KR102548285B1 - 특발성 신증후군 진단용 바이오마커 조성물 및 이의 용도 - Google Patents

특발성 신증후군 진단용 바이오마커 조성물 및 이의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 특발성 신증후군 진단을 위한 마이크로 RNA 바이오마커 및 상기 바이오마커를 이용한 진단에 정보를 제공하는 방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 정상군, 특발성 신증후군 및 막성사구체신염의 혈액에서 분리한 엑소좀 내에 포함된 마이크로RNA를 분석한 결과, 정상군과 막성사구체신염에 비해 특발성 신증후군에서 발현이 유의하게 증가하거나 감소한 마이크로RNA-335(microRNA-335) 및 마이크로RNA-17(microRNA-17)를 확인함에 따라, 상기 마이크로RNA를 특발성 신증후군 진단용 바이오마커로 제공하여 특발성 신증후군 진단을 위한 정보를 제공하는 방법 및 진단용 키트에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

특발성 신증후군 진단용 바이오마커 조성물 및 이의 용도{Biomarker composition for diagnosing idiopathic nephrotic syndrome and use thereof}
본 발명은 특발성 신증후군 진단을 위한 마이크로 RNA 바이오마커 및 상기 바이오마커를 이용한 진단에 정보를 제공하는 방법에 관한 것이다.
일차성 신증후군(primary nephrotic syndrome)은 심한 부종, 다량의 단백뇨와 혈액의 저알부민혈증을 특징으로 정의된다. 일차성 신증후군의 원인 질환은 신장의 사구체 (glomerulus)에 염증이 발생하는 사구체 질환(glomerulitis)이며 종류는 10가지 이상이며 발병률을 기준으로 막성사구체신염(Membranous glomerulonephritis, MGN)과 특발성 사구체신염(Idiopathic nephrotic syndrome, INS)이 대다수를 차지한다. 일차성 신증후군은 질환별로 치료 방법 및 치료 예후가 다양한 것이 특징이다. MGN는 일반적으로 스테로이드 단독 치료에는 반응하지 않으며, 관해(resolution)를 위해서는 고용량의 스테로이드와 시클로포스파미드(cyclophosphamide)와 같은 다른 면역억제제 병합 치료가 필요하다. 이러한 치료에도 불구하고 치료에 반응하지 않는 난치성 MGN도 존재한다.
신증후군에서 원인 질환의 정확한 진단을 위해서 gun needle을 이용하여 신장 조직을 채취하는 침습적인 조직검사(kidney biopsy)가 필수적이다. 또한 심장병과 뇌혈관 질환의 재발을 위해 복용하는 항혈소판제(antiplatelet agents), 항응고제(anticoagulation) 복용 시에는 침습적인 조직검사는 매우 위험한 검사이다. 따라서 침습적인 진단 방법인 조직검사와 더불어 질환의 확진에 도움을 주거나, 침습적인 조직검사가 불가능한 경우를 위한 비침습적인 바이오마커의 개발이 매우 중요하다.
한편, 마이크로RNA(microRNA; miRNA)는 동식물 모두의 게놈에 존재하는 비암호화의 작은 RNA로 생물의 전반적인 모든 과정에 관여하는 것으로 알려져 있으며, 최근 이러한 miRNAs를 질병 진단용 바이오마커로 사용하기 위한 연구들이 진행되고 있다. 현재 임상에서 사용되는 대부분의 바이오마커는 체액에 순환하는 단백질이나, 불행히도 새로운 단백질 기반의 바이오마커 개발은 시료 내 표적 단백질의 낮은 친화도로 인하여 상당한 기술적 어려움에 직면해 있는바, miRNAs를 이용한 바이오마커의 개발은 단백질 바이오마커의 한계점을 극복할 수 있는 하나의 대안이 될 수 있다.
대한민국 공개특허 제10-2019-0139075호 (2019.12.17. 공개)
본 발명은 비침습적 방법으로 특발성 신증후군을 효과적으로 진단하기 위한 바이오마커 조성물을 제공하며, 상기 바이오마커 조성물을 이용한 특발성 신증후군 진단용 키트 및 특발성 신증후군 진단을 위한 정보제공방법을 제공하고자 한다.
본 발명은 miR-335 및 miR-17로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 마이크로 RNA를 포함하는 특발성 신증후군 진단용 바이오마커 조성물을 제공한다.
본 발명은 miR-335 및 miR-17로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 마이크로 RNA의 발현수준을 측정하는 제제를 포함하는 특발성 신증후군 진단키트를 제공한다.
또한, 본 발명은 개체로부터 시료를 분리하는 단계; 및
상기 분리된 시료에서 miR-335 및 miR-17로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 마이크로 RNA의 발현수준을 측정하는 단계를 포함하는 특발성 신증후군 진단을 위한 정보 제공 방법을 제공한다.
본 발명에 따르면, 정상군, 특발성 신증후군 및 막성사구체신염의 혈액에서 분리한 엑소좀 내에 포함된 마이크로RNA를 분석한 결과, 정상군과 막성사구체신염에 비해 특발성 신증후군에서 발현이 유의하게 증가하거나 감소한 마이크로RNA-335(microRNA-335) 및 마이크로RNA-17(microRNA-17)를 확인함에 따라, 상기 마이크로RNA를 특발성 신증후군 진단용 바이오마커로 제공하여 특발성 신증후군 진단을 위한 정보를 제공하는 방법 및 진단용 키트에 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 정상군(HV) 및 특발성 신증후군(INS) 대상자들의 혈청에서 분리한 엑소좀 내 microRNAs의 발현수준을 확인한 결과로, 도 1a는 정상군에 비해 특발성 신증후군(INS)에서 유의적으로 2배 이상(p < 0.05) 발현이 감소 또는 증가한 microRNAs의 발현수준에 따른 계층적 클러스터링을 수행한 히트맵 결과이며, 도 1b는 상기에서 검출된 microRNAs의 발현수준에 따른 산점도(scatter plot) 결과이다.
도 2는 특발성 신증후군(INS) 및 막성사구체신염(MGN) 대상자들의 혈청에서 분리한 엑소좀 내 microRNAs의 발현수준을 확인한 결과로, 도 2a는 INS군에 비해 MGN군에서 유의적으로 2배 이상(p < 0.05) 발현이 감소 또는 증가한 microRNAs의 발현수준에 따른 계층적 클러스터링을 수행한 히트맵 결과이며, 도 2b는 상기에서 검출된 microRNAs의 발현수준에 따른 산점도(scatter plot) 결과이다.
도 3은 정상군(HV) 및 막성사구체신염(MGN) 대상자들의 혈청에서 분리한 엑소좀 내 microRNAs의 발현수준을 확인한 결과로, 도 3a는 정상군에 비해 MGN군에서 유의적으로 2배 이상(p < 0.05) 발현이 감소 또는 증가한 microRNAs의 발현수준에 따른 계층적 클러스터링을 수행한 히트맵 결과이며, 도 3b는 상기에서 검출된 microRNAs의 발현수준에 따른 산점도(scatter plot) 결과이다.
도 4a는 상기 도 1, 2 및 3의 결과로부터 발현이 유의하게 증가된 microRNAs을 벤다이어그램으로 표현하여 정상군, 막성사구체신염군에 비해 특발성 신증후군에서만 발현이 증가된 microRNAs를 확인한 결과 (10개) 이며, 도 4b는 상기 도 1, 2, 3의 결과로부터 발현이 유의하게 감소된 microRNAs을 벤다이어그램으로 표현하여 정상군, 막성사구체신염군에 비해 특발성 신증후군에서 발현이 감소된 microRNAs을 확인한 결과 (4개)이다.
도 5은 정상군(normal)과 특발성 신증후군(INS) 간의 miR-335-5p 또는 miR-17-5p의 발현수준을 차이를 확인한 결과이다.
이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.
본 발명자들은 비침습적 방법으로 특발성 신증후군을 효과적으로 진단하기 위한 방법을 연구하던 중 정상군과 막성사구체신염에 비해 특발성 신증후군 환자의 혈청유래 엑소좀에서 증가 또는 감소하는 특발성 신증후군에 특이적인 마이크로RNA을 확인함에 따라, 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 miR-335 및 miR-17로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 마이크로 RNA를 포함하는 특발성 신증후군 진단용 바이오마커 조성물을 제공할 수 있다.
상기 miR-335는 서열번호 1로 표시되는 염기서열로 이루어지는 것일 수 있으며, 보다 상세하게는 hsa-miR-335-5p 일 수 있다.
상기 miR-17-5p는 서열번호 2로 표시되는 염기서열로 이루어지는 것일 수 있으며, 보다 상세하게는 hsa-miR-17-5p일 수 있다.
상기 miR-335는 정상군과 비교하여 발현이 증가되는 것일 수 있으며, 상기 miR-17은 정상군과 비교하여 발현이 감소되는 것일 수 있다.
본 발명은 miR-335 및 miR-17로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 마이크로 RNA의 발현수준을 측정하는 제제를 포함하는 특발성 신증후군 진단키트를 제공할 수 있다.
상기 제제는 프라이머, 프로브, 항체, 펩타이드 및 앱타머로 이루어지는 군으로부터 선택된 것일 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, “프라이머”란 DNA 합성의 기시점이 되는 짧은 유전자 서열로써, 진단, DNA 시퀀싱 등에 이용할 목적으로 합성된 올리고뉴클레오티드를 의미한다. 상기 프라이머들은 통상적으로 15 내지 30 염기쌍의 길이로 합성하여 사용할 수 있으나, 사용 목적에 따라 달라질 수 있으며, 공지된 방법으로 메틸화, 캡화 등으로 변형시킬 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, “프로브”란 효소 화학적인 분리정제 또는 합성과정을 거쳐 제작된 수 염기 내지 수백 염기길이의 mRNA와 특이적으로 결합할 수 있는 핵산을 의미한다. 방사성 동위원소나 효소 등을 표지하여 mRNA의 존재 유무를 확인할 수 있으며, 공지된 방법으로 디자인하고 변형시켜 사용할 수 있다.
본 발명의 진단키트는 분석 방법에 적합한 한 종류 또는 그 이상의 다른 구성성분 조성물, 용액 또는 장치로 구성된다.
예컨대, 본 발명의 키트는 PCR을 수행하기 위해, 분석하고자 하는 시료로부터 유래된 게놈 DNA, 본 발명의 마커 유전자에 대해 특이적인 프라이머 세트, 적당량의 DNA 중합 효소, dNTP 혼합물, PCR 완충용액 및 물을 포함하는 키트일 수 있다. 상기 PCR 완충용액은 KCl, Tris-HCl 및 MgCl2를 함유할 수 있다. 이외에 PCR 산물의 증폭 여부를 확인할 수 있는 전기영동 수행에 필요한 구성 성분들이 본 발명의 키트에 추가로 포함될 수 있다.
또한, 본 발명의 키트는 RT-PCR을 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함하는 키트일 수 있다. RT-PCR 키트는 마커 유전자에 대한 특이적인 각각의 프라이머 쌍 외에도 테스트 튜브 또는 다른 적절한 컨테이너, 반응 완충액, 데옥시뉴클레오티드(dNTPs), Taq-폴리머레이즈 및 역전사 효소와 같은 효소, DNase, RNase 억제제, DEPC-수(DEPC-water), 멸균수 등을 포함할 수 있다. 또한 정량 대조군으로 사용되는 유전자에 특이적인 프라이머 쌍을 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 개체로부터 시료를 분리하는 단계; 및 상기 분리된 시료에서 miR-335 및 miR-17로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 마이크로 RNA의 발현수준을 측정하는 단계를 포함하는 특발성 신증후군 진단을 위한 정보 제공 방법을 제공할 수 있다.
상기 정보 제공 방법은 개체로부터 분리된 시료로부터 단백뇨 증가 수준을 확인하는 단계를 추가로 더 포함하는 것일 수 있다.
상기 시료는 조직, 세포, 전혈, 혈액, 타액, 객담, 뇌척수액 및 뇨로 이루어진 군에서 선택될 수 있으며, 보다 바람직하게는 혈액 또는 혈액 유래 엑소좀일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 정보 제공 방법에 있어서, miR-335는 정상군과 비교하여 발현이 증가되는 것일 수 있으며, 상기 miR-17은 정상군과 비교하여 발현이 감소될 경우 특발성 신증후군으로 진단할 수 있다.
상기 마이크로 RNA의 발현수준은 차세대 염기서열 분석(Next generation sequencing; NGS), 중합효소연쇄반응(PCR), 역전사 중합효소연쇄반응(RT-PCR), 실시간 중합효소연쇄반응(Real-time PCR), RNase 보호 분석법(RNase protection assay; RPA), 마이크로어레이(microarray) 및 노던 블롯팅(northern blotting)으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 방법으로 측정하는 것일 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, “진단(diagnosis)”이란 넓은 의미로는 환자의 병의 실태를 모든 면에 걸쳐서 판단하는 것을 의미한다. 판단의 내용은 병명, 병인, 병형, 경중, 병상의 상세한 양태, 및 합병증의 유무 등이다. 본 발명에서 진단은 특발성 신증후군의 발병 여부 및 진행단계 수준 등을 판단하는 것이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
<실험예>
하기의 실험예들은 본 발명에 따른 각각의 실시예에 공통적으로 적용되는 실험예를 제공하기 위한 것이다.
1. 분석대상 모집
특발성 신증후군을 조기에 진단하고 특발성 신증후군 관련 합병증의 발병을 예방하기 위한 특발성 신증후군 진단용 바이오마커를 발굴하기 위해, 각각 정상군(HV) 20명, 막성사구체신염군(MGN) 19명, 특발성 신증후군 21명의 대상자들을 모집하였으며, 상기 각 군의 대상자들로부터 혈청을 제공받았다.
2. 혈청으로부터 RNA 분리 및 서열분석
앞서 각 군의 대상자들로부터 수집한 혈청 샘플에 Exoquick(SBI, USA)을 사용해 엑소좀(exosome)을 분리하였고, 상기 분리된 엑소좀으로부터 Qiagen miRNeasy kit을 이용하여 총 RNA를 추출하였으며, 추출된 총 RNA의 질은 Agilent RNA Bioanalyzer를 이용해 제조사의 지시에 따라 측정하였다.
이후 상기 분리된 RNA를 이용하여 Takara SMARTer smRNA for illumina kit(마이크로젠)를 사용하여 라이브러리를 제작한 후 Hiseq 2500으로 차세대 염기서열 분석(NGS)을 실시하여 microRNA를 검출하였다.
<실시예 1> 특발성 신증후군 진단용 마이크로RNA (microRNA) 발굴
1. 정상군 vs 특발성 신증후군에서 발현 수준 차이를 나타내는 microRNA 확인
먼저, 앞선 실험예와 같이 모집된 정상군 20명과 특발성 신증후군 21명의 혈액 유래 엑소좀에서 발현수준의 차이가 나는 microRNA(miRNA)를 동정하기 위하여, 상기 실험예와 같이 각 대상자들에서 채취한 혈청으로부터 엑소좀을 분리하고 추출된 총 RNA에 대한 NGS 분석을 수행하였다. 분석 결과 228개의 miRNAs가 검출되었으며, 상기 검출된 miRNAs의 발현수준을 비교하였다.
그 결과, 도 1a와 같이 44개의 miRNAs 중에 정상군(HV)에 비해 특발성 신증후군에서 2배 이상(p < 0.05) 발현이 증가하는 miRNA가 33개, 발현이 증가하는 miRNA가 11개가 확인되었다. 또한, 상기 유의한 발현 변화를 보이는 miRNAs의 발현수준에 따른 산점도(scatter plot) 결과를 도 1b와 같이 확인하였다.
2. 특발성 신증후군 vs. 막성사구체신염의 발현수준에 차이가 있는 microRNA 분석
상기 특발성 신증후군 21명과 막성사구체신염군 19명의 혈액 유래 엑소좀에서 발현수준의 차이가 나는 miRNA를 동정하기 위하여, 상기와 동일한 방법으로 얻은 엑소좀 내 총 RNA에 대한 NGS 분석을 수행하였다. 분석 결과 228개의 miRNA가 검출되었으며, 상기 검출된 miRNAs의 발현수준을 비교하였다.
그 결과, 도 2a와 같이 11개의 miRNAs 중에 특발성 신증후군에 비해 막성사구체신염에서 2배 이상(p < 0.05) 발현이 증가하는 miRNA가 3개, 발현이 감소하는 miRNA가 8개가 확인되었다. 또한, 상기 유의한 발현 변화를 보이는 miRNA의 발현수준에 따른 산점도(scatter plot) 결과를 도 2b와 같이 확인하였다.
3. 정상대조군 vs. 막성사구체신염의 발현수준에 차이가 있는 microRNA 확인
상기 정상군 20명과 막성사구체신염 19명의 혈액 유래 엑소좀에서 발현수준의 차이가 나는 miRNA를 동정하기 위하여, 상기와 동일한 방법으로 얻은 엑소좀 내 총 RNA에 대한 NGS 분석을 수행하였다. 분석 결과 228개의 miRNA가 검출되었으며, 상기 검출된 miRNAs의 발현수준을 비교하였다.
그 결과, 도 3a와 같이 58개의 miRNAs 중에 정상군(HV)에 비해 막성사구체신염에서 2배 이상(p < 0.05) 발현이 증가하는 miRNA가 31개, 발현이 감소하는 miRNA 27개를 확인하였다. 또한, 상기 유의한 발현 변화를 보이는 miRNAs의 발현수준에 따른 산점도(scatter plot) 결과를 도 3b와 같이 확인하였다.
4. 특발성 신증후군 진단용 microRNA 확인
앞서 확인된 결과로부터 특발성 신증후군을 특이적으로 진단할 수 있는 miRNA를 발굴하기 위해, 상기 분석결과 발현이 유의하게 증가하는 것으로 확인된 miRNA를 도 4와 같이 벤다이어그램으로 나타내었다.
그 결과, 정상군 및 막성사구체신염에 비해 특발성 신증후군에서 발현이 유의하게 증가된 10종의 miRNA와 정상군 및 막성사구체신염에 비해 발현이 감소하는 4종의 miRNA를 확인하였으며, 상기 miRNA 중 가장 유의한 발현수준 차이를 나타내는 hsa-miR-335-5p 및 hsa-miR-17-5p를 최종 선별하였다.
최종 선별된 miRNA는 표 1과 같이 정상인에 비해 특발성 신증후군에서 각각 2.05 배 및 2.04 배의 유의한 차이를 나타내는 것이 확인되었으며, 도 5와 같이 hsa-miR-335-5p 및 hsa-miR-17-5p은 정상군(normal)과 특발성 신증후군 간의 유의한 발현차이를 나타내는 것을 확인할 수 있었다.
특발성 신증후군/정상군
fold change
hsa-miR-335-5p 2.05 ***
hsa-miR-17-5p -2.04 ***
상기 결과로부터 각각 정상인, 막성사구체신염에 비해 특발성 신증후군에서만 발현이 유의하게 증가하거나 감소하는 상기 2종의 miRNAs는 특발성 신증후군을 특이적으로 진단할 수 있는 바이오마커로 유용하게 이용될 수 있이 확인되었다.
<실시예 2> 혈청 지표 확인
앞선 실험예에서 수집된 정상군(HV) 20명, 막성사구체신염군(MGN) 19명, 특발성 신증후군 21명의 혈청에서 다양한 지표의 수준변화를 표 2와 같이 확인하였다.
Variables Study subjects P value
(MGN vs Idiopathic NS)
HVs (n = 20) MGN (n = 19) Idiopathic NS
(n = 21)
AGE 51.9±12.4 54.4±13.7 61.0±16.2 0.797
SEX (Male) 11 (55%) 11 (57.9%) 12 (57.1%) 0.962
WBC 5364.6±588.8 7490.7±1466.7* 6985.5±1914.1 0.96
Hb 13.9±1.3 13.2±2.0 13.7±1.7 0.398
PLT (K) 219.9±48.1 303.0±100.2* 289.3±70.3** 0.209
BUN 12.9±3.2 14.1±5.5 21.3±10.4 0.009
Cr 0.9±0.2 0.9±0.2 1.3±0.8** 0.04
eGFR 88.2±15.7 81.5±23.2 70.1±38.2 0.360
Baseline proteinuria (g/day) 82.3±49.3 7046.3±4423.2* 9023.6±4062.6** 0.220
AST 19.5±7.0 26.4±10.1* 31.1±19.5** 0.892
ALT 18.9±9.1 19.7±8.2 27.9±22.1 0.188
Total protein 7.2±0.3 4.8±0.7* 5.1±1.2** 0.366
Albumin 4.6±0.2 2.4±0.6* 2.5±1.1** 0.775
CRP 0.1±0.2 0.3±0.5* 0.2±0.2** 0.668
Total cholesterol 192.9±28.5 300.3±94.1* 340.3±116.0** 0.445
Triglyceride 108.7±48.4 332.2±214.9* 454.1±350.9** 0.871
HDL 60.8±9.3 53.1±19.0 58.1±21.4 0.552
LDL 123.8±30.1 180.8±98.7 201.9±84.3** 0.913
* HVs vs MGN P value < 0.05; ** HVs vs Idiopathic NS P value < 0.05
HVs-Health volunteers, MGN-Membranous glomerulonephritis, NS-nephrotic syndrome. Hb-hemoglobin, PLT-platelet, BUN-blood urea nitrogen, Cr-creatinine, eGFR-estimated glomerular filtration rate, HDL-high density lipoprotein, LDL-low density lipoprotein
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
<110> Research Cooperation Foundation of Yeungnam University <120> Biomarker composition for diagnosing idiopathic nephrotic syndrome and use thereof <130> ADP-2020-0616 <160> 2 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 23 <212> RNA <213> Unknown <220> <223> hsa-miR-335-5p <400> 1 ucaagagcaa uaacgaaaaa ugu 23 <210> 2 <211> 23 <212> RNA <213> Unknown <220> <223> hsa-miR-17-5p <400> 2 caaagugcuu acagugcagg uag 23

Claims (11)

  1. miR-335 (microRNA-335) 및 miR-17 (microRNA-17)을 포함하는 특발성 신증후군 진단용 바이오마커 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 miR-335는 서열번호 1로 표시되는 염기서열로 이루어지는 것을 특징으로 하는 바이오마커 조성물.
  3. 청구항 1에 있어서, 상기 miR-17은 서열번호 2로 표시되는 염기서열로 이루어지는 것을 특징으로 하는 바이오마커 조성물.
  4. 청구항 1에 있어서, 상기 miR-335는 정상군과 비교하여 발현이 증가되는 것을 특징으로 하는 바이오마커 조성물.
  5. 청구항 1에 있어서, 상기 miR-17은 정상군과 비교하여 발현이 감소되는 것을 특징으로 하는 바이오마커 조성물.
  6. miR-335 및 miR-17의 발현수준을 측정하는 제제를 포함하는 특발성 신증후군 진단키트.
  7. 청구항 6에 있어서, 상기 제제는 프라이머, 프로브, 항체, 펩타이드 및 앱타머로 이루어지는 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 특발성 신증후군 진단키트.
  8. 인간을 제외한 포유류 개체로부터 시료를 분리하는 단계; 및
    상기 분리된 시료에서 miR-335 및 miR-17의 발현수준을 측정하는 단계를 포함하는 특발성 신증후군 진단을 위한 정보 제공 방법.
  9. 청구항 8에 있어서, 상기 정보 제공 방법은 개체로부터 분리된 시료로부터 단백뇨 증가 수준을 확인하는 단계를 추가로 더 포함하는 것을 특징으로 하는 특발성 신증후군 진단을 위한 정보 제공 방법.
  10. 청구항 8에 있어서, 상기 시료는 조직, 세포, 전혈, 혈액, 타액, 객담, 뇌척수액 및 뇨로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 특발성 신증후군 진단을 위한 정보 제공 방법.
  11. 청구항 8에 있어서, 상기 마이크로 RNA의 발현수준은 차세대 염기서열 분석(Next generation sequencing; NGS), 중합효소연쇄반응(PCR), 역전사 중합효소연쇄반응(RT-PCR), 실시간 중합효소연쇄반응(Real-time PCR), RNase 보호 분석법(RNase protection assay; RPA), 마이크로어레이(microarray) 및 노던 블롯팅(northern blotting)으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 방법으로 측정하는 것을 특징으로 특발성 신증후군 진단을 위한 정보 제공 방법.
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2011528789A (ja) 2008-07-18 2011-11-24 ボストン メディカル センター コーポレーション 膜性腎症の診断法
EP2468890A2 (en) 2006-01-05 2012-06-27 The Ohio State University Research Foundation MicroRNA-based methods and compositions for the diagnosis and treatment of solid cancers

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101988100B1 (ko) * 2017-04-07 2019-06-11 경희대학교 산학협력단 소변 엑소좀 유래 바이러스 miRNA를 이용한 BK 바이러스 신병증 진단 기술
KR102129068B1 (ko) 2018-06-07 2020-07-01 성균관대학교산학협력단 신장질환 조기 진단용 바이오마커 pyruvate kinase M2 (PKM2) 및 이의 이용

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2468890A2 (en) 2006-01-05 2012-06-27 The Ohio State University Research Foundation MicroRNA-based methods and compositions for the diagnosis and treatment of solid cancers
JP2011528789A (ja) 2008-07-18 2011-11-24 ボストン メディカル センター コーポレーション 膜性腎症の診断法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Bin Xiao 등. Cell Death and Disease. Vol. 9, No. 533 (2018.05.10.)
Christos Argyropoulos 등. PLOS ONE. Vol. 8, No. 1, e54662 (2013.01.24.)
Pei-Chun Fan 등. Human Genomics. Vol. 10, No. 29 (2016.09.08.)
ZHANG Yan-Rui 등. Chin J Contemp Pediatr. Vol. 22, No. 9, 페이지 958-963 (2020.09.)

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