어진 군에서 선택된 것인 조성물.
  14. 제11항에 있어서, CD40 결합 단백질의 투여량이 약 10 ng/kg/일 내지 약 100 ㎍/kg/일인 조성물.
  15. 대식세포를 활성화시키는데 유효한 양의 CD40 결합 단백질 및 제약학상 허용되는 담체를 포함하는, 대식세포 활성화용 조성물.
  16. 제15항에 있어서, CD40 결합 단백질이 CD40 리간드, CD40에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체 및 그의 배합물로 이루어진 군에서 선택된 것인 조성물.
  17. 제16항에 있어서, CD40 결합 단백질의 투여량이 약 10 ng/kg/일 내지 약 100 ㎍/kg/일인 조성물.
  18. 세포 면역 반응을 자극하는데 유효한 양의 CD40 결합 단백질 및 제약학상 허용되는 담체를 포함하는, 세포 면역 반응이 저하된 포유 동물 치료용 조성물.
  19. 제18항에 있어서, CD40 결합 단백질이 CD40 리간드, CD40에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체 및 그의 배합물로 이루어진 군에서 선택된 것인 조성물.
  20. 제19항에 있어서, CD40 결합 단백질의 투여량이 약 10 ng/kg/일 내지 약 100 ㎍/kg/일인 조성물.
  21. 유효량의 CD40 결합 단백질 및 제약학상 허용되는 담체를 포함하는, 포유 동물에서의 항종양 반응 자극용 조성물.
  22. 제21항에 있어서, CD40 결합 단백질이 CD40 리간드, CD40에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체 및 그의 배합물로 이루어진 군에서 선택된 것인 조성물.
  23. 제22항에 있어서, CD40 결합 단백질의 투여량이 약 10 ng/kg/일 내지 약 100 ㎍/kg/일인 조성물.
  24. 제약학상 허용되는 담체에 지지된 유효량의 CD40 결합 단백질을 투여하는 것을 포함하는, 포유 동물에서의 보호성 TH1 면역 반응을 유도하는 방법.
  25. 제24항에 있어서, CD40 결합 단백질이 CD40 리간드, CD40에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체 및 그의 배합물로 이루어진 군에서 선택된 것인 조성물.
  26. 제25항에 있어서, CD40 결합 단백질의 투여량이 약 10 ng/kg/일 내지 약 100 ㎍/kg/일인 조성물.
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Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999022008A1 (fr) * 1997-10-27 1999-05-06 Sumitomo Electric Industries, Ltd. Inducteur pour la production d'un anticorps specifique de l'antigene, vecteur d'expression contenant le gene requis a cette fin, et procede pour induire la production de l'anticorps specifique de l'antigene
CA2313805A1 (en) * 1997-12-19 1999-07-01 Immunex Corporation Method for reducing susceptibility to hiv infection
ES2249907T3 (es) * 1998-05-23 2006-04-01 Leiden University Medical Center Anticuerpos de union cd40 y peptidos ctl para el tratamiento de tumores.
ATE412427T1 (de) 2000-02-02 2008-11-15 Us Health Cd40-ligand als adjuvant für respiratorisches syncytialvirus-impfstoff
DK2066339T3 (da) 2006-09-18 2014-11-03 Univ Arkansas Sammensætninger og fremgangsmåder til forstærkning af immunreaktioner
CN102037135A (zh) 2007-10-30 2011-04-27 阿肯色大学评议会 增强对有鞭毛的细菌的免疫反应的组合物和方法
CA3156538C (en) 2007-11-01 2023-12-12 The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Compositions and methods of enhancing immune responses to eimeria
ES2643646T3 (es) 2010-01-21 2017-11-23 The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Vectores de vacuna y métodos para potenciar las respuestas inmunitarias
EP2579901B1 (en) 2010-06-09 2019-08-07 The Board of Trustees of The University of Arkansas Vaccine and methods to reduce campylobacter infection
CN113461819B (zh) 2011-04-29 2024-01-02 埃派斯进有限公司 抗-cd40抗体及其使用方法
DK2914627T3 (da) 2012-10-30 2021-07-12 Apexigen Inc Anti-cd40-antistoffer og fremgangsmåder til anvendelse
NZ711019A (en) 2013-02-14 2019-07-26 Univ Arkansas Compositions and methods of enhancing immune responses to eimeria or limiting eimeria infection
BR112015023024B1 (pt) 2013-03-15 2022-04-19 The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Vetor de vacina e composições farmacêuticas compreendendo o mesmo
WO2017009842A2 (en) 2015-07-16 2017-01-19 Biokine Therapeutics Ltd. Compositions and methods for treating cancer
EA201892362A1 (ru) 2016-04-18 2019-04-30 Селлдекс Терапьютикс, Инк. Агонистические антитела, которые связываются с cd40 человека, и варианты их применения
WO2017192671A1 (en) 2016-05-03 2017-11-09 The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Yeast vaccine vector including immunostimulatory and antigenic polypeptides and methods of using the same

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK0667901T4 (da) * 1991-10-25 2008-11-10 Immunex Corp Hidtil ukendt cytokin
WO1994004570A1 (en) * 1992-08-21 1994-03-03 Schering Corporation Cd40 ligand, anti cd40 antibodies, and soluble cd40
AU686230B2 (en) * 1993-10-01 1998-02-05 Immunex Corporation Antibodies to CD40

Also Published As

Publication number Publication date
AU5301196A (en) 1996-09-18
JPH11506418A (ja) 1999-06-08
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EP0812206B1 (en) 2002-07-10
CA2213798C (en) 2001-02-06
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MX9706588A (es) 1997-11-29
NZ305083A (en) 1999-06-29
DE69622259T2 (de) 2003-03-27
DE69622259D1 (de) 2002-08-14
CA2213798A1 (en) 1996-09-06
NO973875L (no) 1997-10-31
ES2179187T3 (es) 2003-01-16
WO1996026735A1 (en) 1996-09-06
DK0812206T3 (da) 2002-09-09
NO973875D0 (no) 1997-08-22
PT812206E (pt) 2002-11-29
JP3657271B2 (ja) 2005-06-08

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