KR102663311B1 - 천마를 포함하는 사료 첨가제 조성물 및 이의 제조 방법 - Google Patents
천마를 포함하는 사료 첨가제 조성물 및 이의 제조 방법 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 천마를 포함하는 사료 첨가제 조성물 및 이의 제조 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따른 천마(Gastrodia elata)를 유효 성분으로 포함하는 사료 첨가제 조성물 제조 방법에 의해 제조된 조성물은 급성 간질환 동물의 예방 또는 개선에의 효과를 가지고 있어, 사료, 사료 첨가제 등의 소재로 활용 가능하다.
본 발명에 따른 천마(Gastrodia elata)를 유효 성분으로 포함하는 사료 첨가제 조성물 제조 방법에 의해 제조된 조성물은 급성 간질환 동물의 예방 또는 개선에의 효과를 가지고 있어, 사료, 사료 첨가제 등의 소재로 활용 가능하다.
Description
본 발명은 천마를 포함하는 사료 첨가제 조성물 및 이의 제조 방법에 관한 것이다.
천연물은 생약, 식품, 화장품 및 각종 민약 등의 다양한 분야에서 이용되어 왔으며, 최근 첨단 BT 기술의 발전과 함께 산업분야로 크게 성장하고 있다. 최근에는 말라리아 치료를 위한 개똥쑥 유래 물질인 아르테미시닌(Artemisinin)이나 혈액순환장애 치료에 쓰이는 은행잎 유래 물질인 진코민(Zincomine) 등의 식물 유래 천연물질을 이용한 건강 개선 및 질병 치료에 대해 관심과 수요가 늘어나고 있는 추세이다. 특히 식물유래 천연물은 다양한 생리활성 물질들을 포함하고 있어 여러 증상 조절에 효과적이며 면역력 향상, 소화 개선, 성장호르몬 생성, 피부 질병 및 항암효과가 있어 그 가치 및 이용성이 높다. 이와 같이 식물유래 천연물의 효과가 입증됨에 따라 이를 가축의 사료에 활용하고자 하는 연구가 활발히 진행되고 있다.
간은 체외에서 들어온 물질 및 체내의 물질대사에서 중추적인 역할을 담당하며 지속적으로 효소 반응 및 에너지 대사가 일어나는 생체 기관이다. 현재 국내의 만성적 질병 중에서 간염, 간 경변증 및 간암이 차지하는 비중은 순환기계 질환과 함께 가장 높은 것으로 나타나고 있으며, 질병으로 인한 사망 원인의 큰 비중을 차지하는 실정이다.
특히 선진국에 비하여 음주 인구가 상대적으로 높고 폭음에 의한 간 손상 발생 원인이 높은 만큼 이에 대한 관심도 지대한 편이다. 바이러스 감염이나 음주에 의한 지속적인 간 조직의 손상은 간 경변증이나 간암으로 발전되는 질환의 특징을 가진다.
따라서, 이러한 간 조직의 생리적 특성 및 중요성을 고려할 때 간 질환의 치료 및 예방은 대단히 중요하며, 간 조직 손상을 줄이고 궁극적으로 치료 효과를 증진할 수 있는 조성물의 개발이 요구되는 실정이다.
본 발명은 전술한 문제 및 이와 연관된 다른 문제를 해결하는 것을 목적으로 한다.
본 발명의 목적은 천마(Gastrodia elata)를 건조시킨 후 추출물을 제조하는 단계; 상기 추출물을 건조시켜 천마 분말을 제조하는 단계; 및 상기 천마 분말을 포함한 혼합물을 살균 처리하는 단계;를 포함하는 사료 첨가제 조성물 제조 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 사료 첨가제 조성물 제조 방법에 의해 제조된 사료 첨가제 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 사료 첨가제 조성물을 포함하는 사료 조성물을 제공하는 것이다.
본 명세서에 개시된 발명의 기술적 사상에 따라 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 문제점을 해결하기 위한 과제로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제는 아래의 기재로부터 통상의 기술자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
이를 구체적으로 설명하면 다음과 같다. 한편, 본 출원에서 개시된 각각의 설명 및 실시형태는 각각의 다른 설명 및 실시 형태에도 적용될 수 있다. 즉, 본 출원에서 개시된 다양한 요소들의 모든 조합이 본 출원의 범주에 속한다. 또한, 하기 기술된 구체적인 서술에 의하여 본 출원의 범주가 제한된다고 볼 수 없다.
상기 목적을 달성하기 위한 일 양태로서, 본 발명은 천마를 포함하는 사료 첨가제 조성물 및 이의 제조 방법을 제공한다. 구체적으로, 본 발명은 천마를 유효성분으로 포함하는 사료 첨가제 조성물을 제조하는 방법 및 급성 간질환에의 예방 또는 개선을 위한 효과가 있는 사료 첨가제 조성물 또는 사료 조성물을 제공한다.
상기 목적을 달성하기 위한 일 양태로서, 본 발명은 (a) 천마를 건조시킨 후 추출물을 제조하는 단계; (b) 상기 추출물을 건조시켜 천마 분말을 제조하는 단계; 및 (c) 상기 천마 분말을 포함한 혼합물을 살균 처리하는 단계;를 포함하는 사료 첨가제 조성물 제조 방법을 제공한다.
본 발명에 있어서, '천마(Gastrodia elata)'는 난과에 속하는 식물이나 줄기와 잎이 퇴화되어 광합성을 하지 못하므로 독립적으로는 생육이 불가능하여 뽕나무버섯류와 공생관계를 통하여 생장을 하는 특성을 가지고 있다. 원산지는 한국, 일본, 중국 등으로 700 m 이상의 고산지대 참나무 군락지에서 잘 자라며 뇌출혈, 뇌졸중, 두통, 치매 등 뇌질환 계통과 고혈압, 심장병 등 순환기 질환, 마비 등 항경련작용에 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 또한 천마는 천마의 줄기 색깔에 따라 홍천마, 청천마 및 황천마 등으로 구분되고 있으며 그 주요 이용부위는 긴 타원형의 지하부 괴경이나 꽃과 줄기는 화장품 등으로 이용되고 있다.
본 발명에 있어서, 상기 (a) 단계의 '추출물'은 목적하는 물질, 예컨대 천마 또는 건조시킨 천마를 다양한 용매에 침지한 다음, 상온 또는 가온 상태에서 일정시간 동안 추출하여 수득한 액상성분, 상기 액상성분으로부터 용매를 제거하여 수득한 고형분 등의 결과물을 의미한다. 뿐만 아니라, 상기 결과물의 희석액, 이들의 농축액, 이들의 조정제물, 정제물 등을 모두 포함하는 것으로 포괄적으로 해석될 수 있다.
상기 추출물은 물 또는 다양한 유기용매 등으로 추출하여 수득할 수 있으며, 특별히 이에 제한되지 않으나, 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 및 또는 이들의 혼합용매로 추출하는 것일 수 있으며, 보다 바람직하게는 물을 이용하여 추출하는 것일 수 있다. 또한, 상기 추출물을 수득하기 위한 방법 역시 특별히 이에 제한되지 않으나, 바람직하게는 이의 건조물 또는 가공물 등을 상기 용매에 침지하고, 90 내지 120℃의 온도에서 추출하는 열수 추출법, 10 내지 25℃의 상온에서 추출하는 냉침 추출법, 40 내지 100℃로 가열하여 추출하는 가열 추출법, 초음파를 가하여 추출하는 초음파 추출법, 환류 냉각기를 이용한 환류추출법 등의 방법을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 열수 추출법을 사용하여 추출하는 것일 수 있다.
상기 추출용매는 중량의 1 내지 20배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하며, 추출온도는 90 내지 120℃인 것이 바람직하나 이에 제한되지 않는다. 또한, 추출시간은 1 내지 10시간인 것이 바람직하며, 6시간 내지 8시간동안 추출하는 것이 가장 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 동결건조이나 이에 한정하지 않는다.
또는, 물, 유기 용매, 또는 이의 혼합 용매를 사용하여 추출하는 방법으로 제조될 수 있다. 추출한 액은 바로 사용하거나 또는 농축 및/또는 건조하여 사용할 수 있다. 유기용매를 사용하여 추출하는 경우, 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 부탄올, 에틸렌, 아세톤, 헥산, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, N,N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 이들의 혼합용매인 유기용매를 사용하며 생약의 유효 성분이 파괴되지 않거나 최소화된 조건에서 실온 또는 가온하여 추출할 수 있다. 추출하는 유기용매에 따라 약제의 유효성분의 추출정도와 손실정도가 차이가 날 수 있으므로, 알맞은 유기용매를 선택하여 사용하도록 한다.
본 발명에 있어서, 천마를 건조시킨 후 추출용매를 가하여 1차 열수 추출한 후, 여과시킨 후 다시 한번 추출용매를 가하여 2차 열수 추출할 수 있다. 구체적으로, 천마를 건조시킨 후 물을 천마의 양의 10 내지 12배 가하여 80 내지 120℃에서 6시간 내지 9시간동안 추출한 후, 여과한 후 다시 물을 천마의 양의 10 내지 12배 가하여 80 내지 120℃에서 4시간 내지 6시간동안 추출할 수 있다.
상기 여과는 한외여과, 정밀여과, 압력여과, 세라믹 여과, 중력여과, 원심여과, 진공여과, 필터프레스 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있으나, 바람직하게는 중력여과일 수 있으며, 필터를 이용한 중력여과일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 있어서, 상기 (b) 단계에서, 상기 2차례의 추출 이후 6시간 내지 8시간 동안 상온에서 유지한 다음, 전탕액을 첨가하고 여과한 후 분무 건조함으로써 천마 분말을 수득할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 (c) 단계의 혼합물은 쌀가루, 연어, 당근, 비타민 C, 녹차 추출물, 아로니아, 프락토올리고당, 울트라케어, 칼슘 용액, 가수분해 닭간 및 타우린으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 재료가 포함되는 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 (c) 단계에서 천마 분말을 포함한 혼합물을 살균 처리하는 단계는 60 내지 80℃에서 2시간 내지 3시간 동안 1차 살균 처리하는 단계; 상기 1차 살균 처리된 혼합물을 여과한 후 90 내지 100℃에서 10 내지 20분동안 2차 살균 처리한 후, 120 내지 130℃에서 10 내지 20분동안 3차 살균 처리하는 단계; 및 상기 2차 및 3차 살균 처리된 혼합물을 10 내지 20분동안 냉각시키는 단계를 포함할 수 있다. 상기 1차 살균 처리는 혼합된 원재료를 가열함으로써 세균을 제거할 수 있으며, 2차 및 3차 살균 처리는 혼합된 원재료를 완전히 무균 상태로 제거할 수 있다. 또한, 상기 1차 살균 처리된 혼합물을 여과하는 단계는 원료 이물이 들어갔는지 확인함으로써 사료 첨가제 조성물에 원료 외의 이물질이 포함되지 않도록 할 수 있으며, 10 내지 20 mesh의 여과망을 이용하여 여과할 수 있고, 바람직하게는 12 내지 15 mesh의 여과망을 이용하여 여과할 수 있으며, 보다 바람직하게는 12 mesh의 여과망을 이용하여 여과하는 것일 수 있다.
상기 목적을 달성하기 위한 일 양태로서, 본 발명은 상기 사료 첨가제 조성물 제조 방법에 의해 제조된 사료 첨가제 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 사료 첨가제 조성물은 동물의 급성 간질환 예방 또는 개선을 위한 것일 수 있고, 이러한 사료 첨가제는 분말, 과립 또는 정제의 제형인 것일 수 있다.
본 발명에서 용어 '사료 첨가제'는 영양소 보충 및 체중감소 예방, 사료 내 섬유소의 소화 이용성 증진, 유질개선, 번식장애 예방 및 수태율 향상, 하절기 고온 스트레스 예방 등 다양한 효과를 목적으로 사료에 첨가하는 물질을 포함한다. 본 발명의 사료첨가제는 사료관리법상의 보조사료에 해당하며, 탄산수소나트륨, 벤토나이트(bentonite), 산화마그네슘, 복합광물질 등의 광물질제제, 아연, 구리, 코발트, 셀레늄 등의 미량 광물질인 미네랄제제, 케로틴, 비타민 A, D, E, 니코틴산, 비타민 B 복합체 등의 비타민제, 메티오닌, 라이신 등의 보호아미노산제, 지방산 칼슘염 등의 보호지방산제, 생균제(유산균제), 효모배양물, 곰팡이 발효물 등의 생균, 효모제 등이 추가로 포함될 수 있다.
본 발명에서 용어, '사료'는 동물이 먹고, 섭취하며, 소화시키기 위한 임의의 천연 또는 인공 규정식, 한끼식 등 또는 상기 한끼식의 성분으로, 당업계의 공지된 다양한 형태의 사료로 제조 가능하며, 구체적으로는 농후 사료, 조사료, 사료 첨가제 또는 특수사료가 포함될 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
농후사료에는 밀, 귀리, 옥수수 등의 곡류를 포함하는 종자열매류, 곡물을 정제하고 얻는 부산물로서 쌀겨, 밀 기울, 보릿겨 등을 포함하는 겨류, 콩, 유체, 깨, 아마인, 코코야자 등을 채유하고 얻는 부산물인 깻묵류와 고구마, 감자 등에서 녹말을 뺀 나머지인 녹말찌꺼기의 주성분인 잔존녹말질류 등의 찌꺼기류, 어분, 물고기찌꺼기, 어류에서 얻은 신선한 액상물(液狀物)을 농축시킨 것인 피시솔루블(fish soluble), 육분(肉粉), 혈분, 우모분, 탈지분유, 우유에서 치즈, 탈지유에서 카제인을 제조할 때의 잔액인 훼이(whey)를 건조한 건조훼이 등의 동물질 사료, 효모, 클로렐라, 해조류가 있으나 이에 제한되지 않는다. 조사료에는 야초, 목초, 풋베기 등의 생초(生草)사료, 사료용 순무, 사료용 비트, 순무의 일종인 루터베어거 등의 뿌리채소류, 생초, 풋베기작물, 곡실(穀實) 등을 사일로에 채워 놓고 젖산발효시킨 저장사료인 사일리지(silage), 야초, 목초를 베어 건조시킨 건초, 종축용(種畜用) 작물의 짚, 콩과 식물의 나뭇잎이 있으며, 이에 제한되지 않는다. 특수사료에는 굴껍테기, 암염 등의 미네랄 사료, 요소나 그 유도체인 디우레이드이소부탄 등의 요소사료, 천연 사료 원료만을 배합했을 때 부족하기 쉬운 성분을 보충하거나, 사료의 저장성을 높이기 위해서 배합사료에 미량으로 첨가하는 물질인 사료 첨가물, 식이 보조제가 있으나 이에 제한되지 않는다.
농후사료에는 밀, 귀리, 옥수수 등의 곡류를 포함하는 종자 열매류, 곡물을 정제하고 얻는 부산물로서 쌀겨, 밀기울, 보릿겨 등을 포함하는 겨류, 콩, 유체, 깨, 아마인, 코코야자 등을 채유하고 얻는 부산물인 깻묵류와 고구마, 감자 등에서 녹말을 뺀 나머지인 녹말찌꺼기의 주성분인 잔존 녹말질류 등의 찌꺼기류, 어분, 물고기찌꺼기, 어류에서 얻은 신선한 액상물을 농축시킨 것인 피시솔루블(fish soluble), 육분, 혈분, 우모분, 탈지분유, 우유에서 치즈, 탈지유에서 카제인을 제조할 때의 잔액인 훼이(whey)를 건조한 건조훼이 등의 동물질사료, 효모, 클로렐라, 해조류가 있으나 이에 제한되지 않는다.
조사료에는 야초, 목초, 풋베기 등의 생초 사료, 사료용 순무, 사료용 비트, 순무의 일종인 루터베어거 등의 뿌리 채소류, 생초, 풋베기작물, 곡실 등을 사일로에 채워 놓고 젖산 발효시킨 저장사료인 사일리지(silage), 야초, 목초를 베어 건조시킨 건초, 종축용 작물의 짚, 콩과 식물의 나뭇잎이 있으며, 이에 제한되지 않는다. 특수사료에는 굴껍데기, 암염 등의 미네랄 사료, 요소나 그 유도체인 디우레이드이소부탄 등의 요소사료, 천연 사료 원료만을 배합했을 때 부족하기 쉬운 성분을 보충하거나, 사료의 저장성을 높이기 위해서 배합사료에 미량으로 첨가하는 물질인 사료첨가물, 식이 보조제가 있으나 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 따른 사료 첨가제는 당업계에 공지된 다양한 사료 제조방법에 따라 적절한 유효 농도 범위에서 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 적절히 더 첨가하여 제조 가능하다.
본 발명에 따른 사료 첨가제는 예를 들면, 개, 고양이, 원숭이, 토끼, 모르모트, 랫트, 마우스, 소, 양, 돼지, 염소 등과 같은 비인간동물, 조류 및 어류 등 어느 개체에도 적용이 가능하다.
본 발명의 용어 '급성 간질환'은 급성 간염(acute hepatitis), 급성 간손상(acute liver injury) 및 급성 간부전(acute liver failure)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 바람직하게는, 급성 간염(acute hepatitis)일 수 있다.
본 발명의 용어 '예방'은 본 발명의 상기 사료 첨가제 조성물을 개체에 투여하여 급성 간염, 급성 간손상 및 급성 간부전 등의 급성 간질환을 억제시키거나 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 용어 '개선'은 본 발명의 상기 사료 첨가제 조성물을 개체에 투여하여 급성 간염, 급성 간손상 및 급성 간부전 등의 급성 간질환이 호전 또는 완화되거나 이롭게 되도록 하는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 조성물은 혈중 알라닌 아미노트랜스퍼라아제(Alanine aminotransferase; ALT) 또는 알칼리성 인산가수분해효소(Alkaline Phosphatase; ALP)의 수치를 감소시키는 것일 수 있다.
본 발명의 용어 '알라닌 아미노트랜스퍼라아제(Alanine aminotransferase; ALT)'는 주로 간이나 신장 등의 조직에서 많이 발견되고, 신체 내에서 세포의 질소 대사와 아미노산 대사, 간에서의 당신생성(gluconeogenesis)에 관계된 효소로서, 생리학적, 병리학적 상태에 따라 골격근으로부터 전구체 형태로 이동되어 그 기능을 수행한다. 알라닌 아미노트랜스퍼라아제는 알라닌과 α-케토글루타레이트(α-ketoglutarate)를 L-글루타메이트(L-glutamate)와 피루베이트(pyruvate)로 바꾸는 반응 과정에서 알라닌의 아미노기(amino-group)를 L-글루타메이트로 이동시키는 아미노전이 효소 활성을 가지고 있으며, 이는 피루베이트를 L-젖산(L-lactic acid)으로 바꾸는 과정을 잇달아 수행하며, 상기 가역적 반응 외에도 그 반대로 역행하는 반응에서도 알라닌 아미노전이효소는 아미노기를 이동시키는 매개체 역할을 수행한다. 또한, 간에서 일어나는 당신생성(gluconeogenesis) 과정에서 이러한 알라닌 아미노트랜스퍼라아제의 아미노 전이 반응이 수반되므로 간에는 ALT의 효소가 매우 많은 양 존재하게 된다. 실제 간에서의 ALT 효소 활성은 혈액 내의 효소활성보다 3000배 정도 더 높게 측정되는 것으로 알려져 있다(Lott and Wolf, 1986). 따라서, 특히 간 조직에 매우 높은 농도로 존재하는 알라닌 아미노트랜스퍼라아제는 간 조직이 독성물질이나 바이러스의 감염, 알코올, 비만 등의 여러 가지 요인 등에 의하여 손상을 받게 되면 혈액 내로 방출되어 순환하기 때문에 혈액의 알라닌 아미노전이효소 활성이 증가하게 된다. 그렇기 때문에 혈액 내의 알라닌 아미노전이효소 활성을 측정하여 간질환의 진단 여부를 유추할 수 있다.
본 발명의 용어 '알칼리성 인산가수분해효소(Alkaline Phosphatase; ALP)'는 간, 뼈, 신장, 장, 임신한 여성의 태반 등 전신의 조직에서 관찰되는 효소이며, 뼈와 간을 구성하는 세포에서 가장 농도가 높게 나타난다. 간에서는 간에서 장으로 담즙을 배출시켜 식이의 지방 소화를 돕도록 하는 작은 관인 담관을 형성하는 세포의 가장자리에서 관찰된다. 혈중 알칼리 인산분해효소 농도의 증가는 간질환 또는 골 병변에 의해 가장 흔하게 관찰된다. 효소 농도의 증가는 담관이 막혔을 때 가장 많이 증가할 수 있다.
상기 목적을 달성하기 위한 일 양태로서, 본 발명은 상기 사료 첨가제 조성물을 포함하는 사료 조성물을 제공한다.
상기 '사료 첨가제', '조성물', '사료', '급성 간질환', '예방' 및 '개선'은 전술한 바와 같다.
본 발명에 있어서, 상기 사료 조성물은 동물의 급성 간질환 예방 또는 개선을 위한 것일 수 있다.
본 발명에 따른 사료 조성물은 급성 간질환 예방 또는 개선을 목적으로 하는 개체이면 특별히 한정되지 않고, 어떠한 것이든 적용 가능하다. 예를 들면, 원숭이, 개, 고양이, 토끼, 모르모트, 랫트, 마우스, 소, 양, 돼지, 염소 등과 같은 비인간동물, 조류 및 어류 등 어느 개체에도 적용이 가능하다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
본 발명에 따른 천마(Gastrodia elata)를 유효 성분으로 포함하는 사료 첨가제 조성물 제조 방법에 의해 제조된 조성물은 급성 간질환 동물의 예방 또는 개선에의 효과를 가지고 있어, 사료, 사료 첨가제 등의 소재로 활용 가능하다.
도 1은 TAA에 의해 생성된 NO에 천마 경구 투여가 미치는 영향을 관찰한 결과이다. (*p<0.05 각 군별 1일차와의 비교, #p<0.05 TAA 군의 21일차와의 비교)
도 2는 각 군별로 간 건강 마커 중 혈중 ALT 수치 변화를 비교한 결과이다.
도 3은 각 군별로 간 건강 마커 중 혈중 ALP 수치 변화를 비교한 결과이다.
도 2는 각 군별로 간 건강 마커 중 혈중 ALT 수치 변화를 비교한 결과이다.
도 3은 각 군별로 간 건강 마커 중 혈중 ALP 수치 변화를 비교한 결과이다.
이하, 본 발명을 하기 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예만으로 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 천마 분말 제조
천마를 건조시킨 후 천마 양의 10 내지 12배만큼 물을 첨가하고 80 내지 120℃에서 6시간 내지 9시간동안 1차로 열수 추출하였다.
1차 열수 추출물을 여과한 후, 10 내지 12배만큼 다시 물을 첨가하고 4 내지 6시간동안 2차로 열수 추출하였다. 이후, 6 내지 8시간동안 상온에서 유지시킨 후에, 전탕액을 첨가하고 여과하여 분무건조 시킴으로써 천마 분말을 제조하였다.
실시예 2. 사료 첨가제 조성물 제조
실시예 1에서 제조된 천마 분말 250mg(전체 중량의 1.7% 함유)과 쌀가루, 연어, 당근, 비타민 C, 녹차 추출물, 아로니아, 프락토올리고당, 울트라케어, 칼슘 용액, 가수분해 닭간 및 타우린을 혼합한 뒤, 60 내지 80℃에서 2시간 내지 3시간 동안 1차 살균 처리하였다. 이후, 살균 처리된 혼합물을 12 내지 15 매쉬의 여과망으로 여과함으로써 혼합물 내에 원료 외 이물질이 없도록 거르고, 90 내지 100℃에서 10 내지 20분동안 2차 살균 처리한 후 120 내지 130℃에서 10 내지 20분동안 3차 살균 처리하였다. 살균 처리된 혼합물은 10분 내지 20분동안 냉각시키는 단계를 거쳐 혼합물 내 원재료를 완전한 무균 상태로 처리하였다. 최종적으로 츄르(중량 15g)를 제조하여 본 실험에 사용하였다.
실험예 1. 사료 첨가제 조성물의 동물 급성 간질환에의 효과 확인
1.1. 실험동물
사료 첨가제 조성물의 동물 급성 간질환에의 효과를 확인하기 위한 실험에 사용한 동물은 총 18마리(각 군별 3마리)의 12개월령 비글(Beagle)을 오리엔트(성남, 경기도, 대한민국)로부터 구입하여 사용하였다.
각 비글들은 실험 환경에 잘 적응할 수 있도록, 고형사료(Puppy chow, Purina)와 물을 자유롭게 급여하면서 1주간 실험 환경에 적응시켰다.
실험군은 크게 대조군(Con), 티오아세트아미드(Thioacetamide; TAA)를 투여하여 급성 간염을 유도한 음성대조군(TAA), 티오아세트아미드 처리와 동시에 간염 치료제인 실리마린을 투여한 양성대조군(TAA+PC), 급성 간염 유도 및 천마 사료 50mg/kg 투여군(TAA+GR_L), 급성 간염 유도 및 천마 사료 100mg/kg 투여군(TAA+GR_M) 및 천마 사료 단독 투여군(GR)으로 나누었다.
가역적 급성 간염을 유발하기 위해, 티오아세트아미드(TAA)를 3일 간격으로 총 3회 복강 주사하였고, 천마 분말을 포함한 사료는 총 21일간 경구 투여하였다. 티오아세트아미드(TAA)는 Sigma Aldrich에서 구입하여 사용하였고(제품번호: 163678), 실리마린은 (주)이엘티사이언스에서 구입하여 사용하였고(제품명: Silymarin 140mg) 10kg 미만 1정의 용량으로 투여하였다.
1.2. NO 생성 억제 효과 확인
티오아세트아미드(TAA)에 의한 급성 간염 유도군에서 천마의 NO 생성에 미치는 영향을 검토하기 위하여 혈청 내 아질산염(Nitrate)의 농도를 Griess reagent(G4410, Sigma, St Louis, MO, USA)를 이용하여 측정하였다. 100μL 혈청과 동량의 Griess reagent 시약을 상온에서 반응시킨 후 마이크로플레이트 리더(microplate reader) (Spectramax M2; Molecular Devices, CA, USA)로 540nm에서 흡광도를 측정하였다.
천마가 TAA에 의해 증가된 일산화 질소(Nitric Oxide, NO) 생성에 미치는 영향을 확인하고자, 21일동안 천마 분말을 포함한 사료를 경구투여하였다. 모든 결과는 각 군별로 1일차를 베이스라인(baseline)으로 설정하여, 시간 경과에 따른 NO 생성 비율(ratio)을 비교 평가하였다. TAA 단독 투여군의 경우, 21일차에 1일차 대비 39.8±9.12% 증가하였다. 반면에 천마 사료를 투여한 군의 경우, TAA+GR_L, TAA+GR_M 군들은 각각 74.6±2.7%, 75.2±3.9%로 TAA 단독 군 대비 각각 65.1%, 64.5% 감소하였다. TAA+PC 군의 경우, 21일차에 1일차 대비 66.5±2.7%로 TAA 단독 군 대비 65.12% 감소하였다. 이 결과들을 통해, 천마 사료를 경구투여한 군들은 TAA에 의해 증가되는 NO의 생성을 감소시킬 수 있음을 확인하였다(도 1). NO의 각 군별 1일차 및 21일차에서의 수치 변화를 아래 표 1에 나타내었다.
| % 변환 | 측정일자 | |
| NO | DAY 1 | DAY 21 |
| Con | 100 | 95.1 |
| TAA | 100 | 139.8 |
| TAA+PC | 100 | 66.5 |
| TAA+GR_L | 100 | 75.2 |
| TAA+GR_M | 100 | 86.4 |
1.3. 혈액 생화학적 분석
모든 동물의 혈액은 요측피정맥(Cephalic vein)에서 채혈하였다. 전혈을 혈액 생화학분석기기 전용 튜브에 3000rpm, 실온에서 10분간 원심 분리하여 혈청을 분리하였다. 분리한 혈청의 각 군별 ALP(알칼리성 인산가수분해효소, Alkaline Phosphatase), ALB(알부민, Albumin), ALT(알라닌 아미노트랜스퍼라아제, Alanine Aminotransferase)의 농도는 Comprehensive S-panel(FUJIFILM, Tokyo, Japan) kit를 이용해 혈액 생화학분석 기기(DRI-CHEM NX700, FUJIFILM, Tokyo, Japan)로 측정하였다.
천마 사료의 경구투여에 따른, TAA에 의해 유도된 간 건강 마커들의 변화를 관찰하였다. TAA에 의해 유도된 급성 간손상의 경우, 가역적인 모델임에 따라, TAA 투여 종료 후 모든 수치들이 정상으로 돌아가는 경향을 띄는데, TAA에 의한 간손상은 TAA 복강 주사 후 24시간이 경과하였을 때, 가장 높게 관찰된다고 밝혀져 있다. 따라서, 본 결과 해석은 TAA 3회 투여 후 24시간이 경과된 시점(Day 8), TAA 3회 투여 후 7일 경과 시점(Day 14)을 기준으로 천마 사료의 경구투여에 따른 간 건강 마커들을 비교 평가하였다.
모든 결과는 각 군별 Day 1일차를 Baseline으로 설정하여, 시간 경과에 따른 간 건강 마커들의 변화를 관찰하였다. TAA 복강주사로 인해, ALT 및 ALP의 수준은 증가하는 양상을 띄었다. 반면에 천마 사료(TAA+GR_L, TAA+GR_M) 및 실리마린(TAA+PC군)을 투여한 군에서는 TAA 단독군에 비해 ALT, ALP의 증가가 상대적으로 감소하는 것을 확인하였다(도 2 및 도 3). 이 결과를 통해, 천마는 TAA에 의해 증가되는 간 건강 마커들의 증가세를 낮출 수 있을 것으로 판단된다. ALT 및 ALP의 각 군별 8일차 및 14일차에서의 수치 변화를 아래 표 2 및 표 3에 나타내었다.
| % 변환 | 측정일자 | ||||
| ALT | DAY 1 | DAY 8 | DAY 8 고찰 | DAY 14 | DAY 14 고찰 |
| Con | 100 | 98.45730028 | 유의적 변화 없음 | 90.3030303 | 10% 감소 |
| TAA | 100 | 163.6792453 | 63% 증가 | 154.7169811 | 54.7% 증가 |
| TAA+PC | 100 | 78.0104712 | 22% 증가 | 71.72774869 | 28.3% 감소 |
| TAA+GR_L | 100 | 82.77511962 | 17.3% 감소 | 81.81818182 | 18.2% 감소 |
| TAA+GR_M | 100 | 84.02061856 | 16% 감소 | 68.04123711 | 32% 감소 |
| GR | 100 | 101.1173184 | 유의적 변화 없음 | 108.9385475 | 8.9% 증가 |
| % 변환 | 측정일자 | ||||
| ALP | DAY 1 | DAY 8 | DAY 8 고찰 | DAY 14 | DAY 14 고찰 |
| Con | 100 | 96.01769912 | 유의적 변화 없음 | 83.31226296 | 16.7% 감소 |
| TAA | 100 | 191.5492958 | 91.5% 증가 | 118.3098592 | 18% 증가 |
| TAA+PC | 100 | 140.5660377 | 40% 증가 | 83.96226415 | 16.1% 감소 |
| TAA+GR_L | 100 | 127.7310924 | 27.7% 감소 | 88.23529412 | 12% 감소 |
| TAA+GR_M | 100 | 125.3968254 | 25.4% 감소 | 80.95238095 | 19.1% 감소 |
| GR | 100 | 89.55223881 | 10.5% 감소 | 80.59701493 | 19.5% 감소 |
이상으로 본 발명의 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
Claims (12)
- (a) 천마(Gastrodia elata)를 건조시킨 후 추출물을 제조하는 단계;
(b) 상기 추출물을 건조시켜 천마 분말을 제조하는 단계; 및
(c) 상기 천마 분말을 포함한 혼합물을 살균 처리하는 단계;
를 포함하는 사료 첨가제 조성물 제조 방법으로서,
상기 살균하는 단계는:
a) 상기 혼합물을 60 내지 80℃에서 2시간 내지 3시간 동안 1차 살균 처리하는 단계;
b) 상기 1차 살균 처리된 혼합물을 여과한 후 90 내지 100℃에서 10 내지 20분 동안 2차 살균 처리한 후 120 내지 130℃에서 10 내지 20분 동안 3차 살균 처리하는 단계; 및
c) 상기 2차 및 3차 살균 처리된 혼합물을 10분 내지 20분 동안 냉각시키는 단계;
를 포함하는 것인, 사료 첨가제 조성물 제조 방법. - 제1항에 있어서,
상기 추출물을 제조하는 단계는:
(a) 건조시킨 천마에 물을 첨가하여 1차 열수 추출하는 단계; 및
(b) 1차 추출물을 여과 후 물을 첨가하여 2차 열수 추출하는 단계;
를 포함하는 것인, 사료 첨가제 조성물 제조 방법. - 제2항에 있어서,
상기 1차 열수 추출 또는 2차 열수 추출은 80 내지 120℃에서 수행되는 것인, 사료 첨가제 조성물 제조 방법. - 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
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