KR102509224B1

KR102509224B1 - 줄기세포 배양액을 포함하는 기능성 화장료 조성물

Info

Publication number: KR102509224B1
Application number: KR1020220119004A
Authority: KR
Inventors: 홍연성
Original assignee: 주식회사 큐리
Priority date: 2022-09-21
Filing date: 2022-09-21
Publication date: 2023-03-14

Abstract

본 발명은 기능성 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 줄기세포 배양액을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 있어서, 상기 줄기세포 배양액은 포유동물의 지방세포로부터 추출된 지방 유래의 간엽줄기세포 배양액이고, 유효성분으로 펩타이드, 히알루론산, 하이드로제네이티드레시틴, 나이아신아마이드 및 아데노신을 더 포함하는 것을 특징으로 한다. 본 발명에 의하면, 우수한 노화 예방, 주름 개선, 보습, 피부톤 개선, 탄력 개선의 효과를 갖는다는 장점이 있다.

Description

줄기세포 배양액을 포함하는 기능성 화장료 조성물{Fuctional cosmetic composition}

본 발명은 기능성 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 지방세포에서 추출된 지방유래 줄기세포 배양액을 유효성분으로 포함함으로써, 피부 재생, 노화 방지, 탄력 개선 등의 기능성을 갖는 줄기세포 배양액을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

줄기세포는 자가 복제가 가능하고 다양한 세포로 분화할 수 있는 능력이 있는 세포로서, 재생의학, 조직공학 분야와 세포치료제로서 사용될 수 있으며, 최근에는 성형외과 미용에 이르기까지 그 유용성과 이용 범위가 확대되고 있다.

최근 화장품 시장에서는 줄기세포 유래 성장인자들을 이용한 기술을 접목하여 치료개념의 줄기세포 화장품을 개발함으로써, 피부 재생에 따른 피부의 다양한 문제들을 해결할 수 있는 새로운 접근법이 제시된 바 있다.

이러한 종래문헌으로는 대한민국 공개특허 제10-2010-0036389호가 게시되어 있다. 상기 선공개 특허에서는 줄기세포를 배양하여 수득한 배양액이 피부의 주름 개선이나 노화 완화에 현저한 효과가 있음을 게시하였다.

또한, 대한민국 등록특허 제10-1764614호에서는 세포외기질 성분을 함유하는 인체 체액인 세포외기질 모사수를 제조하고, 이를 함유하는 피부 장벽 개선을 위한 화장료 조성물을 게시하였다.

아울러, 대한민국 공개특허 제10-2021-0153302호에서는 줄기세포 배양액을 함유하는 노화 예방용 화장료 조성물을 게시하였다.

그러나 이러한 선행문헌들은 모두 줄기세포 배양액만을 유효성분으로 단독 함유함으로써, 노화 예방 및 주름 개선 효과만을 가질 뿐, 보습, 피부톤 개선 등의 기능성을 갖지 못한다는 단점이 있었다. 또한, 줄기세포 배양액 특유의 냄새로 인하여 사용상 거부감이 있다는 단점이 있었다.

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10-2010-0036389

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10-1764614

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10-2021-0153302

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따라서, 본 발명의 목적은 줄기세포 배양액을 유효성분으로 포함하되, 펩타이드, 히알루론산, 하이드로제네이티드레시틴, 나이아신아마이드 및 아데노신을 함께 포함함으로써, 노화 예방, 주름 개선의 효과는 더욱 증진되면서도, 보습, 탄력, 피부톤 개선의 기능성을 갖는 줄기세포 배양액을 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은 줄기세포 배양액 특유의 냄새가 없어 사용상 거부감이 없는 줄기세포 배양액을 포함하는 기능성 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.

상기한 목적을 달성하기 위한 본 발명의 줄기세포 배양액을 포함하는 기능성 화장료 조성물은, 줄기세포 배양액을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 있어서, 상기 줄기세포 배양액은 포유동물의 지방세포로부터 추출된 지방 유래의 간엽줄기세포 배양액이고, 유효성분으로 펩타이드, 히알루론산, 하이드로제네이티드레시틴, 나이아신아마이드 및 아데노신을 더 포함하는 것을 특징으로 한다.

상기 줄기세포 배양액은 리포좀으로 포접된 상태임을 특징으로 한다.

화장료 조성물 100중량%를 기준으로, 상기 줄기세포 배양액 100,000ppm~500,000ppm, 펩타이드 0.0001~1중량%, 히알루론산 0.01~1중량%, 하이드로제네이티드레시틴 0.1~0.2중량%, 나이아신아마이드 2.0~5.0중량% 및 아데노신 0.01~0.1중량%을 포함하는 것을 특징으로 한다.

병풀 추출물, 다마스크장미꽃 추출물, 프로방스장미꽃 추출물, 석류나무 추출물, 녹차 추출물 중 1종 이상의 천연 추출물 0.1~10중량%를 유효성분으로 더 포함하는 것을 특징으로 한다.

돌미나리의 추출물 0.1~5중량%를 유효성분으로 더 포함하는 것을 특징으로 한다.

바다고리풀의 추출물 0.1~5중량%를 유효성분으로 더 포함하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 줄기세포 배양액을 포함하는 기능성 화장료 조성물에 의하면, 우수한 노화 예방, 주름 개선, 보습, 피부톤 개선, 탄력 개선의 효과를 갖는다는 장점이 있다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 기능성 화장료 조성물은, 줄기세포 배양액을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 있어서, 상기 줄기세포 배양액은 포유동물의 지방세포로부터 추출된 지방 유래의 간엽줄기세포 배양액이고, 유효성분으로 펩타이드, 히알루론산, 하이드로제네이티드레시틴, 나이아신아마이드 및 아데노신을 더 포함하는 것을 특징으로 한다.

여기서, 상기 기능성이란 노화 예방, 주름 개선, 보습, 피부톤 개선, 탄력 개선 중 1종 이상의 기능을 의미하는 것임을 밝혀둔다.

상기 줄기세포 배양액은 포유동물의 지방세포로부터 추출된 지방 유래의 간엽줄기세포 배양액으로서, 동물의 줄기세포는 배양과정에서 vEGF(혈관내피성장인자), TGF(형질전환성장인자), HGF(간세포증식인자), bFGF(섬유아세포성장인자), IGF(인슐린유사성장인자), EGF(상피세포성장인자) 등 150여가지의 다양한 성장인자를 분비하는데, 특히 EGF(상피세포성장인자)와 bFGF(섬유아세포성장인자) 등은 피부 재생 및 노화 예방에 탁월한 효과가 있음이 알려져있다.

본 발명에서 상기 줄기세포 배양액으로 포유동물 유래, 더욱 바람직하게는 인간 유래 지방 간엽줄기세포 배양액을 사용하는 이유는 기타 골수 줄기세포나 제대혈 줄기세포보다 채취하기가 쉽고, 대량배양이 가능하면서도 줄기세포 함유량이 많기 때문에 경제적, 효율적이기 때문이다.

이러한 포유동물 유래 지방 간엽줄기세포 배양액의 제조방법은 이 기술이 속하는 분야에서 이미 충분히 공지되었으므로, 본 발명에서는 이에 대한 상세한 설명은 생략한다. 즉, 종래 게시된 다양한 방법을 통해 포유동물 유래 지방 간엽줄기세포 배양액을 수득할 수 있다. 예시적으로, 지방조직으로부터 간엽줄기세포를 분리한 후, 1~20%의 FBS가 첨가된 DMEM을 기본배지로 하여, 온도 35∼39℃, 5∼10％ CO₂ 배양기에서 배양하고, 이를 무혈청 배지에서 계대배양한 후, 여과하여 제조할 수 있다.

다만, 본 발명에서는 이러한 포유동물 유래 지방 간엽줄기세포 배양액을 안정화시키고, 경피 흡수를 용이하게 하면서도, 특유의 냄새가 없도록 저온공정으로 처리하여 리포좀에 포접한 상태로 화장료 조성물에 함유시키는 것이 바람직하나, 이를 반드시 제한하는 것은 아니다.

본 발명에서 상기 리포좀은 레시틴과 수상성분만으로 구성되며, 저온공정으로 처리하여 리포좀에 상기 줄기세포 배양액을 포접시키는 것이다. 구체적으로, 상온에서 레시틴을 줄기세포의 배양액이 포함된 수상에 분산시킨 뒤, 초임계 이산화탄소를 이용하여 4℃ 이하의 온도에서 역마이셀(reverse micelle) 에멀젼(수상/저온공정 이산화탄소)을 형성시켜 반응을 중지하고, 초임계 이산화탄소를 감압 기화시키면 초암계 이산화탄소 상이 제거되면서 줄기세포의 배양액이 포접된 리포좀 현탁액을 얻는 것이다. 이러한 리포좀은 4℃ 이하의 온도에서 제조되므로, 봉입 효율이 우수하며, 열에 약한 줄기세포 배양액이 손상되는 것을 방지한다. 상기 리포좀은 평균 소적 크기가 50~500nm으로, 피부 침투 효과가 우수하며, 피부 속 세포 사이사이의 수분 증발을 억제하고, 외부 자극으로부터 피부를 보호하는 효과가 우수하다.

본 발명에서 상기 리포좀 내 줄기세포 배양액은 리포좀 총 중량에 대하여 0.1~50중량%로 포접됨이 바람직하다.

또한, 본 발명에서 상기 리포좀 방법에 대하여 상세히 설명하였지만, 저온에서 리포좀을 제조할 수 있다면, 상기한 방법 외 공지된 다양한 리포좀 방법을 이용할 수 있음은 당연하다.

상기 줄기세포 배양액은 화장료 조성물 100중량%를 기준으로, 100,000ppm~500,000ppm만큼 포함됨이 바람직한데, 줄기세포 배양액이 100,000ppm 미만이면 그 효과가 미미하고, 500,000ppm을 초과할 경우 특유의 냄새로 인해 사용성이 나빠지고 조성물의 안정성 역시 좋지 못해지며, 제조원가가 상승하여 경제적이지 못하기 때문이다. 이때, 상기 배합비는 리포좀 내 포접된 줄기세포 배양액만을 의미하는 것임을 밝혀둔다.

본 발명에 따른 화장료 조성물의 다른 유효성분인 펩타이드는 분자 구조가 작아 피부 속까지 쉽게 침투해 콜라겐과 엘라스틴의 합성을 도움으로써, 탄력 개선, 피부 재생 등의 역할을 한다. 상기 펩타이드로는 카퍼트리펩타이드-1, 아세틸헥사펩타이드-8은 물론, 에스에이치-올리고펩타이드-1, 에스에이치-올리고펩타이드-2, 에스에이치-폴리펩타이드-1, 에스에이치-폴리펩타이드-9, 에스에이치-폴리펩타이드-11 중 1종 이상을 포함할 수 있다.

상기 펩타이드는 화장료 조성물 100중량%를 기준으로, 0.0001~1중량%만큼 포함됨이 바람직한데, 그 함량이 너무 적으면 그 효과가 미미하고, 과량이 되더라도 더 이상의 증진된 효과가 없어 경제적이지 못하기 때문이다.

상기 히알루론산은 피부 속에 원래 존재하는 성분으로 노화에 따라 그 양이 줄어들면서 피부가 건조해지고, 잔주름도 생긴다. 히알루론산은 자기 몸 크기의 1,000배에 달하는 수분을 끌어당겨 저장하는 능력을 갖고 있으며, 피하조직에 존재하여 수분을 보충하는데 탁월하고, 동안 피부를 유지하는데 도움을 준다고 알려진 성분이다.

상기 히알루론산으로는 소듐하이알루로네이트(Sodium Hyaluronate), 하이드롤라이즈드하이알루로닉애씨드(Hydrolyzed Hyaluronic Acid), 하이드록시프로필트라이모늄하이알루로네이트(Hydroxypropyltrimonium Hyaluronate), 하이알루로닉애씨드(Hyaluronic Acid) 및 소듐아세틸레이티드하이알루로네이트(Sodium Acetylated Hyaluronate)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함할 수 있다.

상기 히알루론산은 화장료 조성물 100중량%를 기준으로, 0.01~1중량%로 포함됨이 그 효과를 고력할 때 가장 바람직하다.

상기 하이드로제네이티드레시틴(Hydrogenated lecithin)은 세포를 구성하는 성분으로 튼튼한 세포벽을 형성하는데 도움을 주고, 피부 속 수분 보유를 장시간 유지하여 부드럽고 촉촉한 피부를 만들어 준다.

상기 하이드로제네이티드레시틴산은 화장료 조성물 100중량%를 기준으로, 0.1~0.2중량%로 포함됨이 그 효과를 고력할 때 가장 바람직하다.

상기 나이아신아마이드(Niacinamide)는 식약처에서 인증한 미백 기능성 화장품성분으로, 피부 색소침착 예방 및 개선에 효과적이며, 콜라겐과 엘라스틴의 손실을 막아주고 콜라겐 분비를 자극하여 피부에 생기를 돋게 한다.

상기 나이아신아마이드는 화장료 조성물 100중량%를 기준으로, 2.0~5.0중량%로 포함됨이 그 효과를 고력할 때 가장 바람직하다.

상기 아데노신(Adenosine)은 식약처에서 인증한 주름개선, 노화방지 성분으로 안전하고 자극이 거의 없으며 항염기능으로 트러블 개선에 탁월한 효과가 있다.

상기 아데노신은 화장료 조성물 100중량%를 기준으로, 0.01~0.1중량%로 포함됨이 그 효과를 고력할 때 가장 바람직하다.

상기와 같이 구성되는 본 발명의 화장료 조성물은, 저온 리포좀으로 제조된 줄기세포 배양액과, 펩타이드, 히알루론산, 하이드로제네이티드레시틴, 나이아신아마이드 및 아데노신을 포함함으로써, 피부 노화 방지, 주름 개선의 효과는 물론, 보습, 탄력 개선, 피부톤 개선 등의 효과를 가지며, 줄기세포 배양액 특유의 냄새가 없다는 장점이 있다.

한편, 본 발명은 유효성분으로, 병풀 추출물, 다마스크장미꽃 추출물, 프로방스장미꽃 추출물, 석류나무 추출물, 녹차 추출물 중 1종 이상, 가장 바람직하게는 5종 모두를 동량으로 혼합한 천연 추출물 0.1~10중량%를 더 포함하는 것이 바람직하다.

상기 천연 추출물은 각종 기능성을 더해주는 역할을 한다.

상기 병풀 추출물은 피부염, 피부손상 및 상처 치유에 도움을 준다. 본 발명에서는 병풀의 전초를 물, 에탄올, 메탄올 중 1종 이상의 용매를 사용하여 통상의 방법으로 추출하여 사용할 수 있다.

상기 다마스크장미꽃 추출물은 보습, 피부 재생, 노화 방지, 탄력, 피부톤 개선의 효과를 갖는 것으로, 다마스크장미꽃을 물, 에탄올, 메탄올 중 1종 이상의 용매를 사용하여 통상의 방법으로 추출하여 사용할 수 있다.

상기 프로방스장미꽃 추출물은 주름 개선에 탁월한 효과를 갖는 것으로, 프로방스장미꽃을 물, 에탄올, 메탄올 중 1종 이상의 용매를 사용하여 통상의 방법으로 추출하여 사용할 수 있다.

상기 석류나무 추출물은 피부 미백, 보습, 탄력 개선 등의 효과를 갖는 것으로, 석류나무의 열매를 물, 에탄올, 메탄올 중 1종 이상의 용매를 사용하여 통상의 방법으로 추출하여 사용할 수 있다.

상기 녹차 추출물은 항산화 및 항염의 활성을 갖는 것으로, 녹차잎을 물, 에탄올, 메탄올 중 1종 이상의 용매를 사용하여 통상의 방법으로 추출하여 사용할 수 있다.

아울러, 본 발명의 화장료 조성물은 유효성분으로 돌미나리의 추출물 0.1~5중량%를 더 포함하는 것이 바람직하다.

상기 돌미나리(wild parsley)는 미나리 중 잎사귀가 많으며 줄기가 짧고, 주로 계곡의 샘터나 들의 습지 또는 물가에서 야생하는 것을 말하며, 각종 아미노산이 풍부하고, 비타민, 칼슘, 인, 칼륨 등의 무기질이 다량 함유되어 우수한 항산화 및 항염증 활성을 갖는다. 특히, 본 발명에서는 상기 돌미나리의 추출물은 줄기세포 배양액 고유의 냄새를 제거하고, 색 변화를 방지하는 탁월한 효능을 보인다. 또한, 줄기세포 배양액과 함께 사용할 시 우수한 주름 개선, 탄력 개선의 효과를 보인다.

상기 돌미나리 추출물은 돌미나리의 잎 및 줄기 또는 그 지상부를 물, 에탄올, 메탄올 중 1종 이상의 용매를 사용하여 통상의 방법으로 추출하여 사용할 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 유효성분으로 바다고리풀의 추출물 0.1~5중량%를 더 포함하는 것이 바람직하다.

상기 바다고리풀(Asparagopsis taxiformis)은 홍조류에 속하는 종으로 열대및 온대 해역에서 세계적으로 분포하고 있다. 이러한 바다고리풀의 추출물은 항균 활성이 우수하여 각종 트러블을 완화해주며, 피부톤을 개선해 준다. 또한, 줄기세포 배양액과 함께 사용할 시 더욱 우수한 주름 개선, 탄력 개선의 효과를 보인다.

상기 바다고리풀 추출물은 바다고리풀의 전초를 물, 에탄올, 메탄올 중 1종 이상의 용매를 사용하여 통상의 방법으로 추출하여 사용할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서의 상기한 성분 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다. 또한, 상기 화장료 조성물은 그 효과를 증진시키기 위하여 피부 흡수촉진 물질을 추가로 포함할 수 있다.

그리고 본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 계면활성제-함유 클린싱 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 스프레이 및 미용팩으로 구성된 군으로부터 선택되는 1종의 제형 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 미용팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

이하, 구체적인 실시예를 통해 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.

(실시예 1)

지방조직을 인산염 완충 염수(PBS)으로 세척하고 2,000 x g에서 5분간 원심분리하여 상층액을 제거하였다. 그리고 이에 0.075% 콜라게나아제-II(Collagenase type II)를 첨가하고 부드럽게 섞어준 다음, 37℃, 5％ CO₂ 배양기에서 150rpm으로 40분간 배양하였다. 배양한 조직은 500 x g에서 5분간 원심분리하여 상등액은 제거하고 세포는 배양액으로 고르게 현탁하여 100㎛의 세포 스트레이너(Cell strainer)에 여과하여 불필요한 조직을 제거하였다. 여과된 세포는 다시 500 x g에서 원심분리하여 상층액을 제거하였다.

그리고 분리된 줄기세포를 Dulbecco's Modified Eagle's Medium(DMEM), 10％ fetal bovine serum(FBS), 1％ penicillin streptomycin, 017％ sodium bicarbonate를 포함하는 비유도성 배양액으로 37℃, 5％ CO₂, 배양기에서 24시간 배양 후 비접착성 세포들을 제거함으로써 간엽줄기세포를 단리하였다.

상기 단리한 줄기세포를 10⁴cells/ml가 되도록 세포 부유액 10ml를 T25 플라스크에 옮겨 배양하였다. 줄기세포의 초기 세포배양은 DMEM을 사용하며, 10％ FBS를 첨가하여 사용하였다. 또한, 항생제로 1％ 페니실린-스트렙토마이신(100 IU/ml,GIBCO)을 첨가하였고, 항진균제로 암포테리신 B(0.5μg/ml,Amresco), 마이코플라스마 억제제로 타일로신(10μg/ml, Serva, Heidelberg), 그리고 2mM 글루타민과 1mM 소디움 피루베이트를 더 첨가하였다. 배양조건은 습도 95％, 37℃, 5％ CO₂배양기에서 배양하고, 5％ CO₂ 배양시에는 최종농도가 0.17％가 되게 소디움 바이카보네이트를 첨가해 주었다.

누적집단배증시간 (doubling time)은 플라스크 내 배양중인 세포가 80％ 합류(confluence) 때까지 유지하고 80％ 합류시기에 계대배양을 수행하였다.

계대배양은 배양액을 제거한 플라스크를 PBS로 세척하고 0.25％ Trypsin-EDTA(GIBCO)로 세포를 떨어뜨린 후, 세포부유액을 원심분리한 다음, 세포수 측정과 viability 검사한 뒤 다시 3배로 계대배양 하였다. 계대배양시 사용한 무혈청배지는 DMEM을 기본으로 하고, 2mM L-글루타민, 1mM 소디움 피루베이트를 첨가한 후 0.1중량％가 되게 소디움 바이카보네이트를 첨가하여 사용하였으며, 상기 과정을 3번 반복하였다. 그리고 이를 여과하여 줄기세포 배양액을 제조하였다.

다음으로, 상온(15℃)에서 레시틴 5%를 상기 배양액 20%가 포함된 수상에 분산시킨 뒤, 초임계 이산화탄소를 이용하여 역마이셀(reverse micelle) 에멀젼(수상/저온공정 이산화탄소)을 형성시킨 다음 반응을 중지하고, 초임계 이산화탄소를 감압 기화시켜 초임계 이산화탄소 상을 제거하고 지방줄기세포 배양액이 포접된 저온공정 리포좀 현탁액을 얻었다. 이때 반응 공정의 온도는 4℃이하로 진행하였다.

상기 제조된 줄기세포 배양액이 포접된 리포좀 현탁액(현탁액 내 줄기세포 배양액의 농도는 300,000ppm) 1,500,000ppm, 펩타이드(카퍼트리펩타이드-1와 아세틸헥사펩타이드-8 1:1 중량비) 0.05중량%, 히알루론산(소듐하이알루로네이트) 0.5중량%, 하이드로제네이티드레시틴 0.15중량%, 나이아신아마이드 3.0중량%, 아데노신 0.05중량% 및 잔부의 30% 1,3-뷰틸렌 글리콜(1,3-butylene glycol)을 혼합하여 시료를 제조하였다.

(실시예 2)

실시예 1과 동일하게 실시하되, 병풀 추출물, 다마스크장미꽃 추출물, 프로방스장미꽃 추출물, 석류나무 추출물, 녹차 추출물을 모두 동량으로 혼합한 천연 추출물 5중량%를 더 혼합하였다.

이때, 상기 추출물은 병풀의 전초, 다마스크장미꽃, 프로방스장미꽃, 석류나무의 열매, 녹차의 잎 각각에 50%의 에탄을 수용액을 3중량배로 가한 후, 40℃에서 5시간 추출 후, 여과 및 건조하여 제조하였다.

(실시예 3)

실시예 1과 동일하게 실시하되, 돌미나리의 추출물 1중량%를 더 혼합하였다.

이때, 상기 돌미나리의 추출물은 돌미나리의 지상부에 50%의 에탄을 수용액을 3중량배로 가한 후, 40℃에서 5시간 추출 후, 여과 및 건조하여 제조하였다.

(실시예 4)

실시예 1과 동일하게 실시하되, 바다고리풀의 추출물 1중량%를 더 혼합하였다.

이때, 상기 바다고리풀의 추출물은 바다고리풀의 전초에 50%의 에탄을 수용액을 3중량배로 가한 후, 40℃에서 5시간 추출 후, 여과 및 건조하여 제조하였다.

(실시예 5)

실시예 1과 동일하게 실시하되, 돌미나리의 추출물 1중량% 및 바다고리풀의 추출물 1중량%를 더 혼합하였다.

이때, 그 추출물은 상기 실시예 3, 4와 동일하게 제조하였다.

(비교예 1)

실시예 1과 동일한 방법으로 줄기세포 배양액만을 제조한 후, 레시틴으로 포접하지 않고 그대로 사용하였으며, 펩타이드, 히알루론산, 하이드로제네이티드레시틴, 나이아신아마이드, 아데노신을 사용하지 않았다.

(비교예 2)

실시예 1과 동일하게 실시하되, 펩타이드, 히알루론산, 하이드로제네이티드레시틴, 나이아신아마이드, 아데노신을 사용하지 않았다.

(시험예 1)_피부 재생 효과

피부 재생 효과를 확인하기 위해 wound healing assay를 수행하였다. 각질형성세포(HaCaT cell)를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 5×10⁵cells/well로 조절한 후, 6 well plate에 접종하고 18시간 동안 배양하였다. 6 well plate에 가득 자란 세포에 스크래치를 내어 세포의 일부분을 6 well plate 바닥에서 떨어지게 한 뒤, 시료를 처리하여 18시간 배양하였다. 세포가 재생된 정도를 확인하여 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다. 세포 재생율은 하기 식에 의해 산출되었고, 대조군에는 시료를 처리하지 않았다.

세포 재생율(%) = (시료 세포 재생율/대조군 세포 재생율) × 100

시험예 1 결과

시료명	처리농도(W/V, %)	세포 재생율(%)
실시예 1	1.0	81.5
실시예 2	1.0	82.4
실시예 3	1.0	83.5
실시예 4	1.0	83.9
실시예 5	1.0	85.7
비교예 1	1.0	70.7
비교예 2	1.0	73.5
대조군	-	60.1

상기 표 1에서와 같이, 본 발명의 실시예 1 내지 5는 세포 재생 효과가 우수함을 확인할 수 있었다.

(시험예 2)_콜라겐 생합성 촉진 효과

사람의 정상 섬유아세포(CCD-986sk cell)를 48-well plate에 1×10⁵ cells/well되게 접종하고 24시간 배양하였다. 그리고 시료를 serum이 없는 DMEM 배지에 농도별로 첨가하여 교체한 후 24시간 동안 더 배양하여 세포 배양액을 취하였다. 세포 배양액 내 콜라겐 양은 procollagen type I C-peptide(PIP) EIA kit(Takara Bio, Japan)을 사용하여 정량하였다. 측정된 콜라겐 양은 Lowry assay로 구한 총 단백질 양으로 보정하였다. 콜라겐 발현율은 하기 식에 의하여 계산하였으며, 대조군으로는 아스코르브산을 사용하였고, 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

Collagen발현율(%) = (시료처리 collagen발현양/대조군 collagen발현양) × 100

시험예 2 결과

시료명	처리농도(㎍/㎖)	Collagen 발현율(%)
실시예 1	800	60.38
실시예 2	800	62.95
실시예 3	800	63.18
실시예 4	800	64.25
실시예 5	800	67.82
비교예 1	800	54.12
비교예 2	800	57.24
대조군	800	50.94

상기 표 1에서와 같이, 본 발명의 실시예 1 내지 5는 높은 collagen 발현율을 보임을 알 수 있었다. 즉, 상기 실시예 1 내지 5는 콜라겐 생합성을 촉진하여 진피층의 탄력을 증가시킴으로써 피부의 주름을 예방하며 피부 재생을 촉진시키는 효과를 가지는 것을 확인할 수 있었다.

(시험예 3)_탄력 개선 효과

탄력 개선 효과를 확인하기 위해 elastase inhibition assay를 수행하였다. 200mM Tris-HCl Buffer(pH 8.8)에 0.1g의 Elastin-Congo red(Sigma)와 2.5g의 agar를 섞은 뒤 멸균하여 petri dish에 부어 굳혀주었다. 배지가 굳은 뒤 hole을 만들어주고 1800 units/mL의 elastase enzyme solution과 시료를 각각 10uL를 준비하여 혼합 후 상온에서 10분간 반응시켰다. 반응시킨 시료를 10uL 취하여 elastin-congo red agar의 hole에 넣어 주고 37℃에서 18시간 동안 배양한 뒤 halo diameter를 측정하였다. 대조예로서 retinol crystal을 엘라스타제와 함께 적가하여 비교하였다. 그 결과는 하기 표 3에 나타내었다.

시험예 3 결과

시료명	처리농도(W/V, %)	Halo diameter(cm)
실시예 1	0.2	0.9
실시예 2	0.2	0.8
실시예 3	0.2	0.7
실시예 4	0.2	0.7
실시예 5	0.2	0.6
비교예 1	0.2	1.2
비교예 2	0.2	1.1
Elastase	0.1	1.9
Retinol Crystal	0.1	0.9

헤일로 직경(Halo diameter)이 클수록 엘라스틴의 분해가 많이 된 것으로, 상기 표 3에서와 같이, 본 발명의 실시예 1 내지 5는 우수한 엘라스틴 분해 억제 효과를 확인할 수 있었다. 본 발명의 조성물은 엘라스틴 분해를 억제함으로써 피부 주름 및 탄력 개선 효과가 있음을 알 수 있었다.

(시험예 4)_보습 효과

보습 효과를 확인하기 위하여, Cutometer MPA 580 기기를 이용하여 임의로 정한 실험자의 피부 수분 함량을 측정하고, 시료를 파이펫(pipet)을 이용하여 정확히 10㎕로 취한 뒤, 이를 임의로 선정한 실험자의 피부에 떨어뜨리고 면봉으로 가볍게 발라주었다.

그리고 시료를 도포한 120분 후 시료가 도포된 부위의 수분 함량 변화를 측정하고, 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다. 단, 상기 보습 테스트는 온도 22~23℃, 습도 17~18%의 조건에서 수행되었고, 양성대조군으로는 보습제로 흔히 사용되는 화학 성분인 1,3-뷰틸렌 글리콜을 사용하였다.

시험예 4 결과

시료	수분함량(%)
실시예 1	31.5
실시예 2	32.4
실시예 3	33.0
실시예 4	33.1
실시예 5	34.5
비교예 1	28.4
비교예 2	29.7
대조군	27.5

상기 표 4에서와 같이, 본 발명에 따른 실시예 1 내지 5는 모두 양성대조군인 1,3-뷰틸렌 글리콜과 대비하였을 때 높은 수분 함량이 유지되는 것을 볼 수 있었다.

(제조예 1 내지 5, 비교제조예 1, 2)

실시예 1 내지 5, 비교예 1, 2와 동일하게 제조하되, 30% 1,3-뷰틸렌 글리콜(1,3-butylene glycol)을 대신하여, 1,3-뷰틸렌 글리콜 10중량%, 잔탄검 0.02중량%, 포스포리피드 10중량%, 하이드록시에틸셀룰로오즈 0.1중량%, 소디움히아루로네이트 5중량%, 페녹시 에탄올 0.0001중량% 및 잔량의 정제수를 포함하는 조성물을 사용하였다.

(시험예 5)

30~40대 여성 70명을 대상으로 상기 실시예 1 내지 5와 비교예 1, 2의 화장료 조성물을 매일 2회씩 4주간 안면에 도포토록 하였다. 10명씩 7개의 조로 나누어 상기 실시예 1 내지 5과 비교예 1, 2의 화장료 조성물을 도포하고, 4주 후 보습, 탄력 개선, 주름 개선, 피부톤 개선, 전체적인 만족도를 9점 척도로 평가토록 하였다. 또한, 화장료 조성물의 냄새에 대해서도 9점 척도로 평가토록 하였다. 그리고 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다. 시험결과치는 각 군의 평균치이다.

시험예 5 결과

구분	보습	탄력	주름	피부톤	냄새	전체적 만족도
제조예 1	6.7	6.7	6.8	6.1	5.0	6.7
제조예 2	7.2	7.1	7.0	7.2	5.5	7.1
제조예 3	7.1	7.0	7.1	7.3	6.7	7.1
제조예 4	7.2	6.9	7.1	7.0	5.7	7.0
제조예 5	7.5	7.2	7.5	7.4	7.0	7.4
비교제조예 1	5.1	5.0	5.5	4.0	2.5	5.3
비교제조예 2	5.2	5.1	5.6	4.0	4.0	5.5

상기 표 5에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명에 의한 제조예들 모두 보습, 탄력 개선, 주름 개선, 피부톤 개선, 냄새, 전체적인 만족도가 높음을 확인하였다.

이상, 본 발명을 바람직한 실시예를 사용하여 상세히 설명하였으나, 본 발명의 범위는 특정 실시예에 한정되는 것은 아니며, 첨부된 특허청구범위에 의하여 해석되어야 할 것이다. 또한, 이 기술분야에서 통상의 지식을 습득한 자라면, 본 발명의 범위에서 벗어나지 않으면서도 많은 수정과 변형이 가능함을 이해하여야 할 것이다.

Claims

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줄기세포 배양액을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 있어서,
상기 줄기세포 배양액은 포유동물의 지방세포로부터 추출된 지방유래의 간엽줄기세포 배양액이고,
유효성분으로 펩타이드, 히알루론산, 하이드로제네이티드레시틴, 나이아신아마이드 및 아데노신을 더 포함하고,
상기 줄기세포 배양액은 리포좀으로 포접된 상태이며,
화장료 조성물 100중량%를 기준으로, 상기 줄기세포 배양액 100,000ppm~500,000ppm, 펩타이드 0.0001~1중량%, 히알루론산 0.01~1중량%, 하이드로제네이티드레시틴 0.1~0.2중량%, 나이아신아마이드 2.0~5.0중량% 및 아데노신 0.01~0.1중량%를 포함하고,
돌미나리의 추출물 0.1~5중량% 및 바다고리풀의 추출물 0.1~5중량%를 유효성분으로 더 포함하는 것을 특징으로 하는 기능성 화장료 조성물.
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